Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологические свойства комплексных извлечений из земляники лесной

На правах рукописи

КЛИМЕНТОВА Дарья Александровна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА КОМПЛЕКСНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ИЗ ЗЕМЛЯНИКИ ЛЕСНОЙ

(экспериментальное исследование)

14.00.25 — фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Томск —2005

Работа выполнена в ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Пашинский Виталий Глебович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

доктор медицинских наук

Плотникова Татьяна Макаровна Скурихин Евгений Германович

Ведущая организация:

Кемеровская государственная медицинская академия

Зашита состоится «_» _ 2005 г. в _ часов на

заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН.

Автореферат разослан « /$ » апреля 2005 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

Актуальность проблемы

В последние годы наметился определённый сдвиг в сторону широкого применения фитопрепаратов в медицине. Разработанные и широко применяемые в мировой медицине препараты растительного происхождения являются убедительным примером того, как решение многих проблем, связанных с лечением и профилактикой трудно излечимых заболеваний, необходимо искать в самой природе [Нуралиев Ю.Н., 1988]. Преимущества применения фитопрепаратов очевидны и обусловлены их неоспоримыми достоинствами, в том числе широким спектром фармакологического действия в сочетании с низкой токсичностью, возможностью длительного применения без побочных эффектов и практически отсутствием противопоказаний [Зинченко Т.В и др., 1990; Барнаулов О.Д., 1999; Федосеева JI.M., Фадеева Н.И., 2003]. Кроме того, комплекс веществ, входящих в состав лекарственных растений, может придать им дополнительные и, зачастую, весьма полезные свойства, которые у индивидуальных соединений, выделенных из тех же растений, отсутствуют [Ловкова М.Я., Рабинович A.M., Пономарёва С.М. и др., 1989].

В связи с этим, видится актуальным поиск, разработка новых препаратов растительного происхождения с широким спектром фармакологических эффектов, а также их внедрение в практику здравоохранения.

Из большого арсенала лекарственных растений, произрастающих в Западной Сибири, наше внимание привлекла земляника лесная семейства розоцветных. Это растение является одним из перспективных объектов исследования в этом направлении. В народной медицине земляника лесная применяется в качестве противовоспалительного, ранозаживляющего, потогонного, мочегонного, кровоостанавливающего, вяжущего средства [Путырский И., Прохоров В., 2000]. В научной медицине она является мало изученным растением с узким спектром применения. Большая сырьевая база, доступность сырья, высокая продуктивность, широкие возможности культивирования позволяют считать землянику лесную перспективным объектом исследования.

Цель исследования:

Целью настоящей работы явилось изучение спектра фармакотерапевтического действия комплексных извлечений из надземной части земляники лесной.

Для достижения поставленной цели были определены следующие

1. Провести сравнительное изучение противовоспалительных свойств комплексных извлечений из надземной час мляники

задачи:

садовой и их действие на показатели системы крови на разных моделях острого и хронического воспаления.

2. Оценить регенераторные возможности водных и спиртовых вытяжек из надземной части земляники лесной.

3. Изучить обезболивающее действие вытяжек из надземной части земляники лесной.

4. Исследовать антигипоксические свойства комплексных извлечений из земляники лесной на моделях острой и повторной гипоксии и их влияние на показатели системы крови.

5. Изучить гастрозащитные свойства вытяжек из надземной части земляники лесной на разных моделях патологии и оценить их действие на моторно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта.

6. Исследовать стресспротективное действие комплексных извлечений из земляники лесной и их влияние на показатели системы крови на фоне воспаления, различных моделей гипоксии, острого стресса и после цитостатического воздействия.

Научная значимость и новизна результатов

1. Впервые экспериментально показано, что водные и спиртовые извлечения из надземной части земляники лесной обладают выраженной противовоспалительной и обезболивающей активностью, не уступая по своей эффективности нестероидным противовоспалительным препаратам. На фоне воспаления препараты земляники садовой также обладают существенными противовоспалительными свойствами и корригируют показатели системы крови и внутренних органов.

2. Выявлено, что водные и спиртовые вытяжки из надземной части растения проявляют ранозаживляющие и гастрозащитные свойства, оказывают стимулирующее действие на двигательную активность желудочно-кишечного тракта.

3. Установлено, что комплексные извлечения из земляники лесной обладают широким спектром фармакологической активности: нормализуют показатели системы крови и внутренних органов на фоне воспаления, гипоксии, стресса и цитостатической болезни, обладают антигипоксическими и выраженными стресспротективными свойствами.

Научно-практическая ценность работы

Результаты экспериментальных исследований служат основанием для разработки новых лекарственных препаратов из надземной части земляники лесной в качестве профилактического и терапевтического средства при заболеваниях, в основе которых лежит воспаление разной степени интенсивности, а также при патологических состояниях пищеварительной

•"•а» "»•» «->.

системы и коррекции нарушений, возникающих в организме при цитостатической терапии. Из фитопрепаратов земляники лесной наиболее перспективными для терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта являются водные извлечения из надземной части растения, а для лечения воспаления - преимущественно спиртовые. Часть данных по изучению фармакологической активности земляники лесной оформлены заявкой на изобретение № 2003111563 «Противоязвенное средство», по которой получен приоритет от 21.04.2003 г.

Апробация работы

Основные положения и результаты диссертационной работы доложены на 2-м съезде Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (г. Москва, 2003); на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы тканевой терапии и перспективы применения природных биологически активных веществ в современной медицине» (г. Одесса, 2003); на 11-й научно-практической конференции «Достижения современной гастроэнтерологии» (г. Томск, 2003); на научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине» (г. Улан-Удэ, 2003); на научной конференции, посвященной 50-летию АГМУ «Актуальные проблемы фармакологии» (г. Барнаул, 2003); на конференции, посвящённой 20-летию НИИ фармакологии «Актуальные проблемы фармакологии» (г. Томск, 2004); на 5-й конференции молодых учёных СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (г. Новосибирск, 2004).

Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 8 печатных работ.

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 204 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 246 источников, из них 55 на иностранном языке. Диссертация иллюстрирована 46 таблицами и 6 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 191 беспородных мышах-самках, 265 мышах-самках линии СВА с исходной массой 18-25 г, 203 беспородных крысах-самках с исходной массой 200 - 250 г. Животные первой категории получены из коллекционного фонда НИЛ экспериментального биомоделирования ТНЦ СО РАМН (сертификат имеется). Все животные содержались в соответствии с правилами, принятыми Европейской

Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (г. Страсбург, 1986). Эвтаназию производили, соблюдая «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных», утверждённых Министерством Здравоохранения России, путём дислокации шейного позвонка, используя эфирный наркоз.

Объектами исследования являлись настойка и настой, полученные из надземной части (стебли, листья, цветки) земляники лесной в соотношении растительное сырьё : экстрагент - 1:10. Настой земляники лесной готовили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI издания (1989). Настойку готовили методом мацерации (настаивания), в качестве извлекателя использовали 40 % этанол. Надземная часть изучаемого растения была собрана в окрестностях г. Томска (вдали от автострад, железнодорожных путей, сельскохозяйственных угодий) в период цветения растений в июне 2002 - 2003 гг. Собранное сырьё сушили в тени в хорошо проветриваемом помещении, влажность высушенного сырья определяли по методике, представленной в Государственной фармакопеи XI издания (1989). На кафедре технологии лекарственных форм Сибирского государственного медицинского университета в сухом сырье определяли содержание следующих биологически активных веществ: сумму флавоноидов и полисахаридов [Государственная ..., 1989]. Содержание флавоноидов и полисахаридов составило 2,84 % и 0,25 % соответственно на 100 грамм сухо-воздушного сырья с учётом влажности.

