Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая коррекция синдрома повышенной вязкости крови при патологических состояниях сердечно-сосудистой системы

г \ №Р

I

На правах рукописи

КОЛТУНОВ Александр Анатольевич

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ СИНДРОМА ПОВЫШЕННОЙ ВЯЗКОСТИ КРОВИ ПРИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОИ СИСТЕМЫ

14.00.25 — фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск — 1997

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте фармакологии Томского научного центра РАМН.

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор М. Б. Плотников

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

'профессор В. Г. Пашинский кандидат биологических наук Т. А. Замощина

Ведущее учреждение — Научно-исследовательский институ

кардиологии Томского научного центра РАМН

Защита диссертации состоится « »_ 1997 г

в час. на заседании специализированного совет

К 001.33.01 при НИИ фармакологии ТНЦ РАМН по адресу г. Томск, пр. Ленина,3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИ1 фармакологии ТНЦ РАМН.

Автореферат разослан « - 1997 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Е. Н. Амосов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ В настоящее время накоплено много клинических данных, доказы- : пающих, что синдром повышенной вязкости крови, как проявление нару-шений'гемореологическнх свойств, значительно осложняет течение многих распространенных заболеваний, таких как инсульт, инфаркт миокарда, ■ гипертоническая болезнь я др., приводя к расстройствам микроциркуля-цин и тромбоэмболичсскнм осложнениям [Э.С.Габриэлян, С.Э.Акопов, 1985; В.А.Лгосов, М.П.Савенков, 1988; М.М.Танашяк, 1988]; '

Вместе с тем, данные литературы о фармакологической коррекции СПВ немногочисленны, спектр гемореологических препаратов ограничен [М.Д. Машковский, 1992]. На современном этапе развитие новых методов фармакотерапии внутрисосудистых нарушений крови связывается с; перспективами применения лекарственных средств, способных, предотвращать или существенно уменьшать патологические сдвиги в гемореоло- ' гическом статусе [М.П.Савенков, 1988].

В связи с вышесказанным, поиск новых средств, обладающих гемо-реологлческой активностью и изучение возможности улучшения вязкостно-динамических свойств крцви с помощью этих соединений при. патологических состояниях, сопровождающихся развитием СПВ, представляется . актуальной задачей.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящей работы являлся поиск и углубленное изучение • новых средств растительного происхождения, обладающих гемореояогй-ческой активностью при сердечно-сосудистых заболеваниях.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработка адекватных моделей СПВ крови in vitro и in vivo для отбора и углубленного изучения гемореологических средств.

2. Поиск перспективных гемореологических средств экстрактов на осно-не флавоноидсодержащлх и экдистероидсодержаших растений.

3. Углубленное изучение наиболее эффективных экстрактов в качестве корректоров СПВ на моделях нарушений реологических свойств крови (ишемия мозга, инфаркт миокарда, артериальная гипертензия)-.

4. Исследование механизма действия отобранных экстрактов. .

НАУЧНАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И НОВИЗНА РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Впервые разработан в условиях in vitro и in vivo комплекс моделей патологических состояний сердечно-сосудистой системы, в патогенезе которых большую роль играет синдром повышенной вязкости крови. Было показано, что при этом выраженность отдельных компонентов геморео-логнческого ста туса имеет для каждой модели свои особенности.

2. Впервые проведено исследование сухих экстрактов флавоноидсо- • держаших и экдистероидсодержащих растений in vitro и in vivo', позволившее выявить наиболее эффективно снижающие остроту лроявления синдрома повышенной вязкости крови: флавоноидсодержащие'экстракты манжетки обыкновенной и горечавки.крупнолистной, экдистероидсодер-жащие экстракты смолевки двудомной, смолевки татарской и лихниса

хальцедонекого, а также у кверцетика и экдистерона (заявка на изобретение №96118150 Темореологическое средство", приоритет от 17.09.96).

3. Показано, что среди исследованных экстрактов в сравнении с пен-токсифиллином наиболее выраженным гемореологическим действием обладают экстракт манжетки лекарственной, превосходящий эталон по ан-тиагрепштному эффекту, и экстракт смолевки двудомной, обладающий более значимым влиянием на содержание фибриногена в плазме по сравнению с пентоксифиллииом. '

4. Установлено, что в основе снижения вязкости крови (при высоких скоростях сдвига) лежит способность экстрактов манжетки обыкновенной и смолевки двудомной повышать деформируемость эритроцитов; а, судя по показателю электрофоретической подвижности эритроцитов, механизм их антиагреганионного действия обусловлен увеличением поверхностного заряда эритроцитов.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ Предложены и отработаны методы, отбора перспективных гемо-реологичсских средств in vitro (заявка на изобретение № 95111697 "Способ определения действия соединений на реологию крови", приоритет от 21.06.95) и in vivo (заявка на изобретение № 95110810 "Способ моделирования синдрома повышенной вязкости крови", приоритет от 10.06.95).

