Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое исследование сныти обыкновенной

На правах рукописи

005049Ьоэ

Агеев Виталий Аркадьевич

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СНЫТИ ОБЫКНОВЕННОЙ (АЕвОГООШМРООЛСЮ{ША Ь.)

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

14 ФЕВ 2013

Самара —2013

005049585

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор - Ханииа Миииса Абдуллаевна

Официальные оппоненты:

Авдеева Елена Владимировна - доктор фармацевтических наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии, профессор кафедры

Белоусов Михаил Валерьевич — доктор фармацевтических наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармации факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов, заведующий кафедрой

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «У» илмЖ(к 2013 г. в {Р',йО часов на заседании Диссертационного совета Д 208.085.Оо при государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 443079, г. Самара, пр. К. Маркса, 165 Б.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171.

Автореферат разослан «?Э » Мс&оЛЛ 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, / ^

кандидат фармацевтических наук, доцент СЯОг^Петрухина Ирина Константиновна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Использование фитопрепаратов в медицине для лечения и профилактики различных заболеваний в настоящее время находит широкое применение. Лекарственные средства из растительного сырья обладают рядом преимуществ, в сравнении с синтетическими, они характеризуются мягкостью воздействия на организм человека, отсутствием побочных эффектов, возможностью длительного применения с целью лечения и профилактики заболеваний (Самылина И.А. и др., 2003; Куркин В.А., 2009; Киселева Т.Н. и др., 2010; Николаев С.М., 2012). Кроме того, в связи с тем, что растения содержат комплекс биологически активных веществ, при их использовании можно добиться не только устранения причины заболевания, но и комплексного, благотворного воздействия на весь организм. Перспективным направлением в практической медицине является совместное использование синтетических лекарственных средств и фитопрепаратов при лечении многих заболеваний, например, онкологических (Пашинский В.Г., 1991; Гольдберг Е.Д., 2000).

Современные противоопухолевые химиопрепараты, наряду с высокой эффективностью лечения, имеют небольшой порог лечебной и токсической доз и характеризуются невысокой селективностью, что приводит к токсическому действию как на опухолевые, так и на нормальные активно пролиферирующие ткани. Одним из способов повышения успешности антибластомной терапии является оптимизация применения используемых химиопрепаратов за счет включения в схемы лечения средств, повышающих эффективность лечения и снижающих выраженность побочных эффектов (Лосева М.И., 2005).

Перспективными в этом плане являются модификаторы биологических реакций, проявлением действия которых является повышение эффективности противоопухолевого лечения посредством воздействия на регуляторные гомеостатические структуры организма. Лекарственные растения содержат обширный комплекс БАС, обладающих высокой биологической доступностью и легко включающихся в различные метаболические процессы, проявляющие при этом относительно «мягкое» влияние на ход гомеостатических реакций. В ряде экспериментов, проведенных учеными на животных, растительные средства повышали эффективность цитостатической терапии, усиливая ее противоопухолевую активность и снижая токсичность (Гольдберг Е.Д., 2000). В связи с этим применение растительных препаратов в комплексе с химиотерапией представляет большой интерес, является перспективным направлением и нуждается во всестороннем изучении. В рамках этого направления одной из актуальных задач является поиск новых нетоксичных растений, отвечающих заданным свойствам.

С этой точки зрения представляет интерес растение - сныть обыкновенная (Aegopodium podagraria L., Apiaceae). В Европейских странах Aegopodium podagraria L. является официнальным растением и применяется в практической медицине в качестве противовоспалительного средства (British herbal Pharmacopoeia, 1996). В народной и традиционной медицинах сныть обыкновенная применяется при широком спектре

заболеваний, в качестве поливитаминного, противовоспалительного, детоксикационного, общеукрепляющего и диуретического средства (Раст. ресурсы СССР, 1988; Штрыголь С.Ю., 2008; Раст. Ресурсы России, 2009). В экспериментальной медицине доказана высокая детоксикационная и противомикробная (в отношении патогенных для человека микробов) активность суммарных извлечений из травы Aegopodium podagraria. Трава сныти обыкновенной входит в состав комплексной пищевой добавки, которая рекомендуется для профилактики онкологических заболеваний (Штрыголь С.Ю., 2008; 51еГапоу1с О., 2009).

Aegopodium podagraria имеет обеспеченную сырьевую базу, она произрастает на всей территории России, характеризуется образованием чистых зарослей. Для нее характерна высокая скорость освоения новых территорий (Ухачева В.Н. и др., 2001; Михайлова Н.В. и др., 2006, 2008). Однако, не смотря, на значительные сырьевые запасы, высокую биологическую активность, сныть обыкновенная в нашей стране применяется только в народной медицине. В связи с этим перспективным представляется использование Aegopod¡um podagraria Ь. в практической медицине в комплексе с химиотерапией с целью снижения ее побочных эффектов и, как следствие, повышения эффективности лечения и качества жизни пациентов.

Известно, что качественный состав и количественное содержание БАС в растениях и в растительных экстрактах определяет доминирование и степень выраженности фармакологического эффекта конкретного растения, а также определяет выбор его при назначении с лечебными и профилактическими целями. К моменту начала исследования химический состав растения сныти обыкновенной являлся недостаточно изученным.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является проведение комплексного фармакогностического исследования надземной части сныти обыкновенной (Aegopodium podagraria Ь.) и оценка возможности применения её для снижения токсического воздействия химиопрепаратов на печень.

Для достижения поставленной цели необходимо решение следующих задач:

1. Проведение общего фитохимического анализа надземной части Aegopodшm podagraria Ь., произрастающей на территории Сибири и Европейской части РФ, с целью выявления основных групп биологически активных соединений.

2. Изучение качественного состава и количественного содержания основных групп биологически активных соединений надземной части Aegopodium podagraria Ь., разработка методик их количественного определения.

3. Исследование динамики качественного состава и количественного содержания основных групп биологически активных соединений надземной части Aegopodium podagraria Ь. в зависимости от места произрастания, фазы вегетации, морфологической группы сырья.

4. Проведение анатомо-морфолгического исследования надземной части Aegopodшm podagraria Ь. для установления макро- и микро-диагностических признаков сырья.

5. Проведение товароведческого анализа для установления норм качества лекарственного растительного сырья Aegopodiumpodagraria Ь.

4

6. Проведение химико-технологических исследований по разработке способа получения сухого экстракта из надземной части Aegopoílium podagraria.

