Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Экспериментальное исследование фармакологических свойств гидрофильных мазей минерала бишофит

В настоящее время в мире отмечается неуклонный рост частоты и распространенности воспалительных заболеваний кожи (А.П. Суворов и соавт., 1999; А.А. Кубанова и соавт., 2000; В.Н. Романенко и соавт., 2001). Для лечения данной патологии кожи применяются наружные нестероидные противовоспалительные средства (НГТВС) и кортикостероиды (КС), но использование НПВС и КС приводит к развитию тех или иных нежелательных реакций. Местные побочные эффекты могут включать усиление дерматофитной инфекции, присоединение (или усиление уже существующей) вторичной инфекции, атрофию эпидермиса и кожи, атрофические стрии или телеаьгиэктазии, контактный дерматит, акнеформную сыпь, фолликулит, угри, гипопигментацию, гипертрихоз, замедление заживления эрозий и ран, вследствие замедления процессов регенерации, снижение синтеза коллагена, пурпуру, стрии. Кроме того, возможно развитие и системных побочных эффектов. Риск усиливается при их использовании в педиатрической или гериатрической практике (И.Я. Шахмейстер и соавт., 1998; В.И. Кулагин и соавт., 2000; Н.Г. Короткий, 2001). В связи с этим одной из актуальных проблем современной фармакологии является создание мазей для более совершенных методов лечения больных воспалительными заболеваниями кожи (В.В. Кулага и соавт., 1996; Петрова Г.А., 2000) и разработка новых лекарственных препаратов, в том числе природного происхождения. Известно, что лекарственные препараты, на основе магнийсодержащих минералов, широко используют в качестве противовоспалительных средств в бальнеологии и косметологии (А.А. Спасов, 2003; J. Shani et al., 1995; Y. Yoshizawa et al., 2001; E. Proksch et al., 2005). Особое внимание среди магнийсодержащих минералов привлекает бишофит, т.к. содержит максимальное количество магния хлорида (до 95-96% в сухом остатке). Исследования, проведенные А.Б. Зборовским и соавт. (1993); А.А. Спасовым и соавт. (1993; 1998) и другими авторами, показали наличие у минерала бишофит выраженных противовоспалительных свойств. Лекарственный препарат «Поликатан» (стандартизированный раствор рассола бишофита) используется для местной терапии воспалительных заболеваний слизистой оболочки (риниты, синуситы, тонзиллиты, стоматиты, гингивиты и др.) (Э.С. Темкин, А.А. Спасов, Н.К. Санжаровская и др., 1997). В , зарубежной практике используют лекарственные препараты подобные минералу бишофит - лекарственные средства на основе поморийской рапы — «Поли-минерол» и «Вулнузан» (Болгария). Данные лекарственные препараты оказывают местное противовоспалительное действие, уменьшают проницаемость кровеносных сосудов, стимулируют фагоцитоз, улучшают регенерацию тканей, оказывают незначительное местное анальгезирующее действие. Применяются при воспалительных заболеваниях, как слизистой полости рта, так и кожи (А.А. Спасов, 2000; М.Д. Машковский, 2002). В Израиле и Иордании весьма успешно для лечения воспалительных заболеваний кожи используют мази на основе со- . лей Мертвого моря (А.А. Спасов, 2000).

На ранних этапах разработки бальнеологических средств, содержащих минерал бишофит (80-е годы прошлого столетия), в литературе отсутствовали сведения об их биофармацевтических исследованиях. При создании мазевых композиций появилась необходимость в научно-обоснованных данных о выборе мазевых основ и влияния магния хлорида на их стабильность и реологические свойства.

В 2000 году на кафедре фармакологии и НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета (ВолГМУ) была разрабо- ' тана инициативная комплексная программа "Российский магний". Координатором данного проекта является академик РАМН, проф. В.И. Петров, который объединяет усилия ВолГМУ, НИИ фармакологии ВолГМУ, Волгоградского технического университета, Пятигорской государственной фармацевтической академии, ЗАО "БИОАМИД" (г. Саратов), ГП «Фармацевтическая фабрика» (г. Волгоград) и некоторых других учреждений.

В соответствие с данной программой в ВолГМУ проведено комплексное изучение фармакологических свойств минерала бишофит и продуктов его переработки с целью научного обоснования направленного создания магнийсо-держащих препаратов для местного воздействия и приема внутрь.

В Пятигорской государственной фармацевтической академии проведена сравнительная оценка и обоснование выбора мазевых основ, а так же разработка и стандартизация мази бишофита (Д.А. Стрельцов, Е.В. Компанцева, 2002).

Основываясь на вышеизложенных данных можно считать весьма перспективным продолжение исследований фармакологических свойств минерала бишофит.

Цель исследования. Экспериментальное изучение фармакологических свойств наиболее оптимальной по биофармацевтическим параметрам мазевой композиции, содержащей минерал бишофит.

Задачи исследования.

1. Исследовать противовоспалительное действие мази бишофита, в сравнении с лекарственным препаратом «Вулнузан», на моделях отека, вызываемых введением каррагенина, гистамина, серотонина и на адъювантной модели ревматоидного артрита.

2. Исследовать острую и хроническую токсичность, аллергизирующее. и местно-раздражающее действие мази бишофита.

3. Исследовать действие мази бишофита и мази «Вулнузан» на течение контактного аллергического дерматита.

