Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологические свойства извлечений из надземной части живокости высокой

На правах рукописи

НАГОРНЯК Юлия Геннадьевна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИЗВЛЕЧЕНИЙ ИЗ НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ЖИВОКОСТИ ВЫСОКОЙ (экспериментальное исследование)

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск-2007

003163395

Работа выполнена в ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН и ГОУ ВПО Томском военно-медицинском институте

Научный руководитель:

доктор биологических наук Поветьева Татьяна Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, Зуева Елена Петровна

профессор

доктор биологических наук Новожеева Татьяна Петровна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 2008 года в_часов на заседании

диссертационного совета^ 0Й1. 031 01 при ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Автореферат разослан >> ^в^аРг^^Л-2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук — Амосова Е Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В последние годы проводятся активные исследования по поиску новых препаратов на основе лекарственного растительного сырья К настоящему времени накоплен значительный объем знаний по химическому составу и фармакологическим свойствам лекарственных растений, что позволяет по-новому взглянуть на потенциальные возможности их применения в медицинской практике [Авдеева Е В и др., 2007] Преимуществом средств растительного происхождения является их малая токсичность, широкий спектр фармакологической активности и возможность длительного назначения без существенных побочных явлений [Крылов Г.В. и др , 2000, Соколов С,Я, 2000]. Фитопрепараты наиболее востребованы в профилактике различных заболеваний, могут использоваться в качестве поддерживающей терапии между курсами основного лечения. В большинстве случаев оправдано применение комплексных растительных средств наряду с синтетическими для снижения токсичности последних, усиления эффективности основного лечения и коррекции нарушенных функций организма [Авдеева Е В и др , 2007; Пашинский В Г., 2007]

В связи с этим, поиск и изучение лекарственных растений с целью создания на их основе безвредных и эффективных препаратов, весьма актуальны. Наибольший интерес для научной и практической медицины представляют лекарственные средства, содержащие алкалоиды, поскольку они занимают значительное место в системе управления физиологическими процессами, протекающими в организме человека, и играют ведущую роль в лечении различных заболеваний [Соколов С.Я, 2000] К подобным растениям относятся представители семейства лютиковых (Ranunculaceae) - живокости (род Delphinium), которые находят широкое применение в народной медицине Живокость высокая используется народами Сибири в качестве обезболивающего [Астахов В Г, 1977], противовоспалительного [Крылов Г В , 1972, Минаева В Г., 1991], жаропонижающего [Новосельцева Н П, 1968] и антимикробного [Мазнёв Н И, 2005] средства. Кроме того, ее применяют для лечения рассеянного склероза, заболеваний желудочно-кишечного тракта, мочеполовых органов, печени, при судорогах, испуге, конвульсиях [Зимин В.М, 1992; Минаева В Г, 1991] В научной литературе приво-4 дятся данные о курареподобных, ганглиоблокирующих и спазмолитических свойствах препаратов живокости высокой [Садритдинов Ф С и др , 1980; Кур-кин В А., 2004]

Большая сырьевая база, доступность сырья и широкий спектр фармакотера-певтического действия, согласно данным народной медицины, обосновывает целесообразность выбора живокости высокой в качестве перспективного объекта изучения

Цель исследования

Целью настоящей работы явилось изучение спектра фармакотерапевтаческо-го действия извлечений из надземной части живокости высокой

Задачи исследования

1 Изучить обезболивающее действие извлечений из надземной части живокости высокой

2 Провести сравнительную оценку противовоспалительной активности извлечений из надземной части живокости высокой и нестероидных противовоспалительных препаратов, их действие на показатели системы крови на разных моделях воспаления

3 Изучить влияние извлечений из надземной части живокости высокой на процесс репаративной регенеращш

4 Исследовать жаропонижающую активность извлечений из надземной части живокости высокой

5 Изучить антигипоксические и антимикробные свойства извлечений из надземной части живокости высокой.

6 Исследовать стресспротективное действие извлечений из надземной части живокости высокой на соматические (при различных патологических состояниях) и поведенческие реакции

Научная новизна результатов

Впервые экспериментально показано, что извлечения из надземной части живокости высокой обладают выраженной анальгетической активностью Обезболивающее действие суммы алкалоидов растения не уступало по эффективности нестероидным противовоспалительным препаратам (метамизол натрий, дик-лофенак-натрий)

Выявлено, что извлечения из надземной части живокости высокой проявляют противовоспалительные, жаропонижающие свойства Настойка обладает антимикробной активностью

Установлено, что извлечения из надземной части живокости высокой оказывают ранозаживляющее действие По эффективности экстракт и сумма алкалоидов растения превосходили препарат сравнения - сок алоэ

Выявлено, что извлечения из надземной части живокости высокой обладают широким спектром фармакологической активности нормализуют показатели системы крови на фоне воспаления, проявляют стресспротективное, антигипок-сическое, умеренное гастрозащитное действие

Научно-практическая ценность работы

Результаты экспериментальных исследований могут служить основой для разработки лекарственных препаратов из надземной части живокости высокой в качестве ранозаживлягощих средств, а также для лечения заболеваний, сопровождающихся болевым синдромом Из растительных средств живокости высокой наиболее перспективной дня дальнейшего экспериментального изучения и клинического испытания является настойка, поскольку она проявляет значительную широту и эффективность фармакологического действия

Ч^сть данных диссертационной работы оформлены заявкой на изобретение №206124332/15 «Средство, обладающее антигипоксическим действием», по которой получено решение о выдаче патента от 14 ноября 2007 года

Апробация работы

Основные положения и результаты работы доложены на итоговых научно-практических конференциях Томского военно-медицинского института (Томск, 2005, 2006), на конференции НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2005), на научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л Н. Березнеговской (Томск, 2006), на 1-м Международном съезде фитотерапевтов (Москва, 2006).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 работ, в том числе 1 - в центральном журнале, рекомендованном "Перечнем " ВАК Минобрнауки

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 218 источников, из них 51 - на иностранном языке Диссертация иллюстрирована 32 таблицами и 7 рисунками

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 466 беспородных мышах обоего пола с исходной массой 25-35 г, 115 беспородных крысах-самцах с исходной массой 170-250 г Животные первой категории получены из лаборатории экспериментального биомоделирования ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (сертификат имеется) Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей

(Страсбург, 1986) Эвтаназию производили, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных», утверждённые Министерством Здравоохранения России, (в зависимости от условий опыта) путем дислокации шейного позвонка либо декапитацией

