Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическое изучение сухого полиэкстракта из надземной части остролодочника остролистного

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ АКАДЕМИКА И.П.ПАВЛОВА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СУХОГО ПОЛИЭКСТРАКТА ИЗ НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ОСТРОЛОДОЧНИКА ОСТРОЛИСТНОГО

Специальность 14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ОД

На правах рукописи

БАХТИНА Светлана Михайловна

Санкт-Петербург - 1996

Работа выполнена в Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии (СПХФА).

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Лесиовская Е.Е.

Научный консультант: кандидат фармацевтических наук, доцент

Саканян Е. И.

Официальные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор Зайцев A.A.

- доктор медицинских наук, профессор Дьячук Г.И.

Ведущая организация - Научно-исследовательский институт

экспериментальной медицины РАМН.

Защита состоится "¿¿О " <jlHWalh<xil996 г. в_ час. на заседании диссертационного совета К 074.37.02 в Санкт-Петербургском государственном медицинском университете им. акад. И.П.Павлова (197089, Санкт-Петербург, ул.Л.Толстого 6/8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского государственного медицинского университета им. акад. И.П.Павлова.

Автореферат разослан " ¿■У " llc(Х<сс~, 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Звартау Э.Э.

- 3 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. При исследовании лекарственных растений Забайкальской флоры, применяемых в традиционной тибетской медицине, было установлено, что растения рода остролодочник - Oxyt-ropis DC., семейства бобовых - Fabaceae содержат значительное количество фенольных соединений (флавоноидов и фенолкарбоновых кислот), а также алкалоиды, кумарины, сапонины (Блинова К.Ф.. 1972, 1974, 1977, СаканянЕ.И., 1988 и др.). Разнообразие химического состава обуславливает противовоспалительное, желчегонное, диуретическое, антиаритмическое и болеутоляющее действие остролодочников. Они представляют интерес в качестве источников противоаллергических, антимикробных средств, а также для лечения интоксикаций различной этиологии. Скрининговые исследования позволили выявить наиболее перспективных для внедрения в научную медицину представителей этого рода: остролодочник остролистный, остролодочник шишковидный, остролодочник лесной (Пастушенков JI.В., 1989, Коноп-лева Е.В., 1994,). Предварительная фармакологическая оценка надземной части остролодочника остролистного (0.0.)■ показала, что он в эксперименте на животных обладает малой токсичностью и проявляет выраженное депримирующее действие на центральную нервную систему (ЦНС), а также антиаритмические, антигипоксические и болеутоляющее свойства (Пастушенков Л.В., 1989, Саканян Е.И., 1988, Коноплева Е.В., 1994)

Настоящее исследование является продолжением ряда работ кафедр фармакогнозии, фармакологии и аптечной технологии лекарств Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии (СПХФА) по фармакогностическому и фармакологическому изучению отдельных видов рода остролодочник - Oxytropis DC. и определению наиболее перспективных из них для внедрения в научную медицину. В связи с этим представляется актуальным разработка фитопрепаратов из надземной части одного из забайкальских видов рода остролодочник - Oxytropis DC. - остролодочника остролистного -Oxytropis oxyphylla (Pall.) DC.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является фармакологическое изучение суммарного спирто-водного извлечения из травы остролодочника остролистного и сухого полиэкстракта на его основе.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Провести фотохимический анализ спирто-водных извлечений

из надземной части остролодочника остролистного, полученных экстрагированием этанолом различной концентрации, а также суммарной вытяжки растения на наличие основных групп биологически активных веществ.

2. Разработать метод количественной оценки суммарного спир-то-водного извлечения из надземной части остролодочника остролистного для последующей стандартизации полиэкстракта в соответствии с требованиями ГФ-Х1.

3. Провести углубленное фармакологическое исследование полиэкстракта остролодочника остролистного (ПЭКО.О.) последующим направлениям:

- изучить спектр психотропных эффектов;

- оценить стресспротективное действие;

- оценить противогипоксическую активность препарата на основных моделях гипоксических состояний;

- исследовать влияние на процесс ноцицепции;

- изучить спектр противовоспалительного и ранозаживляющего эффектов;

- исследовать влияние на некоторые показатели обмена веществ;

- оценить общетоксические свойства полиэкстракта.

4. Подготовить материалы по доклиническому изучению сухого полиэкстракта остролодочника остролистного для представления в Государственный Фармакологический Комитет МЗ и МП РФ и разработать проект временной фармакопейной статьи на него.

Положения выносимые на защиту:

1. Суммарное спирто-водное извлечение из травы остролодочника остролистного содержит весь комплекс биологически активных соединений, присущих данному виду растений, и может быть использовано для получения нового лекарственного средства - сухого полиэкстракта травы остролодочника остролистного. Стандартизацию полиэкстракта следует проводить по одной из основных групп биологически активных веществ - флавоноидам.

2. Полиэкстракт остролодочника остролистного обладает широким спектром психотропных эффектов, стресспротективной активностью, длительным и выраженным анальгезирующим действием, проявляет противогипоксическое, противовоспалительное и ранозаживляю-щее свойства.

3. Полиэкстракт является малотоксичным антигипоксантом в острых и хронических опытах.

