Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Медиатропные механизмы ноотьропного действия новых аналогов возбуждающих аминокислот

о \

о

^ На правах рукописи

СЕРГЕЕВ Владимир Станиславович

МЕДИАТОРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ НООТРОПНОГО ДЕЙСТВИЯ НОВЫХ АНАЛОГОВ ВОЗБУЖДАЮЩИХ АМИНОКИСЛОТ

14.00.25. - фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ВОЛГОГРАД - 1997

Работа выполнена в НИИ фармакологии при Волгоградской медицинской академии.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор В. И. Петров.

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ: доктор медицинских наук, профессор О. С. Медведев.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор М. Д. Гаевый; доктор медицинских наук, профессор А. А. Спасов.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Научно-исследовательский институт фармакологии РАМН,

г. Москва.

Защита состоится " ^ " мая 1997 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д 084.54.01 при Волгоградской медицинской академии (400066, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградской медицинской академии.

Автореферат разослан " ^ " ОЯр^ЛР . 1997 г

Ученый секретарь дисертационного совета, кандидат медицинских наук,

доцент Ю.К. Филимонова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Ускорение научно-технического прогресса, информационные перегрузки, усиление напряженности труда, другие факторы, связанные со стрессогенными воздействиями, увеличивают вероятность появления психической дезадаптации, невротических расстройств, нарушений умственной деятельности (Ведяев Ф.И., 1992; Судаков К.В., 1996). Лечение этих состояний осуществляется различными психотропными средствами: транквилизаторами, антидепрессантами и близкими к ним по спектру действия препаратами (Burrows G.D., 1996; Leonard В.Е., 1996). Однако лечебный эффект этих препаратов носит кратковременный характер и требует постоянного их приема. Поэтому наиболее целесообразным и перспективным является поиск и изучение фармакологических средств, позволяющих при повышении порога психофизиологической устойчивости к воздействию стрессогенного фактора по возможности полно сохранить работоспособность организма в осложненных условиях, перевести пассивную форму адаптации в активную (Бобков Ю.Г. и др., 1984; Вальдман A.B., Александровский Ю.А., 1987; Сытник С.И., Нагорнев С.Н., 1996; Петров В.И. и др., 1996). Такими препаратами являются, на наш взгляд, ноотропные средства.

Ноотропные средства положительно зарекомендовали себя в клинике и широко применяются для лечения интеллектуально-мнестических расстройств при целом ряде патологических состояний (Воронина Т.А., 1991). Результаты исследований свидетельствуют о том, что препараты этой группы способны улучшать процессы умственной деятельности не только в условиях патологических нарушений ин-теллектуально-мнестической сферы, но и у здоровых индивидуумов при действии сверхпороговых эмоциональных раздражителей (экстремальные состояния, стресс). Назначение ноотропных препаратов позволяет оптимизировать деятельность в осложненных условиях, наиболее эффективно использовать имеющиеся резервы для преодоления авер-сивной ситуации (Яснецов В.В., 1996).

Литературные данные свидетельствуют об эффективности применения в качестве стресспротекторов таких ноотропных средств, как пирацетам, пикамилон, меклофеноксат, оксирацетам, анирацетам, ноо-глютил, ацефен и некоторых других (Ковалев Г.В., 1990). Однако недостаточная фармакологическая активность указанных соединений не позволяет широко использовать ноотропные средства в качестве корректоров патологических состояний, вызванных стрессом (Куликова О.Г. и ДР., 1992).

В настоящее время является актуальным поиск новых фармакологически активных веществ с указанным типом действия (Середе-нин C.B., Воронина Т.А., 1992). Одним из наиболее перспективных путей в разработке новых биологически активных веществ является химическая модификация структур эндогенных метаболически активных соединений (Петров В.И., 1995). Весьма интересными в этом

плане являются возбуждающие нейроактивные аминокислоты: глута-миновая и аспарагиновая.

В НИИ фармакологии при Волгоградской медицинской академии за последние годы создан ряд производных возбуждающих аминокислот (ВАК), обладающих ноотропной и стресспротекторной активностью. К таким соединениям относятся производные аспарагиновой кислоты: ди(3-диметоксифосфорилпропил)овый эфир К-ацетил-БЬ-аспарагиновой кислоты (ПИР-87-6-0) и дилитиевая соль Ы-ацетил-Ь-аспарагиновой кислоты (АКФ-94). Однако, нейрохимические механизмы, лежащие в основе центральных эффектов этих веществ остаются малоизученными.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью работы явилось определение значимости моноаминергиче-ских механизмов в реализации ноотропных и стресспротекторных эффектов новых аналогов возбуждающих аминокислот.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить поведенческие и нейрохимические различия у крыс, предварительно разделенных по степени стресс-устойчивости.

2. Изучить динамику поведенческих и нейрохимических параметров животных в условиях адаптации к стрессу.

3. На модели иммобилизациокного стресса изучить влияние фармакологических средств на сохранность параметров поведения после стресса.

4. Провести сравнительное изучение влияния фармакологических препаратов при системном введении на обмен медиаторных катехола-минов мозга крыс.

5. Изучить рецепторный механизм влияния производных возбуждающих аминокислот на метаболизм дофамина в мозге крыс in vivo.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые проведен комплексный анализ поведенческих и нейрохимических показателей, отражающих функциональные изменения на разных уровнях организации деятельности мозга - ловеденческом, тканевом и субклеточном - в норме и в условиях иммобилизационного стресса.

Впервые продемонстрирована возможность гетерорецепторной регуляции процесса синтеза и высвобождения дофамина (ДА) из мозга крыс в условиях in vivo, и выявлена способность ВАК-производных ПИР-87-6-0 и АКФ-94 стимулировать данный процесс. На основании установленного дофаминергического механизма действия изучаемых соединений дан прогноз о возможной стресс-протекторной активности новых производных аспарагиновой кислоты: ПИР-87-б-О и АКФ-94, обладающих ноотропной активностью.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ Тема диссертации является составной частью плана научно-исследовательской работы НИИ фармакологии при Волгоградской медицинской академии и утверждена на заседании Ученого совета BMA (протокол М- 5 от 11 января 1995 года).

В ходе работы апробирована методологическая схема, направленная на повышение информативности нейрохимических исследований в психофармакологии. Представленная фармакологическая характеристика нейрохимических аспектов механизма действия оригинальных соединений с ноотропной активностью: АКФ-94 и ПИР-87-6-0 - является обоснованием перспективности поиска эффективных ноотропов со стресс-протекторными свойствами среди производных нейроактивных аминокислот с позитивным катехоламинергическим действием.

