Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологическая коррекция тиреотоксикоза комплексным растительным средством "Тиреонорм"

На правах рукописи

Ж?

Водопьянова Анна Михайловна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ТИРЕОТОКСИКОЗА КОМПЛЕКСНЫМ РАСТИТЕЛЬНЫМ СРЕДСТВОМ «ТИРЕОНОРМ»

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

О г « - г*~-

•} ¿Ьа

Улан-Удэ - 2012

005015787

005015787

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Шантанова Лариса Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой биоорганической и пищевой химии ФГБОУ ВПО Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления Министерства образования и науки РФ Жамсаранова Сэсэгма Дашиевна

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой инфекционных болезней ФГБОУ ВПО Бурятский государственный университет Министерства

образования и науки РФ Убеева Ираида Поликарповна

Ведущая организация: ГБОУ ДПО «Иркутская государ-

Защита состоится «23» мая 2012 г. б 1400 на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан « » апреля 2012 г. Ученый секретарь диссертационного сочета

ственная медицинская академия последипломного образования» Минздравсоцразвития РФ

кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из наиболее актуальных проблем современной медицины и практического здравоохранения являются заболевания щитовидной железы (Балаболкин, и соавт., 2007; Суплотова, 2008; Касаткина, 2009; Фадеев, 2009; Hoogendoorn et al., 2006). По распространенности заболевания щитовидной железы, прежде всего, обусловленные дефицитом йода (йоддефицитные заболевания), занимают первое место среди всех других эндокринных расстройств: частота этой патологии, даже вне зон зобной эндемии, составляет не менее 20% от общей заболеваемости (Калинин, 2000; Балаболкин, и соавт., 2008; Дедов, 2009), что позволило выделить специальную дисциплину - тироидологию. При этом в эндемичных по зобу регионах, где проживает примерно 1/3 человеческой популяции, эти показатели нередко превышают 50% (Калинин, 2000). По данным ВОЗ риску развития йоддефицитных заболеваний (ЙДЗ) подвержены не менее 1 млрд. населения Земли. В РФ практически нет территорий, население которых не подвергалось бы риску развития ЙДЗ (Федак, 2007; Трошина, 2007; Мельниченко, 2009; Дедов, 2009; Пе-тунина, 2011). По статистическим данным, диффузно-токсический зоб встречается с частотой 18 - 24 на 100 тысяч населения, причем в последние годы отмечается увеличение заболеваемости, что связывают с ухудшением экологической обстановки (Балаболкин, и соавт., 2007, Дедов, 2009; Кроненберг, 2010). Клинически заболевание проявляется синдромом тиреотоксикоза и гипертиреоза, обусловленных избытком тиреоид-ных гормонов и состоянием гиперфункции щитовидной железы (Велда-нова, 2005; Валдина, 2006; Петунина, 2011).

Существующие в настоящее время методы лечения ЙДЗ как хирургические, так и консервативные не являются патогенетическими, а направлены на подавление выработки тиреоидных гормонов (Балаболкин, 2008; Дедов, 2009; Фадеев, 2009; Alexander, 2002; Cooper, 2005). Консервативное лечение, связанное с применением тиреостатических препаратов, способствует неуправляемому течению заболевания с периодами спонтанных ремиссий и рецидивов. Кроме того, назначение их сопровождается высокой частотой развития побочных эффектов (Шестакова, 2007; Кияев, 2008; Lasar, 2000), что обусловливает актуальность поиска и разработки новых эффективных средств, предназначенных для лечения данной патологии.

В связи с вышеизложенным было разработано многокомпонентное растительное средство в виде сухого экстракта, полученного из следующих видов растений: лапчатка белая (Potentilla alba L.), боярышник кроваво-красный {Crataegus sanguínea Pall.), валериана лекарственная (Valeriana officinalis L.), условно названное "Тиреонорм". Выбор экстракта лапчатки

белой обусловлен тем, что данное растение является накопителем йода (Гриценко, 1977; Николайчук, 2006; Алефиров, 2006; Айвазова, 2008). Включение экстрактов боярышника кроваво-красного и валерианы лекарственной связано с тем, что они являются сердечно-сосудистым и седатив-ным средствами и применяются при повышенной возбудимости, развитии неврозоподобных и депрессивных состояний, повышении артериального давления, нарушениях сердечного ритма, сопровождающих тиреотоксикоз (Соколов, 2000; Балаболкин, 2008; Фадеев, 2009; Петунина, 2011).

Целью настоящего исследования явилось определение спектра фармакологической активности, фармакотерапевтической эффективности и особенностей механизма действия «Тиреонорма».

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. определить общие и специфические фармакологические свойства «Тиреонорма»;

2. выявить влияние «Тиреонорма» на гормональный статус и мор-фофункциональное состояние щитовидной железы у белых крыс;

3. определить фармакотерапевтическую эффективность «Тиреонорма» при экспериментальном тиреотоксикозе и иммуносупрессивном состоянии;

4. определить особенности механизма действия «Тиреонорма».