Обоснована и доказана целесообразность включения в тактику лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы, сопровождающихся развитием синдрома повышенной вязкости крови, в качестве корректоров ге-мореологичесхих расстройств средств экстрактов манжетки обыкновенной • (Alhimilla vulgaris) и смолевки двудомной (Silene dioica (L.) clairv.).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 9 работ, подано 3 заявки на ' изобретение.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ Работа изложена на 154 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, вклю- • чающего 165 источника, из них 54 на иностранном языке. Иллюстрирована 43 таблицами и 22 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты проведены на 235 крысах-самцах линии Вистар, 20 крысах-самцах линии SHR. ■

Для определения относительной вязкости крови и плазмы использовали капиллярный вискозиметр ВК-4. Гематокрит определяли с помощью капиллярной центрифуги тип МГЦ-8 и выражали в %. Количество фибриногена в плазме (мг%) оценивали гравиметрическим методом по . Рутберг. Агрегацию эритроцитов исследовали с помощью метода сил-лектометрии. Для характеристики агрегационной способности эритроцитов использовали показатель полупериода кривой агрегации - Ti/2 •• [М.Б.Плотников, О.И.Алиев, Ф.В.Попель, 1995]

Исследование деформационных свойств эритроцитов проводили метопом лазерной ли фра кто метр и и или эктанитометрии. Для исследований применялся диапазон скорости сдвига от 18 до 890 с1. Разведение крови (в .100 раз) подбиралось,.исходя из собственных наблюдений и данных литературы [ Н.И.Фнрсов, ¡С.К.Острейко, К.А.Ремизов, 1983; Е.ЕуапБ, N. МоЬашЗаь', 1986]. В качестве вязкой среды использовался 0,2% раствор высокомолекулярного полиэтиленоксида вязкостью 13 сПз. Для количе-' ственной оценки деформируемости эритроцитов рассчитывался индекс ■ деформируемости эритроцитов (ЕО).

Для оценки электрофоретиче'ской подвижности (ЭФП, сек-'У-'см-' Ю-4) эритроцитов применяли метод клеточного электрофореза [С.С.Харамоненко, А.А.Ракитянская, 1974].

Для отбора соединений, влияющих на реологические свойства крови, . у крыс брали кровь из обшей сонной артерии под эфирным наркозом. Пробы крови инкубировали в термостате в течении 60 мин при температуре 42ПС. За.15 мин до термостатироваяия в пробы крови вносили иссле- ■ дуемое соединение (опыт) или физиологический раствор (контроль). Оценивали ключевые показатели, отражающие гемореологический статус: вязкость крови и спонтанную агрегацию эритроцитов.

Хроническую ишемию воспроизводили под эфирным наркозом у животных линии Вистар кассой 200-250 г путем полной перевязки левой • сонной артерии и ограничении кровотока до 50% по правой сонной артерии. Инфаркт миокарда на крысах линии Вистар массой 180-220 г под-эфирным наркозом с помощью аппарата искусственного дыхания для лабораторных животных воспроизводили путем лигирования левой коронарной артерии на 2-3 мм выше перехода левого края лульмонального конуса в его основание. Верификацию проводили электрокардиографически по характерным признакам па электрокардиограмме. Моделирование инфаркта миокарда без завершающего этапа лигирования левой коронарной артерии использовали для оценки влияния операционной травмы на реологические свойства крови. Для исследования изменений реологических свойств крови при гипертонической болезни в качестве модели использовали линию споптанно-гипертензивных крыс (БНЯ).

Для исследований в качестве антикоагулянтов применяли цитрат Ыа . (3,87«) соотношении с кровью 1:9 и гепарин в конечной концентрации 50 ЕД/1 мл крови. В качестве эталонного гемореологического препарата использовали пентоксифиллин фирмы "Словакофарма" (Агапурин).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием непараметрического критерия Вилкоксона-Манна-Уитни и [-критерия Стыодента. Для оценки статистической связи между исследуе-. мыми параметрами использовали корреляционный анализ. Для установления роли фактора применяемого воздействия (моделирование патологического состояния, введение исследуемых средств) на изменения гемореологического статуса применяли дисперсионный анализ. Оценка информативности и диагностической значимости исследуемых гемореологи-' ческих параметров была проведена с помощью многомерного дискрими-

iiaimioro анализа с пошаговой процедурой отбора информативных приз-паков. Все вычисления производились на ПЭВМ Aptiva 486 DX-4 с использованием пакета статистических программ "Statistica for Windows 4.3"..

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ .

Чтобы оценить адекватность и применимость получаемых в результате использования теплового воздействия in vitro изменений реологических свойств крови, на этой модели были исследованы препараты с известным гемореологическим аспектом действия: пентоксифиллин, ацетилсалициловая кислота (АСК) и пизкомолекулярньш декстрин.

Термостатнрование проб крови в течении часа приводило к ,отчетливому изменению реологических свойств крови: усилению агрсгационной-способности эритроцитов и значительному повышению вязкости крови (табл. I, 2).

В этих условиях наиболее выраженное влияние на оба исследуемых реологических показатели отмечалось у пснтоксифиллина, у АСК и низкомолекулярного дскстрана существенном было влияние на агрегациоп-ную способность эритроцитов (табл. 1). АСК имеет менее выраженный эффект на вязкость крови, а в'действии дскстранов важную роль играет первичная гемодилюция, чье влияние по условиям эксперимента было устранено. Результаты эксперимента свидетельствуют о приемлемости использования предложенной модели m vitro для отбора перспективных ге-мореологи чески,\ средств.

