Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Стандартизация сырья полыни горькой и препаратов из лекарственного растительного сырья

Р Г ь ОД

11 СЕ И 1305

На правая рунониси

ЕЕШ-ЮГСШ КЛ1НГГО1А ДКГГРКЕЕНА

ста'щартгшдкя скрья гсошш горькой н препаратов т дктггшкого рлстгшъного скрья

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических ьаук

Пермь - 1995

Диссертационая работа выполнена

в Пермском государственном фармацевтическом институте

руководитель:

кандидат фармацевтических наук, профессор Олешко Г.И.

Офзгдаа&нш оппоненты:

- член корреспондент РАМН, доктор фармацевтических наук,

Фурса Н.С.

- кандидат фармацевтических наук, доцент Захарова Л.А.

Водуггая сргслмагщкя .-

- Московская медицинская академия им.И.М.Сеченова

Защита состоится " 26" сентября 1995 года в 'час, на засадании диссертационного совета К 084.70.01 при Пермском государственном фармацевтическом институте по адресу:г.Пермь,ул. Ленина 43.

С диссертацией модно ознакомиться в библиотеке Пермского государственного фармацевтического института.

1995 года

Учений секретарь

диссертационного совета К 084.70.01 кандидат фармацевтических наук,доцент

-3 -

СЗДАЯ ХАРШШЗЛОА РАЕОТО

Лляуагыюсть тема. В настоящее время в Российской Федерации заготовка сырья полыни горькой отстает от потребностей медицинской и пищевой промышленности, что связано с отсутствием сведений о размещении ее зарослей на территории отдельных регионов, а такие комплексного изучения биологически активных веществ.

Традиционными районами заготовки травы полыни горькой считались Украина, Белоруссия, Средняя Азия, которые в настоящее время не могут поставлять сырье для России вследствие ряда ызо-гих причин: Чернобыльская катастрофа, нарупение межрегиональных отношений. Возникла необходимость освоения новых районов заготовок сырья полыни горькой в пределах России.

Одним из вакнейших направлений в медицинской и фармацевтической науки является разработка новых препаратов на основе растительного сырья, обладающих равным спектром действия. К таким препаратам относятся полиэкстракт "Виватон" и "Хлорофиллин натрия".

Полиэкстракт "Виватон" представляет собой аммиачный полиэкстракт из 26 видов лекарственного растительного сырья.

Хвойный "Хлорофиллин натрия" получают из бензинового экс-трата хвойной древесной зелени.

Несмотря на экономичность, доступность метода получения, практическое применение получаемых субстанций ограниченно, отсутствуют препараты медицинского назначения на их основе.

Учитывая терапевтическую активность действующих веществ, входящих в полнэкстракт "Виватон" и субстанцию "Хлорофиллина натрия", а тагсхе полученные нал! предварительные данные по доклиническому исследованию, целесообразна их стандартизация и введение в медицинскую практику.

Г^о и задача гхсеэдпзсгпя.

- Для расширения сырьевой базы представляло интерес изучить ресурсы полыни горькой на Урале, как перспективного региона по заготовке сырья, провести фотохимическое изучение и стаядартн-защзо сырья полыни горькой .

- Разработка методов качественного и количественного анализа полеткстраота "Виватон" и хвойного "Хлорофиллина натрия".

- Стандартизация н оформление проектов Временных фармакопейных статей "Виватоп" и хвойный "Хлорофиллин натрия".

Связь темы дассеутацш с пдаяаиакя юосяадаадштст. Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пермского фармацевтического института по проблеме 10.06.01 "Изучение лекарственной флоры СССР".

Вадчзая Боетзва и иразгазч&ашя аиачшоста. Разработаны Государственный стандарт 3558-89 "Трава и листья полыни горькой". Временная фармакопейная статья "Виватон", Временная фармакопейная статья "Хлорофиллин натрия".

Впервые для Уральского региона неучена динамика накопления эфирного масла и флавоноидов по фазам развития и органам полыни горькой.

Определены возможный объем ежегодной заготовки и продуктивные заросли сырья полыни горькой в Пермской области.

Проведена оценка качества сырья полыни горькой по содержанию эфирного масла и флавоноидов.

Впервые для оценки качества сырья в Государственный стандарт "Трава и листья полыни горькой" введен показатель содержания эф:зр-ного масла.

Полиэкстракт "Виватон" после исследования в Лаборатории экспертизы новых лекарственных средств Министерства здравоохранения и медицинской промышленности России допущен до клинических испытаний.

Временная фармакопейная статья "Хлорофиллин натрия" и Пояснительная записка к ней представлены заказчику - в Институт гемофилии и переливания крови г.Кирова.