Научная новизна. Работа представляет собой исследование фармакологических свойств и определение фармакотерапевтической эффективности нового растительного средства «Тиреонорм». Впервые установлено, что испытуемое средство обладает широким спектром фармакологических свойств: тиреотропным, анксиолитическим, ноотропным, седа-тивным, антигипоксйческим, противовоспалительным; снижает частоту сердечных сокращений, оказывает гипотензивное действие. Показано, что курсовое введение животным испытуемого средства в экспериментально-терапевтической дозе (100 мг/кг) оказывает фармакотерапевтическое влияние при экспериментальном тиреотоксикозе. В частности, на фоне его введения наблюдали нормализацию содержания тиреотропного и ти-реоидных гормонов, уменьшение выраженности патоморфологических изменений щитовидной железы, снижение признаков тревожности, повышение исследовательской и ноотропной активности животных, нормализацию уровня артериального давления и биоэлектрической активности миокарда, а также показателей обмена веществ. Впервые установлено, что «Тиреонорм» обладает существенным иммуномодулирующим потенциалом, повышая активность гуморального, клеточного и макрофагаль-ного звеньев иммунного ответа при иммуносупрессивных состояниях. Обнаружено, что фармакотерапевтическая эффективность испытуемого

средства при экспериментальном тиреотоксикозе связана с его нормализующим влиянием на центральные и периферические звенья многоступенчатого процесса биосинтеза тиреоидных гормонов в системе гипоталамус-гипофиз-щитовидная железа. Молекулярно-клеточные механизмы действия «Тиреонорма» обусловлены стабилизацией мембранных структур клеток, связанной с ингибированием процессов свободнорадикально-го окисления биомакромолекул под его влиянием, а также повышением потенциала эндогенной антиокислительной системы организма.

Практическая значимость. Установленные фармакологические свойства нового средства природного происхождения аргументируют возможность и целесообразность его внедрения в практическое здравоохранение в качестве средства, предназначенного для лечения и профилактики тиреотоксикоза. Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 1 февраля 2012 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

- растительное средство «Тиреонорм» обладает широким спектром фармакологических свойств: тиреотропным, анксиолитическим, ноо-тропным, седативным, хронотропным, гипотензивным, антигипоксиче-ским, противовоспалительным;

- курсовое введение животным испытуемого средства в экспериментально-терапевтических дозах (50 - 100 мг/кг) оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при экспериментальном тиреотоксикозе, нормализуя уровень тиреоидных гормонов, уменьшая выраженность патоморфологических изменений щитовидной железы, а также снижая проявления сопутствующих симптомов тиреотоксикоза со стороны центральной нервной и сердечно-сосудистой систем;

- «Тиреонорм» обладает существенным иммуномодулирующим потенциалом, повышая активность гуморального, клеточного и макрофа-гального иммунного ответа при иммуносупрессивных состояниях;

- механизмы фармакотерапевтического действия испытуемого средства связаны с его влиянием на центральные и периферические механизмы многоступенчатого процесса биосинтеза тиреоидных гормонов в системе гипоталамус-гипофиз-щитовидная железа, а также со стабилизацией мембранных структур клеток, обусловленной как ингибированием процессов свободнорадикального окисления, так и повышением потенциала системы эндогенной антиокислительной защиты организма.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 10-

летию медицинского факультета Бурятского государственного университета (Улан-Удэ, 2009); научно-практической конференции, посвященной юбилею Центра восточной медицины (Улан-Удэ, 2010); научно-практической конференции, посвященной Дню медицинского работника (Улан-Удэ, 2010); 5 International symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine (Ulaanbaatar, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, из них 3 - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.

Работа выполнена в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 5 глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего 295 источников: 155 отечественных и 140 зарубежных авторов. Работа изложена на 144 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 36 таблицами, 6 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследованию подвергали сухой экстракт комплексного средства, условно названный «Тиреонорм», полученный из корневищ лапчатки белой (Potentilla alba L.) - 50%, плодов боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguinea Pall.) - 35%, корневищ валерианы лекарственной (Valeriana officinalis L.) - 15%. Сухие экстракты получены путем трехкратной экстракции 40% спиртом этиловым, последующей фильтрацией и сушкой в вакуумно-сушильном шкафу при температуре 50-60 градусов. «Тиреонорм» представляет собой хорошо растворимый в воде порошок темно-коричневого цвета с характерным запахом. Испытуемое средство животным вводили перорально в экспериментально-терапевтических дозах 50-100 мг/кг в объеме 10 мл/кг в соответствии с дизайном исследований. Выбор экспериментально-терапевтических доз был осуществлен в серии предварительных экспериментов. В качестве препаратов сравнения использовали «Эндокринол» («Эвалар», Россия) в дозе 100 мг/кг.

Исследования выполнены на 550 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г и 90 мышах линии Fj (СВА х С57В1/6) обоего пола массой 20-22 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН на обычном рационе (Приказ МЗ СССР №1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты осуществляли' в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.). Протокол исследования согласован этиче-

ским комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол №3 от 03.02.2008). Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Разделение животных на группы производили с учетом принципа рандомизации. Кроме того, в экспериментах были использованы суспензии эритроцитов и желточных липопротеидов.

Острую токсичность определяли с использованием общепринятого метода Кербера (Хабриев, 2005).

Для исследования фармакотерапевтической эффективности «Тирео-норма» были использованы следующие экспериментальные модели:

- экспериментальный тиреотоксикоз воспроизводили путем перо-рального введения «Тиреотома» (Берин-Хеми, Германия), содержащего 40 мг левотироксина (Т4) и 10 мг лиотиронина (Тз) (Айвазова, 2008). Препарат вводили крысам в виде водной взвеси перорально ежедневно (за 30 минут до кормления) в течение 6 недель в еженедельно возрастающей дозе: 25, 50, 100, 150, 200 мкг/кг;

- иммунодепрессивное состояние у животных воспроизводили путем внутрижелудочного введения азатиоприна в дозе 50 мг/кг в течение 5 дней (Лазарева, Алехин, 1985). При исследовании иммуномодулирующей активности «Тиреонорма» состояние гуморального иммунитета оценивали методом локального гемолиза (Cunningham, 1965); клеточного иммунитета - в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (Петров и соавт., 1987); макрофагального звена иммунного ответа - в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в отношении частиц коллоидной туши (Руководство..., 2005).