Объектами исследования являлись водно-спиртовые извлечения из надземной (трава) части живокости высокой, а также фракции алкалоидов и флавонои-дов растения Настойку готовили методом мацерации (настаивания), в качестве экстрагента использовали 40 %-ный этанол (ГОСТ 5962-67). Жидкий экстракт получали на 40 %-ном этаноле методом реперколяции в батарее из 5 перколято-ров при соотношении сырья и экстрагента - 1 2. Алкалоидную фракцию выделяли из надземной части живокости высокой в виде свободных оснований экстракцией хлороформом, очистку извлечений и дальнейший анализ проводили по методике Бешитаишвили JI.B с соавт (1981) Была получена этилацетатная фракция растения, хроматографический анализ которой показал, что она представлена преимущественно подифенодьными соединениями- флавоноидами, фе-нольными кислотами (хлорогеновой и кофейной), гидроксибензойными кислотами (n-гидроксибензойной и галловой) и др [Пономарёв В Д, 1976; Грин-кевич Н И., 1988]. Для сравнительной оценки фармакологической активности были выделены водная и спиртовая фракции флавоноидов живокости высокой Надземная часть изучаемого растения была собрана в окрестностях г Томска (вдали от автомобильных, железнодорожных магистралей и промышленных предприятий) в конце июля 2004 г, затем её подвергали сушке в хорошо проветриваемом помещении. Влажность высушенного сырья определяли по методике, описанной в Государственной фармакопее XI издания (1989) Содержание фракции алкалоидов составляет 0,23 %, фракции флавоноидов - 1,8 % в пересчёте на воздушно-сухое сырьё. Для идентификации алкалоидов использовали отдельно выделенные дитерпеновые алкалоиды: напеллнн, N-окись 12-эпинапеллин, меза-конитин, гипаконитин и зонгорин («вещества-свидетели»), полученные в институте органической химии ВСФ СО РАН г. Иркутск Было установлено, что надземная часть живокости высокой из представленных алкалоидов содержит на-пеллин и зонгорин Получение фракции алкалоидов и флавоноидов живокости высокой, проведение фотохимического анализа осуществляли совместно с доцентом кафедры фармации ГОУ ВПО Томского военно-медицинского института, кандидатом фармацевтических наук Андреевой Т И

Извлечения из надземной части живокости высокой вводили через зонд в желудок профилактическим и/или лечебным курсом. Контрольная группа животных получала эквивалентный объём растворителя в аналогичном режиме.

При изучении фармакологической активности извлечений из живокости высокой использовали препараты сравнения- анальгин (метамизол натрия) (Analgi-num) (фирма изготовитель ОАО ICN), вводили внутрижелудочно в дозе 250 мг/кг, ацетилсалициловую кислоту (Acidum acetylsahcySicum) (фирма изготовитель ОАО ICN), вводили внутрижелудочно в дозе 250 мг/кг; диклонат П (диклофенак-натрий) (Diclofenac sodium) (фирма изготовитель АО «Плива»), вводили внутрижелудочно в дозе 10 мг/кг, индометацин (Indomethacm phar-machim) (фирма изготовитель ХФК ОАО «Акрихин»), вводили внутрижелудоч-

но через зонд мышам в дозе 10 мг/кг. крысам - 6 мг'кг. натрия оксибутират (Na-trii oxybutyras) (фирма изготовитель Государственное предприятие «KAL-CEKS»), вводили внутрижелудочно в дозе 100 мг/кг, найз (нимесулид) (Nimesulide) (фирма изготовитель «Dr Redd/s Laboratories Ltd»), вводили внутрижелудочно в дозе 10 мг/кг, а - Токоферола ацетат (Tocopheroli acetas) (фирма изготовитель ЗАО «Фармаген»), вводили внутрижелудочно в дозе 100 мг/кг, экстракт родиолы жидкий (Extractum Rhodiolae iluidum) (фирма изготовитель ООО НПП «Камелия»), вводили внутрижелудочно в дозе 0,5 мл/кг

Для изучения обезболивающего действия индуцировали специфическую болевую реакцию - «корчи» путём внутрибрюшинного введения мышам 0,75 %-ного раствора уксусной кислоты (ГОСТ 61-75) Анальгетический эффект оценивали по уменьшению количества «корчей» [Руководство, , 2000]. Термическое болевое раздражение [Машковский М Д и др, 1990] вызывали, помещая мышей на горячую (64 °С) пластину, анальгетическое действие оценивали по длительности спокойного пребывания на ней животных (до начала облизывания лап) О выраженности болевой реакции при механическом болевом раздражении на модели иммунного воспаления судили по числу вокализаций при пассивном пятикратном сгибании пораженного артритом голеностопного сустава крыс и индексу вокализации [Давыдов Т.В и др, 1997].

Противовоспалительные свойства извлечений из надземной части живокости высокой исследовали согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000) Острую воспалительную реакцию у животных вызывали субплантарным введением в заднюю левую лапу мышей 1 %-ного раствора каррагенина - 0,05 мл/кг [Winter С А, 1962], острую экссудативную реакцию (перитонит) вызывали внутрибрюшин-ным введением 1 %-ного раствора уксусной кислоты (0,1 мл на 10 г массы животного) Влияние растительных средств из живокости высокой на пролифера-тивную фазу воспаления изучали на модели «ватной гранулёмы» [Тринус Ф.П. и др., 1987, Maeir R. et al, 1950]. Стерильный ватный тампон массой 13 мг имплантировали с помощью иглы для взятия крови (А 1-20-1,17 и 25) крысам под кожу спины между лопатками Иммунное воспаление вызывали полным адъю-вантом Фрейнда (фирма изготовитель ОАО ICN) Флогоген вводили крысам под плантарный апоневроз задней левой лапы однократно в дозе 0,1 мл/кг [Freund I, 1956]

Ранозаживляющую активность фитопрепаратов оценивали на модели «лоскутной раны» [Попова JIН, 1942] На депилированном участке спины у мышей под лёгким эфирным наркозом вырезали лоскут кожи размером 10x10 мм. Для моделирования более длительного заживления струп с экспериментальной раны регулярно (через сутки) снимали

Жаропонижающие свойства извлечений из надземной части живокости высокой оценивали по их способности оказывать гипотермический эффект у крыс ча фоне лихорадки, вызванной подкожным введением суспензии пекарских дрожжей Изучаемые препараты применяли внутрижелудочно, однократно через 17 часов после инъекции пирогена Жаропонижающий эффект оценивали по уменьшению гипертермии в течение 6 часов каждый час после введения препа-

ратов по сравнению с контрольными животными, которые получали растворитель [Руководство , 2000]

Изучение антимикробных свойств осуществляли по стандартным методикам [Райе Э , 1978] совместно с доцентом кафедры цитологии и генетики Томского Государственного университета, кандидатом биологических наук Лаврентьевой JI В. В качестве тест-объектов были использованы музейные штаммы Escherichia coli (К12АТСС 25922) и Staphylococcus aureus (АТСС 25923), полученные из ГИСК им JI. А Тарасевича(г Москва)

Острую тканевую гипоксию у мышей моделировали путём внутрибрюшин-ного введения нитропруссида натрия в дозе 25 мг/кг [Караев А Я. и др, 1991] Исследуемые препараты применяли внутрижелудочно через зонд в течение 5 дней, последний раз - за 1 час до инъекции гипоксанта Фиксировали продолжительность жизни животных, показатели массы селезенки, тимуса и надпочечников, количество геморрагий на слизистой оболочке желудка

Влияние извлечений из живокости высокой на состояние слизистой оболочки желудка исследовали на различных моделях воспаления Язвы нейрогенного происхождения получали путём стресс-подвешивания мышей за шейную складку на 22 часа по методу Ю И. Добрякова (1978) В каждом эксперименте определяли количество деструкций (точечные или множественные геморрагии), приходящиеся на одно животное в группе

Ориентировочно-исследовательское поведение животных оценивали в «открытом поле» [Балынина Е С , Тимофеевская JI А, 1978] Эмоциональную активность изучали по методу I Brady, W Nauta (1953) с модификацией для мышей

Влияние на течение острого стресса извлечений из живокости высокой исследовали по изменению показателей в поведенческой и соматической сферах у мышей через 15 минут после 22-часового подвешивания за шейную складку. Выраженность стресса рассчитывали в баллах по методу Ю.И Добрякова (1978).

