Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Исследования в области разработки составов и технологии мазей дибутирина и их фармакологическая оценка

:

.. >, y''

На правах рукописи

Коростелева Людмила Кузьминична

ИССЛЕДОВАНИЯ В ОБЛАСТИ РАЗРАБОТКИ СОСТАВОВ II ТЕХНОЛОГИИ МАЗЕЙ ДИБУТИРИНА И ИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА

15.00.01-технология лекарств и организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва -1997

Работа выполнена в Пермской государственной фармацевтической академии

Научный руководитель: доктор фармац. наук, профессор Вдовнна Г.П., Научный консультант: доктор биолог, наук, Заслуженный деятель науки РФ, профессор Колла В.Э.

Официальные оппоненты: доктор фармац. наук, профессор Кондратьева Т.С. канд фармац. наук, ст. науч. сотрудник Охотников а В.Ф.

Ведущая организация: Научно-исследовательский 1шстигут фармации МЗ РФ

Защита диссертации состоится « // » 997 г. в ^ часов на

заседании диссертационного совета Д 074.05.06 при Московской медицинской академии им. И.С. Сеченова по адресу: 119881, Москва, Б. Пироговская, 2-6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии по адресу: Зубовская пл., д. 1

Автореферат разослан «/■£» г.

Ученый секретарь диссертационного совета

канд. фармац. наук, доцент Садчнкова Н.П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Лечение раневой инфекции в современных ус-5иях является сложной задачей. Нагноение послеоперационных ран наблю-ггся в среднем у 30% больных, более 40% послеоперационных летальностей саны с гнойно-септическими осложнениями (Афиногенов Г.Е., Блинов 1., 1987, Савельев B.C., 1990, Буянов В.М., Родоман Г.В. и др., 1991). В по-¡дние годы отмечается увеличение частоты возникновения массовых ожо->ых поражений при авариях, и стихийных бедствиях. Гнойная инфекция гестрельных ран по-прежнему остается одной из сложных проблем военно-тевой хирургии.

Для лечения больных с инфицированными ранами и ожогами какбо-; перспективно применение многокомпонентных мазей на гидрофильных ювах, таких как "Левосин", "Левомеколь", "Диоксиколь" и др., оказываю-[х на рану антисептическое, дегидратирующее, противовоспалительное и гзболивающее действие. Однако потребность в таких препаратах удовле-эряется не полностью. Также следует учесть, что за годы широкого приме-пи антибиотиков повысилась доля устойчивых к ним микроорганизмов, эбенно грамотрицательных, возросла частота аллергических реакций на миотерапевтические препараты. В связи с этим поиск новых антнбавтери-,кых средств и разработка лекарственных форм на их основе является акгу->ной задачей. В качестве антимикробного компонента более рационально имеют, антисептики, обладающие достаточно высокой антимикробной гибкостью и меньшей частотой возникновения побочного действия. Из числа изученных антимикробных веществ, синтезированных Иркутским )Х СО РАН, большой интерес представляет 2-формил^2,5-дибупотгио-2,3-гидро~4Н-гагран, именуемый в дальнейшем дибутирин (патент СССР № ¡17243 от 14.09.92). Это новый эффективный антисептик, представляющий бой маслянистую жидкость со специфическим запахом нерастворимую в де, но хорошо в органических растворителях. Дибутирин обладает высокой гнвностыо в отношении золотистого стафилококка, кишечной палочки н негаойной палочки (МПК соответственно составляет 1,3 мг/мл, 0,13 ыг/мл, I мг/мп), а также возбудителя трихофитии. Ценным свойством днбутирина пяется отсутствие материальной и функциональной кумуляции, отсутствие

ч

аллергических реакций, кожно-раздражаюгцего действия и др. Рационально! лекарственной формой, в которой можно реализовать требования направлен ного воздействия на каждый фактор гнойно-воспалительного процесса, явля ются мази.

Ранее мази с дибутирином разработаны не были. Благодаря своим по лежит елышм качествам дибутирин был включен в Федеральную программ] по развитию фармацевтической промышленности и улучшению лекарственно го обеспечения населения на 1991-1995 гг.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования яви лась научно-обоснованная разработка составов и технологии мазей дибутири на, стабильных при хранении и обладающих высокой антимикробной и рано заживляющей активностью. Для выполнения поставленной цели необходим« было решить следующие задачи:

- установить оптимальную терапевтическую концентрацию дибути рина в мазях;

- определить влияние фармацевтических факторов на антимикробную активность дибутирина;

- изучить структурно-механические и осмотические свойства мази дибутирина;

- апробировать методы идентификации и количественного определе ння дибутирина в мазях;

- определить антимикробную активность и микробиологическую чис тогу мазей в процессе хранения;

- изучить безвредность и фармакологическую эффективность разра ботанных мазей в экспериментах на животных;

- исследовать влияние вида упаковки и условий хранения на стабиль ность мазей дибутирина;

- на основании полученных результатов подготовить НТД (проек ВФС и лабораторный регламент производства) на 1% мазь дибутирина до представления в Фармакологический комитет РФ на предмет разрешени клинических испытаний.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтнчс скнх наук. Диссертационная работа выполнялась в соответствии с плано! научно-исследовательских работ Пермской государственной фармацевпш

кой академии и комплексной целевой программой № 24 по направлению 3.-Биофармацпя и технология лекарственных форм" (№ Гос. регистрации 1.9.50007426).