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ Основные положения работы используются в учебном процессе со студентами и слушателями факультета усовершенствования врачей (ФУВ) на кафедрах фармакологии, клинической фармакологии и интенсивной терапии, а также фармакологии и биофармации ФУВ Волгоградской медицинской академии. По материалам диссертации опубликовано 27 печатных работ, 2 работы приняты к печати.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Материалы диссертации докладывались и обсуждались на I Международной медико-биологической конференции "Морфофункцио-нальные механизмы адаптации и коррекции патологических нарушений" (Кишинев, 1995); II и III Межвузовских научно-практических конференциях студентов и молодых ученых Волгоградской области (Волгоград, 1995, 1996); I Конференции молодых физиологов и биохимиков России "Биохимические и биофизические механизмы физиологических функций" (Санкт-Петербург, 1995); II, III и IV Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва, 1995, 1996, 1997); I Съезде Российского научного общества фармакологов "Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств" (Волгоград, 1995); Всероссийской научной конференции "Современные аспекты артериальных гипертензий" (Санкт-Петербург,

1995); IV Международном симпозиуме "Advances in Alzheimer Therapy" (Nice, France, 1996); Международной научной конференции студентов и аспирантов "Ломоносов-96" (Москва, 1996); XX Конгрессе Международной коллегии нейро-психофармакологов (Melbourne, Australia,

1996); VIII Всемирном конгрессе Международной организации психофизиологов (Tampere, Finland, 1996); XIV Международном симпозиуме

5

по медицинской химии (Maastricht, The Netherlands, 1996); Международном симпозиуме "Аминокислоты и их производные (химия, технология, биохимия, фармакология, питание, медицина)" (Гродно, 1996); Научной конференции "Механизмы адаптации организма", посвященной памяти и 90-летию со дня рождения профессора В.А. Пегеля (Томск, 1996); Международной конференции по клинической фармакологии (Москва, 1997); Международной объединенной конференции по физиологии (XXVIII Национальный конгресс Испанского общества физиологов и Американского физиологического общества) (Malaga, Spain, 1997); 14th National Meeting of the Brain Researh Association (Liverpool, UK, 1997); III Международной конференции Африканского нейрофизиологического общества (Cape Town, South Africa, 1997); XI Международном симпозиуме "Trends in drug research" (Noord-wijkerhout, The Netherlands, 1997).

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на т страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, 4 главы собственных исследований, обсуждение результатов, научно-практические рекомендации, выводы, список литературы, содержащий i 72. отечественных и i 74 зарубежных источников, а также приложение. Диссертация иллюстрирована ЗУ рисунками и содержит О таблиц.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Изучение эффективности производных аспарагиновой кислоты ПИР-87-б-О (50 мг/кг) и АКФ-94 (10 мг/кг) на модели иммобилизаци-онного стресса, при остром и субхроническом (7 дней) введении веществ , подтвердило наличие у них отчетливых стресс-протекторных свойств, выражавшихся в сохранности поведенческих параметров после стресса.

2. Соединения ПИР-87-б-О и АКФ-94 при субхроническом внутри-брюшинном введении оказывают активирующее влияние на систему медиаторных катехоламинов мозга крыс. При этом отмечаемые изменения метаболизма медиаторов сходны с таковыми, наблюдаемыми при изучении влияния на центральные структуры предварительной адаптации животных.

3. Дилитиевая соль ^ацетил-Ь-аспарагиновой кислоты (АКФ-94) при добавлении ее в перфузионный раствор в концентрации 1 мМ оказывает гетерорецепторное влияние на метаболизм ДА в стриатуме крыс in vivo. Этот эффект реализуется через NMDA-рецепторы ВАК.

4. Является перспективным дальнейший поиск антистрессорных средств среди производных ВАК, обладающих ноотропной активностью.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использовались 350 белых беспородных крыс-самцов, с исходной массой 170-190 г, выращенных в виварии НИИГТиП (г. Волгоград). Микродиализные эксперименты выполнялись на 64 крысах-самцах линии Вистар, массой 280-320 г, выращенных в виварии ИЭК Кардиологического научного центра (г. Москва). Животные содержались в общих клетках по 4-5 особей, в стандартных условиях вивария, доступ к пище и воде ad libitum.

В работе использовались вещества с лабораторными шифрами: ПИР-87-б-О (ди(З-димет-оксифосфорилпропил)овый эфир М-ацетил-DL-аспарагиновой кислоты) и АКФ-94 (дилитиевая соль 1\-ацетил-Ь-яспа-рагиновой кислоты), полученные в лаборатории органического синтеза НИИ фармакологии при Волгоградской медицинской академии доктором химических наук A.A. Озеровым.

В качестве препаратов сравнения был выбран пирацетам (ноо-тропил), как классическое ноотропное средство, в дозе 200 мг/кг (Ковалев Г.В., 1990), и транквилизатор релониум (диазепам) в дозе 1 мг/кг. Во всех экспериментах контрольная группа животных получала изотонический раствор хлорида натрия.

Изучаемые вещества и препараты сравнения вводились животным внутрибрюшинно, в подвздошную область живота. Соединения растворялись в физиологическом растворе ex tempore и после предварительного взвешивания животных вводились в дозах: ПИР-87-6-0 - 50 мг/кг; АКФ-94 -10 мг/кг. Согласно ранее полученным в нашей лаборатории данным эти вещества в указанных дозах оказывали выраженное ноотропное действие. Назначение препаратов осуществлялось за 1 час до проведения опытов.

Методы изучения поведения животных. Спонтанная двигательная активность, ориентировочно-исследовательское поведение и уровень эмоционального реагирования животных изучались в тесте "открытое поле" (Гельман В.Я., Кременевская С.И., 1990). Скорость решения задачи избегания аверсивной среды как элемента рассудочной деятельности изучалась в тесте экстраполяционного избавления (ТЭИ; Бонда-ренко H.A., 1992). Порог переносимости электроболевого раздражения ■ регистрировали при появлении вокализации у подопытного животного. Для комплексной оценки эмоционально-мотивационной сферы поведения животных в условиях, максимально приближенных к естественным, применялся разработанный в нашей лаборатории оригинальный тест зоосоциального взаимодействия (Петров В.И. и др, 1996).

Определение содержания моноаминов и их метаболитов в ткани мозга крыс ex vivo. Исследуемые вещества вводили внутрибрюшинно в объеме 2 мл/кг за 60 мин до декапитации животных. Мозг быстро извлекали и на холоде выделяли фронтальную кору, стриатум, прилежащие ядра, гиппокамп и гипоталамус (Ковалев Г.И., 1993). Выделенные участки мозга охлаждали в жидком азоте и хранили при температуре -20 °С не более недели. Гомогенизацию осуществляли в (10 объемах) 0,1 Н НСЮ4 с добавлением внутреннего стандарта диоксибензиламина (ДОБА) 100 нг/мл. Пробы' центрифугировали при 10000 g в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отбирали и фильтровали ценрифугированием. 20 мкл фильтрата наносили на аналитическую колонку методом прямой инъекции. Норадреналин (НА), дофамин (ДА), 3,4-ди-оксифенил-

7

уксусную кислоту (ДОФУК) и 5-оксииндолуксусную кислоту (5-ОИУК) разделяли на обращенно-фазной колонке (3x150 мм, СЮ, 5 мкм, МНПП "Элсико", г. Москва) с использованием в качестве подвижной фазы ОД M цитратно-фосфатного буфера, содержащего 0,3 мМ октан-сульфоната натрия, 0,1 мМ ЭДТА и 8% ацетонитрила (pH 3,6). Определение катехоламинов и их метаболитов осуществляли на стеклоугле-родном электроде при потенциале +0,8 В против Ag/AgCl электрода сравнения. Скорость потока подвижной фазы составила 0,7 мл/мин.