7. Выявление и оценка биологической активности экстракта Ас^оросНит ройа^гапа Ь. сухого.

8. Обобщение полученных данных и на их основе разработка проекта нормативного документа на траву Ае^ороЛит рос!а^гаг1а Ь.

Научная новизна. Впервые проведен сравнительный фармакогностический анализ образцов надземной части Aegopodшm рос1а£гаг'ю Ь. в зависимости от фазы развития, места произрастания и по морфологическим группам сырья.

Микроскопический анализ образцов надземной части Ас^орисИит podagraria по морфологическим группам сырья, в зависимости от места произрастания, позволил выявить их микро-диагностические признаки.

Детально изучены качественный состав, количественное содержание основных групп биологически активных соединений в надземной части Aegopodшm podagraria (флавоноидов, гидроксикоричных кислот, кумаринов, эфирного масла, кислоты аскорбиновой, полисахаридов, дубильных веществ, аминокислот, хлорофиллов, макро- и микроэлементов, каротиноидов) и их динамика по органам, по фазам развития растения и по местам произрастания. Определена фаза развития растения, оптимальная для сбора сырья.

Изучен компонентный состав соединений фенолыюго комплекса Aegopodium podagraria, впервые установлено наличие феруловой, транс-коричной кислот, рутина, кверцетнна рамнозида, буплерина, эскулина, эскулетина, скополетина, кумарина и ангелицина.

Изучена эндогенная изменчивость качественного состава и количественного содержания макро- и микроэлементов Aegopodi¡tm podagraria. В траве установлено наличие 61 химического элемента (48 элементов впервые). Впервые проведено исследование элементов в органах растения - листьях, стеблях и соцветии, в них обнаружен 61 элемент и определено их количественное содержание.

Впервые проведен анализ надземной части Aegopodium podagraria, произрастающей на территории Сибири, на содержание эфирного масла, изучена динамика его содержания в зависимости от места произрастания. В составе образцов эфирного масла надземной части Aegopodium podagraria, произрастающей на территории Сибири впервые обнаружены: а-терпинен, п-цимол, цис-Р-оцимен, транс-Р-оцимен, 4-терпинеол, Р-копаен, Р-элемен, 9-эпи-изокариофиллен, хумулен, р-Е-фарнезен, у-муролен, гермакрен Д, аромадендрен, Е,Е-а-фарнезен, у-кадинен, 8-кадинен, спатчуленол и установлена их структура.

В надземной части Aegopodium podagraria обнаружено 14 аминокислот: триптофан, пролин, аспарагиновая кислота, фенилалашш, изолейцин, норвалин, серии., гистидин, глутаминовая кислота, метионин, лизин, треонин, валин, лейцин.

Установлено наличие антиоксидантной активности суммарного извлечения из надземной части Aegopodillmpodagraria.

Разработаны оптимальные технологические параметры для получения сухого экстракта из надземной части Aegopodium podagraria.

Экстракт Aegopodium podagraria сухой по составу основных групп биологически активных веществ, макро- и микроэлементов соответствует исходному сырью.

Впервые установлена способность экстракта Аegopodium podagraria сухого снижать степень альтеративных патоморфологических изменений в клетках печени при проведении полихимиотерапии.

Практическая значимость. Данные о составе биологически активных веществ, полученные в результате проведенных исследований, могут быть использованы при целенаправленном создании фитопрепаратов из травы Aegopodium podagraria, а также для введения растения в отечественную научную медицину.

Определены сроки и оптимальная фаза вегетации для заготовки сырья, а также сырьевая часть, подлежащая заготовке. Разработаны критерии, позволяющие установить подлинность сырья - травы Aegopodium podagraria, определены показатели его доброкачественности.

Предложены методики количественного определения суммы гидроксикоричных кислот, флавоноидов в траве Aegopodium podagraria. Методика количественного определения суммы дубильных веществ, аминокислот в траве Aegopodillm podagraria введена в практику научных исследований растительных объектов и учебного процесса на кафедре фармакогнозии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ. Разработанная методика количественного определения суммы флавоноидов в надземной части Aegopodium podagraria может быть использована при анализе других видов растительного сырья.

Результаты работы использованы при разработке проекта ФСП на предлагаемый новый вид лекарственного сырья «Сныти обыкновенной трава».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с научной тематикой исследований кафедры фармакогнозии и ботаники Новосибирского государственного медицинского университета «Поиск, изучение, создание и внедрение новых лекарственных средств растительного и синтетического происхождения и организационных форм фармацевтической деятельности» (государственная регистрация № 01200807420) и комплексной целевой программой СО РАМН «Здоровье человека в Сибири» (государственная регистрация № 01.9.2002479).

Положения, выносимые на защиту:

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование использования травы Aegopodшm podagraria Ь. для получения экстракта сухого с целью разработки на его основе ЛС.

2. Результаты фотохимического анализа компонентного состава и количественного содержания доминирующих групп биологически активных веществ надземной части Aegopodiltm podagraria Ь.

3. Результаты анатомо-морфологических и товароведческих исследований надземной части Aegopodium podagraria L.

4. Обоснование методов стандартизации, показателей и норм качества травы Aegopodium podagraria L.

Апробация работы. Основные результаты диссертации были доложены и обсуждены на ежегодных Российских научно-практических конкурсах-конференциях студентов и молодых ученых "Авиценна-2005, 2006, 2007" (Новосибирск, 2005, 2006, 2007 гг.), X международной экологической студенческой конференции "Экология России и сопредельных территорий. Экологический катализ" (Новосибирск, 2005 г.), 1-ой студенческой научной конференции Сибирского Федерального округа «Качество жизни как критерий санитарно-эпидемиологического благополучия» (Омск, 2005 г.), 66 Всероссийской итоговой студенческой научной конференции им. Н.И. Пирогова (Томск, 2007 г.), II международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (г. Алматы, 2007 г.), Российской научно-практической конференции «Создание лекарственных средств на основе продуктов природного происхождения» (Пермь, 2010 г.), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Ученые Урала и Сибири - развитию отечественной фармации: от синтеза до инновационных лекарственных средств», посвященной 300-летию М.В. Ломоносова (г. Новосибирск, 2011 г.).

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 14 научных работах, из них 4 статьи - в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 183 страницах машинописного текста, содержит 46 таблиц и 46 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объектам и методам исследований, трех глав собственных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 161 источник, из которых 34 - зарубежных

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Характеристика объектов и методов исследования

Объектами исследования послужили образцы гербаризированных растений и образцы свежего, консервированного, воздушно-сухого сырья надземной части Aegopodium podagraria, собранные в различных районах Новосибирской и Ярославской областей и в Алтайском крае в 2005-2010 гг.