Водные и спиртовые вытяжки из надземной части земляники лесной вводили внутрижелудочно через зонд профилактическим и/или лечебным курсом.

Противовоспалительные свойства вытяжек из надземной части земляники лесной исследовали согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000). На моделях формалинового и адъювантного воспаления для сравнения противовоспалительной активности вытяжек земляники лесной, кроме синтетических средств, использовали спиртовые экстракты из надземной части культивируемого сорта земляники. Острую воспалительную реакцию у животных вызывали субплантарным введением в заднюю правую лапу: каррагенина - мышам 0,05 мл 1 % раствора [WinterC. А. et al., 1962]; формалина - крысам 0,1мл 2 % раствора [DomenjozR., 1953]. Иммунное воспаление вызывали полным адъювантом Фрейнда. Флогоген вводился крысам под плантарный апоневроз задней правой лапы однократно в дозе 0,1 мл [Freund I., 1956]. Влияние извлечений из земляники лесной на пролиферативную фазу воспаления изучали на модели «ватной гранулёмы» [Тринус Ф. П. и др., 1987; Meier R. et al., 1950]. Стерильный ватный тампон весом 13 мг имплантировали с помощью иглы

для взятия крови (А1-20-1,17 и 25) крысам под кожу спины между лопатками.

Ранозаживляющую активность фитопрепаратов изучали на модели заживления кожного повреждения [Попова Л. Н., 1942]. На депиллированном участке спины у мышей под легким эфирным наркозом вырезали лоскут кожи размером 10х 10 мм. Для моделирования более длительного заживления струп с экспериментальной раны регулярно (через сутки) снимали.

Обезболивающее действие извлечений из земляники лесной изучали на моделях «уксусные корчи» и «горячая пластина». Химическое болевое раздражение индуцировали однократным внутрибрюшинным введением 0,75% уксусной кислоты (0,1 мл/Юг массы тела) [Руководство ..., 2000]. Болевую реакцию на модели «горячей пластины» [Машковский М. Д. и др., 1990] вызывали, помещая мышей на горячую (60°С) пластину, и анальгетический эффект оценивали по длительности спокойного пребывания на ней животных (до начала облизывания лап).

На модели иммобилизационного стресса у мышей проводилась оценка антистрессорной активности вытяжек из земляники лесной. Оценку стрессорного состояния проводили по бальной системе Ю.И. Добрякова (1978). Препарат проявлял антистрессорный эффект, если разница в оценке стресса в опытной и контрольной группах составляла 2 и более баллов.

Острую гиперкапническую гипоксию моделировали путём помещения мышей в индивидуальные термокамеры объёмом 0,5 л, где они находились до гибели. Многократную гиперкапническую гипоксию создавали путём помещения мышей в термокамеру этого же объёма до первых судорог в течение 5 дней. При последнем гипоксическом воздействии животных оставляли до гибели [Иванова И. А. и др., 1986].

Острую тканевую гипоксию у мышей изучали с использованием нитропруссида натрия после курсового внутрижелудочного введения мышам растительных и синтетических средств в течение 5 дней, в последний день — за 1 час до внутрибрюшинного введения нитропруссида натрия в дозе 25 мг/кг. Повторную тканевую гипоксию создавали путём внутрибрюшинного введения нитропруссида натрия в течение 4 дней — однократно в дозе 1,0 мг/кг, на 5-е сутки — в дозе 25 мг/кг [Караев А. Я. и ДР-, 1991].

Антиульцерогенную активность извлечений из земляники лесной исследовали, используя различные модели экспериментального повреждения слизистой оболочки желудка. Язвы нейрогенного происхождения получали путём стресс-подвешивания мышей за шейную складку на 22 часа по методу Ю.И. Добрякова (1978).

Субхроническое повреждение слизистой оболочки желудка вызывали введением крысам ацетилсалициловой кислоты в дозе 128 мг/кг натощак

внутрижелудочно в течение суток дважды с интервалом в 4 часа [Оболенцева Г. В., Хаджай Я. И., 1972].

Влияние вытяжек из земляники лесной на гладкую мускулатуру желудочно-кишечного тракта изучали на мышах методом «меток» [КоортапО. Р., Кешш Н. М., 1977]. В качестве «метки» в пищеварительный тракт вводили 10% взвесь активированного угля, приготовленного на 2% крахмальной слизи в количестве 0,5 мл.

Изучалось влияние спиртовой вытяжки из надземной части земляники лесной на показатели внутренних органов и систему крови после воздействия цитостатика. Цитостатическое воздействие осуществлялось путём однократного внутрибрюшинного введения мышам циклофосфана в 'А МПД (125 мг/кг). Определение величины МПД для цитостатика проводили методом пробит-анапиза по Литчфилду и Вилкоксону [Урбах В.Ю., 1975].

Определение общего количества миелокариоцитов, спленоцитов, тимоцитов, содержание ретикулоцитов, подсчёт лейкоцитарных формул и миелограмм осуществляли стандартными гематологическими методами [Меньшиков В.В., 1987; Гольдберг Е.Д и др., 1992].

Статистическую обработку полученных результатов проводили путём расчёта средней (X) и средней квадратичной ошибки (т), О достоверности различий судили, используя параметрический (критерий Стьюдента) и непараметрический (критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) методы. Значимость различий считали достоверной при Р1, Ри <0,05 [Гублер Е.В., 1978].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Водные и спиртовые извлечения из надземной части земляники лесной во всех изученных дозах существенно ослабляли флогогенное действие каррагенина, не уступая по своей эффективности кислоте ацетилсалициловой. Курсовое введение вытяжек из надземной части земляники лесной приводило к торможению отёка на 10,7 - 51,4 % по сравнению с контрольной группой. Наибольшее угнетение экссудации на 51,4 % наблюдалось у животных, получавших водную вытяжку земляники лесной в дозе 1,25 мл/кг. При этом ацетилсалициловая кислота сокращала этот показатель на 47,1 %. Сравнительный анализ весовых показателей внутренних органов свидетельствует о том, что субплантарное введение мышам каррагенина приводило к различным соматическим изменениям, представленные в виде инволюции тимуса и селезёнки, гипертрофии надпочечников и появления геморрагических деструкций на слизистой желудка у мышей. Наряду с противоэкссудативным действием водные и спиртовые вытяжки из надземной части земляники лесной корригировали

изменения во внутренних органах, происходящие на фоне воспалительной реакции. Стресс-протекторное действие настоя и настойки из земляники лесной (снижение глубины стресса на 3 - 5 баллов относительно контроля) на данной модели воспаления реализовывалось в основном за счёт их выраженного гастрозащитного действия на слизистую желудка мышей. Так, у животных, получавших водные или спиртовые вытяжки из растения в дозах 1,25 и 5,0 мл/кг, геморрагические деструкции на слизистой оболочке желудка отсутствовали. Ацетилсалициловая кислота не оказывала защитного влияния на внутренние органы животных (глубина стресса у мышей была на уровне контроля).

С целью углубленной оценки антиэкссудативного действия спиртовых вытяжек из надземной части земляники лесной и садовой было изучено их влияние на острый формалиновый отёк в условиях профилактического и лечебного введения. Наблюдение за динамикой развития отёка, вызванного формалином, показало, что все исследуемые вытяжки в дозах 2,5 и 5,0 мл/кг достоверно на всём протяжении эксперимента тормозили развитие экссудации, гиперемии конечности, ускоряя тем самым сроки полного выздоровления животных по сравнению с контрольной группой, при этом по эффективности не уступая синтетическому антифлогистику - индометацину.