4. Изучить эффективность мази минерала бишофит и препарата сравнения «Вулнузан» при неинфицированных кожных дерматитах.

5. Оценить эффективность мази минерала бишофит и препарата сравнения «Вулнузан» при инфицированных кожных дерматитах, изучив воздействие на эпителизацию гнойной раны кожи и скорость ее очищения от бактериальной обсемененности.

6. Исследовать влияние на формирование рубцовой ткани инфицированной и неинфицированной раны кожи.

7. Изучить влияние мази минерала бишофита на бактерицидную активность кожи в норме и при патологии (алиментарный дефицит магния).

8. Обосновать выбор оптимальной мазевой композиции для минерала бишофит на основании биофармацевтических исследований.

Научная новизна. Впервые показано повышение скорости репаративных процессов и накопления коллагена под влиянием мази бишофита при инфицированных и неинфицированных дерматитах. Впервые продемонстрировано уменьшение тяжести течения аллергического контактного дерматита при применении мази минерала бишофит. Впервые определено, что под влиянием мази бишофита, повышаются бактерицидные свойства кожи в норме и при развитии дефицита магния, стабилизируется ее бактерицидность. Показано, что мазь минерала бишофит оказывает выраженное противовоспалительное действие на модели отека, вызванного каррагенином, гистамином и серотонином, а так же на модели ревматоидного артрита, превосходя по активности препарат сравнения «Вулнузан». Определено, что оптимальной мазевой основой для минерала бишофит является комбинация из полиэтиленгликолей с М.м. 400 и 1500. Установлено, что мазь, содержащая минерал бишофит, относится к разряду мало токсичных веществ и нулевому классу выраженности раздражающих свойств. Показана целесообразность применения мази минерала бишофит в качестве местного противовоспалительного средства.

Научно-практическая значимость работы. Установлено, что мазь минерала бишофит влияет на морфологические изменения в коже и на процессы регенерации при инфицированных и неинфицированных дерматитах. Показана эффективность мази бишофита при контактном аллергическом дерматите. Продемонстрировано влияние мази минерала бишофита на бактерицидную активность кожи в норме и при патологии (дефицит магния). Изучено противовоспалительное действие мази минерала бишофит на модели отека, вызванного каррагенином, гистамином и серотонином, а так же на модели ревматоидного артрита. Исследована острая и хроническая токсичность, аллергизирующее и ме-стно-раздражающее действие мази бишофита. Проведены биофармацевтические исследования по выбору мазевой композиции для минерала бишофит.

Реализация результатов исследования. Материалы работы применяются в НИИ Фармакологии ВолГМУ и Волгоградского научного центра РАМН при проведении научных экспериментов и в учебно-производственной аптеке ВолГМУ. Результаты работы включены в лекционный материал для студентов лечебного, педиатрического, фармацевтического факультетов, слушателей факультета усовершенствования врачей и провизоров на кафедрах фармакологии, общей химии, биофармации ФУ В.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Мазь минерала бишофит, на основе полиэтиленгликолей с М.м. 400 и 1500, является оптимальной по биофармацевтическим параметрам.

2. Изученная мазь оказывает антифлогистическое действие на различных моделях воспаления, вызванных каррагенином, серотонином, гиста-мином, в том числе на модели адъювантного ревматоидного артрита.

3. Мазь бишофита ускоряет процессы регенерации при различных повреждениях кожи (ультрафиолетовое облучение, криотравма), ускоряет заживление и очищение от бактериальной обсемененности инфицированной раны, стабилизирует формирование рубцовой ткани инфицированной и неинфицированной раны.

4. Под влиянием мази минерала бишофит положительно изменяется течение аллергического контактного дерматита.

5. Мазь минерала бишофит повышает бактерицидные свойства кожи в норме и при системном дефиците магния.

6. Изученная мазь не оказывает аллергизирующего и местно-раздражающего действия, отсутствует анафилактическая реакция при нанесении в терапевтической дозе.

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на 61-й, 62-й и 63-й итоговых научных конференциях студентов и молодых учёных ВолГМУ, Волгоград, 2003-2005 гг.; VIII-X Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области, Волгоград 2003-2005 гг.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 172 страницах машинописного текста, содержит 46 таблиц, 57 рисунков, состоит из "Введения", "Обзора литературы", и 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 164 источника, в том числе 71 иностранных.

ВЫВОДЫ

1. Мазь минерала бишофит, на основе ПЭГ-400 и -1500, обладает максимальной осмотической активностью, оптимальными реологическими характеристиками и проявила наибольшее противовоспалительное действие среди изученных мазевых композиций

2. На различных моделях отека (каррагениновая, гистаминовая, серотони-новая) лапки крыс, в том числе на модели ревматоидного артрита, мазь минерала бишофит показала выраженный противовоспалительный эффект, превосходя по активности препарат сравнения «Вулнузан» в 2 раза.

3. На модели аллергического контактного дерматита, вызываемого 2,4 - ди-нитрохлорбензолом, мазь минерала бишофит уменьшала развитие отечности и эритемы пораженного участка кожи, ускоряла отхождение струпа (морфологически отмечена более ранняя регенерация эпидермиса), превосходя по эффективности препарат сравнения «Вулнузан».

4. Мазь бишофита оказала стимулирующее влияние на процессы регенерации кожи крыс при ультрафиолетовом ожоге и повреждении жидким азотом. Гистологически выявлено более быстрое уменьшение отечности тканей в группе животных, получавших мазь минерала бишофит, так же отмечено ускорение формирования грануляционной ткани по сравнению с двумя другими группами. Репаративные процессы протекали более активно, о чем свидетельствовало большее количество фибробластов и коллагена в ране.

