Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение растений семейства лютиковые Ranunculaceae(василистника желтого Thalictrum flavum L., живокости сетчатоплодной Delphinium dictyocarpum DC. )

Р\о 03

Г» ' '

С, I '•-'■*

Министерство здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации

Пятигорская государственная фармацевтическая академия

На правах рукописи Мартынова Наталия Николаевна

Фармакогностическое изучение растений семейства лютиковые Ranunculaceae (василистника желтого Thalictrum flavum L., живокости сетчатоплодной Delphinium dictyocarpum DC.)

15.00.02 - Фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 1995

Работа выполиепа на кафедре фармакогнозии Пятигорской государственной фармацевтической академии.

Научный руководитель: доктор фармацевтических, наук,

профессор Д. А. Муравьева

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Самылина И. А. доктор медицинских наук, профессор Гаевый М. Д. Ведущая организация: Курский государственный медицинский

институт

Защита состоится " 1Ь "ОгК&ЬрЯ. 199 5 г. в 9

о*

_ часов на

заседании диссертационного совета Д 084.45.01 по защитам диссертаций при Пятигорской государственной фармацевтической академии по адресу 357533, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке, Пятигорской государственной фармацевтической академии

Автореферат разослан ". _1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук, профессор

Е. В. Компаицева

Общая характеристика работы

Астуалмюсть темы. Расгнтельный мир подарил человеку офомное богатство - лекарственные растения, которые всегла были источником жизни, пищи и здоровья. В настоящее время, несмотря на большие успехи в создании синтетических лекарственных средств, лекарственные растения не теряют своею значения. Изучение опыта народной медицины, резервы которой неисчерпаемы, использование принципа филогенетического родства, а также разумное их сочетание с глубокими научными исследованиями, приводит к появлению и широкому использованию новых растительных лекарственных средств. Растения остаются незаменимым источником получения лекарственных препаратов различной направленности действия: сердечно-сосудистых, капиляроукреп-ляющих, желчег онных и др.

Растения из рода василистник семейства лютиковые широко используются: в качестве сырья для приготовления настойки, применяемой для лечения стенокардии и гипертонии, входит в состав официального сбора М. Я. Здренко.

Васялнспшк желтый /Thalictrum flavum L./ издавна применялся в тибетской медицине, широко известен н в народной медицине своими целебными свойствами. Ограниченные сведения по содержанию биологически активных веществ в василистншсе желтом, произрастающем на Северном Кавказе, послужила причиной его исследования.

Ценным алкалоидоносным растением является также живокость сетча-гоплодная /Delphinium dictyocarpum DC/ семейства лютиковые /Rlanunculaceac/, из надземной части которого получают курареподобный препарат миорелаксант - меллнктин. В последнее время все большее значение приобретает стандартизация лекарственного растительного сырья. Основной целью которой является обеспечение высокого качества сырья. Существующая нормативно - техническая документация на траву живокости сетчатопло,шой не позволяет обьекшвпо оценивать качество сырья. Для решения угон шдачи необходимо совершенствовать методы определения поятинности н доброкачественности лекарственного растительного сырья, разрабатывать новые, более достоверные методики количественного определения' содержания денсгную-

ншх веществ, на их основе создавать НТД на лекарственное растительное сырье.

Таким образом, углубленное фармакогностическое изучение лекарственных растений, выделение биологически активных веществ, их исследование с применением традиционных и новейших физико-химических методов, установление объективных показателей стандартизации сырья, интро-дукционное нсследонание с целью ннедашя в культуру, является актуальной проблемой фармации.

Цель и задачи исследований. Цель работы заключалась в подробном фармакогностическом исследовании Thalictrum flavum L. флоры Северного Кавказа, выявлении возможности использования Thalictrum flavum L. в качестве источника получения лекарственных препаратов, интродукцшшом изучении Thalictrum flavum L., изучении возможности выращивания Delphinium dictyocarpum DC. в условиях Северного Кавказа, совершенствовании методов стандартизации сырья Delphinium dictyocarpum DC.

Для достижения цели решались следующие задачи:

1. Химическое изучение Thalictrum tlavum L. флоры Северного Кавказа:

- выявление групп биологически активных веществ;

- выделение, изучение физико-химических свойств и структуры феноль-ных соединений;

- выделение, изучение физико-химических свойств и структуры алкалоидов.

- исследование минерального состава.