Лщю&щхя ргбопз. Основные положения диссертации доложены на:

- научно-практических конференциях Пермского фармацевтического института 1980-1905 гг.;

- республиканской конференции "Естественные науки б решении экологических проблем народного хозяйства", Пермь (1080);

- Всесоюзной конференции по ботанике "Ботанические исследования на Урале", Свердловск (1086);

- Шестом совещании по координации ботанических исследований на Урале "Ботаники Урала народному хозяйству" Сыктывкар (1990);

- Первой международной конференции "Мониторинг окружающей среды, оценка и возмещение экологического ущерба, наносимого гдоровыо населения ее 8агря8нениями", Пермь (1994).

Вубшкядак. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Еа аггелу кгкюятся :

1. Результаты фар>.«акогностического изучения травы полыни горькой, заготовленной в различных областях Уральского региона.

2. Результаты стандартизации полиэкстракта "Виватон".

3. Результаты стандартизации хвойного "Хлорофидяина натрия".

Сбгсм л структура p^icm. Диссертация изложена на страницах , содержит 27 таблиц и 10 рисунков.Работа состоит из введения, обзора литературы (1 гл.), материалов и методов исследования, 4-х глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включавшего 120 источников и приложения.

«ЙЩЕРЗАСЗ P/S0HJ Ейгс^тга п кзтолу гямцгадсзггкЗ

Образцы сырья полыни горькой были собраны во время экспедиций по изучении ресурсов лекарственных растений Пермской, Челябинской, Оренбургской и Свердловской областей в 1883-1С89 гг., а такг.е представлены Житошгрсгаш заводом по переработке лекарственного растительного сырья.

Образцы полиэкстра»ста "Виватон" для исследования были представлены концерном "Виватон" г.Москвы.

Образцы "Хлорофшшша натрия" для исследования бшш представлены Лесотехнической Академий г.С.-Петербурга.

Подлинность травы и листьев полыни горькой определяли приемами макро- и кяйфоскопического анатаза (ГФ XI, вып.1).

Влажность (потеря в массе при высушивании) сырья, золу сб-цуа, золу нерастворкмуи в 10%-ном растворе хлороводородной кислоты определяли нетодеш ГФХ1, вып.1, ГОСТ-24027.2-80.

Для идентификации з сырье пожни горькой и полиэкстракте "Виватон" основных групп биологически гктизчих вецеств использовали известные качественные реакции и хроматографкческое исследование.

Хронатографическое исследование флавокоидов и феколокарбо-новх кислот в траве пожги горькой проводили методом восходящей хроматографии на бумаге "Ленинградскаг С" ."Filtrak - FN - 13", хлорофиллом з "Хлорофшшше натрия" - методом тонгсостонкой хроматографии на пластинках "Silufol".

- б -

Для разработки методик количественного определения флавонои-дов в сырье полыни горькой и водорастворишх производных хлорофилла в "Хлорофиллине натрия" использовали фотоэлектроколоримет-рические методы анализа.

Для количественной оценки содержания эфирного масла в сырье полыни горькой использовали дистилляцию водяным паром с применением приборов Гикзберга и Клавенджера методами ГФХ1, вып.1 и ГОСТ-24027.2-80.

Для разработки методик количественного определения основных групп биологически активных веществ в полиэкстракте "Вкватон" применяли титриметрические методы аналива.

рН 12-ных растворов полиэкстракта "Виватон" и "Хлорофиллина натрия" определяли потенциометрическим методом.

Запасы сырья полыни горькой определяли общепринятыми методами на конкретных зарослях.

Статистическую обработку результатов экспериментальных исследований проводили по общепринятым методикам с использованием ЭШ.

ИПГШДПЖПВШ Дюмшвска БвгЗЗСТВ БОЕЦЕЯ гордксЛ

в сгецмривищ'! оф&я.

Химическое изучение фенольных соединений.

На основании результатов качественных реакций и хроиатогра-фического исследования в траве полыни горькой подтверждено наличие флавоноидов,производных кверцетина, фенолкарбоновых кислот, среди которых преобладают кофейная и хлорогеновая кислоты, куыа-ринов, дубильных вецаста и алкалоидов.

Разработана методика фотоэлектроколориыетрического определения флавоноидов в траве полыни горькой.

Для получения окрашенных растворов изучали реакцкз коиплек-сообразования флавоноидов с 2 Х-ным спиртовым раствором хлорида алюминия с добавлением 8 Х-ного раствора ацетата натрия для образования устойчивого комплекса ( метод И.Мурри ) и реакцию азо-сочетания с диавотированным стрептоцидом в щелочной среде (метод В.А.Бандюковой ).

Проводили сравнительный анализ обеих реакций в десятикратной повторности по оптической плотности из одной и той ве навески сырья для проверки чувствительности реакций.

Статистическая обработка результатов анализа показала, что реакция с диазотнрованным сульфаниламидом более чувствительна,чем реакция с 2Х-ккн раствором хлорида алхшганя.

Для дальнейшей разработки методики количественного определения использовали реакция, основанную ва получении азокрасителя.

йетоднка фотоэлектроколорииетрического определения флавонои-дов в сырье полыни горькой включает следующие стадии: получение и очистка извлечения за счет трехкратной смены концентрации этанола (962,702,401); получение окрашенного соединения по реакции азосочетания с диазотированным п-аыино-бензол-сульфамндом в щелочной среде и измерение оптической плотности полученного раствора с поюцыэ ФЗК-56М в кювете с толщиной слоя 10мм при длине волны 400 ни.

