Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическое изучение эффективности и механизма действия новых производных медиаторных аминокислот при экспериментальном алкоголизме

Р Г Б ОД 2 2 ДПР 1396

На правах рукописи

Сабанов Алексей Валерьевич

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ И МЕХАНИЗМА ДЕЙСТВИЯ

НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ МЕДИАТОРНЫХ АМИНОКИСЛОТ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ АЛКОГОЛИЗМЕ

14.00.25 - фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград 1996

Работа выполнена в НИИ фармакологии при Волгоградской медицинской академии

Научный руководитель: академик МАН ВШ, доктор медицинских наук, профессор В.И. Петров

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор М.Д. Гаевый доктор медицинских наук, профессор А.Н. Яворский

Ведущая организация - Московский медицинский стоматологический институт им. H.A. Семашко

Защита состоится " /В " 1996 г в /¿7 часов на

зяседании специализированного совета Д 084. 54. 01 при Волгоградской медицинской академии (400066, г. Волгоград, пл. Павших борцов, д.1)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библи-о геке медицинской академии.

Автореферат разослан ". /Л _1996г

Ученый секретарь

специализированного совета,

кандидат медицинских наук, доцент

Ю.К. Филимонова.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

Алкоголизм является одной из наиболее распространенных токсикомании, вызываемой этиловым алкоголем. В отличие от других психотропных средств, этанол не является ксенобиотиком и принимает непосредственное участие в клеточном метаболизме (Agrawal D.P., Goedde H.W, 1992). Даже незначительные дозы алкоголя способны изменять функциональную активность большинства ней-ромедиаторных систем (Буров Ю.В., Ведерникова H.H., 1985; Nevo I., Hamon М.,1995).

Вне зависимости от наличия и выраженности патологического влечения к алкоголю, его длительное употребление сопровождается рядом характерных соматических и психических расстройств (Анохина И.П., 1995; Любимов Б.И. с соавт. 1995). В первую очередь страдают интеллектуальные и мнестические функции, а также эмоциональный статус (Бабаян Э.А., Гонопольский М.Х., 1987). Степень их повреждения в значительной мере отражает тяжесть заболевания и определяет его прогноз (Морозов 11.В. 1983). В этой связи становится очевидной необходимость использования в комплексной терапии алкоголизма средств, обладающих но-отропной активностью. Однако, эффективность использующихся в наркологической практике ноотропных препаратов, таких как пирацетам, оксирацетам, пи-ритинол, меклофеноксат, этимизол и некоторых других, при алкогольной патологии оценивается как недостаточная. Это обстоятельство определяет необходимость разработки и внедрения в клиническую практику новых, более эффективных средств, обладающих ноотропной активностью (Валентик Ю.В. с соавт., 1995; Петров В.И. с соавт., 1995).

Одним из направлений развития психофармакологии является разработка лекарственных средств - производных возбуждающих (глутаминовой, аспарагино-вой) аминокислот (ВАК), обладающих медиаторным действием. Установлено наличие у веществ этой группы анальгетической, противосудорожной, антипсихотической, церебропротекторной, антиамнестической и других видов активности (ТаЬакоГГ В., НоГГшап P.L.,1990).

На протяжении последних 5 лет в НИИ фармакологии при Волгоградской медицинской академии проводится изучение биологических свойств оригинальных производных медиаторных аминокислот, обладающих кардиоваскулярной и

психотропной активностью. Среди ацил- и фосфонсодержащих производных выявлены вещества с выраженной ноотропным и антидепрессивным действием (Петров В.И., Сажин В.А., Яницкая A.B., Кулешова И.П., Григорьев И.А. и др., 1991-1995 г.). Углубленное изучение психотропной активности этих веществ при экспериментальном алкоголизме является актуальной проблемой психофармакологии. Настоящая работа представляет собой дальнейшее развитие этого направления исследований.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ.