2. Изучение морфолого - анатомических особенностей и установление диагностических признаков различных органов Thalictrum tlavum L.

3. Проведение интродукционных исследований Thalictrum flavum L. на базе ботанического сада ПГФА:

- проведение биологических исследований;

- изучение динамики накопления суммы алкалоидов.

4. Изучение возможности выращивания Delphinium dictyocarpum DC. u условиях Северною Кавказа:

проведение феноло! ических наблюдений;

- и »учение динамики накопления алкалоида метихшкаконитнна.

5. Пересмотр Фармакопейной статьи на траву живокости сетчатоплод-

ной:

- разработка методики количественного определения метилликакони-тина и качественного обнаружения алкалоидов в сырье.

6. Предварительное фармакологическое исследование фнтокомплекса из надземной части Thalictrum flavum L.

Парная новнзиа. Проведено химическое изучение Thalictrum flavum L. флоры Северного Кавказа. Изучен качественный состав и количественное содержание алкалоидов, фенольных соединений, органических кислот. Определено содержание сапонинов, дубильных веществ. Впервые изучен минеральный состав Thalictrum flavum L.

Впервые проведено морфолого - анатомическое исследование различных органов Thalictrum flavum L., выявлены основные морфолого - анатомические диагностические признаки сырья и места локализации алкалоидов.

Проведено иитродукциоиное исследование Thalictrum flavum L. и изучение возможности выращивания Delphinium dictyocarpurn DC. в условиях Северного Кавказа.

Изучена динамика накопления алкалоидов по фазам вегетации и биомассы сырья Thalictrum flavum L. Установлена динамика накопления алкалоида метиликаконитина в Delphinium dictyocarpurn DC., выращиваемой в условиях Северного Кавказа.

Разработана спектрофотомстрпческая методика количественного определения метилликакошпина и качественная реакция определения алкалоидов в сырье Delphinium dictyocarpurn DC.

Проведено предварительное фармакологическое исследование фито-комплекса из травы Thalictrum flavum L. Установлено его нормализующее влияние на метаболические функции печени при ее токсическом поражении ( снижение явлений цитолиза, холестаза, липидоза) и выраженное желчегонное действие.

Практическая значимость. В результате проведенных исследований Thalictrum flavum L. можно рекомендовать для дальнейших фармакологических исследовании с целью получения лекарственных препаратов гепатопро-текторного и желчегонного действии.

Выявлена возможность культуры Delphinium dictyocarpum DC. в климатических условиях Северного Кавказа.

Пересмотрена ФС на траву живокости сетчатоплодной.

Разработана спектрофотометрическая методика количественного определения алкалоида метиллнкаконитина, позволяющая повысить точность анализа и сократить время его проведения.

Результа i ы внедрення. РазраСнианы рекомендации по возделыванию Thalictrum flavum L.

Методика количественного определения метилликаконитина, раздел "Качественные реакции" включены в проект ФС на траву живокости сетчатоплодной и опробированы в ЦЗЛ на ХФЗ г. Чнмекнт.

Положения выдвигаемые на защиту.

- результаты химического исследования Thalictrum flavum L.;

- результаты морфолого - анатомического изучения Th. flavum L.;

- итоги интродукционных исследований Thalictrum flavum L.;

- итоги изучения онтогенеза Delphinium dictyocarpum DC. в климатических условиях Северною Кавказа;

- разработанная методика определения алкалоида метилликаконитина в сырье живокости сетчатоплодной;

- итоги предварительного фармакологического исследования фито-комплекса из травы Thalictrum flavum L.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Пятигорской Государственной фармацевтической академии ( регистрационный номер 01910008620)

Апробация работы

Основные положения работы доложены:

- на научной конференции, посвященной 10-летию фармацевтического факультета БГМИ, Уфа, 1991 г;

- на И Всероссийской учебно - методической и научно - практической конференции, Москва - Барнаул, I992i;

- на научной конференции, посвященной 50-летию НИИ фармации, 1994г.;

- на научных конференциях Пятигорской Государственной фармацевтической академии (1991-1995гг);

- на научно - практической конференции Всероссийского научного общества фармацевтов (1995г);

Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 работ, в которых отражено ее основное содержание.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на il 8 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы и приложения. В тексте содержатся 20 таблиц, 14 схем и рисунков. Список цитируемой литературы содержит 235 литературных источника, из них 64 на иностранных языках.

Основное содержание работы

В введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цели и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы.