Моделирование формалинового воспаления характеризовалось формированием изменений в лейкоцитарной формуле периферической крови крыс. Так, в контрольной группе отмечалось увеличение общего количества лейкоцитов на 1-е и на 6-е сутки исследования, обусловленное возрастанием содержания всех форм лейкоцитов (на 1-е сутки), а также за счёт числа лимфоцитов, сегментоядерных нейтрофилов и эозинофилов (на 6-е сутки). У крыс, получавших настойку земляники лесной в дозах 2,5 и 5,0 мл/кг, на 1-е и 6-е сутки, наблюдалась отмена лейкоцитоза в периферической крови в основном за счёт снижения на 21,7 - 45,2 % числа лимфоцитов и на 25,6 - 43,5 % сегментоядерных нейтрофилов по сравнению с контролем. Спиртовые вытяжки из культивируемого сорта земляники во всех исследуемых дозах также нормализовали гематологические показатели у крыс. Так, на 1-е сутки исследования снижение общего количества лейкоцитов было обусловлено уменьшением на 49,4 % представительства лимфоцитов, на 53,1 - 75 % числа палочкоядерных нейтрофилов и на 70,0 - 81,4 % эозинофилов. Назначение на 6-е сутки настойки садовой земляники отменяло лейкоцитоз в периферической крови лишь за счёт уменьшения на 29,3 - 46,1 % числа лимфоидных клеток относительно контрольных значений. Индометацин в терапевтической дозе нормализовал лейкоцитарный состав периферической крови у больных животных.

Наиболее адекватной для изучения противовоспалительных средств является модель «адъювантного артрита». [Саратиков A.C. и др., 1983]. Сравнительное изучение влияния спиртовых вытяжек из надземной части зе-

на развитие отёка и гиперемии конечности у крыс после введения адьюванта Фрейнда.

1 - контроль, 2 - индометацин в дозе 6,0 мг/кг, 3 - настойка в дозе 5,0 мл/кг, 4 - настойка в дозе 2,5 мл/кг По оси абсцисс - сроки наблюдения, сут По оси ординат -прирост отека воспаленной конечности, % (а); степень выраженности гиперемии, усл. ед. (б), * - различия достоверны в сравнении с контролем при Р1<0,05, Ри<0,05

мляники лесной и культивируемого сорта земляники на течение адьювантного артрита выявило их выраженный антиэкссудативный эффект. Изучаемые фитопрепараты во всех исследуемых дозах (2,5 и 5,0 мл/кг) на 14,0 - 93,9 % угнетали прирост объёма воспалённой конечности у крыс, достоверно уменьшали гиперемию, болезненность суставов и улучшали их подвижность на протяжении всего периода наблюдения. При этом к 23-м суткам исследования у крыс, получавших фитопрепараты земляники лесной и садовой (2,5 и 5,0 мл/кг), объём воспалённой конечности вернулся к исходному уровню, в то время как в группах контрольных животных и крыс, получавших индомеггацин, продолжалось развитие адьювантного артрита (рис. 1а). Кроме того, введение крысам настойки из земляники лесной и садовой во всех исследуемых дозах достоверно снижало выраженность гиперемии лапы уже на 2-е сутки эксперимента в 2,4 - 2,9 раза по сравнению с контролем. При этом, у крыс, получавших индометацин, на 1 - 3-е сутки эксперимента аналогичный показатель был достоверно меньше контрольного в 1,7 - 6,3 раза (рис. 16).

В условиях хронического иммунного воспаления у контрольных крыс наблюдалась инволюция тимуса и селезёнки, гипертрофия надпочечников, на слизистой оболочке желудка появлялись геморрагии, что свидетельствовало о стрессиндуцирующем действии адъювантной болезни. Введение спиртовых извлечений из надземной части земляники лесной, а также садовой в дозах 2,5 и 5,0 мл/кг оказывало защитное действие на внутренние органы животных, подвергнутые воздействию флогогена. При этом, наиболее выраженное стресспротективное действие отмечалось у настойки из садовой земляники (2,5 и 5,0 мл/кг) (глубина стресса снижалась на 4 - 5 баллов относительно контроля). Следует отметить, что синтетический препарат, в отличие от растительных, не оказывал гастрозащитного действия, а напротив, увеличивал число деструкций в 2 раза относительно контрольных крыс. Растительные препараты также предупреждали потерю массы тела, оказывая тем самым анаболическое действие.

Развитие адъювантной болезни характеризовалось изменениями количественного состава клеточных элементов в периферической крови у «артритных» крыс. Так, проведённое изучение показателей периферической крови у контрольных животных во все сроки исследования (3-е, 9-е, 22-е сутки после введения адъюванта) выявило увеличение общего количества лейкоцитов от интактных значений, обусловленное возрастанием числа сегментоядерных нейтрофилов и эозинофилов (на 3-е сутки), сегментоядерных лейкоцитов (на 9-е сутки) и числа лимфоцитов (на 22-е сутки). Под действием спиртовых извлечений из надземной части земляники лесной и садовой (2,5 и 5,0 мл/кг) происходила отмена лейкоцитоза в периферической крови в основном за счёт снижения содержания

сегментоядерных нейтрофилов и лимфоидных клеток. Введение крысам индометацина на фоне развития иммунологического воспаления не оказывало достоверно значимых изменений количественных показателей гемограммы по сравнению с контрольными значениями в течение всего периода наблюдения. Лишь на 3-е сутки эксперимента наблюдалось достоверное снижение в 2,2 раза по сравнению с контролем абсолютного содержания сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови у крыс, получавших этот антафлогистик.

Для развития адъювантного артрита у крыс характерна продукция лимфоцитами лимфокинов, повреждающих мембрану эритроцитов с развитием гемолитической анемии [Йегер Л., 1990]. Так, количество эритроцитов и ретикулоцитов в крови у контрольных животных во все сроки исследования (3-е, 9-е, 22-е сутки) было значительно меньше, чем у здоровых крыс. Число красных клеток крови после назначения индометацина на протяжении всего периода наблюдения также оказалось достоверно ниже фоновых значений. При этом, синтетический препарат приводил к неоднозначным количественным изменениям со стороны показателей ретикулоцитов в циркулирующей крови: на 3-е сутки после введения адъюванта увеличивалось содержание ретикулоцитов, а в последующие сроки количество этих клеток (9-е, 22-е сутки) достоверно снижалось относительно контрольного уровня. Спиртовые вытяжки из надземной части земляники лесной и садовой, по-видимому, защищали периферическое звено эритрона, сохраняя изучаемые показатели в периферической крови на уровне здоровых крыс.

Изучение картины костномозгового кроветворения на фоне развития адъювантной болезни показало снижение общей клеточное™ миелокариоцитов у контрольных крыс по сравнению со здоровыми животными. Анализ миелограмм установил, что снижение клеточности костного мозга реализуется за счёт уменьшения числа зрелых нейтрофильных лейкоцитов, лимфоидных клеток, эозинофилов и моноцитов. Снижение количества эритроцитов в периферической крови крыс как следствие гемолитической анемии, вызванной повреждающим влиянием лимфокинов лимфоцитов, закономерно приводило к гиперплазии эритроидного ростка кроветворения. Кроме того, в костном мозге у контрольных крыс относительно интактных животных в 3,6 раза увеличивалось число плазматических клеток, что считается главной особенностью реакции лимфоидной ткани крыс на развитие адъювантной болезни [ТЫше Н., 1971]. Картина костномозгового кроветворения после назначения индометацина во многом была схожа с аналогичными значениями у нелеченных крыс. Однако, при назначении синтетического антифлогистика количество плазматических клеток в костном мозге снижалось в 2 раза по сравнению с контролем, что является благоприятным

признаком для течения заболевания. Введение «артритным» крысам изучаемых фитопрепаратов в дозах 2,5 и 5,0 мл/кг нормализовало костномозговое кроветворение в условиях хронического иммунного воспаления.