Целью настоящего исследования явилось обоснование применения и изучение механизма действия новых производных медиаторных аминокислот для коррекции пснхо-эмоциональных и интеллектуально-мнестических расстройств при экспериментальном алкоголизме.

ЗАДА ЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительное изучение психотропных эффектов ацил- и фосфонсодержащих аналогов медиаторных аминокислот, обладающих ноотропой активностью, на модели принудительной алкогольной интоксикации и провести оценку их эффективности при системном введении в сравнении с известными ноотропными препаратами. По результатам исследований выявить вещества с наиболее выраженной активностью.

2. Создать модель добровольной алкоголизации с целью дальнейшего углубленного изучения эффективности действия веществ, проявивших наибольшую активность на предыдущем этапе. Провести оценку адекватности созданной модели по наличию изменений поведенческих и биохимических показателей, обусловленных длительным воздействием алкоголя.

3. В условиях добровольной алкоголизации изучить влияние наиболее эффективных соединений, выявленных по результатам первого этапа работы, на состояние интеллектуально-мнестических функций и эмоционального статуса крыс с выраженной алкогольной мотивацией.

4. На модели добровольной алкоголизации изучить влияние веществ на процесс формирования патологического влечения к алкоголю и степень выраженности алкогольной зависимости у крыс.

5. Изучить аспекты механизма нейротропного действия новых веществ н их влияние на эффекты алкоголя.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

Впервые проведено комплексное нейрофармакологическое изучение эффективности и механизма действия новых производных медиаторных аминокислот при экспериментальной коррекции эмоциональных и интеллекту ально-мнестических расстройств на различных моделях алкоголизма.

Среди изученных ацкл- и фосфонсодержащих аналогов медиаторных аминокислот выявлены соединения (лабораторные шифры: АКФ-94 и ПИР-87-6-0), оказывающие положительное влияние на состояние высших интегративных функций мозга в условиях хронической алкоголизации. Указанные соединения не влияли на выраженность влечения к алкоголю, однако улучшали мнестическис, когнитивные функции и эмоциональный статус животных с различным уровнем предпочтения этанола в условиях добровольного его потребления.

Впервые изучены аспекты механизма действия этих веществ на развитие эффектов этанола, установлено важное значение ВАК-ергической медиаторной системы в реализации нейро- и психотропных эффектов соединений, выявлено существование индивидуальных различий в проявлении эффектов веществ у крыс с различной степенью предпочтения алкоголя.

В результате проводимого в рамках диссертационной работы совершенствования и автоматизации методик изучения поведения животных было сделано рационализаторское предложение, подтвержденное удостоверением № 4-96 от 18.01.96.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ И РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗ УЛЬ ТА TOB ИССЛЕДОВА НИЯ.

В ходе работы доказано, что вещества АКФ-94 и ПИР-87-6-0 - ацил- и фос-фонсодержащие производные аспарагиновой кислоты, обладающие ВАК-ергической активностью, являются эффективными соединениями для фармакологической коррекции нарушений мнестических и когнитивных функций животных в условиях экспериментального алкоголизма. Установлен ВАК-ергический механизм нейро- и психотропного действия веществ. Выявленное в ходе работы положительное влияние новых соединений на состояние высших интегративных функ-

ций мозга у животных с генетически обусловленным высоким уровнем алкогольной мотивации, - позволяет рекомендовать эти вещества для дальнейшего изучения с целью создания эффективных лекарственных средств, используемых в комплексной терапии алкоголизма.

Полученные результаты о возможном применении новых ноотропных средств для лечения расстройств высших интегративных функций при алкоголизме используются в лекционном и практических курсах на кафедрах психиатрии, фармакологии, фармакологии и биоформации ФУВ Волгоградской медицинской академии.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Соединения АКФ-94 и ПИР-87-6-0, являющиеся ацил- и фосфонпроизвод-ными аспарагиновой кислоты, оказывают выраженное положительное влияние на состояние мнестических, когнитивных функций и эмоциональный статус крыс в условиях хронического действия алкоголя, превосходя по выраженности эффекта препарат сравнения пирацетам.