Обзор литературы включает общие сведения о систематическом положении и морфологических признаках семейства Rlanunculaceae.

Представлены сведения о ботанической характеристике Thalictrum flavum L. и Delphinium dictyocarpum DC., их химической изученности, краткой характеристике фармакологического действия основных биологически активных веществ, ареалов их распространения и применению изучаемых видов в народной и официнальной медицине.

1. Химическое изучение Thalictrum flavum L. флоры Северного Кавказа

Объектами исследований явились надземная и подземная части Thalictrum flavum L., заготовленные в условиях естественного произрастания в различных районах Ставропольского края.

1. Химическое изучение ТЬаПсЛгит Лауит и. флоры Северного Кавказа

Объектами исследований явились надземная и подземная части ТЬаЦагит Яауит Ь., заготовленные в условиях естественного произрастания в различных районах Ставропольского края.

В результате фитохимических исследований нами было выявлено содержание в сырье ТЬаНагит Па\гит Ь. фенолъных соединений, алкалоидов, органических кислот, сапонинов, дубильных веществ.

Используя методику, описанную в ГФ XI изд. определили содержание органических кислот в надземной части ТЬаЦсиит Пауит Ь., которое составило - 3,9%. Хроматографически идентифицировали кислоты: щавелевую, аскорбиновую, лимонную, винную, янтарную.

По методике, рекомендуемой ГФ XI изд. определили количественное содержание дубильных веществ. Дубильные вещества (преимущественно конденсированной группы) составляют в надземной части растения 0,9%, в подземной - 1,43%.

Качественными реакциями было доказано наличие тритерпеновых сапонинов. Содержание суммы сапонинов в надземной части ТЪаИагит Пауит Ь. составило 0,6%.

Фенольные соединения

Для определения содержания фенольных соединений использовали надземную часть ТЬаНагит Пауит Ь., заготовленную в фазу цветения.

Хроматографнчсскими методами в сырье ТЬаИсиит Пауит Ь. обнаружено содержание веществ фенольной природы.

На основанин качественных реакций флюоресценции в УФ - свете до и посте обработки хромагенными реактивами 3 вещества предварительно было отнесено к флавонопдам и 3 к оксикоритным кислотам.

Выделение веществ фенольной природы проводили экстракцией 70% типовым спиртом. Для разделения суммы веществ на индивидуальные компоненты использовали методы избирательной жидкостной экстракции, дробной кристаллизации, препаративной и колоночной хроматографии на полиамиде.

Для доказаге-шсгва строения гликозидов использовали химические методы исследования: кислотный, щелочной, ферментативный гидролиз,

ацетилирование. Идентификацию проводили по результатам хроматографи-ческого анализа, температуре плавления, по отсутствию депрессии температуры плавления при смешивании с достоверными образцами, УФ-спектрам (как в нейтральном растворе, так и с использованием ионизирующих и ком-плексообразующих реагентов), И К - спектрам, а также получением продуктов гидролиза. Агликоны подвергали такому же анализу, как и гликозиды. Углеводную часть идентифицировали хроматографпчески.

В результате проведенного анализа были выделены и идентифицированы флавононды: гиперозид, изокверцетрин, астрагалин; оксикоричные кислоты: феруловая, хлорагеновая, кофейная. Некоторые физико - химические свойства выделенных фенольных соединений представлены в таблице 1.

Таблица 1

Некоторые физико-химические свойства выделенных фенольных соединений.

Вещество Общая Темпер Полосы ЯГ 11Г УФ- свет Обраб.

формула агура поглощения 2% 15% РШэвУФ

плав- в области Р-Р Р-Р -свете

летш (С°) УФ-спектра (им) уксу сной кпсл <гш уксус ной кислоты

Флавопопзы:

Гиперозид С21н20°12 235-236 365,265,255 0,46 0,44 светло-корич. желто-зеленое

Изоквер- С21П20°12 227-228 360,265,250 0,55 0,66 темное желто-

цетрин оранж.

Астрага- С21Н20°П 176-178 350,312 0,54 0,72 корич. желтое

лин

Оксикоричные кислоты:

Кофейная с9н8о4 194-196 235,325 0,27 0,36 светло- светло-

кислота голубое голубое

Хлораге- С16Н18°9 167-169 234,319 0,64 0,68 голубое зеленое

новая

кислота

Феруловая С^Н^О^ 203-206 246,300,325 0,30 0,45 фиолетов ярко-

кислота ое фиолет.