Изучение высвобождения ыейромедиаторов в мозге свободно-подвнжыых крыс методом внутримоагового микроднализа. Предварительно были изготовлены оригинальные концентрические диализные канюли: внутренняя часть - два кремниевых капилляра (диаметром -0,16 мм, "Polymicro Technologies", США), наружная - стальной капилляр (диаметр - 0,6 мм); рабочая длина диализной мембраны ("Gambro", Германия, проницаемостью до 5000 Да) составляла 2 мм, наружный диаметр 0,25 мм. Имплантирование микродиализной канюли в мозг животного проводили при помощи стереотаксического прибора "David Kopf Instruments" (США). За сутки до начала эксперимента крысам под нембутоловым наркозом (40 мг/кг, внутрибрюшинно) вживляли микродиализатор в область правого вентромедиального гипоталамуса и крепили его к костям черепа с помощью норакрила. Координаты: АР-1,8, L-0,8, V-9,2 (Paxinos G., Watson С., 1986). Конроль положения диализатора в мозгу проводили post mortem на срезах толщиной 25 мкм, окрашенных генционвиолетом. После операции крыс помещали в клетки со свободным доступом к воде и пище. Опыты проводили на бодрствующих животных. Перфузия осуществлялась во всех опытах раствором Рингера (147 мМ Na+, 1,3 мМ Са++, 4 мМ К+, 155,6 мМ Cl ) со скоростью 2,5 мкл/мин, с помощью префузионного насоса ("Carnegie Medicine", Швеция) или шприцевого насоса ("Razel", США). Для повышения чувствительности метода использовался блокатор нейрональ-ного захвата катехоламинов дезипрамин в концентрации 10 мкМ. Через 60 мин после начала перфузии диализат собирали последовательными 20-минутными фракциями в микропробирки, содержавшие 5 мкл 0,2 H HCl. Образцы хранили при температуре -20 °С. Три первых образца усреднялись и считались базальными (100%). Концентрацию нейромедиаторов и их метаболитов в образцах диализата определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимическим детектированием (Kuzniin A.I. et al., 1995). Хроматографи-ческое разделение производили на колонке HR-80, детектирование - с помощью электрохимического детектора Coulochem II ("ESA", США).

Статистическую обработку полученных данных проводили на IBM-совместимом персональном компьютере с помощью пакета программ SOLO и EXCEL с использованием критерия Уитни-Манна, и модифицированного t-критерия Стьюдента (Плохинский H.A., 1980).

Отдельные этапы настоящего исследования выполнены при консультативном и техническом содействии д.б.н. Сеульской Н.Б. (лаборатория физиологии высшей нервной деятельности, Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, г. Санкт-Петербург), д.м.н. Ковалева Г.И., к.б.н. Будыгина Е.А. (лаборатория радиоизотопных методов исследования, НИИ фармакологии РАМН, г. Москва), к.м.н. Гайнетдинова P.P.

(лаборатория нейрохимической фармакологии, НИИ фармакологии РАМН, г. Москва), к.п.н. Зарецкого Д.В. (лаборатория экспериментальной фармакологии, Институт экспериментальной кардиологии КНЦ РАМН, г. Москва), к.м.н. Григорьева И.А. (лаборатория психофармакологии, НИИ фармакологии при Волгоградской медицинской академии), которым автор приносит искреннюю благодарность.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Общепризнано, что изменения поведенческой активности при воздействии стресса являются результатом функциональных изменений мозга, в том числе и нейрохимических характеристик медиаторных систем (Талалаенко А.Н. и др., 1992). Поэтому на первом этапе нашей работы мы попытались оценить возможные нейрохимические механизмы, лежащие в основе стресо/стойчивости и адаптации к неблагоприятным воздействиям.

Для предварительного разделения крыс по уровню стресс-резистентности применялся метод прогнозирования устойчивости к стрессу, разработанный в лаборатории психофармакологии НИИ фармакологии при Волгоградской медицинской академии (Аджиенко В.Л., 1997). Этот метод включает в себя определение исходных двигательно-исследо-вательских и эмоциональных характеристик животных (табл. 1).

В нашем исследовании на поведенческом и нейрохимическом уровнях дано подтверждение корректности примененного метода разделения крыс. Так у животных, отнесенных в группу высокоустойчивых, отмечалась лучшая переносимость иммобклизационного стресса, оцениваемая по сохранности поведенческих параметров, в сравнении с группой низкоустойчивых крыс. В нейрохимических экспериментах было показано, что у крыс с исходно различной ориентировочно-двигательной активностью обнаружено неодинаковое содержание катехоламинов в структурах мозга. В группе высокоустойчивых животных выявлено большее содержание НА и ДА во всех исследованных структурах по сравнению с группой низкоустойчивых (рис. 1). Тем самым полученные данные указывают на существование связи между генетически детерминированной стресс-реактивностью и распределением биогенных аминов в структурах мозга у устойчивых и предрасположенных к эмоциональному стрессу крыс (Вгас1Ьеггу С.\¥. а1., 1991; Ас1ео1а О. et а1., 1993). Предварительная адаптация низкоустойчивых крыс выявила достоверное увеличение содержания медиаторов и ДОФУК в стриатуме, а также НА в гипоталамусе.

Таблица 1. Исходные параметры поведения крыс с различной

генетической устойчивостью к стрессу (М + т)

Группа Вид активности

Гориз. акт. Верт. акт. Загляд. Порог вокал.

Ниакоуст. 13,5 ± 5,2 3 =ь 1,6 3,4 ± 1,4 16,б ± 0,8 21,3 ± 0,7

Высокоуст. 51,8 ± 4,4 * 8,6 ± 1,7 * 6,4 ± 1,5 43,1 ± 1,3 * 61,5 ± 2,3 *

Примечание. Ь - уровень сгресс-устойчивости,

* - достоверное отличие между группами (р<0,05).

Проведенный корреляционный анализ поведенческих и нейрохимических параметров показывает, что уровень стресс-устойчивости Ь имеет положительную корреляционную связь с уровнем НА в гипоталамусе (г = 0,81, при р = 0,05). Показатель суммарной двигательной активности в тесте "открытое поле" имел высокую корреляцию (г = 0,91, при р = 0,02) с активностью дофаминергической системы в стриатуме.