Оценку влияния указанного фитосредства на поведенческую и познавательную активность животных проводили с использованием методов «открытое поле», «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), «условного рефлекса пассивного избегания» (УРПИ) (Методические рекомендации ..., 2005). Для оценки седативной активности определяли его потенцирующее и пролонгирующее действие на снотворный эффект тио-пентала натрия (39 мг/кг, ED50) (Воронина, Неробкова, 2000). Противосу-дорожное действие оценивали по продолжительности латентного периода и количеству выживших животных после введения конвульсантов в летальных дозах. Судороги у животных вызывали однократным введением водных растворов коразола в дозе 100 мг/кг (DLioo), стрихнина нитрата в дозе 2 мг/кг (DLioo) (Гацура, 1974) и тиосемикарбазида в дозе 30 мг/кг (DLioo) (Воронина, Неробкова, 2000).

Влияние «Тиреонорма» на функциональное состояние сердечнососудистой системы оценивали по характеру его влияния на величину систолического артериального давления (САД), частоты сердечных со-

кращений, а также биоэлектрическую активность миокарда животных с использованием метода фотоплетизмографии на кардиомониторе СМ-42115 (Польша).

Гипобарическую гипоксию воспроизводили общепринятым методом в барокамере при разряжении воздуха, соответствующему «подъему» животных на высоту 10000 м. Модель гемической гипоксии вызывали путем однократного внутрибрюшинного введения животным водного раствора натрия нитрита в дозе 210 мг/кг (Костюченков, 1982). Для воспроизведения тканевой гипоксии животным однократно внутрибрюшинно вводили водный раствор натрия нитропруссида в дозе 42 мг/кг (Воронина, Нероб-кова, 2000).

Для оценки противовоспалительной активности «Тиреонорма» определяли его влияние на экссудацию, альтерацию и образование фиброзно-грануляционной ткани. Изучение антиэкссудативной активности проводили на моделях острого асептического воспаления задней конечности, которое моделировали путем однократного субплантарного введения в заднюю конечность белых крыс 0,1 мл 3% раствора формалина (Стрельников, 1960) и 0,1 мл 6% раствора декстрана (Лещинский, 1976). Оценку влияния фи-тосредства на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли с использованием метода «ватной гранулемы» (Тринус и соавт., 1975). Для определения влияния на процессы альтерации воспалительный процесс моделировали путем подкожного введения в область спины 0,5 мл 9% раствора уксусной кислоты с одновременным внутрибрюшинным введением декстрана в дозе 300 мг/кг (Ойвин, Шетель, 1961).

Перекисный гемолиз эритроцитов донорской крови воспроизводили с использованием реактива Фентона, осмотический гемолиз - добавлением равного объема дистиллированной воды (Ковалев и соавт., 1986).

Для оценки антиоксидантных свойств «Тиреонорма» определяли его влияние на интенсивность процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул и состояние эндогенной антиоксидантной системы организма. Для этого определяли концентрацию маланового диальдегида в гомогенате печени (Стальная и соавт., 1977), активность супероксиддис-мутазы (Чевари и соавт., 1985) и катапазы (Королюк и соавт., 1988) в сыворотке крови.

Кроме того, с использованием методов in vitro оценивали динамику накопления ТБК-активных продуктов в суспензии липосом яичного желтка (Клебанов и соавт., 1988). Антирадикальную активность по отношению к супероксидным радикалам определяли по методу Chen A.-S. с соавт.(2003), по отношению к ДФПГ-радикалам - по методу Seyoum А. и соавт. (2006), по отношению к NO - по методу Govindarajan R. с соавт. (2003). Инактивацию пероксида водорода оценивали по методу Chen А.-S. с соавт.(2003). Хелатирующую активность испытуемого средства определяли с использованием О-фенантролинового метода (Теселкин, 1997).

Содержание тиреоидных гормонов (трийодтиронина - Тз и тироксина -Т4), тиреотропного гормона (ТТГ) в сыворотке крови экспериментальных животных определяли с использованием наборов Total Т4 RIA KIT, Total T3 RIA KIT, Total ТТГ RIA KIT фирмы Immunotech, Bekman (Чехия). Содержание гормонов рассчитывали методом интерполяции автоматически по калибровочной кривой нау-счетчике фирмы LKB (Швеция).

Биохимические исследования сыворотки крови животных проводили с использованием биохимического анализатора «Sapphire» (Япония).

Для патоморфологических исследований щитовидную железу животных отделяли от прилежащих тканей, фиксировали в 10%-ом нейтральном формалине и заливали в парафин. Парафиновые срезы толщиной в 45 мкм окрашивали гематоксилин-эозином (Волкова, Елецкий, 1971). Для объективной оценки морфо-функционального состояния щитовидной железы использовали количественные методы анализа тканевых компонентов, в том числе разработанные для эндокринных органов (Хмельницкий, 2002). Методом стереоскопии точечного счета (Автандилов, 1990) с помощью компьютерной программы «Диаморф» на гистологических срезах определяли относительный объем тканевых компонентов щитовидной железы: фолликулярного эпителия, коллоида, интерфолликулярных островков, десквамированных тироцитов, соединительной ткани, лейкоцитов и сосудистого русла.

Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны по Манну-Уитни (Сергиенко, Бондарева, 2000). Различие считали достоверным при вероятности 95 % (Р < 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Исследование фармакологической активности «Тиреонорма»

Исследование острой токсичности сухого экстракта «Тиреонорм» показало, что при внутрибрюшинном введении белым крысам его DL50, рассчитанная по методу Кербера, составляет 750 мг/кг. Перорапьное введение животным испытуемого средства во всех исследованных дозах не сопровождалось гибелью животных в течение всего периода наблюдения. Максимальная доза «Тиреонорма» составила 10000 мг/кг (максимальное количество средства, растворение которого возможно в объеме воды, исходя из расчета 10 мл/кг). При пероральном введении больших доз экстракта (6000 - 10000 мг/кг) в первые часы наблюдали признаки интоксикации в виде ограничения движений, частого мочеиспускания, отказа от корма, которые исчезали через 6-7 часов. Полученные данные позволяют отнести сухой экстракт «Тироенорм» к группе мало токсичных веществ по классификации К.К. Сидорова (Требования ..., 1984).

При исследовании специфической фармакологической активности «Тиреонорма» установлено, что его 7-дневное введение перорально крысам в дозах 50 и 100 мг/кг оказывает выраженное психотропное действие, о чем свидетельствует повышение ориентировочно-исследовательской активности животных за счет увеличения вертикальной активности и норкового рефлекса (соответственно на 55 и 61% по сравнению с аналогичными показателями в контроле), а также почти двухкратное возрастание количества выходов животных в центральную зону камеры (табл. 1).

Таблица 1

Влияние «Тиреонорма» на поведенческую активность белых крыс в тестах _«открытое поле» и «приподнятый крестообразный лабиринт»_

Показатели Группы животных

Контрольная (п=10) Опытная 1 (Тиреонорм, 50 мг/кг) (п=10) Опытная 2 (Тиреонорм, 100 мг/кг) (п=10)

«Открытое поле»

Общая двигательная активность 37,60±3,25 41,11±3,10* 41,8±3,90*

Горизонтальная активность 28,30±2,64 27,80±2,54 27,3±2,61

Вертикальная активность 8,0±0,50 11,4±0,90 12,4±0,50*

Норковый рефлекс 1,32±0,07 1,9±0,10 2,1,±0,17*

Дефекация 3,11±0Д0 1,70±0,09* 1,3±0,01*

Груминг 5,71±0,40 3,0±0,09* 2,9±0,02*

Кол-во выходов в центральную зону 1,42±0,12 3,70±0,44* 3,80±0,31*

«Приподнятый крестообразный лабиринт»

Кол-во заходов в открытые рукава 0,41+0,03 1,36±0,41 1,41±0,13*

Кол-во заходов в закрытые рукава 1,62±0,21 2,36±0,32 2,39+0,27

Время нахождения в закрытом рукаве, с 260,6±24,10 243,0±23,60 239,0+22,11

Время нахождения в открытом рукаве, с 13,4±1,42 28,0±2,59* 31,0±3,23*

Время нахождения на центральной площадке, с 26,0±2,50 29,0±2,78 30,0±2,8

Примечание: * - здесь и далее значения, достоверно отличающиеся от данных контрольной группы при Р < 0,05.

При этом более выраженное действие оказывал «Тиреонорм» в дозе 100 мг/кг. Наряду с этим, отмечалось достоверное уменьшение числа болюсов и количества актов груминга соответственно в 2,3 и 1,9 раз по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы. Пока-

зано также, что введение крысам «Тиреонорма» сопровождается увеличением количества заходов в открытые рукава в 3,3 и 3,4 раза по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Полученные данные свидетельствуют о повышении ориентировочно-исследовательской активности, снижении уровня тревожности и ускорении периода адаптации животных к новым незнакомым условиям.

Установлено также, что «Тиреонорм» в дозе 100 мг/кг оказывает ноо-тропное действие, стимулируя когнитивные функции животных. Так, на фоне его курсового введения животным наблюдали 100% выработку условного рефлекса, ускорение времени рефлекса и сохранение памятного следа в отдаленные сроки (через 1,3 и 7 суток после обучения); латентный период захода в темный отсек увеличивался на 15, 37 и 56% соответственно по сравнению с данными у животных контрольной группы.

Установлено, что предварительное введение крысам «Тиреонорма» в указанных дозах оказывает потенцирующее влияние на снотворное действие тиопентала натрия, о чем свидетельствует достоверное укорочение латентного периода засыпания и увеличение продолжительности тиопента-лового сна При этом отмечается дозо-зависимый эффект: с увеличением дозы испытуемого средства отмечается повышение его потенцирующей эффективности. Установлено, что продолжительность сна животных, получавших «Тиреонорм» в дозе 100 мг/кг, увеличилась более чем в 1,7 раз по сравнению с данными в контроле и составила в среднем 21,7 минут.

При исследовании притивосудорожной активности указанного средства на фоне введения конвульсантов с различными механизмами действия установлено, что подкожное введение белым крысам коразола в дозе БЬюо сопровождается развитием клонико-тонических судорог, приводящих к 100% гибели животных. Однократное введение крысам «Тиреонорма» в дозе 100 мг/кг не предотвращало развития судорог и гибели животных. Вместе с этим, на фоне введения испытуемого препарата отмечали пролонгирование латентного периода в среднем на 60% по сравнению с данными у животных контрольной группы. При подкожном введении белым крысам стрихнина нитрата в дозе ОЬюо У животных контрольной и опытной групп развивались преимущественно тетанические судороги, которые завершались 100% гибелью животных. Вместе с тем, введение животным испытуемого средства удлиняло латентный период судорожного приступа в среднем на 74% по сравнению с контролем. Введение тиосемикарбазида в дозе ОЬюо сопровождалось развитием клонико-тонических судорог, завершавшихся 100 % гибелью животных контрольной группы Профилактическое введение «Тиреонорма» в дозе 100 мг/кг оказывало выраженное противосудорожное действие, о чем свидетельствует увеличение латентного периода развития судорожного приступа и

средней продолжительности жизни крыс опытной группы соответственно в 1,9 и 2,2 раза по сравнению с аналогичными данными в контроле. Кроме этого, в опытной группе, получавшей испытуемое средство, выжило 30 % животных.