Исследование алкалоидного состава ТЬаК^гит Аауит и. флоры Северного Кавказа

Исходным сырьем служили надземные и подземные части растения, заготовленные в дикорастущей флоре в период конца бутонизации • начала цветения.

Для получения суммы алкалоидов, ее фракционирования разделения и выделения индивидуальных оснований использовали методики метанолыюй и хлороформной экстракции, с последующим применением методов колоночной и препаративной хроматографии.

Таблица 2

Алкалоидный состав подземной и надземной частей Thalictrum ftarum L.

Вещество Надземная (аб.с.с) часть Подземная (аб.с.с.) часть Тпл.С° Я.ПШХ (им)

% в % от суммы алк. (4.72 г.) % в %от суммы алк. (15,32 г.)

талшсберин 0,036 12,9 0,014 1,37 158-160 281

о-метшггалпкберии 0,007 2,5 186-190 281

тальфлавин 0,007 2,5 0,006 0,58 132-133 282

таликаршш 0,025 2,4 104-107 282,303,316

глауцнн 0,002 0,19 118-119

крнптопин 0,011 1.1 217-218 288

татиксин 0,021 2,08 194-195 234,165,314,3

(сразл) 90

берберин 0,008 2,9 0,021 2,08 260-262 225.265,345,4

(с разл) 30

магнофлорин 0,058 20,7 0,16 15,1 250-252

(сразл)

-и-

Алкалоиды идентифицировали на основании их физико - химических свойств и спектральных характеристик (УФ-, ИК-, масс- спектроскопии), полученных в лаборатории алкалоидов и других азотсодержащих соединений ВИЛР, по отсутствию депрессии температуры плавления смешанной пробы выделеш!ых оснований с имеющимися достоверными образцами.

В результате пз надземной части ТЬаИагит Пауцш Ь. бьшо вьщелено 5 алкалоидов: о - метшггаликберин, таликберин, тальфлавин, берберин, магно-флорщ. Сумма алкалоидов составила 0,28%. Из подземной части выделено 8 алкалоидов: таликаршш, тальфлавин, глауцин, криптопин, таликсия, таликберин, магнофлорин, берберил. Сумма алкалоидов составила 1,02% в пересчете на абсолютно сухое сырье Таблица 2.

Минеральный комплекс ТИаН^гит Пауит

На основании данных о высокой биологической активности макро- и микроэлементов, их участии в активизации действия лекарственных препаратов, а также в связи с осложняющейся экологической обстановкой представляло интерес изучение минерального состава растения, определение зависимости накопления микроэлементов в органах растения от их содержания в почве.

Исследования проводили используя полуколичественный элементный анализ методом просыпки на приборе СТЭ-1 со сканирующим устройством и методом полного испарения на приборе ДФС-8-1 с использованием стандартных образцов.

Анализировали надземную и подземную части ТЬаи^гига Пауит Ь., а также почву. В результате было установлено, что ТЪаНс(гиш Пауига Ь. содержит в достаточных количествах почти все незаменимые макро- и микроэлементы. Накапливает - марганец, олово, железо, серебро.

Анализ сырья на содержание макро- п микроэлементов подтверждает его необходимость для установления доброкачественности сырья, направленного влияния на растения при возделывании.

1. Морфолого - анатомическое и интродукционное исследование ТИаПсишп Аауит 1_.

В процессе морфолого - анатомического изучения различных органов ТЪаНс^ит Па\ит Ь. нами были установлены диагностические признаки, позволяющие определить подлинность сырья.

Для ТЬаНсиит Пауит Ь. характерными признаками являются: продолговато - обратно - яйцевидная, эллиптическая форма листочков, полный черешок, широкоэлшпический, бороздчатый в поперечном сечении; микродиагностические: для листа - сосочкообразные выросты только на верхнем эпидермисе, мелкие железистые волоски в основании которых расположена эпидермальная розетка; черешок полый без эпидермальных выростов; стебель - шестигранной формы, характеризуется наличием групп каменистых клеток в коровой части, имеется сплошной механический пояс, состоящий из лубяных волокон с утолщенными стенками; для корневища - наличие небольших групп лубяных волокон в коровой части, биколлатер альпый тип проводящих пучков; тонкие корни сохраняют первичное строение, покрыты слоем эпидермальных клеток с выростами, в коре встречаются одиночные каменистые клетки и группы лубяных волокон, древесина представлена трехлучевой звездочкой бкколлатерального типа. Во всех органах растения присутствует инулин.