Анатомо-морфологический анализ надземных частей растений выполнялся на микроскопе «Микмед» при увеличениях от 70 до 600 раз (Долгова A.A. и др., 1977, Самылина H.A. и др., 2007). Рисунки выполнялись на рисовальном аппарате РА-7У, фотографии - при увеличении до 1000 раз на микроскопе с фотонасадкой «Acsio Vision» (ZEISS).

Общий фитохимический анализ надземной части Aegopodium podagraria на присутствие различных групп биологически активных веществ (БАВ) проведен фармакопейными и общепринятыми методиками (Кузнецова Г.А., 1967; Высочина Г.И. и

др., 1987; Запрометов М.Н., 1993; Куркин В.А. и др., 2005; Ложкин A.B. и др., 2006; Корулькин Д.Ю. и др., 2007; Самылина И.А. и др., 2008).

Компонентный состав БАВ и их количественное содержание определяли с помощью общепринятых в фитохимическом анализе и современных методов исследования: спектрофотометрии, хроматоспектрофотометрии, гравиметрии, БХ, ТСХ, ВЭЖХ, масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой, хромато-масс-спектрометрии.

Обнаружение БАВ в надземной части Aegopodiam podagraria методом ВЭЖХ проводили на жидкостном хроматографе «Милихром А-02» с многоволновым детектором и последующей компьютерной обработкой результатов анализа в программе «МультиХром» для Windows. Хроматографическая идентификация, обнаруженных БАС, проводилась в сравнении со стандартными веществами.

Спектрофотометрические исследования проводились на приборе СФ-56 («Ломо», Россия).

Эфирное масло исследовали методом хромато-масс-спектрометрии на газовом хроматографе Agilent 5890/11 с квадрупольным масс-спектрометром (Agilent MSD 5973N) в качестве детектора и системой автоматического ввода Agilent 7673.

Элементный состав определяли на масс-спектрометре с индуктивно связанной плазмой Elan-DRC II (Perkin-Elmer).

Стандартизацию цельного и измельченного сырья проводили согласно методикам ГФ XI. При разработке проекта ФС на сырье руководствовались ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества ЛС. Основные положения».

Изучение биологической активности экстракта Aegopodium podagraria сухого проводили на животных. Цитотоксическую модель создавали однократным введением комплекса противоопухолевых препаратов по программе CHOP. Экстракт вводили животным внутрижелудочно до и после химиотерапии. Проводили патоморфологическое исследование печени животных. При морфометрическом исследовании на микроскопе Axioimager AI ("ZEISS", Германия) при увеличении в 1000 раз, подсчитывали объемные плотности (Vv, %) нормальных и дистрофически измененных гепатоцитов, некрозов паренхимы печени и численную плотность двуядерных гепатоцитов (Nai).

Для обработки полученных результатов использовали программы Gel-Pro Analyzer 4.0, Adobe Photoshop C52 и VideoTes Morphology 5. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью программ статистической обработки данных Statistica MS Excel, OriginPro 7.5. Для выявления статистической значимости различий использовали параметрический критерий Стьюдента.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Фитохимнческое исследование надземной части Aegopodium podagraria

В надземной части Aegopodium podagraria установлено присутствие гидроксикоричных кислот, флавоноидов, кумаринов, полифенольных окисляемых соединений, полисахаридов, аскорбиновой кислоты, аминокислот, хлорофиллов, эфирного масла, каротиноидов, сапонинов (табл. I).

Методами хроматографии (БХ, ТСХ, ВЭЖХ) в надземной части Aegopodium

8

podagraria установлено наличие 4 гидроксикоричных кислот: феруловая, хлорогеновая, кофейная, /иранокоричная кислоты, 5 флавоноидов: рутин, кверцетин, кверцетина рамнозид, гиперозид, буплерин, 6 кумаринов: эскулин, эскулетин, умбеллиферон, скополетин, ангелицин и кумарин. Анализ сезонной динамики БАС в течение вегетационного периода показал, что фаза цветения характеризуется наиболее полным их компонентным составом.

Таблица 1

Результаты фитохимического анализа надземной части Aegopodium podagraria L.

Группа БАВ Компоненты

Гидрокси кори ч н ые кислоты Феруловая, хлорогеновая, »7/?сн/окоричная, кофейная кислоты

Флавоноиды Рутин, кверцетин, кверцетина рамнозид, гиперозид, буплерим

Кумарипы Эскулин, эскулетин, умбеллиферон, скополетин, ангелицин, кумарин

Полифенольные окисляемые соединения Дубильные вещества гидролизуемой и конденсированной групп

Аминокислоты Гистидин, лизин, аспарагиновая кислота, серим, глутаминовая кислота, треонин, пролин, триптофан, метионин, фенилаланин, валин, норвалин, лейцин, изо-лейцин

Эфирные масла а-Терпинен, п-цимол, цис-Р-оцимен, транс-(3-оцимен, транс-р-оцимен, 4-терпинеол, р-копаен, Р-элемен, 9-эпи-изокариофиллен, р-копаен, хумулен, р-Е-фарнезен, у-муролен, гермакрен Д, аромадендрен, Е,Е-а-фарнезен, у-кадинен, 6-кадинен, спатуленол.

Витамины р-Каротин,кислота аскорбиновая

Хлорофиллы Хлорофилл а

Полисахариды Водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества

В сумме гидроксикоричных кислот надземной части Aegopodium podagraria кислота хлорогеновая является преобладающей, что подтверждается сравнительным анализом хроматограмм и электронных спектров поглощения извлечений из травы Aegopodium podagraria и раствора PCO кислоты хлорогеновой (рис. 1).

Рис. I. Электронные спектры поглощения PCO хлорогеновой кислоты (2) и извлечения из надземной части Aegopoiliumpodagraria (1) (>. max = 326нм)

Присутствие рутина, хлорогеновой и феруловой кислот подтверждено методом ВЭЖХ (рис. 2).