2. Животные с различным индивидуальным уровнем влечения к алкоголю отличаются по характеру генетически обусловленных поведенческих и биохимических предикторов формирования алкогольной зависимости. Выявлены различия в воздействии соединения АКФ-94 на эффекты этанола у крыс с различной выраженностью его предпочтения.

3. Механизм нейро- и психотропной активности изучаемых веществ при экспериментальном алкоголизме обусловлен их влиянием на ВАК-ергическую нейро-передачу в мозге.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Материалы диссретации докладывались и обсуждались на международной конференции "Современные методы биологической терапии психических заболеваний", посвященной памяти Г.Я. Авруцкого (Москва 1994); 2-ом и 3-ем Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва 1995,1996); 1-ом Съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград 1995); на 49-й научной сессии " Актуальные вопросы медицины" (Волгоград 1994).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ.

Материал диссертации изложен на 152 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, методику, три главы собственных экспериментальных исследований, обсуждение результатов, выводы, приложение. Работа иллюстрирована 22 рисунками и содержит 18 таблиц. Список литературы состоит из 54 отечественных и зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Эксперименты выполнены на 350 белых беспородных крысах-самцах. Изучаемые вещества (лабораторные шифры: ПИР-87-б-О; АКФ-90-7; АКФ-89-4; ВИК-89; АКФ-94), синтезированные в лаборатории органического синтеза НИИ фармакологии при BMA д.х.н. A.A. Озеровым, представляют собой ацил- и фос-фонсодержащие производные медиаторных аминокислот (аспартат, Ь-аланин, глицин, таурин), проявляющие ноотропную активность. В качестве препарата сравнения был выбран пирацетам. Вещества и препарат сравнения вводились внутрибрюшинно за 1 час до эксперимента в дозах: ПИР-87-б-О - 50мг/кг; АКФ-90-7 - 1мг/кг; АКФ-89-4 - 1мг/кг: ВИК-89 - 1мг/кг; АКФ-94 - 10мг/кг. В этих дозах соединения, по данным сотрудников нашей лаборатории (Григорьев И.А. с соавт., 1994), оказывали выраженное ноотропное действие. Пирацетам вводился в дозе 200 мг/кг. Спиртовой 20% раствор на модели принудительной алкоголизации вводился интрагастрально из расчета 3 г спирта на килограмм массы животного. Для добровольной алкоголизации использовался 15% водный раствор спирта со вкусовыми добавками (0,02% ментола и 0,1% сахарина). При исследовании действия веществ на анальгетический и гипотермический эффекты этанола интраперито-неально вводился 25% спиртовой раствор в дозе 3,5 г/кг, а для оценки гипнотического действия алкоголя - 5 г/кг.

Выполнение работы было разделено на три этапа. На первом этапе проводилась сравнительная оценка эффективности действия новых соединений на модели принудительной алкоголизации (Яворский А.Н.,1987; Danysz W. et al.,1992). Перечисленные выше изучаемые вещества и препарат сравнения вводились внутрибрюшинно в течение 30 дней, через день, чередуясь с интрагастральным введением алкоголя. Степень нарушений состояния интеллектуально-мнестических функций и эмоционального статуса крыс явилась критерием оценки эффективности дей-

ствия изучаемых соединений. Выполнение поведенческих тестов после алкоголизации осуществлялось на фоне трехдневной алкогольной депривации. Целью этого этапа было выявление соединений, обладающих наиболее выраженной но-отропной активностью.