Научная новизна.

В данном исследовании впервые установлены спектр психотроп-

ных эффектов полиэкстракта остролодочника остролистного и характер зависимости "доза - эффект". Выявлены стресспротективное и защитное действие полиэкстракта на основных моделях гипоксических состояний. Установлено, что длительность и выраженность его анальгезирующего эффекта превосходят указанные показатели метами-зола (анальгина). Доказано положительное влияние полиэкстракта остролодочника остролистного на течение всех стадий процессов воспаления и заживления раневых повреждений.

Научно-практическое значение работы.

Изучен новый комплексный препарат растительного происхождения. Результаты его фармакологического и токсикологического исследований будут внесены в отчет для представления в Государственный Фармакологический Комитет МЗ и МП РФ. Разработаны методы стандартизащи препарата и проект временной фармакопейной статьи для представления в Государственный Фармакологический Комитет МЗ и МП РФ. Данные по спектру фармакологических эффектов полиэкстракта остролодочника остролистного являются основанием для дальнейшего направленного поиска высокоэффективных и малотоксичных лекарственных препаратов с полиэкстрактом остролодочника остролистного.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседании Санкт-Петербургского фармакологического общества (1991 г.); на 2-ой Всесоюзной конференции "Фармакологическая коррекция гипоксических состояний" (г.Гродно, 1991 г.); на научно-практической конференции, посвященной 50-летию фармацевтического факульте-' та Томского медицинского института (г.Томск, 1991 г.); на научно-практической конференции, посвященной 25-летию фармацевтического факультета Курского фармацевтического института (г.Курск, 1991 г.); на научной конференции, посвященной 10-летию фармацевтического факультета Башкирского государственного медицинского университета (г.Уфа, 1991 г.); на 3-ей Украинской конференции по медицинской ботанике (г.Киев, 1992 г. ); на Международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения С.В.Аничкова (г. Санкт-Петербург, 1992 г.); на Российской научной конференции "Антигипоксанты и актопротекторы: итоги и перспективы" (г.Санкт-Петербург. 1994 г.); на Всероссийской научной конференции "Химия и технология лекарственных веществ" (г. Санкт-Петербург, 1994 г.); на 2-ой конференции Российской ассоциации по изучению боли (г.Санкт-Петербург, 1995 г.).

Публикации.

По материалам работы опубликовано 14 научных работ, в том числе 3 статьи, тезисы 10 докладов и подана заявка на патент.

Объем и структура диссертации.

Материалы диссертации изложены на 140 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 44 таблицами, 19 рисунками и состоит из введения, шести глав, обсуждения результатов, выводов, научно-практических рекомендаций, приложений и указателя литературы, включающего 154 источника на русском и 22 на иностранных языках.

В главе 1 диссертации проведен обзор литературы и дано современное представление о стресспротекторах. Представлена роль нейромедиаторных систем в формировании анальгезии и механизмах стресс-защиты, проанализированы возможности применения растительных стресспротекторов в качестве антигипоксантов, а также для лечения раневых повреждений и воспалительных процессов в организме. Подтверждена целесообразность использования представителя рода остролодочник (Oxytropls DC.) - остролодочника остролистного Oxytropls oxyphylla (Pall.) DC. как растительного стресспротектора.

В главах 2-6 изложены методы и результаты фитохимического анализа спирто-водных извлечений из травы О.О.. стандартизации суммарного извлечения и сухого полиэкстракта 0.0., методики и результаты фармакологического исследования ПЭК 0:0.

В приложениях помещены экспериментальные данные подтверждающие безвредность ПЗК 0.0. в острых и хронических опытах, а также проект временной фармакопейной статьи на ПЭК 0.0. - "Extractum oxytropls slccum".

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ФОТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СПИРТО-ВОДНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ИЗ НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ОСТРОЛОДОЧНИКА ОСТРОЛИСТНОГО

В качестве объектов исследования были выбраны спирто-водные извлечения из травы 0.0. этанолом 40%, 70%, 96% концентрации и суммарное спирто-водное извлечение из травы 0.0. Извлечения подвергали фитохимическому анализу на наличие основных групп действующих веществ.

- 7 -

Материалы и методы фитохимического исследования. Определяли наличие флавоноидов, аминокислот, фенольных кислот, кумаринов, сапонинов, алкалоидов.

Присутствие флавоноидов устанавливали с помощью цветной реакции (пробы Синода). Изучение структуры флавоноидов и фенольных кислот проводили с помощью двумерной бумажной хроматографии в системах растворителей: 1) н-бутанол-уксусная кислота-вода (БУВ) 4:1:5; 2) 15% уксусная кислота, используя схему Mabry (1969 г.).

Исследование аминокислотного состава проводили методом.одномерной нисходящей бумажной хроматографии в системах растворителей: 1) БУВ 12:1:5; 2) н-бутанол-пиридин-вода (БПВ) 1:1:1. Предварительную идентификацию аминокислот проводили путем сравнения значений Rf и окраски пятен с аминокислотами-свидетелями.

Присутствие сапонинов определяли методом восходящей тонкослойной хроматографии на пластинках "Sllufol" в системе растворителей: н-бутанол-метанол-вода (5:3:1).