Рис. 2. ВЭЖ-хроматограмма извлечения из надземной части АецортЧит ройа^птч

Обозначения: пики - №4 - хлорогеповая кислота, №14 - рутин, №18 - феруловая кислота

При анализе сезонной динамики количественного содержания основных групп БАС в надземной части Aegopodium podagraria установлено, что они накапливаются в сопоставимых количествах во всех фазах развития растения. При этом в фазе цветения растение обладает наиболее широким качественным составом основных групп БАС и наибольшей биомассой. Так, в фазе цветения надземная часть Aegopodium podagra^•ia накапливает не менее: 5,0% гидроксикоричных кислот, 2,0% флавоноидов, 1,5% кумаринов, 4,0% полифенольных окисляемых соединений, 7,0% водорастворимых полисахаридов, 1,0% пектиновых веществ, 30 мг% аскорбиновой кислоты, 2,5% аминокислот, 0,05% хлорофиллов (табл. 2).

Содержание доминирующих групп БАС в надземной части Aegopodium podagraria но фазам развития, местам сбора н

органам (I\l±m, п=3)

1 руппы БАС Исследуемые образцы **

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Гидроксикоричные кислоты, % * 5,02±0,03 4,94±0,05 5,12±0,04 5,3310,04 5.2110,03 4,9710,04 5,9410,02 0,2510,01 4,6710,02

Флавоноиды. % * 1,7410.02 1,93±0,04 2,1910,02 2,4310,03 2.82Ю.ОЗ 2,7010,02 2,8510,02 0,2710,05 2,0510,02

Кумарины, % * 1,62±0,02 1,731.0,03 1,71±0,02 1,691.0,03 1,7610,03 1,58±0,03 1,9410,04 0,6510,02 1.82Ю.ОЗ

Дубильные вещества. % * 2.90Ю.03 2,5210,04 2,47±0,02 2,7010,03 2,9310,03 2,5510,02 2,5610,01 1,101.0,02 4,9510,02

Аскорбиновая кислота, мг% 13,04±0,12 12,1610,09 17,52±0,11 33,3710,10 31,0810,15 31.S010.10 33.2410,11 24,7910,16 25.6010,12

Хлорофнллы, мг% 50,1010,01 _ *** 50,2110.01 80,2010,01 - - - - -

Аминокислоты. %* 1,85±0,03 1,84Ю,01 2,0810,03 2.5210,02 2,4310,01 2,4910,02 3,1610,02 1,7910,02 2,9210,03

Водорастворимые полисахариды, % 7,12±0,11 - 7,0210,14 7,3210,16 7,21Ю,13 - 7,0510,11 3,5210,14 8,4510,10

Пектиновые вещества, % 1,07±0,13 - 1,0210,15 1,1010,14 1,0610,13 - 1,0810,14 0,4910,14 1,4110,11

Каротпноиды, мг% - - - - 26,1010,02 15,0010,02 10.10i0.01 43.2 НО.02

Примечания: Тидроксикоричиые кислоты в пересчете на хлорогеновую кислоту: флавоноидм в пересчете на рутин: кумарины в пересчете на кумарин, дубильные вещества в пересчете на танин, **1 - Новосибирская область (НСО), фаза отрастания, 2 - Алтайский край, фаза отрастания, 3 - НСО, фаза вегетации, 4 - НСО, фаза цветения, 5 - Ярославская область, фаза цветения, б - НСО, фаза цветения, 7 - НСО, фаза цветения, соцветия, 8 - НСО, фаза цветения, стебли, 9 - НСО, фаза цветения, листья, ***- не исследовхтось

2.2. Исследование эфирного масла из надземной части АецороМит роёа^гаг 'ш Ь.

Эфирное масло, получено экстракцией воздушно-сухой травы Ае%оросНит рос1а^аг1а перегретым водяным паром (на лабораторной установке) и представляет собой легкую подвижную жидкость светло-желтого цвета с приятным ароматным запахом, с выходом 0,06 %.

При исследовании компонентного состава масла методом хромато-масс-спектрометрии обнаружено 64 компонента (рис. 3, табл. 3).

ЛЬипс1а

34СОООО

сооооо

40ОООО

¿ОО 10.ОО 1Э.ОО

зэ.оо

Рис. 3. Газовая хроматограмма эфирного масла Ае^ороМит /нн/ацгапа Ь.

Основными компонентами эфирного масла Aegopoc^ium podagraria являются: лимонен (23,0%), у-терпинен (13,9%), п-цимол (7,2 %), Р-Е-фарнезен (10,6%), р-элемен (3,96%), Е,Е-а-фарнезен (3,1%), а- и Р-пинен (1,2% и 2,6%), сабинен (1,6%), р-мирцен (1,6%), цис-Р-оцимен (2,1%), 9-эпи-изокариофиллен (1,2%), гермакрен Д (11,7%), остальные компоненты содержатся в минорных количествах. Идентифицированные соединения составляют 89,69% от массы масла, из которых 54,85% приходится на монотерпены и 34,84% - на сесквитерпены. Масс-спектры основных компонентов представлены в таблице 4.

Компоненты эфирного масла Aegopod'шmр<н1а»гаг'ш Ь.