Для исследований были взяты две rpynpii экстрактов флавоноид- и экднстероидсодсржащих растений, а также кверцетин и экдистерон как одни из основных составляющих этих экстрактов. В результате проведен-, пых экспериментов было получено, что кверцетин в концентрации 10-7. г/мл ограничивал возрастание вязкости крови по сравнению с исходными значениями и полностью предотвращал усиление агрегационной способности эритроцитов (табл. 1). Наиболее эффективными экстрактами из флавоноидсодсржащих растений оказались экстракт манхжтки, полностью предотвращавший в концентрации Ю-4 г/мл патологические сдвиги, наблюдаемые при тепловом воздействии, что выражалось в нормализации исследуемых показателей, и экстракт горечавки, который в концентрации Ю"А г/мл проявил выраженный эффект, предотвращая возрастание и вязкости крови, и спонтанной агрегации эритроцитов (табл. 1).

Из экстрактов экдистероидсодержащих растений четкий антиагрега-циопный эффект и способность ограничивать повышение вязкости крови; проявили в концентрации 1(Нг/мл экстракты рода смолевок: двудомная и татарская, а также экстракт лихниса хальцедонского. Экдистерон подобный эффект оказывал в дозе 10'7 г/мл (табл. 2).

I "емореологическое действие этих экстрактов по выраженности сопоставимо с эффектом пеитоксифиллина (рис. 1). Причем экстракты манжет-

Таблица 1

Действие пентоксифиллина, АСК. декстрана, кверцетина и экстрактов лекарственных растений на вязкость крови (Вк. отн. ед.) и агрегацию эритроцитов (Тщ - полупериод агрегации эритроцитов, с-1) после инкубации крови при температуре 42"С (Х±т. п=5)_у_

1чОН-Ц11Я г/мл вк Тгя

Исходные значения После инкубации Исходные значения После инкубации

КОНТрО-1Ь опыт кон гроль опыт

Пентокснфнллин 10-5 4.08±0,14 4.82+0.04* ' 4.47+0,07"* 9.00-ь0,12 7.35±0.05* 8.6710,22*

АСК 10-5 4.08±0.14 4,90±0.13- 4>0+0.12- 7,45+0,13 5.81 ±0.28" 7.08+0.17*

Декстран 0.02 4.55+0,17. 5.27+0,03* 5.63+0.03" 7.50±0.2 5.25±0.1 6.67±0,22"*

Кверцетнн ю-7 10 + ' 4.08+0,14 5,15+0,10" 4,70+0.10»* 4,5310,07"* 5.50+0,10* 9,62+0.64 6.19+0,50* 9,58+0,30* 5,92±0.30" 2,33+0,08«*

Горечавка крупнолистная Ю-6 ю-* 4,08+0.14 5,15+0,10" 4,53+0,23 * 4.63+0.22 * 9,62+0,64 6,1910,50" 8.10+0.20* 7,08+0,22"

Манжетка обыкновенная 10-5 ю--1 4.08+0.14 5.15+0,10" 4.73+0,43 4,26+0,09* 9.62±0,64 6.19+0,50" 5,50+1,12я 9,5010,38*

Полынь Снверса 10-5 4.08+0,14 5,15+0.10" 5,33±0.17" 9.62±0.64 6,1910,50« 6,1610,33"

Володушка многожнльчатая ю-5 4.08+0,14 5,15±0.10" 5.05+0,57 * 9,62±0.64 6.19+0.50» 6.1711,69«

Примечание: *- Р<0,05 по сравнению с исходными значениями:

* - Р<0,05 по сравнению с контролем

Таблица 2

Действие экдистероиа и экстрактов экдистероидсодерисащих растений на вязкость крови (ВК, отн. ед.) и агрегацию эритроцитов (T/n - полз'период агрегации эритроцитов, с1) после инкубации крови при температуре 42°С in vitro (X±m. n-5)________________

Коп-цкя г/мл ВК • Tu,

Исходные значения После инкубации Исходные значения После инкубации

контроль опыт контроль опыт

Экдистерон 10 7 4.55+0,17 5,36+0,09® 4,86±0,20* 7,91+0,80 5.94+0,08«' 7.1710.17*

Смолевка двудомная Ю-5 4,56+0,12 5.69±0.19г' 5,27±0,15«* 8,751:0.21 6.51+0.25* 8,08±0.14#*

Лихннс х'альцедонскнй Ю-5 4,08+0,14 4,82+0.01« 4.40+0.04** 9,15+0.56 7,35±0,05# 8,92+0.03*

Смолевка зеленоцветковая Ю-5 4,56+0,12 5,80+0.07« 5.60+0.15# 8,75+0.21 7,27+0,10# 8,66+0,30*

Смолевка линнкола 10-' 4,08±0,14 5,20+0,00« 5.15+0.15« 9,15+0.56 7,58 ±0,25" 7.71+0.12*

Смолевка меловая Ю-5 4.56+0,12 5,56±й.03# 5.10+0.40« 8,75-0.21 6,83+0,30« 7.31+0,22*

Смолевка татарская ю-5 4.56+0,12 5,17±0,03# 4,77+0,09* 8.75±0!21 6,7540,25* 7,75±0,25#*

Примечание: * - P<0,05 по сравнению с исходными значениями;

* - Р<0.05 по сравнению с контролем

я

«

ки и смолевки татарской оказывают более значимое влияние на вязкость крови, чем пентоксифиллии. При этом экстракт смолевки татарской по антиш рсгационому эффекту уступает пентоксифиллину, а экстракт смо-лепки двудомной - по влиянию на вязкость крови. В остальном действие экстрактов существенно не отличается от такового у лентоксифиллина (рис. )).