Для изучения действия водных и спиртовых вытяжек из земляники лесной на течение пролиферативной фазы воспаления был выполнен эксперимент на модели «ватной гранулёмы». Установлено, что все исследуемые вытяжки оказывали антипролиферативное действие, замедляя развитие гранулёмы. Введение настоя и настойки из надземной части растения в дозах 2,5 и 5,0 мл/кг достоверно угнетало разрастание гранулематозно-фиброзной ткани у животных на 28,5 - 36,4 % по сравнению с крысами, получавшими только воду. При этом наиболее выраженно ингибировала пролиферативный процесс настойка земляники лесной в дозе 5,0 мл/кг. Кроме того, исследуемые фитопрепараты достоверно снижали массу экссудата в очаге хронического воспаления. Назначение крысам индометацина в условиях хронического асептического воспаления достоверно подавляло воспалительное разрастание ткани, снижая массу сухой гранулёмы в 1,7 раза по сравнению с нелеченными крысами.

Моделирование хронического воспаления приводило к различным соматическим изменениям. Так, в группе контрольных животных на фоне развития гранулёмы наблюдалась тенденция к снижению массы селезёнки и увеличению веса надпочечников, на слизистой оболочке желудка появлялись геморрагические деструкции по сравнению с интактными крысами. Фитопрепараты сглаживали изменения показателей внутренних органов. Назначение настоя земляники лесной в дозе 5,0 мл/кг увеличивало вес селезёнки на 29,2 % по сравнению с контролем. Антистрессорная активность спиртовой вытяжки из растения в дозе 5,0 мл/кг реализовывалась за счёт достоверного повышения массы селезёнки на 33,6 %, снижения веса надпочечников до фоновых значений и гастрозащитного эффекта на слизистую желудка у крыс. Следует отметить, что водные и спиртовые извлечения из земляники лесной (2,5; 5,0 мл/кг) на данной модели воспаления проявляли выраженное гастрозащитное действие в отличие от препарата сравнения - индометацина, приём которого почти в 6 раз увеличивал количество геморрагий на слизистой желудка. Индометацин оказывал прострессорный эффект, обусловленный инволюцией тимуса, селезёнки и появлением большого числа деструкций на слизистой желудка.

Развитие хронического пролиферативного воспаления сопровождалось целым рядом характерных изменений в периферической крови крыс. Так, у контрольных животных наблюдалось достоверное повышение общего количества лейкоцитов в периферической крови, обусловленное увеличением абсолютного числа палочко- и сегментоядерных нейтрофилов, а также лимфоцитов и моноцитов по сравнению с интактными животными.

Использование водных и спиртовых извлечений из надземной части земляники лесной (2,5 и 5,0 мл/кг) корригировало изменения в лейкоцитарной формуле, происходящие на фоне развития гранулематозно-фиброзной ткани, что выражалось в отмене лейкоцитоза в периферической крови крыс в основном за счёт уменьшения числа лимфоидных клеток. Синтетический противовоспалительный препарат также оказывал нормализующее действие на лейкоцитарный состав периферической крови.

Заключительная стадия как острого, так и хронического воспаления -репаративная (фаза реконструкции повреждённых тканей) [Саркисов Д.С., 1970]. На модели «лоскутной раны» мы исследовали ранозаживляющие свойства водных и спиртовых вытяжек из надземной части земляники лесной, моделируя при этом вторичное натяжение, представляющее собой заживление раны вследствие выполнения дефекта гранулематозной тканью [Краевский H.A., Лиознер Л.Д., 1966]. Применение изучаемых растительных препаратов способствовало ускорению процесса ранозаживления у мышей на 3 - 5 дней. При этом, водные и спиртовые вытяжки из надземной части земляники лесной в равной мере вызывали значительное укорочение на 15,8 - 26,3 % срока заживления ран у мышей относительно нелеченных животных. Экстракт сока алоэ является эффективным стимулятором регенерации (на 26,3 % ускорял сроки заживления раны у мышей). Назначение ацетилсалициловой кислоты приводило к замедлению процесса регенерации на 10,5 %, отодвигая на 2 дня сроки заживления раны по сравнению с контрольной группой.

Боль — это неотъемлемый симптом воспаления [Кукес В.Г., Сычев Д.А., 2002]. Большинство флоголитиков сочетает антиэкссудативную активность с болеутоляющем эффектом [Тринус Ф.П. и др., 1987]. Выявленная на различных моделях воспаления флоголитическая активность водных и спиртовых вытяжек из надземной части земляники лесной побудила исследовать анапьгетические свойства вытяжек изучаемого растения. На модели «уксусные корчи» назначение фитопрепаратов мышам оказывало выраженное обезболивающее действие, достоверно уменьшая количество корчей на 51,1 - 73,8 % по сравнению с контролем. Препараты сравнения - анальгин и ацетилсалициловая кислота сокращали данный показатель на 60,4 % и 49,1 % соответственно.

Обезболивающее действие препаратов земляники лесной регистрировалось также на модели «горячая пластина», в генезе которой основную роль играют простагландины группы Е, повышающие чувствительность ноцицепторов и оказывающих влияние на выделение и действие нейропептидов и возбуждающих аминокислот [Сигидин Я.А. и др., 1988]. Под действием настоя и настойки из надземной части земляники лесной через 1 час после их введения увеличивался латентный период болевой реакции в 1,7 - 3,3 раза. Через 2 часа после введения растительных

препаратов этот показатель достоверно увеличивался в 1,7 - 3 раза относительно контрольных мышей. Препараты сравнения также эффективно удлиняли латентный период болевой реакции.

Дальнейшее изучение анальгетической активности извлечений из земляники лесной проводилось в условиях острой воспалительной реакции, вызванной субплантарным введением мышам каррагенина, поскольку известно, что при болях воспалительного характера ненаркотические анальгетики проявляют высокий обезболивающий эффект [Ясиновский М.А. и др., 1975]. Предварительное курсовое введение настоя и настойки из надземной части земляники лесной мышам после субплантарной инъекции каррагенина приводило к удлинению среднего времени пребывания животных на «горячей пластине» на 56,6 - 135,0 % относительно нелеченных мышей. Ацетилсалициловая кислота и анальгин увеличивали этот показатель на 128,8 % и 42,1 % соответственно по сравнению с контролем.

При изучении влияния препаратов из земляники лесной на развитие воспаления было показано, что во всех проведённых экспериментах вытяжки из растения обладали стресспротективным действием. В связи с этим представлялся интерес углубленного исследования антистрессорной активности вытяжек из земляники лесной на модели иммобилизационного стресса. Иммобилизация животных за шейную складку на 22 часа вызывала изменения соматических показателей у мышей. Так, у стресс-контрольных животных наблюдались значительная инволюция селезёнки на 41 %, тимуса - на 56 %, уменьшение общей клеточности эгих органов, гипертрофия надпочечников (на 37 %) по сравнению с интактными животными. Кроме того, стресс-воздействие оказывало выраженное ульцерогенное действие на слизистую желудка мышей. Проведённый анализ защитного действия исследуемых препаратов на внутренние органы животных показал, что и водные, и спиртовые извлечения из надземной части земляники лесной обладали выраженной стресс-протективной активностью (глубина стресса снижалась на 2 - 6 баллов относительно нелеченных животных). В опытных группах у животных значительно сокращалось количество язв на слизистой желудка, масса тимуса и селезёнки сохранялась на уровне контрольных значений, повышалась клеточность этих органов, отсутствовала гипертрофия надпочечников. Животные, получавшие вытяжки земляники лесной, не теряли в весе относительно контрольной группы.