Изучение показателей периферической крови осуществляли стандартными гематологическими методами (Меньшикова ВВ., 1987, ГольдбергЕД.и др, 1992].

В сыворотке крови определяли содержание общего белка - биуретовым, се-ромукоидов - турбидиметрическим методами, активность аланин-амино-трансферазы (АлАТ) по методу Райтмана-Френкеля [Колб В Г, Камышников В С., 1976] Данное исследование осуществляли совместно со старшим научным сотрудником лаборатории токсикологии ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, кандидатом биологических наук Ветошкиной Т.В.

Морфологические исследования проводили стандартными гистологическими методами [Саркисов Д С, 1996] совместно с врачом-цитологом ГОУ ВПО Томского военно-медицинского института, кандидатом медицинских наук Росляковой Е.П.

Статистическую обработку полученных результатов проводили путем расчета средней (X) и средней квадратичной ошибки (т) О достоверности различий судили, используя параметрический (критерий Стьюдента) и непараметрический (критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) методы Для сравнения результа-

тов экспериментов, где показатели выражались в долях, достоверность определяли с помощью метода углового преобразования Фишера. Значимость различий считали достоверной при Pt, Pu, Рср < 0,05 [Гублер Е В., 1978]

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение острой токсичности показало, что LD50 для мышей настойки травы живокости высокой составляет 26,4 мл/кг, экстракта - 28,2 мл/кг, 40 %-ного этилового спирта - 24,5 мл/кг

Растительные средства из живокости высокой проявили выраженное аналь-гетическое действие во всех исследуемых дозах на модели химического болевого раздражения, индуцированного введением уксусной кислоты Однократное применение фитопрепаратов на 40-77 % уменьшало количество «корчей» относительно контрольной группы Максимальный эффект наблюдался у животных, получавших фракцию алкалоидов в дозе 0,1 мг/кг Под влиянием экстракта в дозе 0,25 мл/кг и суммы алкалоидов во всех изученных дозах увеличивалось латентное время болевой реакции в 2,4-3,5 раз при сопоставлении с контролем Назначение препарата сравнения метамизола натрия на 87 % сокращало количество корчей у мышей, удлиняя латентный период болевой реакции в 3 раза При курсовом введении растительные средства на 28-76% сокращали количество «корчей», при этом наибольший эффект оказала водная фракция флавоноидов в дозе 25 мл/кг Латентный период болевой реакции увеличивался под влиянием суммы алкалоидов в широком диапазоне доз в 1,6-2,3 раза, при введении экстракта в дозе 1,0 мл/кг - в 1,5 раза относительно контроля Водная фракция флавоноидов в 2 раза повышала аналогичный показатель Препарат сравнения мета-мизол натрий при курсовом назначении на 46-64 % сокращал число «корчей», удлиняя латентный период болевой реакции в 1,6-1,8 раз (табл 1).

На модели уксусного перитонита растительные средства проявили антиэкс-судативный эффект Так, однократное применение суммы алкалоидов в дозе 0,1 мг/кг снижало объем асцитной жидкости в брюшной полости мышей на 54 % относительно контроля Введение настойки в дозе 5,0 мл/кг и экстракта в дозе 0,25 мл/кг уменьшало экссудацию на 24 % и 42 % соответственно При курсовом назначении фитопрепараты сокращали объём экссудата на 20-48 % Под действием метамизола натрия данный показатель снижался на 65 % при однократном, на 27-59 % - при курсовом применении (табл. 1)

Сравнительный анализ весовых показателей внутренних органов животных свидетельствует об антистрессорном действии извлечений из живокости высокой При однократном введении фитопрепаратов отмечалось уменьшение гипертрофии надпочечников и количества деструкций на слизистой оболочке желудка мышей (снижение глубины стресса на 1-4 балла) Курсовое назначение растительных средств способствовало нормализации массы надпочечников и тимуса, сокращению изъязвлений слизистой оболочки желудка В группах, получавших настойку и экстракт растения, выраженность стресса на 1-6 баллов отличалась от контрольной, фракции алкалоидов и флавоноидов - на 3-9 и 4-6 баллов соответственно Однократное использование препарата сравнения мета-

Таблица 1

Влияние извлечений из живокости высокой (курсовое введение) на развитие уксусного перитонита и болевой реакции у беспородных мышей-самок (Х±т)

Латентный

Группа животных Доза мг/кг, Число живот- Объём асцитной период болевой Количество

млУга ных жидкости, мл реакции, мин корчей

Контроль — 8 0,74±0,07 2,4±0,2 52,6±3,1

0,6 5 0,50±0,04* 2,7±0,3 18,2±4,4*

Настойка 1,25 5 0,60±0,06 3,0±0,4 24,3±1,3*

2,5 5 0,40±0,12* 3,1±0,8 15,2±1,2*

0,25 5 0,48±0,06* 2,7±0,4 26,8±1,8*

Экстракт 0,5 5 0,48±0,04* 2,4±0,2 37,8±2,3*

1,0 5 0,40±0,03* 3,5±0,2"' 24,4±3,2*

Метамизол натрий 250 4 0,30±0,09* 3,8±0,9* 25,5±6,4*

Контроль - 10 0,66±0,06 1,9±0,3 47,2±3,1

0,05 6 0,34±0,07* 2,8±0,3* 19,2±2,4*

Сумма 0,5 6 0,40±0,07* 2,7±0,5 21,5±3,1*

алкалоидов 1,0 6 0,37±0,06* 3,1±0,4* 19,3±2,9*

1,5 6 0,34±0,06* 4,3±1,1* 14,5±2,1*

2,0 6 0,36±0,06* 4,3±0,6* 15,7±2,7*

Метамизол натрий 250 5 0,39±0,08* 3,4±0,9* 25,7±5,4*

Контроль — 10 0,60±0,03 3,3±0,4 50,4±5,1

Водная 12,5 5 0,36±0,13* 6,1 ±2,2 12,6±6,3*

фракция 25,0 5 0,32±0,Ю* 6,3±1,5* 12,0=Ь5,0*

флавоноидов 50,0 5 0,48±0,05* 7,3±2,1* 19,6±5,9*

Спиртовая 12,5 5 0,42±0,10* 6,9±2,7 17,2±6,4*

фракция 25,0 5 0,64±0,06 3,4±0,6 32,6±4,9*

флавоноидов 50,0 5 0,32±0,07* 5,5±2,0 16,4±6,8*

Метамизол натрий 250 5 0,44±0,07* 5,6±0,4* 18,0±4,2*

Примечание- * - различия достоверны в сравнении с контролем

при и < 0,05.

