Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая коррекция синдрома повышенной вязкости крови при сердечно-сосудистой патологии

на правах рукописи

АЛИЕВ ОЛЕГ ИБРАГИМОВИЧ

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ СИНДРОМА ПОВЫШЕННОЙ ВЯЗКОСТИ КРОВИ ПРИ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ ПАТОЛОГИИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Томск-2004

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательский институт фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Научный консультант:

доктор биологических наук,

профессор Плотников Марк Борисович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор,

заслуженный деятель науки РФ Пашинский Виталий Глебович

доктор медицинских наук,

профессор Зверев Яков Федорович

доктор медицинских наук,

профессор Тепляков Александр Трофимович

Ведущее учреждение:

Новосибирская государственная медицинская академия

Защита состоится "_"__2004 г. в "_" часов на заседании

диссертационного совета Д.001.031.01 при ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (634028, Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Автореферат разослан " /¿Р " дгшсухА 2003

г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

2004-4 17916

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. К настоящему времени накоплен значительный объём клинических данных, на основании которых можно утверждать, что изменения реологических характеристик крови, объединяемые под общим понятием синдром повышенной вязкости крови (СПВК) [Dintenfass L., 1971], являются важным звеном в цепи нарушений, развивающихся при сердечнососудистой патологии [Покалев Г.М., 1984; Ганнуппсина И.В. и соавт., 1987; Танашян М.М., 1991, Kwaan Н.С. et. al., 1999; Gomez E. et. al., 2000]. Более пристальное изучение гемореологических расстройств привело к изменению взглядов на механизмы внугрисосудистых нарушений кровоснабжения органов. Доказано активное участие реологических механизмов в нарушении кровообращения, реологическая окклюзия рассматривается в качестве инициирующего фактора "запуска" плазменных коагуляционных механизмов, приводящих к фибринообразованию и закупорке сосудов патологическими тромбо- и эритро-цитарными агрегатами [Люсов В.А. и соавт., 1988; Савенков М.П., 1988]. В микроциркуляторном русле, когда диаметр сосудов сопоставим или меньше диаметра эритроцитов, изменение формы и размера красных клеток крови, ухудшение их деформируемости приводит к ослаблению микроциркуляции, что в конечном итоге ведёт к уменьшению локального кровотока, гипоксии тканей и, как следствие этого, снижение их функциональной активности [Савенков М.П., 1988, Cicco G. et. al., 1999].

В связи с этим не вызывает сомнения значимость изучения возможности фармакологического воздействия на синдром повышенной вязкости крови при патологических процессах в организме и поиск эффективных средств его коррекции. Вместе с тем, решение данной задачи затруднено вследствие многообразия и неоднозначной взаимосвязи факторов, определяющих вязкостные свойства крови на различных уровнях (макрореологический, клеточный, микрореологический) [Coull В.М. et. al., 1986].

Корригирующая терапия реологических свойств крови должна быть многокомпонентной и направленной на различные звенья патологического процесса, приводящего к повышению вязкости. Данные литературы о фармакологической коррекции СПВК немногочисленны, спектр лекарственных • средств, влияющих на реологические свойства крови ограничен. Препараты, которым свойственна гемореологическая активность (пентоксифиллин, тиклопедин, та-накан) оказывают влияние лишь на отдельные компоненты синдрома повышенной вязкости крови [Hossman К.-А. et. al., 1981; Люсов В.А. и соавт., 1988; Coul В.М. et. al., 1991] либо недостаточно снижают тяжесть проявления СПВК в целом [Габриэлян Э.С. и соавт., 1985; Савенков М.П., 1988; Berman W. Jr. et. al., 1994]. Вместе с тем, на современном этапе надежды на принципиально новые методы фармакотерапии внугрисосудистых нарушений крови связывают с перспективами применения лекарственных средств, способных предотвращать или существенно уменьшать патологические сдвиги гемореологических параметров.

С учетом сведений об антирадикальной и антиокислительной активности флавоноидов и их способности влиять на агрегацию эритроцитов [Лакин K.M. и соавт., 1976; Левтов В.А. и соавт., 1982] представляется перспективным исследовать гемореологические свойства индивидуальных биофлавоноидов и экстрактов ряда растений Сибири, содержащих различные классы флавоноидных соединений.

В качестве возможных источников перспективных гемореологических средств могут также выступать экстракты экдистероидсодержащях растений. Фитоэкдистероиды обладают широким спектром фармакологической активности, включающим анаболический, гиполипидемический, противовоспалительный, мембраносгабилизирующий и другие эффекты [Сыров В.Н. и соавт., 1994].

Цель исследования.

Проведение поиска перспективных гемореологических средств среди экстрактов из флафоноид- и экдистероидсодержащих растений и разработка на их основе гемореологических препаратов.

Основные задачи исследования:

1. Разработать адекватные клиническим ситуациям модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro и in vivo для отбора и углубленного изучения гемореологических средств.

2. Провести поиск перспективных гемореологических средств на основе экстрактов из флавоноид- и экдистероидсодержащих растений.

3. Осуществить углубленное изучение гемореологической активности экстрактов из флавоноид- и экдистероидсодержащих растений при курсовом введении на различных моделях сердечно-сосудистой патологии (ишемия мозга, инфаркт миокарда, артериальная гипертензия), сопровождающихся СПВК

4. Оценить влияние асковертина, экстрактов манжетки обыкновенной, левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на форму эритроцитов при ишемии головного мозга, инфаркте миокарда и артериальной гипертензии.

5 Исследовать липидный состав мембран эритроцитов на моделях синдрома повышенной вязкости крови и в условиях его фармакологической коррекции асковертином, экстрактами манжетки обыкновенной, левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского.

6. Изучить церебро- и кардиопротекторное действие исследуемых средств.

7. Оценить эффективность клинического применения асковертина при дисциркуляторной энцефалопатии и ишемической болезни сердца

Научная новизна. Разработаны модели СПВК in vitro и in vivo, воспроизводящие основные феномены, присущие гемореологическим расстройствам, развивающимся при сердечно-сосудистой патологии и позволяющие проводить быстрый и эффективный поиск и отбор средств, обладающих гемореологической активностью.

Исследованиями, проведенными на модели СПВК in vitro установлено, что кверц^гец иЬ^ЦЧетерону обладают гемореологической активностью и их i triW' г''<* ;

Г с'!

влияние на вязкость крови, агрегацию и деформируемость эритроцитов носит дозозависимый характер; диквертин проявляет гемореологический эффект сопоставимый с танаканом, а смесь диквертина с аскорбиновой кислотой в соотношении 1:2 превосходит танакан по влиянию на деформируемость эритроцитов. Доказано, что флавоноид- и экдистероидсодержащие растения являются перспективным источником для поиска и разработки средств с гемореологиче-ской активностью.

Показано, что флавоноидсодержащие (асковертин, экстракты манжетки обыкновенной и горечавки крупнолистной) и экдистероидсодержащие (экстракты смолевки двудомной, смолевки татарской, лихниса хальцедонского и левзеи сафлоровидной) средства при курсовом введении эффективно ограничивают развитие синдрома повышенной вязкости крови на моделях сердечнососудистой патологии за счет влияния как на клеточные, так и плазменные факторы, определяющие вязкостные свойства крови.

Проведенные исследования позволили установить, что асковертин, экстракты манжетки обыкновенной, левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на моделях сердечно-сосудистой патологии ограничивают процессы деградации эритроцитов: повышается количество дискоцитов и снижается число эритроцитов с необратимо измененной формой. Доказано, что существенным компонентом механизма действия исследуемых средств является влияние на липидный состав эритроцигарных мембран: препараты ограничивают снижение как общего количества липидов, так и фосфолипидной фракции и препятствуют избыточному накоплению лизофосфолипидов.

Получены данные о том, что препараты с гемореологической активностью на моделях нарушения кровообращения проявляют церебро- и кардиопро-текгорные свойства.

В клинико-лабораторных исследованиях асковертина установлено положительное действие на гемореологические показатели у больных с дисциркуля-торной энцефалопатией и ишемической болезнью сердца.

Научно-практическая ценность. Разработан новый оригинальный метод для оценки in vitro гемореологической активности препаратов (патент РФ №2110850). Получены данные, свидетельствующие о гемореологической активности экдистерона (патент РФ №2160592), диквертина (патент РФ №2141320), смеси диквертина и аскорбиновой кислоты (патент РФ №2150282), экстракта левзеи сафлоровидной жидкого (патент РФ №2138285) и сухого (патент РФ №2191027), лихниса хальцедонского (патент РФ №2138284).

Результаты изучения гемореологической активности асковертина положены в основу материалов, по которым департамент государственного контроля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств и медицинской техники МЗ РФ принял решение о проведении клинических исследований препарата (протокол № 198 от 19 февраля 2001). Завершившиеся клинические исследования асковертина показали его высокую эффективность и обосновывают целесообразность включения препарата в комплексную терапию сердечно-сосудистых заболеваний.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на 2-м съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995), научной конференции, посвященной памяти ЛН. Березнеговской (Томск, 1996), 1-й Всероссийской конференции по ботаническому ресурсоведению (Санкт-Петербург, 1996), научной итоговой конференции НИИФ ТНЦ РАМН (Томск, 1996), международном совещании "Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений" (Новосибирск, 1998), международном семинаре 'Традиционная медицина - теоретические и практические аспекты" (Улан-Удэ, 1998), международной конференции "Свободнорадикальные процессы: экологические, фармакологические и клинические аспекты" (Санкт-Петербург, 1999), Ш международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения" (Санкт-Петербург-Пушкин, 1999), Ш Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1998), VI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1999), конференции "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии" (Санкт-Петербург, 1999), конференции "Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов" (Томск, 1999), I молодежной научной конференции Новосибирского центра СО РАМН (Новосибирск, 1999), конференции молодых ученых "Современные проблемы фундаментальной и клинической медицины" (Томск, 1999), международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств" (Томск, 2000), П Российской конференции молодых ученых России с международным участием (Москва, 2001), международной конференции по гемореоло-гии (Ярославль, 2001), международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения" (Санкт-Петербург, 2001), XXI международной конференции по полифенолам (Мара-кеш, Марокко, 2002).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 58 печатных работ

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав с изложением результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы. Диссертация изложена на 341 странице машинописного текста, содержит 124 таблицы и 29 рисунков Указатель литературы включает 233 отечественных и 204 иностранных источника.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Эксперименты проведены на 550 крысах-самцах Вистар и 110 крысах-самцах линии SHR (spontaneously hypertensive rats) массой 200-250 г. Клинико-лабораторные исследования гемореологической активности асковертина были проведены на 128 добровольцах.

В экспериментах использовали субстанцию диквертина производства ООО "Флавир" г. Иркутск Диквертин является суммарным флавоноидным экстрактом из древесины лиственницы сибирской или даурской, который содержит не менее 90% флавоноида дигидрокверцитина. Сухие экстракты флавоно-

идсодержащих растений (манжетки обыкновенной, горечавки крупнолистной, володушки многожильчатой, полыни Сиверса) предоставлены профессором Г.И. Калинкиной, сухие экстракты растений рода смолевок, лихниса хальце-донского и экдистерон - к.б н. Л.Н Зибаревой, сухой экстракт левзеи сафлоро-видной - профессором Е.А. Красновым. Лекарственный препарат "Асковертин таблетки" для клинических исследований был изготовлен на ОАО «Асфарма» и отвечал всем требованиям, предъявляемым к нему нормативной документацией. Каждая таблетка содержит 20 мг дигидрокверцетина и 50 мг аскорбиновой кислоты.

Экстракты вводили в 1% крахмальной слизи внутрижелудочно ежедневно (в течение 5-и дней на моделях ишемии мозга и инфаркта миокарда и 10-и дней на модели артериальной гипертензии). Контрольные животные получали экви-объемное количество 1% крахмальной слизи.

Исследовали следующие параметры, характеризующие реологические свойства крови: вязкость цельной крови, вязкость плазмы, гематокрит, спонтанную агрегацию эритроцитов, деформируемость эритроцитов и концентрацию фибриногена.

Относительную вязкость крови и плазмы измеряли методом капиллярной вискозиметрии на гемовискозиметре ВК-4, абсолютные значения вязкости (в сантипуазах) измеряли на ротационном вискозиметре АКР-2 Гематокрит определяли методом центрифугирования в стеклянных капиллярах на центрифуге МГЦ-8 и выражали в %. Количество фибриногена в плазме определяли на коа-гулометре KG-IV (Соппау) с использованием набора "Фибриноген-тест" фирмы "Технология-Стандарт" Исследование деформируемости эритроцитов проводили методом лазерной дифрактометрии, или эктапитометрии Конструкция установки для оценки деформируемости эритроцитов основана на эктацитометре, предложенном MBessis и N.Mohandas [1975]. Агрегацию эритроцитов исследовали силлектометрическим методом. Изучение морфологических особенностей эритроцитов осуществляли методом растровой электронной микроскопии [Ко-зинец Г.И. и соавт., 1984]. По форме эритроциты относили к различным типам в соответствии с классификациями предложенными Г.И. Козинцом и соавторами [1984] и Б В Ионовым и соавторами [1981]

Тени эритроцитов, для изучения липидного состава мембран, получали по методу J.T. Dodge et al. [1963]. Количество белка в суспензии теней эритроцитов определяли микробиуретовым методом [Колб В.Г. и соавт., 1982]. Ли-пидный экстракт получали методом J Folch et al. [1957]. Уровень общих липи-дов в мембранах эритроцитов оценивали по цветной реакции с фосфорно-ванилиновым реактивом [Колб В.Г. и соавт., 1982]. Общее содержание фосфо-липидов определяли по реакции с ферротиоцианатом аммония [Пентюк A.A. и соавт., 1987] Содержание отдельных фракций липидов оценивали после разделения их методом одномерной восходящей хроматографии на пластинках «Silufol UV 254» [Фивдлей Дж. и соавт., 1990].

Процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в мембранах эритроцитов оценивали по содержанию в них диеновых коньюгатов и малонового ди-альдегида [Владимиров Ю.А. 1998].

Для оценки ЭЭГ применяли метод компрессированного спектрального анализа Регистрацию ЭЭГ проводили монополярным способом. Электрограммы записывали с помощью электроэнцефалографа "Эра-9" и магнитографа "1296" фирмы "OTE-Biomedica". Фурье-анализ проводили на спектроанализа-торе той же фирмы.

В отдельной серии экспериментов методами световой [Боголепов И.И 1979, Жаботинский Ю М., 1965] и электронной микроскопии исследовали влияние препаратов на структурные изменения коры головного мозга крыс при ишемии.

Размер зоны инфаркта миокарда определяли по методике А X. Когана и соавторов [1984].

Системное артериальное давление у крыс определяли прямым методом Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ "Statistica for Windows 4.3".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

МОДЕЛИРОВАНИЕ СИНДРОМА ПОВЫШЕННОЙ ВЯЗКОСТИ КРОВИ Модель синдрома повышенной вязкости крови in vitro Одной из принципиально важных задач, которую требовалось решить при поиске соединений, способных влиять на реологических свойств крови, являлась разработка простого и легко воспроизводимого метода скрининга Наиболее оптимально этим условиям соответствует проведение скрининговых исследований in vitro. Однако при этом следует учитывать, что показатели, характеризующие вязкостные свойства крови у интактных животных являются "оптимальными" и не все средства, потенциально способные ограничивать СПВК, будут проявлять свою гемореологическую активность в этих условиях Для воздействия на реологические параметры крови с узким моделированием, характеризующих отдельные стороны СПВК, можно использовать целый ряд факторов как физической так и химической природы. DA Francis et al [1985] показали, что при нагревании снижается деформируемость эритроцитов Этот метод был модифицирован нами и применен для скрининга перспективных ге-мореологических средств

Инкубация крови крыс в течение часа при повышенной температуре (4245 °С) приводила к отчетливому и стабильному изменению ее реологических свойств. Вязкость крови (ВК) возрастала на 17-20% по сравнению с исходными значениями. Величина полупериода агрегации эритроцитов (Тш) снижалась до 77-82% от исходного уровня, что указывало на значительное усиление агрега-ционной способности эритроцитов.

Чтобы оценить возможность использования данной модели СПВК для скрининга мы исследовали препараты с известным гемореологическим аспек-

том действия- пеятоксифиллин и ацетилсалициловую кислоту (АСК). Пенток-сифиллии существенно ограничивал возрастание ВК (9% от исходных значений) по сравнению с контролем (17%), и предупреждал рост агрегационной способности эритроцитов АСК проявила антиагрегантный эффект, что выражалось в нормализации Т1/2, однако под действием препарата не наблюдалось достоверного снижения ВК по сравнению с контролем

Модели синдрома повышенной вязкости крови in vivo

Для исследования механизмов формирования СПВК и изучения эффектов препаратов нами были использованы экспериментальные модели сердечнососудистых патологий, при которых в клинической практике наблюдаются стойкие нарушения реологических свойств крови - ишемия мозга, инфаркт миокарда и артериальная гипертензия.

К 5-м суткам после ограничения кровотока по сонным артериям у крыс вязкость плазмы (ВП) составила 1,7±0,1 сП, что на 22% выше, чем у интактных животных (рис. 1). Содержание фибриногена в плазме увеличивалось с 1,86±0,05 г/л до 2,75±10 г/л. Отмечалось, по сравнению с интактными крысами, достоверное повышение гематокрита (до 49±1%). Наряду с ростом количества эритроцитов наблюдалось выраженное изменение их свойств. Значительно усилилась агрегационная активность, о чем свидетельствует снижение в два раза, по сравнению с интактной группой, Т^. Одновременно ухудшилась деформируемость эритроцитов Так, если на скоростях сдвига 90 с"1 и 180 с"1 у крыс с ишемией головного мозга индекс деформируемости эритроцитов (ИДЭ) не отличался от значений у здоровых животных, то при 360 с" и 890 с"1 был достоверно ниже на 19% и 26% соответственно. Значительные изменения основных реологических параметров привели к закономерному возрастанию ВК у ишеми-зированных крыс в 1,5-2,5 раза по сравнению с интактной группой во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига.

Выраженные нарушения реологических свойств крови сохранялись и в дальнейшем. На 7-е и 10-е сутки после создания ишемии головного мозга ВК оставалась повышенной, а 1\а был меньше в среднем на 60% по сравнению с показателями интактных животных Содержание фибриногена в плазме на 7-е сутки эксперимента снизилось (до 2,28±0,10 г/л), но к 10-м сутки увеличилось и составляло 131% по сравнению со значениями интактных животных. Вместе с тем, величина ВП существенно не отличалась от таковой в интактной группе. Значение гематокрита на 7-е и 10-е сутки эксперимента также не различалось со значениями показателя у интактных животных.

Исследование реологических показателей крови в условиях ишемии миокарда проведено на модели окклюзии коронарной артерии. Лигирование левой коронарной артерии у крыс приводило к достоверному повышению ВК уже спустя сутки после операции К 5-м суткам ВК в диапазоне скоростей сдвига 3300 с"1 возрастала по сравнению со значениями у интактных животных в 1,4-2,5 раза (рис. 1). В дальнейшем (7-у сутки) данный показатель также оставался повышенным. Столь значительное изменение ВК было вызвано глубокими

Вязкость плазмы Фибриноген Гематокркг Полупериод

агрегации зршроцитов

Индекс деформируемость зршроцитов

Вязкость крови

Рис. 1 Изменение реологических свойств крови при сердечно-сосудистой патологии.

О и-О- - интактные, К и-□- - ишемия мозга,

Е2 и -- - инфаркт миокарда, Щ и —А— - 5НЯ.

Звездочками и черными маркерами обозначены достоверные различия с интактными животными

сдвигами основных гемореологических параметров Наблюдалось повышение ВП до 136% через сутки после перевязки, которое сохранялось и на 5-е (126%), и на 7-е сутки (132%) эксперимента Развивалась выраженная гиперфибриноге-немия' содержание фибриногена в плазме через сутки в 2,4 раза превышало нормальный уровень и оставалось повышенным в 1,5-1,6 раза спустя 5 и 7 суток после лигирования коронарной артерии Через сутки после моделирования инфаркта миокарда наблюдалось уменьшение Тш до 32% от уровня этого показателя у интактных крыс, которое сохранялось и на 5-е (47%) и 1-е сутки (46%) эксперимента. Деформируемость эритроцитов через пять суток после перевязки коронарной артерии была достоверно снижена во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига (90-890 с"1) на 20-29% по сравнению с группой интактных животных. Динамика показателя гематокрита была неоднозначной. Так, если спустя сутки после операции гематокрит в группе крыс с инфарктом миокарда составил 48±1%, что достоверно выше, чем у интактных животных (45±1%), то на 5-е и 7-е сутки наблюдалась четко выраженная тенденция к снижению этого показателя до 43±1%.

Данные литературы свидетельствуют, что при артериальной гипертензии у людей наблюдается повышение вязкости крови, усиление агрегационной способности эритроцитов и ухудшение их пластичности, увеличение содержания фибриногена и величины гематокрита [Shi YD et al, 1990; Puniyani R.R. et. al., 1991; Salbas K. et al., 1994]. Реологические характеристики крови при развитии гипертонической болезни изменяются еще до появления нарушений коронарного и церебрального кровообращения [Leschke М et al., 1990; Resch К L. et al., 1990; Канарейкин К.Ф и соает., 1994].

Нами проведено изучение гемореологических показателей у крыс линии SHR, которая в настоящее время считается наиболее адекватной моделью эс-сенциальной гипертензии человека [Гуревич МИ и соавт., 1981].

У крыс линии SHR, по сравнению с крысами Вистар, наблюдалось повышение ВП (до 1,8±0,1 сП) и содержания в ней фибриногена (в 1,5 раза) (рис 1) Также отмечалось усиление процессов эритроцитарной агрегации: 1т был ниже на 32%, чем у нормотензивных животных. Артериальная гипертензия сопровождалась ухудшением деформируемости эритроцитов Так, ИДЭ на скоростях сдвига 360 с"1 и 890 с"1 составил соответственно 0,260±0,009 и 0,375±0,008, что на 23-24% ниже по сравнению со значениями показателя у крыс Вистар Значимых различий гематокрита между SHR и Вистар не выявлено. Сдвиги основных гемореологических параметров у животных с артериальной гипертен-зией закономерно определяют и более высокие, чем у нормотензивных животных, значения ВК при скоростях сдвига 3-300 с"1

Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют, что моделирование ишемии мозга, инфаркта миокарда и артериальная гипертензия у крыс приводят к развитию СПВК, формирование которого обусловлено изменениями как клеточных, так и плазменных факторов, определяющих реологические свойства крови В экспериментальных условиях было получено подтверждение наличия механизма повышения вязкости крови, вызванного снижением дефор-

мируемости эритроцитов и усилением их агрегационной способности на фоне гиперфибриногенемии.

Нарушение структурно-метаболического состояния эритроцитов при

моделировании синдрома повышенной вязкости крови 1

Для крови основным типом частиц, определяющих ее вязкостные свойства, безусловно являются эритроциты, что связано с их абсолютным количественным превосходством среди всех клеточных элементов. Соответственно изменение функционального состояния эритроцитов напрямую влияет на текучесть крови. Учитывая, что у эритроцитов существует тесная взаимосвязь между их функциональной активностью и морфологической формой мы провели исследование поверхностной архитектоники эритроцитарных мембран па моделях СПВК.

У интактных крыс Вистар в периферической крови основная доля эритроцитов была представлена дискоцитами (85,03±0,15%) Содержание переходных форм (клеток еще способных к деформации) было 12,78±0,12%. Доля пред-гемолитических форм составила 1,62±0,10%, на дегенеративные формы приходилось 0,56±0,07%.

Через 5 суток после создания ишемии головного мозга в периферической крови крыс достоверно снизилось содержание дискоцитов до 83,35±0,16% Статистически значимо повышалась доля переходных форм (до 13,70±0,22%). Количество предгемолитических форм увеличивалось по сравнению с интактной группой в 1,3 раза. Число дегенеративных форм эритроцитов увеличивалось до 0,86±0,07%.

На 5-е сутки после лигирования левой коронарной артерии в периферической крови крыс достоверно снизилось содержание дискоцитов до 80,36±0,29% Статистически значимо, по сравнению с интактной группой, повышалась доля переходных форм (до 15,5б±0,24%). Количество предгемолитических форм увеличивалось по сравнению с интактной группой в 2,1 раза. Число дегенеративных форм эритроцитов у крыс с инфарктом миокарда увеличивалось до 0,79±0,04%, что значимо выше, чем аналогичный показатель у здоровых крыс.