*

60-!

Фронгал. кора Стриатум Гипоталамус 1 1 Низкоуст. ИШ Адаптиров. И1 Высокоуст.

Рис. 1. Содержание медиаторов в мозге крыс с различной устойчивостью к стрессу, * - достоверные отличия от группы низкоустойчивых крыс (р < 0,05)

Выделение из низкоустойчивых крыс группы адаптированных животных позволяет оценить влияние предварительной адаптации на сохранность поведенческих показателей при стрессе (Январева И.Н., Кузьмина Т.Р., 1991). В наших экспериментах было показано, что предварительная двухнедельная адаптация крыс к стрессу повышает способность подопытных животных к решению задачи в тесте экстраполя-ционного избавления, а также уменьшает снижение двигательной и исследовательской активности в тесте "открытое поле" под воздействием иммобилизации. По степени изменения параметров поведения группа адаптированных крыс достоверно отличалась от низкоустойчивых, а по некоторым показателям даже превосходила высокоустойчивых животных. Это дает возможность сделать вывод о положительном влиянии предварительной адаптации на сохранность поведенческих параметров при новом стресс-воздействии (рис. 2).

Проведенное нейрохимическое исследование показало, что у адаптированных крыс обнаружены нормализация сниженного под влиянием нового стресса уровня норадренолина в гипоталамусе, а также достоверное повышение содержания норадреналина и дофамина в стриатуме и прилежащем ядре мозга крыс (табл. 2). Следует отметить, что увеличение при стрессе содержания дофамина подтверждается и отличиями в отношении ДОФУК / ДА, что является косвенным признаком

140% -г1

' I □Ннз.+стресс 3 Адап.+стресс

Горнз Вертик. Заглдц. Груминг Порог

активн. активн. вокал.

Рис. 2. Влияние иммобилизации на динамику поведенческих показателей крыс, предварительно разделенных по степени сгресс-^стойчивости, данные представлены в % по отношению к контрольной группе (без стресса), * - достоверное отличие от группы низкоустойчивых крыс (р < 0,05)

Таблица 2. Изменение содержания катехоламинов и их метаболитов в мозге крыс с различной стресоусгойчивостью после 18-часовой иммобилизации (М± т)

Группа НА ДА ДОФУК ДОФУК / уЪа

Низкоуст. Адаптеров. Высокоуст. : 12,4 ± 2,5 68% 25.7 ±3,5* 107% 35.8 ±9,8* 138% Трефронтальная кор ЗД ± 0,8 107% 3,5 ±0,5 117% 6 ±2,3 150% ia 11Д ± 5,6 84% 20Д ± 8,7 164% 26Д ± 3,3* 99% 3,5 5,77 4,37

Низкоуст. Адаптиров. Высокоуст. 2.4 ± 0,8 114% 6.5 ± 2,7* 144% 4,2 ± 0,7 136% Стриатум 13,7 ±4,6 105% 44,5 ± 16* 142% 42,1 ± 14* 158% 20,8 ± 6,6 72% 76,8 ± 16* 145% 93,1 ± 19* 218% 1,52 1,73 2Д1

Низкоуст. Адаптиров. Высокоуст. 2,8 ± 0,8 104% 7,2 ±1,4* 116% 3,8 ± 1 88% Прилежащее ядро 10.8 ± 2,9 106% 27,6 ± 9,5* 169% 30.9 ± 6* 144% 26,8 ± 12 89% 88Д ± 20* 132% 91,3 ± 17* 142% 2,48 ЗД 2,95

Низкоуст. Адаптиров. Высокоуст. 17,8 ± 6,6 95% 73 ± 16* 138% 20,1 ± 5,3 82% Гиппокамп 1,9 ± 0,7 76% 4,4 ± 1,7 119% 5 ± 2,4* 109*/. 5,8 ± 1,4 42% 44,1 ±21* 97% 17,8 ± 6,5 76% 3,05 10,02 3,56

Низкоуст. Адаптиров. Высокоуст. 13,4 ± 2,4 72% 66,6 ±20* 114% 43 ± 19* 113% Гипоталамус 2,3 ± 0,8 82% 4,3 ± 1,1 116% 6Д ± 1Д* 124% 9,4 ± 1,6 93% 42,8 ± 9* 310% 30Д ± 8,5* 150% 4,09 9,95 4,87

Примечание. Данные рассчитаны в нг/мг ткани, а также выражены в % к исходному уровню содержания медиатора; * - достоверность отличия от группы низкоустойчивых крыс при р < 0.05 (п= 8).

повышения синтетической активности катехоламинергической системы в нервной ткани у адаптированных к стрессу животных (Jedema Н. Р., Moghaddam В., 1994).

Более тонкал методика внутримозгового микродиализа in vivo позволила выявить различия в соотношении внеклеточного уровня НА и ДА в вентромедиальном гипоталамусе в ответ на стресс. Так у адаптированных достоверно возрастало содержание ДА, при меньшем уровне прироста НА, по сравнению с контрольной группой (рис. 3). Из литературных данных известно, что НА и ДА в вентромедиальном гипотала-

мусе действуют как стимулятор и ингибитор секреции кортикотропин-рилизинг-фактора при стрессе и тем самым определяют силу ответной реакции организма на стресс (Culman J.et al., 1991; Pacak К. et al., 1992; Miachon S. et al., 1993).

Результаты проведенных нами исследований нейрохимических механизмов эмоционального стресса позволяют сделать вывод о том, что в основе центральных механизмов, определяющих устойчивость животных к эмоциональному стрессу, лежит специфическая нейрохимическая перестройка нейронов эмоциогенных структур мозга. Животные с повышенным исходным содержанием ДА в егриатуме, а также ДА и НА в гипоталамусе проявляют большую устойчивость к иммобилизаци-онному стрессу по сравнению с животными, у которых содержание указанных медиаторов снижено.

Согласно литературным данным система моноаминов является одной из ключевых в механизмах антистрессорной защиты, а также срочной и долговременной адаптации к стрессу (Cenci М.А. et al., 1992; Горбунова А.В. и др., 1995). Причем динамика выброса норадреналина отражает в основном активационный компонент стресс-реакции, в то время как объемный выброс дофамина свидетельствует об активации ответной (защитной) реакции на стресс (Гасанов Г.Г. и др., 1995). Длительность и сила ответа, а также динамика выброса метаболитов ДА (в основном ДОФУК) свидетельствуют о синтетических способностях нервной ткани, что также отражает уровень стресс-устойчивости (Freeman К.А., Tallarida R.J., 1994).

Наши опыты показали, что исходную нейрохимическую организацию эмоциогенных структур у животных можно изменить при помощи адаптации. Одновременно изменяется и устойчивость животных к эмоциональному стрессу.

CJ ь

я

со 250.