5. Под воздействием мази минерала бишофит ускорялась эпителизация гнойной раны кожи, высев патогенного стафилококка из раны в максимальной степени разведения (105) отмечали до 4 дня лечения, а под воздействием мази «Вулнузан» до 7 дня.

6. Мазь минерала бишофит влияла на формирование рубцовой ткани, инфицированной и неинфицированной раны, увеличивая ее прочность, превосходя по активности препарат сравнения «Вулнузан» в 2 раза. Морфологически отмечали ускорение репаративных процессов и накопление большего количество фибробластов и коллагена в ране под влиянием мази бишофита.

7. Мазь минерала бишофит повышала бактерицидную активность кожи, стабилизировала бактерицидность кожи животных с гипомагнеземией и повышала ее до величин контрольной группы.

8. Величина острой токсичности мази минерала бишофит, при пероральном введении, для крыс-самцов равна 13,54 г/кг, а для крыс-самок — 13,69 г/кг, что позволяет отнести мазь минерала бишофит к умеренно токсичным веществам. Трехмесячные аппликации мази не влияли на общее состояние и функциональную активность сердца, печени, почек экспериментальных животных. Мазь бишофита не оказывает местно-раздражающего и аллергизирующего действия.

4.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведенные исследования на крысах показали, что при пероральном введении мази минерала бишофит крысам половой чувствительности не наблюдается. Острая токсичность мази минерала бишофит для крыс-самцов равна 13,54 г/кг, а для крыс-самок - 13,69 г/кг, что характеризует мазь минерала бишофит как умеренно токсичный препарат.

При изучении хронической токсичности мази минерала бишофит было выявлено, что трехмесячные аппликации мази не влияют на общее состояние животных и функциональную активность сердца, печени, почек. Существенно не влияет и на гематологические показатели красной и белой крови животных во все периоды измерений.

Местно-раздражающего действия мази минерала бишофит при однократной аппликации на кожу морских свинок не выявлено. Не отмечали также эритемы и отека кожи после аппликации мази при наблюдении за животными в те-г чение 2-х недель. При выявлении раздражающих свойств мази минерала бишофит при многократных аппликациях на кожу морских свинок, функциональных нарушений кожи характеризующихся появлением различной степени эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменений температуры кожи не отмечали, что свидетельствует об отсутствии неаллергического контактного дерматита при использовании мази минерала бишофит.

Таким образом, в эксперименте на морских свинках не выявлено раздражающего и сенсибилизирующего действия мази минерала бишофит.

Согласно классификации И.В. Саноцкого и Н.Г. Иванова (1998) мазь минерала бишофит можно отнести к нулевому классу выраженности раздражающих свойств.

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Лечение многих кожных заболеваний остаются важнейшей проблемой современной фармакологии и дерматологии, но в тоже время применяемые нестероидные и стероидные противовоспалительные препараты обладают большим количеством побочных эффектов. В тоже время природные средства хотя и уступают по активности синтетическим средствам, но обладают намного меньшим спектром побочных эффектов и лучшей переносимостью (B.I. Long-ley, М. Braverman, 1988; J.P. Callen, 2000).

Проблемы иммунологического статуса кожи тесно связаны с ее противовоспалительным потенциалом. Медиаторы воспаления — биологически активные вещества, содержащиеся в воспаленной ткани и оказывающие воздействие на пато- и морфогенез воспаления. Основные представители этой группы медиаторов — биогенные амины, плазменные системы, производные арахидоно-вой кислоты, кислородные радикалы и гидроперекиси липидов, медиаторы ПЯЛ, моноцитов и лимфоцитов. К компонентам препятствующим развитию воспаления относятся антиоксиданты, стабилизаторы мембран тучных клеток, гистаминаза, эстеразы и др. (В.В. Серов и др., 1995). Известно, что магний является одним из них, так как он влияет на активность биогенных аминов, активность фрагментов комплемента СЗ, синтез простагландинов, активность фагоцитоза. Антифлогистический эффект можно объяснить (S. Nigam et al., 1986) способностью магния снижать активность циклоокисгеназы, а также влиянием на противовоспалительный потенциал тканей - соотношение медиаторов и ан-. тимедиаторов воспаления (В.В. Серова, В.Г. Пауков, 1995). Так как установле-' но (W.B. Weglicki, Т.М. Philips, 1992), что при локальном дефиците магния в тканях происходит активация цитокинов - интерлейкин-2, -6 и фактора некроза опухоли и усиление воспалительно-дегенеративных изменений тканей. Помимо этого, в фазу экссудативного воспаления бишофит снижает флогистическое действие гистамина и серотонина, а в фазе пролиферации стимулирует активность фибробластов и гистиоцитов (С. Бачев, Ю. Писарев, 1970; А.А. Спасов и др., 1998). Кроме того, было показано, что при дефиците магния развивается системное воспаление, снижается противовоспалительного потенциала кожи. Автор считает, что магний модулирует клеточные механизмы, вовлеченные в воспалительный ответ (Y. Rayssiguier, 2005).