В периферической крови крыс линии БШ. достоверно снижено, по сравнению с крысами Вистар, содержание дискоцитов до 80,60±0,24% Статистически значимо была повышена доля переходных форм (до 15,21 ±0,10%). Количество предгемолитических форм увеличивалось по сравнению с нормотензив-ными крысами в 1,8 раза, а число дегенеративно измененных эритроцитов в 2,1 раза.

Таким образом, у крыс с моделями сердечно-сосудистой патологии наблюдаются выраженные изменения поверхностной архитектоники эритроцитов, что проявляется снижением количества дискоцитов и возрастанием доли пере-

1 Разделы работы по исследованию формы эритроцитов и липидного состава их мембран выполнены совместно с ассистентом кафедры фармакогнозии к б н В Ю Андреевой на базе ЦНИЛ Сибирского государственного медицинского университета

ходных, предгемолитических и дегенеративных форм

Согласно наиболее признанной на современном этапе жидкостно-мозаичной модели, мембрана представляет собой липидный бислойный мат-рикс с погруженными в него белками. Липидный состав и соотношение различных фракций ли гладов в бислое является одним из важных факторов, определяющих форму эритроцита и его способность к деформации [Геннис Р., 1997]. В связи с этим было проведено исследование липидного спектра эритроцитарных мембран.

У интакгных крыс Вистар общее содержание белка в эритроцитарных мембранах составило 4,14±0,49 мг/мл суспензии теней эритроцитов. Количество липидов достигало величины 1,968±0,104 мг/мг белка, почти половина этого количества приходилась на долю фосфолипидной фракции (0,960±0,050 мг/мг белка). Исследование фосфолипидной фракции показало, что на фосфатидилэ-таноламин (ФЭА), фосфатидилсерин (ФС), фосфатидилхолин (ФХ) и сфинго-миелин (СМ) приходится соответственно 24±3%, 24±2%, 37±3%, и 11±1%. Доля фракции лизофосфолипидов (ЛФЛ) составляла 4±1%.

У крыс Вистар к 5-м суткам после создания ишемии головного мозга содержание белка в мембранах составило 3,97±0,58 мг/мл суспензии теней эритроцитов, что достоверно не отличается от интакгной группы. Наблюдалось снижение, по сравнению с интактными животными, содержания липидов в тенях эритроцитарных мембран до 1,362±0,084 мг/мг белка. На 34% уменьшилось общее количество фосфолипидов. Среди фосфолипидов максимальным было уменьшение содержания ФХ (от 0,354±0,020 мг/мг белка у интактных животных до 0,140±0,011 мг/мг белка в контрольной группе) и СМ (от 0,110±0,008 мг/мг белка до 0,057±0,002 мг/мг белка). В меньшей степени снижалось количество ФС (на 24% по сравнению с интактной группой). Содержание ФЭА достоверно не отличалось у интактных и контрольных крыс. На фоне снижения общего количества фосфолипидов в эритроцитарных мембранах при ишемии головного мозга достоверно возросло содержание фракции лизофосфолипидов до 0,052±0,003 мг/мг белка, по сравнению с интактными животными (0,039±0,002 мг/мг белка).

У крыс Вистар к 5-м суткам после создания инфаркта миокарда содержание белка в мембранах составило 4,34±0,49 мг/мл суспензии теней эритроцитов и статистически значимо не отличалось от значений в интакгаой группе. Содержание липидов в тенях эритроцитарных мембран уменьшалось до 1,360±0,080 мг/мг белка, что достоверно ниже, по сравнению с интактными животными. Общее количество фосфолипидов в контрольной группе снизилось по сравнению со здоровыми животными на 22%. Среди фосфолипидов максимальным было снижение содержания ФХ (до 0,201 ±0,019 мг/мг белка) и СМ (до 0,081 ±0,007 мг/мг белка). Количество ФЭА и ФС не отличалось от аналогичных показателей у интакгных животных. Содержание лизофосфолипидов достоверно возросло по сравнению с интактными крысами (до 0,048±0,003 мг/мг белка)

У крыс линии БНИ содержание белка в мембранах составило 4,00±0,58 мг/мл суспензии теней эритроцитов, что не отличалось от аналогичного показателя у крыс Вистар Наблюдалось достоверное снижение, по сравнению с нор-мотензивными животными, содержания липидов в тенях эритроцитарных мембран до 1,294±0,042 мг/мг белка. Общее количество фосфолипидов составило 0,587±0,029 мг/мг белка, что на 39% ниже, чем у крыс Вистар. Среди фосфолипидов максимальным было снижение, по сравнению с нормотензивными крысами, содержания ФХ (до 0,110±0,011 мг/мг белка) и СМ (до 0,067±0,004 мг/мг белка). Наблюдаемое уменьшение количества ФЭА и ФС не достигало уровня статистической значимости В эритроцитарных мембранах крыс с артериальной гипертензией содержание фракции лизофосфолипидов составило 0,049+0,003 мг/мг белка

Таким образом, у крыс с моделями сердечно-сосудистой патологии снижено содержание липидов в эритроцитарных мембранах, наблюдается перераспределение соотношения различных фосфолипидов и возрастание количества лизоформ.

Нарушение церебрального и коронарного кровообращения сопровождается активацией процессов липидной пероксидации, которые являются значимым повреждающим фактором для клеточных мембран [Биленко МВ 1989, Владимиров Ю.А. 1998] Следствием патологического усиления перекисного окисления липидов (ПОЛ) является изменение структуры липидного бислоя мембраны, что приводит к нарушению ее барьерной функции и в конечном итоге к ускоренной деградации и гибели клетки. В связи с этим было проведено исследование содержания продуктов ПОЛ в эритроцитарных мембранах.

Уровень диеновых конъюгатов (ДК) у интактных крыс составил 0,259±0,009 002зз/мг липидов Содержание малонового диальдегида (МДА) было 0,017±0,002 нМ/мг липидов. При индукции процессов ПОЛ с помощью Ре2+ количество МДА возрастало до 0,070+0,006 нМ/мг липидов

К 5-м суткам после создания ишемии головного мозга количество ДК в мембранах теней эритроцитов составило 0,379±0,013 0023з/мг липидов и достоверно отличалось от интактной группы Наблюдалось значительное повышение содержания МДА (до 0,045±0,004 нМ/мг липидов, что почти в 2,5 раза превысило значение у интактных животных. При индукции ПОЛ сульфатом железа количество МДА возрастало до 0,082±0,009 нМ/мг липидов.

К 5-м суткам после лигирования коронарной артерии количество ДК в мембранах теней эритроцитов составило 0,273±0,011 002зз/мг липидов и значимо не отличалось от интактной группы По сравнению с интакшыми животными, уровень содержания в эритроцитарных мембранах МДА достоверно возрос до 0,029±0,005 нМ/мг липидов. При индукции ПОЛ сульфатом железа количество МДА составило 0,085±0,008 нМ/мг липидов.

Таким образом, ишемия головного мозга и инфаркт миокарда приводят к активации процессов перекисного окисления липидов в эритроцитарных мембранах.

ОТБОР И ИССЛЕДОВАНИЕ ПЕРСПЕКТИВНЫХ ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДСТВ НА МОДЕЛИ СИНДРОМА ПОВЫШЕННОЙ ВЯЗКОСТИ КРОВИ IN VITRO

Изучение действия флавоноидов и экстрактов из флавоноидсодер-жащих растений на реологические свойства крови in vitro На модели СПВК in vitro было проведено исследование гемореологиче-ских свойств сухих экстрактов, полученных с использованием этанола, из растений Сибири, содержащих значительное количество флавоноидных соединений. Также в этой серии экспериментов использовали кверцетин

При добавлении в пробы крови кверцетина в конечной концентрации МО"7 г/мл крови ВК после теплового воздействия составила 4,7±0,1 отн.ед , что на 15% достоверно ниже по сравнению с контролем, а Т1Д возрос на 55% и не отличался от исходных значений. В концентрации МО"5 г/мл крови кверцетин не предупреждал роста агрегации эритроцитов (значения Т]/2 не отличались от таковых в контрольной группе), хотя его влияние на вязкость крови полностью сохранялось. Наконец, в концентрации МО"4 г/мл кверцетин, напротив, потенцировал эффект теплового воздействия, что проявлялось в более выраженном усилении агрегационной способности эритроцитов и в тенденции к увеличению ВК по сравнению с контролем.

Для изучения гемореологической активности манжетки обыкновенной оценивали эффективность сухих экстрактов, приготовленных с использованием этанола в концентрации 20% (экстракт I), 40% (экстракт II) и 70% (экстракт Ш). В дозе 1-10"5 г/мл крови экстракты I и ЕЛ проявили тенденцию к снижению ВК и не оказали достоверного влияния на агрегацию эритроцитов. Под действием экстракта II наблюдалось достоверное, по сравнению с контролем, снижение ВК на 7% и удлинение Т]Д на 15% Экстракт манжетки обыкновенной (экстра-гент 40% этанол) в дозе 1-10"4 г/мл крови полностью предотвращал сдвиги ге-мореологических параметров, вызванные гипертермией. Так, показатель ВК составил 4,3±0,1 отн ед., Т,д - 9,510,4 с, что статистически значимо не отличается от исходных значений.

Экстракт горечавки крупнолистной (экстрагент 40% этанол) в концентрации 1-Ю"5 г/мл существенно влиял только на ВК, ограничивая его возрастание до 12% от исходного уровня (в контроле прирост ВК составил 27%) При использовании экстракта в концентрации 1-Ю"6 г/мл крови ВК составила 4,5±0,2 отн.ед., а - 8,1±0,2 с, что достоверно лучше, чем в контроле.

Экстракты полыни Сиверса и володушки многожильчатой (экстрагент 40% этанол) в концентрации МО"5 г/мл не оказывали существенного влияния ни на вязкость крови, ни на агрегацию эритроцитов

Гемореологическая активность диквертина и смеси диквертина с аскорбиновой кислотой на модели СПВК in vitro

Диквертин в концентрации МО"5 г/мл крови достоверно снижал ВК (на 11%) и увеличивал Т1/2 (на 13%) по сравнению с контрольными значениям. Зна-

чимое увеличение ИДЭ (на 38% по отношению к контролю) наблюдалось только на скорости сдвига 890 с"1.

Танакан в концентрации 10"5 г/мл крови, внесённый в пробу за 15 мин до термостатирования, снижал ВК на 13%, увеличивал деформируемость эритроцитов при скоростях сдвига 350 с"1 и 890 с"1 на 15% и 26% соответственно по сравнению с контрольными значениями. Удлинение Тт не достигало необходимого уровня статистической значимости.

Известно, что аскорбиновая кислота, восстанавливая окисленные формы флавоноидов может существенно повысить их фармакологическую активность [Бобырева Л.Е., 1998]. Учитывая это было проведено исследование гемореоло-гических свойств аскорбиновой кислоты и смеси диквертина и аскорбиновой кислоты в различных соотношениях.

Под действием аскорбиновой кислоты в концентрации 110'5 г/мл крови достоверно увеличивался, по сравнению с контрольными значениями, Т^ (на 10%), а также скорости сдвига 890 с"1 улучшалась эритроцитарная деформируемость (на 16%). Однако эти изменения не привели к статистически значимому снижению ВК.

При применении смеси диквертина и аскорбиновой кислоты в соотношении 1:1 (каждый компонент в концентрации 1-Ю"5 г/мл крови) ВК составила 5,2±0,1 отн. ед., а - 8,4±0,2 с, что не только достоверно ниже, по сравнению с контролем, но также и не отличается от исходных значений. ИДЭ при скоростях сдвига 90 с"1,180 с"1 и 890 с"1 на 47-50% был выше контрольных значений

Смесь диквертина и аскорбиновой кислоты в соотношении 12 (концентрации 1-10" и 2-10'5 г/мл крови соответственно), уменьшала ВК на 13% и увеличивала Тщ на 14% по отношению к контрольным значениям. Деформируемость эритроцитов достоверно улучшалась во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига на 41-53% по сравнению с контролем, при этом на скоростях сдвига 180 с"1 и 350 с"1 ИДЭ был значимо выше, чем при использовании танака-на.

Смесь диквертина и аскорбиновой кислоты в соотношении 1:3 (концентрации 110"5 и 3-Ю*5 г/мл крови соответственно) уменьшала ВК на 13% по отношению к контрольным значениям. При этом Тш был на 11% больше, чем в контроле и происходило увеличение способности эритроцитов к деформации на скоростях сдвига 90-890 с"1 на 21-52% по сравнению с контролем. При скорости сдвига равной 180 с"1 также наблюдалось достоверное увеличение ИДЭ и по сравнению с танаканом.

Таким образом, смесь диквертина и аскорбиновой кислоты проявляет выраженный гемореологический эффект, превосходящий таковой у танахана, диквертина или аскорбиновой кислоты.

Изучение действия экдистерона и экстрактов из экдистероидсодер-жагцих растений на реологические свойства крови in vitro Метод воспроизведения нарушений реологических свойств крови in vitro так же был использован для оценки гемореологического свойств у экдистерона

и сухих экстрактов (экстрагент - этанол) из экдистероидсодержащих растений -смолевки двудомной (Silene dioica (L.) clairv.), смолевки зеленоцветковой (Silene viridiflora L ), смолевки линикола (Silene linicola С С. Gmelin), смолевки меловой(8йепе creticea L), смолевки татарской (Silene tatarica (L ) Pers ), левзеи сафлоровидной (Rhaponticum carthamoides (Wild )Iljin) и лихниса хальцедонско-го (Lychnis chalcedonica L ).

Наиболее выраженное гемореологическое действие экдистерона проявилось в концентрации 1-Ю'7 г/мл крови. В этой концентрации экдистерон существенно ограничивал возрастание ВК: в опытной группе ВК возросла на 7% по сравнению с исходным значением, в контроле прирост показателя составил 18%. Экдистерон также предотвращал усиление агрегационной способности эритроцитов: Ti/2 под действием экдистерона увеличивался в среднем в 1,2 раза по сравнению с контрольными значениями. В концентрации 1-10"® г/мл крови влияние экдистерона на агрегацию эритроцитов сохранялось - Тт был выше, чем в контроле на 57% Несмотря на это, ВК значимо не отличалось от таковой в контрольной группе. В концентрации 110"5 г/мл крови экдистерон не оказывал существенного влияния ни на один из исследуемых показателей.

При использовании экстракта смолевки двудомной повышение ВК, по сравнению с исходными данными составило 16%, в то время как в контроле -23% Т]/2 в опытных пробах составил 8,1±0,1 с, что достоверно больше (на 25%), чем в контроле. Экстракт смолевки татарской на модели СПВК in vitro предотвращал возрастание ВК и значительно ограничивал усиления эритроци-тарной агрегации (Тш по сравнению с контролем увеличивался на 15%). Экстракт смолевки зеленоцветковой достоверно ограничивал возрастание агрегационной способности эритроцитов, но не оказывал влияния на вязкости крови Сухие экстракты смолевок меловой и линикола не оказывали существенного влияния на оба исследуемых показателя.

Таким образом, среди исследованных извлечений из растений рода смолевок, перспективными для дальнейшего исследования являются сухие экстракты смолевки двудомной и смолевки татарской

В экспериментах по исследованию гемореологической активности левзеи сафлоровидной оценивалась эффективность трех сухих экстрактов, приготовленных с использованием в качестве экстрагента этанола в концентрации 25% (ЭЛС-1), 40% (ЭЛС-2) и 70% (ЭЛС-3).

ЭЛС-1, внесенный в пробу за 15 мин до нагревания в конечной концентрации 110"5 г/мл крови, уменьшал ВК на 7% и удлинял Тш на 50% по отношению к контролю Наблюдалось увеличение способности эритроцитов к деформируемости при скоростях сдвига 90 с"', 180 с"1, 350 с"1 и 890 с"1 на 16%, 21%, 12% и 14% соответственно по сравнению с контролем.

ЭЛС-2, внесенный в пробу за 15 мин до нагревания в конечной концентрации 110'5 г/мл крови, уменьшал ВК на 9% по отношению к контрольным значениям Тт был не только на 70% больше, чем в контроле, но также превосходил значения при использовании танакана. Деформируемость эритроцитов

увеличивалась на 32%, 27%, 19%, 21% при скоростях сдвига 90 с'1, 180 с"1, 350 с'1, 890 с"1 соответственно в сравнении с контролем.

При применении ЭЛС-3 не было выявлено достоверных различий ВК и Т]/2 между контрольными и опытными пробами. ИДЭ достоверно повышался (на 13%) только при скорости сдвига 350 с"1.

Для оценки гемореологической активности лихниса хальцедонского исследовали эффективность сухих экстрактов, приготовленных с использованием в качестве экстрагента этанола в концентрации 40% (ЭЛХ-1) и 70% (ЭЛХ-2)

При добавлении в пробы ЭЛХ-1 ВК составила 4,4±0,2 отн ед и Тт -8,7±0,б с, что статистически значимо не отличается от исходных значений. ИДЭ в исследуемом диапазоне скоростей сдвига (90-890 с"') возрос, по сравнению с контролем, на 30-37%.

При добавлении в пробы крови ЭЛХ-2 ВК была достоверно ниже (на 15%), чем в контроле. Т^, по отношению к контролю, возрастал на 28%. ИДЭ при скоростях сдвига 90 с"1, 180 с"1, 350 с"1 и 890 с"1 по сравнению с контролем увеличивался соответственно на 26%, 31%, 30% и 28%.

Таким образом, экдистероидсодержащие растения на модели СТТВК in vitro проявляют выраженную гемореологическую активность и могут служить перспективным источником для создания средств - корректоров нарушений вязкостных свойств крови.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ СИНДРОМА ПОВЫШЕННОЙ ВЯЗКОСТИ КОВИ НА МОДЕЛЯХ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ ПАТОЛОГИИ ЭКСТРАКТАМИ ИЗ ФЛАВОНОИДСОДЕРЖАЩИХ РАСТЕНИЙ Фармакологические эффекты экстракта из манжетки обыкновенной на моделях синдрома повышенной вязкости крови

Гемореологические эффекты экстракта из манжетки обыкновенной На модели СПВК, развивающегося при ишемии головного мозга, экстракт манжетки обыкновенной (ЭМО) в дозе 300 мг/кг достоверно снижал, по сравнению с контрольной группой, ВП (на 13%) и содержание в ней фибриногена (на 26%). Гематокрит у животных, получавших экстракт, был как и в контроле значимо выше, чем у интактных животных, однако наблюдалось выраженное улучшение функциональных свойств эритроцитов. Так, Тт составил 7,9±0,2 с, что в 1,8 раза выше, чем в группе контроля и статистически значимо не отличалось от значения показателя у интактных крыс и указывает на способность экстракта устранять патологическую гиперагрегацию эритроцитов Вместе с ослаблением эритроцитарной агрегации под действием ЭМО улучшалась деформируемость эритроцитов ИДЭ во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига у животных опытной группы на только превосходил контрольные значения на 29-53%, но и статистически значимо не различался на скоростях сдвига 90 с" 180 с"1 и 360 с"1 с интактной группой. Положительная динамика основных ге-мореологических параметров при применении ЭМО сопровождалась достоверным снижением, по сравнению с контролем, ВК при скоростях сдвига от 3 с'1 до 300 с"1 (рис 2).

Ишемия головного мозга

Инфаркт миокарда

Рис 2 Влияние экстракта манжетки обыкновенной на вязкость крови при сердечно-сосудистой патологии. -—О- интактные, -П- контроль, —Д— опыт.

Черными маркерами обозначены достоверные различия с интакгной группой; зведочкой - достоверные различия с контролем.

Анализ гемореологического механизма действия экстракта манжетки обыкновенной показывает, что в первую очередь, снижение ВК происходит за счет влияния на эритроциты Полностью устраняется гиперагрегация эритроцитов даже на фоне повышенного, по сравнению с интактными животными, уровня фибриногена Также нормализуется деформируемость эритроцитов, что является одним важнейших факторов для поддержания кровотока на уровне мик-роциркуляторного русла, когда диаметр сосудов сопоставим или меньше размера эритроцитов.

На модели СПВК, развивающегося при лигировании коронарной артерии, у крыс, получавших ЭМО ВП составила 1,6±0,1 сП, что достоверно ниже, чем в контроле и не отличается от значений у интактных животных Уровень фибриногена у леченных животных (2,53±0,11 г/л) был также достоверно более низким по сравнению с контрольной группой (3,03±0,14 г/л) Значимых изменений гематокрита под действием экстракта не наблюдалось. Т\п у крыс, получавших ЭМО, в 1,9 раза превосходил контрольные и не отличался от интактных значений Если на скоростях сдвига 90 с"1 и 180 с"1 достоверных различий в деформируемости эритроцитов между группами контроля и опыта не наблюдалось, то при 360 с"1 наметилась тенденция к увеличению ИДЭ в опытной группе (на 14%), а при 890 с"1 различия показателя приобретали достоверные значения ВК у крыс, получавших ЭМО, в области низких скоростей сдвига (3-10 с"1) была меньше, по сравнению с контрольной группой на 15-17%, однако эти изменения не достигали уровня необходимой статистической значимости В диапазоне от 100 с"1 до 300 с" снижение ВК по сравнению с контролем имело уже достоверный характер (рис. 2)

Гемореологические эффекты ЭМО на модели СПВК, развивающегося при инфаркте миокарда, в целом были подобны таковым при ишемии мозга Не наблюдалось влияния на гематокрит Так же нормализовалась эритроцитарная агрегация на фоне все еще остающейся гиперфибриногенемии

При курсовом введении ЭМО крысам с моделью инфаркта миокарда нами выявлен выраженный кардиопротекторный эффект Так, объем пораженного миокарда в левом желудочке в контрольной группе составил 23,6±4,5%, а у леченных животных повреждение ткани сердца было достоверно меньшим -11,7±4,6% Снижение зоны инфаркта вероятно связано с несколькими факторами Во-первых, ЭМО увеличивая деформируемость эритроцитов, снижая их гиперагрегацию может значительно улучшить микроциркуляцию и за счет развитой в миокарде сети анастомозов частично компенсировать снижение кровотока Во-вторых, флавоноиды, содержащиеся в ЭМО способны ограничивать активацию процессов липидной пероксидации. вызванную нарушением кровоснабжения миокарда и, тем самым, препятствовать гибели кардиомиоцитов

У животных линии БНЯ при курсовом введении ЭМО наблюдалось снижение ВП до 1,6+0,1 сП, что достоверно ниже, чем в контроле Уровень фибриногена в плазме снизился по сравнению с контрольной группой на 26% Значимых изменений гематокрита и Т1/2 у спонтанно-гипертензивных крыс, получавших ЭМО не выявлено. Однако происходило существенное улучшение де-

формируемое™ эритроцитов Так, на скоростях сдвига 180 с"1, 360 с"1 и 890 с"' ИДЭ превосходил контрольные значения на 21%, 21% и 11% соответственно. ВК достоверно снижалась в диапазоне скоростей сдвига от 5 с"1 до 300 с"1 на 915% (рис. 2). Особо следует отметить, что у леченных животных, на фоне улучшения реологических свойств крови, наблюдалось достоверное снижение (на 18%) артериального давления, по сравнению с крысами не получавшими лечения.

Таким образом на моделях СПВК, развивающегося при сердечнососудистой патологии экстракт манжетки обыкновенной проявляет выраженные гемореолопические свойства. Снижение вязкости крови происходит как за счет клеточных факторов (улучшение деформируемости эритроцитов, ослабление патологической эритроцитарной гиперагрегации), так и плазменных факторов (снижение вязкости плазмы и содержания в ней фибриногена).

Исследование влияния экстракта манжетки обыкновенной на структурно-метаболическое состояние эритроцитов на моделях синдрома повышенной вязкости крови. У крыс с ишемией головного мозга, получавших в течение 5 суток ЭМО в дозе 300 мг/кг ежедневно, содержание дискоцитов в периферической крови составило 84,03±0,15%, что достоверно выше, чем в контрольной группе. Количество переходных форм в опытной группе статистически значимо не отличалось от значений в кошроле. У крыс, получавших ЭМО, наблюдалось уменьшение, по сравнению с контрольной группой, доли предгемолитических форм (до l,87iO,18%), однако это снижение не достигало статистически значимого уровня, вместе с тем не было значимых различий и с группой интактных животных. Использование ЭМО препятствовало росту числа эритроцитов дегенеративной формы. Так, их доля в опытной группе составила 0,47±0,06%, что в 1,8 раза ниже чем в контрольной группе и достоверно не отличается от значения у интактных животных.