Результаты исследований об изменении гемореологического статуса при моделировании ишемии мозга, инфаркта миокарда и артериальной гипертеизии послужили подтверждением наблюдаемому в клинических условиях развитию СПВ крови при сердечно-сосудистых патологиях |Э.С.Габриэлян, С.Э.Акопов, 1985]. Наиболее ярко нарушения реологиче-. скнх свойств крош на модели- ишемии мозга и инфаркта миокарда у крыс линии Вистар проявлялись на 5-е сут эксперимента (рис. 2). Все исследуемые гемореологические показатели были значительно и статистически достоверно выше таковых у интактпых животных. Наблюдалось повышение ннзкости крови и плазмы, значительно усиливалась агрепшионная способность эритроцитов, возрастало содержание фибриногена в плазме. Вы-, раженные нарушения реологических свойств крови сохранялись вплоть до 7-10-х сут исследования. Для моделирования артериальной гипертензии использовали крыс лшуш 5Н11 с генетически детерминированными гемо-реологпзесхими нарушениями, которые так же сопровождали развитие заболевания.

Проведенный дисперсионный анализ показал, что все изменения реологических свойств крови при ишемии мозга, инфаркте миокарда и артериальной гипертензии в основном обусловлены проведенным воздействием. При этом каждая из моделей имела свои особенности формирования СПВ крови. Более глубокие сдвиги гемореологическнх параметров происходили при инфаркте миокарда, что соответственно отразилось ца общей картине формирования СПВ (рис. 2). Отчасти это связано с тяжес-гыо проводимого оперативного вмешательства, необходимого для получения доступа к сердцу и перевязки коронарной артерии. В отдельной серии эксперимента ("ложно-оперированные': животные) было показано, что достаточно существенные изменения реологических свойств крови при подобном оперативном вмешательстве, сохраняются вплоть до 5 сут эксперимента, хотя и значительно уступают по выраженности наблюдаемым' при инфаркте миокарда.

Проведенный дискриминаитный анализ показал уровень информативности отдельных гемореологическнх параметров и при наличии стереотипности их сдвигов при формировании СПВ также позволил проявиться чертам, характеризующим своеобразие той или иной модели. Идентичность данных корреляционного анализа обработки результатов, полученных на вышеперечисленных моделях, позволяет говорит о существовании общих закономерностей во взаимосвязи исследуемых гемореологическнх параметров.' 13 проведенных экспериментах было получено подтверждение данных об определяющем значении функционального состояния эритроцитов, п частности, их агрегационной способности, в

□Вязкость крови НПолупериод АЭ

Пеитокси Смолевка Лихнис Смолевка Горечакка Манжетка

фпллип двудомная хальисдоносин «¡мирская ■ крупнолистная обыкппнепнаи

Рис I. Сопоставление влияния экстрактов флавононд- и экдистероидсодержащих растений и пентоксифил-лина на вязкость крови и агрегацию эритроцитов после инкубации крови при температуре 42°С in vitro .

Исходные значения исследуемых показателей приняты за 100%; * — Р< 0,05 по сравнению с пентоксифиллином

%

160

140

120-

100

Вязкость крови Вязкость плазмы Гемагокрит Фибриноген Полуперпод АЭ

|Ишемия мозга

□ Инфаркт миокарда

Артериальная гипертензия

Рис. 2. Изменения реологических свойств крови при различных патологических состояниях сердечнососудистой системы у крыс.

Исходные значения исследуемых показателей принять? за 100%; * — Р< 0,05 по сравнению с интактнымИ животными

\

/

изменениях вязкостных характеристик крови. Выявлена прямая корреляционная зависимость между повышением вязкости крови и усилением агрегационной способности эритроцитов, происходящей на фоне гиперфиб-риногенемии. Показано, что усиление агрегационной способности эритроцитов напрямую связано с увеличением содержания фибриногена в. плазме, что само но себе приводит к увеличению вязкости самой плазмы. Все это в свою очередь оказываег существенное влияние на вязкостные .характеристики цельной крови. Эти результаты подтверждают имеющиеся в. литературе сведения о тесной взаимосвязи изменений этих гемореологиче-ских параметров, наблюдающихся при развитии СПВ крови при расстройствах микроциркуляции.

Полученные результаты сдвигов гемореологических показателей на 3-х моделях заболеваний сердечно-сосудистой системы и данные, их анализа свидетельствуют о том, что используемые модели гемореологических расстройств адекватно отображают соответствующие процессы, наблюдаемые при их клинических эквивалентах, и могут быть использованы для изыскания и изучения новых препаратов - корректоров нарушений реоло-. гических свойств крови.