№ Время Количественное Компонент № Время Количественное Компонент

пп удерж. соотношение, % пп удерж. соотношение. %

1 3.258 0.267% _ * 33 19.590 0.168% -

2 4.545 0.014% - 34 21.229 0.065% -

3 4.599 0.019% - 35 22.083 0.338% Р-копаен

4 4.696 0.009% - 36 22.380 0.219% -

5 6.145 0.037% - 37 22.607 3.960% Р-элемен

6 6.886 0.528% а-туйен 38 22.834 0.262% -

7 7.080 1.221% а-пинен 39 23.461 1.160% 9-эии- изокариофиллен

8 8.329 1.595% сабипен 40 23.764 0.168% Р-копаен

9 8.416 2.660% Р-пинен 41 24.521 0.641% хумулен

10 8.794 0.092% - 42 24.640 10.588% р-Е-фарнезен

11 8.919 1.594% р-мирцсн 43 24.770 0.053% -

12 9.308 0.176% 44 24.808 0.073% -

13 9.751 0.166% а-терпинен 45 25.078 0.206% -

14 10.027 7.232% п-цимол 46 25.245 0.486% у-муролеп

15 10.173 23.005% лимонен 47 25.386 11.782% гермакреи Д

16 10.340 0.042% - 48 25.532 0.519% аромадендреи

17 10.513 2.117% цис-Р-оцимен 49 25.802 5.851% -

18 10.870 0.612% транс-р-оцимен 50 25.921 0.540% -

19 11.222 13.924% у-терпниен 51 26.105 0.802% гермакреи Л

20 12.249 0.109% терпиполен 52 26.197 3.121% Е,Е-а-фариезен

21 12.411 0.055% - 53 26.365 0.293% у-кадинен

22 12.670 0.080% - 54 26.651 0.900% 8-кадинен

23 12.827 0.060% - 55 28.230 0.202% спатулснол

24 13.563 0.055% - 56 28.397 0.074% -

25 13.703 0.053% - 57 28.705 0.051% -

26 15.368 0.177% 4-терпииеол 58 28.841 0.289% -

27 16.185 0.202% - 59 30.008 0.116% -

28 17.233 0.047% - 60 31.619 0.181% -

29 17.390 0.125% - 61 34.263 0.146% -

30 18.125 0.041% - 62 36.788 0.111% -

31 19.190 0.047% - 63 39.199 0.115% -

32 19.380 0.106% - 64 47.849 0.053% -

Примечания: * - не идентифицировано

Масс-спектры отдельных компонентов эфирного масла надземной части Aegopodium podagraria L

Компонент

Масс-спектр

Компонент

Масс-спектр

Лимонен

г 100%

93

•11 53

" -luJl

50

79

у-Терпинен

or

121 136

-> т/z

13 J 10?.

. A ,, ,*?. Ц 1 ,Jt j L> т/г

О ВО 100

Гермакрен Д

^ 55 67

11» I

Р-Е-Фарнезен

50 iOCI 150 200

-> т/г

100%

П 1 'г 1 т

50 100 150 200

> m/z

п-Цимол

-100«

91 1

tl СЯ TS [

j - *.....- i-^i J-*

р-Элемен

т/г

2.3. Исследование элементного состава надземной части Лс^орснГшт рпс!а^гапа Ь.

В надземной части и экстракте сухом Ле^оросИит podagraria установлено наличие 61 элемента, включающих 5 макроэлементов, 9 жизненно необходимых (табл. 5), 7 условно жизненно необходимых, 15 токсичных и 29 элементов, биологическая роль которых для человека в настоящее время не установлена. Исследование элементного состава надземной части Aegopod¡um podagraria показало, что все морфологические части исследуемого вида растения является перспективными источниками макро- и микроэлементов. По количественному содержанию элементов морфологические части растения можно расположить в ряд по убыванию: листья > соцветия > стебли. По содержанию токсичных элементов исследуемые образцы сырья отвечают требованиям стандарта для БАД (СанПиН 2.3.2.1078-01).

Таблица 5

Элементы надземной части и сухого экстракта Aegopodium podagraria L.

(M±m, n=3)

№ ГШ Элемент Соцветия Листья Стсили Трава Сухой экстракт

Содержание, мкг/г

Макроэлементы

1 К 41992,0±0,5 37120,0±0,5 44802,0±0,5 47263,0±0,9 81528,0±0,5

2 Ca 6282,0±0,7 19203,0±0,4 6631.0±0.5 I0773,0±0,4 1338,0±0.5

3 Р 5821,0±0,9 3330,0±0,8 2714.0±0.6 4558.0±0,7 1112,0±0,4

4 Mg 3885,0±0,4 4277,0±0,5 1609,0±0,4 1893,0±0,5 2565.0±0,7

5 Na 67,7±0,5 46,9±0,5 16,8±0,2 46,9,0±0,2 52,2±0,5

Жизненно необходимые элементы

6 Fe 147,0±0.5 211,0±0,8 38,2±0,5 133,0±0,5 23,4±0,5

7 Mn 65,0±0,5 148,0±0,5 36,4±0,5 33,2±0.5 44,93±0,7

8 Zn 42,9±0,2 22,5±0,1 11,6±0,2 20,9±0,4 33,6±0,4

9 Си 18,0±0,2 6,83±0,1 4,9±0.01 5,15±0,05 11,3±0,5

10 Cr l.09±0,l 1,13±0,1 0,93±0,005 1,44±0,05 12,4±0,5

11 Mo 0,69±0,005 0,79±0,005 0,13±0,005 0,81 ±0,05 0,39±0,01

12 Se 0,55±0,005 0,11 ±0,005 0,23±0,005 0,38±0,05 0,25±0,01

13 Co 0,13±0,005 0,18±0,005 0,052±0,0005 0,12±0,02 0,02±0,005

14 I 0,25±0,01 <0,0005±0,0001 <0,0005±0,0001 <0,0005±0,0001 <0,0005±0,0001

Определение антиоксидантной активности Aegopodшm podagraria Ь.

Проведенные исследования надземной части Aegopodium podagraria показали наличие БАС с прямым механизмом антиоксидантного действия - флавоноиды, полифенольные соединения, фенолкарбоновые и гидроксикоричные кислоты, кумарины, аскорбиновая кислота, каротиноиды и БАС с непрямым механизмом антиоксидантного действия - элементы с переменной валентностью (Мп, Ие, Сг, Со и др.), хлорофиллы, селен, глутаминовая кислота. Для установления наличия антиоксидантной активности (АО) и ее величины проведены сравнительные исследования АО активности суммарных извлечений из морфологических частей Aegopodium podagraria полученных при экстракции водой очищенной, спиртом этиловым (с концентрацией спирта 70%).

Результаты анализа показали, что наибольшую АОА, проявляют водные извлечения из соцветия и листьев (рис. 4, табл. 6).

Таблица 6

Антиоксидантная активность суммарных извлечений из морфологических частей надземной части Aegopod'шm ройа^гапа Ь. (%)

Эстрагент Исследуемые образцы

Стебель Трава Лист Соцветия

Вода очищенная 6,54±0,09 25,12±0,08 48,65±0,12 88,16±0,12

Спирт этиловый 70% 4,74±0,13 21,35±0,18 58,65±0,21 84,56±0,32

Рис. 4. Спектры поглощения продуктов окисления раствора адреналина в карбонат-бикарбонатном буфере в присутствии суммарных извлечений (СИ) из надземной части Aegopodium ройапгаг 'ш (тах = 347нм)

Обозначения: 1. раствор адреналина в карбонат-бикарбонатном буфере, 2. раствор адреналина в карбонат-бикарбонатном буфере + СИ из стеблей, 3. раствор адреналина в карбонат-бикарбонатном буфере + СИ из травы, 4. раствор адреналина в карбонат-бикарбонатном буфере + СИ из листьев, 5. раствор адреналина в карбонат-бикарбонатном буфере + СИ из соцветий.

4. Разработка параметров стандартизации травы Aegopodшm podagrar'ш Ь.