У животных с ишемией головного мозга, получавших ЭМО, содержание белка составило 4,06±0,53 мг/мл суспензии теней эритроцитов, что достоверно не отличалось ни от интактной группы, ни от контроля. Количество общих ли-пидов достоверно превышало значения у контрольных животных, но не достигало уровня показателя в интактной группе. Общее количество фосфолипидов возрастало по сравнению с контролем до 0,791±0,065 мг/мг белка, однако изменение показателя не достигало уровня необходимой статистической значимости, вместе с тем не было достоверных различий и с интактными животными. Количество ФЭА и ФХ у крыс, получавших экстракт, достоверно не отличалось от значений в контрольной группе. Содержание ФС и СМ составило соответственно 0,245±0,021 мг/мг белка и 0,102±0,009 мг/мг белка, что достоверно выше по сравнению с контролем и не отличается от количества этих фосфолипидов у интактных животных.

У крыс, получавших ЭМО, активность процессов перекисного окисления, была значительно ниже, чем у контрольных животных. Наблюдалось достоверное уменьшение содержания диеновых конъюгатов до 0,226±0,015 ОБгзз/мг ли-пидов. Уровень МДА до и после индукции ПОЛ составил соответственно

0,011±0,004 нМ/мг липидов и 0,041±0,004 нМ/мг липидов, что было значимо ниже аналогичных показателей в контрольной группе. Следует отметить, содержание МДА после индукции ПОЛ у крыс, получавших экстракт манжетки, также было достоверно меньшим и по сравнению с интактными животными

У крыс с инфарктом миокарда, получавших в течение 5 суток ЭМО в дозе 300 мг/кг ежедневно, содержание дискоцитов в периферической крови составило 82,98±0,41%, что достоверно выше, чем в контрольной группе Количество переходных форм в опытной группе составило 13,84*0,56%, что значимо меньше по сравнению с контролем и не отличается от интакгных значений У крыс, получавших ЭМО, доля предгемолитических форм была достоверно меньшей, по сравнению с контрольной группой (2,72±0,21%), а доля дегенеративно измененных эритроцитов была не только значимо меньше, чем в контроле, но и достоверно не отличалась от значения у интактных животных

При курсовом введении ЭМО в условиях модели экспериментального инфаркта миокарда содержание белка в эритроцитарных мембранах составило 4,88±0,32 мг/мл суспензии теней эритроцитов, что достоверно не отличается ни от интактной группы, ни от контроля. Общее количество липидов составило 1,731 ±0,105 мг/мг белка и статистически значимо не отличалось от величин в интактной группе; достоверных различий в сравнении с контрольными животными также не выявлено. Содержание фосфолипидной фракции по сравнению с контролем возрастало (до 0,845±0,056 мг/мг белка), но не достигало необходимого уровня статистической значимости, вместе с тем не было достоверных различий и от группы интактных животных. Количество ФЭА, ФС и СМ у крыс, получавших ЭМО, составило соответственно 0,220±0,009 мг/мг белка, 0,242±0,017 мг/мг белка и 0,101±0,012 мг/мг белка и достоверно не отличалось от значений в интактной группе Содержание ФХ статистически значимо возрастало по сравнению с контрольными животными и достигало значения 0,254±0,010 мг/мг белка У крыс, леченных ЭМО, содержание ЛФЛ составило 0,038±0,004 мг/мг белка, что достоверно ниже, чем у нелеченных животных.

Курсовое введение ЭМО крысам с инфарктом миокарда приводило к достоверному снижению содержания в эритроцитарных мембранах диеновых конъюгатов. Накопление вторичных продуктов липидной пероксидации у крыс опытной группы было также значительно ниже, чем у контрольных животных. Так, уровень МДА до индукции снижался до 0,014±0,003 нМ/мг липидов Количество МДА после активации ПОЛ сульфатом железа составило 0,034+0,008 нМ/мг липидов, что достоверно меньше даже по сравнению с интактной группой.

У крыс с артериальной гипертензией, получавших в течение 10 суток ЭМО в дозе 300 мг/кг ежедневно, содержание дискоцитов в периферической крови составило 81,91 ±0,22%, что достоверно выше, чем в контрольной группе. Количество переходных форм в опытной группе статистически значимо не отличалось от значений в контроле У крыс, леченных ЭМО, наблюдалось уменьшение, по сравнению с контрольной группой, доли предгемолитических форм (до 2,12±0,08%). Использование экстракта препятствовало росту числа

эритроцитов дегенеративной формы Так, их доля в опытной группе составила 0,87±0,08%, что в 1,4 раза ниже, чем в контрольной группе.

При курсовом введении ЭМО крысам с артериальной гипертензией содержание белка составило 4,06±0,53 мг/мл суспензии теней эритроцитов, что достоверно не отличается от контроля. Наблюдалось повышение количества липидов до 1,543±0,081 мг/мг белка. Общее количество фосфолипидов достоверно возрастало по сравнению с контролем до 0,749±0,065 мг/мг белка. Количество ФЭА и ФС возрастало и достоверно не отличалось от значений у нормо-тензивных животных. Содержание ФХ и СМ составило соответственно 0,171±0,022 мг/мг белка и 0,096±0,007 мг/мг белка, причем количество СМ значимо превосходило контрольные значения и не различалось с крысами Вистар. Под действием ЭМО содержание лизофосфолипидов в эритроцитарных мембранах у крыс линии SHR снижалось до уровня показателя у крыс Вистар.

Таким образом, курсовое введение ЭМО обыкновенной в условиях моделей СПВК, развивающегося при сердечно-сосудистой патологии повышает содержание в мембранах эритроцитов липидов за счет увеличения количества фосфолипидов, ограничивает избыточное накопление лизофосфолипидов, что в конечном итоге препятствует переходу дискоидных форм эритроцитов в необратимо измененные формы Существенным компонентом мембранопротектор-ного действия ЭМО является его способность тормозить гиперактивацию процессов липидной пероксидации.

Фармакологические эффекты асковертина на моделях синдрома

повышенной вязкости крови

Гемореологические эффекты асковертина В экспериментах in vitro было показано, что смесь диквертина и аскорбиновой кислоты в соотношении масс 12 и 1:3 обладает выраженным гемореологическим действием. С целью создания на основе этих двух компонентов гемореологического препарата (асковер-тин) и исследования механизмов его действия, дальнейшие исследования, на моделях СПВК in vivo, были проведены при совместном использовании диквертина и аскорбиновой кислоты в дозах 20 мг/кг и 50 мг/кг соответственно.

На модели СПВК, развивающегося при ишемии головного мозга у крыс, при курсовом введении асковертина ВП составила 1,6±0,1 сП, что достоверно не отличается от значений в контроле, однако не было статистически значимых различий данного показателя и с интактной группой. В группе крыс, получавших асковертин, по сравнению с контролем, не наблюдалось значимых изменений гематокрита и Т\п Выраженное влияние препарат оказал на деформируемость эритроцитов. Так, на скорости сдвига 890 с"1 ИДЭ возрастал по сравнению с контрольной группой на 30% и достигал значений у интактных животных Улучшение деформируемости эритроцитов приводило к достоверному снижению, по сравнению с контролем, ВК в диапазоне скоростей сдвига от 100 с"1 до 300 с'1 на 16-18% (рис. 3).

На модели СПВК, развивающегося при лигировании коронарной артерии, при курсовом введении асковертина не наблюдалось достоверных сдвигов ВП,

Ишемия головного мозга

1 ' 1 ' ! ' 1 ! I ; _ I—. ! |

¡К; ■ ; ! 1 '

] ' ! I

1-,- *

! . 1 1 1 1 "V

100 150 200

Инфаркт миокарда

250 300 с

0 50 100 150 200 250

Артериальная гипертензия

ГГП г~ \ {

«С: ' i

- • ^ ;. .

' 1 ! 1.1.1 ——

0 50 100 150 200 250 300 с

Рис. 3 Влияние асковертина на вязкость крови при сердечно-сосудистой патологии.

-О- интактные, -□- контроль, —Д— опыт.

Черными маркерами обозначены достоверные различия с интактной группой; зведочкой - достоверные различия с контролем.

гематокрита и агрегации эритроцитов. Содержание фибриногена в плазме снизилось по сравнению с контролем на 15%, однако эти изменения не достигали уровня необходимой статистической значимости. В группе крыс, получавших препарат, ИДЭ при 890 с"1 достоверно возрастал и статистически значимо не различался со значением показателя интактных животных. У крыс, леченных асковертином, ВК в диапазоне высоких скоростей сдвига (100-300 с"') была достоверно ниже (на 10-13%), чем у животных контрольной группы (рис. 3).

Исследование влияния асковертина на формирование СПВК, развивающегося при ишемии головного мозга и инфаркте миокарда показывает, что основным механизмом его гемореологического действия является ограничение нарушения деформируемости эритроцитов — одного из ключевых клеточных реологических факторов, определяющих уровень микроциркуляции. Деформируемость эритроцитов преимущественно обусловлена вязкоэластическими свойствами их мембран, которые в значительной степени могут изменяться при избыточной активации свободнорадикальных процессов Вероятно, что реализация антиоксидантных свойств компонентов, входящих в состав асковертина может оказывать защитное действие по отношению к зритроцитарным мембранам.

У животных линии SHR при курсовом введении асковертина ВП достоверно, по отношению к контрольным значениям, не изменялась, однако содержание фибриногена в ней составило 2,71 ±0,15 г/л, что значимо меньше, чем в контроле (на 17%). Под действием асковертина уменьшилась эритроцитарная агрегация Тш у леченных животных удлинился по сравнению с контрольной группой на 20%. ИДЭ при скорости сдвига 890 с'1 достоверно превосходил контрольные значения на 18%, а при скоростях сдвига 90 с", 180 с"1 и 360 с"1 не только возрастал по сравнению с контролем на 26-34%, но и достигал уровня значений у крыс Вистар ВК у животных, получавших асковертин, в диапазоне низких скоростей сдвига (3-10 с"1) достоверно снизилась по сравнению с неле-ченными животными на 11-21% (рис. 3).

Анализ гемореологических эффектов асковертина у крыс с артериальной гипертензией свидетельствует о значительно большей активности препарата в условиях данной модели по сравнению с моделями СПВК, развивающегося при окюпозионных нарушениях кровообращения. Наряду с улучшением деформируемости эритроцитов, во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига, препарат также проявлял способность ограничивать их агрегацию. Одной из причин ослабления процессов эритроцитарной агрегации может являться снижение в плазме уровня фибриногена. Кроме того, ослабление эритроцитарной агрегации, в свою очередь, привело к закономерному снижению вязкости крови при низких скоростях сдвига.

Исследование влияния асковертина на структурно-метаболическое состояние эритроцитов на моделях синдрома повышенной вязкости крови. У крыс с ишемией головного мозга, получавших в течение 5 дней асковертин, количество дискоцитов не различалось со значениями в контрольной группе. Число переходных форм составило 13,98±0,43%, что значимо не отличается от кон-

троля. Общее количество эритроцитов предгемолитической формы в контрольной и опытной группе значимо не различалось У леченных животных количество дегенеративно измененных эритроцитов было достоверно меньшим, чем в контроле, и не отличалось от значения в интакгной группе.

При курсовом введении асковертина в условиях модели ишемии головного мозга содержание белка в мембранах составило 4,27±0,41 мг/мл суспензии геней эритроцитов, что достоверно не отличается ни от интакгной группы, ни от контроля Количество липидов достоверно возрастало по сравнению с контролем на 22% и статистически значимо не отличалось от величин в интактной группе. Общее количество фосфолипидов также значимо увеличивалось по сравнению с контролем (до 0,883±0,065 мг/мг белка). Количество ФХ у крыс, получавших асковергин, достоверно не отличалось от значений в контрольной группе. Содержание ФЭА и ФС составило соответственно 0,261±0,013 мг/мг белка и 0,247±0,019 мг/мг белка, что значимо выше по сравнению с контролем и не отличается от показателей у интакгных животных Количество СМ достигало 0,165±0,009 мг/мг белка и превосходило значения как в контрольной группе, так и у интактных животных. У крыс, получавших асковертин содержание лизофосфолипидов было ниже, чем в контроле, однако эти изменения не достигали уровня необходимой статистической значимости, вместе с тем не наблюдалось различий и с интакгной группой.

При курсовом введении асковертина крысам с инфарктом миокарда количество дискоцитов составило 81,58±0,21%, что достоверно выше по сравнению с аналогичным показателем контрольной группы животных Число переходных форм у крыс, получавших асковертин, статистически значимо не отличалось от контрольных значений. Под действием препарата снижалось (до 2,13±0,11%) количество предгемолитических форм эритроцитов, количество дегенеративно измененных эритроцитов было достоверно ниже, чем в контроле и не отличалось от значений у интактных животных. У крыс с инфарктом миокарда, получавших асковертин, содержание белка в мембранах составило 4,29±0,36 мг/мл суспензии теней эритроцитов, что достоверно не отличается ни от интактной группы, ни от контроля Общее количество липидов составило 1,557±0,105 мг/мг белка и статистически значимо не отличалось от величин в контрольной группе Содержание фосфолипидной фракции, по сравнению с контролем, возрастало (до 0,872±0,073 мг/мг белка), но изменение не достигало необходимого уровня статистической значимости, вместе с тем не было достоверных различий и от группы интактных животных Количество ФЭА, ФХ и ФС у крыс, получавших асковертин, составило соответственно 0,232±0,018 мг/мг белка, 0,200±0,018 мг/мг белка и 0,259±0,019 мг/мг белка и не отличалось от значений в контрольной группе Содержание СМ статистически значимо возрастало по сравнению с контролем и достигало значения 0,132±0,010 мг/мг белка. Курсовое введение асковертина не оказало достоверного влияния на содержание ЛФЛ в эритроцитарных мембранах при инфаркте миокарда

На модели СПВК, развивающегося при артериальной гипертензии под действием асковертина количество дискоцитов достоверно возрастало (до

86,53±1,02%) по сравнению с контрольной группой и не отличалось от показателей у интактных крыс Вистар. Препарата уменьшал, до уровня нормотензив-ных животных, долю предгемолитических форм эритроцитов и значительно снижал число дегенеративно измененных эритроцитов (до 0,25±0,05%), что меньше, как по сравнению с контрольной группой, так и с нормотензивными животными.

При курсовом введении асковертина крысам линии БНИ содержание белка составило 4,86±0,51 мг/мл суспензии теней эритроцитов и достоверно не отличалось от контроля. Наблюдалось повышение количества липидов до 1,685±0,056 мг/мг белка, что статистически значимо превосходит аналогичную величину в контрольной группе. Общее количество фосфолипидов достоверно возрастало по сравнению с контролем до 0,769±0,067 мг/мг белка. Количество ФЭА и ФХ в опытной группе, достоверно не отличалось от значений у контрольных животных. Содержание ФС и СМ составило соответственно 0,241±0,012 мг/мг белка и 0,116±0,010 мг/мг белка, что превосходит контрольные значения и не отличается от значений у нормотензивных крыс. Под действием асковертина у гипертензивных животных наблюдалось достоверное снижение количества ЛФЛ (до 0,029±0,004 мг/мг белка).

Характерной особенностью действия асковертина является его способность ограничивать переход эритроцитов из дискоидных форм, которые способны к деформации, в необратимо измененные формы, что проявляется увеличением ИДЭ на всех исследованных моделях.

Влияние асковертина на показатели ЭКГ и объем зоны некроза при моделировании инфаркта миокарда. Учитывая, выявленную способность асковертина ограничивать, в условиях модели инфаркта миокарда, нарушение деформируемости эритроцитов, что может значительно улучшать микроциркуляцию, а также высокую антиокислительную активность диквертина было проведено исследование влияния препарата на миокард. Через 5 суток после лигирования левой коронарной артерии у крыс наблюдались выраженные изменения параметров ЭКГ по сравнению с интактными животными Частота сердечных сокращений (ЧСС) повышалась на 12%, амплитуда зубца Я снижалась на 37% Амплитуда зубца Т принимала отрицательный характер, снижаясь до значений -162±74 мкВ при 59±21 мкВ у интактных животных У 83% животных наблюдалось развитие зубца О (-79±21 мкВ). Объем некротизированной ткани левого желудочка через пять суток после лигирования левой коронарной артерии составил 24,6±2,3% При курсовом введении асковертина наблюдалось снижение ЧСС до 424±13, однако изменение параметра не достигало статистически значимого уровня, вместе с тем не было достоверных различий в ЧСС и с группой интактных крыс Под действием препарата не наблюдалось значимых изменений длительности интервалов РО, ОТ и ОИЯ по сравнению с контрольной группой животных Однако, по сравнению с интактными животными интервал РО был достоверно укорочен, а ОТ - удлинен. При использовании асковертина число животных со сформировавшимся зубцом С? снижалось до 50%, а амплитуда зубца уменьшалась до -37±5 мкВ Благоприятное действие препарата на

миокард в условиях острого нарушения коронарного кровообращения проявилось в снижении объема зоны некроза до 18,8±2,2%.

Церебропротекгорные свойства асковертина при ишемии головного мозга у крыс 2 Изменения реологических свойств крови являются одним из существенных механизмов в формировании недостаточности кровоснабжения мозга при нарушениях церебрального кровообращения [Амоаший М.С , 1986; Ахвле-диани М.А., 1987; Канарейкин К.Ф. и соавт., 1994]. Усиление агрегации эритроцитов и снижение их деформируемости на фоне падения перфузионного давления и нарушения геометрии микроциркуляторного русла, развивающимся отёком-набуханием мозговой ткани, значительно ослабляют уровень микроциркуляции, что ведет к уменьшению кислородного снабжения клеток головного мозга и затруднению удаления продуктов их метаболизма Учитывая значительную гемореологическую активность асковертина, а также выраженные ан-тиоксидантные свойства, входящих в его состав компонентов, были проведены исследования церебропротекторных свойств препарата при ишемии головного мозга у крыс.

На 5-е сутки после лигирования сонных артерий в коре головного мозга наблюдалось достоверное увеличение количества нервных клеток с очаговым хроматолизом до 7,03±0,3% в правом и до 10,51 ±0,60% в левом полушариях Аналогичная динамика наблюдалась в содержании гиперхромных нейронов без признаков сморщивания Так, их доля в левом полушарии возросла в 7,3 раза и составила 25,50±0,92%, в правом полушарии количество подобным образом измененных клеток увеличилось до 15,70±1,04% (в 3,4 раза). В правом и, особенно в наиболее страдающим в этой модели левом полушарии возрастал процент "клеток-теней", которые являются результатом крайней необратимой степени хроматолиза с полным растворением хроматофильной субстанции в пери-карионе и дендритах, резким уменьшением или исчезновением ядрышек Также повысилось содержание необратимо измененных гиперхромных сморщенных нейронов. Резкое увеличение количества поврежденных нейронов привело к закономерному уменьшению доли нормохромных клеток в 1,4-2,5 раза. В целом, выраженность клеточных повреждений имела четкие трансполушарные различия- патологические изменения нейронов коры головного мозга со стороны полной окклюзии сонной артерии были достоверно большими, чем со стороны с частично сохраненным кровотоком.

При курсовом введении асковертина в правом полушарии содержание нейронов с обратимыми реактивными изменениями уменьшалось. Так, доля клеток с очаговым хроматолизом была не только достоверно меньше, чем в контроле, но также значимо не различалась с интактными животными. Количество гиперхромных нейронов составило 9,76±0,87%, что в 1,6 раза меньше по сравнению с нелеченными животными. Терапия асковертином достоверно

2 Разделы работы по исследованию структурных изменений коры большого мозга выполнены совместно с к.м н. Н,В Пугаченко на кафедре гистологии и эмбриологии (зав - проф С В Логвинов) Сибирского государственного медицинского университета

ограничивала число нейронов с необратимыми нарушениями (клетки-тени, пикноморфные нейроны) В левом полушарии значимо была снижена, по сравнению с контролем, только доля нейронов с изменениями обратимого характера (с очаговым хроматолизом, гиперхромные без признаков сморщивания) и отсутствовала динамика в содержании необратимо измененных клеток. Количество нормохромных нервных клеток возрастало, по сравнению с контролем, как в правом, так и в левом полушариях

Патологические процессы, развивающиеся при ишемии в нейронах головного мозга приводят и к ультраструктурным изменениям межнейрональных синапсов. В условиях данной модели ишемии мозга чаще встречается "светлый" тип деструкции межнейрональных синапсов, проявляющийся набуханием пресинаптического отдела и снижением его электронной плотности, разрушением большинства везикул и резким уменьшением их количества, нарушением органелл, в частности митохондрий, вакуолизацией, появлением нитевидного и мелкозернистого материала. Значительно реже синапсы подвергались деструкции по "темному" типу, для которого характерно увеличение ос-миофилии пре- и поетеинагггических отделов, агглютинация и разрушение везикул, с трудом различимых на фоне электронно-плотной аксоплазмы. При подсчете на осмированных улыратонких срезах деструктивно измененных синапсов наблюдалось достоверное увеличение их содержания в правом полушарии до 28,4±5,0%, а в левом до 37,4±3,2%. Ишемия мозга вызывала снижение общей численной плотности ФВК-позитивных определенных контактов в правом полушарии до 12,5±2,0 а в левом до 9,2±1,4, преимущественно за счет уменьшения численной плотности асимметричных контактов до 8,4±1,2 и 4,8±9 соответственно в правом и левом полушариях. Численная плотность симметричных контактов снижалась в меньшей степени У интактных крыс в слое IV коры большого мозга плоские контакты составили порядка 66-67%, положительно искривленные 21-23%, отрицательно искривленные 10-12% При ишемии мозга снижалась численная плотность как искривленных, так и плоских синапсов, но в большей степени изменения касались положительно искривленных контактов, содержание которых уменьшалось, по сравнению с интактными животными, в правом полушарии до 33%, в левом до 21%.

При курсовом введении асковертина в условиях модели ишемии мозга доля деструктивно измененных синапсов составила 10,7±3,5% и 25,0±2,3% соответственно в правом и левом полушариях, что достоверно ниже, чем в контроле, а в правом полушарии не различается и со значениями в интактной группе. Препарат предупреждал снижение в правом полушарии численной плотности ФВК-позитивных определенных контактов в основном за счет влияния на асимметричные контакты. В левом полушарии общая численная плотность синапсов была достоверно выше, чем в контроле на 46%, в основном вследствие значимого более высокого количества асимметричных контактов (на 69%) У леченных крыс численная плотность и соотношение синапсов с различным искривлением в правом полушарии были близки к значениям у ин-

тактных животных, а в более ишемизированном левом полушарии было снижено, по сравнению с интактной группой, лишь количество плоских контактов.

Ишемия мозга вызывала снижение численной плотности гипертрофированных контактов, по сравнению с интактными животными, до 73% в правом и 59% в левом полушариях Асковертин нормализовал численную плотность гипертрофированных синапсов, которая составила в правом полушарии 117%, и в левом - 115% по отношению к значениям у интактных крыс. Численная плотность перфорированных синапсов при ишемии в правом полушарии оставалась на уровне интактных значений, а в левом снижалась до 76%. Введение животным асковертина вызывало существенный рост численной плотности перфорированных контактов не только по отношению к контролю, но и в сравнении с интактными животными.

Полученные данные свидетельствуют, что под влиянием курсового введения асковертина происходило уменьшение ишемических повреждений клеток коры мозга. Эффективность препарата практически не зависит от уровня кровоснабжения полушарий мозга, показатели улучшаются по сравнению с контролем как в бассейне сонной артерии с частично сохраненным кровотоком (правое полушарие), так и со стороны полной окклюзии

Способность асковертина ограничивать структурные нарушения нейронов в коре головного мозга позволяет предположить, что он также может предупреждать расстройства их функциональной активности. В связи с этим было проведено исследование влияния асковертина на биоэлектрическую активность головного мозга в условиях ишемии.

Исходное состояние функциональной активности коры головного мозга у крыс характеризовалось типичным для здоровых животных доминированием ©-ритма и умеренным уровнем межполушарной асимметрии. На 2-е сутки после создания ишемии головного мозга отмечалось падение суммарной мощности спектра ЭЭГ на 36-40% Характерной чертой явилась более выраженная депрессия ©-ритма (на 40-50%), с тенденцией к увеличению межполушарной асимметрии. Падение мощности 5-, а- и (3-диапазонов составило 30-38%, 2025%, 25-35% соответственно. Амплитуда доминирующего пика снизилась на 35 и 55% соответственно в правом и левом полушариях, доминирующий пик несколько сместился в область более низких частот, с 6,45-6,50 Гц до 5,10-5,15 Гц На пятые сутки отмечалось дальнейшее углубление отмеченных изменений Имелась выраженная депрессия мощности ритмов зрительной коры головного мозга Наиболее существенные изменения коснулись левого полушария (со стороны полной перевязки сонной артерии), где наблюдалось снижение мощности всех ритмов ЭЭГ, а также суммарной мощности, практически в два раза по сравнению с правым полушарием. Уменьшение ©-активности левого полушария составило 70%, правого - 44% (коэффициент асимметрии 0,51) от значений до ишемии мозга; снижение мощности 5-, а- и р-ритма в левом полушарии составило 49%, 60% и 51% соответственно, в то время как в правом полушарии не было достоверных отличий этих показателей от значений до ишемии. Амплитуда доминирующего пика снизилась на 25-26% в обоих полушариях.