Научная повизпа. На основании проведенных технологических, рео-огнческихи биофармацевтических исследований впервые обоснованы соста-и и технология мазей с дибутирином. Изучена зависимость специфической, смотической, фармакологической эффективности мази от вида носителя. С омощьхо метода математического планирования эксперимента и дисперсион-ого анализа установлено, что антимикробная активность дибушрина зависит т его концентрации и способа введения в эмульсионную основу, вид и коли-ество эмульгатора, в выбранных интервалах, статистически не значимы. Максимальная антимикробная активность дибутирина проявляется го основ, одержащих ЫаКМЦ и ПЭО-400, 1500 (4:1). Показано, что по специфической ктнвкосги мази дибутирина не уступают шзям хлоргексидинз, приготовлен-зих га тех же основах. Апробированы методы качественного и копичествен-ого определения дибутирина в мазях.

В экспериментах на животных установлено, что мази дибутирина, со-ержащие МаКМЦ и ПЗО, обладают выраженным ранозажншшощим дейст-ием. Введение в состав мазей 5% метилурацшш не вызывает значимого успения этого эффекта. Противовоспалительной активностью обладают мази, одержащне МаКМЦ.

Практическая значимость. Разработаны оптимальные составы и тех-ология мазей дибутирина для лечения инфицированных ран в 1-И фазе ране-ого процесса, содержащие в качестве вспомогательных веществ широко звестные, разрешенные к применению в фармацевтической промышленности ещества отечественного производства. Предложена рациональная упаковка, пределены сроки и условия хранения мазей. Результаты научных исследова-ий внедрены в учебный процесс очного факультета ПГФА по теме Стандартизация мазей и суппозиториев и их биофармацевтическая оценка". >армаколоп!ческая эффективность мазей дибутирина подтверждена при ис-ользовании их в ветеринарной пракгике(Акт апробации от 05.09.96). Разрабо-ан проект ВФС и лабораторный регламент производства 1% дибутириновой гази. Проведена апробация технологии мазей дибутирина в условиях фарма-;евтического производства (Акт апробации от 06.06.97).

в

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на научно-практических конференциях профессорско - преподавательского состава ПГФА (1993, 1994, 1995 гг.), объединенном заседании кафедр технологии лекарств, фармакологии, токсикологической химии, фармацевтической химии (1996 г.). По теме диссертации опубликовано б статей.

На защиту выносятся результаты физических, физико-химических, биофармацевтических, микробиологических и фармакологических исследований по созданию стабильных составов и рациональной технологии мазей антимикробного и ранозаживляклцего действия, содержащих антисептик дибу-тирин.

Объем и структура диссертация. Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, четырех глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 8 рисунками и 26 таблицами. Библиографический указатель включает 206 источников литературы, в том числе 18 на иностранных языках.

Основное содержание диссертационной работы

Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования!, научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе (обзор литературы) описаны основные принципы и методы местного лекарственного лечения ран. Дана характеристика мазевых основ и мазей многонаправленного действия на раневой процесс, показано преимущество использования для этих целей антисептиков по сравнению с антибиотиками. Даш характеристика дибутирина и его специфические свойства.

Во второй главе представлены материалы изучения, а также использованные физические, физико-химические, биологические и микробиологические методы исследований.

В третьей главе изложены результаты экспериментальных исследований по выбору составов и разработке технологии мазей. Приведены результаты исследований влияния вспомогательных веществ на антимикробную активность дибутирина, реологические свойства и осмотическую активность мази. Проведено сравнение антимикробной активности мазей дибутирина и хлоргексиднна.

В четвертой главе приведены данные экспериментов по изучению кмической, микробиологической, структурно-механической стабильности аэей в процессе хранения. Показана необходимость введения в состав мази с аКМЦ консерванта с целью повышения микробиологической стабильности, обоснован выбор упаковки, сроки и режим хранения мазей.

Пятая глава посвящена изучению фармакологической эффективности безвредности мазей дибутирина. Приведены данные экспериментов по рано-газтлякяцей, противовоспалительной эффективности. Показана возмож-ость введения в состав мазей местного анестетика тримекаина, способного величить силу и продолжительность анестезии по сравнению с 3% водным асл вором анестетика.