мизола натрия на 8 баллов уменьшало глубину стресса, курсовое назначение снижало данный показатель на 5 баллов

Известно, что болеутоляющее действие ненаркотических анальгетиков характеризуется небольшим изменением порога боли при исследовании на здоровой ткани, в то время как при болях воспалительного характера эти препараты

и

проявляют высокую анальгетическую активность [Комендантова М В , Шумилина 3 И, 1987] На фоне развития каррагенинового воспаления однократное введение экстракта живокости (0,25 мл/кг) способствовало увеличению латентного времени болевой реакции инъецированной лапы мышей в 1,4 раза Препарат сравнения индометацин сокращал время нахождения на «горячей пластине». Курсовое назначение суммы алкалоидов (0,05 мг/кг) в 2,5 раза увеличивало латентный период болевой реакции для здоровых конечностей Применение экстракта (0,25 мл/кг) в 1,5 раза повышало аналогичный показатель. Ацетилсалициловая кислота на данной модели воспаления не проявляла обезболивающее действие

Анальгетический эффект растительных средств живокости высокой при адьювантной болезни оценивали на 9-14-е сутки эксперимента по индексу вокализации. На 9-е сутки данный показатель в опытных группах в 2,8-4 раза был ниже аналогичного в контроле У крыс, получавших настойку, отсутствие болезненности при сгибании суставов было зафиксировано на 12-й день наблюдения, суммы алкалоидов - на 14-е сутки Препарат сравнения диклофенак-натрий снижал индекс вокализации на 9-е и 12-е сутки эксперимента в 5 и 4 раз соответственно Результаты проведённых исследований, а также имеющиеся литературные денные, позволяют предположить, что обезболивающее действие извлечений из живокости высокой, вероятно, обусловлено потенцированием центрального и периферического эффектов Среди периферических компонентов, участвующих в анальгезии, следует назвать противоотечное действие препаратов, а также устранение эффектов эндогенных альгогенов (гистамина, серотонина, простагландинов, кининов и др ) В отношении центральных механизмов нужно отметить, что дитерпеновые алкалоиды растения по химической структуре являются третичными аминами [Куркин В А, 2004], которые, согласно данным литературы, легко проникают через гематоэнцефалический барьер и, попадая в ЦНС, взаимодействуют с холинорецепторами [Харкевич Д А, 1989] Известно, что холинергические системы принимают участие в формировании чувства боли [Денисенко П.П, 1980].

Растительные средства из живокости высокой, а также препараты сравнения индометацин и ацетилсалициловая кислота ослабляли флогогенное действие каррагенина, однако статистически достоверных отличий от контроля не отмечалось, Введение фитопрепаратов осуществлялось в профилактическом режиме, возможно, более эффективно было бы применение данных средств в лечебном режиме, поскольку известно, что дитерпеновые алкалоиды проявляют выраженное противоотёчное действие на данной модели воспаления при введении через 1-2 часа после инъекции флогогена [Пушкарский С В, 2006].

Изучение весовых показателей органов «триады Се лье» свидетельствует о том, что на фоне развития каррагенинового воспаления проявлялись элементы стрессированности организма животных В группе контроля наблюдалось уменьшение массы селезёнки, гипертрофия надпочечников, появлялись деструктивные изменения слизистой оболочки желудка. Наиболее выраженный стресс-протективный эффект (разница в баллах относительно контроля — 6) проявили

экстракт и фракция алкалоидов живокости при однократном применении Под действием препарата сравнения индометацина глубина стресса сохранялась на уровне контрольных показателей Курсовое назначение растительных средств приводило к снижению интегративяого показателя стресса на 2-4 балла за счет нормализации параметров селезенки и тимуса до уровня янтактных мышей У животных, леченных препаратом сравнения ацетилсалициловой кислотой, глубина стресса на 2 балла превысила контрольный показатель.

Изучение антипролиферативного действия извлечений из живокости высокой показало, что введение экстракта (0,25 мл/кг) способствовало снижению воспалительного разрастания ткани на 19% по сравнению с контролем. Препарат сравнения индометацин не оказал достоверного воздействия на пролифератив-ную реакцию Под влиянием настойки (0,5 мл/кг), экстракта (0,12 мл/кг) и суммы алкалоидов (0,05 мг/кг) уменьшалась масса экссудата в очаге хронического воспаления в 1,4; 1,5 и 1,7 раза соответственно относительно контроля. Введение индометацина приводило к снижению экссудации в 1,9 раз.

В контрольной группе животных по сравнению с интактными на фоне развития гранулём наблюдалась инволюция тимуса, гипертрофия надпочечников, отмечались язвенные поражение слизистой оболочки желудка. Антистрессорный эффект проявила настойка растения в дозе 0,5 мл/кг (снижение глубины стресса на 2 балла) Под влиянием данного извлечения отмечалось увеличение массы тимуса относительно контроля и выраженная тенденция к снижению деструкций желудка У крыс, леченных индометацином, зафиксировано увеличение изъязвлений слизистой оболочки желудка и гиперплазия надпочечников, что приводило к усилению стрессорной реакции

Изучение показателей периферической крови на модели хронического про-лиферативного воспаления выявило у животных контрольной 1руппы повышение общего количества лейкоцитов по сравнению с интактными крысами. Применение практически всех извлечений из живокости высокой способствовало сохранению данного показателя на уровне фоновых значений Известно, что в неиммунных гранулёмах, образующихся вокруг инородных тел, преобладают механизмы ауторегуляции за счет биологически активных веществ, прежде всего, простагландинов, синтезируемых макрофагами гранулём, а также других производных арахидоновой кислоты (лейкотриенов, простациклинов, тромбок-сана) [Серов В В и др, 1995] Поэтому есть основание предполагать, что анти-пролиферативная активность извлечения обусловлена влиянием на синтез простагландинов и других эйкозаноидов. Это находит подтверждение в том, что растительные средства эффективно уменьшали экссудативный компонент воспалительной реакции на данной модели воспаления.

Сравнение противовоспалительной активности вытяжек из живокости высокой проводили также на модели адъювантного артрита, которая считается одной из наиболее адекватных моделей хронического иммунного воспаления [Сарати-ков А С , 1983] Под влиянием растительных средств наблюдалось достоверное уменьшение объёма инъецированной конечности на 1-14-е сутки, гиперемии -через 3 часа и на 5-14-е сутки Наиболее эффективными оказались настойка и экстракт живокости высокой Использование препарата сравнения диклофенак-

натрия приводило к угнетению отека воспаленной конечности, начиная с 9-го дня, отсутствие гиперемии отмечалось на 14-е сутку опыта (рис 1). К 14-м суткам эксперимента у крыс развилась вторичная иммуннологическая реакция в виде генерализованного полиартрита Применение суммы алкалоидов достоверно уменьшало прирост объёма неинъецированной конечности животных Диклофе-нак-натрий оказывал менее выраженное влияние на развитие данного процесса.

Хроническое иммунное воспаление вызывало изменения во внутренних органах крыс. Так, в группе контроля по сравнению с интактными животными отмечалось снижение массы селезёнки, образование деструкций на слизистой оболочке желудка Защитное действие на массу внутренних органов оказала настойка в дозе 0,25 мл/кг, снижая выраженность стресса на 3 балла Под влиянием данного извлечения масса надпочечников сохранялась на уровне фоновых животных, отсутствовали деструкции на слизистой желудка Введение препарата сравнения диклофенак-натрия способствовало уменьшению глубины стресса на 4 балла.