Количественное содер.'яанне фдавоноидов расчитывали по калибровочному графику, построенному по кверцетину-стандарту.

Таблица 1 .

Петрологическая характеристика метода количественного определения сушзя флавоноидов в траве полыни горькой.

1 1 1 П | X 1 | 3* 1 1 Э I Бх | ■ | ± Е |

1 1 | 16 | 0,661 1 1 1 I 0,000428 1 1 0,020688210,04385 I 1 1 • | + б.бг |

Ошибка метода составила + 6,6 X .

Количественное определение эфирного масла.

Одним шз основных потребителей сырья полыни горькой является Министерство лицевой щхжаояенности, где оно используется для производства вермута и ликера "Шартрез". Качество сырья полыни горькой для этих целей определяется по содераанию эфирного масла, которое в пищевой прс&ашгенности применяется как горько-пряное и ароматическое средство, а также обладает высокой фармакологической активностью.

Для более объективной оценки качества сырья и использования его в любой отрасли, показатель содержания эфирного масла введен в раздел "Числозве показатели" ГОСТа 3558-89.

С целью изучения условий полного выделения эфирного масла

из сырья и разработки методики количественного содержания проводили выбор метода и условий определения.

Эфирное масло получали из сырья измельченного и просеянного сквозь сито с различным диаметром отверстий. Использовали разные варианты соотношения воды и сырья,время дистилляции 60-65 капель в минуту. Провели сравнительное исследование двух методов количественного анализа эфирного масла - Гинвберга и Клавенддера.

Результаты изучения влияния условий определения на выход эфирного масла представлены в таблицах 2,3.

В результате исследований установлено, что наибольший выход эфирного масла ( 0,352) наблюдается при использовании метода 2 ГФХ1,вып.1, времени дистилляции - 3 часа;соотношение воды и сырья 1:10, измельченноеть - Змм.

Изучение динамики накопления флавоноидов и эфирного масла в сырье полыни горькой.

Для выбора оптимальных сроков заготовки сырья и разработки стандарта, изучали динамику накопления флавоноидов и эфирного масла в полыни горькой по фазам вегетации и органам растения.

Результаты исследований представлены в таблицах 4,5.

В результате исследований установлено, что в процессе роста и развития растения идет постепенное накопление флавоноидов и эфирных масел, достигая максимума в период бутонизации и цветения. В эти сроки и целесообразно вести заготовку сырья.

Сравнительная оценка содержания флавоноидов и эфирного масла в сырье полыни горькой региона Урала.

Разработанными методиками изучено накопление эфирного масла и флавоноидов в сырье полыни горькой, произрастающей в различных областях Урала. Результаты исследований отражены в таблице 6.

Изучение накопления эфирного масла и флавоноидов в сырье полыни горькой, произрастающей на Урале показало, что максимальное количество эфирного иасла содержится в образцах, заготовленных в Челябинской области (1,91Х), минимальное - в образцам ив Свердловской области (0,35%), а флавоноидов - ьзаксктаное в образцах, заготовленных в Челябинской и Свердловской областях, т-ншзальное - в образцах из Оренбургской области.

Влияние продолшггедьности дистилляции на выход эфирного иасла ив сырья полыни горькой.

Метод определения 1 Время перегонки,час| Выход эфирного маслаД I

1 2 1 1 0,10

2 2 1 0,27

1 3 1 0,17

2 3 | 0,34

1 4 1 0,15

2 4 | 0,30 г

Таблица 3.

Влияние соотношения воды и сырья, степени измельченностн на выход эфирного масла из сырья полыни горькой.

Метод определения Соотношение воды и сырья Содержание эфирного масла, X

размер частиц

1 1 мм | 1 2 мм 1 3 мм | 1 4 15.1

1 1: 10 1 0,12 | 0,15 1 0,15 | 0,14

2 1: 10 0,28 | 0,35 0,35 | 0,32

1 1: 20 0,10 | 0,15 0.15 | 0,13

2 1: 20 0,26 | 0,33 0,34 | 0,32

1 1: 30 0,10 | 0,15 0,15 | 0,11

2 1: 30 0,22 ( ( 0,28 0,32 | 1 0,32

Динамика накопления флавоноидов и эфирного масла в полыни горькой по органам растения.

1 N п/п | 1 1 Органы Содержание флавоноидов, X 1 (Содержание эфирного |масла,X 1

1 1 | Листья 0,09 1 1 2,30

2 1 Стебли 0,46 1 0.37

3 1 Трубчатые цветки 1,65 | 2.11

4 1 Листочки обертки 1,10 1 1.74

1 | с цветоложем 1 |

Таблица 5.

Динамика накопления флавоноидов и эфирного масла в пашни горькой по фазам вегетации.