На втором этапе работы с помощью модели добровольной алкоголизации (Салимов P.M., 1992) и оригинальной методики ступенчатого фильтра из группы белых беспородных крыс производился отбор особей с выраженным предпочтением этанола. После подтверждения правильности этого отбора с помощью поведенческих тестов и определения биохимической активности ферментов основной этанолокисляющей системы, на крысах с высоким предпочтением алкоголя было продолжено изучение психотропной активности наиболее эффективных соединений, отобранных по результатам первого этапа. Вещества и препарат сравнения вводились в течение 30 дней. На этот же срок был возобновлен свободный доступ к поилкам с водой и спиртовым раствором. Оценка влияния исследуемых веществ на высшие интегративные функции мозга животных проводилась путем сравнения их поведенческого статуса до и после проведения алкоголизации и назначения веществ. По степени выраженности алкоголь-депривационного эффекта у животных, получавших вещества, судили о влиянии этих соединений на влечение к алкоголю.

На третьем этапе на моделях острой алкогольной интоксикации проводилось изучение аспектов механизма нейротропного действия АКФ-94 (20 мг/кг), проявившего наиболее выраженную степень ноотролной активности на предыдущих этапах. В ходе экспериментов определялось влияние этого соединения на гипотер-мический, анальгетический и гипнотический эффекты этанола. Для подтверждения правильности рабочей гипотизы о ВАК-ергическом механизме психотропного действия АКФ-94 использовались селективные антагонисты NMDA и АМРА рецепторов - МК-801 (0,3 мг/кг) и диэтиловый эфир глутаминовой кислоты (ДЭГК; 300 мг/кг) соответственно.

В работе использован комплексный подход к изучению психотропной активности веществ, соответствующий требованиям "Методических рекомендаций по экспериментальному изучению препаратов с ноотропным типом действия" под редакцией Т.А. Ворониной и соавт., 1989. Оценка поведенческого статуса животных проводилась на моделях "открытое поле" (Хаунина P.A., Лапин И.П., 1976); тестах форсированного плавания (Porsolt R. D. et al., 1978), поднятого плюс лаби-

ринта (Pellow S. et al., 1985). Изучение влияния веществ на высшие интегративные функции проводилось на моделях условной реакции пассивного избегания (УРПИ; Bures J., Buresova О., 1979); крестообразного лабиринта (Salimov R.M. and Salimova N.B., 1993); тесте экстраполяционного избавления (ТЭИ; Боидареико H.A., 1992). Для комплексной оценки эмоционально-мотивационной сферы поведения животных, в условиях, максимально приближенных к естественным, использовался тест зоосоциального взаимодействия (Петров В.И. с соавт., 1994). В ходе экспериментов изучалось также влияние веществ на гипотермический, анальгети-ческий и гипнотический эффекты этанола (Eriksson C.J.P. et al., 1984; Danysz W. et al.,1992; Korpi E.R. et al.,1992).

Статистическую обработку полученных данных проводили на IBM-совместимом персональном компьютере с помощью пакета программ SOLO и EXCEL с использованием непараметрических критериев Вилкоксона-Уитни-Манна, парного критерия Вилкоксоиа (Гублер Е.В., Генкин A.A., 1973) и модифицированного t-критерия Стьюдента (Плохинский H.A., 1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

При сравнительной опенке поведения животных в "открытом ноле" на мшили принудительной алкотлизации выявлено снижение показателей спонтанной двигательной и ориентировочно-исследо вательской активности у животных получавших алкоголь, что свидетельствует о нарушении у них приспособительной реакции при помещении в условия новой обстановки. Изучаемые вещества, за исключением ВИК-89, не влияли на локомоторную активность крыс на этой поведенческой модели.

При изучении спектра поведения животных в тесте парного зоосоциального взаимодействия показано положительное влияние изучаемых веществ на основные эмоционально-поведенческие категории. Соединение АКФ-94 снижало проявление негативной поведенческой симптоматики, наблюдаемое у животных контрольной группы, что выражалось в снижении гиперактивности и негативности, усилением мотивированности и увеличением числа элементное комфортного поведения. Аналогичный спектр психотропного действия выявлен у соединения ПИР-87-6-0. Действие веществ превосходило по выраженности эффекта препарат сравнения пирацетам. Другие соединения на указанной модели были неэффективны.

