Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологическая активность полифенольного комплекса клеточной культуры незабудочника шелковистого

На правах рукописи

005005773

МАЗКО ОЛЕСЯ НИКОЛАЕВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЛИФЕНОЛЬНОГО КОМПЛЕКСА КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ НЕЗАБУДОЧНИКА ШЕЛКОВИСТОГО

(экспериментальное исследование) 14.03.06-Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МШ1Ш

Томск-2011

005005773

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Брюханов Валерий Михайлович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

профессор Ваизова Ольга Евгеньевна

доктор биологических наук Крылова Светлана Геннадьевна

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития»

Защита состоится «_» _ 2011 г. в _ часов на

заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН

Автореферат разослан «_»_2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук

Амосова Е.Н.

Актуальность темы: В настоящее время в условиях ухудшения экологической обстановки и устойчивой тенденции старения популяции наблюдается дальнейший рост почечных заболеваний в общей структуре внутренних болезней. По статистическим данным в России за 2000 г. на 100 тыс. взрослого населения приходилось 8794,6 больных с заболеваниями мочсвыделителыюй системы, а в 2006 г - 10444,3 [А.Г. Мандодоев, 2009]. Кроме того, имеются данные, что латентно протекающие нефропатии в 2-2,5 раза превышают число клинически выраженных форм [О.Д. Зинкевич и соавт., 2004.] Общественная значимость нефрологической патологии, помимо широкой распространенности, определяется также тем обстоятельством, что в последние десятилетия отмечается ее значительное омоложение. Так, по данным С.И. Рябова (2000) заболеваемость только инфекциями мочевых путей у детей достигает 2,8%, а по данным Н. Сигела (2006) - 3,7%.

Различные заболевания почек, как правило, характеризуются тяжелым течением, развитием рецидивов заболевания, приводящих к длительной потере трудоспособности и инвалидизации [Н.А. Мухин, И.Е. Тареева, Е.М. Шилов, 2002; Р.Бтоп е1 а1., 2004]. При этом, несмотря на использование современных методов лечения, гломерулярные и тубулоинтерстициальные заболевания почек в 1,5 % случаев приводят к развитию почечной недостаточности, при которой летальность достигает 50 % [С.И. Рябов, 2000].

Популяционные исследования показывают устойчивое доминирование среди заболеваний органов мочевой системы, в частности, при эконефропатологии, инфекционно-воспалительных заболеваний почек и мочевыводящих путей.

Распространенность воспалительных заболеваний почек актуализирует поиск препаратов специфической активности, эффективность и безопасность которых могут быть усилены с помощью рациональной фитотерапии.

Лечение заболеваний почек имеет много нерешённых задач, связанных с отсутствием единого понимания этиологии некоторых нозологических форм, а также недостаточным ассортиментом на фармацевтическом рынке лекарственных препаратов, нормализующих функциональное состояние почек. Это особенно актуализирует потребность в препаратах с нефропротекторной активностью. В большинстве случаев для лечения заболеваний мочевыделительной системы используется комбинация нескольких синтетических лекарственных средств. Эффективность такой терапии несомненна, однако с увеличением количества одновременно принимаемых препаратов их побочные эффекты аддитивно складываются. Среди синтетических лекарственных средств нет ни одного препарата, который бы восстанавливал уродинамику, не создавая метаболической нагрузки на паренхиматозные органы. Анализ литературы позволил установить, что лекарственные средства природного происхождения оказывают разностороннее комплексное действие на течение патологических процессов в почках.

Различные фитопрепараты из официнальных растений, а также отвары и настои, благодаря сумме действующих веществ, обладают полимодальностью эффектов. Фитопрепараты являются средствами эгиопатогенетической терапии,

способствуют метаболической коррекции. Для большинства фитокомпозиций характерны хорошая переносимость, отсутствие синдрома отмены, токсичности в отношении паренхиматозных органов.

При этом возможности расширения ассортимента фитопрепаратов в нефрологической практике реализуется далеко не полностью, в том числе, из-за неэффективной переработки лекарственного растительного сырья, дефицита некоторых его видов.

Одним из путей решения данной проблемы является использование нового вида фитосырья - биомассы растений, получаемой биотехнологическим способом, с направленным биосинтезом индивидуальных веществ. Особенно эффективно применение культуры клеток растений в качестве источника биологически активных веществ (БАВ) для редких, исчезающих, произрастающих в труднодоступных регионах или с трудом культивируемых на плантациях. В свете такого подхода заслуживают внимание уникальные растения дальневосточной флоры, одним из которых является незабудочник шелковистый Eritrichium sericeum Lehm. семейства Бурачниковые ([Boraginaceae). Развитие биотехнологических способов получения биомассы клеток незабудочника ЕР-1 в Биолого-почвенпом институте Дальневосточного отделения РАН значительно увеличивает выход полифенольных соединений при резком сокращении времени выращивания. Установленный качественный и количественный состав БАВ клеточных культур незабудочника, представленный олигомерами кофейной кислоты, а также сведения этномедицины о применении нативных растительных источников полифенолов данной группы при почечной патологии свидетельствуют о целесообразности и своевременности фармакологических исследований для решения проблемы создания на основе клеточных культур фитопрепаратов, обладающих патогенетическим действием при лечении заболеваний почек.