При исследовании влияния «Тиреонорма» на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы у интактных животных установлено, что его однократное введение в дозе 100 мг/кг не оказывает статистически значимого влияния на уровень артериального давления, ЧСС и показатели биоэлектрической активности миокарда.

Установлено, что «Тиреонорм» в дозе 100 мг/кг обладает выраженной антигипоксической активностью при кислороддефицитных состояниях различного генеза. Так, при гипобарической гипоксии его профилактическое 7-дневное введение в дозе 100 мг/кг сопровождалось увеличением продолжительности жизни крыс на 81%; при гемической гипоксии продолжительность жизни животных опытных групп увеличивалась в среднем на 21% по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы. При гистотоксической гипоксии испытуемое средство в указанной дозе отличалось умеренным антигипоксическим эффектом: продолжительность жизни крыс увеличивалась на 27% по сравнению с контролем.

При исследовании противовоспалительной активности исследуемого средства установлено, что «Тиреонорм» при введении животным в дозе 100 мг/кг на фоне острого асептического воспаления, вызванного введением формалина и декстрана, сопровождается уменьшением выраженности отека соответственно на 46 и 39% по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы. Курсовое введение животным «Тиреонорма» в указанной дозе на фоне альтерации тканей уксусной кислотой сопровождается уменьшением степени альтерации тканей и ускорением их регенерации. При этом противовоспалительный эффект испытуемого средства как и препарата сравнения проявляется на ранних сроках эксперимента: на 7 сутки площадь альтерации у крыс опытных групп была в среднем на 40% меньше, чем в контроле. На 14 сутки исследования площадь альтерированной ткани была в 1,6 раза меньше, чем в контроле.

При исследовании влияния «Тиреонорма» на процессы обмена веществ и тиреоидный статус интактных крыс установлено, что его однократное введение в дозе 100 мг/кг не оказывает статистически значимого влияния на показатели белкового, углеводного и липидного обмена, а также содержание тиреотропного гормона, трийодтиронина и тироксина в сыворотке крови белых крыс.

Фармакотерапевтическая эффективность « Тиреонорма»

При исследовании фармакотерапевтической эффективности испытуемого средства при экспериментальном тиреотоксикозе, установлено, что 6-недельное введение «Тиреотома» сопровождается существенным повышением уровня тиреоидных гормонов: трийодтиронина (Тз) и тироксина (Т4), снижением содержания тиреотропного гормона (ТТГ), интенсификацией обмена веществ, снижением массы животных, повышением общей двигательной активности, тревожности и ЧСС, повышением уровня артериального давления. Установлено, что курсовое (в течение 4-х недель) введение крысам «Тиреонорма» в дозе 100 мг/кг сопровождается достоверно значимым снижением уровня тиреоидных гормонов и повышением содержания тиреотропного гормона (ТТГ) (табл. 2).

Таблица 2

Влияние «Тиреонорма» на тиреоидный статус белых крыс на фоне экспериментального тиреотоксикоза

Группы животных (п=10) Т3, пмоль/мл Т4, пмоль/мл ТТГ, мкМЕ/мл

Интактная 1,2±0,09 33,0±3,20 0,033±0,0050

Контрольная (тиреотом) 2,8±0,16 57,3±5,10 0,002±0,0001

Опытная 1 (тиреотом -Ьтиреонорм) 1,7±0,17* 46,4±4,46* 0,041 ±0,0003*

Опытная 2 (тиреотом +эндокринол) 2,2±0,23 47,0±6,10 0,043±0,0090*

Показано также, что на фоне курсового введения крысам испытуемого средства отмечается нормализация белкового, углеводного и липидно-го обмена, о чем свидетельствует повышение в сыворотке крови концентрации общего белка на 39%, глюкозы - в 1,5 раза и холестерина - в 2,1 раза по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. У животных этой группы отмечается достоверное увеличение массы животных по сравнению с контролем.

Установлено, что введение животным «Тиреонорма» сопровождается нормализацией функционального состояния центральной нервной и сердечно-сосудистой систем животных (табл. 3). Так, у крыс опытной группы отмечается уменьшение частоты сердечных сокращений и артериального давления соответственно на 27 и 20% по сравнению с контролем; наблюдается нормализация показателей биоэлектрической активности сердца. Установлено также, что у крыс, получавших «Тиреонорм», уменьшаются признаки тревожности, эмоциональности и страха, о чем свидетельствует достоверное снижение горизонтальной двигательной активно-

сти, числа актов дефекации и груминга по сравнению с аналогичными данными у животных контрольной группы, а также снижение вертикальной активности, увеличение норкового рефлекса, количество выходов в центральную зону и количества заходов,в открытые рукава ПКЛ до уровня физиологической нормы.

Таблица 3

Влияние «Тиреонорма» на функциональное состояние сердечно-сосудистой и центральной нервной систем при экспериментальном тиреотоксикозе

Показатели Группы животных (п=10)

Интактная Контрольная (Тиреотом) Опытная 1 (Тиреотом+ тиреонорм) Опытная 2 (Тиреотом+ эндокринол)

1 2 3 4 5

Сердечно-сосудистая система

ЧСС, в мин 446,7±24,10 630,5±31,70 459,8±44,90* 502,7±60,20

САД, мм.рт.ст. 114,8±7,80 135,9±6,00 108,3±11,00 123,7±13,20

Тест «Открытое поле»