В группе животных с ишемией мозга, получавших асковертин, картина мощности диапазонов ЭЭГ на вторые сутки была близка к таковой в группе не-леченных животных. На пятые сутки было отмечено частичное восстановление мощности 0- и (3-диапазонов Мощность ©-ритма в левом и правом полушариях превышала таковую в группе контроля на 54% и 55%, а 5-ритма - на 41% и 45% соответственно Однако мощность 0-ритма была ниже исходных значений на 27% и 19%, а 5-ритма - на 32% и 26% соответственно в левом и правом полушариях Асковертин практически устранял межполушарную асимметрию суммарной мощности и мощности основного диапазона (0-ритм), которая развивалась у крыс при ишемии.

Таким образом, асковертин при нарушениях мозгового кровообращения обладает выраженной церебропротекторной активностью, что проявляется его способностью ограничивать ишемические повреждения нейронов коры головного мозга и улучшать его функционирование.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ СИНДРОМА ПОВЫШЕННОЙ ВЯЗКОСТИ КРОВИ НА МОДЕЛЯХ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ ПАТОЛОГИИ ЭКСТРАКТАМИ ИЗ ЭКДИСТЕРОИДСОДЕРЖАЩИХ

РАСТЕНИЙ

Фармакологические эффекты экстракта из левзеи сафлоровидной на моделях синдрома повышенной вязкости крови in vivo Гемореологические эффекты экстракта из левзеи сафлоровидной На модели СПВК, развивающегося при ишемии головного мозга, экстракт левзеи сафлоровидной (ЭЛС) в дозе 150 мг/кг достоверно снижал ВП (на 11%) и содержание в ней фибриногена (на 18%) Гематокрит у животных, получавших экстракт, не отличался ни от значений в контрольной группе, ни от значений у интактных животных. ЭЛС не оказал значимого влияния на агрегацию эритроцитов, однако препятствовал нарушению деформируемости эритроцитов ИДЭ во всем исследуемом диапазона скоростей сдвига (90-890 с"1) у животных опытной группы не только превосходил контрольные значения на 14-38%, но и при 90 с"1, 180 с"1 и 360 с"1 достоверно не различался со значениями в интакт-ной группе Положительная динамика основных гемореологических параметров при применении ЭЛС сопровождалась снижением, по сравнению с контролем, ВК при скоростях сдвига от 3 с"1 до 300 с"1 на 25-38% (рис. 4).

В условиях СПВК, развивающегося при лигировании коронарной артерии у крыс, получавших ЭЛС ВП составила 1,6±0,1 сП, что достоверно ниже, чем в контроле и не отличается от значений у интактных животных. Уровень фибриногена у леченных животных (2,89±0,25 г/л) был также более низким по сравнению с контрольной группой (3,61±0,13 г/л). Значимых изменений гематокри-та под действием экстракта не наблюдалось. Длительность Т^ у крыс, получавших ЭЛС, не отличалась от значений в контрольной группе. Если на скоростях сдвига 90 с*1 и 180 с"1 достоверные различия в деформируемости эритроцитов между группами контроля и опыта отсутствовали, то при 360 с"1 и 890 с"1

Ишемия головного мозга

Инфаркт миокарда

I ! ' |

Ц-<..... 1 1 ч \ !

! ! 1 <

! ----- -!-\-?

Артериальная гипертензия

Рис. 4 Влияние экстракта левзеи сафлоровидной на вязкость крови при сердечно-сосудистой патологии.

-О- интактйые, -□- контроль, —Д— опыт.

Черными маркерами обозначены достоверные различия с интактной группой; зведочкой - достоверные рдзли^ш? с кожгйрйем.

ИДЭ значимо превосходил контрольные значения. ВК у крыс, получавших ЭЛС, в области низких скоростей сдвига (3-10 с"1) статистически значимо не различалась с контрольной группой, однако в диапазоне от 100 с"1 до 300 с"1 наблюдалось достоверное снижение показателя (рис. 4)

У животных линии SHR при курсовом введении ЭЛС наблюдалось снижение ВП (до 1,5±0,1 сП) Уровень фибриногена в плазме уменьшился по сравнению с контрольной группой на 17%. ЭЛС оказал существенное положительное влияние на функциональные свойства эритроцитов крыс линии SHR. Так, Тщ достоверно удлинялся, по сравнению с контролем, на 38% и не отличался от значений у крыс Вистар, что свидетельствует об устранении гиперагрегации ИДЭ у леченных животных возрастал во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига до уровня в группе нормотензивных крыс. Улучшение основных гемореологических показателей привело к закономерному снижению ВК на 920% в диапазоне скоростей сдвига от 5 с"1 до 300 с"1 (рис 4).

Проведенные исследования показали, что общей для всех моделей СПВК, является способность ЭЛС нормализовать вязкость плазмы и ограничивать развитие гиперфибриногенемии, кроме того под действием экстракта улучшалась деформируемость эритроцитов.

Исследование влияния экстракта левзеи сафлоровидной на структурно-метаболическое состояние эритроцитов на моделях синдрома повышенной вязкости крови У крыс с ишемией головного мозга, получавших в течение 5 суток ЭЛС в дозе 150 мг/кг ежедневно, содержание дискоцитов в периферической крови составило 84,98+0,26%, что достоверно выше, чем в контрольной группе. Количество переходных форм в опытной группе было статистически значимо меньше не только чем в контроле, но также по сравнению с группой интактных животных У крыс опытной группы наблюдалось достоверное возрастание, по сравнению с контрольной группой, эритроцитов с предгемолитической формой (до 2,87±0,12%). Использование ЭЛС препятствовало росту числа эритроцитов дегенеративной формы Так, их доля в опытной группе составила 0,48±0,05%, что в 1,8 раза ниже, чем в контроле и достоверно не отличается от значения у интактных животных

У животных с ишемией головного мозга, получавших ЭЛС, содержание белка составило 4,05±0,41 мг/мл суспензии теней эритроцитов, что достоверно не отличалось ни от интактной группы, ни от контроля. Количество общих ли-пидов достоверно превышало значения у контрольных животных, но не достигало уровня показателя в интактной группе Общее количество фосфолипидов достоверно возрастало по сравнению с контролем до 0,791±0,065 мг/мг белка Содержание в эритроцитарных мембранах ФЭА и ФХ у крыс, получавших экстракт, достоверно не отличалось от значений в контроле Содержание ФС и СМ составило соответственно 0,224±0,011 мг/мг белка и 0,124±0,011 мг/мг белка, что достоверно выше контрольных значений и не отличается от количества этих фосфолипидов у интактных животных. Под действием экстракта наблюдалось снижение, до уровня интактных животных, количества ЛФЛ.

, , | I I ■ • ~ —-

I РОС НАЦИОНАЛЬНА* I

библиотека i . О» Щ> _1

У крыс с инфарктом миокарда, получавших в течение 5 суток ЭЛС в дозе 150 мг/кг ежедневно, содержание дисконтов в периферической крови составило 83,12±0,15%, что достоверно выше, чем в контрольной группе. Количество переходных форм (13,88±0,21%) было достоверно меньше контрольных значений. Доля предгемолитаческих форм (2,47±0,08%) также была достоверно меньшей, по сравнению с контрольной группой. Использование ЭЛС препятствовало возрастанию доли дегенеративно измененных эритроцитов. Так, их число в опытной группе составило 0,53±0,08%, что значимо меньше, чем в контроле, и достоверно не отличается от значения у интактных животных.

При курсовом введении ЭЛС в условиях модели экспериментального инфаркта миокарда содержание белка в эритроцитарных мембранах составило 4,45±0,32 мг/мл суспензии теней эритроцитов, что достоверно не отличается ни от интактной группы, ни от контроля. Общее количество липидов (1,620±0,088 мг/мг белка) было выше, чем в контрольной группе, однако эти изменения не достигали уровня необходимой статистической значимости. Содержание фос-фолипидной фракции (0,835±0,058 мг/мг белка) достоверно не отличалось от уровня в контроле, вместе с тем не было значимых различий и с группой интактных животных. Количество ФС и СМ в эритроцитарных мембранах у крыс, получавших ЭЛС, составило соответственно 0,259±0,015 мг/мг белка и 0,125±0,012 мг/мг белка, что было достоверно выше, чем в контроле и не отличалось от значений в интактной группе. Содержание ФХ (0,217±0,013 мг/мг белка) статистически значимо, по сравнению с контролем не изменялось. У крыс, леченных ЭЛС, количество ЛФЛ снижалось до 0,025±0,004 мг/мг белка

У крыс с артериальной гипертензией, получавших в течение 10 суток ЭЛС в дозе 150 мг/кг ежедневно, содержание дискоцитов в периферической крови составило 85,90±0,49%, что достоверно выше, чем в контрольной группе и не отличалось от значений у крыс Вистар. Количество переходных форм в опытной группе было ниже значений как в контрольной группе, так и в группе у крыс Вистар. Уровень эритроцитов с предгемолитической формой (2,63±0,12%) значимо не различался с контрольной и опытной группами. Использование экстракта препятствовало росту числа эритроцитов дегенеративной формы Так, их доля в опытной группе составила 0,47±0,08%, что в 2,6 раза ниже, чем в контроле.

При курсовом введении ЭЛС крысам с артериальной гипертензией содержание белка составило 4,06±0,53 мг/мл суспензии теней эритроцитов Наблюдалось повышение, по сравнению с контролем, количества липидов до 1,493±0,052 мг/мг белка. Общее количество фосфолипидов достоверно возрастало по сравнению с контрольной группой до 0,734±0,041 мг/мг белка. Количество ФЭА, ФХ и ФС у крыс, получавших экстракт, не отличалось от значений у нелеченных животных. Содержание СМ составило 0,095±0,009 мг/мг белка, что выше, чем в контрольной группе и не отличается от значений у крыс Вистар. Количество ЛФЛ значимо не изменялось.

Выявленное в исследованиях повышение количества дискоцитов и снижение числа переходных» форм при курсовом применении экстракта левзеи < * *

"»J д ■

сафлоровидной в условиях моделей сердечно-сосудистой патологии, свидетельствует о способности ЭЛС тормозить процессы, ведущие к потере эритроцитом нормальной дискоидной формы Во многом данный эффект экстракта обусловлен ограничением снижения содержания липидов в эршроцитарной мембране. Кроме того, на моделях ишемии головного мозга и инфаркта миокарда ЭЛС препятствует избыточному накоплению лизофосфолипидов.

Церебропротекторные свойства экстракта левзеи сафлоровидной при ишемии головного мозга. В группе животных, получавших ЭЛС, исходные значения мощности отдельных диапазонов спектра ЭЭГ значимо не отличались от исходных показателей в контрольной группе крыс и составили: 8-диапазон -33,0% и 37,9%, 0-диапазон - 34,4% и 38,5%, а-диапазон - 11,9% и 13,8%, р-диапазон - 10,3% и 12,1% в теменной коре левого и правого полушарий соответственно.

Уже после двукратного применения ЭЛС достоверно по сравнению с контролем увеличивалась мощность в отдельных диапазонах и суммарная мощность ЭЭГ в обоих полушариях, причём значения мощностей в исследованных частотных диапазонах статистически значимо не отличались от исходных величин.

К 5-м суткам в группе крыс, получавших ЭЛС, наблюдался дальнейший рост мощности ЭЭГ-спектров в теменной коре правого полушария, что привело к статистически значимому по сравнению с исходными значениями возрастанию суммарной мощности на 59,0%. В левом полушарии увеличение суммарной мощности ЭЭГ на 11,6% не достигало уровня статистической значимости. Под действием экстракта устранялся, возникающий при ишемии низкочастотный сдвиг доминирующей частоты К 5-м суткам в действии ЭЛС на биоэлектрическую активность четко прослеживается психостимулирующий эффект, что проявляется в возрастании всех отдельных частотных диапазонов спектра

Полученные данные демонстрируют способность экстракта левзеи сафлоровидной сохранять функциональную активность головного мозга при ишемии.

Положительное влияние экстракта левзеи сафлоровидной на биоэлектрическую активность мозга позволяет предположить, что он способен ограничивать развитие ишемических нарушений в нейронах В связи с этим было проведено исследование действия ЭЛС на показатели синаптоархитекгоники коры головного мозга.

При курсовом введении ЭЛС в условиях модели ишемии мозга доля деструктивно измененных синапсов в правом полушарии составила 19,3±1,2%, что достоверно ниже, чем в контроле. В левом полушарии уровень деструктивных изменений значимо не изменялся Под действием препарата общая численная плотность синапсов (ФВК-позитивные определения) по сравнению с контролем значимо не изменялась, однако наблюдалась тенденция к возрастанию количества положительно искривленных синапсов в левом полушарии и достоверное увеличение показателя в правом. ЭЛС не изменяет по сравнению с контролем возрастание числа гипертрофированных синапсов. Однако, под действием экс-

тракта повышается количество перфорированных синапсов, что свидетельствует об активации синаптогенеза.

Полученные данные свидетельствуют, что экстракт левзеи сафлоровид-ной уменьшает ишемические повреждения в коре головного мозга. Эффект экстракта ярче выражен в полушарии с более высоким уровнем кровоснабжения

Таким образом, экстракт левзеи сафлоровидной при ишемии головного мозга обладает церебропротекторным действием, что выражается в снижении ишемических нарушений в синапсах головного мозга и улучшением его функциональной активности.

Фармакологические эффекты экстракта из лихниса хальцедонского на моделях синдрома повышенной вязкости крови in vivo

Гемореологические эффекты экстракта из лихниса хальцедонского Экс- л

перименты по исследованию фармакологической активности спиртовых извлечений из лихниса хальцедонского in vivo были проведены с использованием сухого экстракта, приготовленного с применением в качестве экстрагента 40% этанола, так как на модели СПВК in vitro данный экстракт проявил наибольшую гемореологическую активность

На модели СПВК, развивающегося при ишемии головного мозга у крыс, при курсовом введении ЭЛХ ВП составила 1,6±0,1 сП, что достоверно ниже (на 12%), чем в контроле, и статистически значимо не отличается от значения у ин-тактных животных; содержание фибриногена в плазме также было значимо ниже (на 20%) В группе крыс получавших ЭЛХ, по сравнению с контролем, не наблюдалось достоверных изменений гематокрита, однако функциональное состояние эритроцитов значительно улучшилось Так, 1\п, по сравнению с контролем удлинился на 47% ИДЭ при скоростях сдвига 90 с"1 и 180 с"1 превосходил контрольные значения на 27% и 16% соответственно Улучшение основных гемореологических параметров приводило к достоверному снижению, по сравнению с контролем, ВК в диапазоне низких скоростей сдвига (3-10 с"1) на 3346%, а при скоростях сдвига от 100 с"1 до 300 с"1 на 20-29% (рис 5). На модели > СПВК, развивающегося при лигировании коронарной артерии, при курсовом введение ЭЛХ ВП и содержание в ней фибриногена были не только достоверно ниже, чем в контрольной группе на 16% и 31% соответственно, но также значимо не отличались от величин у интактных животных. Гематокрит в интакт- " ной, контрольной и опытной группах значимо не изменялся. У животных, получавших ЭЛХ Ti/2 составил 8,9±0,6 с, что достоверно выше по сравнению с нелеченными крысами. Влияние экстракта на деформируемость эритроцитов достоверно проявилось только на высокой скорости сдвига У крыс, леченных ЭЛХ, при скоростях сдвига 3-7 с"1 наблюдалась тенденция к снижению, по сравнению с контролем, ВК, а в диапазоне от 10 с"1 до 300 с*1 межгрупповые различия имели достоверный характер (рис. 5)

У животных линии SHR при курсовом введении ЭЛХ ВП достоверно снизилась до уровня нормотензивных крыс, содержание фибриногена в ней составило 3,20±0,12 г/л, что значимо меньше, чем в контроле (на 19%). Под действи-

Ишемия головного мозга

Инфаркт миокарда

Артериальная гипертензия

Рис. 5 Влияние экстракта лихниса хальцедонскою на вязкость крови при сердечно-сосудистой патологии. -О- интакгные, -О- контроль, —Д— опыт.

Черными маркерами обозначены достоверные различия с интактной группой; зведочкой - достоверные различия с контролем.

ем ЭЛХ уменьшилась эритроцитарная агрегация. Тш у леченных животных удлинялся по сравнению с контрольной группой на 33% и достоверно не отличался от показателя у крыс Вистар. ИДЭ в диапазоне скоростей сдвига 360-890 с"' достоверно превосходил контрольные значения на 16-26%, а при скорости сдвига 90 с"1 не только возрастал по сравнению с контролем, но и достигал уровня значений у крыс Вистар. ВК у животных, получавших ЭЛХ, при скоростях сдвига 3 с"1 и 5 с"1 значимо, по сравнению с контрольной группой, не изменилась, однако в диапазоне 7-300 с"1 была достоверно ниже, чем у нелеченных животных на 8-13% (рис. 5)

Таким образом, на моделях СПВК, развивающегося при сердечнососудистой патологии экстракт лихниса хальцедонского проявляет выраженный гемореологический эффект. В механизме действия ЭЛХ отчетливо прослеживается, как и у других эвдистероидсодержащих средств, способность ' нормализовать вязкость плазмы и эффективно ограничивать развитие гипер-фибриногенемии. Наряду с этим экстракт активно влиял и на клеточные гемо-реологические факторы снижалась гиперагрегация эритроцитов и улучшалась их деформируемость.

Исследование влияния экстракта лихниса хальцедонского на структурно-метаболическое состояние эритроцитов на моделях синдрома повышенной вязкости крови. У крыс с ишемией головного мозга, получавших в течение 5 дней экстракт лихниса хальцедонского (150 мг/кг) количество дискоцитов не различалось со значениями в контрольной группе Число переходных форм составило 13,254.0,20%, что также значимо не отличается от контроля Вместе с тем у леченных животных количество дегенеративно измененных эритроцитов было достоверно меньшим, чем в контроле, и не различалось со значениями в ин-тактной группе.

При курсовом введении ЭЛХ в условиях модели ишемии головного мозга содержание липидов и фосфолипидов возрастало, по сравнению с контролем, на 10% и 15% соответственно, однако эти изменения не достигали уровня необходимой статистической значимости. Количество ФХ у крыс, получавших j ЭЛХ, составило 0,202±0,019 мг/мг белка, что достоверно выше значений в контрольной группе. Содержание ФЭА и ФС значимо не различалось с контролем, однако не было также достоверных различий с показателями у интактных животных Содержание СМ достигало 0,086±0,009 мг/мг белка и превосходило значения в контрольной труппе Количество лизофосфолипидов в контрольной и опытной группах значимо не различалось.

При курсовом введении ЭЛХ крысам с инфарктом миокарда количество дискоцитов составило 83,32±0,31%, что достоверно выше по сравнению с аналогичным показателем контрольной группы животных Число переходных форм у крыс, получавших ЭЛХ, было достоверно ниже, чем в контроле. Под действием препарата снижалось (до 2,73±0,10%) количество предгемолитиче-ских форм эритроцитов, а доля дегенеративно измененных эритроцитов была достоверно ниже, чем в контроле и не отличалась от значений у интактных животных

У крыс с инфарктом миокарда, получавших ЭЛХ, общее количество ли-пидов составило 1,553+0,088 мг/мг белка и статистически значимо не отличалось от величин в контрольной группе Содержание фосфолипидной фракции, по сравнению с контролем, возрастало (до 0,805+0,069 мг/мг белка), но изменение не достигало необходимого уровня статистической значимости, вместе с тем не было достоверных различий и от группы интактных животных. Количество ФЭА и ФХ у крыс, получавших ЭЛХ, составило соответственно 0,209+0,015 мг/мг белка и 0,178+0,019 мг/мг бежа и не отличалось от значений в контрольной группе Содержание ФС и СМ статистически значимо возрастало по сравнению с контрольными животными в 1,2 и 1,6 раза соответственно. ЭЛХ достоверно снижал уровень ЛФЛ в эритроцитарных мембранах при инфаркте миокарда.

При курсовом введении ЭЛХ (150 мг/кг) количество дискоцитов у животных линии SHR достоверно возрастало (до 82,73+0,34%) по сравнению с контрольной группой Общее количество эритроцитов с переходной формой составило 13,22+0,24% и было значимо выше, чем в контроле. Под действием экстракта не изменялось содержание предгемолигических и дегенеративно измененных форм эритроцитов.

При курсовом введении ЭЛХ крысам с артериальной гипертензией количество лигтидов (1,439+0,052 мг/мг белка) статистически значимо не отличалось от аналогичной величины в контрольной группе. Общее количество фосфоли-пидов достоверно возрастало по сравнению с контролем до 0,723+0,041 мг/мг белка Содержание в эритроцитарных мембранах ФЭА, ФС и СМ у крыс, получавших ЭЛС, достоверно не отличалось от значений у контрольных животных. Количество ФХ составило 0,209+0,019 мг/мг белка, что значимо больше, чем в контроле При курсовом введении ЭЛХ у гипертензивных животных наблюдалось достоверного снижения количества ЛФЛ (до 0,032+0,004 мг/мг белка)

Таким образом, экстракт лихниса хальцедонского на моделях синдрома повышенной вязкости крови, развивающегося при инфаркте миокарда и артериальной гипертензии препятствует избыточному накоплению в эритроцитарных мембранах лизофосфолипидов, что приводит к повышению количества дискоцитов.

КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЕМОРЕОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ АСКОВЕРТИНА Исследование гемореологической активности асковертина у больных с дисциркуляторной энцефалопатией

Исследование было проведено на 108 больных с диагнозом дисциркуля-торная энцефалопатия (ДЭ) I и II стадии, разделенных на три группы по ведущей фоновой патологии: церебральный атеросклероз (31 пациент), гипертоническая болезнь (48 пациентов), сахарный диабет (29 пациентов). По 10 больных из каждой группы было выделено в группу сравнения. Все больные основных групп получали асковертин по 2 таблетки 3 раза в день первую неделю, по 1 таблетке 3 раза в день вторую и третью неделю.

Для сравнения гемореологических показателей была взята контрольная группа из 10 клинически здоровых людей, близких по возрасту к основным группам, которым никогда не выставлялся диагноз заболеваний сосудистой системы и сахарный диабет.

У больных всех трех групп имелись значительные нарушения основных гемореологических показателей, достоверно по сравнению с клинически здоровыми людьми была повышена вязкость цельной крови и снижена деформируемость эритроцитов при всех исследуемых скоростях сдвига, а также снижен полупериод агрегации эритроцитов (на 44,6% - в I, на 25,7% - во II, на 53,5% - в III группе). Кроме того, у больных II и III групп было выявлено повышенное по сравнению с контрольной группой содержание фибриногена плазмы, а у больных I группы был значимо повышен гематокрит.

При исследовании гемореологического статуса у больных группы I на фоне приема асковертина была отмечена положительная динамика. Вязкость цельной крови во всем диапазоне скоростей сдвига (от 3 с1 до 300 с"1) имела тенденцию к снижению к концу первой недели курса и достоверно уменьшалась по сравнению с исходным уровнем к концу третьей недели. Показатели деформируемости эритроцитов, имея тенденцию к повышению на седьмой день исследования, достигали достоверных изменений на двадцать первый день Наибольшие изменения отмечались при высоких скоростях сдвига. Существенно снижалась агрегация эритроцитов: к концу первой недели на 25%, а к концу третьей - на 54% по сравнению с исходным значением удлинялся полупериод агрегации, что говорит о существенном ослаблении асковертином процесса агрегации эритроцитов. Уровень фибриногена и гематокрит имели тенденцию к снижению; вязкость плазмы практически не изменялась.

При курсовом приеме асковертина больными с ДЭ на фоне гипертонической болезни наблюдалась тенденция к снижению ВК при скоростях сдвига от 3 с"! до 50 с"1, а в диапазоне 50-300 с"' уменьшение ВК по сравнению с исходными значениями достигало статистически значимого уровня. К концу третьей недели ВК достоверно снижалась по сравнению с исходным уровнем при всех исследуемых скоростях сдвига. ИДЭ закономерно повышался уже на седьмой день приема препарата, а к окончанию курса достигал увеличения на 88% при низких, на 27% при средних и на 20% при высоких скоростях сдвига. Полупериод агрегации эритроцитов к концу первой недели увеличивался лишь на 4%, но к концу третьей достоверно возрастал на 27% по сравнению с исходными данными Не изменилось значения уровня вязкости плазмы. Вместе с тем, содержание фибриногена в плазме крови и гематокрит имели тенденцию к снижению.