Экспернмсятатьное обоснование составов и технология мазей дабутарпиа (глава 3) Из данных литературы известно, что гидрофильные основы способст-уют усилешпо антимикробного эффекта антибактериальных веществ, поэтому с целью выбора оптимальной терапевтической концентрацго! дибутирина ыли приготовлены мази с концентрацией его от 0,05% до 10% на геле 1аКМЦ. Антимикробную акпганость определяли по методике ГФ XI диффу-ней в агар. В качестве тест-культур использовали Staureus (АТСС 2592), .coli (АТСС 6538-Р), Ps.aerug.(ATCC 27857), как наиболее часто высеваемые з раневого экссудата. Результаты эксперимента, обработанные с помощью-исперсиошого метода, показали влияние концентрации дибутирина на его нтнмгасробную активность (Fra6l - 2,36; Fran= 15,6). Установлено, что оптн-[альная концентрации! дибутнрина в мази -1 %.

Для изучения влияния вида основы на антимикробную активность ибутирина были приготовлены мази дибутиртша 1% на различных основах гидрофобных, гидрофильных, абсорбционных, эмульсионных). Критерием целки противомикробной активности служила зона задержки роста тест-шкрооргангомов, которая оценивалась как низкая при диаметре до 15 мм, ысокая - 25 мм и выше.

Анализ полученных данных, обработанных дисперсионным методом, ¡оказал, что основа оказывает существенное влияние на антимикробную ак-ивность дибутирина (Fr,6„ = 1,994; F.«, - 49,817), а в некоторых случаях сво-

дат ее та нет, например, композиция вазелина с твином-80 и подсолнечное масло с аэросилом. Сила влияния в отношении Е.соН составила 78% , а в отношении St.au!. - 95,89%. Только в 7-ми композициях из 18-ти активность ди-бутирина проявилась в отношении обоих штаммов микроорганизмов.

Установлено, что наилучшими основами, обеспечивающими высокук активность в отношении золотистого стафилококка и среднюю в отношении кишечной палочки, являются гидрофильные основы - гели ЫаКМЦ и ПЭО д иаметры зон ингабнрования роста микроорганизмов этими мазями составит от 25,3 мм до 38,6 мм. Во всех остальных мазевых композициях активное« дибутирнна низкая или средняя в отношении золотистого стафилококка г совсем не проявляется в отношении Е.соЦ.

На основании данных о хорошей смешиваемости дибутирина с маслами и возможностью его введения в мазь в виде масляного раствора, в состах гидрофильных основ ввели 10% касторового масла. Выбор касторового маелг в качестве растворителя дибутирина обусловлен прежде всего его широким применением для лечения ожогов, язв, пролежней, а также данными литературы о высокой термо- и-коллоидной стабильности эмульсий касторового масла Для стабилизации эмульсионной системы использовали широко применяемые в фармацевтическом производстве эмульгаторы Т-2, МГД, эмульгатор № 11 интервале от 1 до 15 г. С целью обоснования рациональной технологии мазей использовали различные способы введения дибутирина в мазевую основу.

Учитывая, что мази пред назначены для печения инфицированных ран, готовили их в асептических условиях в соответствии с требованиями санитарного режима в аптеках, регламентированных НТД. При разработке технологии принимали во внимание природу и физико-химические свойства лекарственных и вспомогательных веществ.

Для обоснования оптимального состава дибутириновой мази и оценки влияния комплекса фармацевтических факторов на антимикробную активность лекарственной формы, применяли математический метод планирования эксперимента по типу "латинские кубы" второго порядка. Параметрами оптимизации служили: У) - размер зон ингибирования тест- микроорганизмов; у2 -эффективная вязкость мазей.

Обозначение изучаемых факторов и их уровней:

А - вид эмульгатора (а5 - эмульгатор № 1, а2 - эмульгатор Т-2, а3 - мо-ноглицериды дистиллированные твердые);

В - количество эмульгатора (вгминимальное, в2 - среднее, в3 - максимальное);

С - способ введения дибутиргага в основу (ct - в готовую основу, с2 -дибутарин в масле, с3 - дибутирин в корпус эмульсии); Д - вид мазевой основы:

А - сплав ПЭ0400 с ПЭСМООО 1:1; В - то же 2:1

С-то же 3:1

D - то же 3:2

Е - вазелин

F - ппщерогель ЫаКМЦ 6%

G- сплав ПЭ0400 с ПЭО-1500 3:2 Н-тоже 2:1

J-тоже 4:1

Таблица I

Матрица планирования латинского куба второго порядка и результа-

№ п/п Факторы Yi - зона ингибирования, мм У2-Т1 Па.с

А В С Д St.auieus E.coli Дг=24,3 сек'1

1 2 3 4 5 б 7 8

1. «1 в,(1,0) Cl А 15,0±0,б 10,0±0 б/ст 22,3

2. 8l »2(4.0 Ci В 9M2S 0 23,5

3. ai Вз (8,0) Cl С 10,(Ш) 0 17,6

4. a2 в,(1,0) Ci D 14,0±2,5 0 17,6

5. а2 В2(5,0) Cl E 12,3±1,4 0 12,0

6. »2 Вз (10,0) Cl F 26,2±1,9 26,0±2,3 16,4

7. аз В!(1,0) Cl G 12,8±2,7 0 19,9

8. а? 82(5,0) Cl H 20,0±0 0 8Д

9. аз вз(15,0) Cl J 23,0±1,6 0 14,1

10. ai в, (1,0) Ca H 20,0±1,б 0 5,2

11. ai в2(4,0) c2 J 20,0±1,2 17,3±0,8 б/сг 6,4

Ю

Продолжение табл. 1

12. а| в3 (8,0) с2 в 13,0±0,8 20,6±1,9 10,5

13. а2 »1(1.0) с2 В 24,6±1,6 30,5±1,6 17,6

14. а2 вг(5,0) сг С 13,0±2,9 0 23,5

15. а2 в3(15,0) с2 А 14,7±0,8 13,0±1,2 41,5

16. а3 »1(1,0) с2 Е 13,0±2,9 0 11,1

17. аз в2(5,0) с2 Р 28,0±0 21,3±0,8 12,1

18. а3 в3(15,0) Сг Б 23,0±2,9 0 5,4

19. а! в,(1,0) Сз Б 16,0±0 0 10,5

20. а. вг(4,0) Сз Б 17,0±1,5 14,6±1,5 б/ст 25,8

21. а] в3(8,0) Сз Е 29,3±1,4 0 4,7

22. а2 в, (1,0) Сз ] 27,0±1,7 20,3±0,4 6,0

23. аг Вг(5,0) сз в 16,0±0 0 12,8

24. а2 в3(Ю,0) с3 Н 14,6±2,9 0 8,2

25. а3 в,(1,0) сз С 26,0±1,7 0 12,3

26. а3 »2(5,0) Сз А 13,3±0,7 14,0±1,54 б/ст 7,0

27. а3 ®з(15,0) сз В 24,0±2,9 0 41,1

Примечание: 0 - отсутствие зоны задержки роста микроорганизмов; б/ст - бактериостатическое действие; в графе "в" указано количество эмульто-ра.

Из данных табл. 1 видно, что только в десяти составах проявилось антимикробное действие дибугиряна в отношении обоих штаммов микроорганизмов, это составы 1,6, И, 12,13, 15, 17,20,22,26. Причем, высокая ингиби-рующая активность как в отношении золотистого стафилококка, так л кишечной палочки наблюдалась только у мази дибутиргаш на основе геля МаКМЦ ( состав б). Высоко-средней активностью обладали мази на основе геля ЫаКМЦ и ПЭО-400 с ПЭ01500 4:1 ( составы 17 и 22). Средне-высокой активностью обладает мазь на основе сплава ПЭО-400 с ПЭО-4000 2:1 ( состав 13). Остальные составы мазей подавляют рост золотистого стафилококка на уровне средних или низких значений оценочной шкалы и совсем не тормозят рост кишечной палочки.

и

Дисперсионный анализ полученных данных по критерию Фишера показал, что статистически значимыми, при уровне значимости Р = 0,05, оказались факторы Д - вид основы и фактор С - способ введения дибутирина в основу. Проведенная проверка различий средних значений результатов значимых факторов с помощью множественного рангового критерия Дункана, позволила составить следующие ранговые ряды: Б > ], В, А>0, Н, Е,С,С и с2 > с3 > С|. Факторы А и В (вид эмульгатора и его количество) - статистически не значимы.

Антимикробная активность мазей дибутирина среди составов на основе сплавов полиэшленоксидов (в ряду 1>В>А) снижается с уменьшением в них количества низкомолекулярного ПЭО-400 (4:1,2:1, 1:1). Если представить этот ряд в виде суммы зон подавления микроорганизмов обоими штаммами, то он примет вид: 107,6 мм > 88,5 мм > 79,9 мм. Следовательно, среди различных комбинаций полнэпшеноксндов лучшей является композиция ПЭО-400 с ПЭО-1500 в соотношении 4:1 (I), что согласуется с данными литературы о способности низкомолекулярного ПЭО к пеяетрацки вглубь раны и повышению антимикробной активности.

Проведенные исследования позволит! установить, что лучшими по микробиологическим параметрам оптимизации являются мази дибутирина, содержащие ИаКМЦ (составы 6 и 17) и ПЭО (составы 13 и 22).