Это было подтверждено исследованием гемореологического действия- пентоксифиллина, которое продемонстрировало что, при ишемии мозга у крыс курсовое введение пентоксифиллина в дозе 100 мг/кг оказало выраженное влияние на реологические свойства крови (рис. 3, 4). Нормализация вязкости крови сопровождалась уменьшением агрегационной способности эритроцитов на фоне'значительного снижения содержания фибриногена в плазме по сравнению с контрольными данными. Однако снижение вязкости самой плазмы при этом не было значимым по отношению к показателю у нелеченных животных. Уменьшение гематокритного числа закже не носило достоверного характера. Дисперсионный анализ показал, что отмечаемые сдвиги вязкости крови, содержания фибриногена и полупериода АЭ прямо связаны с введением препарата, а влияние его на гема-токрит и вязкость плазмы косит в значительной степени случайный характер.

В этих условиях курсовое введение кверцетина в дозе 2,5 мг/кг, привело'к практически полной нормализации показателей вязкости крови и содержания фибриногена: агрегационная способность эритроцитов, и вязкость плазмы оставались повышенными по сравнению с исходными данными, ко значимо отличались от контрольной группы (рис. 3). Гематокрит оставался неизменным. Подобные эффекты проявляли экстракты мапжетхи и горечавки. Экстракт манжетки (300 мг/кг) оказывал отчетливое влияние па реологические параметры крови у животных, что выражалось в нормализации показателей вязкости плазмы и спонтанной агрегации эритроцитов, а также в снижении вязкости крови и уровня фибриногена в плазме по сравнению с контролем (рис. 3). При сравнении антиагрегационных эффектов экстракта манжетки и кверцетина было получено, что экстракт' манжетки обладает более выраженным влиянием на агрегационные

□ Контроль ■ Псимженфнллнн ЕЗКверцетин S M анжегка □ Горечавка

ооыкковеннах кр* пнолнетная

Рис. 3. Влияние курсового введения (в течение 5 сут) пентоксифиллина (100 мг/кг), кверцетнна (2.5 мг/кг), экстракта манжетки обыкновенной (300 мг/кг) и экстракта горечавки крупнолистной (50 мг/кг) ira реологические свойства крови при ишемии мозга у крыс. Значения исследуемых показателей у интактных животных приняты за 100%; * — Р< 0,05 по сравнению с контролем; s — Р< 0.05 по сравнению с пентоксифиллином 1

1 60

Вязкость крони Вязкость плални Гематокрпт Фибриноген ГТолупериол АЭ

□ Контроль В Пентокснфиллмн В Смолевка □ Смолевка В Лихнис

двудомная татарская хальцедонскии

Рис. 4. Влияние курсового введения (в течение 5 сут) пентоксифиллина (100 мг/кг) и экстрактов экдистреоид содержащих растений (150 мг/кг) на реологические свойства крови при ишемии мозга у крыс. Значения исследуемых показателей у интактных животных приняты за 100%;

* — Р< 0,05 по сравнению с контролем; = •

? — Р< 0,05 по сравнению с пентокенфиллином

свойства эритроцитов (Р=0,007). Значения гематокрита существенно не различались с контрольными данными.

Курсовое введение экстракта горечавки в дозе 50 мг/кг, приводило к снижению всех изучаемых гемореологических параметров по сравнению с контрольными данными, кроме гематокритиого числа (рис. 3). По результатам одномерного факторного анализа наблюдаемое улучшение реологических свойств крови полностью обусловлено фактором применяемого воздействия, т.е. введением лекарственных средств. Под влиянием кверце-. тина происходит улучшение всех изучаемых характеристик, действие экстрактов манжетки и горечавки достоверно определяет изменения всех ге- • мореологических параметров, кроме гематокрита.

11одобный эффект наблюдался и при введении экстрактов смолевок . двудомной, татарской и лихниса хальисдонского в дозах 150 мг/кг (рис. 4). Однако необходимо отмстить, как особенность действия экстрактов этой группы, менее выраженное влияние на вязкость кропи и более значимое - на содержание фибриногена в плазме и вязкость самой плазмы. Про- ' веденный дисперсионный анализ показал, что введение экстрактов рода смолевок обуславливает благоприятные сдвиги гемореологического статуса, а во влиянии лихниса хальцедонского на показатели вязкости крови.и гематокрита большую роль играет фактор случайности.

. Сравнение гемореологического действия экстрактов манжетки обыкновенной и горечавки крупнолистной с пснтоксифиллином показало, что эффекты изучаемых экстрактов в этом плане полностью сопоставимы <; таковым у пентоксифиллина (рис. 3). При этом экстракт манжетки про- • явил значимо больший антиагрегационный эффект, нежели пентоксифил-лнн. Что касается действия экстрактов смолевки двудомной, смолевки татарской и лихниса хальцедонского, то у всех экдистероидсодержащнх экстрактов наблюдалось полная нормализация содержания фибриногена в плазме, что достоверно отличает их действие от пентоксифиллина и фла-аоноидсодержащих экстрактов (рис. 4). Однако значительно слабее проявляется влияние экдистероидсодержащнх экстрактов па вязкость крови, как по сравнению с пентоксифиллипом, так и экстрактами манжетки и горечавки. Кроме этого, влияние экстракта манжетки па агрегационпую ■ способность эритроцитов более выражена по сравнению с экдистероидеог держащими экстрактами. Полученные результаты позволили отобрать для дальнейшего изучения наиболее эффективные экстракты: манжетки .' обыкновенной и смолевки двудомной.