Ч 2 225-

ч 200-

и

< 175

ч

я 150-

1-

и о 125

а.

а. 100

с

75

\i

-/

I

Иммобилизация

\

'о-о

-60 -30 о

30 60

Время

90 120 150 180

мин

—О— Контроль

30 60 90 120 150 180

Время, мин

Алаптация

Рис. 3. Влияние иммобилизации на степень прироста ДА и НА в диализате у контрольных крыс и на фоне предварительной адаптации, * - достоверность отличия от контрольной группы (р < 0,05)

s

К <

Ct

220 200180160140 12010080

—A—

40 60 контроль —О—

NMDA (1 мМ) —•—

мин 80 100

АКФ-94 (0,1 мМ) АКФ-94 (t мМ)

Проведенная на первом этапе работы серия физиологических экспериментов позволила определить нейрохимическую "мишень", воздействуя на которую можно повысить устойчивость организма к неблагоприятному воздействию стресса.

Из литературных источников известно, что одним из механизмов регуляции активности катехола-минергических ней-

Рис. 4. Изменение содержания дофамина ронов является акти-

■лат/- вация рецепторов в стриатуме под действием агонистов ВАК-

рецепторов, - достоверность отличия от контроля (р < 0,05)

возбуждающих аминокислот (Whitton P.S., 1994). Проводимые в последнее время эксперименты свидетельствуют, что фронтальная кора при участии MyTaMafeprn4ecKHx нейронов регулирует активность катехоламинергической системы ба-зальных ганглиев мозга крыс (Alessandri В. et al., 1996). Показано, что глутаминовая кислота при локальном введении вызывает увеличение высвобождения ДА в стриатуме (Годухин О.В., 1987). Наблюдаемый эффект блокируется введением антагонистов ВАК-ергической передачи, что свидетельствует о специфическом влиянии этой медиаторной системы на активность катехоламинергических нейронов (Whitton P.S., 1992). Имеются также данные о наличии прямых гипоталамо-кортакальных связей, регулирующих физиологические реакции организма в ответ на эмоциональное раздражение (Батуев A.C. и др., 1996).

Для проведения экспериментов на втором этапе нами выбрано соединение дилитиевая соль К-ацетил-Ь-аспарагиновой кислоты (АКФ-94). Для оценки возможного нейромедиаторного механизма действия препарата был применен метод внутримозгового микродиализа, позволяющий оценивать состояние и динамику указанных процессов при сохранении целостности регуляторных механизмов мозга (Петров В.И. и др., 1996).

Эксперименты показали возможность гетерорецепторного влияния на высвобождение стриатного ДА в условиях in vivo. Установлена способность соединения АКФ-94 при локальном введении повышать экстраклеточный уровень ДА в стриатуме крыс. 14

Мы наблюдали увеличение концентрации ДА, когда через диализную канюлю в стриатум мозга крыс вводили 1 мМ NMDA, агонист ионотропных рецепторов глутама-та. Добавление в пер-фузионный раствор изучаемого соединения АКФ-94 в концентрации 0,1 мМ практически не вызывало эффекта, в то время как введение соединения в концентрации 1 мМ оказывало качественно сходный с NMDA, но уступающий по степени прироста катехолами-ков эффект (рис. 4). Предварительное, за час, добавление в перфузионный раствор 1 мМ 2-амино-5-фос-фовалериаяовой кислоты (АР-5), антагониста NMDA-рецепторов, значимо не влияло на бозальный уровень ДА, но достоверно устраняло АКФ-вызванное увеличение содержание ДА (рис. 5).

Полученные данные позволяют предположить, что изучаемое соединение оказывает влияние на катехоламинергическую медиаторную систему посредством избирательного воздействия на NMDA-рецепторы глутамата, расположенные на пресинаптических терминалях.

В проводимых ранее исследованиях сходная активность выявлена у соединения ПИР-87-G-O. Это вещество увеличивало на 20% базальное высвобождение ДА из изолированного стриатума на нейрохимической модели in vitro (Будыгин Е.А., 1993). При анализе рецепторного компонента в эффекте ПИР-87-б-О отмечалось его NMDA-позитивное действие. Эти данные хорошо согласуются с результатами A.B. Яницкой (1991), показавшей наиболее выраженное проявление ноотропных свойств исследуемых производных аспарагиновой кислоты на модели нарушения УРПИ неконкурентным антагонистом NMDA-рецепторов МК-801.

Из приведенных выше данных следует, что в активирующем базальное высвобождение ДА действии производных аспарагиновой кислоты ПИР-87-6-0 и АКФ-94 принимают участие NMDA-рецепторы ВАК.

Р-.

х о я

< et

220200 180 160 140 120 100 80

АР5

N

Время, мин

0 20 40 60 80 100 120 140 160 —*— контроль

—•— физ. р-р + АКФ-94 (1 мМ) --о- АР5 (1 мМ) + АКФ-94 (1 мМ)

Рис. 5. Влияние антагониста NMDA-pe-цепторов АР5 на центральный эффект АКФ-94, * - достоверность отличий от контроля (р < 0,05)

На следующем этапе исследования мы попытались определить нейрохимические изменения, происходящие в структурах головного мозга крыс, при субхроническом (7 дней) системном введении оригинальных соединений.

В отличие от препарата сравнения - пирацетама, изучаемые нами производные ВАК оказывали стимулирующее влияние на содержание

60

50

40

30-

20-

10

К 50-

X

я К 40-

н

и 30-

£

Ч 20-

10-

1

* *

НА

ДА

90 75 60 45 30 15

, * ДОФУК

Фронтал. кора Стриатум Гипоталамус

I_| контроль

пирацетам

ПИ Р-87-б-О АКФ-94

Рис. 6. Содержание медиаторов в мозге крыс после субхронического введения веществ. * - достоверные отличия от контрольной группы (р < 0,05)

катехоламинов во всех исследованных структурах. Причем под влиянием ПИР-87-б-О и АКФ-94 достоверно увеличивалась концентрация метаболита дофамина ДОФУК, что указывает на увеличение метаболизма дофаминергической системы мозга. Наибольшие изменения в приросте нейромедиатора отмечались в стриатуме и гипоталамусе (рис. 6).

Далее мы попытались оценить, как фармакологические агенты способны влиять на изменение нейрохимических параметров под воздействием 18-часового иммобилизационного стресса. Как было отмечено ранее, стресс-воздействие снижало уровень изучаемых медиаторов, особенно это заметно в гиппокампе и гипоталамусе. Значительно снижался уровень ДОФУК, что косвенно указывает на опустошение депо медиатора ДА и отсутствие дополнительных резервов его синтеза. Пирацетям не оказывал существенного влияния на динамику содержания катехоламинов при стрессе. Можно отметить лишь незначительное стимулирующее действие в отношении ДА и ДОФУК в гиппокампе и ДА в гипоталамусе, также несколько повышалось содержание метаболита серо-тонина 5-ОИУК по сравнению с базальным уровнем. Последнее дает возможность предположить влияние пирацетама на ееротонинерги-ческую систему при стрессе.