Наличие кумаринов определяли методом восходящей тонкослойной хроматографии в системе: н-гексан-бензол-метанол (5:3:1).

Исследование на наличие алкалоидов проводили с помощью общеалкалоидных осадочных реакций, а также методом одномерной восходящей хроматографии в системах растворителей: БУВ 4:1:5 и 15% уксусная кислота.

Результаты фитохимического исследования спирто-водных извлечений из травы остролодочника остролистного.

Установлено, что 40% этанолом экстрагируются флавоноиды, преимущественно флавоноловой природы в виде моно- и дигликозидов, сапонины. Фенольные кислоты представлены в извлечении хлорогено-вой и п-оксибензойной кислотами. В растительной вытяжке идентифицировано 16 аминокислот.

Из травы 0.0. 70% этанолом извлекаются флавоноиды моноглико-зидной формы, фенольные кислоты, следы кумаринов. По результатам хроматографического анализа идентифицировано 11 аминокислот.

Предварительная фитохимическая оценка вытяжки из надземной части 0.0. 96% этанолом указывает на то, что спиртом высокой концентрации экстрагируются в основном флавоноидные агликоны, флавоноиды в виде моногликозидов, фенольные кислоты, следы аминокислот, кумарины, а также азотсодержащее соединение алкалоидного характера.

Исследование качественного состава объединенной спирто-вод-ной вытяжки из травы 0.0. показало, что способ последовательного экстрагирования этанолом восходящей концентрации позволяет извле-

кать из сырья все группы биологически активных веществ, присущие данному виду растений: флавоноиды, фенольные кислоты, аминокислоты, алкалоид, сапонины, кумарины. Сапонины и кумарины обнаружены в незначительном количестве. В большом разнообразии и количестве представлены аминокислоты. В вытяжке содержится 21 аминокислота. В результате сравнения хроматограмм извлечения с хроматограммами аминокислот свидетелей удалось предварительно идентифицировать 18 соединений, в том числе нейроактивные аминокислоты (аспарагин, глицин, аланин, фенилаланин, лейцин, триптофан, аспарагиновая и глутаминовая кислоты) и антиоксиданты (метионин и цистеин). Результаты предварительного фитохимического анализа спирто-водных извлечений из травы 0.0. представлены в табл.1.

Таблица 1

Содержание биологически активных соединений в спирто-водных извлечениях из травы 0. 0.

1 1 N Группа биологич. 40% 70% 96% 1 Суммарное |

|п/п активных веществ этанол этанол этанол извлечение |

1 1. Флавоноиды 4 4 4 4 |

1 2. Фенольные к-ты 4 4 4 4 |

1 з. Аминокислоты 4 4 4 4 |

1 4. Сапонины сл. 0 0 сл. 1

1 5. Кумарины 0 сл. 4 4 |

1 6. 1. Алкалоиды 0 0 4 4 | 1

Примечание: "+" - установлено наличие соединений в исследуемом извлечении; "О" - группа соединений в извлечении отсутствует; "сл." - следы соединений в исследуемом извлечении.

Наличие в объединенной спирто-водной вытяжке 0. 0. всего набора биологически активных соединений, характерного для растений этого вида, явились предпосылкой для проведения углубленного фармакологического изучения суммарного извлечения из травы 0.0. в виде сухого полиэкстракта. ПЭК 0.0. получали методом дробной ме-церации этанолом восходящей концентрации с последующим выпариванием и высушиванием в вакуум-выпарном аппарате.

Флавоноиды, как одна из основных групп действующих веществ остролодочника, переходят в полиэкстракт и удобны для стандартизации препарата. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидных соединений в ПЭК 0.0. В ее основу положен спектрофотометрический метод, основанный на использовании реакции

комплексообразования флавоноидных соединений с хлоридом алюминия.

Установлено, что количественное содержание флавоноидов в сухом ПЭК 0.0. составляет в среднем 2,7% в пересчете на кверцетин, или 0,9% - в пересчете на абсолютно сухое сырье.

Представленная методика является достаточно чувствительной, воспроизводимой и простой в исполнении. Она включена в проект временной фармакопейной статьи и рекомендована для стандартизации сухого полиэкстракта из надземной части 0.0.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ СУХОГО ПОЛИЭКСТРАКТА ОСТРОЛОДОЧНИКА ОСТРОЛИСТНОГО

Фармакологические исследования ПЭК 0.0. выполнены на 515 белых нелинейных мышах обоего пола, 3145 белых нелинейных крысах обоего пола, 24 кроликах самцах.

ПЭК 0.0. вводили внутрибрюшинно в диапазоне доз от 0,01 мг/кг до 400 мг/кг, перорально - от 4 мг/кг до 760 мг/кг, а также местно в виде 0.2% мазей на различных основах. В работе в качестве препаратов сравнения использовали: гексенал (60 мг/кг), хлоралгидрат (200 мг/кг). диазепам (0,5 мг/кг - 5 мг/кг), гидазепам (10 мг/кг). натрия оксибутират (34 мг/кг - 100 мг/кг). коразол (100 мг/кг), стрихнина нитрат (0.1 мг/кг). гутимин (50 мг/кг -100 мг/кг), фенамин (4 мг/кг), анальгин (100 мг/кг), ортофен (2,5 мг/кг), бутадион (10 мг/кг). Перорально вводили масло облепихи (5 мл/кг), деалкоголизированную настойку корней женьшеня (60 мг/кг).

