Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологические эффекты регуляторных пептидов при травмах кожи и костей

На правах рукописи

К

у

ЧЕРДАКОВ ВИКТОР ЮРЬЕВИЧ

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ РЕГУЛЯТОРНЫХ ПЕПТИДОВ ПРИ ТРАВМАХ КОЖИ И КОСТЕЙ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

/ АВГ 2014

Курск - 2014

005551657

005551657

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Смахтин Михаил Юрьевич доктор медицинских наук, профессор Дубровин Григорий Михайлович

Официальные оппоненты:

Николаев Сергей Борисович - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Министерства образования и науки РФ, кафедра госпитальной хирургии

Якушева Елена Николаевна - доктор медицинских наук, доцент, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакологии с курсом фармации и фармакотерапии ФДПО, заведующая

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится « 9 » октября 2014 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России (http://www.kurskmed.com)

Автореферат разослан « »_С? _2014 г.

Учёный секретарь

диссертационного совета

Овод Алла Ивановна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. В последние годы рост травматизма наблюдается во многих странах, в том числе и в России, где травмы вышли на 2-е место среди причин временной нетрудоспособности (Андреева Т.М., 2010). Травматизм не только занимает ведущее место в структуре заболеваемости, но и является одной из основных причин первичной инвалидности и смертности взрослого населения и детей (Вишневский A.A., 2009). В связи с этим по-прежнему актуален поиск новых эффективных средств, стимулирующих заживление поврежденных тканей (Лазарь А.Д., 2010).

Репарация кожи и костной ткани находится под контролем механизмов, в которых принимают участие регуляторные системы организма: нервная, эндокринная, иммунная. Компонентами этих систем являются пептидные молекулы, осуществляющие их взаимодействие (Акмаев И.Г., 1996; Бердюгина О.В., 2009). Такие пептидные препараты, как миелопид, семакс, тимоген, даларгин, иммунофан, дельтаран и другие уже нашли применение в клинической практике, что свидетельствует о важном практическом значении этих исследований (Болдырева И.В., 2009, Орлова А.Ю., 2009; Строев Ю.В., 201 1).

Также известен трипептид глицил-гистидил-лизин или Gly-His-Lys (GHL), который стимулирует процессы роста и дифференцировки клеток (Trachly, 1991). Первоначально он был назван фактором роста клеток печени, так как одним из его первых обнаруженных эффектов было повышение выживаемости гепатоцитов in vitro (Maquart F.X et al., 1993; Гомазков O.A., 1995). При этом выявление репаративных эффектов GHL в условиях целостного организма по-прежнему актуально.

В то же время получены убедительные данные о существенном влиянии иммунной системы на восстановительные процессы опорно-двигательного аппарата и кожи (Бердюгина О.В., 2009, Склянчук Е.Д., 2009). В связи с этим при травмах целесообразно дальнейшее выявление эффектов и механизмов действия пептидного иммуномодулятора - тимогена (Glu-Trp). При этом особенно важную роль в ранозаживлении играют нейтрофилы, которые первыми из фагоцитов приходят в очаг воспаления и от активности которых существенно зависит вероятность нагноения и длительность патологического процесса (Фрейдлин И.С., 2001).

В то же время повреждение тканей и органов вызывает развитие окислительного стресса с повышенным образованием активных форм кислорода (Воронина Т.А., 2001; Прокопенко Л.Г. и др., 2003; Giray Belma et al., 2003). Поэтому в этих условиях актуально не только выявление репаративных эффектов, но и изучение механизмов действия пептидов в отношении активности свободно-радикальных реакций.

В связи с наличием болевого синдрома при травмах также представляется целесообразным выявление эффектов опиодных пептидов, являющихся компонентами стресс-лимитирующей системы организма (Лишманов Ю.Б. и др, 2012). Опиатные рецепторы для энкефалинов обнаружены в большинстве органов и тканей (Максакова Е.В., 2000) . Эти факты обусловили выбор для исследования аналога природного лейэнкефалина - даларгина.

В то же время в нейроэндокринной регуляции значительный интерес представляют вопросы потенцирования или ослабления эффектов регулятор-ных пептидов (Розен В.Б., 1994; Акмаев И.Г., 2001), в связи с чем также целесообразно изучение эффектов комбинированного введения пептидных субстанций.

Степень разработанности темы исследования. В доступной литературе отсутствует сравнительная оценка репаративных, иммунотропных и антиокси-дантных эффектов пептидов различных функциональных групп при травмах кожи и костей, а также степени выраженности этих эффектов в зависимости от способа введения пептидов. Большинство выполненных исследований с пептидом GHL проведено in vitro, а не в условиях целостного организма. Кроме того, вопросы потенцирования или ослабления эффектов регуляторных пептидов остаются малоизученной областью медицины, а эффекты комбинированного введения таких пептидов как глицил-гистидил-лизин (GHL), тимоген и даларгин при травмах кожи и костей неизвестны.

Цель исследования. Целью исследования является выявление репаративных, иммунотропных и антиоксидантных эффектов регуляторных пептидов глицил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их комбинаций при травмах кожи и костей.

Задачи исследования:

• Выяснить особенности влияния трипептида глицил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их комбинаций на репаративную регенерацию кожи, активность нейтрофилов и свободно-радикальных реакций при внутрибрюшин-ном введении.

• Выявить репаративные, иммунотропные, антиоксидантные эффекты глицил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их парных сочетаний в условиях кожных ран при внутрикожном введении.

• Установить особенности действия глицил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их комбинаций на выраженность репаративного остеогенеза, активность нейтрофилов и свободно-радикальных реакций при внутрибрюшин-ном введении.

• Выявить репаративные, иммунотропные, антиоксидантные эффекты глицил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их сочетаний при внутрикост-ном введении в условиях экспериментального перелома.

• Провести сравнительную оценку эффективности глицил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их комбинаций при травмах кожи и костей.

Научная новизна. Установлены репаративные и антиоксидантные эффекты регуляторных пептидов глицил-гистидил-лизина (GHL), тимогена, даларгина и стимулирующее действие тимогена и даларгина на активность нейтрофилов крови в условиях кожных ран как при внутрибрюшинном, так и при внутрикожном способах введения. Показана более выраженная репаративная активность пептида GHL по сравнению с тимогеном или даларгином при внутрикожном способе введения в эквимолярных дозах. Выявлено синергичное действие парных комбинаций пептида GHL, тимогена и даларгина в отношении

репаративной регенерации кожи, функции нейтрофилов крови и антиоксидант-ной активности при внутрибрюшинном и внутрикожном способах введения.

Установлены репаративные, антиоксидантные эффекты пептида GHL, тимогена, даларгина и их стимулирующее действие на активность нейтрофилов крови при переломе трубчатых костей, как при внутрибрюшинном, так и при внутрикостном способах введения. Показана более выраженная репаративная активность пептида GHL по сравнению с тимогеном или даларгином при внутрикостном способе введения в эквимолярных дозах. Выявлено синергичное действие парных комбинаций пептида GHL, тимогена и даларгина в отношении репаративного остеогенеза, антиоксидантной активности и функции нейтрофилов крови при внутрибрюшинном и внутрикостном способах введения.