N п/п | Фазы вегетации | 1 1 Содержание флавоноидов, X 1 |Содержание эфирного |масла,X

1 1 Образование розетки| 1,65 I 0.55

2 Образование стеблей| 2.94 | 0,83

3 Начало бутонизации | 2.11

4 Бутонизация | 3,58 1 1.28

5 Начало цветения | - 1 1.86

6 Цветение | 2,20 1 2.11

7 Плодоношение | | - 1 0,42 1

Содержание эфирного масла и флавоноидов в сырье полыни горькой, произрастающей на Урале.

1 Области (Образ-региона Урала|цы.Ы 1 | 1 1 | Эфирное масло,2| Флавоноиды, X

1 1 | 1987 | 1 1 1988 | 1987

1 1 1 2 1 1 1 1 3 | 1 | 4 I 5

1 | 1 I 1 1 1.39 | 1.27 | 1. 17

1 2 1 1.44 | 0.91 | 1. 29

1 з 1 0,87 | 0.87 | 1, 29

1 4 1 0.96 | 1. 29

Пермская 1 5 1 0,78 | 0, 43

1 6 1 0.95 | 1, 04

1 7 1 0,87 | 0, 37

1 8 1 1.48 | 4, 11

1 9 1 0,52 | 5, 22

| 10 1 0.С1 | 1 1 1, 25

X + шх 1 1 1 0,99+ 0,09 | 1,9 + 0,54

1 | 1 1 1 1 0,70 | '0,61 1 3. 34

1 2 1 0,61 | 0,87 | 5. 46

1 з 1 0,44 | 1.04 | 3. 62

1 4 1 0,35 | 0,96 | 4, 24

1 5 1 0,44 | 1,39 | 5, 46

1 б 1 0,44 | 4, 11

Свердловская 1 7 1 0.35 | 5. 59

1 8 1 0,44 | 5, 28

1 9 1 0,52 | 6, 14

1 ю 1 1 I > 2, 15

1 11 1 1 1 ; 1 1, 65

X + тх 1 | 1 I 0,65+ 0,08 | 4,29 + 0,44

продолжение таблицы 6.

1 2 1 1 з 1 1 4 1 1 1 5

1 1 0,74 1 1 0.78 1 5,28

2 1 1.04 1 1.04 1 3,01

3 1 0,87 | 0,96 1 2.27

4 I 0,96 1 1.91 | 3,56

Челябинская 5 1 1.52 1 2,70

б 1 1,22 1 1.41

7 1 0.91 1 4,29

8 I 0,96 1 I 6.14

X ± ту | 1,07+ 0,10 | 3,58 + 0,56

1 | 0,96 | 0,96 1 1.84

Оренбургская 2 | 0,69 1 1.09 1 1.17

3 | 0,65 1 1,65 1 1.72

4 1 0.61 1 1.31 1 1 1,84

X + п>х I 0.99+ 0,13 1 | 1.64 + 0,16 1

Анализ полученных даяных показал, что корреляционной зависимости меяду содержание« фдавоноидов и эфирных масел в сырье полыни горькой региона Урала не наблюдается.

Таким образом, исследованиями установлено, что сырье Польши горькой региона Урала пи содержанию эфирного масла (от 0,35 до 1,912) соответствует требова2шш, разработанного ГОСТа 2558-89 ( не менее 0,2%).

Следовательно, саготовку сырья полыни горькой иоззю проводить по всему региону Урала.

В течение 1083-89 гг.нами проведено ресурсоведческое исследование запасов сырья полыни горькой в Пермской области.

В результате ресурсоведческих исследований выявлены наиболее продуктивные заросли сырья, которые размещаются в южных, юго-западных и западных районах области: Октябрьском, Бардымском, Ор-динском, Оханском, Очерском, Нытвенском, Частинском и Болыпе-Сос-новском.

Сотрудниками кафедры фармакогнозии Пермского фармацевтического института в течение 1983-87 гг. проведены ресурсоведческие исследования запасов лекарственного растительного сырья в Пермской, Челябинской, Оренбургской и Свердловской областях.

Наиболее продуктивные заросли расположены в Оренбургской области, где возможный ежегодный объем заготовки составил 30400 кг (таблица 7).

Таблица 7.

Ресурсоведческая характеристика полыни горькой на Урале.

N п/п 1 1 1 | Области |Площадь продуктивных! I |зарослей,га | 1 1 1 Возможный объем ежегодной заготовки,кг

1 1 1 1 | Пермская | 105,0 | 9714,0

2 I Оренбургская| 553,64 | 30400,0

3 ¡Челябинская | 320,58 | 13354,0

4 |Свердловкая | 91,33 | 1 1 1 6781,0

Общая площадь продуктивных г>а[.ослей полыни горькой на Урале составила 1070,55 га, а возможный объем ежегодной заготовки 60249 кг, что полностью удовлетвср потребность в ^ырье полыни горькой в России.

Материалы к разработке ГОСТ "Трава и листья полыни горькой".