Цель исследовании: Выявить специфические виды фармакологической активности полифенольного комплекса (ПФК) клеточной культуры незабудочника шелковистого, имеющие патогенетическое значение при воспалительных заболеваниях почек.

Основные задачи исследования:

1. Изучить влияние полифенольного комплекса клеточной культуры незабудочника шелковистого на выделительную функцию почек.

2. Оценить противовоспалительные свойства ПФК из клеточной культуры незабудочника шелковистого на моделях острого и хронического воспаления.

3. Исследовать влияние ПФК клеточной культуры на процессы свободно-радикального окисления in vitro.

4. Исследовать влияние указанного фитокомплекса на показатели оксидативного и антиоксидативного статуса в условиях оксидативного стресса.

5. Оценить антимикробное действие фитокомплекса в отношении возбудителей инфекций мочевыводящих путей.

6. Оценить фармакотерапевтическую эффективность ПФК клеточной культуры в условиях экспериментального гломерулонефрита.

Научная новизна работы: Работа представляет собой экспериментальное исследование фармакологической активности и фармакотерапевтического эффекта фитопрепаратов из нового вида фитосырья — клеточной культуры Е. Sericeum, получаемого биотехнологическим способом с направленным биосинтезом индивидуальных полифенолов: розмариновой кислоты, рабдозиина и эритрихина. Впервые проведено экспериментальное изучение специфических видов фармакологической активности комплекса полифенолов: диуретической, противовоспалительной, антибактериальной и антиоксидантной и нефропротективной. Установлено, что лечебное применение ПФК клеточной культуры незабудочника в дозе 100 мг/кг усиливает процессы клубочковой фильтрации и снижает процессы канальцевой реабсорбции электролитов.

Выявлено антиэкссудативное действие фитокомплекса, реализуемое в период энергичного нарастания отека.

Полифенольный комплекс клеточной культуры незабудочника оказывет фармакотерапевтическое влияние при нефропатиях ишемической и иммуновоспалителыюй этиологии, регулируя процессы свободно-радикального окисления в ишемизированной почке и способствуя облегчению тяжести течения экспериментального гломерулонефрита.

Научная и практическая значимость: Результаты экспериментального исследования являются доказательством и подтверждением возможности получения фитопрепаратов биосинтетическим способом из фитосырья незабудочника шелковистого для лечения и профилактики воспалительных заболеваний почек. Полученные данные о наличии диуретической, противовоспалительной, антиоксидантной и антибактериальной активности фитокомплекса клеточной культуры, подтвержденные в результате исследования нефропротекгавпого действия при острой ишемии почки и экспериментальном гломерулонефрите, определяют целесообразность его применения в комплексной фитотерапии и профилактике заболеваний почек.

Основные положения выносимые на защиту:

1. В условиях длительного введения полифенольного комплекса клеточной культуры незабудочника шелковистого в дозе 100 мг/кг отмечено увеличение диуреза, сопровождающееся угнетением канальцевой реабсорбции электролитов и усилением клубочковой фильтрации.

2. Фитокомплексы клеточной культуры незабудочника оказывают тормозящее влияние на развитие каррагенинового отека крыс без существенного эффекта на течение хронического воспалительного процесса.

3. Спиртовые извлечения полифенольного комплекса клеточных культур незабудочника in vitro обеспечивают подавление общей прооксидантной активности, вероятно, за счет активации антиоксидантной системы.

4. Профилактическое применение полифенольного комплекса клеточной культуры незабудоч!гака в дозе 100 мг/кг на фоне транзиторной ишемии почки сопровождается некоторой прооксидантной активностью, что обусловливает закономерную активизацию антиоксидантной защиты.

5. Полифенольный комплекс в разведениях 100 мг/мл и выше продемонстрировал антибактериальную активность в отношении микрофлоры, специфичной для инфекционных заболеваний мочевых путей.

6. Оказывая нефропротективное действие, фитокомплекс клеточной культуры незабудочиика способствует облегчению тяжести течения экспериментального гломерулонефрита (снижает уровень протеинурии и ферментурии, преимущественно Г-глютамилтрансферазу).

Апробация материалов диссертации: Материалы диссертации докладывались и обсуждались на шестом Сибирском физиологическом съезде (г. Барнаул, 2008 г), на девятой научно-практической конференции «Молодежь -Барнаулу» (Барнаул, 2007 г.), десятой научно-практической конференции «Молодежь - Барнаулу» (Барнаул, 2008 г.), одиннадцатой научно-практической конференции «Молодежь - Барнаулу» (Барнаул, 2009 г.); на IV Всероссийской научной конференции «Новые достижения в химии и технологии растительного сырья» (Барнаул, 2009 г.).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 2 - в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, иллюстрирована 9 рисунками, 15 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 138 источника, из них 84 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 220 белых аутбридинговых крысах обоего пола в возрасте 2-2,5 месяцев и массой 140-200 г, выращенных в питомнике ГУ НИИ Цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск). Содержание крыс соответствовало требованиям Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Животные содержались в индивидуальных клетках в режиме свободного доступа к воде и пище. Дизайн эксперимента одобрен биоэтическим комитетом при государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования АГМУ Минздравсоцразвития России. В качестве объекта исследования использовали фитокомплекс полифенолов, извлеченный из каллусов незабудочиика шелковистого (штамм Ег-1). Культуры клеток растений созданы из корневой системы незабудочиика шелковистого Eritrichium sericeum Lehm., дикорастущего растения Камчатки и Приморского края, в Биолого-почвенном институте Дальневосточного отделения РАН и выращены на питательной среде Wß/NAA в течение 35 суток. Качественный и количественный состав комплексов полифенолышх соединений, извлеченных из клеточных культур исследуемых растений для проведения фармакологических исследований, представлен в таблице 1.