Известно, что гипоксия является важнейшим патогенетическим фактором, играющим ведущую роль в развитии многих заболеваний [Новицкий В.В., Гольдберг Е.Д., 2001]. На модели однократной гиперкапнической гипоксии водные и спиртовые вытяжки из надземной части земляники лесной не обладали антигипоксичсским эффектом, действуя на уровне контроля или уменьшая продолжительность жизни

мышей в условиях замкнутого гермообъёма. Препарат сравнения - экстракт родиолы розовой достоверно удлинял время до наступления признаков терминальной стадии на 41,6 % относительно контрольной группы. Несмотря на это, извлечения из земляники лесной корригировали изменения в соматической сфере, вызваннные однократным гипоксическим воздействием. Так, под действием настоя (2,5; 5,0 мл/кг) и настойки (2,5 мл/кг) из земляники лесной глубина стресса в опытных группах снижалась на 2 - 4 балла по сравнению с мышами, получавшими только дистиллированную воду. Препарат сравнения также оказывал стресс-протективное действие.

На модели острой тканевой гипоксии применение настоя и настойки из земляники (2,5; 5,0 мл/кг) отодвигало время наступления гибели мышей, достоверно увеличивая на 15,6 - 44,5 % продолжительность жизни животных после введения нитропруссида натрия. Кроме того, водные и спиртовые вытяжки изучаемого растения защищали организм животных от повреждающего действия гипоксии, снижая глубину стресса на 2 - 3 балла по сравнению с острым контролем. Применение экстракта родиолы розовой не оказывало антистрессорного эффекта на организм животных, подвергнутых гипоксическому воздействию.

Вторую серию экспериментов проводили на модели повторной тканевой гипоксии, которая вызывала более серьёзные нарушения в соматической сфере экспериментальных животных. Введение гипоксанта в течение 5 дней на фоне использования настоя (2,5; 5,0 мл/кг), настойки (2,5 мл/кг) из надземной части земляники лесной и препарата сравнения не отодвигало время гибели мышей по сравнению с контролем (хроническим). Несмотря на это, извлечения из земляники лесной в условиях многократной тканевой гипоксии оказывали выраженное стресс-протекторное действие, снижая глубину стресса на 4 - 7 баллов по сравнению с хроническим контролем в основном за счёт отмены гипертрофии надпочечников и сокращения числа геморрагических деструкции на слизистой желудка мышей, и тем самым увеличивали адаптационную возможность организма животных. Экстракт родиолы розовой также восстанавливал соматические изменения, вызванные введением нитропруссида натрия. Необходимо отметить, что животные, получавшие вытяжки из надземной части земляники лесной или препарат сравнения, сохраняли массу тела на модели повторной тканевой гипоксии в отличие от мышей, получавших только дистиллированную воду.

В наших экспериментах многократная тканевая гипоксия вызывала значительное уменьшение клеточности тимуса и селезёнки, а также приводила к достоверному снижению общего количества лейкоцитов периферической крови контрольных животных, обусловленное уменьшением содержания сегментоядерных нейтрофилов, зозинофилов и

лимфоцитов по сравнению с интактным контролем. Использование водных и спиртовых вытяжек земляники лесной нормализовало клеточность лимфоидных органов и приводило к достоверному увеличению количества лейкоцитов, в основном за счёт возрастания числа сегментоядерных нейтрофилов и лимфоидных клеток относительно нелеченных животных. Введение экстракта родиолы розовой мышам не оказывало корригирующего действия на гематологические показатели, а лишь приводило к ещё большей депрессии в отношении клеток белой крови по сравнению с контрольной группой.

При изучении влияния препаратов земляники лесной на различные патологические процессы с разным механизмом их возникновения (воспаление, стресс, гипоксия) установлено, что во всех проведённых экспериментах комплексные извлечения из надземной части земляники лесной обладали стресспротективным действием, одним из проявлений которого является гастрозащитный эффект. В связи с этим проведено расширенное исследование антиульцерогенной активности вытяжек из этого растения с использованием различных моделей патологии. На модели нейрогенного язвообразования водные и спиртовые вытяжки из надземной части земляники лесной оказывали выраженное гастрозащитное действие, проявляющееся в снижении степени изъязвления желудка и количества животных с деструкциями, зарегистрированное под влиянием кастоя в дозе 2,5 мл/кг и настойки в дозе 1,25 мл/кг (табл. 1). 22-часовая иммобилизация мышей вызывала изменения во внутренних органах. Так, у стресс-контрольных животных наблюдалось снижение массы и клеточности тимуса и селезёнки, гипертрофия надпочечников по сравнению с фоновыми животными. Использование водных и спиртовых вытяжек из надземной части земляники лесной оказывало выраженное стресс-протективное действие (снижение глубины стресса на 2 - 6 баллов), так как сохраняло весовые показатели тимуса и селезёнки на уровне контрольных значений, повышало клеточность этих лимфоидных органов и отменяло гипертрофию надпочечников. В условиях стресса препарат сравнения, экстракт родиолы розовой, оказывал антистрессорный эффект (при разнице с контрольной группой в 2 балла) в основном за счёт снижения массы надпочечников у мышей. Необходимо отметить, что предварительное курсовое введение животным препарата сравнения не предупреждало появления деструкции на слизистой желудка на фоне развития стресс-реакции. Кроме того, назначение животным настоя (1,25; 2,5 мл/кг) и настойки (1,25; 2,5; 5,0 мл/кг) из земляники лесной предотвращало потерю массы тела в отличие от нелеченных животных и животных, получавших препарат сравнения.

Широко используется в экспериментальной гастроэнтерологии индукция язвообразования введением животным нестероидных противовоспалительных лекарственных средств [Зуева Е.П., Рейхарт Д.В.,

Таблица 1

Влияние вытяжек из надземной части земляники лесной на язвообразование у мышей-самок линии СВА

на модели острого стресса (Х±т)

Группа животных Доза мл/кг Число живот ных Количество язв Количество животных с язвами, % | Индекс | Противоязвенная

мелкие ! крупные общее количество язв Паулса активность (баллы)

Контроль — 8 6,63±1,36 5,38±0,87 12,01±1,36 100 12,01 —

Экстракт родиолы розовой 0,5 5 8,60±1,34 3,00±0,58* 11,60±1,34 100 11,60 1,04

Настой 1,25 4 2,25±0,97* 1,50±0,49* 3,75±0,97* 100 3,75 3,20

2,5 5 2,40±0,77* 1,00±0,38* 3,40±0,77* 80 2,72 4,42

5,0 5 3,40±0,77* 1,60±0,96* 5,00±0,96* 100 5,00 2,40

Настойка 1,25 5 2,80±0,96* 1,00±0,58* 3,80±0,96* 80 3,04 3,95

2,5 5 3,80±1,15 1,60±0,58* 5,40±1,15* 100 5,40 2,22

5,0 5 3,40±0,96* 0,80±0,19* 4,20±0,96* 100 4,20 2,86

Примечание: * — различия достоверны в сравнении с контролем при РК0,05, Ри<0,05.