Установление подлинности сырья Проведенный макроскопический анализ образцов травы полыни горькой, заготовленных на Урале, а также представленных Яитоыирс-кин заводом по переработке лекарственного растительного сырья, позволил включить в раздел "Подлинность" следующие признаки: - листья прикорневой розетки в очертании треугольно-округлые, двачды-трэддьтеристорассеченные, длинночерешковые;

- срединные листья короткочерешковые, дваждыперисторассеченные, верхние трехраздельные или цельные. Сегменты линейно-продолговатые, цельнокрайние, листья опушены с обеих сторон, серо-зеленого цвета;

- соцветия шаровидные, поникающие корзинки, собранные в однобокие кисти, образующие сложную метелку;

- обертка черепитчатая, двурядная, наружные листочки ее линейные, внутренние широкоэллиптические;

- цветоложе выпуклое, краевые цветки пестичные, узкотрубчатые, с цельным или двузубчатым неотогнутым краем; срединные обоеполые, воронковидные, с пятизубчатым отгибом венчика.

Для подтверждения подлинности цельного сырья и установления подлинности измельченног рья изучали анатомическое строение травы полыни горькой. Микроскопический анализ позволил уточнить особенности анатомических приз' -в и предложить рисунок анатомического строения препарата лист, .юлыни горькой о поверхности.

Определение числовых показателей.

При разработке ГОСТа раздел "Числовые показатели" изложен в разделе "Основная часть".

Описаны внешние признаки, органолептические показатели, влажность, массова" доля эфирного масла, массовая доля общей золы, массовая доля золы нерастворимой в 101-ном растворе хлороводородной кислоты, массовая доля посторонних примесей - органической, минеральной. В этот же раздел включены анатомические признаки сырья.

В "Основной части" даются ссылки на стандарты, регламентирующие правила приемки, методы испытаний, упаковки, маркироьки. транспортирования и хранения.

Дополнительно в "Методы испытаний" включено изложение методики определения массовой доли эфирного масла и его содержание не менее 0,2%. В "Основной части" приводится гарантийный срок хранения с момента заготовки.

По данным анализов влажность цельного и измельченного сырья колебалась в пределах от 7,45 до 8,607.. Рекомендуем норму этого показателя оставить не более 13%.

Значение показателя "зола общая" составило от 7,42 до 9,48%. Рекомендуем норму этого показателя не более 13%. Содержание золы

не растворимой в 102-ном растворе хлороводородной кислоты колебалось от 0,10 до 0,432. Рекомендуем норму гтого показателя не более 32.

Содержание органической и минеральной примеси в сырье составило соответственно от 0,6 до 1,92 и от 0,3 до 1,22. Норму содержания рекомендуем установить для органической примеси не более 22, минеральной - не более 1,52.

Стгэд2£дазгыя£31 посзЕястряята "Сггзгтоя".

Нами проведен полный фитохимический анализ полиэкстракта "Виватон" в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи СССР XI вып.2 стр. 160 по статье "Экстракты".

Методы испытаний проводили на 9 образцах полиэкстракта, представленных заказчиком.

Качественный состав пслиэкстракта "Виватон" устанавливали реакциями подлинности, характерными для различных групп биологически активных веществ. Все испытания проводили после удаления ашиака из полиэкстракта до рН 7-8 по универсальному индикатору.

Определение цветности проводили согласно ГФХ1 вып.1 стр.194. Определение проводили визуально путем сравнения с соответствующими эталонами. Сравнение проводили в пробирках одинакового стекла и диаметра при дневном отраженном свете на матовом фоне. Окраска полиэкстракта "Виватон" в разведении 1:10 очищенной водой соответствует окраске эталона 2"а" и не должна превы' ать его.

Определение прозрачности и степени мутности проводили согласно ГФХ1 вып.1 стр.198, путем сравнения окрашивания испытуемого раствора в разведении 1:10 с эталонами. Сравнение проводили в пробирках бесцветного стекла одного и того же диаметра с притертыми пробками в компораторе. Пробирки просматривались при подсвечивании электрической лампой в 40 вт.

Установили,что прозрачность и степень мутности полиэкстракта "Виватон" соответсвует эталону 1.

Показатели цветности, степени мутности и прозрачности полиэкстракта включены в Проект Временной фармакопейной статьи "Виватон".

На основании проведенного качественного анализа полиэкстракта "Виватон" установлено присутствие окнсляешх веществ, тритер-

пеноидов, алкалоидов, гликоэидов стероидного строения и лактонов азуленового рада.

Качественные реакции подлинности на указанные группы биологически активных веществ включены в Проект Временной фармакопейной статьи "Виватон".

Согласно ГФХ1, вып.1 и 2, при проведении испытаний требуется определение содержания тяжелых металлов. Проведено исследование полиэкстракта "Виватон" на содержание в нем тяжелых металлов.

Тяжелые металлы в полиэкстракте "Виватон" не обнаружены.

Количественное определение биологически активных веществ в полиэкстракте "Виватон".