Теоретическая н практическая значимость работы. Экспериментально показана перспективность применения пептида GHL в комбинации с пептидными препаратами даларгин и тимоген для стимуляции заживления кожных ран и репаративного остеогенеза.

Выяснено, что при травмах кожи и костей проявление репаративных эффектов пептида GHL и его комбинаций с тимогеном или даларгином зависит от способа введения. Выявлена более выраженная репаративная активность пептида GHL и его комбинаций с тимогеном или даларгином при внутрикожном или внутрикостном способах введения по сравнению с внутрибрюшинным введением.

Применение пептида GHL, тимогена и даларгина при травмах кожи и костей в парных сочетаниях сопровождается усилением репаративного эффекта с максимальной выраженностью в комбинации GHL+даларгин.

Разработаны способы стимуляции репаративного остеогенеза (патент № 2429002) и заживления кожных ран (патент № 2452508).

Выявленные особенности действия регуляторных пептидов могут быть учтены при экспериментальном или клиническом применении их аналогов.

Внедрены и апробированы результаты работы:

результаты работы используются в практической деятельности Курской биофабрики - фирмы «Биок» (акт внедрения № 3 от 24.01.13 г.), а также в лекционных курсах и на практических занятиях кафедр фармакологии (акт внедрения № 23 от 09.09.13), биологической химии (акт внедрения № 25 от 09.09.13.), травматологии, ортопедии и ВПХ (акт внедрения № 24 от 09.09.13) Курского государственного медицинского университета, кафедры адаптивной физкультуры и медико-биологических наук Курского филиала Российского государственного социального университета (РГСУ) (акт внедрения № 4 от 20.02.13 г.).

Методология и методы исследования. Методологической составляющей диссертационного исследования стали труды отечественных и зарубежных ученых (Смахтина М.Ю., 2004; Курцева A.A., 2009; Pickart L., 2012).

В диссертационной работе использованы биохимические, иммунологические, гистологические, рентгенологические методы исследования, а также основные правила работы с экспериментальными животными при доклинических исследованиях фармакологических препаратов.

Основные положения, выносимые на защиту:

• Регуляторные пептиды глицил-гистидил-лизин (GHL), тимоген и да-ларгин в эквимолярных дозах сопоставимо стимулируют заживление кожных ран при внутрибрюшинном введении, проявляют антиоксидантную активность, а тимоген и дагтаргин повышают активность нейтрофилов крови.

• В условиях кожных ран пептиды GHL, тимоген и даларгин в парных сочетаниях обладают синергичным репаративным, антиоксидантным, а также и иммуностимулирующим действием в отношении функции нейтрофилов крови.

• Пептиды GHL, тимоген и даларгин стимулируют репаративный остео-генез, а в парных сочетаниях обладают синергичным репаративным, антиоксидантным, а также и иммуностимулирующим действием в отношении функции нейтрофилов крови.

• Пептид GHL и его комбинации с тимогеном или даларгином более эффективны в отношении репаративной регенерации кожи и костей при местном, чем при внутрибрюшинном способе введения.

Степень достоверности и апробация результатов. Научные положения и выводы диссертационного исследования основаны на анализе экспериментального материала, полученного при проведении опытов с использованием современных иммунологических, биохимических, гистологических методов. Статистическая обработка осуществлялась с применением комплекса учетно-оценочных и аналитических показателей, адекватных математических методов и ЭВМ, что определяет высокую достоверность результатов.

Основные положения диссертации представлены на международном молодежном научном форуме «Ломоносов-2007» (Москва, 2007); 2-м международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения» (2007); II Международной (XI Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2007); 71-й итоговой научно-практической конференции с международным участием, посвященной 130-летию со дня рождения профессора Войно-Ясенецкого и 65-летию КрасГМА (Красноярск, 2007); международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2008); международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010, 2013); всероссийской научной конференции «Молодежная наука и современность» (Курск, 2007, 2008, 2010-2012); на заседании Курско-Старооскольской региональной общественной организации «Общество травматологов-ортопедов» (2012); III международной конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии» (Казань, 2012); XX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2013); итоговой научной конференции сотрудников КГМУ, ЦентральноЧернозёмного научного центра РАМН и отделения РАЕН, посвященной 78-летию КГМУ (Курск, 2013); международной научно-практической конференции РГСУ (Курск, 2012, 2014); межкафедральной научно-практической конференции кафедр травматологии, ортопедии и ВПХ, фармакологии, патологической физиологии и биологической химии Курского государственного медицинского университета (2013).

Соответствие диссертации паспорту на>........ специальнос ти. ! (лучные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.0.5.06 фармакология, клиническая фармакология. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности 14.0Г1.06 «Поиск новых биологически активных фармакологических веществ среди природных п впервые синтезированных соединений, продуктов биотехнологии, генной инженерии и других современных технологий на 'жепернмептальпых моделях патологических состоянии».

Связь задач исследования с проблемным планом медпцппоспх паук. Диссертация выполнена в соответствии с планом научных исследовании ПЮУ ВПО КГМУ Росздрава, тематикой проблемной комиссии «Фармакология, клиническая фармакология» (номер государственной регистрации 01201055012).

Личный вклад автора. Автором сосгавлсш,I план и дизайн исследования, проведен анализ отечественных и зарубежных источников литературы но теме диссертации, лично проводилось моделирование травматического повреждения кожных покровов и бедренных костей лабораторных животных, забор крови, анализировались лабораторные показатели процессов перекпспого окисления липидов, функции нейтрофилов крови, репаративпые процессы поврежденных тканей. Диссертантом самостоятельно выполнялись анализ и обобщение результатов, составление таблиц и графиков, написание диссертации, сопоставление с литературными данными. Доля автора I! совместных публикациях составила 80-90%.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 30 работ в центральной и местной печати, в том числе 4 в рекомендуемых ВАК изданиях. 11о-лучено 2 патента на изобретение. В работах содержится полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Объем н структура диссертации. Диссертация изложена па 14Х страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 таблицами и 36 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения собственных результатов, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка сокращений, библиографического указателя, включающего 157 отечественных и 166 иностранных источников.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены на 224 крысах Вистар самцах массой 180-220 г. которые содержались в условиях вивария КГМУ па обычном пищевом режиме и не имели признаков заболеваний. В каждую из контрольных и опытных групп включали от 8 до 10 животных одного возраста. Крысы различались по исходному весу не более ±10%. Все исследования проводили в одно и то же время суток - с 8 до 13 ч. Все манипуляции с животными в ходе исследования, а также выведение из эксперимента осуществляли с соблюдением принципов, изложенных в Страсбургской конвенции (1986).

Объектами исследования служили кровь, плазма крови, ткань кожи, бедренные кости.