Гистохимическими реакциями установлена локализация алкалоидов.

На основании проведенных исследований можно заключить, что "ПгаМгит Пауига Ь. имеет характерный признак рода ТЬаНс1гиш - наличие инулина.

С 1990 г. в условиях ботанического сада ПГФА нами проводились ингродукционные исследования ТЪаЦагига Пауит Ь. Изучалась возможность размножения растений в культуре, норм посева, ритм сезонного развития, сырьевая урожайность и динамика накопления алкалоидов. Изучение проводили по методики исследований при интродукции лекарственных растений, разработанной ВИЛА Р.

Семена использовали, полученные из Московской сельскохозяйственной Академии им. К. А. Тимирязева и собранные в дикорастущей флоре.

На основании проведенных исследований были составлены фенологические спектры и график динамики накопления биомассы Thalictrura flavum L., представленные на рис. 1 и 2

Интродукцнонные исследования легли в основу составления рекомендаций по выращиванию Thalictrum flavum L., направленные в НПО ВИЛАР для рассмотрения.

При изучении динамики накопления суммы алкалоидов, было выяснено, что максимальное количество наблюдается в фазу бутонизации - начала цветения (0,34%-0.38%), при этом наблюдается второй, максимум в фазу плодоношения (зрелые плоды); в подземной часта - в период массового цветения -начала плодоношения (2,08%). Рис. 3 и 4.

3. Предварительное фармакологическое исследование надземной части Thalictrum flavum L.

Полученные сведения о химическом составе надземной части Thalictrum flavum L. и литературные данные о применении его в народной и тибетской медицине в частности при заболевании печени, обусловили целесообразность изучения возможности использования Thalictrum flavum L., как дополнительного сырьевого источника препаратов, примеЕыемых при заболеваниях печепи.

С этой целью проведены фармакологические исследования фитоком-плекса, полученного из надземной части Thalictrum flavum L. (1:1 на 40° этиловом спирте). Изучение специфической активности полученного препарата проводили на кафедре биохимии ПГФА под руководством профессора, доктора мед, наук Ю. К. Василенко.

Нами было исследовано гепатопротекторное и холеретическое действие полученного фнтокомплекса. Гепатопротекторную активность оценивали по степени нормализации ряда биологических показателей, отражающих морфо - функциональное состояние печени в условиях экспериментального токсического гепатита. В качестве препарата сравнения использовали гепа-топротекторный препарат - енллбор, в максимальной терапевтической дозе, вводимый в тех же условиях, как и исследуемый фитокомплскс.

IV [ III II I

I II —

I I I I—

IV

жттш^уштш^уууууууу

vi i vi i | VII 11 IX

X

месяцы

вегетация бутонизация цветение

плодоношение отмирание

I - однолетние, II - двухлетние, III - трехлетние, IV - четырехлетние растения Рис 1. Фенологические спектры Thalictrum flavum L.

0.5-10.4 0.3 --

0,2

^\трв*л»тннв экземпляры

двухлетние экземпляры

фазы

1-бутонизация; 2-цвстение; 3-плодоношеиие; 4-отмирание

Рис 2. График динамики накопления биомассы надземной части "ПзаГ^гит Аа\шт в зависимости от фазы вегетации

А%

0,5 - -

0,4

0,3

0,2

0,1-

' ||"|||| || 1111111III|||| ||| |||| 11| III

фазы

3 4

1-бутонизация; 2-цветепие; 3-плодоношение; 4-отмиранне

Рис.3. График динамики накопления суммы алкалоидов в надземной части ТЬаНсЬит Аатит I. в зависимости от фазы вегетации

1

* 1-бутонизация; 2-цветение; 3-плодоношение; 4-отмиранне

Рис. 4. График динамики накопления суммы алкалоидов в подземной части ТЬаН^гит Аауит I. в зависимости от фазы вегетации.

Гепатозащитный эффект оценивали по биохимическим показателям в сыворотке крови.

Холеретическое действие исследуемого препарата изучали по методу М.Д. Литвинчук и З.И.Новоселец. Изучение желчеотделения проводили в острых опытах на крысах массой 200-210 г.

В общем количестве собранной желчи определяли содержание желчных кислот и холестерина по методу В. П. Мирошниченко, а также рассчитывали холяго - холестериновый коэффициент.