После проведенного лечения животных с инфарктом миокарда экстрактом манжетки в дозе 300 мг/кг отмечалось существенное' улучшение всех исследуемых гемореологических. параметров (рис. 5). Значения вязкости плазмы и агрегаииошюй способности эритроцитов значимо не отличались от таковых у иптактных животных. Рост вязкости крови и содержания фибриногена н плазме был существенно ограничен. Гемато--критное число значимо не отличалось от такового у животных в контрольной и интактной группах (рис. 5).

Курсовое введение экстракта смолевки двудомной в дозе 50 мг/к оказало не столь.выраженное влияние на изменения гемореологическог статуса (рис. 5). Не было достигнуто существенных сдвигов вязкости кроа и агрегациошюй способности эритроцитов по сравнению с показателям нелечеиных животных. Гематокрит значимо не отличался от показателе: контрольной и интактной групп животных. Достоверным было толък. снижение вязкости плазмы и содержания фибриногена в ней (рис. 5).

На этой модели СПВ крови для сравнения был изучен гемореологи ческий эффект пентоксифиллина. Препарат в дозе 100 мг/кг оказывал от четливое влияние на реологические параметры у Животных при данно! патологий, что выражалось в значительном снижении вязкости крови i плазмы, увеличении полупериода АЭ и уменьшении содержания фибрино гена r плазме по сравнению с контролем (рис.-5). Достоверных изменеиш г сматокрнтного числа по сравнению с таковым у когггродьных и интакт пых животных не наблюдалось.

При сопоставлении эффективности исследуемых экстрактов и пен токсифиллина необходимо отметить, что экстракт манжетки обыкновен ной рказывал более значимое влияние на агрегационную способность эри троиитов по сравнению с пентоксифшшшом (рис. 5). По сравнению с экс трактом смолевки двудомной у животных, получавших экстракт манжетки, более выраженным было также снижение вязкости крови (рис. 5). Пс влиянию на вязкость крови экстракт смолевки двудомной уступал также пенгоксифиллпну.

Курсовое введение экстракта манжетки обыкновенной в дозе ЗОС мг/кг.с артериальной гипертензией, не оказало значимого влияния на а'г-регаиионнуто способность эритроцитов (рис. 6). Однако происходило существенное снижение вязкости плазмы за счет значительного уменьшения содержания в ней фибриногена по сравнению с показателями нелечеиных животных. Кроме этого, вязкость крови у крыс получавших экстракт манжетки, была гораздо ниже вязкости крови животных контрольной группы. I !оказатель гематокрита при этом значимо не изменялся. Экстракт смолевки двудомной в дозе 150 мг/кг, напротив, оказал выраженное, влияние на все исследуемые гемореологические параметры при артериальной ги-пертензии у крыс (рис. 6). Происходила полная нормализация вязкости плазмы и содержания фибриногена в ней. Значительное снижение вязкости крови, происходило на фоне существенного ослабления скорости спонтанной АЭ. Кроме этого, происходило значимое снижение гематокритного числа.

Особенно стоит отметить, что у животных получавших как экстракт манжетки, так и экстракт смолевки происходило существенное снижение артериального давления по сравнению с животными, не получавшими лечения (рис. 6).

Вязкость крови Вязкость плазмы Гематокрит Фнбриноген Полупериол АЭ

□ Контроль □ Манжетка ■ Смолевка двудомная В Пентоксифнллин

обыкновенная

Рис.5. Влияние курсового введения (в течение 5'сут) экстрактов манжетки обыкновенной (300

мг/кг), смолевки двудомной (150 мг/кг) и пентоксифиллина (100 мг/кг) на реологические свойства крови при инфаркте миокарда у крыс.

Значения исследуемых показателей у интактных животных приняты за 100%; * — Р< 0,05 по сравнению с контрольными значениями. 5 — Р< 0,05'по сравнению с экстрактом манжетки обыкновенной

Вязкость Вязкость Гематокрит Фибриноген Полупериод Арт. крови плазмы АЭ давление

□ Контроль □ Манжетка обыкновенная ■ Смолевка двудомная

Рис. 6. Влияние курсового введения.(в течение 5 сут) экстрактов манжетки обыкновенной (300 мг/кг)

и смолевки двудомной (150 мг/кг) на реологические свойства крови при артериальной ги-пертензии у крыс линии SHR.

Значения исследуемых показателей у интактных животных линии Вистар приняты за 100%;

*—Р< 0.05 по сравнению с контрольными значениями; . '

$ — Р< 0,05 по сравнению с экстрактом манжетки обыкновенной

J 18

При сравнении действий экстрактов смолевки двудомной и манжетки обыкновенной, было получено, что экстракт смолевки двудомной существенно превосходит экстракт манжетки по своему влиянию на все изучаемые гемореологические параметры при артериальной гипертензии у крыс (рис. б). Дисперсионный анализ подтвердил, что в действии экстракта манжетки на показатели гематокрита и агрегации эритроцитов большую роль играют случайные факторы, в то время, как изменения всех г'е-мореологических параметров, наблюдаемые при введении экстракта смолевки. двудомной, обусловлены только 'фактором применяемого воздействия.