У больных с ДЭ I и II стадии на фоне сахарного диабета, принимавших асковертин ВК во всем исследованном диапазоне скоростей сдвига (от 3 с"1 до 300 с1) достоверно снижалась к окончанию курса лечения. Уменьшение вязкости крови под действием асковертина преимущественно было связано с влиянием препарата на клеточные гемореологические факторы. Так, ИДЭ возрастал уже на седьмой день приема препарата, а к окончанию курса превосходил ис-

ходные значения при скоростях сдвига 90 с"', 180 с'1, 360 с"1, 890 с"1 на 68%, 48%, 37% и 18% соответственно. Полупериод агрегации эритроцитов достоверно удлинялся (на 32%) уже к концу первой недели, а к концу третьей увеличивался на 53% по сравнению с исходными значениями Под действием аско-вертина не наблюдалось существенного изменения вязкости плазмы, уровня фибриногена и гематокрита

У больных в группах сравнения не было зафиксировано существенной динамики ни одного из исследуемых параметров.

Таким образом, под влиянием асковертина происходило ослабление выраженности синдрома повышенной вязкости крови, преимущественно за счет уменьшения агрегации и увеличения деформируемости эритроцитов, в связи с чем снижалась вязкость цельной крови.

Исследование гемореологической активности асковертина у больных с ишемической болезнью сердца

В исследование было включено 20 волонтеров обоего пола в возрасте от 48 до 66 лет (средний возраст составил 53,9 ± 3,5 года), имеющих верифицированный диагноз ишемической болезни сердца. Асковертин применят по схеме' первый месяц по 1 таблетке 4 раза в день, во второй и третий месяцы по 1 таблетке 3 раза в день после еды. Все больные получали базовую терапию (нитраты, бета-адреноблокаторы).

Через 3 недели после начала приема асковертина у больных с ишемической болезнью сердца наблюдалось достоверное увеличение (на 6% по сравнению со значениями до лечения) ИДЭ при скорости сдвига 890 с"1. Значимых изменений других параметров, характеризующих реологические свойства крови, не было выявлено К окончанию курсового приема (3 месяца) при исследовании реологического статуса была отмечена положительная динамика ряда показателей ИДЭ при скорости сдвига 890 с"' достоверно возрастал на 12%, а при скорости сдвига 180 с*1 - на 17% Наблюдалось статистически значимое снижение содержания фибриногена в плазме крови до 2,72±0,11 г/л.

Таким образом, асковертин при курсовом применении у больных с ишемической болезнью сердца улучшает деформируемость эритроцитов и снижает содержание фибриногена в плазме.

ВЫВОДЫ

1 На модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro экстракты фла-воноид- и эвдистероидсодержащих растений - манжетки обыкновенной, горечавки крупнолистной, смолевки двудомной, смолевки татарской, лихниса халь-цедонского и левзеи сафлоровидной эффективно ограничивают нарушения реологических свойств крови. Кверцетин, диквертин и экдистерон на данной модели проявляют дозозависимый гемореологический эффект, по выраженности сопоставимый с пентоксифиллином и танаканом, а смесь диквергина с аскорбиновой кислотой в соотношении 1:2 превосходит танакан по влиянию на деформируемость эритроцитов.

2. Воспроизведение ишемии мозга и инфаркта миокарда у крыс Вистар, а также развитие артериальной гипертензии у спонтанно гипертензивных крыс сопровождается формированием стойкого синдрома повышенной вязкости крови, который характеризуется наличием основных патологических гемореологи-ческих сдвигов, присущих заболеваниям сердечно-сосудистой системы.

3. Существенным компонентом в развитии синдрома повышенной вязкости крови является изменение морфологической формы эритроцитов вследствие нарушения липидного состава мембран (снижение общего количества липидов, содержания фосфолипидной фракции, избыточное накопление лгоофосфоли-пидов) и активации в них процессов липидной пероксидации.

4 Курсовое введение флавоноидсодержащих средств на моделях сердечнососудистой патологии, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости

крови приводит к ослаблению гемореологических нарушений. В основе меха- «

низма снижения вязкости крови лежит умеренное влияние этих средств на плазменные и выраженное на клеточные гемореологические факторы.

5 Экстракты флавоноидсодержащих растений в условиях моделей сердечно-сосудистой патологии препятствуют снижению содержания в мембранах * эритроцитов липидов, фосфолшшдов, избыточному накоплению лизофосфоли-

пидов и ограничивают активацию процессов липидной пероксидации, при этом возрастает количество дискоцитов и снижается доля эритроцитов с необратимо измененной формой.

6 Курсовое введение экдистероидсодержащих средств на моделях сердечно-сосудистой патологии, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости крови, приводит к ослаблению патологических гемореологических сдвигов, чго обусловлено существенным влиянием на плазменные и умеренным действием на клеточные гемореологические факторы

7 Экстракты экдистероидсодержащих растений в условиях моделей сердечно-сосудистой патологии увеличивают число дискоцитов, ограничивают снижение содержания в мембранах фосфолипидов и препятствуют повышению количества лизофосфолипидов. ,

8. На модели ишемии головного мозга смесь диквертина с аскорбиновой кислотой и экстракт левзеи сафлоровидной ограничивают ишемические изменения в нейронах (снижают количество поврежденных нервных клеток и уменьшают степень деструкции межнейрональных контактов) и способствуют нор- " мализации частотного спектра ЭЭГ. На модели инфаркта миокарда смесь диквертина с аскорбиновой кислотой, экстракты манжетки обыкновенной и левзеи сафлоровидной уменьшают зону некроза

9. У больных с дисциркуляторной энцефалопатией на фоне атеросклероза, артериальной гипертензии и сахарного диабета курсовой прием асковертина приводит к существенному улучшению гемореологических показателей: снижается вязкость цельной крови за счет уменьшения агрегации и увеличения деформируемости эритроцитов

10 Курсовой прием асковертина больными с ишемической болезнью сердца ослабляет выраженность синдрома повышенной вязкости крови благодаря

улучшению деформируемости эритроцитов и уменьшению содержания фибриногена в плазме.

Список работ, опубликованных по теме диссертации: ] Колтунов А.А , Алиев О.И Изменение реологических свойств крови на модели ишемии мозга // Тр молодых учёных НИИ фармакологии ТНЦ РАМН -1995. С. 35-36.

2 Алиев О И , Колтунов A.A., Баскакова И Б Способ воспроизведения синдрома повышенной вязкости крови // Там же - С 46-47.

3 Плотников М Б , Алиев О И , Попель Ф.В. Модификация микроколориметра МКМФ-1 для регистрации агрегации эритроцитов // Клинич. лабор диагностика. -1995.-№ 3. - С. 57-58.

4. Колтунов A.A., Алиев О.И. Исследование действия кверцетина на реологические свойства крови // Проблемы экспериментальной и клинической медицины - Томск, 1996. - Вып. 1.-С. 43-45.

5. Плотников М.Б., Колтунов A.A., Алиев О.И., Калинкина Г.И., Березовская Т.П., Тихонова JI.A. Изучение действия флавоноидсодержащих соединений на реологические свойства крови in vitro // Науч. конф. посвящ. памяти проф Л.Н.Березнеговской: Тез. докл. - Томск, 1996. - С. 144.

6. Плотников М Б., Колтунов A.A., Алиев О.И. Моделирование синдрома повышенной вязкости крови у крыс: оценка взаимосвязи гемореологических показателей и их информативности при ишемии мозга // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1996. - № 9. - С. 274-275.

7. Плотников МБ., Колтунов A.A., Алиев О.И., Калинкина Г.И, Березовская Т П. Действие экстракта Alhimilla vulgaris на реологические свойства крови при экспериментальном инфаркте миокарда // Маггер. 1-й Всерос. конф. по ботанич ресурсоведению. - СПб., 1996. - С. 221.

8. Плотников М Б., Колтунов A.A., Алиев О.И. Метод отбора лекарственных веществ, влияющих на реологические свойства крови in vitro // Эксперим и клинич. фармакология. -1996. - № 6. - С. 57-58.

9. Плотников М.Б., Колтунов A.A., Алиев О.И, Калинкина Г.И., Березовская Т.П. Действие экстракта манжетки обыкновенной на реологические свойства крови при экспериментальной гипертензии // IV Росс, национ. конгресс "Человек и лекарство". - М., 1997. - С. 101.

Ю.Плотников М.Б., Колтунов A.A., Алиев О И., Калинкина Г.И., Березовская Т.П., Андреева В.Ю., Тихонова Л.А. Гемореологические свойства экстрактов из некоторых растений, содержащих флавоноиды // Раст. ресурсы. - 1998. - № 1. -С. 87-91.

П .Плотников М Б., Зибарева Л.Н., Колтунов A.A., Алиев О.И., Якимова Т.В , Маслов М.Ю. Гемореологические свойства экстрактов из некоторых растений, содержащих экдистероиды // Раст. ресурсы. - 1998. - № 1. - С. 91-97. 12.Маслов М.Ю., Алиев О.И., Васильев A.C., Тюкавкина H.A., Плотников М.Б Фармакологическая коррекция синдрома повышенной вязкости крови при ишемическом инсульте у крыс биофлавоноидом ди гидрокверцитином в ком-

плексе с аскорбиновой кислотой // Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственых растений. Матер, междунар совещ,, посвящ. памяти В.Г Минаевой. - Новосибирск, 1998. - С. 133.

13.Плотников М Б, Алиев О.И., Колтунов А.А., Маслов М Ю. Синдром повышенной вязкости крови у спонтанно гипертензивных крыс анализ адекватности модели//Бюл. эксперим. биол и мед. - 1998. -№ 8. - С. 150-151. 14 Maslov M.Y., Aliev O.I., Vasilyev A.S., Tyukavkina N.A., Plotnikov M.B. Pharmacological correction of "High blood viscosity" syndrome (HBVS) at myocardial infarction in rats with means of dihydroquercetin in complex with ascorbic acid // Traditional medcine' Theoretical and practical aspects. - Ulan-Ude, 1998 - P. 36.

15.Vasilyev A.S., Aliev О I., Maslov M.Y., Krasnov E.A, Dmitruk S.E., Gulimova L.D, Plotnikov M.B. Hemorheological activity of the extracts from Rhaponticum cartamoides (Wil/d.J Iljin in vitro // Traditional medcine: Theoretical and practical • aspects. - Ulan-Ude, 1998. - P. 37.

16.Плотников МБ., Алиев О.И., Маслов М.Ю., Васильев АС., Березовская ТП., Калинкина Г.И., Зибарева Л.Н, Экдисгероид- и флавоноидсодержание средства - эффективные корректоры синдрома повышенной вязкости крови // V Росс национ. конгресс "Человек и лекарство" - М., 1998. - С. 396.

17.Плотников М.Б., Алиев О И., Васильев А.С., Маслов МЮ., Краснов Е.А., Дмитрук С Е Влияние экстрактов левзеи на реологические показатели крови // Бюл эксперим. биол. и мед. - 1999. - Приложение № 1. - С 58-60.

18 Алиев О.И., Васильев А С. Коррекция гемореологических расстройств экстрактом левзеи сафлоровидной // Акт. пробл. фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Томск, 1999. - Т. 10. - С. 170-172.

19 Плотников МБ , Алиев О.И., Колтунов А А., Маслов М.Ю, Васильев А.С. Модели синдрома повышенной вязкости крови при сердечно-сосудистых заболеваниях // VI Росс, национ. конгресс "Человек и лекарство". - М., 1999 - С. 59

20 Алиев О.И., Маслов М.Ю., Васильев А.С., Тюкавкина Н А., Плотников М Б. Фармакологическая коррекция синдрома повышенной вязкости крови при инфаркте миокарда в эксперименте //Там же. - С. 10. » 21.Васильев А.С., Алиев О.И., Маслов МЮ., Дмитрук С.Е, Краснов Е.А., Плотников М.Б. Влияние сухого экстракта левзеи сафлоровидной на геморео-логический статус крыс линии SHR // Акт. пробл. эксперим. и клинич. фармакологии. Матер Всеросс науч конф с междунар участием - СПб, 1999 - С.

39.

22 Алиев О й., Андреева В Ю., Колтунов А.А., Плотников М Б, Калинкина Г И. Разработка гемореологического средства на основе полифенольного экстракта манжетки обыкновенной // Акт пробл создания новых лекарственных препаратов природного происхождения' Матер Ш Международного съезда -СПб, 1999. - С. 93-96.

23 Плотников М Б , Тюкавкина Н.А, Маслов М.Ю, Алиев О И , Васильев А С., Суслов Н И Гемореологические и церебропротекторные свойства препарата "Асковерпгин" // Там же. - С. 61-64.

24 Плотников М.Б., Алиев О.И., Васильев А С., Маслов М.Ю., Чернышева Г А , Краснов Е А, Зибарева JI.H. Гемореологическая активность экстрактов из надземной части LYCHNIS CHALCEDONICA L. и RHAPONTICUM CARTHAMOIDES (WTLLD.) ILJIN при экспериментальном инфаркте миокарда И Раст. ресурсы. - Вып. 1. -1999. - С. 103-107.

25 Плотников M Б, Алиев О.И., Маслов M Ю , Васильев A.C., Тюкавкина H А Коррекция синдрома повышенной вязкости крови в условиях ишемии мозга у крыс комплексом диквертина с аскорбиновой кислотой // Эксперим. и клинич. фармакология. - № 6 - 1999. - С. 45-47.

26 Пугаченко Н.В., Логвинов C.B., Алиев О И Влияние смеси диквертина и аскорбиновой кислоты на морфологические изменения нейронов коры большого мозга белых крыс в условиях ишемии. // Матер, науч. конф. "Актуальные вопросы экспериментальной морфологии", посвященной 70-летию проф. А.И. Рыжова. - Томск, 1999. - С. 108-109.

27Плотников МБ., Алиев О.И., Васильев АС., Маслов МЮ., Зибарева Л.Н., Дмитрук С Е, Калинкина Г И Гемореологические эффекты экстрактов Lychnis chalcedonica L. II Эксперим. и клинич. фармакология. - 2000. - Т. 63, №2. - С. 54-56.

28.Плотников М.Б, Маслов М.Ю., Алиев О.И, Васильев A.C., Тюкавкина H.A. Коррекция гемореологических расстройств при остром инфаркте миокарда у крыс комплексом диквертина и аскорбиновой кислоты // Вопр биол. мед. и фармацевт, химии. - 2000. - № 2. - С. 31-33.

29.Плотников М Б , Алиев О.И, Маслов M Ю., Васильев A.C., Андреева В.Ю., Тюкавкина Н.А, Калинкина Г.И., Краснов Е.А, Дмитрук С.Е. Поиск и изучение средств растительного происхождения, обладающих гемореологической активностью // Тромбоз, гемостаз и реология - 2000 - № 3 - С 32-35.

30.Алиев О И., Плотников M Б., Васильев A.C., Краснов Е.А., Зибарева Л H, Маслов М.Ю., Дмитрук С.Е Поиск и изучение гемореологических средств из растений, содержащих экдистероиды // Поиск, разработка и внедрение новых лекарств, средств и организац форм фармацевтич деятельности: Матер, меж-дунар. науч. конф. - Томск 2000. - С. 120-121.

31 Андреева В.Ю., Алиев О.И., Колтунов A.A., Плотников М.Б., Калинкина Г И Изучение гемореологического действия экстракта манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.) при ишемии мозга у крыс // Там же. - С. 121-122. 32.Васильев A.C., Алиев О.И, Маслов М.Ю, Зибарева Л.Н., Краснов Е.А, Дмитрук С.Е., Плотников М.Б. Влияние сухих экстрактов лихниса хальцедон-ского и левзеи сафлоровидной на вязкость крови, агрегацию, деформируемость и электрофоретическую подвижность эритроцитов у крыс линии S HR // Там же -С. 133-134.

33 Плотников M Б , Алиев О И, Маслов М.Ю., Васильев A.C., Тюкавкина Н.А, Карпова Г.В , Фомина Т.И , Ветошкина Т В., Суслов Н.И, Дубская Т.Ю, Полу-экгова М.Е., Тимина Е.А. Асковертин - новое гемореологическое средство // Там же. - С. 178-179.

34 Плотников М Б., Алиев О.И., Маслов М.Ю., Васильев А С, Андреева В.Ю., Тюкавкина Н.А., Калинкина Г.И., Краснов Е.А, Дмитрук С.Е. Поиск и изучение средств растительного происхождения, обладающих гемореологической активностью // Реологические исследования в медицине - М, 2000. - Вып. 2. -С. 74-82.

35.Плотников М.Б., Логвинов С В., Пугаченко Н.В , Маслов М Ю , Алиев О.И., Тюкавкина Н.А., Суслов НИ, Потапов А В. Церебропротекгорные эффекты смеси диквертина и аскорбиновой кислоты // Бюл. эксперим. биол. и мед. -

2000.-Х9 11.-С. 543-547

36.Плотников М.Б., Зибарева Л.Н., Васильев А С , Алиев О И, Маслов М.Ю., Дмитрук С.Е Гемореологическая активность экдистерона и различных экстрактов Lychnis Chalcedonica L. in vitro // Раст ресурсы. - 2000. - T 36, № 3. - С. 91 -94.

37.Алиев О.И., Андреева В.Ю., Плотников МБ., Новицкий В.В., Рязанцева Н В., Маслов М.Ю., Васильев А С., Калинкина Г.И Влияние экстракта манжетки обыкновенной на морфофункциональные свойства эритроцитов, липидный спектр и ПОЛ в эритроцитарных мембранах при ишемии головного мозга // Бюл. эксперим. биол и мед. - 2001. - Приложение № 1. - С 103-106.

38.Плотников Д М., Алиев О И., Маслов М Ю. Гемореологический и антиокси-дантный эффекты комплекса диквертина и аскорбиновой кислоты у больных с дисциркуляторной энцефалопатией // Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины: Матер. П Росс конф молодых ученых России с междунар. участием. - М„ 2001. - С. 373.

39 Андреева В.Ю, Алиев О И. Влияние экстракта манжетки обыкновенной на липидный спектр мембран эритроцитов у крыс с инфарктом миокарда // Там же. - С. 269-270.

40 Алиев О.И, Плотников М Б., Маслов М.Ю, Васильев А.С., Андреева В Ю., Зибарева Л Н., Краснов Е А, Калинкина Г И Поиск и изучение гемореологиче-ских средств из растений, содержащих экдистероиды // Матер междунар. конф. по гемореологии. - Ярославль, 2001. - С. 68-69.

41.Андреева В.Ю., Плотников МБ, Алиев О И, , Калинкина Г.И Влияние экстракта манжетки обыкновенной на структурно-метаболическое состояние мембран эритроцитов при артериальной гипертензии // Там же. - С. 66-67.

42.Плотников М Б., Тюкавкина Н А, Алиев О.И, Маслов М Ю, Васильев А С., Плотников Д.М., Алиферова В М., Брюханов А.Г Доклинические исследования и клинические испытания нового гемореологического препарата асковертина // Там же. - С 78-79.

43 Алиев ОИ, Плотников ДМ, Маслов М.Ю, Алиферова ВМ, Тюкавкина Н А, Плотников М.Б. Фармакологические эффекты асковертина у больных с диабетической нейропатией // Акт. пробл. создания новых лекарственных препаратов природного происхождения- Матер. V Международного съезда - СПб,

2001.-С. 93-96.

44.Алиев О.И., Андреева В.Ю., Плотников М.Б. Влияние экстракта левзеи саф-лоровидной на поверхностную архитектонику эритроцитов при ишемии голов-

ного мозга // Акт. пробл эксперим. и клинич. фармакологии - Томск, 2001 - С. 5-7.

45 Маслов М.Ю, Алиев О.И., Васильев А С Гемореологические и церебропро-текторные свойства смеси диквертина и аскорбиновой кислоты // Там же - С. 96-98

46.Плотников М Б., Алиев О И., Васильев А С, Маслов М Ю , Дмитрук С Е, Краснов Е А Влияние экстракта левзеи сафлоровидной на реологические свойства крови у крыс с артериальной гипертензией // Эксперим и клинич фармакология. - 2001. - Т. 64, № 6. - С. 45-47.

47 Логвинов С В., Пугаченко Н В., Потапов А В., Краснов Е.А., Плотников МБ , Маслов МЮ., Алиев О И., Тюкав кина Н.А Изменения синаптоархитек-тоники коры большого мозга при ишемии и их коррекция асковертином и экстрактом левзеи II Бюл эксперим. биол. и мед. - 2001. - Т. 132, № 10. - С. 473476

48 Андреева В Ю , Плотников М.Б., Калинкина Г И , Алиев О.И Исследование флавоноидного состава экстракта манжетки обыкновенной и его влияния на структурно-метаболический статус эритроцитов на модели инфаркта миокарда // Бюл СО РАМН. - 2001. - № 3 (101). - С. 32-36.

49 Плотников Д.М., Алиев О.И., Маслов М Ю, Тюкавкина Н А, Плотников М Б Влияние комплекса антиоксидантов на показатели реологии крови и ли-пидной пероксидации у больных гипертонической болезнью // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2001. - № 3. - С. 44-48.

50 Плотников Д.М, Алиферова В М., Алиев О.И, Брюханов А Г Эффективность комплекса диквертина и аскорбиновой кислоты в терапии больных с дис-циркуляторной энцефалопатией // Консилиум. - 2002 - № 2. - С. 67-69.

51 Алиев О И, Андреева В Ю, Плотников М Б., Калинкина Г.И Влияние аско-вертина на поверхностную архитектонику эритроцитов при артериальной ги-пертензии у крыс // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. - Томск, 2002. - С. 3-5.

52 Плотников Д М., Алиев О.И. Влияние асковертина на субъективную оценку самочувствия больных с дисциркуляторной энцефалопатией I и II стадии //Там же - С. 135-138.

53 Tjukavkina N.A., Plotnikov D.M., Aliev ОI, Maslov M Ju, Alifirova V.M., Va-siliev A.S., Plotnikov M.B. Hemorheological and antioxidant effects of ascovertin (diquertin and ascorbic acid complex) in arterial hypertension // XXI Internetional Conference on Polyphenols "Polyphenols Communications 2002". - Marrakech-Morocco, 2002. - Vol. 1. - P. 295-296.

54 Плотников M Б, Удут B.B , Алифирова В М., Плотников Д М, Алиев О И, Бородулина Е.В., Грибов С А , Авдеева М.М., Поленичкина Н.В. Исследование эффективности и безопасности асковертина у больных сахарным диабетом // Сахарный диабет и сердечно-сосудистая патология' Тез докл региональной научно-практич. конф. - Томск, 2002. - С. 58-59.

55 Plotnikov M.B., Aliev O.I, Maslov M.Ju., Vasiliev A S. and Tjukavkina N.A. Correction of Haemorheology Disturbances in Myocardial Infarction by Diquertin and Ascorbic Acid // Phytotherapy Reseach. - 2003. - Vol. 17. - P. 86-88

56 Plotnikov, M B. Aliev O.I., Maslov M.Ju, Vasiliev A S. and Tjukavkina N.A. Correction of the High Blood Viscosity Syndrome by a Mixture of Diquertin and Ascorbic Acid in vitro and in vivo И Phytotherapy Reseach. - 2003. - Vol 17. - P 276-278.

57Плотников МБ., Тюкавкина H.A., Павлюкова EH., Алифирова В.М., Удут В В , Плотников Д М, Алиев О.И, Маслов М.Ю , Васильев А С., Андреева В Ю, Богач Е В. Итоги разработки новых гемореологических препаратов: от эксперимента к клинике // Фундаментальные проблемы фармакологии" Тез. 2-го съезда Российского научного общества фармакологов - М, 2003. - С. 309. 58 Плотников М Б, Павлюкова Е.Н., Удут В В, Попова Г А., Богач Е В , Алиев О И., Маслов М.Ю Исследование эффективности нового гемореологического препарата асковертина у больных с ишемической болезнью сердца // X Росс, национ конгресс "Человек и лекарство" Тез. докл - М, 2003. - С. 312.

Список сокращений АЭ - агрегация эритроцитов ВК - вязкость крови ВП - вязкость плазмы ДК - диеновые коньюгаты ДЭ - дисцир куляторная энцефалопатия ИДЭ - индекс деформируемости эритроцитов ЛФЛ - лизофосфолипиды МДА - малоновый диальдегид ПОЛ - перекисное окисление липидов СМ - сфингомиелин

СПВК - синдром повышенной вязкости крови

Ti/2 - полупериод агрегации эритроцитов

ФВК- фосфорновольфрамовая кислота

ФС - фосфатидилсерин

ФХ - фосфатидилхолин

ФЭА - фосфатидилэтаноламин

ЭКГ - электрокардиограмма

ЭЛС - экстракт левзеи сафлоровидной

ЭЛХ - экстракт лихниса хальцедонского

ЭМО - экстракт манжетки обыкновенной

ЭЭГ - электроэнцефалограмма

Отпечатано в типографии «Облгоскомстат» Лицензия № 7523 634050, г. Томск, уп. Гагарина, 56 Заказ № 13 Тираж 100 экз.