Крылова С.Г. и др., 2003]. В наших экспериментах внутрижелудочное введение крысам ацетилсалициловой кислоты вызывало язвенное поражение в 100 % случаев. На фоне аспиринового повреждения желудка у крыс исследуемые препараты из надземной части земляники лесной способствовали снижению гиперемии и степени изъязвления слизистой оболочки. Настой земляники лесной проявил гастрозащитное действие во всех изученных дозах, которое выражалось в достоверном уменьшении общего количества язв в 5,1 - 7,7 раза по сравнению с контролем. Это происходило за счёт снижения на 80 - 87 % числа мелких и на 44 - 100 % количества крупных язвенных деструкций. Препарат сравнения не предотвращал развитие язв на слизистой желудка, вызванных ацетилсалициловой кислотой, не проявив тем самым противоязвенной активности. Под действием настоя надземной части земляники лесной в меньшей степени (чем в контроле) была выражена гиперемия и отёчность слизистой. В группах животных, получавших настой в дозах 0,7; 1,25 и 2,5 мл/кг, гиперемия слизистой желудка вообще отсутствовала. Наряду с изучением антиульцерогенной активности настоя земляники лесной также проводилось исследование гастрозащитных свойств спиртовой вытяжки из лекарственного растения. Наиболее эффективной оказалась настойка земляники в дозе 2,5 мл/кг, которая предотвращала развитие мелких язв в 2 раза с отсутствием крупных деструкций, в результате чего способствовала снижению общего числа язв на 52 % по сравнению с контролем. При этом коэффициент противоязвенной активности составил 2,6 балла. Защитное действие на слизистую желудка на фоне субхронического повреждения аспирином у крыс было зарегистрировано под влиянием настойки из надземной части земляники лесной в дозах 1,25 и 5,0 мл/кг. Это выразилось в уменьшении степени изъязвления слизистой желудка в 1,5 и 1,7 раза соответственно, отсутствии крупных язв по сравнению с контролем. Предварительное курсовое введение животным спиртовых извлечений из изучаемого растения снижало выраженность степени гиперемии на 60 - 80 % по сравнению с контролем. Исследование внутренних органов на модели аспиринового язвообразования показало, что введение водной вытяжки из надземной части земляники лесной сохраняло или увеличивало массу внутренних органов, на 1 - 3 балла нивелируя глубину стресса у крыс. При введении настоя земляники лесной в дозах 0,7; 1,25; 2,5 мл/кг сохранялась масса тела животных, в то время как контрольные животные теряли в весе. Плантаглюцид оказывал чёткий стресспротективный эффект и способствовал сохранению массы тела животных на данной модели язвообразования.

Нарушение моторно-эвакуаторной функции верхних отделов желудочно-кишечного тракта принято рассматривать в ряду «агрессивных» факторов язвообразования [Дегтярева И.И., Харченко Н.В., 1995; Чурин Б.В., 1996]. В результате проведённого эксперимента было установлено, что водные и спиртовые вытяжки из земляники лесной оказывали существенное

тоногенное действие на гладкую мускулатуру кишечника, ускоряя на 71,2 - 95,3 % продвижение гастро-дуоденального содержимого кишечника по сравнению с контрольной группой. Взятый в качестве препарата сравнения метоклопрамид стимулировал моторно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта на 17 %. При этом, у мышей, получавших ацетилсалициловую кислоту, наблюдалась тенденция к снижению моторно-эвакуаторной деятельности желудочно-кишечного тракта на 8,6 % относительно группы контроля.

В результате проведённых исследований с использованием различных патологических моделей (воспаление, гипоксия) установлено, что водные и спиртовые вытяжки из надземной части земляники лесной нормализуют показатели периферической крови и (или) костного мозга у экспериментальных животных. Кроме того, изучаемые препараты из растения проявляют выраженные антистрессорные и гастрозащитные свойства. В связи с вышесказанным представлялось интересным экспериментальное исследование, направленное на изучение фармакологических свойств спиртовых вытяжек из земляники лесной после воздействия цитостатика. Данная экспериментальная модель является «жёсткой», так как повреждаются все ростки кроветворения и внутренние органы у животных. Проведённое исследование позволило установить, что однократное введение мышам циклофосфана в дозе 125 мг/кг оказывало выраженное стрессиндуцирующее действие, проявляющееся в уменьшении массы и клеточности селезёнки и тимуса, гипертрофии надпочечников, появлением геморрагических деструкций на слизистой оболочке желудка. Назначение галенового препарата из надземной части земляники лесной снижало токсическое влияние цитостатика на внутренние органы животных, уменьшая глубину стресса на 2 - 5 баллов с 4-х по 8-е сутки по сравнению с группой контрольных животных. Стресспротекторные свойства фитопрепарата реализовывались преимущественно в виде улучшения динамики восстановления клеточности селезёнки и тимуса и гастрозащитного действия на протяжении всего периода наблюдения.

Анализ миелограмм показал, что в указанный период имело место глубокое подавление как гранулоцитопоэза, так и эритропоэза. Выраженное угнетение процессов костномозгового кроветворения приводило, в свою очередь, к развитию панцитопенического состояния, характеризующегося значительным (по отношению к исходному уровню) снижением в периферической крови количества всех форм лейкоцитов. Использование настойки из надземной части земляники лесной приводило к стимуляции процессов костномозгового кроветворения, подавленных циклофосфаном. Так, общее содержание клеток костного мозга после назначения растительного препарата на 4-е, 7-е, 8-е и 11-е сутки эксперимента было достоверно выше (в 1,2 — 1,3 раза), чем у мышей, получавших только

цитостатик. Выявленное увеличение общего числа миелокариоцитов во все сроки исследования у животных, получавших спиртовую вытяжку земляники лесной, обусловлено преимущественно увеличением числа незрелых и зрелых форм нейтрофильных гранулоцитов. Усиление процессов постцитостатической регенерации гранулоцитопоэза в костном мозге под действием растительного препарата сопровождалось достоверным увеличением в периферической крови, по сравнению с контрольной группой, общего количества лейкоцитов (4,5,6,7-е сутки), абсолютного числа сегментоядерных (5-е сутки) и палочкоядерных (5,6,8-е сутки) нейтрофилов.

к Необходимо отметить, что в результате однократного воздействия

цитостатика в периферической крови контрольных животных развилась выраженная ретикулоцитопения. Спиртовая вьггяжка из надземной части земляники лесной на 8, 11-е сутки эксперимента достоверно увеличивала число ретикулоцитов относительно контрольных мышей.

При действии антибластомного препарата наблюдалось увеличение выхода в циркулирующую кровь мышей эритроцитов с остатками ядерного материала (особенно их число увеличивалось на 6 - 11-е сутки исследования). Вероятно, в данном случае это связано с нарушением механизмов адаптации к повреждающему фактору на кпеточном и внутриклеточном уровнях организации жизнедеятельности организма [Хлусов И.А. и др., 1993]. У животных, получавших настойку земляники лесной, на 7, 8, 11-е сутки после цитостатического воздействия в периферической крови достоверно снижалось количество эритроцитов с микроядрами по сравнению с контрольной группой. Исходя из полученных нами данных, можно утверждать, что спиртовая вьггяжка из растения обладает антимутагенными свойствами, так как микроядерный тест предназначен для выявления уровня генетических поломок в организме.