С целью изучения состояния краткосрочной памяти и элементов рассудочной деятельности была использована методика крестообразного лабиринта, в которой изучался маршрут движения животного в условиях свободного выбора рукавов. В ходе эксперимента было показано увеличение количества непосредственных заходов в рукава и продолжительности первого цикла обхода всех рукавов у животных контрольной группы, что расценивалось как нарушение упорядоченности обхода лабиринта и свидетельствовало об ухудшении процессов краткосрочной памяти и когнитивных функций. Наиболее эффективным на данной поведенческой модели оказалось соединение АКФ-94, превосходящее другие соединения, а также пирацетам по выраженности психотропного действия.

При изучении влияния соединений на долговременную память на модели УРПИ было показано положительное влияние на сохранность памятного следа соединений ПИР-87-6-0 и АКФ-94. Латентный период захода в темный отсек животных, получавших эти вещества, достоверно превосходил в динамике аналогичный показатель крыс контрольной группы. Отмечалась большая выраженность эффекта указанных соединений по сравнению с пирацетамом (рис. I).

Рис. 1 Динамика воспроизведения УРПИ. *- достоверность по сравнению с контролем; р<0,05. Критерий Уитни-Манна.

Определение влияния новых веществ на когнитивные функции было продолжено в тесте экстраполяционного избавления аверсивной водной среды. Перед животными ставилась задача по нахождению выхода из-под стеклянного ци-

линдра, погруженного в воду. Полученные результаты свидетельствуют о лучшей способности крыс, получавших соединений АКФ-94 и ПИР-87-6-0, а также ВИК-89, к решению экстраполяционной задачи. Вещества превосходили по выраженности эффекта действие лирацетама.

Обобщая полученные на первом этапе результаты, следует сделать вывод о наиболее выраженном корригирующем действии соединений с лабораторными шифрами АКФ-94 (10 мг/кг) и ПИР-87-б-О (50 мг/кг) на интегративную деятельность мозга в условиях принудительной алкоголизации. Вещества превосходили по выраженности действия эффекты пирацетама. Углубленное изучение их активности было продолжено на втором этапе работы.

Для наиболее точной оценки эффективности изучаемых веществ на втором этапе использовалась модель добровольной алкоголизации, для воспроизведения которой были отобраны крысы, имеющие высокий уровень потребления этанола. Отбор животных производился на основании сравнения объема среднесуточного потребления спиртового раствора и выраженности алкоголь-депривационного эффекта после четырехмесячного свободного доступа к воде и 15% раствору алкоголя. Адекватность разделения животных на группы была подтверждена на поведенческих моделях и по оценке активности основных ферментов этанолокисляю-щей системы печени.

При проведении теста поднятого плюс лабиринта было установлено, что крысы со слабо выраженной алкогольной мотивацией совершали достоверно большее количество выходов в открытые рукава и находились там более длительное время по сравнению с животными, предрасположенными к потреблению алкоголя. Полученные результаты свидетельствуют о наличии у животных, склонных к потреблению алкоголя, повышенного уровня тревожности. Формирование у этой группы крыс патологического влечения к алкоголю, вероятно, может быть обусловлено компенсаторным транквилизирующим (антифобическим) действием этанола, облегчающим у таких животных адаптацию н усиливающим положительное подкрепление этанола при его потреблении.

При воспроизведении навыка в тесте неизбегаемого плавания было выявлено, что у животных, отнесенных в дальнейшем к группе с высоким уровнем предпочтения алкоголя, имелось достоверное снижение количества прыжков и увеличение времени иммобилизации (ВИ) по сравнению с животными, непредпочи-тающими алкоголь. Полученные данные свидетельствуют о том, что у животных с

низким уровнем предпочтения алкоголя произошла адаптация к условиям эксперимента. Напротив, животные с высокой алкогольной мотивацией были склонны к проявлению депрессивноподобного состояния, что выражалось в увеличени времени иммобилизации (рис. 2 ).