Таблица 1 - Содержание полифенольных соединений в корнях и клеточных культурах Eritrichium sericeum Lehm, (сухая биомасса)

Объект исследования Сумма полифенольных соединений, % ,, Рабдозиин, % Розмариновая кислота, % Эршрихин, %

Культура клеток Eritricfiiumsericewn 6,9ШД84 1,50+0,15 4,5+0,8 0,09+0,02

Корпи Eritrichium sericeum 0,26*0,03 0,20+0,02 0,04±0,01 0,02+0,005

Диуретическая активность. При исследовании влияния ПФК на функцию почек крысы содержались в индивидуальных клетках, приспособленных для сбора мочи. В собранной за сутки моче (суточный диурез) определяли содержание креатинина, экскреция которого служила мерой клубочковой фильтрации. Для расчета суточной экскреции электролитов в собранной моче устанавливали содержание ионов Na+ и К+. Препарат из сухой измельченной биомассы Е. sericeum (линия Е-4) в виде 2%-ной крахмальной взвеси вводили крысам при помощи желудочного зонда в дозе 100 мг/кг в день, что соответствовало 4.5 мг розмариновой кислоты и 1.5 мг рабдозгаша.

Экскрецию креатинина с мочой определяли унифицированным методом Поппера, основанном на реакции Яффе с помощью стандартного набора реактивов. В основе метода лежит фотометрическая реакция образования в щелочной среде окрашенных продуктов взаимодействия пикриновой кислоты с веществами, содержащими активную метиленовую (=СН) группу [В.В. Меньшиков,1987].

Концентрацию ионов натрия и калия в моче определяли методом пламенной фотометрии на пламенном фотометре ПАЖ-3.

Противовоспалительную активность исследовали на модели острого воспаления после двухнедельного введения фитопрепаратов внутрь в ранее установленных оптимальных дозах 100 мг/кг в виде 2%-ной крахмальной взвеси. Животные контрольной группы па протяжении 14 дней получали эквиобъемное количество 2%-ной крахмальной взвеси в идентичном режиме. В качестве препарата сравнения использовали отвар листьев зимолгобки зонтичной Chimaphyla umbellata (L.) W. Barton.

Острое экссудативное воспаление индуцировали субплантарным введением 0,1 мл 1%-ного раствора каррагенина [С. Winter, 1962]. Измерение объема правой задней конечности производили с помощью плетизмометра по окончанию курса применения фитокомплексов до введения, а также через 60, 120 и 240 минут после инъекции флогистика. На основании данных среднего объема прироста конечности животных, полученных в результате трех параллельных измерений, рассчитывали степень противовоспалительной

активности. Эффективными считаются препараты со степенью противовоспалительной активности, превышающей 30 % [Ф.П.ТрииусД983].

Изучение антипролиферативной активности фитокомплекса проводили методом «хлопчатобумажной » гранулемы. Экспериментальным животным под кожу спины имплантировали стерильный хлопчатобумажный тампон массой 20 мг. На 14-е сутки крыс забивали, хлопчатобумажные тампоны с образовавшейся вокруг них грануляционной тканью извлекали, взвешивали на электронных весах «Adventurer» (США) и высушивали в термостате до постоянной массы при 37 С. Пролиферативную реакцию оценивали по разнице между массой высушенной гранулемы и исходной массой ватного тампона. Экссудативную реакцию определяли по разнице между массами сырой и высушенной гранулемы[Ь.А. Oronsky.1967].

Для исследования возможной прооксидаитной и аитиоксидантной активности in vitro использовали экстракты полифенолов Е. Sericeum на 50% и 70% спирте этиловом. Содержание продуктов окисления ТВИН-80 определяли спектрофотометрическим методом. В экспериментах in vivo исследовали влияние препаратов из сухой биомассы Е. sericeum на состояние свободно-радикального окисления в почке крыс в обычных условиях и на фоне непродолжительной ишемии. Общую прооксидантную активность, суммарный показатель концентрации всех прооксидантов и свободно-радикальных метаболитов, оценивали по накоплению в почечной ткани продуктов перекисного окисления липидов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой. Антиоксидантную активность оценивали по изменению интегративного показателя общей аитиоксидантной активности и активности антиоксидантных ферментов (каталазы, глутатионпероксидазы, супероксидцисмутазы) [Я.С. Арбузова, 2006; С.Г. Благородов, 1987 ].

Определение антимикробной активности проводили методом культивирования тест-культур бактерий на средах с добавлением ПФК незабудочника шелковистого (метод репликаций) по стандартной методике ГФ XI. В качестве тест-культур использовали стандартные штаммы бактерий, относящихся к разным семействам: Pseudomonadas aeruginosa АТСС 27853, Escherichia coli АТСС 25922, Staphylococcus aureus АТСС 25923 и Acinetobacter.