Для исследования механизмов гемореологического действия экстрактов манжетки обыкновенной и смолевки двудомной были поставлены1 отдельные серии экспериментов в условиях in vitro по изучению деформируемости эритроцитов и их ЭФП. Исследования проводились в сравнении с пентоксифиллином, чье влияние на деформируемость эритроцитов считается основным механизмом гемореологического действия. •

В результате проведенных экспериментов, было получено, что экстракт манжетки обыкновенной оказывает значимо большее влияние на деформируемость эритроцитов нежели пентоксифиллин на всех используемых скоростях сдвига (табл. 3). Необходимо отметить, что влияние экстракта манженгки обыкновенной и на вязкость крови более выражено, чем у пентоксифиллина. При этом наблюдался равный по силе пентокси-филлину антиагрегантный эффект экстракта. Следовательно, повышение деформируемости эритроцитов у экстракта манжетки обыкновенной имеет-больший вклад и механизм снижения вязкости кропи по сравнению с пентоксифиллином. Воздействие экстракта смолевки двудомной на деформи- . руемость было сопоставимо с таковым у пентоксифиллина, хотя и уступало действию экстракта манжетки (табл. 3).

По влиянию на ЭФП эритроцитов экстракт манжетки обыкновенной не уступает пентоксифиллину, а экстракт смолевки двудомной обладает, менее выраженным влиянием на ЭФП, чем пеитоксифиллин и экстракт манжетки (табл. 4).

Полученные в результате экспериментов in .vitro и in vivo данные, указывают на то, что механизмом действия экстракта смолевки двудомной является влияние на плазменные составляющие гемореологического статуса, в частности, на вязкость плазмы и- содержание фибриногена в ней. При этом экстракт смолевки двудомной оказывает дополнительно достаточно существенное влияние на деформируемость эритроцитов, что в общем приводит, к положительным изменениям интегрального гемореологического показателя - вязкости крови.

Механизм действия экстракта манжетки обыкновенной основан на его выраженном влиянии на функциональное состояние самих эритроцитов: изменение их деформируемости и агрегашонной способности, а также поверхностного заряда клеток. Дополнительное влияние на плазменные составляющие гемореологического статуса в сумме дает более

Таблица 3

Влияние экстрактов манжетки обыкновенной (Ю-4 г/мл), смолевки двудомной (10'5 г/мл) и пснтоксифиллина (10-5 г/мл) на электрофорети-ческую подвижность_эритроцитов после инкубации крови при темпе-

Исследуемые соединения Элекггрофоретическая подвижность эритроцитов, мкм V-1 • г1 • см

Исходные значения 1,88+0,13

После инкубации

Контроль 0,92+0,003«

Манжетка обыкновенная 1.3810,006 «*

Смолевка двудомная 1,23+0,002 " * $

Пеитоксифиллн н 1,43+0,003 «*

Примечание: # - Р<0,05 по сравнению.с исходными значениями; * - Р<0,05 по сравнению с контролем; $ - Р<0,05 по сравнению с пентоксифиллином

Таблица <■

Влияние экстрактов манжетки обыкновенной (Ю-4 г/мл), смолевки'двудомной (Ю-5 г/мл)-и пептоксифиллина (Ю-5 г/мл) на индекс деформируе мости ГЕР) эритроцитов после инкубации крови при температуре 42°С й V\Ц'о (Х±ш. п=5)_• _

Исследуемые Скорость сдвига

соединения 90 е-1 350 с-' 890 с1

Исходные значения 0,162+0,011 0,218±0,009 . 0,300+0,002

После инкубации

Контроль 0,129+0,008 * 0,161+0,007 и 0,184+0,008 "

Манжетка обыкновенная ' 0,166+0,013«* . 0,218±0,008 0,252+0,006

Смолевка двудомная ' 0,150±0,010 « ' 0.181+0,009 " 0,232±0,006 **■

Пентоксифил-лин 0,150±0.010 # 0,200+0,010 "* 0,220+0,001 #*•

Примечание: я - Р<0,05 по сравнению с исходными значениями; * - Р<0,05 по сравнению с контролем; $ - Р<0,05 по сравнению с пентоксифиллином

мощный эффект экстракта манжетки обыкновенной, выражающийся в от-гстливом снижении остроты проявления СПВ крови на используемых мо- • делях.

Таким образом, экстракт манжетки обыкновенной в дозе 300 мг/кг и жстракт смолевки двудомной в дозе 150 мг/кг оказывают выраженное шняние на реологические свойства крови, ограничивая развитиё СПВ при различных патологиях сердечно-сосудистой системы, оказывая влияние сак на клеточные', так и на плазменные составляющие гемореологического :тагуса.

Проведенные исследования показали что, экстракты флавоиоид- и ждистероидсодержащих -растений могут быть перспективными геморер-югических средствами, используемыми в комплексном лечении рас- -тройств церебральной гемодинамики, сопровождаемых развитием СПВ' сровй и имеют своеобразие в проявлении гемореологических эффектов.