В контрольные и опытные группы подбирали животных с близкими психофизиологическими профилями, которые оценивали по усовершенс-твованому способу ( Лесиовская Е.Е., Веселова И.Б., 1989).

Для исследования действия ПЭК 0.0. на этологические показатели животных использовали методы "открытое поле" и "норковый рефлекс". Миорелаксирующий эффект определяли по времени удерживания животных на горизонтальном гладком вращающемся (70 об/мин) стержне, анксиолитическую активность препаратов оценивали в тесте "бой крыс". Влияние ПЭК 0.0. на свойства снотворных препаратов и средств для наркоза оценивали по скорости наступления и продолжительности сна. Антагонизм ПЭК 0.0. с эталонными конвульсантами оценивали по времени наступления судорог, длительности судорожного периода и проценту гибели животных и опытных и контрольной группах.

Для оценки антигипоксической активности ПЭК 0.0. использовали ряд основных моделей гипоксических состояний. Моделирование

острой гипобарической гипоксии (ОГБГ) осуществляли при помощи барокамеры с приточно-вытяжной вентиляцией. Максимальное разряжение в камере соответствовало высоте подъема 12 ООО м над уровнем моря. Гипоксию с гиперкапнией в гермобъеме моделировали, помещая животных в стеклянные сосуды, которые герметично закрывали и заливали парафином. Б основе острой гистотоксической гипоксии (ОГТГ) лежит прямое взаимодействие гистотоксических ядов (натрия нитропруссид) с цитохромоксидазой, приводящее к подавлению ее активности. Водный раствор ингибитора фермента терминального участка дыхательной цепи вводили животным в дозе 22 мг/кг внутрибрю-шинно за 30 минут после парентерального введения исследуемых препаратов. Регистрировали продолжительность жизни и выживаемость животных в условиях гипоксии. Истощающие физические нагрузки моделировали в условиях "плавательного теста" (Пастушенков Л.В., 1966,1991). Плаванье до полного утомления с грузом 1% от массы тела осуществляли при температуре 28,0 ±0,5 "С. Регистрировали время до полного утомления (отказ от плавания).

Комплекс экстремальных воздействий (ЭВ) моделировали путем сочетания подъема в барокамере при температуре 45,0 °С и эмоционального стресса, вызываемого мягкой фиксацией хвоста крыс. Определяли количество эрозий слизистой оболочки желудка животных. Оценку стресспротективного действия ПЭК 0.0. также проводили в условиях периодической электростимуляции корня хвоста и 3-х часовой иммобилизации (импульсы частотой 20 Гц, длительностью 10 мс, амплитудой 50 В каждые 3 минуты по 30 с).

Обезболивающее действие ПЭК 0.0. оценивали'по влиянию на латентный период отдергивания хвоста (тест "tall-fllk") и по появлению звукового реагирования (порога вокализации) у крыс при электростимуляции корня хвоста крыс (Зайцев А.А., 1984, Дмитриев A.B., 1984, Игнатов Ю.Д., Михайлович В.А., 1990 ).

Антиальтеративную активность ПЭК 0.0. оценивали на модели бутадионовой язвы желудка подопытных животных (Барнаулов О.Д. и соавт., 1988).

Антизкссудативное действие ПЭК 0.0. изучали на моделях:

а) острый воспалительный отек, вызванный субплантарным введением в заднюю лапу крыс самцов 0,1 мл 1% водного раствора кар-рагенина.

б) острый отек легкий вызывали введением адреналина гидрохлорида (5 мг/кг) подкожно через 1 час после введения ПЭК 0.0. и препаратов сравнения.

Антипролиферативные свойства ПЭК 0.0. изучали на модели

"ватной гранулемы".

В качестве дополнительного теста для изучения антипролифера-тивной активности ПЭК 0.0. и его комплексного влияния на процесс воспаления использовали модели линейной кожной и плоскостной кож-но-мышечной ран (Убашеев И.А. и др., 1990).

Для определения общего потребления кислорода использовали аппарат конструкции Миропольского.

Ректальную температуру определяли у крыс электротермометром ТПЭМ-l через 30 и 60 минут после внутрибрюшинного и перорального введения препаратов, соответственно.

Определение глюкозы проводили орто-толуидиновым методом (Мешкова Н.П., 1979, Колб В.Г., 1982), определение пировиноград-ной и молочной кислот - ферментативным методом с помощью наборов реактивов "Лахема" (Колб В.Г., 1982). Содержание малонового ди-альдегида определяли по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Swan-son L.W., 1981). Определение общего белка проводили при помощи биуретовой пробы (Колб В.Г. ,1982, Мешкова Н.П., 1979), альбуминов и глобулинов - унифицированным методом электрофоретического разделения на пластинках из ацетата целлюлозы (Колб В.Г., 1982), холестерина - методом Илька по реакции с уксусным ангидридом (Колб В.Г., 1982, Мешкова Н.П., 1979). Содержание общих липидов определяли при помощи набора реактивов фирмы "Лахема".