Результаты опытов обрабатьвали методом вариационной статистики, предстаатены в таблицах 3 и 4.

Табпща 3

Биохимические показатели при исследмати гепшпопротекторного действия

фитокомплекса ПшИагит /1агит Ь.

Серии п АлТ ЩФ триглицерцды

опытов мккатал/л мккатал/л ммоль/л

М±т [Р. %нзм. к М±т [Р. %изм. М±ш {Р, %изм. к

контролю] к контролю] контролю]

Интакт. 9 25+0,04 370±0,25 0,80±0,11

живот.

Животные с 9 0,7910,04 8,5±0,48 1,99+0,18

гепатитом (контроль) [Р<0,001,+216,0] [+131,1] [+59,6]

Животные, 10 0,37+0,07 [Р<0,001,- 3,48+0,16 0,93±0,07

получавшие сштбор 53,1] [Р<0,001,-59,2] [-53,1]

Животные, 9 0,36±0,03 [Р<0,001,- 3,64±0,38 1,ЗОЮ, 12

получавшие фитоком- 54,4] [Р<0,001,-57,4] [-29,8]

плекс

Табпица 4

Желчегонная активность фитокомплекса Thalictrum flavum L.

Серии опытов п Количество желчи мл Холято-холесггер. ко-

M±m [Р, %изм. к кон- эфф.М±ш [Р, %изм. к

тролю] К01ГГр0Лю]

Интактные животные 10 1,5 ±0,06 17,0 ±2,1

(контроль)

Животные, получав- 10 2,0 ±0,06 12,7 ±2,0

шие фламин [Р<0,06;+33%] [Р<0,5;-17%]

Животные, получав- 10 2,5 ±0,1 15,1 ±3,0

шие фитокомплекс [Р<0,05;+33%] [Р>0,5;-12%]

Исследования показали, что фитокомплекс вызывает значительный нормализующий эффект: по сравнению с контролем активность АлТ уменьшилась на 54,4% (р<0,001), а активность ЩФ на 57,4% (р<0,001), содержание тригллцеридов уменьшилось на 29,8% (р<0,001), чго свидетельствует о ею способности существенно уменьшить явления цитолиза, холестаза и ли-пидоза. Сравнение с действием енлибора показало, что активность исследуемого фитокомплекса находится па уровне одного из эффективных офици-

нальных гепатопротекторов.

При изучении холеретического действия наблюдалось увеличение желчеотделения на 40% (р<0,05). Желчегонный эффект фитокомплекса превышает действие фламииа.

4. Изучение онтогенеза Delphinium dlctyocarpum DC.

Второй объект наших исследований - растение этого же семейства (Rlanunculaceae) - живокость сетчатоплодная (Delphinium dictyocarpum DC.). В настоящее время надземная часть растения является источником получения ценного курареподобного препарата миорелаксанта - "мелликтин" (йодгидраг алкалоида мепшшкаконитина).

Перед нами медицинской промышленностью и Фармакопейным ком-митетом были поставлены задачи разработки более совершенного метода количественного определения метилликакошггина в сырье Delphinium

dictyocarpura DC. и изучения возможности выращивания данного вида в климатических условиях Северного Кавказа.

В 1990 г. из г. Чимкент, совхоза "Дармина" нами б идя привезены саженцы и семена Delphinium dictyocarpum DC. с целью проведения первичных испытаний по выращиванию.

На основании проведенных исследований были составлены фенологические спсоры Delphinium dictyocarpum DC., представленные на рис. 5.

| I I I | IV 1 V 1 VI | VII 1 VII 1 | IX | X |

месяцы

Ш вегетация ^плодоношение бутонизация ЦЦ( отмирание _цв е т ен и е

а) однолетние; б)двухлетние; в)трсхлетние растения

Рис.5. Фенологические спектры Ве1рЫпшт еИсуосагрит ВС.

Изучаемый вид хорошо растет в условиях Северного Кавказа, гибели от заморозков не наблюдалось.

При изучении динамики накопления метилликакошггина отмечено наибольшее содержание в фазу начала цветения.(0,28-0,33%).

В процессе переработки фармакопейной статьи на траву живокости сетчатоплодной мы отметили длительность, трудоемкость, многостадийиость, использование большого количества сырья, различных токсических растворителей и реактивов в методике количественного анализа, представленной в ФС 42-315-72.