Использованные препараты и способы их применения. В экспериментах изучались эффекты пептида глицил-гистидил-лизина NH2-Gly-L-His-L-Lys-COOH (GHL), синтезированного в НИИ химии Санкт-Петербургского государственного университета; опиоидного пептидного препарата даларгин -NH2-Tyr-D-Ala-GIy-Phe-Leu-Arg-COOH (Микроген НПО ФГУП, Россия) и пептидного иммуномодулятора тимоген - NH2-GIu-Trp-COOH (МБНПК ЦИТО-МЕД ЗАО, Россия).

Навески соответствующих препаратов (GHL и даларгин) растворяли в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия, а тимоген доводили им до соответствующей концентрации, и вводили в эквимолярных дозах внутрибрю-шинно или местно (внутрикожно, внутрикостно) в объеме 0,1 мл с интервалом в 24 часа между инъекциями в течение 10 суток. Введение препаратов начиналось сразу после моделирования раневого процесса на коже или перелома бедренной кости. Последнее введение препаратов осуществляли за 12 часов до вывода животных из эксперимента.

Экспериментальные модели и способы оценки репаративной регенерации кожи и костей. Эксперименты проводились под хлоралгидратным наркозом (300 мг/кг массы тела животного) (Никитина Н.В., 2011).

Раневой процесс моделировали по методике Хотинян В.Ф. (1984). При этом полнослойные раны стандартного размера (1 см2) наносились на холке. Сразу после моделирования раневого процесса, а также через пять и десять дней раны фотографировали цифровой фотокамерой Canon Powershot А410 с применением миллиметровой сетки с последующим измерением начальной (1-е сутки), промежуточной (через 5 суток) и конечной (через 10 суток) площадей ран. Вычисление площадей ран производилось с помощью программы Image Tool. На основании полученных данных вычислялся коэффициент относительного ранозаживления по формуле: Y= So-St/So, где Y - коэффициент относительного ранозаживления (КОР), So - начальная площадь раны, St - конечная площадь раны (Амирасланов Ю.А., 1981г.). При вычислении первого коэффициента относительного ранозаживления (КОР1) за So была взята площадь ран на первые сутки, а за St - через пять суток. При вычислении второго коэффициента относительного ранозаживления (КОР2) за So была взята площадь ран через пять суток, а за St - через десять суток. При вычислении третьего коэффициента относительного ранозаживления (КОРЗ) за So была взята площадь ран на первые сутки, а за St - через десять суток. Также проводились гистологические исследования раневых срезов.

Моделировался закрытый перелом правой задней конечности (производилась закрытая остеоклазия бедренной кости в средней трети зажимом Кохе-ра) с последующей интрамедуллярной фиксацией её спицей (Файтельсон A.B., 2007). Процесс консолидации переломов оценивали рентгенологически на аппарате Арман-1 8JI3 (Россия) и гистологически.

Гистологические исследования. После выведения животных из эксперимента для дальнейшего гистологического исследования иссекали кожные раны с окружающими здоровыми тканями и фрагменты бедренной кости (участок перелома и окружающих мышц). Материал фиксировали в 10% растворе ней-

трального формалина. После стандартных процедур обезвоживания и заливки в парафин на санном микротоне изготавливали срезы толщиной 7-10 мкм. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином (Саркисов Д.С., 1996).

При исследовании гистологических препаратов в световом микроскопе Leica СМЕ подсчитывали процентное соотношение различных типов резидентных и нерезидентных клеток в воспалительном инфильтрате грануляционной ткани и костной мозоли. Идентификация типов клеток осуществлялась по ка-риологическим признакам.

Примечание: гистологические исследования кожи проводились на базе МБУЗ «Пато-логоанатомическое бюро» с последующей консультативной помощью зав. кафедрой гистологии, эмбриологии и цитологии д.м.н., профессора A.B. Иванова, а гистологические исследования костных мозолей проводились на кафедре патологической анатомии КГМУ при непосредственном участии зав. кафедрой к.м.н., доцента В.Т. Дудки, за что мы выражаем им огромную признательность.

Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов и кислородзависи-мых механизмов антиинфекционной защиты. Фагоцитарную активность нейтрофилов крови исследовали после их инкубации с латексом (Медведев А.Н., 1987).Для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов использовали фагоцитарный индекс (ФИ) и фагоцитарное число (ФЧ). ФИ (процент нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе) и ФЧ (среднее количество поглощенных частиц латекса на один фагоцит) определяли в мазках, окрашенных по Романовскому (Медведев А.Н., 1987). В каждом мазке просчитывали 100 нейтрофилов.

Активность кислородзависимых механизмов защиты в фагоцитах оценивали в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) на аппарате Multiscan MC 400 (Labsystems, Финляндия) (Зинкин В.Ю., Годков М.А., 2004). Параллельно со спонтанным (НСТ-сп.) ставили стимулированный (НСТ-инд.), при этом в качестве стимулятора использовали зимозан. Об уровне функционального резерва нейтрофилов (ФРН) судили по коэффициенту КАо(оз/с) (Зинкин В.Ю., Годков М.А., 2004).

Определение оксидантных и антиоксидантных показателей крови.

Интенсивность перекисного окисления липидов определяли по уровню малонового диальдегида (МДА) с использованием набора реактивов для определения ТБК-активных продуктов («Агат», Россия) по общепринятому методу (Mihara М., 1980) с помощью спектрофотометра «DU-65» («Beckman», Великобритания). Состояние антиоксидантной защиты определяли по активности ка-талазы крови (Коралюк М.А., 1988).

Статистическая обработка материала. После определения типа распределения полученных цифровых данных они обрабатывались с помощью встроенных алгоритмов пакета анализа приложения Excel 2003. Достоверность различий сравниваемых параметров между средними значениями контрольной группы и групп животных различных серий определяли по расхождению границ доверительных интервалов при значениях р<0,05 и с помощью критерия Манна-Уитни (Зайцев В.В., 2000).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Влияние глицил-гистидил-лизина, гимогена, даларгина, а также их комбинаций на заживление кожных ран, функцию нейтрофилов и активность свободно-радикальных реакций при внутрибрюшинном введении.

Первым этапом исследований было выявление эффектов регуляторных пептидов GHL, даларгина и тимогена в отношении репаративной регенерации кожи. В ранее проведенных исследованиях на крысах было установлено, что пептид GHL проявляет наиболее выраженную ранозаживляющую активность в разовой дозе 0,5 мкг/кг массы при десятикратном внутрибрюшинном введении (Курцева A.A., 2009). Поэтому для исследования была выбрана эта доза и кратность введения препарата. Учитывая тот факт, что эффекты регуляторных пептидов зависят от количества молекул в среде (Розен В.Б., 1994; Хавинсон В.Х., 2002), введение тимогена и даларгина осуществлялось в эквимолярных с GHL дозах.

Установлено, что при внутрибрюшинном введении пептиды в эквимолярных концентрациях сопоставимо стимулировали заживление кожных ран (рисунок 1). При использовании пептидов в парных сочетаниях наблюдалось усиление их ранозаживляющего действия с наибольшей выраженностью в группе животных, получавших комбинацию GHL+даларгин (рисунок 1).