120 Я 100

I 80

I -

5 40

5

* 20 О

Кол-во Кол-во триодов ВИ, сек

прыжков иммобилизации

|вНе1федпоштк>аиш« □Предютвтааик |

Рис. 2. Показатели теста форсированного плавания.

* - достоверность по сравнению с контролем; р<0,05 ** - достоверность по сравнению с контролем; р<0,01 Критерий Уитни-Манна.

Достоверность различий между группами животных с различной выраженностью алкогольного предпочтения определялась также с помощью сравнения биохимических показателей активности ферментов этанолокисляющей системы. Показано, что животные с высоким уровнем предпочтения алкоголя имели достоверно большую активность алкоголь- и ацетальдегиддегидрогеназы при определении ее базального уровня, в отличие от крыс с низким предпочтением этанола. Это свидетельствует о существовании различий в уровнях активности ферментов основной этанолокисляющей системы у животных изучаемых групп.

После подтверждения адекватности выбранной модели алкоголизма, было продолжено изучение веществ, проявивших наибольшую активность на первом этапе. С этой целью предрасположенным к потреблению алкоголя крысам был вновь предоставлен свободный доступ к воде и спиртовому раствору. Параллельно проводилось курсовое введение АКФ-94 и ПИР-87-б-О в указанных дозах. Доступ к алкоголю и назначение веществ были прекращены через 30 дней для проведения сравнительной оценки поведенческого статуса животных, состояния их ин-

теллектуальных н мнестических функций, а также для определения выраженности алкоголь-депривационного эффекта. Анализ указанных характеристик был положен в основу оценки эффективности действия изучаемых веществ.

Влияние АКФ-94 и ПИР-87-б-О на модели "открытое поле" проявлялось активацией двигательной и исследовательской активности, достоверно отличаемой от показателей контрольной группы. Действие изучаемых веществ по своей выраженности превосходило эффект пкрацетама.

Изучаемые вещества оказались эфективными на модели плюсообразного лабиринта. Они положительно влияли на состояние краткосрочной памяти и элементов рассудочной деятельности, оптимизируя маршрут передвижения крыс в условиях свободного выбора рукавов.

В тесте экстраполяционного избавления вещества АКФ-94 и ПИР-87-б-О способствовали ускорению решения задачи избегания аверсивной водной среды (рис. 3). Анализ результатов этого теста позволил выявить различие в действии изучаемых веществ. Подобно пирацетаму соединение ПИР-87-б-О способствовало решению задачи избегания путем активации поисковой деятельности, в то время как АКФ-94 предположительно улучшало процесс экстраполяции траектории выхода, о чем свидетельствует уменьшение двигательной активности при незначительном снижении общего периода иммобилизации.

Контроль Пирацстам ПИР-87 6-О АКФ-94

Вещеспя

О До ялкоготзжмщш □После алкоголжхшп I

Рис. 3. Влияние веществ на время решения задачи избегания аверсивной среды. * - достоверность по сравнению с контролем; р<0,05 ** - достоверность по сравнению с контролем; р<0,01 Критерий Уитни-Манна.

В тесте эоосоциапьного взаимодействия под влиянием изучаемых веществ наблюдалось снижение агрессивности, конфликтности при контакте и неадекватности поведения, а также увеличения соматомоторных элементов поведения и исследовательской активности по сравнению с животными контрольной группы. Следует отметить большую выраженность эффектов ПИР-87-6-0 и АКФ-94 в сравнении с пирацетамом. Кроме того, изучаемые соединения, в отличие от пира-цетама, способствовали снижению уровня тревожности и негативности поведения крыс.

В завершении алкоголизации и курсового назначения препаратов проводилось исследование среднесуточного потребления раствора алкоголя, а после его отмены определялась выраженность алкоголь-депривационного эффекта. Результаты полученных экспериментов не выявили статистически значимых отличий в состоянии указанных параметров до и после назначения веществ.