Нами были изучены условия экстракции метилликаконитина из растительного сырья. Метилликаконитин имеет в УФ- области характерные максимумы светопоглощения при 276 и 300 им, что позволило использовать для количественного определения спрктрофотометрический метод. В качестве стандартного образца использовали препарат мелдиктин.

Для определения мстроло! нческой характеристик» методики было проведено определение содержания метнлликакошгтина на одаом образце сырья в семи повторности.

Таблица 5

Метрологические характеристики методики определения метилликаконитина в

сырье Delphinium dictyocarpum DC. спектрофотометрическим методом.

Взят на анализ сырья Найдено % меинлика-конитина Метрологическая характеристика

10,0164 0,365 Т=0,363

10,0120 0,370 f=6

10,066 0,363 S=0,0044

10,0070 0,360 Sx=0,00166

10.0053 0,362 Р=95

10,0176 0,370 t(P,t)=2,57

10,9726 0,361 ДХ=0,019

Е=±2,3%

Разработанная нами методика количественного определения метилликаконитина в сырье Delphinium dictyocarpum ЕЮ. позволяет сократить массу навески в 10 раз, время анализа в 4 раза, исключить ряд промежуточных операций, повысить точность метода.

Выводы

1. Thalictrum flavum L. флоры Северного Кавказа по составу алкалоидов отличается от представителей этого вида, произрастающих в других районах ареала. Из надземной части выделено и идентифицировано 5 алкалоидов: таликберин, тальфлавин, берберин, магнофлорин. Содержание алкалоидов составляет 0,28%. Из подземной части выделено и идентифицировано 8 алкалоидов: таликарпии, галнкберин, тальфлавин, глауцин, крнптопин, таликсин, берберин, магнофлорин. Содержание алкалоидов составляет 1,02%.

2. Максимальное содержание суммы алкалоидов Thalictrum flavum L. наблюдается в фазу бутонизации - начала цветения ( 0,34-0,38%) в надземной части. В подземной части - н период массового цветения (2.08'!о). Содержание

суммы и алкалоидный состав Thalictrura flavum L. существенно не изменился у культивируемых растении в сравнении с дикорастущими.

3. Из надземной части Thalictrum flavum L. флоры Северного Кавказа выделены и идентифицированы фенольные соединения: флавоноиды - гиперо-зид, изокверцетрин, астрагалин; окагкоричные кислоты - феруловая, хлораге-новая, кофейная. Содержание фенольных соединений составляет 7,7 %.

4. Установлено содержание сопутствующих веществ в надземной часш растения Thalictrura flavum L.: дубильные вещества конденсированной группы (0,9%), тр1перпеновые сапонины (сумма гликозидов 0,6%), органические кислоты (3,9%) - лимонная, винния, янтарння, аскорбиновая, щавелевая.

5. Исследован минеральный состав Thalictrum flavum L. В растении содержатся в достаточном количестве незаменимые микроэлементы: железо, йод, медь, цинк, марганец, кобальт. Thalictrura flavum L. накапливает - серебро, марганец, железо.

6. Проведенные морфолого - анатомические исследования всех органов растения Thalictrum flavum L. позволили выявить характерные диагностнче ские признаки.

7. Предварительное фармакологическое исследование фитокомплекса из травы Thalictrum flavum L. показало его выраженное гепатопротекторное и желчегонное действие, Из чего следует, что Thalictrum flavum L. является перспективным растением для введения в официнальную медицину и может быть рекомендован д;ш дальнейшею углубленного фармакологического исследования.

8. На основании проведенных интродукционных исследований Thalictrum flavum L. разработаны рекомендации по выращиванию, направленные в НПО ВИЛАР на рассмотрение.

9. При изучении онтогенеза растений Delphinium dictyocarpum DC. не выявлено отклонений в развитии растений, в качественном, количественном отношении по сравнению с дикорастущими экземплярами. Содержание алкалоида метилликакоштша колеблется от 0,28 до 0,33%, что соответствует НТД.

10. Разработана качественная реакция на сырье Delphinium dictyocarpum DC, мегодчка количественного определения алкалоида мс тилликакошггпна в сырье живокости се1чатоплодной, позволяющая сокра-

rmi. в 10 pas навеску сырья, в 4 раза срок проведения апаш ta. Относительная ошибка не превышает 2,3°о. Раздел "Качественные реакции", спектрофото-метрическая методика количественною определения мегн.ишкаконитина включены в разработанный проект ФС на "Траву живокости сетчатоплодной".