Содержание нейромедиаторов в группах крыс, получавших производные ВАК, достоверно отличалось от контрольной группы. При этом, несмотря на 18-часовое воздействие стрессора, уровень катехоламинов в мозге нарастал (табл. 3). Особое внимание следует обратить на возрастание показателя отношения ДОФУК/ ДА у групп животных, получавших изучаемые соединения. Нарастание уровня метаболита во внеклеточном пространстве указывает на имеющиеся резервные возможности синтетической активности нервных клеток, что является важным фактором устойчивости структур головного мозга в условиях стресса (Самойлов М.О., 1995).

Итак, полученные данные дают возможность с уверенностью утверждать, что производные аспарагиновой кислоты АКФ-94 и ПИР-87-6-0 при субхроническом введении оказывают активирующее влияние на систему катехоламинов мозга крыс. При этом отмечаемые изменения метаболизма медиаторов сходны с таковыми, наблюдаемыми при изучении влияния предварительной адаптации на содержание катехоламинов в различных структурах мозга животных. Влияние, оказываемое на синтетическую активность дофаминергической системы стриатума, может рассматриваться как адаптивное, повышающее возможности центральных физиологических реакций защиты перед предстоящим психотравмирующим воздействием (Яковлев Г.М. и др., 1990).

Согласно предложенной гипотезе регуляции синтетической активности ДА, можно определить различия в действии пирацетама и производных ВАК на уровень катехоламинов в мозге. Пирацетам оказывает влияние на выброс медиатора (Будыгин Е.А. и др., 1996). В наших экспериментах пирацетам незначительно повышал уровень ДА в стриа-

стриатуме и гипоталамусе, не оказывая существенного влияния на метаболит дофамина - ДОФУК, то есть не увеличивая метаболизм ДА.

Экзогенное введение производных ВАК оказывало заметное влияние на увеличение как самого ДА, так и ДОФУК, что указывает на по-

Таблица 3. Изменение содержания катехоламинов н их метаболитов в мозге крыс при субхроническом (7 дней) введении изучаемыми соединениями на модели 18- часового иммобилизационного стресса

(М±т).

Группа НА ДА ДОФУК ДОФУК -"•SA

Префронгаяьная кора

Контроль 12,4 ±2,5 68% ЗД ± 0,8 107% 11Д ±5,6 84% 3,5

Пирацетам 13Д ± 1,9 71% 3,4 ±0,6 110% 12 ±3,3 88% 3,53

ПИР-87-6-0 25,7 ± 3,5 107% 4,5 ± 1,3 113% 22,4 ± 8,9 82% 4,98

АКФ-94 39,1 ± 7,9 120% 7,5 ± 0,4 174% 37 ± 15 74% 4,93

Стриатум

Контроль 2,4 ± 0,8 114% 13,7 ±4,6 105% 20,8 ± 6,6 72% 1,52

Пирацетам 2,6 ± 0,6 104% 21,4 ± 4 79% 36,4 ± 9,1 98% 1,7

ПИР-87-6-0 6,8 ±3 119% 49,8 ± 14* 123% 85Д ± 14* 113% 1,71

АКФ-94 8,3 ± 0,3* 122% 53,6 ±6,3* 112% 127 ± 16* 141% 2,37

Прилежащее ядро

Контроль 2,8 ± 0,8 104% 10,8 ± 2,9 106% 26,8 ± 12 89% 2,48

Пирацетам 2,9 ±0,6 97% 19,7 ± 3,3 104% 32Д ± 7,3 96% 1,63

ПИР-87-6-0 8,4 ± 1,7* 112% 30,9 ± 8,4* 112% 96,6 ± 16* 112% 3,13

АКФ-94 9,3 ± 1,6» 124% 34,4 ±7,8* 131% 127 ± 24* 139% 3,69

Гиппокамп

Контроль 17,8 ± 6,6 95% 1,9 ± 0,7 76% 5,8 ± 1,4 42% 3,05

Пирацетам 19,4 ± 6,1 101% 3,1 ±0,4 129% 10,6 ± 1,3 117% 3,42

ПИР-87-б-О 52 ± 9,6* 108% 4,9 ± 1,5* 100% 31,6 ± 9,4* 140% 6,45

АКФ-94 58,1 ±7,1* 130% 6,7 ± 1* 129% 25,8 ±2,7* 105% 3,85

Гипоталамус

Контроль 13,4 ± 2,4 72% 2,3 ± 0,8 82% 9,4 ± 1,6 93% 4,09

Пирацетам 22,4 ± 9,8 88% 3 ± 0,7 120% 9,8 ± 2,5 85% ЗД7

ПИР-87-б-О 79,1 ± 13* 132% 15,4 ± 2,7* 150% 90,4 ± 12* 231% 5,87

АКФ-94 64,2 ± 18* .118% 14,4 ± 2,3* 144% 61,3 ±6Д* 182% 4,26

Примечание: Данные рассчитаны в нг/мг ткани, а также выражены в % к исходному уровню содержания медиатора; * - достоверность отличия от контрольной группы крыс при р < 0,05 (п = 8). Вещества вводились в дозах: гтрацетам - 200 мг/кг/день; АКФ-94 - 10 мг/кг/день; ПИР-87-6-0 - 50 мг/кг/день.

Нормальные условия

Снижение внеклеточного уровня дофамина

Рис. 7. Примерная схема регуляции синтеза и высвобождения ДА, а также возможный механизм влияния АКФ-94, оригинального производного ВАК (объясвения в тексте)

вышение метаболизма ДА под действием изучаемых нами соединений. Видимо, производные аспарагиновой кислоты способны оказывать активирующее действие на биосинтез ДА посредством влияния на преси-наптические №<ГОА-рецепторы глутамата даже в условиях, когда повышено содержание внеклеточного уровня дофамина. В результате этого влияния в пресинаптических терминалях дофаминергических нейронов происходит накопление медиатора (рис. 7). Возможно, подобные процессы происходят в нервной системе при адаптации крыс к стресс-воздействию (К1уа1кш Е.А., 1995).

Увеличивая резервы катехоламинергической системы мозга, мы повышаем устойчивость животных к воздействию конфликтной ситуации (Серова Л.И., Козлова О.Н., 1996). Это подтверждается нашими экспериментами по определению более высокого уровня катехоламинов в мезолимбической системе мозга у высокоустойчивых животных.

На заключительном этапе работы мы изучили стресс-протекторные свойства соединений ПИР-87-6-0 и АКФ-94 на модели иммобили-зационного стресса. В ходе проведенных экспериментов было установлено наличие антистрессорной активности у изучаемых соединений при 2-часовой иммобилизации как при однократном, так и при субхроническом введении. Препарат сравнения пирацетам оказался более эффективным при однократном применении, тогда как 7-дневное его введение оказывало незначительное стресс-протекторное действие, реланиум, снижая тревожность животных, не влиял на параметры двигательной и исследова-

140 120 100 80 60 40 20 0

Гориз. актив».