Для проведения исследований к 20 мл расплавленной и охлажденной до 45°С среды - мясо-пептонного агара (МПА), добавляли ПФК в таком количестве, чтобы получить требуемую концентрацию в одном миллилитре. Были исследованы следующие концентрации ПФК незабудочника 25, 50,75 мг/мл. На поверхность остывшей смеси наносили стандартизированную микробную взвесь в объёме 0,02 мл откалиброванной петлей. В качестве контроля высевали вышеуказанные культуры на МПА без добавления исследуемого ПФК. Учет растущих культур проводили после инкубирования при температуре 37°С в течение суток и выдерживания при температуре 22,5°С в течение 3 суток [ГФ XI]. Антимикробную активность определяли по отсутствию или задержке роста исследуемых тест-культур бактерий.

Исследование нефропротективной активности проводили на модели экспериментального гломерулонефрита, который индуцировали внутривенным

введением специфической нефротоксичиой сыворотки (НТС), полученной от кроликов при их иммунизации почками крыс по модифицированной методике Masugi [Никифорова, 1985]. В результате этого у животных развивается диффузный нефротический гломерулонефрит, наиболее близкий к клиническим формам тяжелого нефрита человека.

Для получения почечного антигена из отмытых почек крыс-самцов массой 350-400 г брали корковую часть и продавливали через стерильное металлическое сито с диаметром пор 105 мкм. После добавления к полученной взвеси в качестве антисептика мертиолята (1 мг на 10 мл) иммунизировали кроликов-самцов следующим образом. На первом этапе 20 мг антигена в 1 мл суспензии, смешанного с 1 мл полного адъюванта Фрейнда, вводили животному внутримышечно в несколько участков тела. Спустя 4 недели ежедневно вводили антиген внутрибрюшинно по 100 мг в объеме 5 мл в течение трех последующих суток. Через 7 дней после последней инъекции антигена брали у кроликов кровь и полученную сыворотку вводили крысам внутривенно из расчета 8 мл/кг массы.

Животные были разделены на три группы: I -интактные крысы (n=10>; II -контрольные животные с индуцированным экспериментальным гломерулонефритом, вызванным внутривенным введением НТС (п=18); Ш группа - животные, длительно получавшие ПФК незабудочника в виде суспензии на 2%-ной крахмальной слизи. Тридцатидневное применение ПФК начинали с момента введения НТС. Животным II группы вводили эквиобъемное количество 2%-ной крахмальной слизи.

Протекгавную активность в отношении экспериментального гломерулонефрита определяли по их влиянию на экскрецию белка и биохимические показатели мочи. В собранной за сутки моче определяли содержание креатинина, экскреция которого служила мерой клубочковой фильтрации, описанным выше способом. Суточную экскрецию белка устанавливали унифицированным методом, основанным на взаимодействии белков с сульфосалициловой кислотой.

Активность ферментов щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы и гамма-глютамилтрансферазы определяли в моче с помощью биохимического анализатора «Hitachi» и рассчитывали по отношению к экскреции креатинина.

Статистическую обработку полученных результатов проводили путём расчёта средней (X) и средней квадратичной ошибки (ш). О достоверности различий судили, используя параметрический (критерий Стьюдента) и непараметрический (критерий Вилкоксона-Манна-Уитни) методы. Для сравнения результатов экспериментов, где показатели выражались в долях, достоверность определяли с помощью метода углового преобразования Фишера. Значимость различий считали достоверной при Pt, Pu, Ptp < 0,05 [Е.В. Гублер, 1978].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При определении острой токсичности ПФК незабудочника, выявлено что введение исследуемого фитокомплекса во всех используемых дозах мышам(100-

1000 мг/кг) и крысам (2500-10000мг/кг) в объемах 0,4 и 2 мл соответственно внутрижелудочно не влияло на состояние и поведение животных. Отсутствие токсических проявлений на организм животных позволило нам сделать вывод о безвредности изучаемой фитокомпозиции.

Фармакологические исследования ПФК клеточных культур проводились в направлении изучения диуретической, противовоспалительной, антиоксидантной и противомикробной активности.

Диуретическое действие ПФК клеточных культур проявилось в динамичном нарастании суточного диуреза, манифестация которого была зафиксирована к концу первой недели эксперимента. Достоверно высоким уровень диуреза оставался и после прекращения введения, превышая контрольные показатели на 82-104% (р<0,001). Увеличение суточного диуреза протекало с ростом экскреции электролитов. Зарегистрированный максимум натрийуреза и калийуреза под действием фитокомплексов достоверно превышал исходный уровень в 1,5 раза (р<0,001) (Рис.1).

Сравнивая мочегонное действие исследуемого фитокомплекса с действием растительных диуретиков по данным литературы, можно отметить некоторые отличия в механизме действия. Так, большинство растительных диуретиков не являются классическими диуретиками, а считаются акваретиками. Эфирные масла и другие БАВ растений, прямо воздействуя на почечный эпителий, вызывают временное увеличение количества мочи без выраженной натрийуретической реакции.