Таким образом, полученные в ходе второго этапа данные свидетельствуют о том, что вещества АКФ-94 (10 мг/кг) и ПИР-87-б-О (50 мг/кг), вводимые в течение 30 дней на фоне свободного доступа к алкоголю, оказывали выраженное положительное влияние на интеллектуальио-мнестические функции, нивелируя отрицательное воздействие этанола и проявления эффекта его отмены у крыс. Однако, эти соединения не влияли на степень выраженности у крыс патологического влечения к алкоголю.

На третьем этапе работы проводилось изучение механизма нейротропного действия и влияния на эффекты алкоголя вещества АКФ-94, проявившего по результатам предыдущих тестов наиболее выраженную антиамнестическую активность.

Изучение влияния АКФ-94 на гипнотический эффект этанола, развивающийся при его интраперитонеальным введением в дозе 5 г/кг, показало, что в группе животных с высоким уровнем алкогольного предпочтения в ответ на введение указанного соединения в дозе 20 мг/кг наблюдалось увеличение продолжительности этанолового сна. Назначение антагониста ЫМОА-рецепторов - МК-801 (0,3 мг/кг) препятствовало развитию этого эффекта. Введение ДЭГК (300 мг/кг) не оказывало влияние на продолжительность этанолового сна.

При однократном введении АКФ-94 (20 мг/кг) наблюдалось потенциирова-ние гипотермического действия алкоголя. Этот эффект был более выражен у животных с высоким уровнем алкогольного предпочтения (рис. 4). Соединение

АКФ-94 самостоятельно также приводило к снижению базальной температуры, однако оно было выражено в меньшей степени, чем при воздействии этанола. Использование селективного антогониста ЫМОА-рецепторов - МК-801 (0,3 мг/кг) уменьшало проявление гипотермического эффекта, вызванного как АКФ-94, так и его сочетанием с алкоголем.

а. б.

Рис. 4. Влияние АКФ-94 на гипотермический эффект алкоголя

а) у крыс с высокой степенью предпочтения алкоголя;

б) у крыс с низкой степенью предпочтения алкоголя.

_ £

Р "

ё 2 35

О. о о «о

с а

№

А

ш

■Ь

Контроль

"Этанол ЛКФ-94 АК4*94 + АКФ-941 АКФ94» АК<М4» ЛК<М4»

'Уганол МК-801 МК-801 + ДЭГК ДЭГК*

Группы животных :Паио'1 Ьзнол □ Непредпочтаютие I

0 Предпочитающие

о

Рис. 5. Влияние веществ на порог переносимости электроболевого раздражения. * - достоверность по сравнению с контролем; р<0,05. ** - достоверность по сравнению с контролем; р<0,01. Критерий Уитни-Манна.

При исследовании порога переносимости электроболевого раздражения выявлено, что однократное введение АКФ-94 (20 мг/кг) приводило к ослаблению анальгетичсского действия этанола (рис.5). Уменьшение выраженности этого эффекта наблюдалось при использовании антагонистов рецепторов ВАК - МК-801 (0,3 мг/кг) и ДЭГК (300 мг/кг). Снижение порога электроболевой чувствительности также отмечалось при назначении МК-801 (0,3 мг/кг) на фоне действия АКФ-94.

Данные экспериментов, полученные на третьем этапе работы, свидетельствуют об участии ВАК-ергической системы мозга (рецепторов NMDA типа) в реализации нейротропных эффектов вещества.

ВЫВОДЫ:

1. В результате проведенного сравнительного изучения эффективности действия новых производных медиаторных аминокислот на модели принудительной алкоголизации у крыс, наибольшая степень ноотропной активности выявлена у соединений АКФ-94 (10 мг/кг) и ПИР-87-6-0 (50 мг/кг) при курсовом применении в течение 30 дней через день. Положительное действие этих веществ на состояние мнестических и когнитивных функциий превосходило по выраженности эффект препарата сравнения пирацетама (200 мг/кг).