Ш- - , 4,

РНБ Русский фонд

2004-4 17916

Актуальность проблемы. К настоящему времени накоплен значительный объём клинических данных, на основании которых можно утверждать, что изменения реологических характеристик крови, объединяемые под общим понятием синдром повышенной вязкости крови (СПВК) [294, 353], являются важным звеном в цепи нарушений, развивающихся при сердечно-сосудистой патологии [51, 172, 208, 316, 353]. Более пристальное изучение гемореологических расстройств привело к изменению взглядов на механизмы внутри-сосудистых нарушений кровоснабжения органов. Доказано активное участие реологических механизмов в нарушении кровообращения, реологическая окклюзия рассматривается в качестве инициирующего фактора "запуска" плазменных коагуляционных механизмов, приводящих к фибринообразованию и закупорке сосудов патологическими тромбо- и эритроцитарными агрегатами [135, 192, 191]. В микроциркуляторном русле, когда диаметр сосудов сопоставим или меньше диаметра эритроцитов, изменение формы и размера красных клеток крови, ухудшение их деформируемости приводит к ослаблению микроциркуляции, что в конечном итоге ведёт к уменьшению локального кровотока, гипоксии тканей и как следствие этого снижение их функциональной активности [191, 273] .

В связи с этим не вызывает сомнения значимость изучения возможности фармакологического воздействия на синдром повышенной вязкости крови при патологических процессах в организме и поиск эффективных патогенетически обоснованных средств его коррекции. Вместе с тем, решение данной задачи затруднено вследствие многообразия и неоднозначной взаимосвязи факторов, определяющих вязкостные свойства крови на различных уровнях (макрореологический, клеточный, микрореологический) [279] .

Корригирующая терапия реологических свойств крови должна быть многокомпонентной и направленной на различные звенья патологического процесса, приводящего к повышению вязкости. Данные литературы о фармакологической коррекции СПВК немногочисленны, спектр препаратов, влияющих на реологические свойства крови ограничен. Препараты, которым свойственна гемореологиче-ская активность (пентоксифиллин, ацетилсалициловая кислота, тиклопедин, танакан) оказывают влияние лишь на отдельные компоненты синдрома повышенной вязкости крови [135, 278, 332] либо недостаточно снижают тяжесть проявления СПВК в целом [50, 191, 252]. Эти препараты относятся к разным фармакологическим группам; а в различных классификациях отсутствует само понятие "гемореологическое средство". Вместе с тем на современном этапе надежды на принципиально новые методы фармакотерапии внут-рисосудистых нарушений крови связывают с перспективами применения лекарственных средств, способных предотвращать или существенно уменьшать патологические сдвиги гемореологических параметров .

С учетом сведений об антирадикальной и антиокислительной активности флавоноидов и их способности влиять на агрегацию эритроцитов [119, 124] представляется перспективным исследовать гемореологические свойства биофлавоноидов и экстрактов ряда растений Сибири, содержащих различные классы флавоноидных соединений.

Другой группой в качестве возможных источников перспективных гемореологических средств, по нашему мнению, могут являться экстракты экдистероидсодержащих растений. Фитоэкдистероиды обладают широким спектром фармакологической активности, включающим анаболический, гиполипидемический, противовоспалительный, мембраностабилизирующий и другие эффекты [203] .

Цель исследования.

Проведение поиска перспективных гемореологических средств среди экстрактов из фла^юноид- и экдистероидсодержащих растений и разработка на их основе гемореологических препаратов.

Основные задачи исследования.

1.Разработать адекватные клиническим ситуациям модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro и in vivo для отбора и углубленного изучения гемореологических средств.

2.Провести поиск перспективных гемореологических средств на основе экстрактов из флавоноид- и экдистероидсодержащих растений.

3.Осуществить углубленное изучение гемореологической активности экстрактов из флавоноид- и экдистероидсодержащих растений при курсовом введении на различных моделях сердечнососудистой патологии (ишемия мозга, инфаркт миокарда, артериальная гипертензия), сопровождающихся СПВК.

4.Оценить влияние асковертина, экстрактов манжетки обыкновенной, левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на форму эритроцитов при ишемии головного мозга, инфаркте миокарда и артериальной гипертензии.

5.Исследовать липидный состав мембран эритроцитов на моделях синдрома повышенной вязкости крови и в условиях его фармакологической коррекции асковертином, экстрактами манжетки обыкновенной, левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского.

6.Изучить церебро- и кардиопротекторное действие исследуемых средств.

7.Оценить эффективность клинического применения асковертина при дисциркуляторной энцефалопатии и ишемической болезни сердца.

Научная новизна.

Разработаны модели СПВК in vitro и in vivo, воспроизводящие основные феномены, присущие гемореологическим расстройствам, развивающимся при сердечно-сосудистой патологии и позволяющие проводить быстрый и эффективный поиск и отбор средств, обладающих гемореологической активностью.

Исследованиями, проведенными на модели СПВК in vitro установлено, что кверцетин и экдистерон, обладают гемореологической активностью и их влияние на вязкость крови, агрегацию и деформируемость эритроцитов носит дозозависимый характер; дик-вертин проявляет гемореологический эффект сопоставимый с танаканом, а смесь диквертина с аскорбиновой кислотой в соотношении 1:2 превосходит танакан по влиянию на деформируемость эритроцитов. Доказано, что флавоноид- и экдистероидсодержащие растения являются перспективным источником для поиска и разработки средств с гемореологической активностью.

Показано, что флавоноидсодержашие (асковертин, экстракты манжетки обыкновенной и горечавки крупнолистной) и экдистероидсодержащие (экстракты смолевки двудомной, смолевки татарской, лихниса хальцедонского и левзеи сафлоровидной) средства при курсовом введении эффективно ограничивают развитие синдрома повышенной вязкости крови на моделях сердечно-сосудистой патологии за счет влияния как на клеточные, так и плазменные факторы, определяющие вязкостные свойства крови.

Проведенные исследования позволили установить, что асковертин, экстракты манжетки обыкновенной, левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского на моделях сердечно-сосудистой патологии ограничивают процессы деградации эритроцитов: повышается количество дискоцитов и снижается число эритроцитов с необратимо измененной формой. Доказано, что существенным компонентом механизма действия исследуемых средств является влияние на ли-пидный состав эритроцитарных мембран: препараты ограничивают снижение как общего количества липидов, так и фосфолипидной фракции и препятствуют избыточному накоплению лизофосфолипи-дов.

Получены данные о том, что препараты с гемореологической активностью на моделях нарушения кровообращения проявляют це-ребро- и кардиопротекторные свойства.

В клинико-лабораторных исследованиях асковертина установлено положительное действие на гемореологические показатели у больных с дисциркуляторной энцефалопатией и ишемической болезнью сердца.

Научно-практическая ценность. Разработан новый оригинальный метод для оценки in vitro гемореологической активности препаратов (патент РФ №2110850). Получены данные, свидетельствующие о гемореологической активности экдистерона (патент РФ №2160592), диквертина (патент РФ №2141320), смеси диквертина и аскорбиновой кислоты (патент РФ №2150282), экстракта левзеи сафлоровидной жидкого (патент РФ N'2138285) и сухого (патент РФ №2191027), лихниса хальцедонского (патент РФ №2138284).

Результаты изучения гемореологической активности асковерти-на положены в основу материалов, по которым департамент государственного контроля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств и медицинской техники МЗ РФ принял решение о проведении клинических исследований препарата (протокол № 198 от 19 февраля 2001). Завершившиеся клинические исследования асковертина показали его высокую эффективность и обосновывают целесообразность включения препарата в комплексную терапию сердечно-сосудистых заболеваний.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены на 2-м съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995), научной конференции, посвященной памяти JI.H. Березне-говской (Томск, 1996), 1-й Всероссийской конференции по ботаническому ресурсоведению (Санкт-Петербург, 1996), научной итоговой конференции НИИФ ТНЦ РАМН (Томск, 1996), международном совещании "Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений" (Новосибирск, 1998), международном семинаре "Традиционная медицина - теоретические и практические аспекты" (Улан-Удэ, 1998), международной конференции "Свободнорадикаль-ные процессы: экологические, фармакологические и клинические аспекты" (Санкт-Петербург, 1999), III международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения" (Санкт-Петербург-Пушкин, 1999) , III Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1998), VI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1999), конференции "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии" (Санкт-Петербург,

1999), конференции "Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов" (Томск, 1999), I молодежной научной конференции Новосибирского центра СО РАМН (Новосибирск, 19 99), конференции молодых ученых "Современные проблемы фундаментальной и клинической медицины" (Томск, 1999), международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств" (Томск, 2000), II Российской конференции молодых ученых России с международным участием (Москва, 2001), международной конференции по гемореологии (Ярославль, 2001), международном съезде "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения" (Санкт-Петербург, 2 001), XXI международной конференции по полифенолам (Маракеш, Марокко, 2002).

Публикации. По теме диссертации опубликованы 58 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 5 глав с изложением результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка использованной литературы. Диссертация изложена на 341 странице машинописного текста, содержит 12 4 таблицы и 2 9 рисунков. Указатель литературы включает 233 отечественных и 204 иностранных источника.

288 ВЫВОДЫ

1. На модели синдрома повышенной вязкости крови in vitro экстракты флавоноид- и экдистероидсодержащих растений - манжетки обыкновенной, горечавки крупнолистной, смолевки двудомной, смолевки татарской, лихниса хальцедонского и левзеи сафлоровидной эффективно ограничивают нарушения реологических свойств крови. Кверцетин, диквертин и экдистерон на данной модели проявляют дозозависимый гемореологический эффект, по выраженности сопоставимый с пентоксифиллином и танаканом, а смесь диквертина с аскорбиновой кислотой в соотношении 1:2 превосходит танакан по влиянию на деформируемость эритроцитов.

2. Воспроизведение ишемии мозга и инфаркта миокарда у крыс Вистар, а также развитие артериальной гипертензии у спонтанно гипертензивных крыс сопровождается формированием стойкого синдрома повышенной вязкости крови, который характеризуется наличием основных патологических гемореологических сдвигов, присущих заболеваниям сердечнососудистой системы.

3. Существенным компонентом в развитии синдрома повышенной вязкости крови является изменение морфологической формы эритроцитов вследствие нарушения липидного состава мембран (снижение общего количества липидов, содержания фосфоли-пидной фракции, избыточное накопление лизофосфолипидов) и активации в них процессов липидной пероксидации.

4. Курсовое введение флавоноидсодержаших средств на моделях сердечно-сосудистой патологии, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости крови приводит к ослаблению гемореологических нарушений. В основе механизма снижения вязкости крови лежит умеренное влияние этих средств на плазменные и выраженное на клеточные гемореологические факторы.

5. Экстракты флавоноидсодержагцих растений в условиях моделей сердечно-сосудистой патологии препятствуют снижению содержания в мембранах эритроцитов липидов, фосфолипидов, избыточному накоплению лизофосфолипидов и ограничивают активацию процессов липидной пероксидации, при этом возрастает количество дискоцитов и снижается доля эритроцитов с необратимо измененной формой.

6. Курсовое введение экдистероидсодержащих средств на моделях сердечно-сосудистой патологии, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости крови, приводит к ослаблению патологических гемореологических сдвигов, что обусловлено существенным влиянием на плазменные и умеренным действием на клеточные гемореологические факторы.

7. Экстракты экдистероидсодержащих растений в условиях моделей сердечно-сосудистой патологии увеличивают число дискоцитов, ограничивают снижение содержания в мембранах фосфолипидов и препятствуют повышению количества лизофосфолипидов .

8. На модели ишемии головного мозга смесь диквертина с аскорбиновой кислотой и экстракт левзеи сафлоровидной ограничивают ишемические изменения в нейронах (снижают количество поврежденных нервных клеток и уменьшают степень деструкции межнейрональных контактов) и способствуют нормализации частотного спектра ЭЭГ. На модели инфаркта миокарда смесь диквертина с аскорбиновой кислотой, экстракты манжетки обыкновенной и левзеи сафлоровидной уменьшают зону некроза .

9. У больных с дисциркуляторной энцефалопатией на фоне атеросклероза, артериальной гипертензии и сахарного диабета курсовой прием асковертина приводит к существенному улучшению гемореологических показателей: снижается вязкость цельной крови за счет уменьшения агрегации и увеличения деформируемости эритроцитов. . Курсовой прием асковертина больными с ишемической болезнью сердца ослабляет выраженность синдрома повышенной вязкости крови благодаря улучшению деформируемости эритроцитов и уменьшению содержания фибриногена в плазме.

252 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сердечно-сосудистая патология занимают лидирующее место в структуре заболеваемости в развитых странах и приводит к высокой смертности и ивалидизации больных, поражая зачастую людей трудоспособного возраста. Терапия нарушений кровообращения проводится как правило комплексно, но существует, по крайней мере, один компонент воздействие на который, несмотря на всю его значимость, в достаточной степени не осуществляется - это нарушение реологических свойств крови. Повышение вязкости крови напрямую приводит к снижению кровотока в магистральных артериях, что на фоне недостаточной вазодилатации вследствие атеросклероза или патологического спазма сосудистой стенки значительно ухудшает кровоснабжение органов. В микроциркуляторном русле, когда диаметр сосудов сопоставим или меньше диаметра эритроцитов, изменение формы и размера красных клеток крови, ухудшение их деформируемости и повышенная агрегационная активность приводят к ослаблению микроциркуляции [10, 120, 122, 294, 419] . Кроме того, изменение параметров, определяющих вязкостные свойства крови создает такие условия потока в сосудах, которые вызывают активацию процессов свертывания [163, 294] , Очевидно, что воздействие на диндрОМ повышенной вязкости крови (СПВК) является важным направлением в терапии нарушений кровообращения. Однако, арсенал препаратов, способных оказывать положительное влияние на гемореологические параметры ограничен и они недостаточно эффективны в клинической практику [50, 141, 191, 252],

Осуществляя поиск эффективных гемореологических средств, необходимо использовать набор моделей, воспроизводящих различные клинические варианты синдрома повышенной вязкости крови и позволяющих на доклиническом этапе исследований выявлять условия максимальной эффективности препаратов.

На первом этапе нами был разработан простой и легко воспроизводимый метод скрининга препаратов - корректоров гемореологических расстройств. Для изменения гемореологических параметров можно использовать целый ряд воздействий химической и физической природы [123, 310, 352] . Нами было выбрано тепловое воздействие. Температура является неотъемлемым фактором внешней среды, постоянно действующим на клеточные мембраны и оказывающим огромное влияние на происходящие в них физико-химические процессы. Варьируя время экспозиции и температуру мы подобрали условия (инкубация проб крови в течение часа при температуре 42-45 °С) , приводящие к отчетливому и стабильному изменению реологических свойств крови - усилению агрегации эритроцитов, снижению их деформируемости и, как следствие, значительному повышению вязкости крови.

Выраженный сдвиг функциональных свойств эритроцитов, вероятнее всего, связан со структурной перестройкой надмолекулярной организации липидной фазы их мембран. Особенностью структурных переходов эритроцитарных мембран при повышении температуры выше физиологических пределов является то, что большинство из них имеет необратимый характер и приводит к потере ряда функциональных свойств клеток. Инициируются эти перестройки, как правило, в липидной фазе, однако также могут происходить переходы, инициируемые в белковых компонентах. Установлено постепенное ухудшение деформируемости эритроцитов при нагревании свыше 43 °С. Полная потеря деформируемости эритроцитов при 4 9-50 °С соответствует переходу диск-сфера, наблюдаемому под микроскопом. В целом этот процесс зависит как от температуры, так и времени инкубации [224].

На данной модели была проведена оценка эффективности пен-токсифиллина и танакана, в спектре фармакологического действия которых гемореологический компонент занимает значительное место. Оба препарата снижали вязкость крови и ограничивали сдвиг агрегации и деформируемости эритроцитов. Эти данные свидетельствуют в пользу приемлемости использования предложенной модели СПВК in vitro для отбора перспективных геморео-логических средств.

Также было проведено исследование кверцетина, экдистерона и большой группы извлечений из флавоноид- и экдистероидсодер-жащих растений. Среди флавоноидсодержащих растений наиболее активны экстракты манжетки обыкновенной и горечавки крупнолистной. Эти экстракты в оптимальных концентрациях превосходили кверцетин, один из основных флавоноидов, содержащихся, в частности в манжетке обыкновенной [2, 82] . Среди экдистероидсо-держащих гемореологическую активность проявили экстракты смолевки двудомной, смолевки татарской, левзеи сафлоровидной, лихниса хальцедонского.

Диквертин на модели СПВК in vitro оказывал отчетливое ге-мореологическое действие, по выраженности сопоставимое с та-наканом. Аскорбиновая кислота проявляла весьма низкую активность, несколько снижая агрегационную активность эритроцитов и незначительно увеличивая их деформируемость лишь при высокой скорости сдвига, однако снижение вязкости крови при этом не было достоверным. При изучении гемореологической активности совместного применения диквертина с аскорбиновой кислотой было отмечено усиление эффекта диквертина. Причем смесь диквертина с аскорбиновой кислотой в соотношении 1:2 (судя по количеству достоверных изменений) наиболее отчетливо ограничивала реологические сдвиги вызванные тепловым воздействием, а по влиянию на деформируемость эритроцитов превосходила та-накан.

Проведенные in vitro исследования показывают, что гемо-реологическое действие извлечений из растений, в основном, определяется флавоноидами и экдистероидами. Однако их активность может значительно модифицироваться другими группами, сопутствующих биологически активных веществ.

В пользу этого предположения говорят следующие факты:

1) Экстракты, приготовленные с использованием этанола в различной концентрации отличаются по своей эффективности. Как правило, экстракты, приготовленные с использованием 40% этанола более активны по сравнению с экстрактами, где в качестве экстрагента использовался этанол в более низкой или высокой концентрации.

2) Данные, полученные при исследовании гемореологической активности извлечений из экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского, приготовленных с использованием растворителей с различной полярностью, указывают на большую активность суммарного экстракта по сравнению с отдельными фракциями.

3) Экстракты приготовленные из растений с высоким содержанием флавоноидов и экдистероидов (например полынь Сивер-са или некоторые растения из рода смолевок) не оказывают действия на гемореологические параметры.

Кроме того, при разработке средств растительного происхождения для воздействия на СПВК следует учитывать дозозависи-мый характер гемореологического действия флавоноидов и экдистероидов .

Результаты исследований, проведенных в условиях модели СПВК in vitro и выявивших гемореологические свойства извлечений из флавоноид- и экдистероидсодержащих растений явились основанием дальнейшего углубленного их изучения в условиях in vivo. Для решения этих задач были исследованы закономерности формирования синдрома повышенной вязкости крови на моделях сердечно-сосудистых патологий при которых в клинических условиях наблюдается нарушение реологических свойств крови.

Среди основных параметров, которые могут варьировать в системе микроциркуляции главным несомненно является скорость кровотока. Она регулярно изменяется при самых разнообразных (как нормальных, так и патологических) условиях. Это нередко имеет место когда уровень венозного и артериального давлений, а также и состояние соответствующих резистивных артерий снабжающих кровью данную капиллярную сеть остаются неизменными. При таких условиях основным фактором, определяющим интенсивность микроциркуляции, является текучесть крови.

По данным литературы характер изменений вязкостных характеристик крови в общих чертах однотипен при расстройствах коронарного и церебрального кровообращения или артериальной ги-пертензии. наблюдается развитие выраженного СПВК, включающего комплекс нарушений гемореологических параметров: повышение вязкости плазмы и содержания в ней фибриногена [42, 299, 318, 362, 369, 420], снижение деформируемости [15, 273, 365, 416] и усиление агрегации эритроцитов [15, 273, 291], возрастание гематокрита [42, 278, 306], что в конечном итоге и определяет повышение вязкости крови. При этом многими авторами отмечается взаимосвязь между тяжестью расстройства церебрального или коронарного кровотока и степенью сдвига гемореологических параметров [41, 85, 94, 128, 403].

Данные наших исследований об изменении гемореологического статуса при моделировании ишемии мозга, инфаркта миокарда и артериальной гипертензии в целом были аналогичны наблюдаемым в клинической практике сдвигам реологических свойств крови. На всех моделях отмечалось наличие выраженного СПВК. Повышалась вязкость крови и плазмы, возрастало содержание фибриногена, усиливалась агрегация эритроцитов и снижалась их деформируемость . Повышение агрегируемости и ригидности эритроцитов может самыми различными путями повлиять на гемоциркуляцию. Изменение этих параметров функционального состояния эритроцитов приводит к замедлению кровотока, повышению периферического сопротивления и увеличению нагрузки на сердце [50]. В условиях гиперагрегации на уровне микроциркуляции происходит перераспределение форменных элементов в сосудистом русле, причем агрегаты, продолжая свое движение по основному стволу, способны вызывать тромбирование части капилляров и артериол эритроцитарными агрегатами, тогда как боковые ответвления могут превращаться в плазматические капилляры. Наиболее мелкие сосуды и капилляры блокируются ригидными эритроцитами, причем этот процесс наиболее выражен в тех участках микроциркулятор-ного русла, где кровоток нарушен вследствие стеноза или тромбоза [50] .

Наиболее ярко нарушения реологических свойств крови на моделях ишемии мозга и инфаркта миокарда проявлялись на 5-е сутки после лигирования сосудов. Определенный вклад в формирование СПВК на окклюзионных моделях нарушения кровообращения вносило хирургическое вмешательство, необходимое для получения доступа к артериям. В отдельной серии экспериментов было показано, что вскрытие грудной клетки и получение доступа к сердцу приводят к изменению реологических свойств крови, которые сохраняются вплоть до 5-х суток эксперимента, хотя и значительно уступают по выраженности наблюдаемым при инфаркте миокарда. В клинической практике также показано наличие сдвигов гемореологических параметров при хирургических операциях [6, 7, 8] .

Используемые модели СПВК различались по динамике гематокрита. При лигировании коронарной артерии отмечалась определенная фазность изменений гематокрита: повышение в первые дни после перевязки коронарной артерии с дальнейшим понижением его на 5-е и 1-е сутки эксперимента. Подобная динамика наблюдалась и в клинических условиях [181, 191]. Напротив, особенностью формирования СПВК при ишемии мозга явились высокие значения гематокритного числа на 5~е сутки после лигирования сонных артерий, что также отмечается в клинике [42, 91] . Учитывая, что при расстройствах церебрального кровообращения также выявлены значительные нарушения кислородтранспортной функции эритроцитов [50], повышение объемной концентрации эритроцитов, вероятно, является компенсаторной реакцией на ишемию мозга. При артериальной гипертензии значения гематок-ритного числа существенно не изменялись.

Идентичность данных корреляционного анализа, полученных на вышеперечисленных моделях, позволяет говорить о существовании общих закономерностей во взаимосвязи исследуеиых гемореологических параметров. Было получено подтверждение данных об определяющем значении функционального состояния эритроцитов, в частности их агрегационной способности, в изменении вязкостных характеристик крови. Нами выявлена прямая корреляционная зависимость между повышением вязкости крови и усилением агрегационной способности эритроцитов, происходящей на фоне гиперфибриногенемии. Повышение содержания фибриногена в плазме также приводит к увеличению ее вязкости, что в свою очередь оказывает существенное влияние на вязкостные характеристики крови.

Усиление агрегации эритроцитов, выявленное в наших, экспериментах, напрямую связано с увеличением содержания фибриногена. Согласно современным представлениям, образование макро-молекулярных мостиков является основным механизмом агрегато-образования [50, 124]. Макромолекулами, ответственными за агрегации эритроцитов в кровотоке, являются высокомолекулярные плазменные белки, в первую очередь, фибриноген, что и подтверждает его роль как одного из основных факторов патологической гиперагрегации эритроцитов.

Во взаимодействии эритроцитов между собой, наряду с содержанием фибриногена, важную роль играет величина отрицательного поверхностного заряда клеток, которая определяет степень электростатического отталкивания. У крыс линии SHR наблюдалось снижение ЭФП эритроцитов, что в значительной степени может влиять на процессы эритроцитарной агрегации. Рядом автором отмечено снижение электрического заряда эритроцитов и, как следствие, закономерное повышение агрегационной активности эритроцитов при ишемической болезни сердца, остром инфаркте миокарда и гипертонической болезни [173, 220].