Диуретическая реакция, сопровождающаяся зарегистрированным натрийурезом и калийурезом, можно рассматривать как положительный момент применения ПФК незабудочника при наличии сердечных и почечных отеков, сопровождающих такие тяжелые заболевания как хроническая сердечная недостаточность, гипертоническая болезнь, нефротический синдром и другие. Уровень прироста экскреции натрия (на 45%) и калия (на 48%) оставался стабильно высоким до конца периода наблюдения, что может быть связано с угнетением канальцевой реабсорбции этих ионов. При этом, увеличение экскреции электролитов значительно уступало по степени выраженности диуретическому действию (рис .1 и 2).

Длительное использование ПФК незабудочника приводило к некоторому увеличению скорости клубочковой фильтрации, о чем свидетельствует появившаяся тенденция к усилению экскреции креатинина (рис.1). К концу первой недели приема фитокомплекса умеренный рост данного показателя достигал своего максимума, оставаясь статистически достоверным до конца эксперимента (р<0,001).

Рис.1. Влияние длительного введения ПФК незабудочника (100 мг/кг) на уровень диуреза и экскрецию натрия и креатинина у аутбридинговых крыс Примечание: И - исходный уровень; цифры соответствуют дням наблюдения; сплошная линия - диурез, пунктирная - экскреция натрия, точечная - экскреция креатинина; звездочками отмечены достоверные изменения по отношению к исходному уровню.

Рис.2. Влияние длительного введения ПФК незабудочника (100 мг/кг) на уровень диуреза и экскрецию калия у аутбридинговых крыс Примечание: н - исходный уровень; цифры на оси абсцисс соответствуют дням наблюдения; сплошная линия - диурез, пунктирная - экскреция калия

По-видимому, наблюдавшееся усиление экскреторной функции почек под влиянием фитокомплекса незабудочника было связано с увеличением скорости клубочковой фильтрации, поскольку происходило параллельно с ростом

экскреции креатинина. Однако, более существенный рост диуретической активности указывает на дополнительное угнетение реабсорбции воды в канальцах почек.

Результаты исследования влияния на функцию почек ПФК показали, что фитокомплекс незабудочника обладает диуретическим, натрийуретическим и калийуретическим действием, обусловленным как усилением клубочковой фильтрации, так и снижением реабсорбции жидкости в канальцах.

Действие фитокомплекса клеточной культуры незабудочника выгодно отличает его от действия растительных акваретиков, которое заключается в повышен™ гломерулярной фильтрации и увеличении образования первичной мочи вследствие повышения почечного кровотока и (или) ускорении осмотических процессов.

Согласно приоритетным направлениям фитотерапии в лечении болезней почек и мочевыводящих путей нормализация уродинамики, которая может быть достигнута с помощью диуретических средств растительного происхождения, эффективна на фоне их противовоспалительной активности.

Целесообразность исследования противовоспалительной активности полифенолыюго комплекса клеточной культуры дальневосточного растения продиктована имеющимися литературными данными о флоголитическом действии отдельных полифенолов в составе изучаемых фитокомплексов. Фармакологическая активность одного из полифенолов клеточной культуры незабудочника шелковистого, розмариновой кислоты per se и в составе галеновых препаратов хорошо изучена, и с начала 90-х годов рядом авторов данное соединение рассматривается как перспективное противовоспалительное средство, действие которого связано с замедлением возникновения и развития окислительного стресса [W. Englberger, 1988; M.R. Al-Sereiti, 1999; Е. Inoue, 2006]. Противовоспалительную активность розмариновой кислоты связывают с ингибированием фракций комплемента СЗ и С5, выступающих в качестве либераторов гистамина [P.W. Реаке, 1991], а также с уменьшением выработки медиаторов воспаления, секретируемых макрофагами [Е. Inoue, 2006; С. Sanbongi, 2004]. Рабдозиии, другой тетрамер кофейной кислоты, входящий в сосгав обоих фитокомплексов, обладает способностью к удалению активных форм кислорода и предотвращению ряда клеточных биохимических реакций, обеспечивающих воспалительный процесс, в частности, к подавлению активности гиалуронидазы, что оказывает отчетливый протективный эффект в отношении проницаемости капилляров [Н. Ito, 1998].

С учетом фазности воспалительных изменений и значения различных процессов в развитии этих фаз исследование флоголитической активности проводится с использованием различных моделей воспаления, среди которых традиционно используется индуцированный каррагенином отек конечности крыс [М. Di Rosa, 1971]. Схематично в развитии острого асептического воспаления, вызванного каррагенином, можно выделить несколько фаз. В первую фазу (10-20 минут) в ответ на повреждающее действие флогогена высвобождаются биогенные амины (серотонии и гистамин), активизирующие калликреин-кишшовую систему, что приводит к накоплению кшшпов (1-2

часа). Последние способствуют локальному высвобождению гидролитических ферментов лизосом, стимулирующих образование простагландгаюв, которые являются посредниками поздней фазы воспаления, развивающейся при каррагениновом отеке через 3 часа. Так, максимум концентрации простагландипа Е; регистрируется через 12-24 часа. Далее в эту цепь включается система комплемента, функционирующая в комплексе с кшшновой системой и системой свертывания крови [Я.Ф.Сигидин, 1988]. Рядом авторов упомянутые заключительные фазы часто объединяются в одну, и каррагениновый отек рассматривается как двухстадийный процесс, вторая стадия которого является результатом высвобождения простагландинов, лизосомальных протеаз и брадикишша [J. Vinegar, 1969; P. Crunkhon, 1971], В наших экспериментах введение раствора каррагенина контрольным животным приводило к быстрому и последовательному развитию воспалительного отека. В этих условиях длительное превентивное введение фитокомплекса незабудочника ослабляло его формирование. На ранних стадиях формирования отека максимальный эффект угнетения воспаления под действием полифенолыюго комплекса незабудочника составил 36,4 % (рф<0,05), причем оставался стабильно высоким в течение всего периода наблюдения, когда степень противовоспалительной активности колебалась в пределах 25-36 % (табл. 2).