Развитие адыовантной болезни приводило к изменениям в лейкоцитарной формуле периферической крови животных Анализ гемограмм крыс контрольной группы выявил увеличение палочкоядерных и сегментоядерных форм ней-трофильных гранулоцитов, базофилов по сравнению с фоном Показатели периферической крови нормализовались в большей степени под влиянием настойки живокости (0,25 мл/кг)

Известно, что сопутствующим синдромом адъювантной болезни является паренхиматозный гепатит [Саратиков А.С , 1983] Анализ результатов биохимических исследований показал, что в сыворотке крови контрольных животных наблюдалось увеличение уровня серомукоидов, возрастала активность аланин-амино-трансферазы. Применение растительных средств живокости высокой препятствовало развитию у животных некоторых метаболических нарушений, вызванных флогогеном снижалась активность аланин-аминотрансферазы, под влиянием настойки и экстракта нормализовался уровень серомукоидов

Природные средства, очевидно, влияют на основные звенья патогенеза адъювантной болезни - стабилизируют мембраны лизосом, эритроцитов, нейтрофи-лов, уменьшают выделение протеолитических ферментов и медиаторов воспаления, устраняют дефект в обмене сульфгидрильных групп [Саратиков А С, 1983; Клебанов Б М, 1992] Поскольку в развитии адьювантного артрита лимфоциты, в частности, Т-клетки выполняют ключевую роль [Серов В В., 2001], то можно предположить, что в данном случае механизм положительного влияния извлечений из живокости высокой обусловлен их иммунномодулирующим эффектом, распространяющимся на основные звенья иммунногенеза. на феномен клеточной кооперации макрофагов с лимфоидными клетками, на популяцию Т-хелперов, Т-киллеров, а также продукцию медиаторов иммунного ответа, интерлейкин-1 и интерлейкин-2 [Сабирова Ф М, 2004]

50 т 40 30 20 10

контроль

настойка в дозе 0,5 мл/кг

экстракт в дозе 0,12 мл/кг

сумма алкалоидов в дозе 0,05 мг/кг

диклофенак-натрий в дозе 10 мг/кг

0

3 1 2 часа

б

контроль

настойка в дозе 0,5 мл/кг

-^-экстракт в дозе 0,12 мл/кг

-ж- сумма алкалоидов в дозе 0,05 мг/кг

—•—диклофенак-натрий в дозе 10 мг/кг

часа

Рис. 1. Влияние извлечений из живокости высокой на развитие отёка и

гиперемии конечности у крыс после введения адъюванта Фрейнда. По оси абсцисс - сроки наблюдения, сут.

По оси ординат - прирост отёка инъецированной конечности, % (а);

степень выраженности гиперемии, усл. ед. (б). * - различия достоверны в сравнении с контролем при П, и < 0,05.

Заключительная стадия как острого, так и хронического воспаления - репа-ративная [Саркисов А С , 1970,1987] Исследование показало, что растительные средства активировали регенераторные процессы в коже мышей, уменьшая сроки заживления ран, увеличивая количество животных с полной эпителизацией раневого дефекта и вызывая формирование более полноценных регенератов кожи. У мышей, получавших экстракт и фракцию алкалоидов живокости высокой, произошла полная эпителизация раневого повреждения к концу наблюдения. Препарат сравнения сок алоз оказывал менее выраженное действие на регенерацию - 80 % животных с полным заживлением ран (табл. 2)

Таблица 2

Влияние извлечений из живокости высокой на сроки заживления ран у беспородных мышей-самцов (Х±ю)

Группа животных Число животных Доза, мл/кг, мг/кг Количество животных с зажившими ранами, %

Сутки наблюдения

15-е 17-е 20-е

Контроль 10 - 0 0 10

Настойка 5 0,6 0 20* 40*

Экстракт 5 0,25 0 40* 100*

Водная фракция флавоноидов 5 25 0 0 20

Фракция алкалоидов 6 0,05 17 17 100*

Сок алоэ 5 10 0 20* 80*

Примечание. * - различия достоверны в сравнении с контролем

при Рф< 0,05.

Результаты гистологического анализа раневого дефекта свидетельствуют о том, что под влиянием извлечений из живокости отмечалось уменьшение воспалительной реакции дермы, более раннее созревание грануляционной ткани, упорядочивание ее структуры по сравнению с контролем Кроме того, выраженность патоморфологических изменений эпителия в виде акантоза, галер- и дис-кератоза в группах, получавших фитопрепараты, была значительно ниже, чем в контроле. Вероятно, ранозаживляющие свойства живокости высокой следует объяснить наличием алкалоидов, поскольку они проявили максимальную эффективность и, возможно, определяют действие других извлечений. Вместе с тем, растение характеризуется большим удельным содержанием макро- и микроэлементов, которые участвуют во многих биохимических циклах организма: активировании ферментных систем, взаимодействии с витаминами, нуклеиновыми кислотами и другими соединениями [Бальхаев М В , 2004, Убашев И О и др, 1990] Можно предположить, что ранозаживляющие свойства извлечений из жи-

вокости высокой связаны с активацией процессов синтеза нуклеиновых кислот и белков, лежащих в основе репзративной регенерации повреждённой ткани.

Установлена способность извлечений из живокости высокой понижать температуру тела у животных с гипертермией на фоне дрожжевой лихорадки. В ходе пирогенной реакции настойка и сумма алкалоидов проявили сопоставимый эффект, снижая температуру тела животных на 0,3-0,8 °С и 0,4-0,8 °С соответственно. Под влиянием настойки растения нормализация температуры тела крыс зафиксирована через 19 часов, а под влиянием суммы алкалоидов - через 21 час с момента введения пирогена. Препарат сравнения нимесулид уменьшал гипертермию на 0,4-1,1 °С, однако под его действием отмечалось более резкое падение температуры тела, чем при введении природных средств (рис. 2). По мнению некоторых исследователей, алкалоиды группы аконитов оказывают жаропонижающий эффект посредством возбуждения центрального парасимпатического тормозящего аппарата [Алефиров А.Н., 2002].

Рис. 2. Влияние извлечений из живокости высокой на изменение ректальной температуры у крыс в ходе пирогенной реакции. По оси абсцисс - сроки наблюдения, в часах.

По оси ординат - изменение температуры тела от исходной (А X, °С). * - различия достоверны в сравнении с контролем при И, и < 0,05.

-ш- настойка в дозе 0,6 мл/кг

экстракт в дозе 0,25 мл/кг

-Ж- сумма алкалоидов в дозе 0,05 мг/кг

—нимесулид в дозе 10 мл/кг

- контроль

Антимикробную активность живокости высокой оценивали по способности подавлять рост штаммов Е coli и St aureus, а также культуры микроорганизмов, выделенных с кожи рук и слизистой оболочки ротовой полости. Под влиянием свежих листьев растения наблюдалось достоверное угнетение роста St. aureus Настойка проявляла одинаковую активность в отношении Е. coli и St aureus, зоны роста которых в 3,3 раза меньше, чем в контроле (40 % спирт этиловый) Кроме того, под действием настойки наблюдалось угнетение роста микроорганизмов, выделенных с кожи рук и слизистой оболочки ротовой полости