0.8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

Коэффициент относительного раночаживления (КОР 3)

* 1

н1я

в

Hü

I

ÜS

Щш ü

1

1

ж

Й

1 ÜP

IL щи

¡¡I

4-4

*1-5

6

4,6

т

ш «

ж ¡И

■

ш

I'hcviiok I Влияние регуляторных пептидов Gill., тимогена, даларгина и их комбинации на заживление кожных ран при внутрибрюшинном введении

Обозначения: I. Введение физиологического раствора (контроль). 2. Введение пептида GHL. 3. Введение гимогена. 4. Введение даларгина. 5. Введение комбинации GHL+тимоген. 6. Введение комбинации GHL+даларгин. 7. Введение комбинации тимоген+даларгин. I !римечание: * - р<0.05, а рядом стоящая цифра номер групп сравнения.

Выявленные эффекты подтверждались гистологическими исследованиями срезов кожных ран. При сочетанном применении пептидов наблюдалось усиление репаративной активности с максимальной выраженностью в группе крыс, получавших комбинацию СНЬ+даларгин. Наблюдалось изменение соотношения клеток соединительной ткани в сторону увеличения количества терминально-дифференцированных и зрелых форм механоцитов по сравнению с рекрутируемыми в очаг воспаления фагоцитирующими клетками (нейтрофилы и моноциты), а также завершения процессов эпителизации раневого дефекта.

Установлено, что при экспериментальной травме кожи наблюдалось снижение показателей ФИ, ФЧ и ИАФ. что свидетельствовало об ослаблении фагоцитарной активности нейтрофилов крови. Пептид СНЬ при внутрибрю-шинном введении не оказывал существенного влияния на функцию нейтрофилов крови (рисунок 2).

ФИ

Рисунок 2 - Влияние пептида GHL и его комбинаций с тимогеном и даларгииом на функцию нейтрофилов крови и аптиоксидантные показатели в условиях кожных ран при внутрибрюшинном введении

Обозначения: 1. Радиусом окружности обозначены показатели интактных животных без кожных ран. Изменения показателей в других группах с кожными ранами представлены в % по отношению к этим значениям. 2. • - р<0,05 по сравнению с интактными животными.

3. — - введение OHL. 4. - - - введение GHL+тимоген. 5. - введение

GHL+даларгин.

В этих условиях даларгин и тимоген повышали уровни ФИ, ФЧ и ИАФ по сравнению с группой, получавшей инъекции физиологического раствора.

При использовании комбинаций пептидов наблюдалось усиление эффектов (рисунок 2). При этом в группе животных, получавших комбинацию пептидов СНЬ+тимоген, наблюдалась коррекция уровней ФИ и ИАФ, а при использовании комбинации СНЬ+даларгин - коррекция уровней ФИ, ФЧ и ИАФ.

Травматическое повреждение кожных покровов экспериментальных животных также сопровождалось снижением показателей кислородзависимой активности нейтрофилов. Раздельное введение даларгина и тимогена достоверно усиливало кислородзависимую активность нейтрофилов периферической крови в спонтанной и индуцированной зимозаном реакциях НСТ-теста. При комбинированном введении тимогена или даларгина с пептидом СНЬ усиление эффекта наблюдалось в обеих группах животных (рисунок 2).

При повреждении кожных покровов наблюдалась активация свободно-радикальных реакций и ослабление антиоксидантной защиты организма, о чем свидетельствовало повышение уровня МДА и снижение активности каталазы. Раздельное введение пептидов сопровождалось проявлением антиоксидантной активности, в результате чего снижался уровень МДА и повышалась активность каталазы. Эффекты изучаемых препаратов в отношении МДА и каталазы были сопоставимы. Парное введение пептидов сопровождалось усилением эффекта в отношении активности каталазы и уровня МДА (рисунок 2). При этом при введении комбинаций СНЬ+тимоген и СНЬ+даларгин наблюдалась коррекция этих показателей.

Таким образом, при экспериментальной травме кожи благодаря синер-гичному действию пептидов СНЬ, тимогена и даларгина происходит существенное усиление иммунотропного, антиоксидантного и репаративного эффектов.

Репаративная, иммунотропная и антиоксидантная активности гли-цил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их парных сочетаний в условиях кожных ран при виутрикожном введении. Принимая во внимание возможность непосредственного действия пептидов на клетки кожи, было целесообразно выявить их эффекты, а также эффекты их парных сочетаний при виутрикожном введении.

Установлено, что при виутрикожном способе введения пептид СНЬ, а также его комбинации с тимогеном или даларгином оказывали более выраженное репаративное действие по сравнению с их эффектами при внутрибрюшин-ном способе введения. При этом наибольшей выраженностью также обладала комбинация СНЬ+даларгин (рисунок 3).

На гистологических срезах кожных ран в группе СНЬ+даларгин четко определяются все слои эпителия кожи. Наблюдается плотная неоформленная волокнистая соединительная ткань. Содержание фиброцитов значительно превышает содержание фибробластов. О степени зрелости эпителиального пласта свидетельствует появление межэпителиальных лимфоцитов.

В отношении сниженной на фоне экспериментальной травмы кожи поглотительной способности нейтрофилов было выявлено, что введение пептида СНЬ не влияло на изучаемые показатели. Тогда как внутрикожное введение даларгина и тимогена повышало ФИ и ФЧ, вследствие чего увеличивался ИАФ.

Использование комбинированного введения пептидов приводило к усилению поглотительной активности нейтрофилов. При этом более выраженными эффектами обладали комбинации СНЬ+даларгин и ОНЬ+тимоген.

Коэффициент относительного % ранозаживления (КОРЗ)

250 п 200 150 100 50 0

□ Внутрибрюшинно

□ Внутрикожно

*1-4

»1-3

р—

щ ж

GHL (1)

х, -к'

ш

*1 ш о

N -

*2-5

Даларшн (2) Тимогек (3) GHL+тимоген (4) GHL+дапаргон (5) Тимоген+даларгин

(6)

Рисунок 3 - Влияние регуляторных пептидов GHL, тимогена, даларгина и их комбинаций на заживление кожных ран при внутрикожном введении

Обозначения: Ось абсцисс - уровень животных, получавших физиологический раствор (контроль). Изменения представлены в % по отношению к контролю. 1. Введение пептида GHL. 2. Введение даларгина. 3. Введение тимогена. 4. Введение комбинации GHL+тимоген. 5. Введение комбинации GHL+дапаргин. 6. Введение комбинации тимоген+даларгин.

Примечание: * - р<0,05 (внутрикожное введение), а рядом стоящая цифра - номер групп сравнения.

Трипептид GHL не оказывал существенного влияния в отношении кисло-родзависимой активности нейтрофилов, тогда как пептидные препараты тимо-ген и даларгин повышали уровень функционального резерва нейтрофилов. Введение парных комбинаций пептидов GHL-Игимоген, GHL+даларгин и тимоген+даларгин приводило к усилению этого эффекта. При этом в группах GHL+тимоген и GHL+даларгин наблюдалась коррекция изучаемых показателей.