На пике противовоспалительной активности полифенолы незабудочника продемонстрировали угнетение выраженности отека, превышающее действие известного растительного аитифлогистика зимолюбки зонтичной. Учитывая фазность в развитии острого каррагенинового отека и зарегистрированный максимум активности в период энергичного нарастания отека, эффективность данных ПФК можно объяснить вмешательством в пусковые механизмы воспалительного процесса с угнетением его сосудистого компонента в зоне альтерации. По всей вероятности, выраженное угнетение экссудативной фазы воспаления под влиянием ПФК незабудочника связано с наличием в их составе олигомеров кофейной кислоты - рабдозиина и розмариновой кислоты.

Влияние полифенолыюго комплекса незабудочника па течение хронического воспалительного процесса изучали на модели «хлопчатобумажной» гранулемы.

Исследуемый фитокомплекс незабудочника не обладает противовоспалительной активностью. Напротив, отмечалась незначительная стимуляция процессов экссудации (8,9%) и пролиферации (9,7%).

Данное обстоятельство указывает на то, что ПФК незабудочника не влияет на синтез структурных компонентов гранулематозно-фиброзной ткани -коллагена и неколлагеновых белков в очаге воспаления в результате изменения функциональной активности фибробластов.

Изучение противовоспалительного действия ПФК незабудочника показало, что курсовое терапевтическое введение в дозе 100 мг/кг не приводило к снижению воспалительного разрастания ткани и уменьшению экссудации в очаге хронического воспаления.

Таблица 2 - Влияние ПФК клеточной культуры незабудочника шелковистого на развитие каррагенинового отека лапы у аутбридинговых крыс (М ± т)_________

Группа исследования Количество животных Доза, мг/кг Часы наблюдения

1 2 4

Средний прирост объема конечности, см3 Противовосп алительная активность, % Средний прирост объема конечности, см3 Противовосп алительная активность, % Средний прирост объема конечности, см3 Противовосп алительная активность, %

Контроль (1% крахмальная взвесь) 15 - 0,49 + 0,04 - 0,55+0,04 - 0,67 ± 0,05 -

Отвар листьев зимолюбки (1:10) 14 500 0,33 ± 0,03* 32,7 0,43 + 0,04* 21,8 0,57 + 0,02 14,9

ПФК незабудочника шелковистого 15 100 0,35 + 0,03* 28,6 0,35 + 0,04* 36,4 0,50 + 0,05* 25,3

Примечание: Примечание: * - различия достоверны в сравнении с контролем при Ри Ри<0,05.

Референс-препарат - отвар зимолюбки зонтичной снижал интенсивность воспалительной реакции достоверно угнетая процессы пролиферации (20%) и экссудации (20,2%).

В настоящее время в отечественной и зарубежной литературе достаточно хорошо освещены вопросы патогенеза воспалительных заболеваний почек, в частности пиелонефрита, среди которых большое значение придается мембранопагологаческим процессам, в том числе изменениям в липидном слое мембран с накоплением продуктов ПОЛ, избыточной активности эндогенных фосфолипаз, которые реализуют свое патологическое действие в очаге воспаления. Поскольку данные патологические изменения наиболее выражены на фоне истощения факторов антиоксидантной защиты организма и дефицита эндогенных антиоксидаитов, одним из направлений ренопротекции при воспалительной почечной патологии является коррекция дислипидемий, которая предполагает усиление антиоксидантиой защиты.

Рядом исследователей установлена антиоксидантная активность полифенола в составе ПФК незабудочника - розмариновой кислоты [M.R. А1-Sereiti, 1999]. Кроме того, не вызывает сомнений тот факт, что антиоксидантная активность растительных БАВ является одним из ведущих звеньев механизма противовоспалительного действия фитопрепаратов [M.R. Al-Sereiti, 1999].

Учитывая химический состав ПФК незабудочника и выше установленную противовоспалительную активность ПФК на модели каррагенипового отека, закономерен интерес к исследованию антиоксидантной активности ПФК, полученного из незабудочника.

В предварительных экспериментах in vitro определены показатели общей антиоксидантной и прооксидантной активности. Спиртовые извлечения ПФК клеточных культур незабудочника на 50° и 70° спирте этиловом проявили выраженную и примерно одинаковую способность подавлять железо-аскорбатиндуцированное окисление ТВИН-80, что соответствует показателю общей антиоксидантной активности, равному 71,3 и 76,2% соответственно (табл.3).