Для оценки консистенции мазей дибутирина составов б, 13, 17, 22 строили реограммы течения в диапазоне скоростей от 0,166 до 72,9 с'1. Исследования проводили с помощью вискозиметра "Реотест-2". Используя показания прибора, рассчитывали касательное напряжение сдвига и строили график зависимости от скорости сдвига. Реограммы течения мазей составов 6 и 13 выходят за пределы реологического оптимума для гидрофильных мазей, что и послужило причиной отказаться от дальнейшего их исследования из-за аномально высокой вязкости.

Для мазей составов 17 и 22 была получена зависимость скорости сдвига от напряжения сдвига, соответственно для возрастающих и убывающих значений скоростей сдвига, представляющих собой "петли гистерезиса" (рис.1).

/и

r>°' ■ n,

Реограммы течения мазей дибутирина

1 - состав 22

2 - состав 17

100 200 Напряжение сдвига, н/м2 Рис.1.

Проведенные исследования позволили установить, что указанные мази являются структурированными дисперсными системами, обладающими упруго - вязко - пластичными и тиксотропными свойствами, для которых характерны коагуляционные связи (механическая стабильность равна 1,25 и 1,48 соответственно).

Таким образом, на основании биофармацевтических, исследований выбраны рациональные составы мазей дибутирина, содержащие ЫаКМЦ и ПЭО, обладающие высокой антимикробной активностью и удовлетворительной консистенцией; По внешнему виду обе приготовленные мази представляют собой однородные гели беловатого цвета с запахом дибутирина, хорошо намазываются и удерживаются на коже.

Оценку осмотических свойств разработанных составов, имеющих существенное значение при печении гнойных ран, определяли методом равновесного диализа. Полученные результаты (табл.2), показывают, что мазь на эмульсионной ПЭО основе обладает высокой и продолжительной осмотической активностью, что превосходит 10% раствор натрия хлорида по силе в 43 раза, ano продолжительности действия в 8 раз. Такое действие необходимо в I фазе раневого процесса с повышенной экссудацией. Тогда как мазь на эмульсионной основе ЫаКМЦ имеет более "мягкое" по сипе (в 4,3 раза) и менее продолжительное (в 3 раза) дегидратирующее действие, что будет способст-

я

вовать очищению раны во II фазе раневого процесса, не оказывая раздражающего действия на грануляционную ткань.

Таблица 2

Осмотическая активность мазей дибутирина

Лекарственный препарат Абсорбировано Время абсорбции,

воды,% час

1. Контроль(р-ор ЫаС110%) 1б,9±3,5 2

2. Мазь на основе 17 (ЫаКМЦ) 13,Ш,6 8

3. Мазь на основе 22 (ПЭО) 738,0±30,5 18

Дальнейшие исследования посвящены сравнительной оценке антимикробного действия мазей дибутирина. В качестве мази сравнения выбрали мазь с хлоргексидином, антисептиком, широко применяемым в хирургии и фармации. Отечественной промышленностью хлоргексидиновая мазь не выпускается, использовать мазь "Сибикорт" фирмы Орион (Финляндия) сочли нерациональным, так как кроме хлоргекстзднна она содержит 1% гидрокортизона. Поэтому приготовили 1% мазь хлоргехсндина биглкжоната на основах: 17 (6% гель ЫаКМЦ, касторовое масло, эмульгатор , глице-

рин) и 22 (сплав ПЭО-400 с ПЭО-1500 Я'Я, касторовое масло, эмульгатор, вода очищенная).

Обработанные статистически результаты антимикробной активности, представленные в табл.3, свидетельствуют, что мазь дибутирина состава 17 не уступает по антимикробной активности хлоргексядиновой мази на той асе основе, при достоверно большей активности на золотистый стафилококк. Обе мази антисептиков на основе ПЭО показали высокую активность в отношении золотистого стафилококка. Зона задержки роста кишечной палочки дибутири-новой мазн ниже, чем у хлоргексндика, но находится на уровне средних значений оценочной шкалы.

«г

Таблица 3

Сравнительная оценка антимикробной активности мазей дибутирина и хпоргексидина

Вид основы Состав 17 на основе ЫаКМЦ Состав 22 на основе ПЭО

Название препарата зона ингабирования тест-микроорганизмов, мм

Б^аигеиз Е.соН Б^аигеш Е.соН

Дибутирин 31,1±1,95* 24,6±0,87 25,5±0,93 21,1±1,05

Хлоргексидин 24,6±0,87 26,7±1,22 29,б±0,95* 36,211,01*

Примечание: "(здесь и Далее) - достоверные результаты при Р < 0,05.

Учитывая, что хлоргексидин является дорогостоящим импортным антисептиком, относится к умеренно токсичным соединениям ОН класс токсичности) в ряде случаев вызывает аллергические дерматозы, то становится очевидным преимущество дибутарина.