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. H. Н. Мартынова. Фитохимическое изучение ломаиоса фиолетового, василистннка желтого. // Поиск биологически активных веществ и проблемы лек. обеспечения: Тез. докл. научн. конф., посвященной 10 летию фармац. факультета БГМИ. - Уфа, 1991. - с. 25

2. Д. А. Муравьева, О. И. Попова, К. О. Вартанян, И. В. Пшукова, Н. Н. Мартынова. Совершенствование контроля качества лекарственного растительного сырья. И Химики Северного Кавказа народному хозяйству: Тез. докл. Ш региональной конференции. - Нальчик, 1991. - с. 100

3. H. Н. Мартынова. Влияние мест произрастания на содержание алкалоидов в граве живокости высокой. / Вторая Всероссийская \ чебно - методическая и научно - практическая конф., посвященная проблеме жологического об>чсш1Я и воспитания студентов мед. и фарм. вузов РФ. (2, 1992, М. - Барнаул): Материалы ... - М. - Барнаул, 1992, - с.86.

4. H. Н. Мартынова, Д. А. Муравьева. Определение метиллихакошгги-на а траве живокости сетчатоплодной. II Контроль качества лекарств: Информационно - методический бюллетень №2 - М., 1992. - с.51

5. Д. А. Муравьева, H. Н. Мартынова. С. Н. Степанюк. Спектрофото-метрическос определение метилликаконитина а траве живокосги сетчатоплодной. // Медицинская промышленность и биохимия. Наука, производство, маркетинг. - М., 1992. - Вып. 2. - с.7

6. H. Н. Мартынова, Д. А. Муравьева. Анатомически - морфологические особенности василистннка желтого. II Проблемы фармации, по,и отопки и использования провизорских кадров: Тез. докл. Республиканской научн. конф. по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 1993. - ч. I. - с.46-47.

7. H. Н. Мартынова. Фенолъные соединения Thalictrum flavum L. флоры Сенерисно Кавказа. / Региональная конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (49: 1994; Пятигорск): Материалы... - Пятигорск. 1994. с.32.

8. Д. А. Муравьева, О. И. Попова, H. Н. Мартынова. Интродукция лекарственных растений, содержащих алкалоиды, в условиях Северного Кавказа. // Решение актуальных задач фармации на современном пане. Тез. докл. научн. конф.. посвященной 50- легшо НИИ фармации, - М., 1994. - с. 251-252.

9. Д. А. Муравьева, О. И. Попова, В. Н. Карпенко, Н. Н. Мартынова. Экстракционно - фотометрическое определение мегнлликаконитина к траве живокости сетчатоплодной. // Фармация. - 1994. №3. - с. 62-63.

10. Д. А. Муравьева, О. И. Попова, Н. Н. Мартынова. Изучение родов Colchicum L. и Thalictrum L. на содержание алкалоидов. // Актуальные проблемы фармации: Сборник научных трудов, посвященный 30- летию фармац. факультета Тюменского мед. института. - Тюмень, 1994. - с. 135-136.

И. Д. А. Муравьева, Н. Н. Мартынова, Вита Псдро. Опыт интродукции василнсшика и каторактуса розового в бот. саду ПГФА. // Актуальные проблемы фармации: Тез. науч. конференции - Пятигорск, 1995. - с.21

12. Д. А. Муравьева. О. И. Попова, Е. М. Самаров, Н. Н. Мартынова. Разработка НТД на лекарственное растительное сырье, содержащее алкалоиды, с учетом современных требований И Актуальные проблемы фармации: Тез. науч. конф., посвященной 20- летию фарм. факультета Алтайского гос. мед. универсигета - Барнаул, 1995.

13. Д. А. Муравьева, В. И. Погорелов, О. И. Попова, Н. И. Гужва, С. П. Лукашук, С. А. Рожнова, Н. Н. Мартынова, Н. В. Латцердс, С. Г. Яковлева. Лекарственные растения Северного Кавказа, применяемые в народной медицине. // II Международный кошреес по народной медицине - М. 1995.

14. Д. А. Муравьева, О. И: Попова, С. П. Лукашук, Н. Н. Мартынова, И.- В. Пшукова, С. Г. Яковлева. Изучение растений народной медицины Се-верпого Кавказа для практического применения. // Формирование приоритетов лекарственной политики. Российская национальная конференция: Материалы... - М„ 1995. - с.178-180