Наиболее часто применяемыми наружными лекарственными средствами при воспалительных заболеваниях кожи являются нестероидные противовоспалительные средства и кортикостероиды (КС) (Сорока Н.Ф., 2000). Данные препараты вызывают целый ряд побочных эффектов. Риск усиливается при использовании в педиатрической или гериатрической практике (И.Я. Шахмейстер и соавт., 1998; В.И. Кулагин и соавт., 2000; Н.Г. Короткий, 2001; M.L. Van Del Key, 1983; V.F. Haustein 1985; Froch, 1987).

В связи с указанным выше в лечении воспалительных заболеваний в настоящее время не потеряли свою актуальность методы бальнеотерапии. Различные бальнеологические курорты широко известны как места лечения пациентов больных псориазом, атопическим дерматитом, витилиго, ревматоидным артритом и другими кожными и ревматическими заболеваниями (A. Dostrovsky, F. Sagher, 1959; W.W. Avrach, A.M. Niordsen, 1974). Минеральные соли и грязи давно и очень широко применяются в лечении различных воспалительных заболеваний кожи (Е. Hodak et al., 2003).

В данной работе продолжено исследование фармакологических и биофармацевтических свойств мазей, содержащих минерал бишофит, на различных экспериментальных моделях. В биофармацевтическом блоке была изучена степень высвобождения магния из мазевых композиций, осмотическая активность, реологические свойства. Проведены исследования противовоспалительной активности, влияние на процессы регенерации, контактный дерматит, бактерицидную активность кожи в норме и при гипомагнеземии.

Проявление максимального терапевтического эффекта — одно из основополагающих условий, предъявляемых к разрабатываемым лекарственным формам (Е.Е. Борзунов и др., 1981; P.W. Stattum et al., 1996).

Для изготовления мазевых композиций был использован стандартизированный минерал бишофит (удельная плотность — 1,268 г/мл), с содержанием хлорида магния 95-96 % в сухом остатке, Городищенского месторождения, Волгоградской области. При выборе основ для изготовления образцов мазей руководствовались физико-химической совместимостью минерала бишофит с компонентами основ. Выбор остановился на гидрофильных носителях. Были выбраны наиболее часто встречающиеся гидрофильные мазеобразующие компоненты и для сравнения в качестве образца липофильных носителей - эмульсионная основа.

В качестве изучаемых концентраций, на основании литературных данных, были выбраны мази с содержанием рассола минерала бишофит 20 и 50%.

Препаратом сравнения был выбран магнийсодержащий препарат «Вулнузан» (Болгария). Данный препарат оказывает местное противовоспалительное действие, уменьшает проницаемость кровеносных сосудов, стимулирует фагоцитоз, улучшает регенерацию тканей, оказывает незначительное местное аналь-гезирующее действие. Применяется при воспалительных заболеваниях, как слизистой полости рта, так и кожи (А.А. Спасов, 2000; М.Д. Машковский, 2002).

Биофармацевтическую оценку мазей, приготовленных на различных основах, проводили по методу А.И. Тенцова, М.Г. Королева (1977) и B.C. Маркина и др., (1998). Было установлено, что к 60 минуте эксперимента, среди мазей содержащих 20% рассола минерала бишофит, наилучшие результаты высвобождения наблюдались у мазевых композиций на основах производных целлюлозы (NaKMl \ и МЦ), но к 120 минуте эксперимента у всех мазей, кроме эмульсионной, отмечались высокие результаты биодоступности магния.

В случае исследования мазей, содержащих 50% минерала бишофит, установлено, что из мазей, приготовленных на основе ПЭГ и производных целлюлозы, к 60 минуте наблюдалось максимальное высвобождение, превосходя по показателям мазь на эмульсионной основе. При этом из эмульсионной основы через 90 мин высвобождается около 19% магния, в то время как в гидрофильные основы этот порог содержания преодолевают в первые 30 мин эксперимента. Обобщая проведенные биофармацевтические исследования можно заключить, что максимальное высвобождение магния (около 70%) наблюдается у производных целлюлозы, в случае включения 20% минерала бишофит, и на ПЭГ-основах, в случае включения 50% минерала бишофит (около 70%).

При изучении упруго-вязко-пластичных свойств мазей, согласно методике предложенной И.С. Гриценко (1981) и И.М. Перцев (2002), установлено, что лучшие результаты показали мазевые композиции, приготовленные на ПЭГ-основе, они обладают тиксотропными свойствами, и имеют малую площадь петли гистерезиса, из чего следует наличие оптимальных технических свойств — намазываемость, экструзия из туб, прилипаемость.

Исследования осмотической активности (И.М. Перцев и др., 1986; Н.М. Насыбулина и др., 1997) мазевых композиций показали, что мазь минерала бишофит на ПЭГ-основе превзошла по осмотической активности другие мазевые композиции. Полученные данные согласуются с результатами И.М. Перцева и др. (1986), показавшие высокую осмотическую активность полиэтиленпшко-лей.

При изучении противовоспалительного эффекта мазевых композиций, содержащих минерал бишофит, на модели каррагениновой модели отека (Ф.П. Тринус и др., 1975), установлено, что максимальным антифлогистическим эффектом обладает мазь минерала бишофит на ПЭГ-основе, содержащая, как 20%, так и 50% бишофита. Причем прослеживается влияние на развитие воспаления именно бишофита, так как мазевые основы не показали статистически достоверных результатов, в отличие от мазей.