Единого мнения о возможных механизмах изменений функционального состояния эритроцитов нет, однако можно выделить следующие значимые аспекты. Изменение активного транспорта катионов в результате существенного снижения функционирования трансмембранных транспортных систем, в частности Na+-K+- и Са2+-АТФаз [177, 379]. Повышение пассивной проницаемости ли-пидного бислоя эритроцитарных мембран для одно- и двухвалентных катионов [53] . Все это приводит к повышению содержания Са2+ в клетке и при достижении определенного критического уровня концентрации иона происходит переключение процесса обмена веществ на катаболизм. Как следствие снижение уровня АТФ нарушение процессов фосфорилирования белков цитоскелета и в конечном итоге изменение формы эритроцита. Повышение концентрации Са"ь также приводит к потере К+ за счет активации Са-зависимых калиевых каналов, а потеря К+ и воды при повышении концентрации Са2+ ведет к увеличению вязкости внутриэритроци-тарного содержимого [50] . Важное значение для функционирования эритроцитов имеет состояние липидного бислоя: асимметричное распределение фосфолипидов/ их способность модифицировать активность мембранных ферментов; содержание холестерина, влияющего на микровязкость мембран [53, 96, 2 67, 4 36] . Кроме этого, большое значение придается активации процессов пере-кисного окисления липидов [74, 100, 242, 338].

В контрольных группах на всех исследуемых моделях сердечно-сосудистой патологии наблюдалось достоверное снижение числа эритроцитов с нормальной дисковидной формой. Уменьшение количества дискоцитов, как показывают многочисленные исследования, является типичной реакцией в ответ на любое патологическое воздействие [5, 223]. Наблюдаемое снижение количества дискоцитов сопровождалось некоторым изменением их формы, а точнее углубления в центре клетки. Так, на моделях СПВК, связанных с окклюзией сосудов (ишемия головного мозга и инфаркт миокарда), среди дискоцитов повышалось количество клеток с такой же двояковогнутой поверхностью, однако центральная впадина у них была значительно шире и края более пологие, чем у нормоцитов. Появление таких изменений приводило к достоверному увеличению коэффициента уплощенности. Следствием подобной перестройки явилось увеличение поверхности клетки и снижение ее объема. Данное явление, вероятно можно считать приспособительной реакцией на- гипоксию, так как возрастание соотношения поверхность/объем создает более благоприятные условия для газообмена. Подобный эффект, увеличение доли "полууплощенных" эритроцитов, выявили А.А. Можина и соавторы при гипоксической гипоксии у крыс [14 9]. Обратная картина наблюдалась у животных с артериальной гипертензией. Размер углубления в центре дискоцитов у них был уменьшен, что отражалось в достоверном снижении по сравнению с крысами Вистар коэффициента уплощенности. Такое строение дискоцитов у линии SHR, вероятно, можно объяснить с позиции теории Ю.В. Постнова о патологических механизмах первичной гипертензии как генетически обусловленной мембранной патологии [17 5, 17 6] .При всех исследуемых сердечно-сосудистых расстройствах повышалось количество переходных форм, однако в зависимости от модели патологии возрастала доля различных видов эритроцитов, относящихся к этому типу. Так, при ишемии головного мозга увеличивалось количество клеток в виде плоского диска и дискоцитов с гребнем, при инфаркте миокарда - эллипсов, дискоцитов с выростом и эритроцитов в виде тутовой ягоды. Артериальная гипертензии сопровождалась увеличением количества всех видов переходных форм за исключением дискоцитов с множественными выростами и эритроцитов в виде тутовой ягоды.

Повышение доли эритроцитов с переходной формой не является тяжелым патологическим изменением. Эти клетки сохраняют общую дискоидную структуру и при определенных благоприятных условиях могут претерпевать обратный переход в дискоцит [22, 95] . Таким образом, переходные формы являются своеобразным резервом, воздействуя на который, в том числе и фармакологическими средствами, можно увеличивать количество дискоцитов.

Моделирование сердечно-сосудистой патологии в наших экспериментах сопровождалось ростом доли необратимо измененных эритроцитов как предгемолитической, так и дегенеративной форм. Однонаправленные изменения в сторону увеличения числа предгемолитических форм на всех исследуемых моделях имели некоторые различия в зависимости от конкретной патологии. При ишемии головного мозга достоверно, более чем в 2 раза возрастало количество эритроцитов в виде спущенного мяча, несколько снижалась доля сферических, а число куполообразных оставалось неизменным. В условиях модели инфаркта миокарда возрастало количество всех форм эритроцитов, относящихся к предгемолитической группе. Максимальными были доли эритроцитов со сферической и куполообразной формой. У крыс линии SHR также увеличивалось количество всех предгемолитических форм эритроцитов, однако наиболее широко из них были представлены клетки куполообразной формы. Дегенеративноизмененные эритроциты в периферической крови крыс в норме выявляются очень редко [157] . Это клетки самой разнообразной формы, несущие следы выраженного разрушения мембран и их количество возрастает при активации в организме деструктивных процессов. Полученные нами результаты свидетельствуют о значительном увеличении количества подобных эритроцитов при моделировании сердечнососудистой патологии. Необратимо измененные эритроциты теряют способность к деформации, чем в значительной мере затрудняют кровоток на микроциркуляторном уровне, когда диаметр сосудов сопоставим с их размерами. В клинических исследованиях, проведенных T.JI. Березиной и соавторами [22] показано, что во все сроки наблюдения при кровопотере у пациентов с благоприятным течением (выздоровление), доля необратимо измененных эритроцитов была достоверно ниже, чем у лиц с неблагоприятным течением (летальный исход в разные сроки). Тогда как доля дискоцитов и переходных форм, начиная с 2 4 часов после крово-потери в данных группах статистически значимо не различались.

Переход из дискоидной формы в недискоидную рассматривается многими авторами как естественный процесс старения эритроцитов [79, 112] . Нарушения кровообращения ишемического типа сопровождаются ускорением процессов дегенерации эритроцитов и приводят к возрастанию числа измененных форм. При артериальной гипертензии не исключено, что одним из факторов, повреждающих эритроциты, могут являться значительные гидродинамические перегрузки, вследствие повышенного системного давления [176] .

Выявленные нами изменения поверхностной архитектоники эритроцитов, вероятнее всего следствие нарушения структурно-функциональной организации клеточных мембран, которое является основополагающим фактором реализации патологических состояний врожденного и приобретенного генеза.

Основой клеточной мембраны является липидный бислой. Состав липидов, входящих в мембрану, крайне разнообразен, что связано с множеством функций, которые они выполняют. Установлено, что именно липидные компоненты мембран (главным образом фосфолипиды и холестерин) определяют их текучесть или микровязкость, зависящую от степени упорядоченности ацильных цепей и ненасыщенности жирных кислот [53, 224] . Некоторые липиды способствуют стабилизации сильно искривленных участков мембраны, образованию контактов между мембранами или связыванию определенных белков [281, 284, 288]. Некоторые являются важными биорегуляторами или необходимы для поддержания активности ферментов [53].

Выявленные в наших экспериментах изменения поверхностной архитектоники эритроцитов сопровождались выраженным сдвигом в липидном составе эритроцитарных мембран. Ишемия головного мозга и инфаркт миокарда приводили к достоверному снижению содержания в мембранах общего количества липидов и, в частности, фосфолипидной фракции. Подобные изменения в содержании фосфолипидов отмечены у больных с ишемическим инсультом и ишемической болезнью сердца при клинических исследованиях [1, 18 6] . Также в условиях этих моделей в равной мере с фосфолипидной фракцией снижалось количество мембранного холестерина, о чем свидетельствует отсутствие достоверных изменений в соотношении холестерин/фосфолипиды. Несколько иная картина наблюдалась у крыс с артериальной гипертензией. Общее количество липидов у животных линии SHR также было снижено по сравнению с интактными крысами Вистар, и соответствовало аналогичным показателям у животных с окклюзионной патологией. Однако достоверное возрастание соотношения холестерин/фосфолипиды свидетельствует об увеличении относительной доли холестерина в мембране. В нормальных условиях, встраиваясь в липидный бислой холестерин повышает его плотность, сглаживает температуру фазового перехода и тем самым увеличивает его прочность [53, 221, 22 4] . Вместе с тем избыточное накопление холестерина в мембране эритроцитов приводит к значительному повышению микровязкости мембран [267, 436]. Таким образом, наблюдаемое повышение содержания холестерина может являться одной из причин снижения деформируемости эритроцитов при данной модели СПВК. В подтверждение вышесказанного предположения можно привести результаты, которые получили С.Н. Орлов и соавторы при исследовании эритроцитов крыс линии SHR [160] . Они не получили различий в флюоресценции зондов, располагающихся на поверхности мембран, как с внешней так и с внутренней стороны, у животных линий SHR и Киото-Вистар. Однако температурные зависимости флюоресценции зондов, располагающихся в гидрофобных (внутренних) областях мембраны, измеренные для эритроцитов этих линий существенно различались. Холестерин встраиваясь в липидный бислой располагается именно во внутренних областях [53] .

Снижение содержания общего количества фосфолипидов отмечалось на всех трех исследованных нами моделях сердечнососудистых расстройств. Однако динамика изменения количества отдельных фосфолипидов была различной. Так, на всех моделях достоверно снижалось, по сравнению с интактными животными линии Вистар, содержание фосфатидилхолина и сфингомиелина. Количество фосфатидилсерина значимо снижалось при ишемии головного мозга, отмечалась тенденция (0,05<Р<0,1) к его уменьшению при артериальной гипертензии. В условиях экспериментального инфаркта миокарда ФС достоверно не изменялся. Стабильность липидного бислоя во многом обуславливается определенным балансом (соотношением) составляющих его фосфолипидов [183, 351, 388] . В различной степени выраженное изменение количества отдельных фосфолипидов приводит к сдвигу их соотношения: значительно уменьшается процентная доля ФХ; возрастают доли ФЭА и ФС; процентное содержание СМ, несмотря на снижение его абсолютного количества, остается неизменной. Подобные изменения могут привести к нарушению стабильности бислоя и изменению функционирования ряда мембрансвязанных ферментов, активность которых зависит от фосфолипидного окружения.

Четко показано, что распределение фосфолипидов в мембране эритроцитов в высшей степени асимметрично [53, 22 4] . Фосфати-дилхолин и сфингомиелин находятся преимущественно в наружном монослое, тогда как фосфатидилсерин и фосфатидилэтаноламин -в основном во внутреннем. Значимое снижение в мембранах количества ФХ и СМ и незначительное уменьшение содержания ФЭА и ФС приведет к уменьшению площади внешнего монослоя липидов относительно внутреннего, что может являться одной из причин, выявленного нами изменения морфологической формы эритроцитов.

Зависимость формы эритроцитов от липидного состава подтверждается результатами проведенного нами корреляционного анализа. У интактных крыс Вистар достоверные положительные корреляционные связи высокой степени существуют у ряда показателей липидного спектра только с количеством дегенеративно-измененных эритроцитов. Можно предположить, что избыточное содержания в мембране фракций липидов и фосфолипидов, в нормальных условиях, приводит к более быстрой деградации эритроцитов. Отсутствие взаимосвязи между содержанием дискоцитов и липидным спектром, вероятно определяется тем, что двояковогнутая форма эритроцита обуславливается не отдельным компонентом, а их суммарным соотношением.

Моделирование сердечно-сосудистой патологии приводило к изменению картины корреляционных связей. При ишемии головного мозга отмечена положительная корреляция липидного спектра с переходными формами эритроцитов. Сдвиг корреляционных связей с относительно небольшой (в процентном отношении) группы клеток с дегенеративной формой к группе с переходной формой свидетельствует о высокой вовлеченности липидного спектра в процессы формообразования при данной патологии. При инфаркте миокарда наблюдались корреляционные связи липидного спектра и формы эритроцитов подобные интактной группе животных, за исключением фракции ЛФЛ. У крыс линии SHR, картина корреляционных связей была несколько иная. Отмечена достоверная обратная связь высокой степени между содержанием общих липидов и дис-коидной формой эритроцитов. На фоне отсутствия корреляции с фосфолипидной фракцией, наиболее вероятной причиной такой взаимосвязи, представляется повышение доли холестерина в общей липидной фракции мембран эритроцитов крыс данной линии. С этих же позиций представляется закономерной положительная корреляция между содержанием липидов и количеством переходных форм эритроцитов.

Несмотря на уменьшение содержания в мембранах эритроцитов фосфолипидов, в условиях моделей ишемии головного мозга и инфаркта миокарда, наблюдался достоверный рост, по сравнению с интактными животными, фракции лизофосфолипидов. У крыс линии SHR количество ЛФЛ достоверно не превосходило аналогичный показатель у линии Вистар, однако на фоне редукции фосфолипидной фракции, их процентное содержание статистически значимо возрастало. Лизофосфолипиды являются обязательными компонентами многих мембранных образований и выполняют важную роль в функционировании мембран [62] . Однако значительное накопление фракции ЛФЛ в мембране ведет к снижению температуры фазового перехода, меняет упаковку липидов мембран [53, 62] , способствуя переходу липидного бислоя в монослой, активации проницаемости для ионов Na+, К+, с последующей везикуляцией мембраны эритроцита и образованием эхиноцитов [44, 270]. ЛФЛ также способны привести к усилению эритроцитарной агрегации [371]. Проведенный нами корреляционный анализ показал наличие достоверной положительной связи высокой степени между фракцией ЛФЛ и количеством эритроцитов с измененной формой: у интактных животных линии Вистар корреляция наблюдалась между содержанием ЛФЛ и дегенеративно-измененными эритроцитами; при ишемии головного мозга - с количеством эритроцитов переходной формы; при инфаркте миокарда - с переходной и предгемолитической формами. Избыточное накопление в эритроцитарных мембранах ЛФЛ может свидетельствовать об активации, в условиях используемых нами моделей, фосфолипаз, которые катализируют переход фосфолипидов в лизоформы.

Нарушение структуры бислоя за счет активации фосфолипаз и избыточного накопления лизофосфолипидов может привести к нарушению ионной проницаемости мембран и повышению внутриэрито , роцитарного содержания Са , которое, вероятно, является одной из причин трансформации эритроцитов и снижения содержания липидов в мембране. В экспериментах in vitro В.И. Сороковым и соавторами [199] показано, что в присутствии ионов кальция и кальцимицина отмечается структурная перестройка морфологической формы эритроцитов по эхиноцитарному пути, с последующим отшнуровыванием мембранных везикул.

Существенным механизмом повреждения плазматических мембран является активация процессов свободнорадикального окисления липидов [23, 100, 207]. ПОЛ вызывает не только нарушение барьерной функции мембран, но и существенно влияет на их структурную организацию. Известно, что ПОЛ приводит к изменению их вязкости, полярности гидрофобной фазы, повышению температуры фазового перехода, а также влияет на конформацию белков [44, 224]. Ишемия головного мозга приводила к увеличению содержания в мембранах эритроцитов диеновых конъюгатов и малонового диальдегида. При инфаркте миокарда возрастало содержание малонового диальдегида. Повышение МДА может являться следствием истощения антиоксидантных систем мембраны эритроцитов в условиях сердечно-сосудистой патологии.

Полученные результаты сдвигов реологических свойств крови на моделях сердечно-сосудистых заболеваний и данные их анализа свидетельствуют о том, что используемые модели гемореологических расстройств адекватно отображают соответствующие процессы, наблюдаемые при их клинических эквивалентах, и могут быть использованы для углубленного изучения средств, влияющих на синдром повышенной вязкости крови.

Проведенные на моделях СПВК in vivo исследования показали, что флавоноидсодержащие средства при курсовом введении оказывают существенное влияние на реологические свойства крови. В механизме их действия основное место занимает влияние на клеточные гемореологические факторы. Этот эффект прослеживается для всего исследованного ряда (кверцетин, экстракт горечавки крупнолистной, экстракт манжетки обыкновенной, асковертин) . Как правило, улучшение деформируемости эритроцитов, сопровождалось снижением вязкости крови в области более высоких скоростей сдвига вне зависимости от модели патологического состояния.

Гемореологические эффекты ЭМО на модели СПВК, развивающегося при инфаркте миокарда, в целом, были подобны таковым при ишемии мозга. Однако их выраженность была несколько меньшей. Особо следует отметить способность ЭМО нормализовать агрегацию эритроцитов на фоне гиперфибриногенемии. Учитывая повышение деформируемости эритроцитов при использовании экстракта, можно предположить, что это обусловлено его воздействием на липидный бислой. В процессе образования межклеточных мостиков макромолекулы связываются с участками бислоя, находящимися в кристаллическом (гелеобразном) состоянии. Снижение микровязкости липидного бислоя приводит как к увеличению деформируемости эритроцитов, так и к облегчению латеральной диффузии в мембране. Большая подвижность центров адгезии фибриногена будет способствовать затруднению процесса мостикообразования. На модели артериальной гипертензии, в отличии от окллюзионных моделей, не наблюдалось влияния ЭМО на агрегацию эритроцитов.

Типичной реакцией воздействия асковертина также было снижение вязкости крови и улучшение деформируемости эритроцитов.

Эффекты гемореологической терапии препаратом при ишемии мозга и инфаркте миокарда носили схожий характер, что можно объяснить подобием патофизиологических процессов, наблюдающихся при формировании этих состояний. Основной мишенью для воздействия смеси диквертина и аскорбиновой кислоты явились эритроциты, так как, главным образом, происходило улучшение их деформируемости, что и обусловило снижение вязкости крови.

Особенностью действия асковертина на модели артериальной гипертензии явился эффект снижения вязкости крови при низких скоростях сдвига, отсутствовавший при ишемии мозга и инфаркте миокарда. Вязкость крови при низких скоростях сдвига во многом является функцией агрегационной активности эритроцитов [247, 272], снижение которой также наблюдалось на данной мо-деле. Уменьшение эритроцитарной агрегации во многом могло быть обусловлено снижением концентрации фибриногена в плазме. Еще одним фактором, который приводил к ослаблению агрегации, явилось увеличение ЭФП эритроцитов, что свидетельствует о возрастании величины электроотрицательности эритроцитарных мембран. Труднообъяснимым является факт достоверного увеличение гематокрита, которое, теоретически должно было повлечь за собой рост вязкости крови во всем диапазоне скоростей сдвига [50, 124] . Но, видимо, оптимизирующее действие смеси диквертина и аскорбиновой кислоты на показатели клеточной реологии нивелировало негативное проявление возрастания гематокрита.

Наряду с общность гемореологического действия ЭМО и асковертина в условиях экспериментальных моделей, также наблюдалось выраженное различие в спектре их действия. ЭМО ослаблял агрегацию эритроцитов при ишемии мозга и инфаркте миокарда и не проявлял антиагрегантного эффекта при артериальной гипертензии. Асковертин проявлял прямо противоположный эффект. Подобное явление вероятно определяется различиями действующих начал этих двух средств.

При изучении поверхностной архитектоники эритроцитов на фоне введения ЭМО и асковертина наблюдалась положительная динамика на всех моделях. Оба средства тормозили переход клеток дискоидной формы (дискоциты и переходные формы) в клетки не-дискоидной формы (предгемолитические и дегенеративные), которые полностью потеряли способность к деформации. При использовании ЭМО в периферической крови крыс, на всех исследуемых моделях, достоверно повышалось содержание дискоцитов. По количеству достоверных положительных сдвигов исследуемых показателей максимальным эффект экстракта был на модели инфаркта миокарда, в меньшей степени его действие проявилось при артериальной гипертензии и ишемии мозга. Асковертин наибольшую активность проявил на модели артериальной гипертензии, что вполне согласуется с данными, полученными при исследовании его гемореологического действия. Именно у спонтанно гипертен-зивных крыс не только в более широком диапазоне скоростей сдвига улучшал деформируемость эритроцитов, но также проявлял и антиагрегантную активность в отношении эритроцитов. Наблюдаемые изменения морфологической формы эритроцитов позволяют говорить о том, что ЭМО и асковертин в условиях сердечнососудистой патологии замедляет процессы деградации эритроцитов и это безусловно будет создавать более благоприятные условия для микроциркуляции.

Существенным механизмом в нормализации поверхностной архитектоники эритроцитов при сердечно-сосудистой патологии под воздействием ЭМО и асковертина является их способность ограничивать нарушения липидного спектра мембран.

Экстракт манжетки обыкновенной при курсовом введении препятствовал снижению содержания как общего количества липидов, так и фракции фосфолипидов в эритроцитарных мембранах при ишемии головного мозга и инфаркте миокарда. У крыс линии SHR под действием экстракта повышалось содержание в мембранах липидов в основном за счет увеличения количества фосфолипидов. Это приводило к снижению соотношения холестерин/фосфолипиды до значений у крыс Вистар.

Асковертин не оказывал значимого влияния на общее содержание липидов и фосфолипидов в эритроцитарных мембранах на модели инфаркта миокарда, повышал содержание липидов при ишемии мозга и достоверно увеличивал как общее количество липидов, так и количество фосфолипидов при артериальной гипертен-зии. При этом препарат устранял, имеющееся у крыс линии SHR избыточное накопление холестерина.

Нормализацию асковертином и ЭМО соотношения холестерин/фосфолипиды можно рассматривать как безусловно положительный фактор, который может способствовать снижению микровязкости мембран [267, 436] у животных с артериальной гипертензией и в конечном итоге, улучшать деформируемость эритроцитов .

На разных моделях в той или иной степени проявляется нормализующее действие ЭМО и асковертина на содержание отдельных фосфолипидов в мембранах эритроцитов. При ишемии головного мозга у крыс, получавших экстракт манжетки, достоверно повышается по сравнению с контрольной группой содержание в мембранах ФС и СМ, однако количество ФХ остается на низком уровне. На модели инфаркта миокарда курсовое применение экстракта манжетки значительно повышает содержание ФХ, а содержание СМ восстанавливается до показателей у интактных крыс. У животных линии SHR, под действием экстракта увеличивается содержание СМ, количество ФХ повышается, однако изменения не достигают необходимого уровня статистической значимости. Асковертин повышает содержание ФЭА, ФС и СМ при ишемии мозга не оказывает влияния на фосфолипидный спектр при инфаркте миокарда и восстанавливает количество ФС и СМ у гипертензивных крыс.

Значительный вклад в стабилизацию липидного бислоя и сохранение липидного спектра мембраны эритроцита вносит способность ЭМО и асковертина ограничивать повышение фракции лизофосфолипидов. На всех исследуемых моделях под действием ЭМО снижалось как абсолютное содержание ЛФЛ, так и их процентная доля в фосфолипидной фракции. Причем, количество ЛФЛ у пролеченных животных достоверно не отличалось от аналогичного показателя интактных крыс Вистар. Асковертин достоверно снижал уровень ЛФЛ только у крыс SHR.

Ограничение накопления ЛФЛ может являться одним из механизмов снижения гиперагрегации и улучшения деформируемости эритроцитов. Способность ЭМО и асковертина снижать содержание ЛФЛ в мембранах, вероятно, может реализовываться несколькими путям. Во-первых, активность фосфолипаз полностью подавляется ЭДТА [34], а флавоноиды, как и ЭДТА обладают способностью связывать ионы металлов [100] . Во-вторых, выяснено, что активность фосфолипазы А2 значительно ослабляется витамином Е и его аналогами [34], которые также как и флавоноиды являются производными хромана. В-третьих, одной из причин активации фосфолипаз является повреждение мембраны, в том числе и ли-пидной пероксидацией, которая эффективно может подавляться флавоноидами.

В основе способности ЭМО и асковертина ограничивать повреждение эритроцит арньгх мембран в значительной мере может лежать влияние на свободнорадикальное окисление. На моделях ишемии головного мозга и инфаркта миокарда мы выявили снижение, под действием ЭМО содержания в мембранах эритроцитов диеновых конъюгатов, что свидетельствует о способности экстракта тормозить ПОЛ уже на стадии инициации. Подобный эффект экстракта, вероятно, обусловлен антиокислительными свойствами входящих в его состав флавоноидов. Во многих исследованиях показана способность веществ этого ряда взаимодействовать с активными формами кислорода [238, 250, 256, 2 65, 289]. Достоверное уменьшение количества МДА позволяет говорить о значительной эффективности ЭМО и на стадии развития цепных реакций за счет выраженной антиокислительной активности [44, 107]. Сравнительные исследования антирадикальной активности флавоноидов показали, что важное значение имеет присутствие в кольце Б гидроксильных групп в ортоположении и ОН- группы в третьем [244, 269] . Вероятно, наличие в экстракте манжетки обыкновенной кверцетина, кемпферола и лютеолина определяет способность поглощать свободные радикалы. Существенным механизмом в ограничении ПОЛ является хелатирующая активность флавоноидов. Ионы металлов с переменной валентностью, главным образом железо, катализируют распад гидроперекисей с образованием свободных радикалов. Связывая ионы железа флавоноиды в значительной мере ингибируют ПОЛ. Важным моментом является способность флавоноидов накапливаться в мембране эритроцитов и выполнять роль естественных антиоксидантных систем. Нами выявлено, что у животных, получавших экстракт манжетки, при индукции ПОЛ сульфатом железа содержание МДА достоверно ниже, по сравнению как с контрольной, так и с интактной группами.