Изучение стабильности мазей дибутарина в процессе хранения (глава 4)

Стабильность мази изучаемых составов проводили по следующим показателям: внешний вид, рН водных извлечений мазей, количественное содержание дибутирина, вязкость, микробиологическая чистота, антимикробная активность. Мази хранили в стеклянных банках с навинчиваемыми крышками по 30 г и алюминиевых тубах с внутренним лаковым покрытием вместимостью 15 г при температуре +20°±2°С и +4°±2°С.

Для определения количественного содержания дибутирина в мазях апробировали спектрофотометрический метод анализа в УФ области спектра в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 246 им.*

Установлено, что рН 10% водных извлечений мазей, концентрация дибутирина изменяются в пределах ошибок методик их определения. При хранении мазей в условиях комнатной температуры и холодильника в банках

* Методика разработана сотрудниками кафедры токсикологической химик ПГФА Кокшаровон Н.В. и Пепапяевой И.В.

5 навинчиваемыми крышками через 6 месяцев происходи снижение концентрации дибутирина на 26% (состав 22), что,очевидно,можно объяснить негер-яетичностью такого вида упаковки и возможным взаимодействием дибутири-та с кислородом воздуха (наличие реакцнонноспособной карбонильной груп-таровки).. Внешний вид мазей, цвет и запах не изменяются.

Вязкость мазей, хранившихся при температуре ±4°С,практически не изменялась (6,0-5,9; 12,0-12,0). Изучение микробиологической стабильности яазей в процессе хранения показало, что эмульсионная мазь дибутирина на эскове ЫаКМЦ, хранившаяся в банках из стекломассы с навинчиваемыми фышкамн, является агрегативно неустойчивой как при комнатной температуре, так и в условиях холодильника. Для повышения микробной чистоты в состав мази ввели сорбиновую кислоту, которая кроме фунгистатического действия создает кислую реакцию (рН 5,6), что благотворно скажется на течении раневого процесса. Введение консерванта в мазь на основе ПЭО сочли нецелесообразным в виду хорошей микробиологической устойчивости. Обе мази, хранившиеся при температуре +4"С в течение 12 месяцев (время наблюдения) оставались микробиологически стабильными, в исследуемых образцах ке обнаружилось и патогенной микрофлоры, присутствие которой не допустимо в препаратах для лечения инфицированных ран. Антимикробная актив-гость сохраняется на уровне исходных значений зон ингибнрования микроорганизмов, о чем свидетельствуют результаты, представленные в табл.4.

Таблица 4

Антимикробная активность мазей дибутирина после 12 месяцев

____________х лЪп

Мазь, срок хранения, мес. Диаметр зон задержки роста тест-микроорганизмов, мм

31аигеи5 Е.соИ Рв-аепщ. СапсИёа а1Ь.

Состав 17 0 25,0±1,01 21,(Ш),84 29,0± 1,23 27,0±0,96

12 24,0±1,37 21,0±1,05 27,0±0,8б 25,0±0,83

Состав 22 0 25,0*1,09 27,0±137 29ДЫ.25 32,0±0,83

12 2б,0±1,52 26,0±1,02 27,0±0,9б 30,0±1,12

При определения срока годности мази исследовали три серии 1% ди-бутириновой мазя на основе ПЭО, храшшшиеся в банках из стекломассы и алюминиевых тубах с внутренним лаковым покрытием, вместимостью 30 г и 15 г соответственно в условиях термостата -+40°С±2°С.

Проверяли подлинность, количественное содержание дибутирина и рН 10% водных говлеченш мази. Химическую стабильность дибутирина определяли по отсутствию посторонних пятен на хроматографнческих пластинках "Сорбфил" в системе бензол с последующей обработкой смесью концентрированной серной кислоты - этанол 1:9. Установлено, что величина рН и содержание дибутирила изменились незначительно, а на хроматограммах не обнаружено дополнительных пятен продуктов разложения, что позволяет прогнозировать срок годности в течение 2-х лет.

На основании результатов, полученных в процессе изучения стабильности мазей дибутирина, установлено, что рациональной упаковкой для мазей являются алюминиевые тубы, обеспечивающие качество при температуре +4°Св течение 1 года (время наблюдения).

Изучение фармакологической эффективности в безвредисеге мазей дибутир ннз в опытах на ясввошых (глава 5)

Далеко ие всегда мази, имеющие хорошие технологические показатели, обладают высокой терапевтической активностью, в связи с чем, нами были проведены исследования изучаемых образцов мазей дибутирина на скорость заживления резаных ран кожи крыс.