Таблица 3 - Показатели антиоксидантной и прооксидантной активности спиртовых извлечений полифенольных комплексов клеточной культуры незабудочника in vitro_______

Экстрагепт - спирт Извлечения ПФК незабудочника

Показатель этиловый п= 15

50° 70° 50°спирт этиловый 70°спирг этиловый

п= 15 п= 15 п= 15 п= 15

ОАА, % 18,2±1,14 17,7+1,28 71,3+0,89* 76,2+1,38*

ОПА, % 13,9+1,24 41,4+2,53 14,3+1,87* 6,1+0,74*

Примечание: * - различия достоверны в сравнении с показателями соответствующего экстрагента при Рр<0,05

Различия в степени выраженности ОАА, отмеченные для извлечений ПФК на 50° и 70° спирте этиловом, можно объяснить изменением степени диссоциации полифенолов при изменении полярности растворителя.

Однако, при этом, в отличие от 40° этилового спирта, вероятно в силу более высокой концентрации, 70° этиловый спирт обладает более значительной оксидантной активностью. Этот факт необходимо принимать во внимание при изготовлении спиртового извлечения из фитокомплекса незабудочника на 70° этиловом спирте.

В результате эксперимента установлено, что извлечение из ПФК незабудочника, изготовленное на 70° этиловом спирте, обладает наименьшей прооксидантной способностью по сравнению с извлечением на 40° этиловом спирте. Возможно, благодаря 70°этиловому спирту извлекается меньше водорастворимых прооксидантов и больше веществ с антирадикальным действием, что приводит к некоторому угасанию прооксидантной активности.

Полученные результаты экспериментов in vitro, свидетельствующие о воздействии спиртовых извлечений фитокомплексов клеточной культуры незабудочника на активность свободно-радикального окисления, позволяют предположить позитивное влияние ПФК на процессы свободно-радикального окисления в экспериментах in vivo.

В условиях окислительного стресса, вызванного острой ишемией почки, отмечено существенное влияние ПФК незабудочника на оксидативный статус, что реализовалось в достоверном увеличении концентрации тиобарбитуратчувствительных продуктов, образующихся в ходе перекисного окисления липидов, в 3,4 раза по сравнению с группой интактных животных. Стимуляция оксидативного статуса под воздействием фитокомплекса привела к увеличению показателя общей прооксидантной активности в ишемизированной почке на 35,7% по сравнению с интактной почкой. Вероятно, фитокомплекс незабудочника не обладает способностью прямо «улавливать» свободные радикалы, либо содержит в равных количествах антиоксиданты и вещества прооксидантного характера, противодействующие антирадикальным эффектам ПФК клеточной культуры незабудочника. Причем последнее предположение выглядит более убедительно, поскольку установлено что фитокомплекс незабудочника содержит олигомеры кофейной кислоты [A.A. Аверьянов, 1984]. Между тем, давно известно, что при окислении фенольных кислот образуется значительное количество супероксида, запускающего дальнейшее образование других более токсичных радикалов [Я.С. Арбузова, 2006]. Возможно, именно присутствие олигомеров кофейной кислоты и определяет некоторые прооксидантные свойства фитокомплекса незабудочника, а также довольно высокие концентрации свободно-радикальных интермедиатов в крови животных.

Учитывая единство оксидантной и антиоксидантной систем, стимуляция прооксидантной системы под действием изучаемых фитокомплексов активизировала процессы ферментативной защиты от оксидативного стресса. Это нашло свое подтверждение в увеличении выработки эндогенных антиоксидантов (каталазы, глютатионпероксидазы) в ишемизированной почке в

1,2-1,5 раз на фоне применения фитокомплексов. Активность же супероксиддисмутазы была незначительно подавлена по сравнению с контролем. Вероятно, одной из причин столь «отсроченного» вступления этого энзима в борьбу с радикалами может быть необходимость достижения некой пороговой концентрации последних. В диссертации Я.С. Арбузовой было установлено, что именно каталаза - энзим первой лшши антиоксидантной защиты, к которому позднее последовательно подключаются ГПО и СОД. Кроме того, динамика каталазы на фоне развития оксидативного стресса имеет постепенный характер, в отличие от СОД и ГПО. Так, для СОД характерен довольно длительный латентный период индукции, сменяющийся резким взлетом активности. Для индукции ГПО требуется меньше времени, чем в случае с СОД, однако и активность фермента угасает гораздо быстрее. Вероятно, последнее обусловлено быстрым истощением глутатиона, играющего ключевую роль в глутатионпероксидазной системе.

Активация ферментативной защиты, вызванная ПФК клеточных культур, закономерно приводила к увеличению интегративного показателя общей антиоксидантной активности до 62,9% (р<0,01).