Все выше сказанное в полной мере относится и к асковерти-ну, компонентами которого являются диквертин и аскорбиновая кислота. Дигдрокверцетин, из которого на 90% состоит суммарный флавоноидный экстракт диквертин, является флаваноном, представителем флавоноидов (дигидрофлавонолы), отличающимся наличием ОН группы при С3 и, подобно катехинам, содержащих два асимметрических атома углерода в молекуле С2 и С3. Ди-гидрокверцетин, обладает антиокислительной активностью, превышающую таковую кверцетина и сопоставимой с активностью эталонного антиоксиданта - а-токоферола [105, 210]. Предполагается, что антиокоидантные свойства дигидрокверцетина преимущественно реализуются за счет прямого взаимодействия с липид-ными радикалами. Вместе с тем, нельзя исключить взаимодействия с супероксидными анионами. Дигидроквердетин, в свою очередь, ограничивая процессы липопероксидации, по-видимому способен предупреждать снижение электрического заряда мембраны, повышение ее жесткости и ингибирование Са2+, являющихся следствием активации процессов ПОЛ и приводящие к нарушениям клеточной реологии.

Таким образом, проведенные исследования позволяют говорить о том, что флавоноидсодержашие средства являются эффективными корректорами нарушений реологических свойств крови при сердечно-сосудистой патологии. Они обладают способностью ограничивать процессы деградации эритроцитов за счет воздействия на липидный бислой эритроцитарной мембраны и предотвращать активацию перекисного окисления липидов.

Другой группой перспективной для создания гемореологических средств являются извлечения из экдистероидсодержащих растений.

Проведенные исследования показали, что экдистерон, экстракты смолевки татарской и смолевки двудомной на модели ишемии головного мозга ограничивают развитие СПВК. Общим и ярко выраженным компонентом их гемореологического действия является снижение уровня фибриногена и нормализация вязкости плазмы. Экстракты смолевки татарской и смолевки двудомной, в отличии от экдистерона уменьшали эритроцитарную гиперагрегацию. По выраженности гемореологического действия на модели ишемии головного мозга наиболее эффективным являся экстракт смолевки двудомной. На моделях СПВК, развивающегося при инфаркте миокарда и артериальной гипертензии экстракт смолевки двудомной, как и на модели ишемии мозга, оказал существенное влияние на плазменные гемореологические факторы, что проявилось нормализацией вязкости плазмы и уменьшением гиперфибриногенемии. У крыс линии SHR экстракт, кроме того ослаблял гиперагрегацию эритроцитов.

При исследовании гемореологической активности экстрактов левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского четко прослеживается снижение вязкости плазмы и содержания в ней фибриногена вплоть до нормализации данных параметров на ряде моделей. Вместе с тем, следует отметить, что влияние ЭЛС на процессы эритроцитарной агрегации было неоднозначным. На моделях окк-люзионных нарушений кровообращения не наблюдалось значимого изменения агрегации эритроцитов несмотря на снижение уровня фибриногена в плазме. Однако, на модели артериальной гипертензии ЭЛС проявил отчетливое антиагрегантное действие. Вероятно, одной из причин такого различия в действии может являться длительность курсового применения ЭЛС. Так, на моделях ишемии мозга и инфаркта миокарда экстракт вводили в течение 5-и дней, а при артериальной гипертензии - 10-и дней. Кроме того, у крыс линии SHR при применении ЭЛС возрастала ЭФП эритроцитов, что свидетельствует об увеличении поверхностного заряда клеток и приводит к усилению взаимного электростатического отталкивания. ЭЛХ в отличии от ЭЛС снижал агрегацию эритроцитов на всех моделях, однако деформируемость эритроцитов улучшал в более узком диапазоне скоростей сдвига.

Влияние на поверхностную архитектонику эритроцитов у ЭЛС и ЭЛХ весьма неоднозначное. Наблюдаемое увеличение числа дискоцитов происходит за счет снижения доли клеток с переходной формой. Под действием ЭЛС положительная динамика (снижение общего количества необратимо измененных клеток) наблюдается при инфаркте миокарда и артериальной гипертензии, а на модели ишемии мозга отмечен рост этой группы эритроцитов. При применении ЭЛХ благоприятное действие отмечено только на модели инфаркта миокарда. Полученные данные по соотношению эритроцитов способных к деформации и необратимо измененных во многом объясняют более выраженное улучшение деформируемости при использовании ЭЛС.

Выявленное в исследованиях влияние ЭЛС и ЭЛХ на морфологическую форму эритроцитов в условиях моделей сердечнососудистой патологии связано с влиянием данных средств на ли-пидный состав мембран. Под действием экстракта левзеи сафлоровидной повышать содержание в мембранах количества липидов и фосфолипидов. Причем на модели артериальной гипертензии экстракт устранял сдвиг соотношения липидных фракций в сторону холестерина. Кроме того, на моделях ишемии головного мозга и инфаркта миокарда ЭЛС препятствует избыточному накоплению лизофосфолипидов. ЭЛХ в меньшей степени, по сравнению с ЭЛС, проявляет влияние на липидный состав мембран. Значимый эффект наблюдается только на модели артериальной гипертензии. Возрастает количество фосфолипидов, за счет чего нормализуется соотношение холестерин/фосфолипиды и достоверно повышается количество ФХ, что достаточно редко наблюдалось в ходе всех исследований. Кроме того, на моделях инфаркта миокарда и артериальной гипертензии снижается количество ЛФЛ, что безусловно является положительным моментом в реализации мембрано-протекторного действия экстракта.

Механизм действия ЭЛС и ЭЛХ во многом определяется их химическим составом [19, 81, 110]. Ранее установлено наличие у экстрактов экдистероидсодержащих растений родов Lychnis и Silene антиокислительных и антирадикальных свойств [81], очевидно связанное с присутствием в экстрактах полифенольных соединений - флавоноидов. Флавоноиды снижая интенсивность процессов ПОЛ могут ограничивать нарушения структуры эритроцитарных мембран. С учетом способности фитоэкдистероидов индуцировать активность АТФ-аз эритроцитов [167], возможно предположить, что повышение деформируемости и снижение агрегации эритроцитов у крыс с инфарктом миокарда, ишемией мозга и артериальной гипертензией обусловлено их присутствием в исследуемых экстрактах. Кроме того, наблюдаемое повышение ЭФП эритроцитов у крыс линии SHR в опытных группах, также не исключает возможность влияния экдистероидов и флавоноидов на ионный гомеостаз и энергетический баланс красных клеток. Повышение ЭФП при использовании ЭЛС и ЭЛХ у крыс с артериальной гипертензией отражает восстановление поверхностного отрицательного заряда мембран и напрямую сказывается на процессах агрегации эритроцитов.

Так как содержание фибриногена в крови является одним из ведущих параметров, отмеченное значительное снижение фибриногена при применении экстрактов экдистероидсодержащих растений может вносить свой вклад в ослабление агрегации эритроцитов, и способствовать снижению интегрального гемореологического показателя - вязкости цельной крови. Однако не совсем понятно почему экстракты левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского, содержащие в своем составе экдистероиды, обладающие способностью повышать содержание общего белка в крови [203] снижают концентрацию фибриногена. Возможно это связано с тем, что биологически активные вещества, входящие в состав исследуемых препаратов стабилизируют мембраны клеточных элементов крови и эндотелиальных клеток, посредством снижения процессов ПОЛ (флавоноиды) и восстановления ионного и энергетического баланса (экдистероиды). В результате нормализуется проницаемость капилляров, стабильность клеток и снижается необходимость активации системы гемостаза, выражающаяся, в частности, в поёЕиншши ойршве®^. фирриедеэнне исследования позволяют говорить о том, что экстракты левзеи сафлоровидной и лихниса хальцедонского являются перспективными гемореологическими средствами и могут быть использованы в комплексной терапии инфаркта миокарда, гипертонической болезни, ишемии мозга.

Для оценки эффективности применения средств с гемореологической активностью при нарушениях кровообращения мы провели ряд исследований, позволяющих установить степень их влияния на развитие сердечно-сосудистых патологий.

Лигирование коронарной артерии приводило к развитию острого инфаркта миокарда и развитию к 5-м суткам зоны некроза ткани левого желудочка. Введение исследуемых средств оказывало положительное влияние на протекание патологического процесса. Под действием ЭМО, асковертина и ЭЛС наблюдалось снижение зоны некроза левого желудочка. Снижение объема инфаркта, вероятно, связано с несколькими факторами. Во-первых, средства с гемореологической активностью, могут значительно улучшить микроциркуляцию и за счет развитой в миокарде сети анастомозов частично компенсировать снижение кровотока. Следует отметить, что уменьшение объема инфаркта наблюдалось только у средств, способных в значительной степени влиять на деформируемость эритроцитов и указывает на значимость этого гемореологического параметра. Полученные результаты согласуются с данными об улучшении микроциркуляции под действием по-лифенольного комплекса из манжетки при экспериментальном инфаркте миокарда [29]. Во-вторых, биологически активные вещества, содержащиеся в экстрактах, в частности, флавоноиды, способны ограничивать активацию процессов липидной пероксида-ции, вызванную нарушением кровоснабжения миокарда и, тем самым, препятствовать гибели кардиомиоцитов.

Экстракты манжетки обыкновенной и смолевки двудомной при курсовом применении снижали артериальное давление у крыс линии SHR. Этот эффект вероятно обусловлен снижением периферического сопротивления вследствие уменьшения вязкости крови, ослабления агрегации эритроцитов и возрастанием их деформируемости .

Значительное положительное действие гемореологических средств наблюдалось и на модели ишемии головного мозга.

Первым этапом в процессе развития ишемии является уменьшение мозгового кровотока. Так, одностороннее выключение любой из крупных мозговых артерий приводит к грубым двухсторонним нарушениям метаболизма ткани мозга [217], диффузному снижению мозгового кровотока [193, 215] с образованием мозаично расположенных очагов гиперемии [186, 207], а также осложняется развитием отёка-набухания мозговой ткани [330]. Образование областей мозга с различным уровнем кровоснабжения и различной степенью нарушения сосудистого тонуса затрудняет выбор препаратов для фармакологической коррекции инсульта, поскольку многие из применяемых ныне вазотропных веществ могут привести в этих условиях к извращённой реакции со стороны сосудов с развитием "синдрома обкрадывания" [201]. В связи с относительной неэффективностью сосудорасширяющих препаратов в последнее время всё большие усилия направлены на создание "цитопротективных" средств, которые способны защищать нейроны и глиальные клетки от повреждающего воздействия гипоксии, сохранять и поддерживать их функциональную активность в течение периода ишемического инсульта [179, 204, 328, 334].

Патогенез ишемического повреждения ткани мозга сложен и ещё недостаточно изучен, но существуют доказательства о вовлечении в этот процесс, по крайней мере, трёх значимых факторов: увеличение внутриклеточной концентрации Са2+, ацидоз и активация свободнорадикальных процессов [227] . Известно, что кальций является универсальным внутриклеточным мессенджером и от колебаний его концентрации зависит функциональное состояние гладкомышечных клеток, клеток крови и нейронов. Перегрузка нервных клеток Са2+ рассматривается как одна из непосредственных причин нарушения функций и гибели нейронов при ишемии за счёт активации липаз, протеаз и, возможно, эндонуклеаз, что приводит к нарушению фосфорилирования белков и вторично к повреждению белкового синтеза и экспресии генов [180, 226] . Ацидоз нарушает связывание Са2+ с кальмодулином и кальцибинди-ном - белками, которые служат внутриклеточным кальциевым буфером, что ведет к дальнейшему увеличению внутриклеточного пула свободных ионов кальция в клетке; ацидоз также приводит к ингибированию дыхательной цепи и снижению синтеза АТФ [225]. Активация кальцием фосфолипаз А и С сопровождается гидролизом фосфолипидов клеточных мембран с образованием ара-хидоновой кислоты, продукты липоксигеназного и циклооксиге-назного путей окисления которой являются вазоактивными веществами и способствуют увеличению проницаемости сосудистой стенки [233]. Накопление жирных кислот, в результате активации фосфолипаз, приводит к увеличению пула субстратов для процессов липидной пероксидации, активация которых в ишемизи-рованном мозге продемонстрирована многими авторами [173, 180, 205] . Образующиеся при этом эндоперекиси чрезвычайно токсичны для клеток, так как нарушают структуру клеточных мембран и ещё более увеличивают их проницаемость [18].

Изменения реологических свойств крови являются одним из существенных механизмов в формировании недостаточности кровоснабжения мозга при нарушениях церебрального кровообращения [9, 11, 91, 297, 404]. Усиление агрегации эритроцитов и снижение их деформируемости на фоне падения перфузионного давления и нарушения геометрии микроциркуляторного русла развивающимся отёком-набуханием мозговой ткани значительно ослабляют микроциркуляцию, что ведет к уменьшению кислородного снабжения клеток головного мозга и затруднению удаления продуктов их метаболизма. Учитывая значительную гемореологическую активность асковертина, а также выраженные антиоксидантные свойства, входящих в его состав компонентов, мы провели исследование церебропротекторных свойств препарата при ишемии головного мозга у крыс.

На 5-е сутки ишемии наблюдался выраженный отек астроглии по ходу артериол и венул, просвет которых вследствие сдавле-ния частично или полностью закрыт. Очаговый хроматолиз в пе-рикарионе нервных клеток проявлялся чаще периферическим или сегментарным растворением хроматофильной субстанции, что обычно трактуется как результат длительного раздражения, функционального напряжения нейрона и является распространенной реакцией на кислородное голодание [2, 5] . Содержание указанным образом измененных нейронов значимо возрастало по сравнению с таковым у интактных животных в большей степени в левом полушарии. Аналогичная динамика наблюдалась в содержании гиперхромных нейронов без признаков сморщивания, которые морфологически идентифицировались по увеличению степени базо-филии перикариона, укрупнению глыбок хроматофильного вещества с образованием конгломератов, что функционально интерпретируется как реактивное заторможенное состояние нейрона [7].В правом и, особенно в наиболее страдающим в этой модели левом полушарии возрастал процент "клеток-теней", которые являются результатом крайней необратимой степени хроматолиза с полным растворением хроматофильной субстанции в перикарионе и денд-ритах, резким уменьшением или исчезновением ядрышек. Также повысилось содержание необратимо измененных гиперхромных сморщенных нейронов, а процент неизмененных нормохромных клеток значимо уменьшался. Наблюдаемые морфологические изменения отражают явление значительного кислородного голодания [2, 5] .

На 5-е сутки ишемии данными ЭЭГ продемонстрирован ряд феноменов, которые служат критерием выраженной гипоксии головного мозга [4] . Так, наблюдалось достоверное снижение суммарной мощности ЭЭГ теменной коры как левого, так и правого полушарий. Происходило преимущественное угнетение доминирующей в норме активности ©-диапазона с формированием выраженной асимметрии.

Под влиянием курсового введения асковертина происходило уменьшение ишемических повреждений клеток коры мозга, причем степень эффекта препарата зависела от выраженности клеточных повреждений и носила трансполушарные различия. Повреждение нейронов коры также ' снижалось в зависимости от степени ишемии. Так, в правом полушарии с умеренной ишемией содержание нейронов с обратимыми реактивными изменениями уменьшалось, причем доля клеток с очаговым хроматолизом приближалось к уровню интактных животных. Терапия асковертином достоверно ограничивала число нейронов с необратимыми нарушениями (клетки-тени, пикноморфные нейроны) . В левом полушарии с более выраженной ишемией снижалась доля нейронов с изменениями обратимого характера; отсутствовала динамика в содержании необратимо измененных клеток, но в целом содержание нормохромных нервных клеток возрастало по сравнению с контролем. Динамика содержания нейронов с различными морфологическими изменениями при ишемии и на фоне введения асковертина в слоях III, IV, V была весьма сходна.

Под влиянием асковертина наблюдалось значительное улучшение со стороны функциональной активности коры головного мозга: мощность 5~, 0- и |3-ритмов в правом полушарии превышала аналогичные показатели в контрольной группе; в левом полушарии мощность 5-, ©-диапазонов была близка к уровню интактных животных; снижалась межполушарная асимметрия ЭЭГ

Таким образом, асковертин при нарушениях мозгового кровообращения обладает выраженной церебропротекторной активностью, что проявляется ограничением ишемических повреждений нейронов коры головного мозга.

Проведенное клинико-лабораторное исследование показало, что асковертин является эффективным средством для коррекции основных клинических и патофизиологических проявлений дисцир-куляторной энцефалопатии I и II стадии на фоне церебрального атеросклероза, гипертонической болезни и сахарного диабета, сопровождающихся синдромом повышенной вязкости крови. Однако его эффекты на разные проявления заболевания и звенья гемо-реологических расстройств были различными в трех основных группах.

При всех заболеваниях, являющихся фоновыми для дисцирку-ляторной энцефалопатии, наблюдается синдром повышенной вязкости крови. Он проявляется снижением деформируемости, повышением агрегации эритроцитов, фибриногена и гематокрита и, как следствие, увеличением вязкости плазмы и цельной крови. Это приводит к микроциркуляторным расстройствам, гипоксии тканей и является одним из важнейших патогенетических звеньев дис-циркуляторной энцефалопатии [21].

Наиболее изучены гемореологические расстройства при гипертонической болезни. По данным Н.Д. Китаевой и соавторов [56], у всех больных с гипертонией выявлено снижение деформируемости, гиперагрегация эритроцитов и повышение вязкости крови, причем для начальных стадий заболевания наиболее специфичными являлись изменения деформируемости, а при осложненном течении - повышение агрегации эритроцитов. Увеличение вязкости крови коррелировало со стадией заболевания. По данным других авторов, у всех больных гипертонической болезнью повышен уровень фибриногена плазмы и гематокрит [13].

При системном и церебральном атеросклерозе выявлено снижение деформируемости эритроцитов [4 9, 93] и повышение агрегации эритроцитов [3 6]. Доказана связь степени выраженности этих расстройств со стадией атеросклеротической энцефалопатии и наличием сочетанных сосудистых заболеваний.

Диабетологами признается важная роль микроциркуляторных нарушений в патогенезе осложнений сахарного диабета, в частности, дисциркуляторной энцефалопатии [28]. По мнению С. В. Котова и соавторов, гемореологические расстройства являются неотъемлемой составляющей этих расстройств [43].

Полученные нами в результате исследования показатели деформируемости, агрегации эритроцитов, вязкости крови, фибриногена плазмы и гематокрита у больных с дисциркуляторной энцефалопатией I и II стадии на фоне церебрального атеросклероза, гипертонической болезни и сахарного диабета в целом согласуются с вышеописанными данными.

У больных всех трех групп с дисциркуляторной энцефалопатией на фоне церебрального атеросклероза, гипертонической болезни и сахарного диабета, по сравнению с клинически здоровыми людьми, отмечался синдром повышенной вязкости крови (СПВК): вязкость цельной крови при всех скоростях сдвига была достоверно выше, причем преимущественно за счет клеточного звена гемореологии. Так, индекс деформируемости и полупериод агрегации эритроцитов всех групп больных был достоверно ниже, чем у клинически здоровых. Интересно, что у группы больных, у которых фоновым заболеванием являлась гипертоническая болезнь, в большей степени (относительно двух других групп) патологические изменения касались деформируемости, а в меньшей - агрегации эритроцитов. Это подтверждает исследование В. А. Шабанова и соавторов [95], в котором отмечено, что у больных гипертонической болезнью в первую очередь страдает деформационная способность эритроцитов, а на более поздних стадиях, при наличии осложнений - их агрегация.

У больных с фоновым заболеванием церебральный атеросклероз определялся повышенный уровень гематокрита; содержание фибриногена плазмы было повышено у больных с гипертонической болезнью и сахарным диабетом. Вместе с тем, значения вязкости плазмы у больных всех трех групп и клинически здоровых значимо не различались.

Учитывая выявленные изменения преимущественно клеточного звена гемореологии, можно предположить первично возникающую при сосудистых заболеваниях патологию мембран эритроцитов, или мембранопатию. Действительно, по данным Э.С Габриэляна и С.Э. Акопова [16]t именно морфофункциональными изменениями мембран эритроцитов и обусловлено нарушение микроциркуляции при атеросклерозе и гипертонической болезни. Эти изменения в мембранах происходят, по данным Н. Watanabe и соавторов [429], благодаря накоплению в них продуктов ПОЛ в результате активации свободнорадикального окисления, приводящее к повышению микровязкости мембран клеток. В исследовании Е.В. Ройт-мана и соавторов [187] установлено, что ПОЛ оказывает выраженное влияние на реологические свойства крови, причем эрит-роцитарное звено первым реагирует на повышение свободнорадикального окисления и первым исчерпывает свои компенсаторные возможности. Работами В.Ю. Лишневской и соавторов [53] также показана зависимость агрегационной активности и деформируемости эритроцитов от уровня свободнорадикального окисления у больных ИБС пожилого возраста.

Динамика гемореологического статуса под действием асковертина в изучаемых группах больных проявлялась по-разному. В группах больных с дисциркуляторной энцефалопатией на фоне церебрального атеросклероза и сахарного диабета, у которых были отмечены изначально очень близкие значения агрегации и деформируемости эритроцитов, и динамика этих показателей под влиянием асковертина была сходной. В отличие от этих двух групп, у больных с фоновым заболеванием гипертоническая болезнь выявлены изначально более низкие значения индекса деформируемости эритроцитов. У пациентов этой группы индекс деформируемости эритроцитов статистически достоверно увеличился уже к концу первой недели приема асковертина, а у больных двух других групп — лишь к концу курса.

В противоположность этому, полупериод агрегации эритроцитов, изначально более низкий у пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией на фоне атеросклероза и сахарного диабета, значимо возрос уже к концу первой недели, а у пациентов с фоновой патологией гипертоническая болезнь - только к двадцать первому дню. Однако во всех трех группах вязкость цельной крови во всем диапазоне скоростей сдвига имела тенденцию к снижению на седьмой день и достоверно снижалась к концу третьей недели без заметной разницы между группами. Вязкость плазмы, уровень фибриногена и гематокрит существенно не менялись во всех трех группах. Исходя из вышесказанного, можно заключить, что вязкость цельной крови - это интегральный показатель, изменение которого зависит в большой степени как от изменения агрегационной, так и деформационной способности эритроцитов. Определение в клинике только этого показателя, без составляющих его факторов, недостаточно для характеристики ведущего патологического процесса, особенно при оценке его динамики. Это заключение подтверждается публикацией Е.В. Ройтмана и соавторов, где доказывается, что основными факторами, определяющими вязкость цельной крови, признаются агрегация и деформируемость эритроцитов, гематокрит и концентрация фибриногена [83].

Кроме того, о положительном влиянии асковертина на показатели гемореологии свидетельствует еще тот факт, что до начала лечения не бьшо отмечено никаких корреляционных связей между исследуемыми показателями, а после курса приема препарата восстанавливалась физиологическая корреляция. У всех больных, прошедших лечение, вязкость крови при низких скоростях сдвига коррелировала со значениями фибриногена и гематокрита, а при высоких - с показателями деформируемости эритроцитов (слабой степени, 0,3<г<0,5). По группам появились корреляции средней степени (г>0,5; Р<0,05) между вязкостью крови при высоких скоростях и деформируемостью эритроцитов (в I группе) и между вязкостью крови при низких скоростях сдвига и уровнем фибриногена и гематокритом (в III группе). Наличие этих физиологических корреляций подтверждаются работами К.П. Иванова [32].

Таким образом, проведенное клиническое исследование асковертина у больных с дисциркуляторной энцефалопатией подтверждает экспериментальные данные, где в исследованиях на крысах с моделью церебральной ишемии выявлены церебропротекторные и гемореологические свойства препарата. Полученные данные свидетельствуют об эффективности препарата у пациентов с хронической недостаточностью мозгового кровообращения, протекающей не фоне атеросклероза, гипертонической болезни и сахарного диабета, а также о положительном влиянии асковертина на ведущие звенья патологического процесса. Это доказывает необходимость назначения препаратов с гемореологической активностью на начальных стадиях дисциркуляторной энцефалопатии для предотвращения прогрессирования заболевания и формирования стойкого неврологического дефицита.