2. Вещества АКФ-94 (10 мг/кг) и ПИР-87-6-0 (50 мг/кг) оказывали выраженное положительное влияние на интеллектуально-мнестические функции, нивелируя отрицательное воздействие алкоголя и проявления эффекта его отмены у крыс, имеющих высокую степень предпочтения этанола. Вещества не влияли на степень выраженности предпочтения алкоголя.

3. Выявлены различия в степени воздействия соединения АКФ-94 на эффекты этанола у крыс с различной выраженностью алкогольной мотивации. Вещество в дозе 20 мг/кг при однократном введении в большей степени потенцировало ги-потремический и гипнотический эффекты этанола и снижало анальгетическое его действие у животных с выраженной алкогольной мотивацией.

4. Механизм ноотропного действия изучаемых веществ при экспериментальном алкоголизме обусловлен их влиянием на процессы ВАК-ергической нейроме-диации.

5. Целесообразно дальнейшее углубленное изучение вещества АКФ-94 с целью создания эффективного средства, улучшающего высшие интегративные функции мозга и применяемого в комплексной терапии алкоголизма.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Считать целесообразным применение соединений, влияющих на ВАК-ергическую нейромедиацию, для проведения фармакологической коррекции нарушений высших интегративных функций мозга, обусловленных длительным употреблением алкоголя.

2. Рекомендовать новые оригинальные соединения - аналоги медиаторных аминокислот - АКФ-94 и ПИР-87-б-О к дальнейшему углубленному доклиническому изучению с целью последующего создания препаратов, применяемых в комплексной терапии алкоголизма.

3. Продолжить поиск новых веществ в ряду аналогов медиаторных аминокислот, оказывающих коррегирующее влияние на расстройства когнитивных функций.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Результаты предварительного изучения антидепрессивных свойств соединения АКФ-94. // Тез. докладов Международной конференции "Современные методы биологической терапии психических заболеваний". Москва, 1994. С. 48. (в соавт. с В.И. Петровым, И.А. Григорьевым, A.A. Озеровым, B.JI. Аджиенко, С.Г. Горбуновым).

2. Методика комплексной оценки эмоционально-поведенческой активности крыс в условиях зоосоциального взаимодействия. // Тез. докладов 49-й научной сессии "Актуальные вопросы медицины". Волгоград, 1994. С. 77-78. (в соавт. с В.И. Петровым, И.А. Григорьевым, С.Г. Горбуновым).

3. Оценка церебропротекторных свойств новых аналогов медиаторных аминокислот на модели экспериментального алкоголизма // Сб. статей "Новые материалы и методы в медицине". Волгоград, 1995. Т. 51, вып. 2, С. 7-9. (в соавт. с В.И. Петровым и И.А. Григорьевым).

4. Сравнительная ноотропная активность пикамилона, пантогама и новых аналогов медиаторных аминокислот. // Сборник статей Российской конференции

"Пикамилон в современной неврологической и психиатрической практике". Москва, 1994. С. 42-45. (в соавт. с В.И. Петровым, A.A. Озеровым, И.А. Григорьевым, A.B. Яницкой, И.П. Кулешовой, Д.Г. Ковалевым, В.Л. Аджиенко, С.Г. Горбуновым).

5. Фармакологическое изучение эффективности действия новых производных возбуждающих аминокислот, обладающих ноотропной активностью, на модели хронической алкоголизации \\ Тез. докладов 2-го Российского национального конгресса "Человек и лекарство". Москва, 1995. С. 302. (в соавт. с В.И. Петровым и И.А. Григорьевым).

6. Влияние новых производных медиаторных аминокислот на рассудочную деятельность и мнестические функции при экспериментальном алкоголизме // Сборник тезисов 1-го Съезда Российского научного общества фармакологов. Волгоград, 1995. С. 327. (в соавт. с В.И. Петровым и И.А. Григорьевым).

7. Коррекция интеллекту ал ьно-мнестических расстройств при экспериментальном алкоголизме новыми производными медиаторных аминокислот \\ Тез. докладов 3-го Российского национального конгресса "Человек и лекарство". Москва, 1996. (в соавт. с В.И. Петровым).