Раздельные инъекции пептидов снижали повышенную после травмы концентрацию МДА и повышали сниженную активность каталазы. Местное введение комбинаций пептидов GHL+даларгин и GHL+тимоген как и при внутри-брюшинном введении сопровождалось коррекцией изучаемых показателей.

Таким образом, в условиях кожных ран пептид GHL, а также его сочетания с тимогеном или даларгином проявляли более выраженную репаративную активность при их местном введении по сравнению с внутрибрюшинным введением. Также пептиды обладали синергичным антиоксидантным и иммуностимулирующим в отношении функции нейтрофилов эффектами.

Эффекты глицил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их комбинаций при внутрибрюшинном введении в условиях экспериментального перелома. В результате проведенных исследований также была выявлена ре-паративная активность регуляторных пептидов и их комбинаций при экспериментальном переломе бедренной кости.

У животных, получавших пептид вНЬ, в области перелома в краях костных отломков наблюдалась активная резорбция остеокластами погибшей костной ткани (рисунок 4). Над костными отломками располагался широкий слой, представленный множеством мелких сосудистых полостей и интенсивно про-лиферирующими остеогениыми клетками (многочисленные митозы клеток), среди остеогенных клеток встречались мелкие очаговые скопления хондроци-тов. В костной мозоли, расположенной дистальнее от места перелома, наблюдалось интенсивное новообразование костных трабекул, имеющих непосредственную связь с сохранившей жизнеспосособность тканью костных отломков, с формированием губчатой костной ткани.

i" 0

-

.....щ J

dbê

% : 4

j*"

V,

jggf

m

': ;

: »

.ж

к

J

il sa

-< х- V « Ш

' • i,1 : 1 iü

ÈÏ

g

Рисунок 4 Фотография гистологического среза наружной костной мозоли лабораторных крыс, получавших внут-рибрюшшшо GHL, через 10 суток после перелома бедренной кости (окраска ге-матоксилин+юзин, увеличение х 200).

Рисунок 5 - Фотография гистологического среза наружной костной мозоли лабораторных крыс, получавших внут-рибрюшинно комбинацию вНЬ +даларгин, через 10 суток после перелома бедренной кости (окраска гема-токсилин+эозин, увеличение х 200).

В группе животных, получавших даларгин, видимых морфологических различий с крысами, которым вводили пептид GHL, не было выявлено. Наблюдались репаративные изменения сопоставимые с теми, которые отмечались у животных, получавших пептид GHL. Наименее выраженные репаративные изменения наблюдались в группе животных, получавших тимоген.

При сочетанном применении пептидов наблюдалось усиление репаратив-ной активности, более выраженной в группе крыс, получавших комбинацию GHL + даларгин (рисунок 5). Наружная костная мозоль у этих животных в области места перелома была представлена двумя слоями: над костными отломками в тесной связи с их тканью слой новообразованных остеобластами кост-

ных трабекул, кнаружи покрытый фиброзным слоем надкостницы слой остео-генных клеток с мелкими очаговыми скоплениями хондроцитов.

Травматическое повреждение костной ткани сопровождалось угнетением функции нейтрофилов, о чем свидетельствовало снижение показателей ФИ, ФЧ, ИАФ, HCT, ФРН (таблица 1). В этих условиях было установлено стимулирующее действие пептидов GHL, даларгина и тимогена на поглотительную стадию фагоцитоза нейтрофилов, что сопровождалось достоверным повышением значений ФИ, ФЧ, ИАФ. Наибольшей стимулирующей активностью обладал тимоген, о чем свидетельствовало более выраженное повышение ФИ и ИАФ по сравнению с другими пептидами (таблица 1). При использовании комбинаций пептидов наблюдалось усиление эффекта. При этом была выявлена коррекция изучаемых показателей (ФИ, ФЧ, ИАФ) в группах животных, получавших комбинацию пептидов GHL -I- тимоген и GHL + даларгин (таблица 1).

При переломе бедренной кости также наблюдалось снижение показателей кислородзависимой активности нейтрофилов, что сопровождалось угнетением их функционального резерва. Внутрибрюшинные инъекции GHL существенно не влияли на изучаемые показатели. В то же время введение даларгина и тимогена сопоставимо повышало активность нейтрофилов в спонтанной и индуцированной реакциях НСТ-теста.

Таблица 1 - Влияние пептидов Gly-His-Lys (GHL), тимогена и даларгина, а также их комбинаций на фагоцитарную активность (М±т, н=8) нейтрофилов крови при экспериментальном переломе у крыс при внутрибрюшин-ном введении_

№ п/ п

Условия опыта

Интактные животные

Фагоцитарный индекс, %

67,01 ±4,33

Фагоцитарное число, абс.

3,82±0,19

2.

3.

5.

6.

7.

Введение физиологического раствора (NaCl)

Животные с экспериментальным переломом

Индекс активности фагоцитоза

2,51 ±0,12

Введение GHL

Введение даларгина

Введение тимогена

Введение комбинации GHL+даларгин

Введение комбинации GHL+тимоген

Введение комбинации Тимоген +даларгин

31,67±2,03*

41,80±2,50

43,50±2,65

тт

55,00±2,22

ччг

69,17±3,70*

72,17±5,25*2"5

60,00±2,5*'"4'6-7

1,35±0,05*

2,64±0,14

2,70±0,15,т3_

2,67±0,17

3,74±0,25*2"5 3,79±0,17*2"5

2,85±0,19

* 1.2.6,7

0,43±0,04*

!, 19: 0.03

1,17±0,03

1,41 ±0,04

трГ

2,35±0,23*

2,71±0,19*

1,71±0,05*

Примечание: * - достоверность отличий (р<0,05), цифры рядом со звездочкой показывают по отношению к показателю, какой группы эти различия достоверны, п - количество животных в группах.

При комбинированном введении тимогена или даларгина с пептидом ОНЬ наблюдалось усиление эффекта только в группе животных, получавших комбинацию СНЬ+даларгин и сопровождалось коррекцией функционального резерва нейтрофилов (рисунок 6). Эффекты комбинаций вНЬ^имоген и тимо-ген+даларгин были сопоставимы с эффектами раздельного введения тимогена и даларгина.

Установлено, что в условиях экспериментального перелома наблюдается активация процессов перекисного окисления липидов (таблица 2), что сопровождалось увеличением уровня МДА и снижением активности фермента ката-лазы. Введение всех выбранных для исследования пептидов по отдельности сопровождалось проявлением антиоксидантной активности, о чем свидетельствовало снижение уровня МДА и повышение активности каталазы крови

Функциональный резерв нейтрофилов (коэффициент КАо)

•1,2,5

т

•1,2.5

1

2

3

5

7

Рисунок 6 - Влияние регуляторных пептидов GHL, тимогена и даларгина, а также их комбинаций на уровень функционального резерва (М±ш, п=8) нейтрофилов крови при экспериментальном переломе у крыс при внутрибрюшинном введении

Обозначения: - ЛИН1)Я . уровень интактных животных.

Столбики - животные с экспериментальным переломом.