Обобщая результаты биофармацевтических исследований, можно сделать вывод о том, что мазь минерала бишофит, приготовленная на ПЭГ-основе, обладает оптимальными реологическими свойствами, высокой осмотической активностью. Мазь бишофита, на ПЭГ-основе, проявила максимальный противовоспалительный эффект, среди изучаемых мазевых композиций.

Основываясь на этих данных, мазь бишофита, на основе ПЭГ-400 и -1500, была выбрана для дальнейших фармакологических исследований.

На модели отека лапки крыс, вызванного введением каррагенина, мазь минерала бишофит оказала выраженное противовоспалительное действие и превзошла по активности препарат сравнения мазь «Вулнузан» в среднем в 2,1 раза. При гистаминовом и серотониновом отеках лапки крыс мазь минерала бишофит также проявила выраженный противовоспалительный эффект.

Предыдущие опыты с использования рассола минерала бишофит, в качестве бальнеологического средства при ревматическом повреждении суставов конечностей, показали его противовоспалительные свойства (А.Б Зборовский и др., 1991, 1997, 2001; А.Р. Бабаева и др., 1993; А.А. Спасов и др., 1993).

Так, на модели ревматоидного артрита (А.А. Потапова, 1993; G.D. Anderson, 1996), мазь минерала бишофит проявила выраженный антифлогисти-ческий эффект и понижала отечность суставов лапок крыс. На протяжении эксперимента противовоспалительная активность мази минерала бишофит превосходила таковую у мази «Вулнузан» в 1,5-2,1 раза.

Обобщая вышеизложенные данные можно сделать вывод, что мазь минерала бишофит оказывает противовоспалительное действие. При отеке лапки крыс, вызванного действием таких флогогенных агентов как каррагенин, серо-тонин, гистамин, мазь минерала бишофит показала выраженную активность, превосходящую таковую у препарата сравнения «Вулнузан». На модели экспериментального ревматоидного артрита, мазь минерала бишофит продемонстрировала противовоспалительную активность. Препарат сравнения «Вулнузан» уступал по силе действия мази минерала бишофит практически в 2 раза.

Антифлогистический эффект мази минерала бишофит можно объяснить способностью магния снижать активность циклоокисгеназы (S. Nigam et al., 1986), а также антагонистическим взаимодействием с медиаторами воспаления - серотонином, гистамином, простагландинами (А.А. Спасов, 2000). Нельзя исключать в противоотечном действии мази бишофита и эффект гиперосмоляр-ности, так как данная мазевая композиция обладает выраженными осмотическими свойствами.

Полученные данные являются обоснованием возможности применения данной мази в качестве противовоспалительного лекарственного средства.

Известно, что минерал бишофит стимулирует процессы регенерации. Так, он ускорял заживление инфицированных и неинфицированных кожных ран (JI.A. Смирнова, 1995; Т.Н. Гусева и др., 1999). Установлено, что аппликации солей магния ускоряют восстановление кожного барьера после его разрушения. Также эти соли играют важную роль в метаболизме эпидермиса (М. Denda et al., 1999; Y. Ashida et al., 2001).

На модели ультрафиолетового ожога кожи крыс (И.Г. Ясногородский и др., 1992) мазь минерала бишофит оказала стимулирующее влияние на процес-. сы регенерации. Так, эпителизация раны при применении мази минерала бишофит наступила раньше, чем в контрольной группе на 6 суток и на 4 суток раньше, чем в группе животных, получавших мазь «Вулнузан».

Заживление кожного дефекта, вызванного жидким азотом (А.В. Уле-сов и др., 2002), под влиянием мази минерала бишофит происходило быстрее, чем в группах животных не получавших мазь. Эпителизация раны при применении мази минерала бишофит наступала быстрее, чем в контрольной группе и группе животных, получавших мазь «Вулнузан». Скорость сокращения площади раны в группе мази бишофита была больше контрольной группы на 33%, а группы «Вулнузан» на 22,2%.

Как в первом, так и во втором опыте, гистологически выявлено, что в группе животных, получавших мазь минерала бишофит, отечность тканей проходила раньше и была менее выражена, чем в контроле и группе животных получавших мазь «Вулнузан». Так же отмечено ранее и выраженное формирование грануляционной ткани по сравнению с двумя другими группами. Репара-тивные процессы протекают более активно, о чем свидетельствует большее количество фибробластов и коллагена в ране.

В последние годы в клиническую практику для лечения гнойных ран внедрены новые мази на полиэтиленоксидной основе (комбинации полиэтиленок-сидов с молекулярным весом 400 и 1500). Полиэтиленоксиды являются производными окиси этилена и обладают низкой токсичностью и выраженными осмотическими свойствами. Мази на ПЭГ выгодно применять при наличии остатков некротических тканей и обильном раневом отделяемом, т.е. в дегенеративной, дегенеративно-воспалительной, воспалительной и даже воспалительно-регенераторной фазах течения раневого процесса. Наконец, водорастворимая основа мази — полиэтиленоксид, обладая осмотическим эффектом, адсорбирует микробные и тканевые токсины, в то время как мази на ланолин-вазелиновой основе быстро «насыщаются» раневым отделяемым и полностью теряет свою осмотическую способность (Т.Г. Спиридонова, 2001). Кроме того было обнаружено, что раствор ПЭГ-400 имеет значительный антибактериальный эффект против различных патогенных бактерий, включающих К. pneumoniae, P. aeruginosa, Е. coli, St. aureus. Эти данные свидетельствуют о том, что растворы ПЭГ-400 потенциально могут использоваться в качестве местных антибактериальных средств. Хотя, бактерицидный эффект ПЭГ-400 намного слабее, чем у традиционных дезинфицирующих агентов, но данный компонент является нейтральным, без запаха, высоко растворим в воде, не раздражает кожу, не разлагается при хранении, низкая токсичность при оральном или местном применении, что отвечает требованиям к идеальному местному дезинфектанту. (J. Chirie,et al., 1983). Исходя из того, что в состав мази минерала бишофит входит ПЭГи, следовало ожидать, что при применении мази увеличиться скорость заживления инфицированной раны кожи.