Стандартизацию сырья предложено проводить по двум группам веществ -гидроксикоричным кислотам и полисахаридам. Это связано с тем, что они являются преобладающими и имеют высокую значимость в проявлении фармакологической активности экстракта из надземной части Aegopod¡um podagraria.

Качественное определение предлагается проводить обнаружением присутствия водорастворимых полисахаридов по реакции осаждения спиртом этиловым 95%-м из водного извлечения и реакцию азосочетания на присутствие гидроксикоричных кислот.

4.1. Методика количественного определения гидроксикоричных кислот

Аналитическую пробу воздушно-сухого сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм. Точную навеску сырья (около 1,0 г.) помещают в колбу вместимостью 100 мл, заливают 25 мл спирта этилового 40%-го. К

16

колбе присоединяют обратный холодильник и выдерживают на водяной бане в течение 30 мин. с момента закипания экстрагента. По истечении времени, колбу снимают, содержимое колбы фильтруют через сухой бумажный фильтр, следя за тем, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Затем фильтр помещают в колбу с сырьем и экстракцию повторяют дважды в описанных выше условиях. Фильтраты объединяют и замеряют объем извлечения. Оптическую плотность полученных извлечений замеряют на приборе СФ-56 при длине волны 326 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют спирт этиловый 40%-й. При необходимости проводят разведение извлечения.

Построение калибровочного графика. Около 0,02 г. (точная навеска) ГСО кислоты хлорогеновой, предварительно высушенной при температуре 100-105°С в теченне 3 ч, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 80 мл 40% спирта этилового и перемешивают до полного ее растворения (при необходимости нагревают на водяной бане, охлаждают до комнатной температуры), затем доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Отбирают по 0,75; 1,0; 1,25; 1,5 и 2,25 мл раствора в мерные колбы вместимостью 25 мл и доводят 40%-ным спиртом этиловым до метки. Оптическую плотность растворов измеряют на спектрофотометре СФ-56 при длине волны 326 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 40%-ный спирт этиловый. Для построения калибровочного графика (рис.5) по оси ординат откладывают оптическую плотность, а по оси абсцисс - концентрацию PCO кислоты хлорогеновой в мг в 1 мл раствора.

Калибровочный график PCO ялорогеиовой «ислоты

о 0.2 0.« 0.6 о.а 1 12

Кои миграция PCO хлорогеновой кислоты, а кг/ил

Рис.5. Калибровочный график, построенный по ГСО хлорогеновой кислоты Суммарное содержание гидроксикоричных кислот в сырье в пересчете на хлорогеновуго кислоту вычисляли по формуле:

X = О х У,гш х ур;пв х 100 / К х у„ х щ х (100 - XV), где Э — оптическая плотность исследуемого извлечения;

т - масса сырья, г;

Умш— объем извлечения, полученного из сырья; Ура™- объем разведения, мл.;

Уа., — объем извлечения, взятого на анализ (аликвота) мл.; \у- потеря в массе при высушивании сырья, %;

К - коэффициент пропорциональности, рассчитанный по калибровочному графику.

Предложенная методика количественного определения гидроксикоричных кислот в надземной части Ле^оросНит podagraria надежна и дает воспроизводимые результаты. Ошибка единичного определения при доверительном интервале 95 % не превышает 2,80 % (табл. 7). Валидацию метода проводили по показателям правильность, повторяемость и воспроизводимость.

Таблица 7

Метрологическая характеристика методики количественного определения

гидроксикоричных кислот в сырье Ае^оросИит ройа^гаг'ш Ь.

п Г ^Ср 5 р К Р, С) Ах 8

10 9 5,33 0,00017 0,013 95% 2,23 0,02 2,80%

Надземная часть Ае^ороймт роЛар-аг'ю содержит не менее 4,5% гидроксикоричных кислот.

Для количественной оценки содержания водорастворимых полисахаридов использовати гравиметрический метод.

Содержание водорастворимых полисахаридов в надземной части Ае^оросИит podagraria - не менее 7%.

4.2. Показатели подлинности сырья

Микроскопия. Лист - гппостоматический. Нижняя эпидерма листа выполнена клетками с сильно извилистыми боковыми стенками, покрыта мощным слоем складчатой кутикулы, наиболее выраженной у замыкающих клеток устьиц. Устьица аномоцитного типа, многочисленные, погруженные.

Клетки верхней эпидермы со слабо извилистыми, утолщенными боковыми стенками, покрыты складчатой кутикулой (рис. 6, 7).

Мезофилл листа выполнен паренхимными клетками округлой и лопастной форм. В паренхиме листа и вдоль жилок располагаются вместилища с эфирным маслом желто-коричневого цвета (рис. 7, 8). Листья опушены простыми одноклеточными и многоклеточными волосками по краю листовой пластинки и по жилкам (рис. 9-12).

Эпидерма стебля прозенхимная, прямостенная (рис. 13), устьнчный аппарат и трихомы имеют строение аналогичное строению устьиц и трихом на листе. На поперечном срезе стебель округлый, слаборебристый, полый. Проводящая система пучкового типа.

Рис. 6. Нижняя эпидерма листа

Рис. 9. Простой одноклеточный волосок вдоль жилки

Рис. 10. Простой многоклеточный волосок вдоль жилки

Рис. 12. Простые многоклеточные волоски по краю листа

Рис. 11. Простые одноклеточные волоски по краю листа

Рис. 13. Эпидермальные клетки стебля

Рис. 14. Эпидермальные клетки нижней стороны лепестка венчика

Рис. 15. Папиллы на эпидермальных клетках верхней стороны лепестка венчика

Рис. 16. Схизогенные вместилища в мезофилле лепестка

Эпидерма верхней стороны лепестков выглядит бархатистой, так как покрыта многочисленными папиллами. Устьица не обнаружены. Эпидермальпые клетки нижней стороны лепестков мелкие, с сильно извилистыми стенками, покрыты складчатой кутикулой. Отмечено обилие устьиц. В мезофилле лепестков находятся многочисленные вместилища с эфирным маслом желтого цвета (рис. 14, 15).

Полученные данные использованы при составлении проекта нормативного документа на сырье Aegopodillm podagraria.

4.3. Показатели доброкачественности сырья

В соответствии с требованиями ОСТ 91500.05.001-00 к структуре и перечню разделов фармакопейной статьи на лекарственное растительное сырье, установлены числовые показатели для стандартизации сырья Aegopodiwn podagraria (табл. 8).