I Введение физиологического раствора (контроль). 2. Введение GHL

3. Введение даларгина, 4, Введение тимогена. 5. Введение GHL+даларгин

6. Введение GHL+тимоген. 7. Введение тимоген+даларгин.

Примечание: * - р<0,05, различия достоверны по отношению к группе контроля

Было выявлено повышение активности каталазы при сочетанном применении пептидов (таблица 2). При этом наиболее выраженная активность каталазы в крови наблюдалась при использовании комбинации пептидов

ОНЬ+тимоген (коррекция уровня каталазы). В то же время концентрация МДА в этой группе была на уровне контроля. Выявлено, что при совместном применении пептидов вНЬ, тимогена и даларгина наблюдалось их синергичное стимулирующее действие на активность каталазы, но не на уровень МДА в крови.

Таблица 2 - Влияние пептидов GHL, тимогена и даларгина, а также их комбинаций на антиоксидантные (М±ш, п=8) показатели крови при экспериментальном переломе у крыс при внутрибрюшинном введении

№ п/п Условия опыта МДА, мкмоль/л Катал аза, мккат/л

1. Интактные животные 2,08±0,23 2798,55±201,!

Животные с экспериментальным переломом

2. Введение физиологического раствора (контроль) 5,47±0,24*' 1291,37±64,17*]

3. Введение вНЬ 4,09±0,22*''2 1 597,60±91,37*1 ~

4. Введение даларгина 3,26±0,3f'-2 1530,15±93,82*'л

5. Введение тимогена 2,68±0,16*К! 1497,00±85,43*''2

6. Введение комбинации ОНЬ+даларгин 3,90±0,26*'-г-5 181 1,33±101,53*'"5

7. Введение комбинации СНЬ+тимоген 5,50±0,21*и"6 2966,86±391,0*2""

8. Введение комбинации тимоген+даларгин 3,66±0,41 *1,2'5,7 1978,35±196,60*'"5'7

Примечание: * - достоверность отличий (р<0,05), цифры рядом со звездочкой показывают по отношению к показателю какой группы эти различия достоверны, п - количество животных в группах.

Таким образом, при переломах комбинации изучаемых пептидов СНЬ, тимогена и даларгина обладают синергичными антиоксидантным и иммуностимулирующим в отношении активности нейтрофилов эффектами. При этом сочетание ОНЬ+даларгин корригировало большинство изученных показателей и более выраженно стимулировало репаративный остеогенез.

Репаративные, иммунотропные и антиоксидантные эффекты гли-цил-гистидил-лизина, тимогена, даларгина и их парных сочетаний при внутрикостном введении в условиях экспериментального перелома.

Гистологическими исследованиями костных мозолей было установлено, что пептид вНЬ, а также его комбинации с даларгином или тимогеном проявляли более выраженную репаративную активность при местном (внутрикостном) способе введения по сравнению с их внутрибрюшинными инъекциями. При этом наибольшей активностью обладала комбинация вНЬ+даларгин. В дистальных от линии перелома отделах костной мозоли обнаруживалась в тесной связи с тканью костного отломка новообразованная костная ткань с надко-

стницей и с явлениями перестройки в компактную кость (рисунок 7).

При местном (внутрикостном) введении особенности в иммуномета-болических эффектах по сравнению с внутрибрюшинным введением были выявлены только для комбинации СНЬ+даларгин. Так при внутрибрю-шинном введении этой комбинации не наблюдалось корригирующего дейст-

Рисунок 7 - Фотография гистологического среза наружной костной мозоли лабораторных крыс, получавших внутрикост-ио ОНЬ+даларгии через 10 суток после перелома бедренной кости (окраска гема-токеилин+эозин, увеличение х 200).

вия только в отношении уровня МДА и каталазы, тогда как при местном (внутрикостном) способе введения комбинации СНЬ+даларгин была выявлена коррекция этих показателей (рисунок 8).

НСТ инд

Рисунок 8 - Иммунометаболические эффекты комбинации СНЬ+даларгин при переломах костей при различных способах введения

Обозначения: 1 Радиусом окружности обозначены показатели интактных животных. Изменения показателей в других группах с экспериментальным переломом представлены в % по

отношению к этим значениям. 2.*- р<0,05 по сравнению с контролем. 3. ...... внутрибрю-

шинное введение пептидов ОНЬ+даларгин. 4. Е53 - внутрикостное введение пептидов ОНЬ+даларгин.

Каталаза

МДА * '

ФРН

Х НСТ сп

В связи с этим при переломах трубчатых костей комбинация GHL+даларгин обладала более выраженными антиоксидантными и иммуностимулирующими эффектами, что сопровождалось коррекцией изученных показателей при местном (внутрикостном) введении.

Таким образом, в условиях кожных ран и переломах трубчатых костей благодаря синергичному действию пептидов GHL, тимогена и даларгина происходит существенное усиление иммунокорригирующего, антиоксидантного и репаративного эффектов, что может быть использовано для стимуляции заживления кожных ран и репаративного остеогенеза.

ВЫВОДЫ

1. Регуляторные пептиды глицил-гистидил-лизин (GHL) и тимоген в разовой дозе 0,5 мкг/кг, а даларгин - 1,2 мкг/кг при десятикратном внутрибрю-шинном введении сопоставимо стимулируют заживление кожных ран.

2. При моделировании раневого процесса пептид GHL в разовой дозе 0,5 мкг/кг не влияет на функцию нейтрофилов крови, а тимоген (0,5 мкг/кг) и даларгин (1,2 мкг/кг) повышают активность нейтрофилов как при внутрибрю-шинном, так и при внутрикожном способах введения.

3. В условиях кожных ран пептиды GHL (0,5 мкг/кг), тимоген (0,5 мкг/кг) и даларгин (1,2 мкг/кг) проявляют сопоставимую антиоксидантную активность в отношении уровня малонового диальдегида и каталазы крови при десятикратном внутрибрюшинном или внутрикожном введении.

4. При внутрикожном способе введения пептид GHL в дозе 0,5 мкг/кг более эффективен в отношении репаративной регенерации кожи, чем при его внутрибрюшинном способе введения, а также по сравнению с тимогеном (0,5 мкг/кг) или даларгином (1,2 мкг/кг), введенным внутрикожно.

5. В условиях кожных ран пептиды GHL (0,5 мкг/кг), тимоген (0,5 мкг/кг) и даларгин (1,2 мкг/кг) в парных сочетаниях обладают синергич-ным репаративным, антиоксидантным и иммуностимулирующим действием в отношении функции нейтрофилов при внутрибрюшинном и внутрикожном способах введения, а комбинации GHL+ тимоген и GHL+даларгин обладают корригирующим действием на функцию нейтрофилов и процессы перекисного окисления (уровень малонового диальдегида и каталазы крови). При этом более выраженную ранозаживляющую активность проявляет комбинация GHL+даларгин.

6. Пептиды GHL (0,5 мкг/кг), тимоген (0,5 мкг/кг) и даларгин (1,2 мкг/кг) стимулируют репаративный остеогенез, а в парных сочетаниях обладают си-нергичным репаративным, антиоксидантным (активность каталазы) и иммуностимулирующим действием в отношении функции нейтрофилов при внутрибрюшинном и внутрикостном способах введения.