Одним из объективных показателей скорости репаративиых процессов в срастающихся тканях является определение прочности послеоперационного рубца (Фенчин К.М., 1979, Мишарев О.С. и др., 1984, Виноградов В.М. и др., 1987). Опыты по изучению ранозаживляющего действия мазей дибутирина проведены на 66 белых беспородных крысах обоего пола. Показателем заживления служили результаты тензиометрии. Анализ результатов эксперимента, представленный в табл.5, свидетельствует, что все мази дибутирина не только не тормозят регенерацию, но и показали тенденцию к более быстрому их заживлению, о чем свидетельствует крепость послеоперационного рубца, достоверно большая по сравнению с контролем.

f7

Таблица 5

Влияние различных мазей с антисептиками на регенерацию резаных ран кожи белых крыс

Состав мази Сила разрыва рубца в г через % кинтактным животным

3 суток 5 суток 7 суток

1. Контроль 222,2115,1 372,4138,9 551,6133,8 0

2. Д+вазелин 281,4125,8 524,3141,3* 752,81135,4

3. Д+ПЭО (8:2) 266,0132,9 465,0125,3 752,5136,2* 136,5

4. Д+6% NaKMLJ 324,6150,6 455,01263 815,7164,1* 147,9

5. Д+основа 17 352,0113,4* 600,0165,1* 770,0157,6* 139,7

б. Д+основа 22 216,218,5 539,7111,8* 855,0115,3* 155,0

7. Мазь 5% МУ 475,0119,9* 7233±5бД* 798,7152,2*

8. Д+ПЗО+5% МУ 455,01433 677,5120,8 887,5120,1

9.Д+ИаКМЦ+5% МУ 375,0139,8 742,5134,4 770,0121,5

Примечание: Д -1% дкбутирина;МУ - метилурацил.

Введение мегпшурацила в состав мазей дибутирина не привело к существенному усилению регенерации, хотя мазь дибутирина с метилурацгтом на ПЭО основе н показала несколько большую крепость рубца, но это увеличение недостоверно. Сравнительное изучение ранозажлвляющего действия исследуемых мазей с мазями хлоргексидина и йодопироновон мазью заводского производства показало, что ранозаживляющий эффект днбутириновых мазей превосходит их по эффективности (рис.2).

Эффективность исследуемых мазей при лечении ожоговых ран изучали на модели дозированных по площади и глубине термических ожогов, наносимых контактным способом на выстриженную поверхность спины крыс, находящихся под эфирным наркозом. Показателями, характеризующими заживление, служили сроки отторжения первичного струпа, изменение площади ожоговой поверхности в процентах, к исходной величине или полное заживление ожоговой раны к 30-ому дню наблюдения. Результаты эксперимента показали, что исследуемые образцы мазей оказали некоторое влияние на скорость заживления ожоговых ран: ускорилось отторжение струпа га 35 дней по сравнению с контролем и уменьшилась площадь ожоговой раны на

30-ый день в среднем на 80%. Мазь на основе ЫаКМЦ состава 17 вызвала полное заживление ожога у 20% животных.

Влияние мазей с антисептиками на регенерацию:

время заживления, сут.

1000 800,; § 6008 «.

2И-

7 суток

□ контроль

□

Я хлоргекскдин + основа □

□ йодопироновая мазь О

ЕД + основа 22

Рис. 2.

Учитывая тот факт, что с ожоговой поверхности любые вещества всасываются также быстро, как и со слизистых оболочек, предстояло проследить проявляют ли мази дибутирина реэорбтивное действие, для чего следили за изменением массы животных и их температурой. Наблюдения за животными при ежедневном 30-дневном нанесении мазей на ожоговую рану показало, что обе мази не оказывают резорбтизного действия, о чем свидетельствовало отсутствие гоменений в массе животных и их температуры по сравнению с контролем (без нанесения аппликаций мази).

Известно, что заживление ран, как правило, сопровождается развитием воспалительного процесса. С целью определения противовоспалительной активности мазей дибутирина использована каррагениновая модель экесуда-тивного асептического воспаления лапы 1фыс. Анализ результатов эксперимента показал, что 1% мази дибутирина на 6% геле ЫаКМЦ обладают выраженной противовоспалительной активностью. У мази состава 17 это действие выражено в меньшей степени. Мазь состава 22 на ПЭО основе не показала четкого торможения отека по сравнению с контролем (табл.0.

Таблица 6

Противовоспалительный эффект мазей дибутирина

Состав мази Прирост объема в % к Торможение отека

исходному через 4 ч в%кнсходному

1. Контроль (без обработки) 171,1 -

2.1% мазь на №КМЦ 95,8 44,1

3. Контроль (без обработки) 135,8 -

4.1% мазь на основе 17 116,3 14,4

5. Контроль (без обработки) 112,0 -

б. 1% мазь на основе 22 121,0 нет торможения

С учетом современных требований, предъявляемых к мазям для лечения ран и ожогов, было важно, кроме антимикробного, репаративного, противовоспалительного действия дибутирина изучить местноаиестезнрующее действие мазей. Поверхностную анестезию 1% мазями дибутирина с введенными в них 3% тримекална, пиромекаина и анилокаяна определяли на роговице глаза кролика по методу Ренье.