Загладывания

Груминг

Порог вокализ.

□ Физ. р-р + стресс

□ Реланиум + стресс В АКФ-94 + стресс

¡3 Пирадетам + стресс □ ПИР-87-6-0 + стресс — Контроль

Рис. 8. Влияние 2- часовой иммобилизации на изменение поведенческих показателей в группах крыс;субхронически (7 дней) получавших различные фармакологические препараты; данные представлены в % к контролю (без стресса); * - достоверность отличий по сравнению с группой,получавшей физ. раствор (р < 0,05)

тельской активности. Изучаемые нами вещества, ПИР-87-6-0 и АКФ-94, увеличивая двигательную и исследовательскую активность у перенесших иммобилизационный стресс животных, снижали уровень тревожности (подобно реланиуму), что выражалось в уменьшении реакций груминга, повышении числа посещений центральной зоны и возрастании порога переносимости электроболевого раздражения (рис. 8).

Обращает на себя внимание, что более эффективное действие на сохранность психоэмоциональных параметров при стрессе оказывало субхроничесное введение изучаемых соединений.

В отдельной серии экпериментов было исследовано влияние изучаемых соединений на поведение крыс в ТЭИ. Показано, что у животных контрольной группы после перенесенного стресса значительно увеличивалось время решения задачи, тогда как поведение животных, получавших пирацетам, а также соединения АКФ-94 и ПИР-87-6-0, достоверно не отличалось от исходного уровня, что свидетельствует о сохранности способности подопытных животных к решению задачи в условиях аверсивной ситуации после однократного стрессирования. Транквилизатор реланиум оказался не эффективным на данной поведенческой модели.

Проведенная сравнительная оценка динамики основных параметров поведения животных позволила сделать вывод о близости спектра поведенческой активности подвергнутых фармакологической коррекции крыс с животными, устойчивыми и адаптированными к стрессу, что подтверждает наше предположение об активации под действием ВАК-ергических средств механизмов срочной и длительной адаптации и, как следствие, повышении уровня устойчивости к стрессу.

Таким образом, изучение эффективности новой группы ВАК-ергических средств на модели острого стресса при остром и субхроническом введении веществ показало наличие у них отчетливых стресс-протекторных свойств.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Считать целесообразным проведение фармакологической профилактики нарушений высших интегративных функций мозга при стрессе ноотропными препаратами.

2. Рекомендовать новые оригинальные соединения - аналоги возбуждающих аминокислот АКФ-94 и ПИР-87-6-0 - к дальнейшему углубленному доклиническому изучению с целью последующего применения в качестве корригирующих препаратов для профилактики и лечения нарушений высших интегративных функций головного мозга при экстремальных воздействиях.

3. Продолжить поиск новых веществ в ряду аналогов возбуждающих аминокислот, сочетающих в себе ноотропную и антистрессор-ную активность.

выводы

1. В ходе проведенных экспериментов было установлено наличие стресс-протекторных свойств у изучаемых соединений: ПИР-87-6-0 (50 мг/кг) и АКФ-94 (10 мг/кг) при 2-часовом иммобилизационном стрессе как при однократном, так и при субхроническом (7 дней) введении веществ. Подобно пирацетаму (200 мг/кг), оригинальные соединения улучшали сохранность двигательной и исследовательской активности животных, а при субхроническом введении даже превосходили по выраженности эффект эталонного ноотропного препарата.

2. Производные аспарагиновой кислоты ПИР-87-б-О и АКФ-94 при субхроническом внутрибрюшинном введении оказывают активирующее влияние на систему медиагорных катехоламинов мозга крыс. При этом отмечаемые изменения метаболизма медиаторов сходны с таковыми, наблюдаемыми при изучении влияния предварительной адаптации на содержание катехоламинов в различных структурах мозга животных.

3. С помощью метода вкутримозгового микродиализа in vivo было установлено, что соединения ПИР-87-б-О и АКФ-94 при однократном системном введении не влияли на базальный уровень дофамина (ДА) в гипоталамусе. В то же время, при иммобилизации крыс, получавших производные ВАК, установлен достоверно больший прирост ДА по сравнению с контрольной группой. Это дает основания утверждать, что изучаемые вещества оказывают модулирующее действие на систему медиаторных катехоламинов, выявляемое в условиях повышенного эмоционального напряжения.

4. Дилигиевая соль N-ацетил-Ь-аспарагиновой кислоты (АКФ-94) при локальном введении в концентрации 1 мМ оказывает гетерорецеп-торное влияние на высвобождение дофамина в стриатуме крыс in vivo. Этот эффект реализуется через NMDA-рецепторы ВАК.

5. Скорость биосинтеза катехоламинов в нервной ткани in vivo оценивается по изменению внеклеточного содержания Ь-3,4-дигидро-ксифенилалакина (ДОФА) во время локальной перфузии через диализатор ингибитора декарбоксилазы L-ароматических аминокислот 3-гидро-ксибензилгидразина (NSD-1015). С использованием этого метода, было установлено, что АКФ-94 при локальном введении в концентрации 1 мМ вызывает увеличение синтетической активности дофаминерги-ческой системы в стриатуме.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

X. Регуляторная роль системы возбуждающих аминокислот в неиромедиа-торпом ответе гипоталамуса на стресс // Доклады Академии ноук. 1996. Т. 351. N: 4. С.567-570 (соавт. Е.И. Чазов, В.И. Петров, И.А. Григорьев, Д.В. Зорецкий, A.A. Озеров, Е.И. Калеиикова, А.И. Кузьмин, О.С. Медведев).

2. Новые аналоги возбуждающих аминокислот, эффективные при стрессе // Новые материалы и методы в медицине: Сб. Волгоград: BMA, 1995. Т. 51. Вып. 2. С. 3-5 (соавт. В.И. Петров).

3. Фармакологическая коррекция состояний дезадаптации у животных различных типологических групп производными медиаторных аминокислот, обладающими ноотропнои активностью // Тоз. докл. I Междунор. медико-биологической коиф. "Морфофувкдиоиальные механизмы адаптации и коррекции патологических нарушений". Кишинев, 1995. С. 43 (соавт. В.И. Петров, И.А. Григорьев, В.Л. Аджиенко).

4. Изучение защитных эффектов адаптации животных на модели острого иммобнлизациопиого стресса // Тез. докл. I конференции молодых физиологов и биохимиков России. С.-Пб., 1995. С. 53 (соавт. И.А. Григорьев).

5. Изменение внеклеточного уровня дофамина и его метаболитов в латеральном гипоталамусе при стрессе: микродиализное исследование // Ibid. С. 167 (соавт. И.А. Григорьев, Д.В. Зарецкин).