Оценку острой, хронической и специфической токсичности полиэкстракта проводили в рамках работа по изучению токсичности 0.0. Работа выполнена в соответствии с рекомендациями Фармакологического комитета МЗ СССР (1985, 1986, 1988 г.г.) в опытах на крысах, морских свинках и кроликах на базе НИЛа кафедры фармакологии СПХФА.

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами с расчетом средних значений, стандартных отклонений средних значений и доверительных интервалов при р = 0,05. Различия по сравнению с контролем считали статистически существенными при р < 0,05.

ПСИХОТРОПНЫЕ И СТРЕССПРОТЕКТИВНЫЕ СВОЙСТВА СУХОГО ПОЛИЭКСТРАКТА ОСТРОЛОДОЧНИКА ОСТРОЛИСТНОГО

При изучении спектра психотропной активности установлено, что препарат обладает способностью изменять функциональное состояние ЦНС. Характер центральных эффектов 0.0. варьировал в зависимости от дозы растительного средства. В диапазоне доз от 4 мг/кг

до 80 мг/кг он оказывал стресспрогективное действие и активирующее влияние на ДНС и был схож с транквилизатором "дневного" типа - гидазепамом. По спектру этологических эффектов ПЭК 0.0. в дозах от 80 мг/кг до 120 мг/кг близок к натрия оксибутирату, а в более высоких дозах схож с диазепамом (рис.1). Он не потенцировал эффект средств для наркоза, но проявлял умеренную противосудорожную активность. Выраженность центральных эффектов растительного препарата в более высоких дозах (от 200 мг/кг до 400 мг/кг) во всех экспериментах была сравнима с активностью диазепама.

Исследования противогипоксической активности ПЭК 0.0. показали, что препарат обладает выраженным эффектом в широком диапазоне до^ на основных моделях гипоксических состояний. В условиях острой гипобарической гипоксии при внутрибрюшнном введении наибольшую активность ПЭК 0.0. проявил в дозе 40 мг/кг. Длительность жизни животных возрастала в 3,3 раза по сравнению с контролем. При энтеральном введении максимальный эффект ПЭК 0.0. оказывал в дозе 400 мг/кг. Длительность жизни животных увеличивалась в 2,9 раза по сравнению с контролем, выживаемость составляла 40%. Анти-гипоксический эффект ПЭК 0.0. превосходил по активности препараты сравнения: гутимин, натрия оксибутират, диазепам.

ПЭК 0.0. проявляет защитный эффект в условиях гипоксии с ги-перкапнией в диапазоне доз от 20 мг/кг до 400 мг/кг, а также в условиях острой гистотоксической гипоксии в дозах - от 4 мг/кг до 400 мг/кг. Результаты исследований представлены на рис.2. Установлено. что активность ПЭК 0.0. была сравнима с эффектом гутимина.

Выявлено, что протекторное действие ПЭК 0.0. в условиях гипоксии "нагрузки" после его семидневного введения, сопоставимо с эффектом растительного адаптогена - настойки корня женьшеня. Оптимальные дозы исследуемого препарата: внутрибрюшинно - 40 мг/кг, а перорально - 200 мг/кг.

Поскольку установлено, что ПЭК 0. 0. проявляет антигипокси-ческие свойства на различных моделях гипоксии, исследовали защитные возможности препарата в условиях экстремальных воздействий (ЭВ). В качестве комплекса ЭВ применяли сочетание состояний, в патогенезе которых ведущая роль принадлежит гипоксии: эмоциональный стресс, ОГБГ, перегревание. Установлено, что препараты сравнения уменьшали количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка: гидазепам на 60%, гутимин на 30,3%. По активности ПЭК 0.0. превосходил гутимин в 1,6 раза и был сравним с гидазепамом.

- 13 -

Агрессивность

А

¿¿л 1 г

->'7 У» V, р£

в в 7 8

а)

рЬ

ш

Число обследованных отверстий

120-, 100 ■ 8060 -40 200

вЕп

А

б)

3

4

Число пересеченных квадратов

120 100 80 во

40

20 о

б

в)

Рис.1. Влияние полиэкстракга остролодочника остролистного (ПЭК 0.0.) на этологические показатели крыс самцов.

По осям ординат: агрессивность (а), число обследованных отверстий (б), число пересеченных квадратов (в) в % к контрольному уровню. Обозначения:

1- контроль; 2-диазепам (5 мг/кг); 3- натрия оксибутират (100 мг/кг); 4- ПЭК О.О. (4 мг/кг); 5- ПЭК 0.0. (40 мг/кг); 6- ПЭК 0.0. (80 мг/кг); 7- ПЭК О.О. (120 мг/кг); 8- ПЭК О.О. (200 мг/кг); 9- ПЭК О.О. (400 мг/кг).

, * к контролю

120 -

J

Кмгтрмъ

Рис.2. Влияние полиэкстракта остролодочника остролистного (ПЭК О.О.) и гутимина (100 мг/кг) на переносимость

, мышами гипоксии с гиперкапнией (светлые столбики) и гистотоксической гипоксии (столбики со штриховкой).