Известно, что гипоксия является важнейшим патогенетическим фактором, играющим ведущую роль в развитии многих заболеваний [Новицкий В В, Гольдберг Е Д., 2001] Моделирование острой тканевой гипоксии показало, что настойка в дозе 0,6 мл/кг и экстракт в дозах 0,12 и 0,25 мл/кг проявили сопоставимый эффект, в 2 раза увеличивая продолжительность жизни животных относительно контрольной группы. Под влиянием настойка в дозе 2,5 мл/кг данный показатель возрастал в 2,5 раза. Введение фракции алкалоидов в дозах 0,05 и 1,5 мг/кг отодвигало время гибели мышей в 1,6 и 1,7 раз соответственно, водной и спиртовой фракции флавоноидов - в 1,2 раза по сравнению с контролем Назначение препаратов сравнения а - токоферола ацетата и натрия оксибутирата в 2,3 и 1,5 раза повышало продолжительность жизни животных (табл 3)

Таблица 3

Влияние извлечений из живокости высокой на выживаемость беспородных мышей-самцов в условиях острой тканевой гипоксии (Х±т)

Группа животных Доза мг/кг, мл/кг Число животных Продолжительность жизни, мин

Контроль , - 10 9,0±1,2

Настойка 0,6 6 18,9±3,0*

2,5 6 22,1±1,8*

Экстракт 0,12 6 17,6±1,8*

0,25 6 17,0±1,6*

Сумма алкалоидов 0,05 6 14,8±0,6*

1,5 6 15,6±1,0*

а - токоферола ацетат 100 5 21,1±3,9*

Контроль - 5 9,2±0,4

Водная фракция флавоноидов 25 5 10,8±0,5*

Спиртовая фракция флавоноидов 25 5 11,0±0*

Натрия оксибутират 100 5 13,4±1,0*

Примечание * - различия достоверны в сравнении с контролем при Pt, и < 0,05.

Острая ттшоксическая травма приводила к соответствующим соматическим изменениям В контрольной группе мышей наблюдалась инволюция селезенки и тимуса, гипертрофия надпочечников, на слизистой оболочке желудка появлялись деструкции Наиболее выраженный защитный эффект проявили флавоноэдные фракции живокости, уменьшая глубину стресса на 7-8 баллов относительно контроля за счет сохранения весовых показателей селезёнки и надпочечников в пределах нормы Под влиянием настойки в дозе 2,5 мл/кг и экстракта в дозе 0,25 мл/кг характеристики внутренних органов были близки к фоновым данным, что отразилось на интегратнвном показателе стрессированности (разница в баллах в сравнении с контролем - 5). Введение суммы алкалоидов снижало выраженность стресса на 3-4 балла за счёт нормализации массы надпочечников. Сопоставимый антистрессорный эффект проявил препарат сравнения а - токоферола ацетат (отличие от контроля составило 3 балла). Натрия оксибутират уменьшал глубину стресса на 9 баллов Известно, что нитропруссид натрия, использованный в качестве гштоксанта, является донатором оксида азота (N0), молекула которого имеет неспаренный электрон, поэтому относится к свободнорадикальньм веществам и способна индуцировать тканевую гипоксию [Покровский В И и др, 2005] В результате окислительной модификации биополимеров (белков, нуклеиновых кислот и др) происходит нарушение тканевого дыхания во внутренней мембране митохондрий и процессов гидроксилирования в микросомах [Лукьянова Л Д, 1989] Все извлечения из живокости высокой увеличивали продолжительность жизни животных и снижали токсические проявления тканевой гипоксии Не исключено, что это обусловлено влиянием фитопрепаратов на метаболизм оксида азота,

В настоящее время доказана роль стресса как главного или вспомогательного фактора язвенных поражений желудка [Меерсон Ф 3,1981] Выраженное ульце-рогенное действие на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта [Яси-новский М А. и др., 1975] оказывает также воспалительная реакция, а именно, ее компонент - болевой стресс, возникающий в результате введения флогогена (раствора каррагенина, адъюванта Фрейнда, уксусной кислоты) или инородного предмета («ватного тампона») Растительные средства из живокости высокой в условиях данных экспериментов, а также на модели иммобилизационного стресса оказывали гастрозащигное действие. Под влиянием извлечений достоверно сокращалось количество деструкций, уменьшалось число животных с повреждениями и степень проявления гиперемии слизистой оболочки желудка. Наиболее эффективной оказалась фракция алкалоидов. Известно, что алкалоиды живокости высокой (элатин, метигогакаконитин, эльделин, делатин и др.) обладают ганглиоблокирующими свойствами [Садритдинов Ф.С. и др, 1980, Головкин Б Н и др,2001] Антисекреторное действие ганглиоблокаторов находит применение для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки Вещества этого ряда тормозят продукцию желудочного сока, нормализуют тонус пилорического сфинктера, улучшают регенерацию слизистой оболочки желудка [Венгеровский А И, 1998]

Существенным показателем антистрессорного действия препаратов является сохранение массы тела у экспериментальных животных по сравнению с таковой в контрольной группе Установлено, что на модели иммобилизационного стресса коэффициент массы тела оказался положительным (0,1-3,7) под влиянием настойки в дозе 0,6 мл/кг, экстракта в дозе 0,25 мл/кг и суммы алкалоидов в дозе 0,05 мг/кг На фоне развития каррагенинового воспаления под действием фракции алкалоидов животные не теряли в весе В условиях острой тканевой гипоксии и уксусного перитонита практически все извлечения из живокости высокой обеспечивали прирост массы тела животных Введение натрия оксибутирата способствовало сохранению массы тела мышей к концу эксперимента, а а - токоферола ацетата, наоборот, вызывало кахексию

Изучение поведенческих реакций по тесту «открытое поле» показало, что настойка (2,5 мл/кг), экстракт (0,25 мл/кг) и сумма алкалоидов (1,5 мг/кг) снижали обшую двигательную активность мышей по сравнению с контролем Это происходило за счёт сокращения горизонтальных, вертикальных перемещений и норкового рефлекса. Экстракт родиолы розовой, взятый в качестве препарата сравнения, увеличивал суммарную двигательную активность На фоне иммобилизационного стресса фракция алкалоидов в дозе 1,5 мг/кг оказала протекторное влияние на массу внутренних органов мышей Другие растительные средства живокости в условиях данной методики не проявляли антистрессорный эффект в отношении соматических показателей, но способствовали увеличению или нормализации угнетённой двигательной активности Аналогично действовал и препарат сравнения - экстракт родиолы розовой. После «рессорного воздействия извлечения из живокости высокой увеличивали или нормализовали сниженную эмоциональную реакцию животных Следовательно, ангистрессорное действие фитопрепаратов проявилось в сохранении функциональной активности ЦНС

Таким образом, подводя итог вышеизложенному, можно заключить, что извлечения из живокости высокой имеют широкий спектр фармакотерапевтиче-ских свойств При различных экспериментальных патологических состояниях было показано, что выраженность эффектов действующего начала растения (фракции алкалоидов и флавоноидов) часто не достигает уровня такового у комплексных препаратов (настойки и экстракта), что, вероятно, обусловлено действием всего комплекса биологически активных соединений. Обращает на себя внимание тот факт, что фитопрепараты оказали выраженное анальгетическое, жаропонижающее и умеренное противовоспалительное действие, что, возможно, объясняется их влиянием преимущественно на ЦНС В пользу центрального компонента свидетельствует способность извлечений из живокости изменять ориентировочно-исследовательское поведение и эмоциональную реакцию животных Известно, что важным патогенетическим фактором развития многих патологических состояний, в том числе, воспаления, лихорадки, гипоксии, эмоционального стресса, являются радикальные окислительные процессы, вызывающие деструктивные изменения на клеточном, тканевом и организменном уровне [Зенков Н.К и др., 2001] Можно предположить, что в механизме фармакологического действия растительных препаратов живокости высокой существенное значение имеют антиоксидантные свойства полифенольных соединений и алка-