Общая двигательная активность 33,6±2,30 39,9±1,85 33,7±1,20* 34,5±2,00*

Горизонтальная активность 15,6±1,64 19,3±1,54 15,9±1,00* 16,6±1,50

Вертикальная активность 9,1±0,35 13,8±1,10 9,1±0,90* 10,0±1,20

Норковый рефлекс 8,9±0,57 6,8±0,10 8,7±0,70* 7,9±0,65

Дефекация 3,0±0,10 4,3±0,40 2,9±0,22* 3,1±0,20*

Груминг 2,5±0,40 3,8±0,09 2,6±0,15* 2,4±0,11 *

Кол-во выходов в центральную зону 1,4±0,12 0,5±0,10 1,3±0,20* 1,0±0,10*

Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт»

Время нахождения в закрытом рукаве, с 249,4±23,10 257,4+25.50 252,0±25,00 252,8±28,00

Время нахождения в открытом рукаве, с 24,6±2,12 19,6±1,17 24,0±2,21* 23,2±2,6*

Время нахождения на центральной площадке, с 26,0±2,43 23,0±2,22 24,0±2,50 24,0±2,61

Кол-во заходов в открытые рукава 1,6±0,15 0,6±0,05 1,2±0,11* 1,3±0,14*

Кол-во заходов в закрытые рукава 1,3 ±0,14 2,5±0,23 1,6±0,15* 1,8±0,21*

Таблица 4

Влияние «Тиреонорма» на интенсивность процессов СРО биомакромолекул и состояние антиоксидантной системы белых крыс при экспериментальном тиреотоксикозе

Показатели Интактная Контрольная (тиреотом) Опытная 1 (Тиреотом+ тиреонорм) Опытная 2 (Тиреотом+ эндокринол

МДА в гомогенате печени, нмоль/г 37,4±2,64 66,7±3,42 43,4±2,43* 45,8+4,50*

СОД, мкмоль/мл 17,1±1,40 5.8+0,90 11,0±1,00* 11,4±1,13*

Каталаза, мкат/л 24,7+1,10 17,9±1,65 24,1 ±1,82* 23,8±2,22*

Восст. глутатион, мкмоль/мл 364,2±26,10 244,8±29,10 318,2±29,90* 313,8±30,10*

Как следует из данных, приведенных в таблице 4, развитие тиреотоксикоза у животных сопровождается индукцией процессов свободноради-кального окисления (СРО) биомакромолекул, на что указывает существенное повышение уровня МДА в печени и сыворотке крови, а также снижение активности эндогенной антиоксидантной системы у крыс контрольной группы. Установлено, что курсовое введение крысам «Тиреонорма» в указанной дозе оказывает выраженное антиоксидантное действие, о чем свидетельствует уменьшение концентрации МДА в сыворотке крови и гомогенате печени соответственно на 20 и 34%, а также повышение активности каталазы и супероксиддисмутазы на 25 и 52%, повышение концентрации восстановленного глутатиона в 1,7 раза по сравнению с показателям у крыс контрольной группы.

Таблица 5

Влияние «Тиреонорма» на морфофункциональные показатели щитовидной железы белых крыс при экспериментальном тиреотоксикозе

Тканевые компоненты Интактная Контрольная Опытная 1 «Тиреонорм» Опытная 2 «Эндокринол»

Коллоид, % 38,7±3,21 58,7±5,13 37,6±2,60* 39,2±3,64*

Строма, % 5,0±0,63 10,2±1,50 11,2± 1,11 11,4±1,79

Фолликулярный эпителий, % 34,3±3,11 22,5±2,12 29,8±2,32* 28,6±2,45*

Диаметр фолликула, мкм 60,2±5,70 76,4±6,11 67,6±5,40* 70,9±9,52

Высота эпителия, мкм 8,4±0,41 6,5±0,53 9,0±0,60* 9,5±0,56*

Фолликулярно-коллоидный индекс 0,8±0,02 0,3±0,02 0,7±0,04* 0,7±0,02*

Показатель Брауна 7,1 ±0,40 11,7*1,12 7,5±0,70* 7,4±0,59*

При микроскопическом исследовании железы выявлено, что на гистологических срезах площади тканевых компонентов приближаются к таковым показателям интактной группы животных. При морфометриче-ском изучении щитовидной железы (табл. 5) установлено, что курсовое введение крысам «Тиреонорма» сопровождается восстановлением структуры и функции щитовидной железы. Установлено, что площадь коллоида в фолликулах щитовидной железы уменьшилась на 36% по сравнению с данными в контрольной группе животных, фолликулярно-коллоидный индекс увеличился в 2,3 раза, а показатель Брауна, прямо отражающий степень накопления коллоида в фолликулах, уменьшился в 1,5 раза.

При исследовании фармакотерапевтической эффективности «Тиреонорма» при экспериментальном иммуносупрессивном состоянии у мышей установлено, что испытуемое средство оказывает выраженное имму-номодулирующее действие, повышая активность клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунитета в условиях его супрессии (табл. 6).

Таблица 6

Влияние «Тиреонорма» на выраженность реакций гиперчувствительности замедленного типа, антителообразования и фагоцитоза на фоне азатиоприновой иммуносупрессии у мышей линии Р1(СВАхС57В1/6)

Показатели реакций Группы животных

Интактная (п=10) Контрольная (п=10) Тиреонорм (п=10)

Индекс реакции ГЗТ 32,50±2,58 16,22±0,90 47,3±1,90*

Количество АОК на селезенку 87524±4114 53013±3691 96320±5433*

Количество АОК на 10ьспленоци-тов 606,0±34,42 373,0±15,65 590,0+49,16*

Фагоцитарный индекс (Е 620 нм ) 0,029±0,0020 0,013±0,0009 0,0321±0,015*

Как следует из данных, приведенных в указанной таблице, под влиянием курсового введения животным фитосредства в дозе 100 мг/кг отмечается почти двукратное увеличение количества антителообразующих клеток, повышение индекса реакции ГЗТ в 3 раза, а также фагоцитарного индекса в среднем в 2 раза по сравнению с аналогичными показателями у мышей контрольной группы.