Выбор метода количественного определения действующих веществ в полиэкстракте "Виватон" основывался на результатах предварительной оценки качественного состава, показавшего, что осноышми биологически активными веществами являются окисляемые вещества полифенольного характера и азотсодержащие вещества основного характера.

Количественное определение окисляешх веществ полифенольного характера.

Окисляемые вещества определяли титриметрическюа методом,основанном на их способности окисляться перманганатом калия в кислой среде в присутствии индикатора и катализатора икдигосуль фокислоты.

1 мл препарата помещали в коническую колбу вместюгастью 1 л, прибавляли 600 мл очищенной воды, 20 мл свежеприготовленного раствора индигосульфокислоты и титровали при постоянном перемешивании 0,1н раствором перманганата калия до золотисто-желтого окрашивания. Параллельно проводили контрольный опыт.

1 мл 0,1н раствора перманганата калия соответствует 0,004157 г окисляемых веществ в пересчете на танин.

Содержание окисляемых веществ в полиэкстракте "Виватон" вычисляли по формуле:

(У-У1)х 0,004157 х100

Х= - ; где

Ч

V - объем о,1н раствора перманганата калия, израсходованного на титрование препарата, мл;

VI- объем 0.1н раствора перыанганата калия, переднего на титрование в контрольном опыте, мл;

У2- объем полиэкстракта , мл;

0,004157 - количество окисляемых веществ, соответствующее 1 ил 0,1н раствора перыанганата калия, г.

Количественное определение веществ основного характера (алкалоидов и азотистых оснований).

Определение проводили методом обратного титрования,основанном на выделении веществ основного характера в виде оснований (ГФХ1. вып.2, стр. 251).

Результаты количественного определения окисляешх веществ и веществ основного характера в полиэкстракте "Виватон" представлены в таблице 8.

Таблица 8.

Содержание окисляемых веществ и веществ основного характера

в полиэкстракте "Виватон".

1 N образца| Адрес поставщика Содержание в-в основного ха-раД 1 (Содержание окис |ляемых в-в, X ■

1 | Концерн"Виватон" 0,38 1 1 0,12

г 1 г.КЗосква, Ленинс- 0,38 1 0,21

3 1 кий район, ГПЗ 0,38 1 0,17

4 1 "Коммунарка",ст.6 0,49 1 0.12

5 1 0,38 1 0,21

6 1 <1 0,41 | 0.25

7 1 0,40 | 0.083

8 1 0.37 1 0.12

9 1 ■ 0,45 | 0.083

Содержание окисляемых веществ в полиэкстракте "Виватон" колебалось от 0,08 до 0.25Х, веществ основного характера - от 0,21 до 0,49%. Данные показатели в установленных пределах введены в Проект Временной фармакопейной статьи.

Согласно требования статьи "Экстракты" ГФХ1, вып.2, при сос-?авленки нормативной документации необходимо определение сухого остатка. При разработке Проекта Временной фармакопейной статьи

"Виватон" нами установлены нормы содердания сухого остатка в образцах полиэкстракта.

Сухой остаток в полиэкстракте составил от 5,60 до 7,301.

Результаты определения включены в Проект Временной фармакопейной статьи "Виватон".

Экспериментально определен срок годности полиэкстракта "Виа-тон" на основе Временной инструкции N 42-2-82.

Срок годности полиэкстракта "Виватон" установлен 1 год с момента изготовления и включен в Проект Временной фармакопейной статьи.

Ствцдарииаяя зесйзого "ЯводоЁнажаа шарад**.

Перспективным направлением использования экономически доступных ресурсов древесной велени является их комплексная переработка, позволяющая получить в одном технологическом процессе ценные продукты медицинского назначения, в частности, препараты хлорофилла (хлорофиллин натрия и металдопроизводные хлорофилла).

Доступность и экономичность производства, высокая фармакологическая активность препарата "Хлорофиллин натрия" свидетельствуют о целесообразности его использования в различных лекарственных формах.

Нами разработан Проект Временой фармакопейной статьи "Хлорофиллин натрия" по заявке НИИ гемофилии и переливания крови г.Кирова и Лесотехнической академии г.С-Петербурга.

Определяли подлинность, показатель цветности, рН 12-ного раствора, содержание тяаелых металлов, воды, сухого остатка, водорастворимых производных хлорофилла.

Подлинность. "Хлорофиллин натрия" идентифицировали методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей бензсл-метанол в соотношении 8:2.

На хроматографе обнаружены 2 пятна, имеющие в УФ- свете ¡грасноватую флюоресценцию, что свидетельствует о наличии хлоро-филлов а и Ь.

Определение показателя цветности проводили визуально путем сравнения с соответствующими эталонами. Цветность "Хлорсфиллина натрия" в разведении 1:2000 соответствует эталону 2г ГФХ1, вып.1, стр.194.

Определение рН. рН "Хлорофнллина натрия" определяли потенцио-нетрически. рН 12-ного раствора "Хлорофиллина натрия" колебалось от 7,90 до 8,63.