Обозначения: I - ПЭК О.О. в дозе 4мг/кг, II - ПЭК О.О. в дозе 20мг/кг,

III - ПЭК О.О. в дозе 40мг/кг, IV - ПЭК О.О. в дозе 400мг/кг, * - отличия от контроля статистически несущественны (р>0,05).

АНАЛЬГЕЗИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ. ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ ДЕЙСТВИЕ И РАНОЗАЗКИВЛЯЮЩИЕ СВОЙСТВА СУХОГО ПОЛИЭКСТРАКТА ОСТРОЛОДОЧНИКА ОСТРОЛИСТНОГО

Установлено, что в тесте "tail-flik" ПЭК О.О. обладает умеренным обезболивающим действием. Максимальный эффект отмечен в дозе 40 мг/кг при внутрибрюшинном и в дозе 400 мг/кг при перо-ральном введении. Латентный период отдергивания хвоста крыс увеличился по сравнению с контролем на 29,6% и на 23,1%, соответственно.

Эмоциональную реакцию на боль оценивали по величине порога вокализации при электростимуляции корня хвоста крыс. Установлено, что болеутоляющий эффект препарата проявляется через 20 минут после его введения, достигает максимума через 1, 5 часа и сохраняется в течение 5 часов, после чего постепенно уменьшается. По силе действия ПЭК 0.0. во всех экспериментах превосходил метамизол (анальгин).

Установлено, что ПЭК 0.0. на модели бутадионовой язвы желудка обладает антиульцерогенным эффектом. Он уменьшает общее количество деструкций желудка в два раза. Активность ПЭК 0. 0. сравнима с выраженностью эффекта масла облепихового. Исследования показали, что одной из возможных лекарственных форм 0.0. может быть эмульсия (масло-вода) для внутреннего применения.

ПЭК 0.0. проявляет близкий к ортофену антиэкссудативный и антипролиферативный эффекты, как при внутрибрюшинном введении в дозах от 20 мг/кг до 80 мг/кг, так и при пероральном введении в дозах от 100 мг/кг до 200 мг/кг. Результаты экспериментов представлены на рис. з.

О комплексном воздействии ПЭК 0.0. на процесс воспаления можно судить по его способности влиять на заживление раневых повреждений. Установлено, что на модели линейной кожной раны ПЭК 0.0. превосходит нестероидные противовоспалительные средства (бу-тадион, ортофен) и масляные вытяжки облепихи (табл.2). В качестве возможного лекарственного препарата с ПЭК 0.0. исследовали ряд 0,2% мазей на различных (дифильных, гидрофильных, липофильных) основах. Установлено, что дифильные основы способствуют проявлению максимального фармакологического эффекта остролодочника.

На модели плоскостной кожно-мышечной раны ранозаживляющий эффект ПЭК 0.0. проявляется в две фазы: в 1-3 сутки на высоте экссудации и после 17-го дня - в фазу репарации.

Таким образом, показано, что ПЭК 0.0. оказывает выраженное

-16 -

Экссудация

% к контролю

80

б)

Рис.3. Влияние полиэкстракта остролодочника остролистного (ПЭК О.О.)

на фазы экссудации (а) и пролиферации (6) процесса воспаления. Обозначения:

1- контроль; 2- бугадион (10 мг/кг); 3- ортофен (2,5 мг/кг);

4- ПЭК О.О. внутрибрюшинно (20 мг/кг);

5- ПЭК О.О. внутрибрюшинно (80 мг/кг);

6- ПЭК О.О. перорально (100 мг/кг) ;

7- ПЭК О.О. перорально (200 мг/кг).

Таблица 2

Влияние ранозаживляющих препаратов на показатель тензиометрии (в каждой группе по 12 животных)

N п/п Препарат, путь введения Доза Данные ранотензиометрии абсолюта. % к % к М±м интактным контр.

1. Интактные животные - 227,5±25, 0 100,0 -

Внутрибрюшинное введение

2. 3. 4 Контроль (физ.р-р) Бутадион Ортофен 2 ' мл/кг 10 мг/кг 2,5 мг/кг 20 мг/кг 40 мг/кг 243,0+8,37 251,1+23,9' 287,1+32, 9 106,8 110,3 126,0 100,0 103,3 118,2

5. 6. ПЭК 0.0. ПЭК 0.0. 370, 9+37, 0 395, 8+68,1 163.0 174, 0 152,6 162,9

Пероральное введение

7. 8. 9. Контроль (диет.вода) ПЭК 0.0. ПЭК 0.0. 5 мл/кг 20 мг/кг 200 мг/кг 243.6+25,1 326,7+34.5 436,0+43,3 107,1 143.6 191.7 100,0 134,4 178,9

Местно

10. И. 12. 13. Контроль (масло подсолнечн.) Масло облепиховое Контроль (вазелин: ланолин 4:1) Мазь с ПЭК 0.0. 0.2% (основа вазелин: ланолин 4:1) 2 мл/кг 2 мл/кг 10 мг/кг 258,6+21,7 320,0+30,1 237,5+16,8 450,0+54,1 117,8 141, 0 104,4 197,8 100. 0 123.7 100.0 189,5

Примечание: * - отличия от контроля статистически несущественны (Р ) 0,05)

влияние на все компоненты воспалительной реакции, угнетая альтерацию и экссудацию, замедляя процесс пролиферации и стимулируя репаративные изменения тканей.