При исследовании механизмов действия испытуемого фитосредства установлено, что под его влиянием отмечается стабилизация мембранных структур клеток. Так, с использованием суспензии эритроцитов донорской крови установлено, что добавление испытуемого средства в дозах, эквивалентных экспериментально-терапевтическим, оказывает выражен-

ное мембраностабилизирующее действие, уменьшая степень гемолиза эритроцитов при перекисном гемолизе в 2, а при осмотическом — в 1,3 раза по сравнению с контролем.

С использованием методов in vitro показано, что мембраностабилизи-рующая активность «Тиреонорма» связана с его антиоксидантными свойствами, обусловленными прямым антирадикальным и опосредованным -хелатирующим действием веществ фенольной природы, входящих в его состав. Так, наличие выраженной антирадикальной активности исследуемого средства было установлено по отношению к супероксидным анион-радикалам, радикалам NO. Индекс половинного ингибирования (1С50) в отношении супероксидных радикалов составил 0,015 мкг/мл и превосходит таковой у препарата сравнения кверцетина (1С50 = 31.82 мкг/мл); в отношении NO-радикалов 1С5о «Тиреонорма» составил 0,155 мг/мл, при IC50 у аскорбиновой кислоты и кверцетина соответственно 1.14 мг/мл и 0.150 мг/мл; Наряду с этим показано, что «Тиреонорм» снижает скорость накопления ТБК-активных продуктов в модельной системе; индекс антиокислительной активности, рассчитанный по данному тесту, составил 1,256 мг/мл.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что комплексное растительное средство «Тиреонорм» в дозах 50-100 мг/кг обладает широким спектром фармакологических свойств: тиреотропным, анксио-литическим, ноотропным, седативным, гипотензивным, антигипоксиче-ским, противовоспалительным, иммуномодулирующим; нормализует процессы обмена веществ. В частности, испытуемое средство ускоряет период адаптации к новым незнакомым условиям, повышает ориентировочно-исследовательскую активность, снижает уровень эмоциональности и тревожности животных. «Тиреонорм» оказывает также выраженное ноотропное действие, стимулируя познавательную активность и ускоряя выработку условного рефлекса и сохранение памятного следа. У испытуемого средства выявлены также седативные свойства, на что указывает потенцирование и пролонгирование наркотического сна, индуцированного натрия тиопенталом, а также увеличение продолжительности латентного периода судорог, вызванных конвульсантами с различным механизмом действия. Учитывая механизмы действия указанных фармакологических средств, можно полагать, что испытуемое средство обеспечивает широкую иррадиацию тормозных процессов в разных отделах центральной нервной системы, включая кору больших полушарий, благодаря усилению блокирующих эффектов наркотических препаратов на восходящую часть ретикулярной формации. Испытуемое средство обладает так-

же выраженной антигипоксической активностью, повышая продолжительность жизни животных при кислородцефицитных состояниях (гипо-барической, гемической, гистотоксической гипоксии), увеличивая продолжительность жизни животных как в условиях низкого парциального давления кислорода в воздухе, так и при нарушениях кислород-транспортной функции крови. Таким образом, «Тиреонорм» обеспечивает более высокий уровень кислородного обеспечения тканей организма, что во многом объясняет наличие у него выраженных психотропных свойств.

Установлено также наличие у «Тиреонорма» противовоспалительной активности, при этом установлено, что данное средство оказывает выраженное влияние на основные стадии процесса воспаления: уменьшает выраженность экссудации, оказывает антиальтеративное действие, стимулирует регенерацию поврежденных тканей.

Показано, что курсовое введение животным испытуемого средства перорально в экспериментально-терапевтических дозах (50-100 мг/кг) оказывает фармакотерапевтическое влияние при экспериментальном тиреотоксикозе. В частности, на фоне его введения наблюдается нормализация уровня тиреоидных гормонов в условиях тиреотоксикоза: снижение содержания Т3, Т4 и одновременное повышение уровня ТТГ. Выявленные эффекты сопровождаются уменьшением выраженности патоморфологи-ческих изменений щитовидной железы, на что указывает уменьшение размера коллоида, нормализация состояния фолликулярного эпителия и ее функциональной активности. Наряду с этим, на фоне введения «Тиреонорма» отмечается уменьшение выраженности патологических явлений со стороны центральной и сердечно-сосудистой систем. Так, у крыс опытной группы наблюдалось уменьшение признаков тревожности, повышение исследовательской и ноотропной активности, нормализация уровня артериального давления, ЧСС и показателей биоэлектрической активности миокарда, а также основных показателей обмена веществ. «Тиреонорм» обладает также существенным иммуномодулирующим потенциалом, повышая активность гуморального, клеточного и макрофа-гального иммунного ответа при иммуносупрессивных состояниях.

Установлено, что механизмы фармакотерапевтического действия испытуемого средства при экспериментальном гипертиреозе связаны с нормализацией синтеза и секреции тиреотропного и тиреоидных гормонов, обусловленного его влиянием на центральные и периферические звенья системы гипоталамус-гипофиз-щитовидная железа. Учитывая данные последних лет, свидетельствующие о том, что дефицит йода не является единственным пусковым механизмом развития тиреопатий (Фадеев, Мельниченко, 2004; Пашке, 2004; Рее1еге ет а1., 2001), можно полагать, что биологически активные вещества, содержащиеся в испытуемом сред-

стве, в том числе органический йод, оказывают комплексное влияние на сложный многоступенчатый процесс биосинтеза тиреоидных гормонов. В частности, снижение уровня тиреоидных гормонов при одновременном повышении содержания тиреотропного гормона при экспериментальном тиреотоксикозе можно объяснить снижением чувствительности тироци-тов под влиянием антигормональных компонентов испытуемого средства, относящихся к группе фенолкарбоновых кислот (производные кофейной кислоты, литоспермовая кислота и др.) (Алефиров, 2006; Bucar et al., 1995; Wojciechowski et al., 1995). Другой механизм нормализации уровня тиреоидных гормонов, очевидно, связан со снижением интенсивности периферического дейодирования Т4 в печени, поскольку известно, что 80% Тз являющегося наиболее активным гормоном (Peeters et al., 2001), образуется в печени (Kuiper et al., 2006).