Нами проведено исследование спектральной характеристики образцов "Хлорофиллина натрия" в видимой области спектра при длине волны от 400 до 700 нм и толщине поглощающего слоя 10 им .

В результате исследования спектральной характеристики образцов "Хлорофиллина натрия" установлены максимумы поглощения при длинах волн 605 и 660 кн. что свидетельствует о наличии производных хлорофилла (рисунок 1).

01

Рисунок 1. Спектральная характеристика хлорофиллина натрия.

С целью определения экологической чистоты препарата определяли содержание тяжелых металлов (ГФХ1,вьт.2,стр.160).

Тягелые металлы в образцах "Хлорофиллина натрия" не обнаружены.

Массовая доля воды. Определяли путем высушивания навески "Хлорофиллина натрия" массой 1,0 г в биксе при температуре 100--105°С в супильноа шкафу в течение 6 часов.

Определение сухого остатка проводили согласно ГФХ1, вып.2,стр. 161, путем выпаривания н-\вески препарата массой 5,0 г в предварительно высушенной н доведенной до постоянной массы бзоксе.

Количественное определение водорастворимых производных хлорофилла. ( Определение проводили фотоэлектроколоргегетрическии методом, основанной на измерении оптической плотности скрашенного раствора

"Хлорофиллина натрия" при длине волны 660 нм с использованием калибровочного графика, построенного по стандартному раствору Гетри.

При разработке методики количественного определения водорастворимых производных хлорофилла установили, что процесс фильтрования и продолжительность определения не оказывают влияния на содержание водорастворимых производных хлорофилла.

Результаты количественного определения воды, сухого остатка и водорастворимых производных хлорофилла представлены в таблице 9.

Таблица 9.

Содержание воды, сухого остатка и водорастворимых производных хлорофилла.

1 1 |Образцы! 1 Вода,%| Сухой остаток 1 Водорастворимые производные | хлорофилла, % |

1 1 1 56,0 | 44,09 38,91 |

1 2 | 57,0 | 38,70 35,65 |

1 3 | 60,0 | 37,45 25,56 |

1 4 | 56,0 | 36,44 32,00 |

1 5 | 50,0 | 38,76 33,40 |

1 6 | 54,0 | 38,20 30,81 |

1 ? 1 48,0 | 32,56 32,60 |

1 8 | ■ | 50,0 | | 48,93 33,84 | |

Содержание воды в исследуемых образцах "Хлорофилдина натрия" колебалось от 48,0 до 60,0%, сухого остатка составило от 32,56 до 48,93%, содержание водорастворкшх производных хлорофилла -от 25,56 до 38,91%.

Результаты количественной оценки препарата в указанных пределах включены в Проект Временной фармакопейной статьи "Хлорофил-лин натрия".

обцке шзадз.

1. Разработана методика фотоэлектроколориметрического определения суммы флавоноидов в сырье полыни горькой, произрастающей на Урале. Ошибка метода составляет 6,6%.

2. Установлено,что максимальное содержание флавоноидов накапливается в сырье полыни горькой, заготовленном в Свердловской области (4,29%), минимальное - в Оренбургской области (1,641).

3. Изучена динаыика накопления флавоноидов в полыни горькой по фазам вегетации и по органам растения. Обнаружено, что максимальное количество флавоноидов накапливается в трубчатых цветках (1.65%), нинкиальное - в листьях (0,09%). Наибольшее содержание сунны флавоноидов приходится на фазу бутонизации (3,58%), наиыень-вее - на фазу образования розетки (1,65%).

4. Разработана ыетодика количественного определения эфирного наела в сырье полыни горькой с использованием прибора Клавендяера. Установлены оптимальные условия: соотношение воды и сырья 1:10, время перегонки 3 часа, размер частиц сырья 3 им.

5. Изучена динамика накопления эфирного ыасла в полыни горькой по фазам вегетации и по органам растения. Установлено, что пакеныальное содер1хание эфирного мазла накапливается в листьях (2,3%) и трубчатых цветках (2,11%), минимальное - в стеблях (0,28%). Наибольшее содержание эфирного масла приходится на фазу иассового цветения (2,11%), наименьшее в фазу плодоноаения (0,42%).

6. Установлено, что заготовку сырья полыни горькой целесообразно вести в период бутонизации и массового цветения.

7. Изучены ресурсы полыни горькой в Пермской области. Наиболее продуктивные заросли обнаружены в южных, юго-западных и западных районах области в разнотравно-злаково-тысячелистннково-тиыофе-евнчных, полынно-аяаково-разнотравных, польшно-пучково-разнотравных и влаково-разнотравных ассоциациях в Октябрьском, Бардьваскш, Ординскоа, Охаискоы, Очерском, Нытвенскои, Частинскои и Боль-ве-Сосновскоы районах. Общая площадь продуктивных зарослей составила 105,1 га, а возможный объем ежегодных заготовок - 9714 кг.