7. При переломах трубчатых костей комбинация GHL+тимоген корригирует поглотительную стадию фагоцитоза нейтрофилов и активность каталазы крови, а комбинация GHL+даларгин корригирует как поглотительную стадию фагоцитоза, так и кислородзависимую активность нейтрофилов при внутрибрюшинном и внутрикостном введениях. При этом комбинация GHL+даларгин

при внутрикостном введении корригирует процессы перекисного окисления в крови (МДА и каталаза) и проявляет более выраженное репаративное действие.

8. При внутрикостном способе введения комбинации пептидов GHL+тимоген или GHL+даларгин более эффективны в отношении репаратив-ного остеогенеза, чем при внутрибрюшинном способе введения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Стимуляция репаративной регенерации поврежденных тканей (кожи, костей) может проводиться с использованием комбинации регуляторных пептидов глицил-гистидил-лизина идаларгина.

2. Более выраженного усиления репаративной регенерации кожи и костей возможно добиться при местном (внутрикожном, внутрикостном) применении комбинации пептидов глицил-гистидил-лизина и даларгина.

3. Целесообразно использовать в учебном процессе медицинских вузов полученные данные об иммунометаболических расстройствах, изменениях в процессах репаративной регенерации тканей организма в условиях экспериментальной травмы кожи и костей, а также способах их коррекции комбинациями пептидов различных функциональных групп.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чердаков, В.Ю. Репаративные и иммунотропные эффекты пептида Gly-His-Lys в условиях кожных ран: материалы II Международной (XI Всерос.) Пироговской студенческой науч. мед. конф. (Москва, 15 марта 2007 г.). / В.Ю. Чердаков, A.A. Курцева// Вестн РГМУ -2007.-С. 284. '

2. Чердаков, В.Ю. Влияние фактора роста клеток печени на заживление кожных ран и функцию нейтрофилов / В.Ю. Чердаков, A.A. Курцева // Материалы докладов XIV Междунар. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 11-14 апр. 2007 г.) [Электронный ресурс]: - М„ 2007. - 1 электрон, опт. диск (CD-ROM)'; URL: http://lomonosov-msu.ru/arehive/Lomonosov_2007/index.htm.

3. Чердаков, В.Ю. Регуляторные пептиды: особенности репаративного и иммуно-тропного действия / В.Ю. Чердаков, A.A. Курцева, В.И. Панкратов // Молодежная наука и современность: материалы 72-й итоговой межвузовской конф. студентов и молодых ученых (Курск, 17-18 апр. 2007 г.): в 2 ч. - Курск, 2007. - Ч. I. - С. 23-25.

4. Чердаков, В.Ю. Репаративная активность глицил-гистидил-лизина в условиях кожных ран / В.Ю. Чердаков, A.A. Курцева, А.И. Маяков // Сборник материалов 71-й итоговой науч.-практ. конф. с междунар. участием, посвященной 130-летию со дня рождения профессора Войно-Ясенецкого и 65-летию КрасГМА. - Красноярск, 2007. - С. 354-356.

5. Чердаков, В.Ю. Влияние регуляторных пептидов различных функциональных групп на репаративную регенерацию гепатоцитов и иммунную функцию организма при поражении печени / В.Ю. Чердаков, A.A. Курцева, А.И. Маяков // Материалы II междунар. молодежного медицинского конгресса «Санкт-Петербургские научные чтения» (Санкт-Петербург, 5-7 дек. 2007 г.). - СПб, 2007; URL: http://sovetsno.spb.ru/conferences.html.

6. Влияние даларгина на показатели иммунной функции и репаративной регенерации в условиях кожных ран / В.Ю. Чердаков, E.H. Кононец, Я.В. Кремзукова, C.B. Гришин // Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов / Материалы 73-й итоговой межвузовской конф. студентов и молодых ученых (Курск, 15-16 апр 2008 г)- в 2 ч. - Курск, 2008. - Ч. 1. - С. 23-24.

7. Иммунотропные и репаративные эффекты даларгина в условиях кожных ран /

B.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, E.H. Кононец, C.B. Гришин // Материалы 1 Международной дистанционной науч. конф. «Инновации в медицине» (1-3 декабря 2008 г.). - Курск. 2008. -

C. 12-14.

8. Влияние лизина и пептида Gly-his-lys на функцию нейтрофилов крови при травмах кожи // В.Ю. Чердаков, A.A. Курцева, М.Ю. Смахтин, Я.В. Кремзукова // Материалы I Междунар. дистанционной науч. конф. «Инновации в медицине» (1-3 декабря 2008 г.). -Курск, 2008. - С. 14-16.

9. Синергичное антиоксидантное и репаративпос действие тимогена, далар-гина и пептида Gly-His-Lys при переломе трубчатых костей / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин и др./ Курск, науч.-практ. вести. «Человек и его здоровье». - 2010. - № 4. - С. 15-20.

10. Фармакологические эффекты регуляторных пептидов при травме кожи /

B.Ю. Чердаков, И.М. Соболева, E.H. Кононец и др. // Материалы IV Международной науч. конф. молодых ученых-медиков (Курск, 25-26 февраля 2010 г.): в 2 т. - Курск, 2010. Т. 1. -

C. 355-358.

11. Репаративные и иммунотропные эффекты пептида gly-his-lys в условиях кожных ран / В.Ю. Чердаков, E.H. Кононец, И.М. Соболева, В.Т. Корошвили // Молодежная наука и современность: материалы 75-й юбилейной итоговой Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием, посвященной 75-летию КГМУ (Курск, 20-21 апр. 2010 г.): вЗ ч,-Курск, 2010.-Ч 1.-С. 24-25.

12. О механизме репаративного действия пептида gly-his-lys и даларгина при травме кожи / В.Ю. Чердаков, E.H. Кононец, И.М. Соболева, М.Е. Патина // Молодежная наука и современность: материалы 75-й юбилейной итоговой Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием, посвященной 75-летию КГМУ (Курск, 20-21 апр. 2010 г.): в Зч -Курск, 2010.-Ч. 1.-С. 32-33.

13. Репаративные и иммунотропные эффекты тимогена в условиях кожных ран I В.Ю. Чердаков, И.М. Соболева, E.H. Кононец, О.В. Локтионова // Молодежная наука и современность: материалы 75-й юбилейной итоговой Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием, посвященной 75-летию КГМУ (Курск, 20-21 апр. 2010 г.): в 3 ч,-Курск, 2010.-Ч 1.-С. 33-34.

14. Антиоксидантное действие регуляторных пептидов при переломах / В.Ю. Чердаков, В.Т. Корошвили, E.H. Кононец, И.М. Соболева // Молодежная наука и современность: материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых (Курск, 19-20 апр. 2011 г.): в 3 ч. - Курск, 2011. - Ч. 1. - С. 20-21.