ВЛИЯНИЕ СУХОГО ПОЛИЭКСТРАКТА ОСТРОЛОДОЧНИКА ОСТРОЛИСТНОГО НА НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ

Известно, что достичь устойчивости к гипоксии можно уменьшением потребления кислорода органами и тканями организма, которое всегда сопровождается снижением температуры тела. Установлено, что ПЭК 0.0. в условиях нормоксии снижает потребление кислорода и температуру тела животных аналогично гутимину и алмиду. Активность ПЭК 0.0. по отношению к показателям основного обмена проявляется в дозе 40 мг/кг. возрастает при увеличении доз и выражена максимально в дозе 400 мг/кг.

Установлено, что в условиях нормоксии ПЭК 0.0. существенно не . влиял на основные показатели углеводного обмена. Исследуемый препарат не оказывал влияния на содержание общих липидов, холестерина, фракций альбумины:глобулины периферической крови животных. Однако, содержание малонового диальдегида (МДА) и продуктов перекисной природы при введении ПЭК 0.0. в дозе 40 мг/кг в первый день уменьшалось на 35,9%, а на десятый - на 37,3%, по сравнению с контролем. Полиэкстракт в дозе 400 мг/кг снижал уровень МДА на 20% как в первый день, так и на десятый день опыта. Интерес представляет тенденция к увеличению общего белка как в первый день эксперимента, так и в течение десяти дней опыта.

Влияние ПЭК 0.0. на биохимические показатели крови в условиях гипоксической гипоксии, перегревания и эмоционального стресса представлены на рис.4. У контрольных животных выявлены сдвиги, сопоставимые с описанными ранее изменениями обменных процессов в условиях тяжелой гипоксии (Березовский В.А., 1981; Меерсон Ф. 3., 1986). Установлено, что ПЭК 0.0. способствует оптимизации углеводного обмена, анаболическим процессам, тормозит свободноради-кальное окисление липидов.

Исследование "хронической" токсичности ПЭК 0.0. не выявило выраженных изменений со стороны органов и систем, а также местно-раздражающего действия. В предварительных опытах установлено, что исследуемый препарат не обладает мутагенной и эмбриотоксической активностью.

А * »

' /

I ^ к

4 —«—»—

Рис.4. Влияние полиэкстракта остролодочника остролистного на биохимические показатели периферической крови крыс самцов в условиях гипоксической гипоксии, перегревания и эмоционального стресса (комплекса ЭВ).

Обозначения: показатели представлены в процентах к исходному уровню. 1 - глюкоза, 2- молочная кислота, 3 - пировиноградная кислота, 4 - общие липиды, 5 - холестерин, 6 - малоновый диальдегид, 7 - общий белок, 8 - отношение белковых фракций (альбумины: глобулины). —•—•— исходный уровень; —а—а— контроль (комплекс ЭВ);

-- ПЭК О.О. в дозе 40 мг/кг внутрибрюшинно в течение 10 дней;

-2-отличия от исходного уровня статистически существенны.

Таким образом, ПЭК 0.0. является оригинальным, эффективным, низкотоксичным растительным лекарственным средством. Ему свойственен широкий спектр фармакологической активности, что связано с комплексом действующих веществ остролодочника. Уникальным является выявленное сочетание анальгезирующей, антигипоксической, противовоспалительной активностей и разнообразных психотропных эффектов. различающихся, в зависимости от дозы препарата, по выраженности и направленности. Совокупность проявляемых свойств позволяет отнести полиэкстракт из надземной части 0.0. к группе растительных стресспротекторов.

На основании полученных данных можно рекомендовать ПЭК 0.0. для дальнейших исследований высокоэффективных и малотоксичных лекарственных препаратов.

ВЫВОДЫ

1. В результате исследований получен сухой полиэкстракт на основе объединенного спирто-водного извлечения из травы остролодочника остролистного. Доказано, что он содержит весь комплекс биологически активных веществ, присущих данному виду растений.

2. Полиэкстракт остролодочника остролистного обладает широким спектром психотропной активности. Установлено, что выраженность и направленность центральных эффектов зависят от дозы препарата. В дозах менее 80 мг/кг выявлены анксиолитическое и активирующее свойства полиэкстракта, а свыше 200 мг/кг преобладающим является депримирующее действие препарата на ЦНС.

3. Полиэкстракт в дозах от 4 мг/кг до 400 мг/кг проявляет длительное и выраженное анальгезирующее действие и защитный эффект на различных моделях гипоксических состояний, а также в условиях комплекса экстремальных воздействий.

4. Впервые обнаружены у полиэкстракта остролодочника остролистного противовоспалительное и ранозаживляющее свойства.

5. Установлено, что полиэкстракт остролодочника остролистного в условиях экстремальных воздействий способствует оптимизации обменных процессов организма и тормозит свободнорадикальное окисление липидов.