Таким образом, в результате проведённого расширенного исследования с использованием самых разнообразных экспериментальных моделей патологических процессов и направленного на изучение фармакологических свойств комплексных извлечений из земляники лесной, установлена способность изученных вытяжек земляники лесной

1 поддерживать организм на определённом уровне устойчивости на фоне

развития разнообразных стресс-индуцирующих условий, обусловленных различными по своей природе воздействиями, в том числе носящих экстремальный характер. На основании полученных нами экспериментальных данных выявлен широкий спектр фармакотерапевтической активности у водных и спиртовых вытяжек из надземной части земляники лесной: противовоспалительное, анапьгетическое, ранозаживляющее, гастрозащитное, стимулирующее действие на моторно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта, антигипоксическое, антистрессорное, цитопротекторное. Кроме этого, нами

впервые показано нормализующее влияние комплексных извлечений из земляники лесной на количественные показатели центрального и периферического отделов системы крови на фоне развития воспаления и экстремальных воздействий (гипоксическая травма, воздействие цитостатиком). Однако, главными на наш взгляд являются противовоспалительные эффекты вытяжек из надземной части земляники лесной, не уступающие по своей эффективности, а в ряде случаев и превосходящие по действию нестероидные противовоспалительные препараты. Известно, что поливалентность действия синтетических антифлогистиков объясняет неспецифичность клинического эффекта и лежит в основе побочных явлений при их применении (ульцерогенное действие на желудочно-кишечный тракт, нарушение функции печени, почек, центральной нервной системы, гематотоксичность, развитие аллергических реакций и многие другие) [Ясиновский М.А., Лещинский А.Ф., Баркаган З.С. и др., 1975; Тринус Ф.П. и др., 1987; Сигидин Я.А и др., 1988; Белоусов Ю.Б., Моисеев B.C., Лепахин В.К., 1993; Зиганшина Л.Е., Султанова А.Ф., Хазиахметова В.Н. и др., 2002]. В отличие от синтетических препаратов противовоспалительной направленности изученные нами растительные препараты земляники лесной выгодно отличаются от последних тем, что наряду с выраженными противовоспалительными свойствами, они не являются токсичными, имеют широкий спектр фармакотерапевтического действия и не вызывают побочных эффектов. Высокий уровень сопротивляемости организма в экстремальных условиях под действием изучаемых фитопрепаратов земляники лесной обусловлен комплексом биологически активных веществ, стимулирующий защитные механизмы организма.

Полученные нами данные позволяют расширить область медицинского применения комплексных извлечений из земляники лесной и рекомендовать их в качестве терапевтического средства для приёма внутрь при заболеваниях, сопровождающихся острой или хронической воспалительной реакцией.

ВЫВОДЫ

1. Комплексные извлечения из надземной части земляники лесной обладают выраженной флоголитической активностью (угнетают развитие отёка, вызванного каррагенином, формалином, адьювантом Фрейнда, ослабляют выраженность гиперемии воспалённой конечности, ингибируют образование гранулематозно-фиброзной ткани). На моделях формалинового отёка лапы крыс и адъювантной болезни настойка из надземной части земляники садовой оказывала существенный противовоспалительный эффект, не уступая по эффективности спиртовой вытяжке из земляники лесной и индометацику.

2. Водные и спиртовые извлечения из надземной части земляники лесной проявляют ранозаживляющие (стимулируют заживление кожной раны) и обезболивающие свойства (уменьшают восприятие болевых раздражений на моделях «уксусные корчи», «горячая пластина», в том числе на фоне острого асептического воспаления конечности).

3. Вытяжки из земляники лесной оказывают антигипоксический эффект на модели острой тканевой гипоксии.

4. Комплексные извлечения из земляники лесной нормализуют показатели системы крови (периферическая кровь и костный мозг) на различных патологических моделях (воспаление, повторная тканевая гипоксия).

5. Вытяжки из исследуемой части земляники лесной обладают выраженным гастрозащитным действием (уменьшают количество геморрагических деструкций на слизистой оболочке желудка и число животных с деструкциями) на разных моделях язвообразования (нейрогенной, аспириновой язвы, на фоне воспаления и гипоксической травмы) и стимулирующим влиянием на моторно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта (ускоряют эвакуацию гастро-дуоденального содержимого).

6. Стресспротективное действие комплексных извлечений из надземной части земляники лесной (на фоне воспаления, различных моделей гипоксии, острого стресса и после цитостатического воздействия) связано с предотвращением инволюции тимико-лимфатического аппарата, уменьшением гипертрофии надпочечников, выраженным противоязвенным эффектом и нормализацией показателей системы крови.

ПЕРЕЧЕНЬ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации

1. Цитопротекторные эффекты настойки надземной части FRAGARIA VESCA L. в условиях интоксикации циклофосфаном // Растительные ресурсы. - 2003. - Т. 39. - Вып. 4. - С. 130 - 134. (соавторы Аксиненко С.Г., Пашинский В.Г.).

2. Гастрозащитные свойства настоя надземной части земляники лесной // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии. - 2003. -№ 16. - С. 149 - 150. (соавторы Аксиненко С.Г., Пашинский В.Г.).

3. Некоторые механизмы адаптогенного действия лекарственных растений // Фундаментальные проблемы фармакологии: Тез. докл. - Москва, 2003. - С. 72. (соавторы Пашинский В.Г., Поветьева Т.Н., Зеленская К.Л., Аксиненко С.Г., Нестерова Ю.В., Горбачёва A.B.).

4. Ранозаживляющая активность вытяжек из земляники лесной // Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине: Тез. докл. - Улан-Удэ, 2003. - С. 51 - 52. (соавторы Аксиненко С.Г., Пашинский В.Г.).

5. Особенности механизма адаптогенного действия лекарственных растений // Актуальные вопросы тканевой терапии и перспективы применения природных биологически активных веществ в современной медицине: Матер, международной конфер. - Одесса, 2003. - С. 185 - 186. (соавторы Поветьева Т.Н., Пашинский В.Г., Зеленская KJL, Аксиненко С.Г., Нестерова Ю.В., Горбачёва A.B., Гайдамович H.H., Першина О.В., Жданов В.Н.).

6. Влияние вытяжек из надземной части земляники лесной на течение острого стресса // Актуальные проблемы фармакологии: Тез. докл. -Барнаул, 2003. - С. 20. (соавторы Аксиненко С.Г., Пашинский В.Г.).

7. Механизмы адаптогенной активности вытяжек из сапицинсодержащих растений // Актуальные проблемы фармакологии: Матер, конфер., посвящённной 20-летию ГУ НИИ фармакологии - Томск, 2004. - С. 27 -29. (соавторы Аксиненко С.Г., Пашинский В.Г.).

8. Противовоспалительные свойства настойки земляники лесной И Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины: Матер. 5-й молодёжной науч. конфер. СО РАМН. - Новосибирск, 2004. - С. 20 - 22. (соавторы Аксиненко С.Г., Пашинский В.Г.).

Патенты

1. Приоритетная справка №2003111563 от 21.04.2003 г. «Противоязвенное средство» (соавторы Аксиненко С.Г., Пашинский В.Г., Поветьева Т.Н., Зеленская K.J1., Нестерова Ю.В., Горбачёва A.B.).

í

!

t i

!

i

t *

¡ »

I

¡

t í

!

I-7445

РНБ Русский фонд

2006-4 5826

Тираж 100. Заказ 322. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники. 634050, г. Томск, пр. Ленина, 40.