При статистической обработке результатов эксперимента не выявлено достоверного различия в глубине и продолжительности анестезирующего эффекта мазевых композиций по сравнению с 3% водными растворами анестетиков (контроль), кроме мази на основе 17 с МаКМЦ и трнмекаином, эффективность анестезии которого, при отсутствии раздражающего действия [слезотечение, покраснение коньюкгавы), выражена в 1,67 раза сильнее по ¡равнению с водным раствором анестетика. Индекс Ренье: для мази составил: 1070,7±80,2; контроль - 640Д±53,1. Длительность анестезии мазью составила 53,3±3,3 мин.; контроль - 36,3±1,3 мин. Учитывая современные положения, что ¿очетания активных веществ в одной лекарственной форме могут приводил, к усилению или снижению их фармакологических свойств, в результате физико-шмического взаимодействия,необходимо дальнейшее гоучение антимикробной активности и ранозаживляющего эффекта мази дибутирина с тримекаи-хом.

Таким образом, на основании физических, физико-химических, био-$армацевтических, микробиологических и фармакологических исследований

Ю

разработаны составы мазей дибутирина, обладающие высокой антимикробной активностью, дегидратирующим, ранозаживляющим и противовоспалительным действием, что позволяет рекомендовать их для лечения хирургических ран в I и II фазе раневого процесса.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании проведенных комплексных исследований при использовании математического метода планирования эксперимента научно обоснованы составы и технология 1% мазей дибутирина на щцрофильных основах, предназначенных для терапии раневых инфекций в I и II фазу раневого процесса.

2. Изучены антимикробные, осмотические и реологические свойства разработанных мазей. Установлена высокая антимикробная активность в отношении основных возбудителей шейной инфекции. Показано, что они обладают удовлетворительными консистентными свойства и выраженной осмотической активностью.

3. Установлена ранозаживляющая и противовоспалительная эффективность разработанных мазей, а также отсутствие резорбтивного и раздражающего действия.

4. Апробированы хроматографический метод идентификации и спекгрофо-тометрический метод количественного определения дибутирина в мазях.

5. Исследование стабильности мазей дибутирина в зависимости от вида упаковки и условий хранения показало, что оптимальными являются алюминиевые тубы, обеспечивающие стабильность при температуре +4°±2°С в течение одного года (время наблюдения).

6. Составлены проект ВФС и лабораторный регламент производства на 1% мазь дибутирина. Подготовлена документация для представления в Фармакологический комитет МЗ РФ на предмет разрешения клинических испытают.

ПУБЛИКАЦИИ

1. Изучение влияния мазевых композиций на антимикробную актив-кость дибутирина в мазях/ Коростелева JI.K, Семенова З.Н., Вдовина Г.П., Кейко H.A. // Актуальные проблемы фармацтехнологии: Сб.науч.тр.-М.: ВНИИФ, 1994,- С.123-126.

2. Изучение фармакологических свойств 1% мазей дибутирина на гидрофильных основах/ Коростелева Л.К., Чащина C.B., Дровосекова Л.П., Вдовина Г.П., Кейко H.A. // Фармация здравоохранению России: Материалы науч. и учеб.-метод. конф., посвященной 10-летию выпуска провизорских кадров в респ. Башкортостаи.-Уфа: Башк.гос.мед.ун-т, 1996,- С. 143.

3. Коростелева Л.К., Тюбаева СЛ., Вдовина Г.П. Изучение техноло-пгческих и фармакологических свойств мазей дибутирина на гидрофильных основах// Актуальные проблемы медицины и фармации: Материалы итоговой науч. конф. студентов и молодых ученых,- Курск, 1996,- С.98-99.

4. Коростелева JI.K., Одегова Т.Ф., Вдовина Г.П. Влияние способа введения дибутирина в мази на его антимикробную активность// Депон. и зарег. в Госдентр науч. мед.б-ке за Кя 125155 от 06.05.96.

5. Коростелева Л.К., Вдовина Г.П. Оценка осмотических свойств мазей дибутирина на эмульсионных основах// Депон. и зарег. в Гос.центр. науч. мед.б-ке за № 125156 от 06.05.96.

6. Оценка раиозаживляющего действия мазей с антисептиками/ Коростелева Л.К., Погребняк А.И., Колла В.Э., Тюбаева С.А., Данилов Ю.Л.// Достижения современной фармацевтической науки и образования - практическому здравоохранению.- Пермь, 1997,- С. 112.