ВЫВОДЫ

1. Инкубирование, крови при температуре 42°С в течение 60 мин фиводит к воспроизводимому повышению вязкости крови и агрегациоп-, юй способности эритроцитов и может быть использовано для отбора эффективных средств-корректоров гемореологических расстройств.

2. Воспроизведение ишемии мозга и инфаркта миокарда у крыс лиши Вистар, а так же развитие'артериальной гипертензии у спонтанно-нпертензивных крыс сопровождается развитием стойкого СПВ крови, нормирование которого обусловлено изменениями как клеточных, так и шазменных факторов гемореологического статуса: повышением вязкости •рови и плазмы, увеличением содержания фибриногена и усилением arpe- ' ационной способности эритроцитов, а также изменениями гематокригпо- . о числа.

3. Скрининг сухих экстрактов 4 флавоноидсодержащих и б зкдист.е-юидеодержаших растений in vitro в сравнении с пектоксифиллином поволил выявить наиболее эффективно снижающие вязкость крови и агре-ацию эритроцитов: флавоноидсодержащие экстракты манжетки обыкно-енной и горечавки крупнолистной, экдистероидсодержащие экстракты молевки двудомной, смолевки татарской и лихниса хальцедонского. Вы-вяенный гемореологический эффект флавоноида кверцетина и экдистеро-да экдистерона также сопоставим с эффектом пентоксифиллина.

4. Курсовое введение при ишемии мозга экстрактов манжетки обык-шенной (300 мг/кг), горечавки крупнолистной (50 мг/кг), смолевки дву- • .омпой (15Ü мг/кг), смолевки tarapcKoii (150 мг/кг), лихниса хальцедонско-о (150 мг/кг), кверцетина (2,5 мг/кг) и экдистерона (0,25 мг/кг)' приводит к ■ слаблению выраженности СПВ крови: снижению вязкости крови и плаз-1ы, уменьшению содержания фибриногена в плазме, ослаблению гипе-агрегации эритроцитов.

5. Среди исследованных экстрактов в сравнении с пентоксифилли-ном наиболее выраженным гсмореологическим действием обладают экстракт манжетки лекарственной, превосходящий эталон по антиагрегант-ному эффекту, и экстракт смолевки двудомной, обладающий более значимым влиянием на содержание фибриногена в плазме по сравнению с пен-токсифиллином.

6, Курсовое введение при инфаркте миокарда и артериальной гипер-теизии экстрактов манжетки обыкновенной и смолевки двудомной эффективно снижает вязкость крови и плазмы, уменьшает содержание фибриногена в плазме и агрегацию эритроцитов. При артериальной гипертензии нормализация гемореологических параметров сопровождалась выраженным гипотензивным эффектом обоих экстрактов.

7. В основе снижения вязкости крови (при высоких скоростях сдвига) лежит способность экстрактов манжетки обыкновенной и смолевки двудомной повышать деформируемость эритроцитов;-а, судя по показателю электрофоретической подвижности эритроцитов, механизм их аптиагре-гационного действия обусловлен увеличением поверхностного заряда эритроцитов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Способ воспроизведения синдрома повышенной вязкости.крови // Труды молодых учёных Института фармакологии ТНЦ РАМН,. - Томск, 1995. - с. 46-47. (Соавт. Алиев О.И., Баскакову И.Б)

2. Изменения реологических свойств крови на модели ишемии мозга // Труды молодых ученых Института фармакологии ТНЦ РАМН, - Томск,

1995. - с. 35-36. (Соавт. Алиев О .И.)

3. Исследование реологии крови на модели инфаркта миокарда И II Съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1995, ч. 1. - С. 215. (С'оавт. Плотников М.Б.)

4. Экспериментальное исследование изменений реологических свойств крови при ишемии мозга // Клинические и экспериментальные исследования молодых учёных Сибирского отделения РАМН. - Новосибирск

1996. - с. 64. (Соавт. Алиев О.И.)

5. Исследование действия кверцепша на реологические свойства крови // Проблемы эксперим. и клинич. медицины. - Томск, 1996. - вып. 1.-е. 4345. (Соавт. Алиев О.И.)

6. Моделирование синдрома повышенной вязкости крови у крыс: оценка изаимоевязи гемореологических показателей и их информативности при ишемии мозга II Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - №9, 1996. - с. 27.4-275. (Соавт. Плотников М.Б.. Алиев О.И.. Баскакова И.Б.)

7. Действие экстракта Alhcmillia Vulgaris на реологические свойства крови' при экспериментальном ппфаркте миокарда II Труды 1 Всеросийской конференции по ботаническому ресурсоведению. - С.-Пб., 1996. - с.221..

(Соавт. Плотников М. Б., Алиев О. И., Калинкина Г. И.,

Березовская 1. n.j

Изучение действия флавоноидсодержащих соединений на реологические свойства крови in vitro / Научн. конф. по-свящ. памяти проф. Л. Н. Березнеговской: Тез. докл. — Томск, 1996. — г ил (^о.шт ГГлотпнков М. Б., Алис" О. И.; Калинкина Г. И., Березовская Т. П., Тихонова Л. А.) Метод отбора лекарственных веществ, влияющих на реологические свойства крови in vitro / Эксперим. и клинич. фармакология; — 1996. — № 6. — С. 54—55. (Соавт. Плотников М. Б., Алиев О. И.).