Актуальность проблемы

В последние годы наметился определённый сдвиг в сторону широкого применения фитопрепаратов в медицине. Разработанные и широко применяемые в мировой медицине препараты растительного происхождения являются убедительным примером того, как решение многих проблем, связанных с лечением и профилактикой трудно излечимых заболеваний, необходимо искать в самой природе [120]. Преимущества применения фитопрепаратов очевидны и обусловлены их неоспоримыми достоинствами, в том числе широким спектром фармакологического действия в сочетании с низкой токсичностью, возможностью длительного применения без побочных эффектов и практически отсутствием противопоказаний [88, 8, 178]. Кроме того, комплекс веществ, входящих в состав лекарственных растений, может придать им дополнительные и, зачастую, весьма полезные свойства, которые у индивидуальных соединений, выделенных из тех же растений, отсутствуют [135].

В связи с этим, видится актуальным поиск, разработка новых препаратов растительного происхождения с широким спектром фармакологических эффектов, а также их внедрение в практику здравоохранения.

Из большого арсенала лекарственных растений, произрастающих в Западной Сибири, наше внимание привлекла земляника лесная семейства розоцветных. Это растение является одним из перспективных объектов исследования в этом направлении. В народной медицине земляника лесная применяется в качестве противовоспалительного, ранозаживляющего, потогонного, мочегонного, кровоостанавливающего, вяжущего средства [174]. В научной медицине она является мало изученным растением с узким спектром применения. Большая сырьевая база, доступность сырья, высокая продуктивность, широкие возможности культивирования позволяют считать землянику лесную перспективным объектом исследования.

Цель исследования:

Целью настоящей работы явилось изучение спектра фармакотерапевти-ческого действия комплексных извлечений из надземной части земляники лесной.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Провести сравнительное изучение противовоспалительных свойств комплексных извлечений из надземной части земляники лесной и земляники садовой и их действие на показатели системы крови на разных моделях острого и хронического воспаления.

2. Оценить регенераторные возможности водных и спиртовых вытяжек из надземной части земляники лесной.

3. Изучить обезболивающее действие вытяжек из надземной части земляники лесной.

4. Исследовать антигипоксические свойства комплексных извлечений из земляники лесной на моделях острой и повторной гипоксии и их влияние на показатели системы крови.

5. Изучить гастрозащитные свойства вытяжек из надземной части земляники лесной на разных моделях патологии и оценить их действие на мо-торно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта.

6. Исследовать стресспротективное действие комплексных извлечений из земляники лесной и их влияние на показатели системы крови на фоне воспаления, различных моделей гипоксии, острого стресса и после цитостатиче-ского воздействия.

Научная значимость и новизна результатов

1. Впервые экспериментально показано, что водные и спиртовые извлечения из надземной части земляники лесной обладают выраженной противовоспалительной и обезболивающей активностью, не уступая по своей эффективности нестероидным противовоспалительным препаратам. На фоне воспаления препараты земляники садовой также обладают существенными противовоспалительными свойствами и корригируют показатели системы крови и внутренних органов.

2. Выявлено, что водные и спиртовые вытяжки из надземной части растения проявляют ранозаживляющие и гастрозащитные свойства, оказывают стимулирующее действие на двигательную активность желудочно-кишечного тракта.

3. Установлено, что комплексные извлечения из земляники лесной обладают широким спектром фармакологической активности: нормализуют показатели системы крови и внутренних органов на фоне воспаления, гипоксии, стресса и цитостатической болезни, обладают антигипоксическими и выраженными стресспротективными свойствами.

Научно-практическая ценность работы

Результаты экспериментальных исследований служат основанием для разработки новых лекарственных препаратов из надземной части земляники лесной в качестве профилактического и терапевтического средства при заболеваниях, в основе которых лежит воспаление разной степени интенсивности, а также при патологических состояниях пищеварительной системы и коррекции нарушений, возникающих в организме при цитостатической терапии. Из фитопрепаратов земляники лесной наиболее перспективными для терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта являются водные извлечения из надземной части растения, а для лечения воспаления — преимущественно спиртовые. Часть данных по изучению фармакологической активности земляники лесной оформлены заявкой на изобретение №2003111563 «Противоязвенное средство», по которой получен приоритет от 21.04.2003 г.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Водные и спиртовые извлечения из надземной части земляншси лесной проявляют выраженную противовоспалительную активность, одновременно оказывая нормализующее влияние на показатели системы крови, внутренних органов, а также обезболивающее и стресспротективное действие.

2. Вытяжки из надземной части земляники лесной оказывают защитное действие на слизистую оболочку желудка на различных моделях язвообразо-вания (нейрогениой, аспириновой язвы, а также на фоне воспаления, гипоксии, цитостатической болезни), усиливают моторио-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта, обладают ранозаживляющими свойствами.

3. Извлечения из земляники лесной проявляют антигипоксическую (на модели острой тканевой гипоксии) и стресспротективную (на различных патологических моделях) активность.

4. Спиртовая вытяжка из надземной части земляники лесной нивелирует токсическое влияние циклофосфана на внутренние органы и нормализует показатели центрального и периферического отделов системы крови.

Апробация работы

Основные положения и результаты диссертационной работы доложены на 2-м съезде Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (г. Москва, 2003); на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы тканевой терапии и перспективы применения природных биологически активных веществ в современной медицине» (г. Одесса, 2003); на 11-й научно-практической конференции «Достижения современной гастроэнтерологии» (г. Томск, 2003); на научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине» (г. Улан-Удэ, 2003); на научной конференции, посвященной 50-летию АГМУ «Актуальные проблемы фармакологии» (г. Барнаул, 2003); на конференции, посвященной 20-летию НИИ фармакологии (Актуальные проблемы фармакологии» (г. Томск, 2004); на 5-й конференции молодых учёных СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (г. Новосибирск, 2004).

Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 8 печатных работ.

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 204 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 246 источников, из них 55 на иностранном языке. Диссертация иллюстрирована 46 таблицами и 6 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. Комплексные извлечения из надземной части земляники лесной обладают выраженной флоголитической активностью (угнетают развитие отёка, вызванного каррагенином, формалином, адъювантом Фрейнда, ослабляют выраженность гиперемии воспалённой конечности, ингибируют образование гранулематозно-фиброзной ткани). На моделях формалинового отёка лапы крыс и адъювантной болезни настойка из надземной части земляники садовой оказывала существенный противовоспалительный эффект, не уступая по эффективности спиртовой вытяжке из земляники лесной и индометацину.

2. Водные и спиртовые извлечения из надземной части земляники лесной проявляют ранозаживляющие (стимулируют заживление кожной раны) и обезболивающие свойства (уменьшают восприятие болевых раздражений на моделях «уксусные корчи», «горячая пластина», в том числе на фоне острого асептического воспаления конечности).

3. Вытяжки из земляники лесной оказывают антигипоксический эффект на модели острой тканевой гипоксии.

4. Комплексные извлечения из земляники лесной нормализуют показатели системы крови (периферическая кровь и костный мозг) на различных патологических моделях (воспаление, повторная тканевая гипоксия).

5. Вытяжки из исследуемой части земляники лесной обладают выраженным гастрозашитным действием (уменьшают количество геморрагических деструкций на слизистой оболочке желудка и число животных с деструкциями) на разных моделях язвообразования (нейрогенной, аспириновой язвы, на фоне воспаления и гипоксической травмы) и стимулирующим влиянием на моторно-эвакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта (ускоряют эвакуацию гастро-дуоденального содержимого).

6. Стресспротективное действие комплексных извлечений из надземной части земляники лесной (на фоне воспаления, различных моделей гипоксии, острого стресса и после цитостатического воздействия) связано с предотвращением инволюции тимико-лимфатического аппарата, уменьшением гипертрофии надпочечников, выраженного противоязвенного эффекта и нормализацией показателей системы крови.