Установлено, что молекулярно-клеточные механизмы действия «Ти-реонорма» обусловлены стабилизацией мембранных структур клеток, в том числе тироцитов, о чем свидетельствуют данные патоморфологиче-ского исследования, а также наличие выраженной мембраностабилизи-рующей активности в условиях осмотического и перекисного гемолиза эритроцитов. Можно полагать, что одним из важных молекулярно-клеточных механизмов в действии данного средства является наличие выраженной антиоксидантной активности, поскольку известно, что «ок-сидативный стресс» является ведущим патогенетическим фактором, приводящим к развитию патологических состояний (Дедов, 2009; Петунина, 2011). При этом антиоксидантная активность испытуемого средства обусловлена ингибированием процессов свободнорадикального окисления (СРО) биомакромолекул и повышением потенциала эндогенной антиокислительной системы организма, на что указывают полученные данные о снижении содержания продуктов пероксидации липидов в тканях, повышение активности ферментов антиоксидантной защиты организма. Установлено, что ингибирование процессов СРО биомакромолекул обусловлено входящими в состав данного экстракта преимущественно соединениями фенольной природы, обладающими прямым радикалперехва-тывающим и опосредованным - хелатирующим действием, а также другими наличествующими в экстракте природными веществами (витаминами Е, А, С) и, тем самым, обеспечивается структурная и функциональная целостность биологических мембран тироцитов и других клеток.

При этом фармакотерапевтическая эффективность «Тиреонорма» при экспериментальном тиреотоксикозе была сопоставимой с таковой у препарата сравнения «Эндокринол».

ВЫВОДЫ:

1. Растительное средство «Тиреонорм» обладает тиреотропным, ан-ксиолитическим, ноотропным, седативным, гипотензивным, антигипок-сическим, противовоспалительным действием, нормализует процессы обмена веществ и оказывает иммуномодулирующее действие.

2. Курсовое введение животным испытуемого средства в экспериментально-терапевтических дозах (50-100 мг/кг) оказывает выраженное фар-макотерапевтическое влияние при экспериментальном тиреотоксикозе, нормализуя уровень тиреоидных гормонов, уменьшая выраженность па-томорфологических изменений щитовидной железы, снижая проявления сопутствующих симптомов тиреотоксикоза со стороны центральной нервной и сердечно-сосудистой систем.

3. «Тиреонорм» оказывает фармакотерапевтическое влияние при экспериментальном иммуносупрессивном состоянии у мышей, корригируя показатели клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа.

4. Механизмы действия «Тиреонорма» связаны с его нормализующим влиянием на центральные и периферические звенья многоступенчатого процесса биосинтеза тиреоидных гормонов в системе гипоталамус-гипофиз-щитовидная железа, а также со стабилизацией мембранных структур клеток, обусловленной как ингибированием процессов свобод-норадикального окисления биомакромолекул, так и повышением мощности системы эндогенной антиокислительной защиты организма.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Водопьянова A.M. Лапчатка белая как перспективное средство для лечения заболеваний щитовидной железы / A.M. Водопьянова, Э.В. Архипова, Л.Н. Шантанова, С.М. Николаев // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН.-2011.-№ 1 (77).-С. 131-134

2. Водопьянова A.M. Влияние «Тиреонорма» на функциональное состояние центральной нервной системы / A.B. Водопьянова, Л.Н. Шантанова// Бюллетень ВСНЦ СО РАМН,- 2011№1 (77).- С. 128-130

3. Хобракова В.Б. Влияние сухого экстракта лапчатки белой на состояние клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа / В.Б. Хобракова, Э.В. Архипова, A.M. Водопьянова // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН.-2011.-№1 (77).-С. 195-197.

4. Водопьянова A.M. Определение острой токсичности Potentilla alba L. / A.M. Водопьянова, Э.В. Архипова, Э.А. Алексеева, Л.Н. Шантанова // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2009. - № 2 (66). - С.234-235.

5. Arkhipova E.V. The potentional source for treatment of thyroid gland's diseases is cinquefoil white (Potentilla alba L.) / E.V. Arkhipova, A.M.

Vodopyanova, S.M. Nikolaev, V.K. Kolkhir // Мэс засал. Journal of surgery. -2011.-№ 13.- P.140.

6. Архипова Э.В. Тиреотропное действие экстракта Potentilla alba L. / Э.В. Архипова, A.M. Водопьянова, А.И. Мешков, В.К. Колхир // Сборник материалов конференции «Развитие традиционной медицины в России». - Улан-Удэ, 2010,- С.324.

7. Vodopjanova A.M. The effect of plant remedy «Tireonorm» at experimental hyperthyroidism/ A.M. Vodopjanova // Abstract of the 5-th international symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine. - Ulanbaatar, 2011.-P.32.

Подписано в печать 20.04.2012 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,3 печ. л. Тираж 100. Заказ № 65.

Отпечатано в типографии Изд-ва Федерального государственного бюджетного учреждения науки БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахьяновой, 6.