6. Оценка стресс-протекторного действия новых аналогов медиаторных аминокислот, обладающих ноотропной активностью // Тез. докл. I съезда Российского научного общества фармакологов "Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств". Волгоград, 1995. С. 123 (соавт. В.И. Петров, И.А. Григорьев, В.Л. Аджиенко).

7. Исследование нейромеднаторных механизмов действия новых аналогов возбуждающих аминокислот при остром стрессе // Ibid. С. 329 (соавт. В.И. Петров, О.С. Медведев, Д.В. Зарецкнй, И.А. Григорьев, А.И. Кузьмин, Е.И. Калеиикова).

8. Дофаминергическая система гипоталамуса как возможная мишень анти-стрессорного действия производных возбуждающих аминокислот // Тоз. докл. Всерос. науч. конф. "Современные аспекты артериальных гипертензий". С.-Пб., 1995. С. 93 (соавт. В.И. Петров, О.С. Медведев, И.А. Григорьев, А.И. Кузьмин, Е.И. Калеиикова, Д.В. Зарецкий).

9. Изучение уровня катехоламшюв в мозге крыс с различной степенью устойчивости к эмоциональному стрессу II Экспериментальная биология и медицина: Сб. Волгоград, 1995. С. 7-8 (соавт. И.А. Григорьев, В.Л. Аджиенко, А.Г. Воробьев).

10. Изучение влияния предварительной адаптации на сохранность психофизиологических реакций животных в условиях эмоционально-болевого стресса // Ibid. С. 14-17.

11. Antiaimicstic activity of phosphorylated ethers of excitatory анпно-acids // Abstr. of Fourth International Nice/Springfield Symposium on "Advances in Alzheimer Therapy".- Nice, France, 1996, p.166 (co-authors V.I. Petrov, A.A. Ozerov, I.A. Grigoriev, A.V. Sabanov).

12. Изучение влияния фосфорилироваииого производного аспарагиыовой кислоты на гемодинамические реакции при стрессе // Тез. докл. Ш Рос. нац. конгресса "Человек и лекарство". Москва, 1996. С.48 (соавт. В.И. Петров. И.А. Григорьев, Д.В. Зарецкий).

13. Дофамипергический компонент в механизме действия фосфорилиро-занного производного аспарагиаовой кислоты // Ibid. С. 48 (соавт. В.И. Петров, И.А. Григорьев, А.Г. Воробьев).

14. Влияние производных возбуждающих аминокислот на стресс-индуци-роваиные изменения поведения и кровообращения Ц Тез. докл. Междунар. науч. конф. студ. и пев. "Ломоносов-96". Москва: Изд-во Моск. ун-та, МГУ, 1996. С.54.

15. Effect of dilithium N-acetyl-L-aspartate on stress-induced dopamine release in hypothalamus // Abstr. of XXtli C.I.N.P. Congress. Melbourne, Australia, 1996, p.10-4 (co-authors V.I. Petrov, I.A. Grigoriev, D.V. Zaretsky).

16. Receptor mechanism of psychotropic action of -lipophylic excitatory amino acid derivatives // Abstr.of XlVth International symposium on medical chemistry. Maastricht, The Netherlands, 1996, p.6-22 (co-authors V.I. Petrov, I.A. Grigoriev,

A.A. Ozerov).

IT. Новые лигавды ВАК-рецепторов: психофармакология и нейрохимический механизм действия // Вестник Волгоградской медицинской академии. 1996. Т. 52. Вып. 2. С. 28-33 (соавт. В.И. Петров, И.А. Григорьев, B.JI. Аджиен-ко, А.Г. Воробьев, А.А. Озеров, А.В. Яиицкая).

18. Изучение нейрохимических изменений в гипоталамической области у адаптированных к стрессу животных // Экспериментальная биология и медицина: Сб. Волгоград, 1996. С. 8-9 (соавт. И.А. Григорьев, Д.В. Зарецкий).

19. Профилактическая терапия эмоционального стресса Ц Ibid. С. 25-27 (соавт. Й.А. Григорьев, Д.В. Зарецкий).

20. The influence of dilithium N-acetyl-L-aspartic acid on catecholamine turnover in rat brain // Abstr. of International symposium "Amino Acids and Derivatives". Grodno, Belarus, 1996, p.40 (co-authors V.I. Petrov, I.A. Grigoriev, V.L. Adjienko, A.G. Vorobjev, D.G. Kovalev, V.J. Iljin).

21. The receptor mechanism of nootropic activity of new excitatory amino acid analoque // Ibid. P. 83 (co-authors V.I. Petrov, I.A. Grigoriev, D.V. Zaretsky).

22. Центральные нейромедиаториые механизмы адаптации // Сб. ст. науч. конф. "Механизмы адаптации организма". Томск, 1996. С. 33-34 (соавт.

B.И. Петров, И.А. Григорьев).

23. Медиаторвый механизм центрального действия нового производного аспарагиновой кислоты, обладающего ноотропной и антидецрессивной активностью // Тез. докл. Международной конференции по клинической фармаколо-

гии. Москва, 1997. С, 20 (соавт. И И. Петров, И.А. Григорьев, Д.В. Зарецкий, Е.И. Каленикова).

24. Altered in vivo catechtjanmio release in the hypothalamic paraventricular nucleus of the stress-adapted rats // Abstr. of Joint meeting of Sociedad Espanola de ciencias fisiologicas and The American physiological society.- Malaga, Spain, 1997, p.57 (co-authors V.I. Petrov, I.A. Grigoriev).

25. Central mechanisms of stress-protective activity of derivatives of excitory aininoacids // Abstr. of 14th National meeting of the Brain research association.-Liverpool, UK, 1997, p.84 (co-authors V.I. Petrov, I.A. Grigoriev).

26. Previous adaptive stress increase in vivo biogenic amine response to acute immobilization stress // Abstr. of 3rd International conference of the society of neu-roscientists of Africa.- Cape Town, South Africa, 1997, p.37 (co-authors V.I. Petrov, I.A. Grigoriev).

27. Изучение влияния дилитиевой соли М-ацетил-Ь-аспартата, нового аналога возбуждающих аминокислот на биосинтез дофамина в стриатуме крыс in vivo // Tea. докл. IV Рос, нац. конгресса "Человек и лекарство". Москва, 1997. С. 62 (соавт. В.И. Петров, И.А. Григорьев).

28. Особенности поведения крыс с различной генетической устойчивостью к стрессу // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1997. В печати (соавт. В.И. Петров, И.А. Григорьев, Д.В. Зарецкий).

29. Влияние адаптации на катехоламииергическую систему мозга и стресс-реактивность сердечно-сосудистой системы у крыс // Физиол. журн. им. И.М.Се-чейова. 1997. В печати (соавт. В.И. Петров, И.А. Григорьев, Д.В. Зарецкий).