Так, на модели гнойной раны кожи крыс (В.Б.Скопинцев, 1992), мазь минерала бишофит значительно превосходила мазь «Вулнузан» по скорости очищения раны от бактериальной обсемененности и по скорости сокращения гнойной раны. Полная эпителизация раны под воздействием мази минерала бишофит наступала на 13 сутки с образованием нежного мягкого рубца, под воздействием мази «Вулнузан» эпителизация отмечена у 80% животных через 15 суток. Сравнение противовоспалительной и регенерационной активности мази минерала бишофит и мази «Вулнузан» относительно контрольной группы показало, что мазь бишофита более чем в 2 раза эффективнее мази «Вулнузан». Изучаемые мази ускоряли очищение ран от микроорганизмов. Высев патогенного стафилококка под воздействием мази минерала бишофит отмечался в максимальной степени разведения (105) до 4 дня лечения, а под воздействием мази «Вулнузан» до 7 дня.

Кроме того, мазь минерала бишофит влияла на формирование рубца инфицированной раны и увеличивала его прочность, превосходя при этом по активности препарат сравнения «Вулнузан» практически в 2 раза. Схожие результаты были получены при исследовании влияния мази бишофита на формирование рубца не инфицированной раны кожи крыс. В обоих случаях, исходя из показаний гистологических исследований, вполне вероятно, что изменение характеристик рубцовой ткани обусловлено не только более высокой, чем в контроле и группе, получавшей «Вулнузан», концентрацией коллагена, но и более совершенным ремоделированием рубца,

Таким образом, обобщая результаты проведенных исследований, можно сделать вывод, о том, что мазь минерала бишофит оказывала стимулирующее влияние на процессы регенерации при повреждениях кожи, вызванных ультрафиолетовым облучением, жидким азотом, ускоряла заживление и очищение от бактериальной обсемененности инфицированной раны кожи крыс, влияла на формирование рубца инфицированной и неинфицированной раны кожи, увеличивая прочность рубца. Мазь минерала бишофит превосходила по активности, на указанных выше моделях, препарат сравнения «Вулнузан».

Дерматиты являются наиболее распространенными и часто встречаемыми формами воспалительных и аллергических заболеваний кожи. Экспериментальный аллергический контактный дерматит (АКД) является моделью для изучения гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), различные проявления которой играют большую роль в развитии аллергических дерматозов (Зал-кан П.М., Иевлева Е.А., 1965).

Сегодня известно, что кожа выполняет существенные функции в качестве иммуного органа в деле поддержания гомеостаза, причем наиболее значитель-\ ная роль в этом отводиться клеткам Лангерганса (КЛ) и кератиноцитам. Они играют важную роль в запуске процесса сенсибилизации кожи благодаря их способности инициировать иммунный ответ обрабатыванием и презентацией антигенов (S. Aiba, S.I. Katz, 1990; Н. Ozawa, S. Nakagawa, 1997). В исследования, проведенных S. Gruner et al. (1990), установлено влияние солей магния на функциональную активность КЛ. Более того, было показано, что соли магния, входящие в состав соли Мертвого моря, специфично ингибировали бесконтрольную пролиферацию псориазного эпидермиса (J Shani et al., 1995). Исследования по влиянию минерала бишофит на различные аллергодерматозы, осу-\ ществленные С.Н. Щава (2001), продемонстрировали его эффективность при данной патологии. Известно, что пребывание на различных курортах, имеющих в своем арсенале ванны с морской и океанической водой (содержащие большое количество солей магния), а особенно на курортах Мертвого моря, благотворно влияет на течение различных воспалительных заболеваниях кожи. Исходя из

148 ' . того, что солевой состав минерала бишофит и Мертвого моря практически идентичен (в бишофите магния содержится больше), становиться ясным положительное изменение в течение аллергического контактного дерматита под воздействием мази бишофита.

На модели аллергического контактного дерматита (АКД) у морских свинок, вызываемого ДНХБ (П.М. Залкан, Е.А. Иевлева, 1965), мазь минерала бишофит продемонстрировала положительное влияние на его развитие и течение. Так, мазь минерала бишофит уменьшала развитие отечности и эритемы пораженного участка кожи, ускоряла отхождение некротизированных корочек, превосходя по эффективности препарат сравнения «Вулнузан». Полная эпителизация кожного дефекта при применении мази минерала бишофит наступила быстрее, чем в группе контроля на 4 суток, и на 2 суток, чем в группе животных, получавших мазь «Вулнузан». Гистологические исследования показали, что в группе бишофита через неделю отмечено начало регенерации эпидермиса под струпом. В контрольной группе животных таких процессов не происходило, так же не наблюдалось и в группе животных леченных мазью «Вулнузан».

Полученные результаты подтверждают данные о благоприятном влиянии препаратов, на основе магнийсодержащих минералов, на течение воспалительных заболеваний кожи.