6. Доказана безвредность полиэкстракта в острых и хронических опытах. Не выявлено местнораздражающего, мутагенного и эмбри-отоксического действия остролодочника остролистного.

- 21 -

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании проведенного исследования для стандартизации полиэкстракта остролодочника остролистного рекомендован спектро-фотометрический метод определения суммы флавоноидов. содержание которых должно быть не менее 2.7% в пересчете на кверцетин или 0,9% в пересчете на абсолютно сухое сырье.

2. Полиэкстракт из травы остролодочника остролистного рекомендован для создания новых лекарственных препаратов группы растительных стресспротекторов в виде гранул, драже, растворов для инъекций, глазных капель и капель в нос. мазей, обладающих противовоспалительной и анальгезирующей активностью.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бахтина С.М. К вопросу об антигипоксической активности полиэкстракта остролодочника остролистного // Антигипоксанты и актопротекторы: итоги и перспективы: Тез.докл. Всеросс. на-учн. конф. - СПб., 1994. - С. 15.

2. Бахтина С.М., Лесиовская Е.Е., Саканян Е.И.. Коноплева Е. В., Кабишев К.Э. Противогипоксическая и анальгезирующая активности некоторых видов остролодочника // Казанский мед. журнал. -Т. 36, 1995, КЗ. - С. 205-208.

3. Блинова К.Ф., Саканян Е.И., Лесиовская Е.Е., Пастушенков Л. В., Бахтина С.М., Коноплева Е.В. О перспективах применения представителей некоторых видов рода остролодочник // Химия и технология лекарственных веществ: Матер. Всеросс.научн.конфер. -СПб., 1994. - С.93.

4. Лесиовская Е.Е., Бахтина С.М., Пастушенков Л.В., Коноплева Е. В., Саканян Е.И. Исследование болеутоляющего действия тибетского растения Даг-ша Гар-бо // Тез. докл. 2-й конфер. Российской ассоциации по изучению боли. - СПб., 1995. - С.237-239.

5. Лесиовская Е.Е.. Молдавер Б.Л.. Пастушенков Л.В., Саканян Е.И., Бахтина С.М., Кабишев К.Э. Разработка технологии дерматологической мази с применением остролодочника остролистного // Химия и технология лекарственных веществ: Матер. Всеросс.научн.конфер. - СПб., 1994. - С. 113.

6. Лесиовская Е.Е., Саканян Е.И., Харламова С.М., С.Пхон-аса. К исследованию фенольных . соединений.некоторых видов рода остролодочника // Тез. докл. научно-практ. конф., посвящ. 50-летию фарм. ф-та Томского мед. ин-та. - Томск, 1991. - С.151-152.

7. Лесиовская Е.Е., Харламова С.М., Саканян Е.И. Об особенностях влияния полиэкстракта остролодочника остролистного на перцепцию ноцицептивного сигнала и эмоциональную окраску боли // Актуальные вопросы фарм. науки и практики: Тез. докл. научно-практ. конф., посвящ. 25-летию фарм. ф-та КМИ. - Курск,1991.- С.170-171.

8. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е.. Фролова Н.Ю., Харламова С.М. и др. Изучение противогипоксической активности извлечений из растительного сырья // Тез.докл.межвуз. 49-й научно-практ. конф. - Пермь,1993. - С. 112-113.

9. Пастушенков Л.В.. Харламова С.М., Лесиовская Е.Е., Коноп-лева Е. В. К вопросу о спектре психотропной активности остролодочника остролистного // Тез. докл. Международной конфер., посвященной 100-летию со дня рождения акад. С.В.Аничкова. - СПб., 1992. -С. 168-169.

10. Саканян Е.И., Кабишев К.Э., Лесиовская Е.Е., Молдавер Б.Л., Бахтина С.М. Разработка лекарственных препаратов на основе остролодочника остролистного // Актуальные проблемы фармации: Сб. науч. статей. - Барнаул: Алтайский госуд. мед. университет, 1995.

- С. 295-299.

11. Харламова С.М. К вопросу о механизме антигипоксического действия полиэкстракта остролодочника остролистного // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний: Тез. докл. 2-й Всесо-юзн. конфер. - Гродно, 1991. - С.253-254.

12. Харламова С.М., Лесиовская Е.Е., Саканян Е.И. О влиянии полиэкстракта остролодочника остролистного на регенеративные процессы и возможных механизмах их реализации // Тез. докл. 3-й Украинской конф. по мед. ботанике. - Киев, 1992. - С.140-141.

13. Харламова С. М., Фролова Н.Ю., Плацен Р. И. и др. О рано-заживляющих свойствах сухих экстрактов остролодочника остролистного и касатика молочно-белого // Поиск биологически активных веществ и проблема лекарственного обеспечения: Тезисы докл. - Уфа.

- 1991. - Т. 2. - С. 160-164.

14. Заявка на патент "Способ получения сухого экстракта из травы остролодочника остролистного". - N96100388. Приоритет заявки от 10.01.96 г. / Саканян Е.И.. Кабишев К.Э., Бахтина С.М. и ДР-