8. Разработан новый Государственный стандарт "Трава и листья полыни горькой". Уточнены иорфолого-анатомические признаки сырья полыни горькой. В раэдел "Числовые показатели" включена оценка качества сырья по содержанки эфирного масла, не менее 0.2%. Установлен срок хранения сырья полыни горькой - 2 года с шаента заготовки.

9. Проведен полный фотохимический анализ полиэкстракта "Вива-тон". Установлены основные группы биологически активных веществ.

представленные стероидными гликозидами, тритерпеноидами.лактонами азуленового ряда, окисляешми веществами и азотсодердащиыи веществам основного характера.

10. Разработаны методики количественной оценки полиэкстракта "Виватон" по содержанию окисляемых веществ и азотсодержащих веществ основного характера.

11. Разработан Проект Временной фармакопейной статьи "Виватон". Установлены числовые показатели, регламентирующие качество полиэкстракта, изучена стабильность полиэкстракта "Виватон" и установлен срок годности.

12. Проведено фотохимическое исследование "Хлорофиллина натрия", определены показатели: подлинности,цветности,содеркания сухого остатка(12-32,9Z), воды(52,4-67,5Х), рН(7,9-8,63).Изучена спектральная характеристика и установлены максимумы поглощения (605 и 660 нм).

13. Разработана методика фотоэлектроколориметрического определения содержанию водорастворимых производных хлорофилла в препарате "Хлорофиллин натрия"(25,56-38,91Х)

14. Разработан Проект Временной фармакопейной статьи "Хлорофиллин натрия".

Eg seas сзу&ззишвш сг&япххэ psüosu:

1. Белоногова В.Д.,0лешко Г.И. Динамика накопления эфирного масла полыни горькой, произрастающей на Урале //Сб. науч. тр. ГШ. -Пермь, 1986.

2. Белоногова В.Д., Просовский м.А. К ресурсоведческой характеристике полыни горькой, произрастающей в Пераской области // Ботанические исследования на Урале. Тез. докл. Всесоюзн. конф. по ботанике,- Свердловск, 1986.- С.120.

3. Олешко Г.И., Просовский М.А..Белоногова В.Д. Запасы сырья дикорастущих лекарственных растений восточных и юго-западных районов Пермской области //, Растит, рес.- 1987.- т.ХХШ.- вып. 3.-С.319-325.

4. Белоногова В.Д., Олешко Г.И. Фармакогностическое изучение полыни горькой, произрастающей на Урале //Ботаники Урала - народному хозяйству, 6-ое совещ.по коорд.ботан.исслед. на Урале, Сыктывкар. 1990.

5. Белоногова В.Д., Олешко Г.И. Ресурсоведческая и фотохимическая оценка полыни горькой, произрастающей на Урале // Есгест-

-

венные науки в решении экологических проблем народного хозяйства. Материчлы республиканской кснф-ренции. - Пермь, 19У0.- с.¿18.

Г.. Ьс-локогова В.Д. макогностическое изучение полыни горькой, произрастающей в Пермской области // Ресурсы и рациональное использование лекарственных растений. Сб.' науч. тр. ПГМИ и ПФИ.-Пермь, 1991.- С. 5.

7. ГОСТ 3558 89"Трава и листья полыни горькой".

8. Белоногова В.Д.,Олешко Г.И.Дерябин A.M. "Виватон" - новый препарат иммуностимулирующего действия //Материалы Всесоюзной конференции. - Харьков. 1990.

У. Олешко Л.Н..Роженцов Т.В.,Садиков С.А., Белоногова В.Д. Разработка технологии лекарственных пленок с хлорофиллином натрия //Тез.докл.45 конф.Курского мед.института, Курск, 1990.

10. Олешко Л.Н..Олешко Г.И., Белоногова В.Д. Стандартизация препарата "Виватон" //Бюллетень НОФ, Москва. I93i".

11. Олешко Д.Н..Олешко Г.И. Мельникова Т.Н. Белоногова В.Д. Исследования в области биорастворимых лекарственных пленок.//Тез. докл.1 Росс.конгресса "Человек и лекарство" . 1992.

12. Олешко Л.Н. и др. Биологически активные средства и их лечебно- профилактическое применение для реабилитации здоровья населения экологически неблагоприятных районов . Олешко Л.Н., Олешко Г.И., Белоногова В.Д., Коншина Л.О. и др. >/ Матер. I меддунар. конф. Мониторинг окружающей среды, оценка и ьозмещение экологичес кого ущерба, наносимого здоровью нгселения ее загрязнениями.-П^рмь, 1994,- С.92-93.

II.' ; 11......in н п.-и ii. 7 О?) ,ri5

•hi.pM.i i tiO ■ !.' III. lb'I , i, . • 1111 г i ii.iii

v< л 111■■i. л i,1

¡¡■;u.-k icc ik v i.iK.i i V&l.,.

11'(Ml M.I./II 111 //''/ I Mi ki'l .1 \ I (¡111./. I II / i' I.I

'':'/(. I HI. I //i/i.M I-. \ I I) \ M.'/H'll.l. /