Бактерицидная активность кожи (БАК) является одним из показателей естественных защитных сил организма. Она снижается при ухудшении общего физиологического состояния организма, вызванного нарушением питания, инфекционным заболеванием, лучевой болезнью, поражением нервной системы; и, наоборот, при условии повышения биологической сопротивляемости организма бактерицидные свойства кожи усиливаются (Лебедева К., 1990). Известно положительное влияние бальнеотерапии на иммунный статус кожи (Х.Г.

Пратцель, К. Артман, 1992). Общеукрепляющая и стимулирующая терапия активно влияет на бактерицидность кожи больных гнойничковыми заболеваниями кожи. Нарастание бактерицидности кожного покрова приводит к уменьшению и прекращению рецидивов заболевания (Ф.С. Малышев, 1975). В исследованиях, проведенных G. Argenziano, М. Delfino (2004), было показано возможное применение бальнеотерапии в лечении акне. Исследования, проведенные Спасовым А.А. и соавт. (1998), показали стимулирование иммунитета под влиянием бишофита. По-видимому, с этим связано возрастание БАК, которая является естественным иммунитетом и повышается под воздействием мази минерала бишофит. Весьма возможно, что патология кожи может определяться локальным дефицитом магния, что, в конечном счете, может привести к снижению ее иммунологической сопротивляемости и бактерицидности (А.А. Спасов, 2003).

Исследование влияния мази минерала бишофит на бактерицидную активность кожи (Н.Н. Клемпарской, 1966), показало достоверное возрастание бактерицидности кожи после курсового нанесения мази. Что говорит о повышение естественных защитных свойств кожи.

При развитии у животных дефицита магния, по-видимому, наблюдалось снижение иммунологической сопротивляемости кожи, и уровень ее бактерицидности падал. Мазь минерала бишофит вероятно влияла на состояние кожи животных с гипомагнеземией и стабилизировала ее бактерицидность. Величина бактерицидности кожи повышалась до величин контрольной группы.

Эти данные дают основание полагать о возможном применении мази минерала бишофит в комплексной терапии различных гнойничковых заболеваний кожи.

Исследование токсических свойств мази бишофита на крысах показали, что при пероральном введении мази минерала бишофит крысам половой чувствительности не наблюдается. Острая токсичность мази минерала бишофит для крыс-самцов равна 13,54 г/кг, а для крыс-самок - 13,69 г/кг, что характеризует мазь минерала бишофит как низко токсичный препарат.

При изучении хронической токсичности мази минерала бишофит было выявлено, что трехмесячные аппликации мази в терапевтической дозе не влияют на общее состояние животных, не обнаружено существенных отклонений от контрольной группы по состоянию шерстного покрова, слизистых, потреблению пищи, воды, естественных отправлений.

Наблюдение за динамикой массы тела у подопытных животных позволили обнаружить относительно ровный прирост в группах. Поведенческая активность, при нанесении мази минерала бишофит, в первый месяц эксперимента изменялась не однозначно. При этом у крыс - самок во всех испытуемых группах достоверных различий с контролем не обнаружено, прослеживалась лишь тенденция увеличения актов дефекаций. У крыс - самцов, которым мазь наносили в терапевтической дозе, прослеживалось достоверное увеличение двигательной активности. В группе самцов, которым мазь наносили в токсической дозе, достоверно снизилась горизонтальная двигательная активность и существенно (практически в 2 раза) количество заглядываний в напольные отверстия. Исследования, проведенные на третий месяц эксперимента позволили зафиксировать восстановление до контрольного уровня поведенческой и двигательной активностей у крыс-самцов, получавших мазь минерала бишофит в терапевтической дозе. Значимых различий не оказалось и в группе с токсической дозой мази. При анализе динамики поведенческих сдвигов у самок выявлено достоверное и дозозависимое угнетение горизонтальной, поисковой активности и актов груминга. Анализ электрокардиограмм подопытных групп животных, снятых на третий месяц хронического эксперимента, не выявил существенных различий в показателях функциональной активности сердца у крыс, получавших мазь в терапевтической дозе. У крыс же, получавших мазь в токсической дозе, зафиксировано лишь урежение частоты сердечных сокращений, при этом значимых различий в исследуемых интервалах ЭКГ не обнаружено. Анализ данных периферической крови крыс позволил отметить отсутствие существенного влияния мази минерала бишофит, апплицированной животным в терапевтической дозе в течение 3-х месяцев. Более существенные сдвиги наблюдались у крыс, получавших мазь минерала бишофит в токсической дозе, количество эритроцитов понижалось в среднем на 10%, уровень гемоглобина понижался на 20-25%. Вместе с тем необходимо отметить, что, несмотря на достоверные сдвиги, обнаруженные в периферической крови крыс с токсической дозой мази, показатели красной и белой крови не выходили за рамки существующих физиологических норм и нивелировались через месяц в отставленных экспериментах. При биохимических исследованиях плазмы крови крыс наблюдалось отсутствие существенного влияния мази минерала бишофит, апплицированной в течение 3-х месяцев крысам самкам и самцам, как в терапевтической, так и в токсической дозах. С помощью функциональных методов исследований выделительной и обезвреживающей функции печени и почек у подопытных животных выявлены изменения достоверно значимые лишь для токсических доз изучаемой мази минерала бишофит. При оценке влияния мази минерала бишофит на поглотительно-выделительную функцию печени (проба с бромсульфалеи-ном) установлено, что, несмотря на выявляющиеся незначительные флуктуации выделившегося бромсульфалеина у подопытных и контрольных животных данные достоверно не различались как в периоды нанесения мази, так и после ее отмены. Несмотря на выявленные флуктуации функциональных показателей поглотительно-выделительной, реабсорбирующей и экскреторной функции печени и почек указанные изменения были недостоверны и не выходили за рамки существующих физиологических норм.