лоидов, направленные на коррекцию окислительного стресса Так, полифенолы способны как непосредственно захватывать свободные радикалы, так и участвовать в восстановлении других антиоксидантов [Чернов ЮН и др.,2004] В структуре дитерпеновых алкалоидов живокости высокой третичный атом азота способен образовывать хелатные соединения с ионами металлов переменной валентности и тем самым ингибировать процессы перекисного окисления лшгадов на стадии разветвления цепей [Беликов В.Г, 1985, Зенков Н К и др , 2001]

Полученные результаты исследований позволяют предполагать, что фитопрепараты живокости высокой могут быть полезны в лечении заболеваний, сопровождающихся интенсивным болевым синдромом Кроме того, извлечения проявляют противовоспалительную, антимикробную и выраженную ранозажив-ляющую активность, что обосновывает использование их в качестве средств, оказывающих протекторное влияние на регенерируемые ткани и стимулирующих репаративные процессы в ране При этом широта и эффективность фармакологического действия настойки живокости позволяет считать этот препарат наиболее перспективным для дальнейшего экспериментального изучения и рекомендовать для клинического испытания.

ВЫВОДЫ

1. Извлечения из живокости высокой проявляют выраженную анальгетиче-скую активность (уменьшают восприятие болевых раздражений на моделях «уксусных корчей», «горячей пластины», при адъювантном артрите) Обезболивающее действие суммы алкалоидов растения не уступало по эффективности нестероидным противовоспалительным препаратам (метамюол натрий, диклофе-нак-натрий)

2 Извлечения из живокости высокой обладают противовоспалительным действием (снижают развитие перитонита на модели «уксусных корчей», препятствуют развитию отека, вызванного адьювантом Фрейнда, экстракт угнетает образование гранулематозно-фиброзной ткани)

3. Извлечения го живокости высокой оказывают нормализующее влияние на показатели периферической крови на модели адьювантной болезни и хронического пролиферативного воспаления.

4 Настойка и фракция алкалоидов живокости высокой обладают жаропонижающим действием (снижают гипертермическую реакцию на фоне дрожжевой лихорадки), сопоставимым с эффектом нимесулида

5 Извлечения из живокости высокой оказывают стимулирующее влияние на процесс репаративной регенерации (ускоряют заживление кожной раны, способствуют созреванию грануляционной ткани) По выраженности ранозаживляюще-го эффекта экстракт и фракция алкалоидов растения превосходили известный стимулятор регенерации - сок алоэ.

6 Извлечения из живокости высокой обладают антигипоксическим, стресс-протективным, умеренным гастрозащитным действием Настойка растения проявляет антимикробную активность

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации

1 Жаропонижающее действие живокости высокой // Актуальные вопросы медицинского обеспечения войск, подготовки и усовершенствования военно-медицинской службы Сибирского военного округа на современном этапе. Материалы конфер. к распространению передового опыта медицинского обеспечения войск, посвященная 85-летию образования 333 военного госпиталя - Новосибирск, 2004 - Часть 3 -С 84 (соавт Поветьева Т Н, Нестерова Ю В)

2. Изучение противовоспалительной активности извлечений из надземной части Delphinium elatum L // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии Итоговая научная конференция НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН - Томск, 2005 - С 30-32 (соавт Нестерова Ю В, Попова Е.В)

3 Антигипоксическая активность алкалоидоносных растений // Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения. Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л Н Березнеговской - Томск, 2006 - С. 266-269 (соавт. Поветьева Т Н, Нестерова Ю В., Попова ЕВ и др).

4 Углекислотные экстракты пихты и спиртовые экстракты дельфиниума и болиголова в комплексном лечении и профилактике воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей // Современные проблемы фитотерапии Материалы I Международного съезда фитотерапевтов - Москва, 2006 - С. 84-88 (соавт Зеленская К Л, Поветьева Т.Н, Нестерова Ю В и др.).

5 Тканевая гипоксия, вызванная нитропруссидом натрия, и ее коррекция растительными средствами // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины -2007 - Приложение 1 - С 49-53 (соавт. Аксиненко С.Г, Поветьева Т.Н., Провалова Н В. и др)

6, Изучение алкалоидов живокости высокой // Актуальные вопросы медицинского обеспечения войск, подготовки и усовершенствования военно-медицинских кадров Материалы научно практической конференции профессорско-преподавательского состава Томского военно-медицинского института -Томск,2007 -С 28-30 (соавт АндрееваТИ,ГавриленоСС,ХаецкийВВ.).

7. Исследование фармакологической активности извлечений из надземной части Delphinium elatum L // Актуальные вопросы медицинского обеспечения войск, подготовки и усовершенствования военно-медицинских кадров Материалы научно практической конференции профессорско-преподавательского состава Томского военно-медицинского инстшута - Томск, 2007 - С 113-115 (соавт Поветьева Т Н., Нестерова Ю В, Андреева Т И )

Подписано в печать 20.12.07 Формат 60x84/16. Гарнитура «Tunes». Бумага офсетная. Печать трафаретная. Усл. печ. л. 1,22. Тираж 200 экз. Заказ № 161

Отпечатано в типографии ООО «Аграф-Пресс».

634055, г. Томск, пр-т Академический, 2/2, стр. 2, тел 25-24-84

Актуальность проблемы

В последние годы проводятся активные исследования по поиску новых препаратов на основе лекарственного растительного сырья. К настоящему времени накоплен значительный объём знаний по химическому составу и фармакологическим свойствам лекарственных растений, что позволяет по-новому взглянуть на потенциальные возможности их применения в медицинской практике [1]. Преимуществом средств растительного происхождения является их малая токсичность, широкий спектр фармакологической активности и возможность длительного применения без существенных побочных явлений [72, 137]. Фитопрепараты наиболее востребованы в профилактике различных заболеваний, могут использоваться в качестве поддерживающей терапии между курсами основного лечения. В большинстве случаев оправдано применение комплексных растительных средств наряду с синтетическими для снижения токсичности последних, усиления эффективности основного лечения и коррекции нарушенных функций организма [1, 112]. Ведущую роль играют фитопрепараты на этапе противорецидивного, реабилитационного лечения, поскольку они отличаются низкой опасностью осложнений и, следовательно, возможностью продолжительного использования [112].

В связи с этим поиск и изучение лекарственных растений с целью создания на их основе безвредных и эффективных препаратов весьма актуальны. Наибольший интерес для научной и практической медицины представляют лекарственные средства, содержащие алкалоиды, поскольку они занимают значительное место в системе управления физиологическими процессами, протекающими в организме человека, и играют ведущую роль в лечении различных заболеваний [137].

Из большого арсенала лекарственных растений, произрастающих в Западной Сибири, наше внимание привлекла живокость высокая семейства лютиковых. В научной медицине она является малоизученным растением, но в народной медицине живокость высокая находит широкое применение в качестве обезболивающего [59, 88], противовоспалительного [70, 93], жаропонижающего [102] и антимикробного [88] средства. Кроме того, её используют для лечения рассеянного склероза, заболеваний желудочно-кишечного тракта, мочеполовых органов, печени [58, 93], при судорогах, испуге [63, 93].