Таблица 8

Числовые показатели травы Aegopodшm ро(1идгаг1а Ь.

Показатели Нормы (%)

Гидроксикоричные кислоты Не менее 4,0

Полисахариды Не менее 6,0

Влажность Не более 8,0

Зола общая Не более 14,0

Зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной Не более 0,3

Побуревших, пожелтевших и почерневших частей травы Не более 3,0

Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями с диаметром 7 мм Не более 3,0

Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями с диаметром 0,310 мм Не более 2,0

Органической примеси Не более 2,0

Минеральной примеси Не более 1,0

Результаты проведенных исследований использованы при разработке проекта ФС «Сныти обыкновенной трава».

5. Получение и исследование химического состава экстракта сныти обыкновенной сухого (ЭСОС)

В результате химико-технологических исследований разработан способ получения сухого экстракта из надземной части Aegopodium podagraria. Способ заключается в последовательной экстракции сырья, измельченного до размера частиц 0,5-3 мм 40% этанолом, гидромодуль 1:40, в течение 30 минут при температуре 80-82 °С трехкратно с последующим объединением экстрактов, отгоном этанола, упариванием и сушкой в вакуум-сушильном аппарате. Выход готового продукта составляет - 36-40% от массы воздушно-сухого сырья.

Был получен ЭСОС, который представляет собой кристаллический порошок темно-коричневого цвета, со специфическим запахом, сладковато-горького вкуса, легко

растворимый в воде. Не гигроскопичен, не комкуется. В ЭСОС были определены основные группы БАВ: кумарины - 4,85%, флавоноиды - 9,30%, гидроксикоричные кислоты -11,82%, дубильные вещества - 10,50%, водорастворимые полисахариды - 17,72%, аскорбиновая кислота - 0,41% аминокислоты - 2,73%, макро- и микроэлементы (табл.5). Влажность - 4,24%, зола общая - 9,14%.

5.1. Оценка эффективности ЭСОС в качестве средства, снижающего токсическое влияние цитостатиков на печень

При морфометрическом исследовании гистологических препаратов печени мышей было выявлено, что после проведения ПХТ как с последующим введением ЭСОС (ПХТ + ЭСОС), так и с предварительным (ЭСОС + ПХТ + ЭСОС) наблюдаются деструктивные и дисциркуляторные изменения, но выраженность этих изменений достоверно ниже по сравнению с интактной группой и группой сравнения (табл. 9).

Таблица 9

Результаты морфометрического исследования печени мышей при введении

ПХТ и ЭСОС в разных режимах

Группы Нормальная Дистрофия Некрозы Двуядерпые

наблюдения паренхима печени, гепатоцитов, Уу, паренхимы гепатоциты,

Уу, % % печени, Уу, %

Интактные 80,8±0,8 5,5±0,5 9,0±0,8 1,3±0,2

ПХТ 3 сутки 49,4±1,2а 18,2±1,0 а 27,8±1,0а 1,1 ±0,2

ПХТ + ЭСОС 3 дн 54,5±1,1 аЬ 14,7±0,9а 25,8±1,2" 1,2±0,2

ЭСОС 7 дн + ПХТ 65,6±1,4 а"с 14,7±0,9ас 17,9±0,9аЬс 1,3±0,2

+ ЭСОС 3 дн

а-Т 7 дн + ПХТ + 61,6±1,4ас 12,5±0,7ас 22,7±1,Зас 1,3±0,2

а-Т 3 дн

ПХТ 7 сутки 43,8±1,4а 19,3±0,8а 35,3±1,3а 0,5±0,1 а

ПХТ + ЭСОС 7 дн 46,4±1,1 ь 19,8±0,8Ь 31,4±0,9а" 0,5±0,15 "

ЭСОС 7 дн + ПХТ 53,0±1,0аЬ 16,2±0,9 а" 27,6±0,9а ь 0,8±0,14 "

+ ЭСОС 7 дн

а-Т 7 дн + ПХТ + 50,5±1,6а 17,5±0,9 30,1±1,15а 1,0±0,2а

а-Т 7 дн

Примечания: "достоверные отличия между группами ПХТ с ЭСОС и а-Т от ПХТ без антиоксидантной терапии; ьдостоверные отличия между группами с предварительным введением ЭСОС и без; 'достоверные отличия между ЭСОС и а-Т.

При анализе результатов исследования можно сделать вывод, что печень животных, которым вводили ЭСОС, менее подвержена токсическому влиянию химиотерапии. При этом доля дистрофических изменений клеток печени уменьшилась на 19%, а доля некрозов клеток печени уменьшилась на 35%. Наиболее эффективным режимом введения является введение экстракта до и после проведения полихимиотерапии.

Следовательно, экстракт сныти обыкновенной сухой - эффективное средство фоновой коррекции тяжелых альтеративных изменений внутренних органов, закономерно развивающихся при ПХТ.

выводы

1. Проведено анатомо-морфологнчеекое исследование надземной части Aegopodшm podagraria Ь., в результате которого получены цифровые фотографии и выявлены диагностические признаки для включения в соответствующие разделы проекта ФС «Сныти обыкновенной трава».

2. В результате фитохимического анализа в надземной части Aegopodium podagraria Ь. установлено наличие флавоноидов, гидроксикоричных кислот, кумаринов, полифенольных окисляемых соединений, кислоты аскорбиновой, водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ, макро- и микроэлементов, эфирного масла, аминокислот, хлорофиллов, каротиноидов.

3. В результате исследования травы Aegopodium podagraria с использованием современных методов анализа (ТСХ, ВЭЖХ, ГХ-МС УФ-, масс-спектров) были идентифицированы 4 гидроксикоричные кислоты (феруловая, транс-коричная- впервые), 5 флавоноидов (рутин, кверцитрин, буплерин - впервые), 14 аминокислот, 27 компонентов эфирного масла (17 компонентов впервые), 5 кумаринов (эскулин, эскулетин, скополетин, кумарин и ангелицин - впервые).

4. Установлено, что качественный состав некоторых групп БАС меняется в зависимости от фазы развития (флавоноиды, гидроксикоричные кислоты), и по органам растения (флавоноиды, гидроксикоричные кислоты, кумарины). Качественный состав образцов надземной части Лс^оросИшп роЫадт/ча Ь„ произрастающих в различных точках ареала, существенных различий не имеет.