Местно-раздражающего действия мази минерала бишофит при однократной аппликации на кожу морских свинок не выявлено. Не отмечали также эритемы и отека кожи после аппликации мази при наблюдении за животными в течение 2-х недель. При выявлении раздражающих свойств мази минерала бишофит при многократных аппликациях на кожу морских свинок, функциональных нарушений кожи характеризующихся появлением различной степени эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменений температуры кожи не отмечали, что свидетельствует об отсутствии неаллергического контактного дерматита при использовании мази минерала бишофит. В эксперименте на морских свинках не выявлено раздражающего и сенсибилизирующего действия мази минерала бишофит.

Таким образом, исходя из проведенных исследований можно сделать вывод о том, что мазь минерала бишофит проявила противовоспалительное, репа-ративное и антибактериальное действие, на различных патологических моде, лях, влияла на иммунный статус кожи и повышала ее бактерицидность.

Мазь минерала бишофит показала оптимальные биофармацевтические параметры, такие как степень высвобождения магния, осмотическая активность, реологическая характеристика. Превзошла по осмотической активности и реологическим показателям другие изучаемые мазевые композиции.

При изучении противовоспалительных свойств мазевых композиций мазь минерала бишофит проявила максимальный противовоспалительный эффект. Кроме того, обнаружена слабая антифлогистическая активность у мазевых ос-\ нов, но достоверных отличий с контролем не установлено.

На модели каррагенинового отека мазь минерала бишофит показала выраженное противовоспалительное действие и превзошла по активности препарат сравнения «Вулнузан» практически в 2 раза.

Мазь минерала бишофит оказала выраженный антифлогистический эффект на моделях отека вызванных гистамином и серотонином.

На модели адъювантного ревматоидного артрита мазь минерала бишофит проявила выраженный противовоспалитлеьный эффект. В среднем на протяже нии эксперимента противовоспалительная активность мази минерала бишофит превосходила таковую у препарата сравнения «Вулнузан» в 1,5-2,1 раза.

Эпителизация раны на модели ультрафиолетового ожога, при применении мази минерала бишофит, наступала раньше, чем в контрольной группе на 6 суток и на 4 суток раньше, чем в группе животных, получавших мазь «Вулнузан». Гистологически, в группе животных получавших мазь минерала бишофит, . выявлено, что отечность тканей проходила раньше и была менее выражена, чем в контроле и группе животных получавших мазь «Вулнузан». Так же отмечено ранее и выраженное формирование грануляционной ткани по сравнению с группой контроля и группой, получавшей «Вулнузан».

Мазь минерала бишофит стимулировала регенераторные процессы и способствовала быстрейшему заживлению раны кожи, вызванной воздействием жидкого азота, превосходя по активности препарат сравнения «Вулнузан».

На модели гнойной раны кожи мазь минерала бишофит увеличивала скорость сокращения площади раны и очищение ее от бактериальной обсеменен-. • ности. Мазь «Вулнузан» уступала по активности.

Мазь минерала бишофит влияла на формирование рубцовой ткани инфицированной и неинфицированной раны, увеличивая прочность сформировавше- . гося рубца, превосходя по эффективности мазь «Вулнузан».

На модели аллергического контактного дерматита мазь минерала бишофит уменьшала развитие отечности и эритемы пораженного участка кожи,ускоряла отхождение некротизированных корочек, превосходя по активности препарат сравнения «Вулнузан».

Мазь минерала бишофит повышала бактерицидные свойства кожи. Кроме ' того, мазь минерала бишофит, вероятно влияла на состояние кожи животных с гипомагнеземией и стабилизировала ее бактерицидность, так как под ее влиянием бактерицидная активность кожи при дефиците магния повышалась до величин контрольной группы.

Изучение острой токсичности обнаружено, что при пероральном введе-: нии мази минерала бишофит крысам половой чувствительности не наблюдается. Острая токсичность мази минерала бишофит для крыс-самцов равна 13,54 г/кг, а для крыс-самок - 13,69 г/кг, что характеризует мазь минерала бишофит как низко токсичный препарат.

Проведенные исследования по изучению хронической токсичности мази минерала бишофит, наносимой в течение 3-х месяцев на кожные покровы крыс в дозах терапевтической и превышающую терапевтическую в 10 раз, показали, что исследуемая мазь является нетоксичной и безопасной. Установлено, что трехмесячные аппликации мази не влияют на общее состояние и функциональную активность сердца, печени, почек. Существенно не влияет и на гематологические показатели красной и белой крови животных во все периоды измерений.

Мазь не оказывает местно-раздражающего и аллергизирующего действия. Согласно классификации И.В. Саноцкого и Н.Г. Иванова (1998) мазь минерала бишофит можно отнести к нулевому классу выраженности раздражающих свойств.

Основываясь на вышеперечисленных свойствах мази минерала бишофит, представляется целесообразным ее применение в дерматологической практике в качестве средства при различных воспалительных заболеваниях кожи.