15. Эффекты глицил-гистил-лизина и тимогена на репаративные процессы в коже после механической травмы / В.Ю. Чердаков, E.H. Кононец, И.М.Соболева, В.Т. Корошвили // Молодежная наука и современность: материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых (Курск, 19-20 апр. 2011 г.): в 3 ч. - Курск, 2011. - Ч. 1.- С. 28.

16. Чердаков, В.Ю. Сравнительная характеристика эффектов регуляторных пептидов при переломах трубчатых костей / В.Ю. Чердаков, E.H. Кононец, И.М.Соболева // Молодежная наука и современность: материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых (Курск, 19-20 апр. 2011 г.): в 3 ч,-Курск, 2011. - Ч. 1.-С.208.

17. Чердаков, В.Ю. Фармакологические эффекты gly-his-lys в условиях кожных ран / В.Ю. Чердаков, E.H. Кононец, И.М. Соболева // Молодежная наука и современность: материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых (Курск, 19-20 апр. 2011 г.): в 3 ч. - Курск, 2011. - Ч. 1. - С. 209.

18. Применение регуляторных пептидов: тимогена, даларгина, глицил-гнетидил-лизнна и их комбинаций для коррекции нейтрофилыюго звена антиинфекционного иммунитета при переломе бедренной кости / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин, И.И. Бобынцев // Курск, науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье». -2012.-Л'» 2.-С. 40-44.

19. Пептидэргические механизмы активации репаративного остеогенеза при переломах / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин, Ю.В. Фурман // Теоретические и прикладные проблемы современной науки и образования / Материалы междунар. науч,-практ. конф. (Курск, 29-30 марта 2012 г): в 2 ч. - Курск, 2012. - Ч. 1. - С. 193-199.

20. Влияние регуляторных пептидов: тимогена, даларгина и gly-his-lys на функцию нейтрофилов крови при переломах / В.Ю. Чердаков, В.Т. Корошвили, Ю.С. Кузнецова, К.В. Глушакова // Молодежная наука и современность: материалы 77-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых (Курск, 18-19 апр. 2012 г.): в 3 ч. - Курск, 2012. - Ч. 1. -С. 50-51.

21. Комбинированные пептидэргические способы активации репаративного остеогенеза/ В.Ю. Чердаков, В.Т. Корошвили, Т.В. Корогодина, E.H. Кононец//Молодежная наука и современность: материалы 77-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых (Курск, 18-19 апр. 2012 г.): в 3 ч. - Курск, 2012. - Ч. 1. - С. 51.

22. Чердаков, В.Ю. Репаративная активность регуляторных пептидов: тимогена, даларгина и gly-his-lys при переломах / В.Ю. Чердаков, Ю.Ю. Полевой, В.Т. Корошвили // Молодежная наука и современность: материалы 77-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых (Курск, 18-19 апр. 2012 г.): в 3 ч. - Курск, 2012.-Ч. 1.-С. 51-52.

23. Чердаков, В.Ю. Пептидэргические способы активации репаративного остеогенеза / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин // Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии: сб. трудов III Международной интернет-конф. (Казань, 19-22 ноября 2012 г.) / ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет». - 2013. -С. 319-320.

24. Синергичное иммунотропное и репаративное действие тимогена, даларгина и регуляторного пептида Gly-His-Lys при экспериментальной травме кожи/ В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин, И.И. Бобынцев // Курск, науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2013. - № 1. - С. 38-42.

25. Регуляторные пептиды: влияние на репаративные процессы и иммунную функцию в условиях кожных ран / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин, В.Т. Корошвили // Университетская наука: взгляд в будущее: Материалы итоговой науч. конф. сотрудников КГМУ, Центрально-Чернозёмного научного центра РАМН и отделения РАЕН, посвященной 78-летию КГМУ (Курск, 7 февраля 2013 г.): 2 т. - Курск, 2013. - Т. 2. -С. 238-240.

26. Применение регуляторных пептидов для коррекции поглотительной стадии фагоцитоза нейтрофилов в условиях экспериментального перелома / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин, В.Т. Корошвили // Университетская наука: взгляд в будущее: Материалы итоговой науч. конф. сотрудников КГМУ, Центрально-Чернозёмного научного центра РАМН и отделения РАЕН, посвященной 78-летию КГМУ (Курск, 7 февраля 2013 г.): 2 т. - Курск, 2013. -Т. 2. - С. 252-255.

27. Пептидэргические механизмы действия на репаративные процессы и иммунную функцию в условиях кожных ран / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин, В.Т. Корошвили // Материалы VII Международной науч. конф. молодых ученых-медиков (Курск, 1-2 марта 2013 г.): в 3 т. - Курск, 2013. - Т. 2. - С. 88-91.

28. Чердаков, В.Ю. Антноксидантные и репаративные эффекты регуляторных пептидов Gly-His-Lys, тимогена, даларгина и их парных комбинаций при экспериментальной травме кожи / В.Ю. Чердаков // Научно-практический журнал «Врач-аспирант». - 2013. - № 1.3 (56). - С. 416-421.

29. Чердаков, В.Ю. Фармакологические эффекты парного комбинированного применения тимогена, даларгина и пептида gly-his-lys при экспериментальной травме кожи / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин // Человек и лекарство: сб. материалов XX Рос. нац. конгр. (Москва, 15-19 апреля 2013 г). - М„ 2013. -С. 463.

30. Пептидэргические способы активации заживления кожных ран / М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин, В.Ю. Чердаков, Ю.В. Фурман //Актуальные проблемы общества, науки и образования: современное состояние и перспективы развития / Материалы междунар. науч,-практ. конф. (Курск, 23-24 янв. 2014 г.). - М„ 2014. - С. 394-400.

31. Пат. 2429002 Российская Федерация, МПК А61Р19, А61К38/08, А61К38/06. Способ стимуляции репаративного остеогенеза [Текст] / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин [и др.]; заявитель и патентообладатель Курск, гос. мед. ун-т. -№2010137996/15; заявл. 13.09.10; опубл. 20.09.11. Бюл. №26. -7с.: ил.

32. Пат. 2452508 Российская Федерация, МПК А61К38/05, А61К38/06, А61Р17/02. Способ стимуляции заживления кожных ран и функциональной активности нейтрофилов [Текст] / В.Ю. Чердаков, М.Ю. Смахтин, Г.М. Дубровин [и др.]; заявитель и патентообладатель Курск, гос. мед. ун-т. - № 2010137992/15; заявл. 13.09.10.; опубл. 10.06.12. Бюл. № 16. -

ИАФ - индекс активности фагоцитов

КОР - коэффициент относительного ранозаживления

МДА - малоновый диальдегид

НСТ-тест - тест восстановления нитросинего тетразолия

НСТ-сп. - спонтанная реакция НСТ-теста

НСТ-инд. - индуцированная реакция НСТ-теста

ФИ - фагоцитарный индекс, %

ФРН - функциональный резерв нейтрофилов

ФЧ - фагоцитарное число, абс

вНЬ - пептид глицил-гистидил-лизин

ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 4.07.2014 г. Подписано в печать 9.07.2014 г. Формат 30x42i/s Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 276«А» Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

4 с. :ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