Большая сырьевая база, доступность сырья и широкий спектр фармако-терапевтического действия, согласно данным народной медицины, обосновывает целесообразность выбора живокости высокой в качестве перспективного объекта изучения.

Цель исследования

Целью настоящей работы явилось изучение спектра фармакотерапевти-ческого действия извлечений из надземной части живокости высокой.

Задачи исследования

1. Изучить обезболивающее действие извлечений из надземной части живокости высокой.

2. Провести сравнительную оценку противовоспалительной активности извлечений из надземной части живокости высокой и нестероидных противовоспалительных препаратов, их действие на показатели системы крови на разных моделях воспаления.

3. Изучить влияние растительных средств из надземной части живокости высокой на процесс репаративной регенерации.

4. Исследовать жаропонижающую активность извлечений из надземной части живокости высокой.

5. Изучить антигипоксические и антимикробные свойства растительных средств из надземной части живокости высокой.

6. Исследовать стресспротективное действие извлечений из надземной части живокости высокой на соматические (при различных патологических состояниях) и поведенческие реакции.

Научная значимость и новизна результатов

1. Впервые экспериментально показано, что извлечения из надземной части живокости высокой обладают выраженной анальгетической активностью. Обезболивающее действие суммы алкалоидов растения не уступало по эффективности нестероидным противовоспалительным препаратам (метами-зол натрий, диклофенак-натрий).

2. Выявлено, что извлечения из надземной части живокости высокой проявляют противовоспалительные, жаропонижающие свойства. Настойка обладает антимикробной активностью.

3. Установлено, что растительные средства из надземной части живокости высокой оказывают ранозаживляющее действие, по эффективности экстракт и сумма алкалоидов растения превосходили препарат сравнения - сок алоэ.

4. Выявлено, что извлечения из надземной части живокости высокой обладают широким спектром фармакологической активности: нормализуют показатели системы крови на фоне воспаления, проявляют стресспротективное, антигипоксическое, умеренное гастрозащитное действие.

Научно-практическая ценность работы

Результаты экспериментальных исследований могут служить основой для разработки лекарственных препаратов из надземной части живокости высокой в качестве ранозаживляющих средств, а также для лечения заболеваний, сопровождающихся болевым синдромом. Из вытяжек живокости высокой наиболее перспективной для дальнейшего экспериментального изучения и клинического испытания является настойка, поскольку она проявляет значительную широту и эффективность фармакологического действия.

Часть данных диссертационной работы оформлены заявкой на изобретение № 2006124332/15 «Средство, обладающее антигипоксическим действием», по которой получено решение о выдаче патента от 14. 11. 2007 г.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Извлечения из надземной части живокости высокой проявляют выраженную анальгетическую активность, противовоспалительное и жаропонижающее действие, оказывая нормализующее влияние на показатели периферической системы крови и внутренних органов животных. При этом обезболивающий эффект суммы алкалоидов растения не уступает действию нестероидных противовоспалительных препаратов.

2. Растительные средства из надземной части живокости высокой обладают широким спектром фармакологических свойств: оказывают ранозажив-ляющее, антигипоксическое, стресспротективное, умеренное гастрозащитное действие. Настойка живокости высокой проявляет антимикробную активность.

Апробация работы

Основные положения и результаты работы доложены на итоговых научно-практических конференциях Томского военно-медицинского института (Томск, 2005, 2006), на конференции НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2005), на научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора JI. Н. Березнеговской (Томск, 2006), на 1 -м Международном съезде фитотерапевтов (Москва, 2006). 9

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 работ, в том числе 1 - в центральном журнале, рекомендованном "Перечнем." ВАК Минобрнауки.

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных наблюдений, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 218 источников, из них 51 - на иностранном языке. Диссертация иллюстрирована 32 таблицами и 7 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. Извлечения из живокости высокой проявляют выраженную анальге-тическую активность (уменьшают восприятие болевых раздражений на моделях «уксусных корчей», «горячей пластины», при адъювантном артрите). Обезболивающее действие суммы алкалоидов растения не уступало по эффективности нестероидным противовоспалительным препаратам (метамизол натрий, диклофенак-натрий).

2. Извлечения из живокости высокой обладают противовоспалительным действием (снижают развитие перитонита на модели «уксусных корчей», препятствуют развитию отёка, вызванного адъювантом Фрейнда, экстракт угнетает образование гранулематозно-фиброзной ткани).

3. Извлечения из живокости высокой оказывают нормализующее влияние на показатели периферической крови на модели адъювантной болезни и хронического пролиферативного воспаления.

4. Настойка и фракция алкалоидов живокости высокой обладают жаропонижающим действием (снижают гипертермическую реакцию на фоне дрожжевой лихорадки), сопоставимым с эффектом нимесулида.

5. Извлечения из живокости высокой оказывают стимулирующее влияние на процесс репаративной регенерации (ускоряют заживление кожной раны, способствуют созреванию грануляционной ткани). По выраженности ранозаживляющего эффекта экстракт и фракция алкалоидов растения превосходили известный стимулятор регенерации - сок алоэ.

6. Извлечения из живокости высокой обладают антигипоксическим, стресспротективным, умеренным гастрозащитным действием. Настойка растения проявляет антимикробную активность.

Заключение

Таким образом, применение ненаркотических анальгетиков является неотъемлемой частью рациональной фармакотерапии различных заболеваний. Большой арсенал лекарственных средств данной группы, различающихся по своим фармакологическим характеристикам, позволяет выбрать наиболее адекватный для того или иного патологического состояния препарат. Однако для большинства из них наряду с высокой активностью характерны индивидуальная непереносимость, противопоказания и развитие побочных эффектов. Поэтому поиск новых высокоэффективных и малотоксичных болеутоляющих препаратов остается актуальной проблемой фармакологии. В связи с этим, представляет интерес изучение средств растительного происхождения, способных сочетать анальгетическое действие с другими видами активности (противовоспалительной, жаропонижающей, стресспротективной и др.), а также обеспечивать пролонгированный эффект и минимум побочных явлений. Учитывая богатый опыт использования живокости высокой в народной медицине и ограниченные данные экспериментальных исследований, целесообразно изучение растения в широком спектре фармакотерапевтического действия.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Экспериментальные животные

Эксперименты проведены на 466 беспородных мышах обоего пола с исходной массой 25-35 г, 115 беспородных крысах-самцах с исходной массой 170-250 г. Животные первой категории получены из лаборатории экспериментального биомоделирования ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется). Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Эвтаназию производили, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденные Министерством Здравоохранения России, (в зависимости от условий опыта) путем дислокации шейного позвонка либо декапитацией. Распределение животных по сериям экспериментов представлено в таблице 1.

2.2. Характеристика исследуемых препаратов

Объекты исследования

Объектами исследования являлись водно-спиртовые извлечения из надземной (травы) части живокости высокой, а также фракции алкалоидов и флавоноидов растения.

Сырьё было собрано в окрестностях г. Томска вдали от автомобильных, железнодорожных магистралей и промышленных предприятий в конце июля 2004 г., затем его подвергали сушке в хорошо проветриваемом помещении. Влажность высушенного сырья определяли по методике, описанной в Государственной фармакопее XI издания (1989) [43].