5. Количественное содержание основных групп БАС Aegopodшm podagraria подвержено эндогенной и сезонной изменчивости. В качестве лекарственного растительного сырья необходимо использовать траву, собранную в фазе цветения. Количественное содержание основных групп БАС в траве в фазе цветения: кумарины -1,9%, флавоноиды - 2,8%, гидроксикоричные кислоты -5,1%, дубильные вещества -5,0%, полисахариды - до 7,0%.

6. Исследование химического состава надземной части Aegopodium podagraria с помощью современных методов анализа позволило определить, что ведущими группами БАС, ответственными за проявление биологической активности являются гидроксикоричные кислоты и водорастворимые полисахариды.

7. С использованием химико-технологических исследований разработан способ получения средства (сухого экстракта) для профилактики осложнений полихимиотерапии, заключающийся в последовательной экстракции сырья (надземной части Aegopodшm podagraria Ь.), измельченного до размера частиц 0,5-3 мм 40% этанолом, гидромодуль 1:40, в течение 30 минут при температуре 80-82 °С трехкратно, с последующим объединением экстрактов, отгоном этанола, упариванием и сушкой в вакуум-сушильном аппарате. Выход готового продукта составляет - 36-40% от массы воздушно-сухого сырья.

8. В результате химического исследования экстракта сныти обыкновенной сухого установлено, что по составу основных групп БАС он соответствует исходному сырью, но превосходит по их содержанию: кумарины - 4,85%, флавоноиды - 9,30%,

23

гидроксикоричные кислоты - 11,82%, дубильные вещества - 10,50%, водорастворимые полисахариды - 17,72%, аскорбиновая кислота - 0,41% аминокислоты - 2,73%.

9. Доказано, что печень животных, которым вводили экстракт сныти обыкновенной сухой, менее подвержена токсическому влиянию химиотерапии. При этом доля дистрофических изменений клеток печени уменьшилась на 19%, а доля некрозов - на 35%. Наиболее эффективным режимом введения является введение экстракта сныти обыкновенной сухого до и после проведения полихимиотерапии.

10. Научно обоснована целесообразность использования травы Aegopodlum podagraria L., содержащей комплекс БАС, основными из которых являются гидроксикоричные кислоты и полисахариды, в качестве гепатопротекторного средства при полихимиотерапии, на которую разработан проект Фармакопейной статьи предприятия «Трава сныти обыкновенной».

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Агеев, В.А. Коррекция токсического действия полихимиотерапии экстрактом сныти /

B.А. Агеев, A.B. Сенькова, М.А. Ханина, Т.А. Агеева // Фармация. - 2010. - № 6. -

C. 36-38.

2. Агеев, В.А. Патоморфологические изменения в печени мышей при проведении

полихимиотерапии и их коррекция экстрактом Aegopodium podagraria L. / В.А. Агеев, A.B. Сенькова, М.А. Ханина, Т.А. Агеева // Сибирское медицинское обозрение. - 2010. - № 4. - С. 52 - 55.

3. Агеев, В.А. Изучение химического состава эфирного масла Aegopodium podagraria L.

флоры Сибири / В.А. Агеев, Д.Л. Макарова, Д.В. Домрачев, А.П. Родин, М.А. Ханина // Химия растительного сырья. - 2011. - № 1. - С. 129 - 132.

4. Агеев, В.А. Элементный состав травы и экстракта Aegopodium podagraria L. / В.А.

Агеев, М.А. Ханина, А.П. Родин // Меднцнна и образование в Сибири. -Новосибирск: эл.науч.изд-е НГМУ. - 2012. - № 4.

5. Агеев, В.А. Фармакогностическое исследование сныти обыкновенной / В.А. Агеев //

Авиценна-2005: материалы ежегодной конкурс-конференции студентов и молодых ученых,- Новосибирск, 2005. - С. 351.

6. Агеев, В.А. Микроскопический анализ травы Aegopodium podagraria L. / В.А. Агеев //

Экология России и сопредельных территорий. Экологический катализ: материалы X междунар. экологич. студ. конф.- Новосибирск, 2005. - С. 159.

7. Агеев, В.А. Фармакогностическое исследование травы Aegopodium podagraria L. / В.А.

Агеев // Качество жизни как критерий санитарно-эпидемиологического благополучия: материалы I студ. научн. конф. Сибирского федерального Округа. -Омск, 2005. - С. 130- 133.

8. Агеев, В.А Товароведческий и фитохимический анализ травы Aegopodium podagraria L.

/ В.А. Агеев // Авиценна-2006: материалы конкурс-конференции студентов и молодых ученых.- Новосибирск, 2006. - С. 360.

9. Агеев, В.А. Количественные показатели некоторых биологически-активных веществ

сныти обыкновенной / В.А. Агеев // Авиценна-2007: матер, конкурс-конф. ст. и молодых ученых,- Новосибирск, 2007. - С. 312.

10. Агеев, В.А. Некоторые аспекты фармакогностического исследования сныти

обыкновенной / В.А. Агеев // Материалбб Всеросс. итоговая студ. научн. конф. им. Н.И. Пирогова. - Томск, 2007. - С. 216 - 217.

11. Агеев, В.А. Количественные показатели фенольного комплекса сныти обыкновенной /

В.А. Агеев // Материалы 66 Всеросс. итог. студ. научн. конф. им. Н.И. Пирогова. -Томск, 2007.-С. 217-219.

12. Агеев, В.А. Влияние экстрагента и степени измельченное™ сырья на выход

фенольных соединений из сныти обыкновенной / В.А. Агеев, М.А. Ханина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. научн. тр. - Пятигорск, 2007. - Вып. - 62. - С. 37.

13. Агеев, В.А. Фармакогностическое исследование сныти обыкновенной / В.А. Агеев,

М.А. Ханина // Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений: материалы II Междунар. научн. конф,- Алматы, 2007. - С. 215.

14. Агеев, В.А. Фармакогностическое исследование Aegopodium podagraria L. флоры

Сибири и перспективы ее применения в медицине для снижения побочных эффектов противоопухолевых средств / В.А. Агеев, М.А. Ханина, A.B. Сенькова, Д.Л. Макарова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. -2010. -№ 7. -С. 16- 18.

Отпечатано в типографии Новосибирского Государственного технического университета 630092, г.Новосибирск, пр. К. Маркса, 20, Тел./факс (383) 346-08-57 Формат 60 х 84/16. Объем 1.75 п.л. Тираж 100 экз. Заказ 574. Подписано в печать 28.01.2013 г.