Принимая во внимание результаты экспериментов на подопытных животных с экспериментальной активацией реакций СРО, данные ранних экспериментов по изучению фармакологических эффектов ПФК клеточной культуры незабудочника вполне объяснимы. Было доказано, что исследуемый фитокомплекс обладает антиэксудативной активностью. Вероятно, это обусловлено фитохимическими особенностями полифенолыюго комплекса клеточной культуры незабудочника, в которой методами УФ-, ЯМР-, хроматомасс-спектроскопии, а также при изучении спектров кругового дихроизма идентифицированы три полифенола - олигомера кофейной кислоты: розмариновая кислота, рабдозиин и эритрихин [Б-К РесЬгеуеу, 2005]. Извесно, что эти вещества являются мощными природными антиоксидантами и определяют значительные антиоксидантные свойства фитокомплексов, их содержащих. В то же время, как выяснилось, длительное профилактическое введение полифенолыюго комплекса незабудочника подопытным животным на фоне экспериментальной активации СРО приводит к значительному росту антиоксидантного статуса животных. Учитывая, что антиоксидантный статус организма включает в себя различные факторы антирадикальной защиты, и ферментной и неферментной природы, можно сделать вывод, что отвары зимолюбки способствуют угнетению воспалительной реакции в том числе и за счет увеличения в организме содержания неферментных антиоксидантов, в частности, полифенольпых соединений.

В развитии воспалительных заболеваний почек важная роль принадлежит бактериальным факторам. Инфекции почек и верхних мочевых путей можно выделить в группу наиболее значимых в медико-демографическом отношении нозологических единиц, составляющих основную долю нефрологических заболеваний.

Исследование антибактериальной активности фитокомплексов клеточной культуры незабудочника в диапазоне разведений 25-125 мг/мл было проведено в

отношение наиболее распространенных возбудителей инфекций мочевыводящих путей: Escherichia coli, Pseudomonadas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

Применение ПФК в концентрации 125 мг/мл вызывало гибель всех используемых штаммов микроорганизмов. Наибольшей устойчивостью к фитопрепарату отличались представители Pseudomonadas aeruginosa. В отношении этой группы бактерий эффективны лишь высокие концентрации фитокомплекса (более 100 мг/мл).

Наиболее чувствительными к фитокомплексу незабудочника в концентрациях начиная с 50 мг/мл, оказались бактерии кокковой группы Staphylococcus aureus. Данный факт позволяет предположить воздействие полифенолов незабудочника на пептидогликан клеточной стенки микроорганизма, поскольку на 50-60% клеточная стенка стафилококков состоит из пептидогликана.

Сравнительный анализ чувствительности исследуемых штаммов к полифенолам незабудочника позволяет выявить прямую зависимость степени выраженности антимикробного действия от концентрации исследуемого фитокомплекса, зарегистрированную в отношении одного из самых распространенных уропатогенов Escherichia coli.

На основании данной зависимости была выявлена минимальная подавляющая концентрация ПФК незабудочника для обеспечения бактерицидного действия каждого из изученных видов микроорганизмов (табл. 4)

Таблица 4 - Антимикробная активность полифенольного комплекса клеточной культуры незабудочника

Объект исследования, разведение мгАш Котроль- ная культура Огоар толокнянки Мг/мл Штаммы микроорганизмов

Staphylococcus aureus Escherichia coli Pseudomonadas aemginosa

25 + - + + 4-

50 +/- 4/- + 4-

75 4/- +f- 4-

100 4/- - +/'

125 - - -

«+»- рост микроорганизмов, «+/-» - задержка роста микроорганизмов, «-»-отсутствие роста микроорганизмов.

Предложенные данные по определению минимальной подавляющей концентрации представляют интерес при выборе доз для лечения неосложненных моноинфекций мочевыводящих путей.

В сравнении с известным растительным уроантисептиком - отваром листьев толокнянки (Агс^арНуЬя ма-ит) полифенольный комплекс клеточной культуры незабудочника оказался более эффективным в отношении

патогенной микрофлоры, специфичной для инфекционных заболеваний уринарного тракта, в частности, в отношении грамотрицательных бактерий, что позволяет рассматривать его в качестве перспективного антисептика для лечения инфекций мочевыводящих путей, так как наиболее часто они вызваны грамотрицательной микрофлорой.

Выявленные фармакологические эффекты (диуретический,

антиэкссудативный, антиоксидантный и противомикробный) имеют патогенетическое значение в лечении воспалительных заболеваний почек, поэтому закономерен интерес к изучению влияния экспериментального фитопрепарата на течение одного из распространенных иммуно-воспалительных заболеваний почек - гломерулонефрита (рис. 5).

При изучении нефропротективной активности полифенольного комплекса незабудочника был отмечен существенный благоприятный сдвиг в структуре тяжести заболевания. Как видно из рисунка 4, значительно (с 43 до 23%) снижалось количество крыс с тяжелой формой гломерулонефрита за счет соответствующего перераспределения числа животных со средней тяжестью течения заболевания.

■ тяжелая □ легкая Передняя

■ тяжелая □ средняя

□ легкая □ отсутствует

опытная группа

контрольная группа

29<>/о

Рис. 3. Распределение животных по степени протеинурии в контрольной и опытной группе

На это же указывает и динамика развития протеинурии. Длительный прием фитокомплекса приводил к существенному снижению экскреции белка. На пике заболевания на 23% по сравнению с максимумом протеинурии у контрольной группы, что свидетельствует о снижении воспалительного процесса.

Полифенольный комплекс незабудочника шелковистого

Розмариновая кислота Рабдозиин

Рис.5. Фармакологические эффекты и механизмы действия полифенольного комплекса незабудочника шелковистого.

Кроме того развивался значительный мочегонный эффект па фоне пропорционального роста скорости клубочковой фильтрации, о чем свидетельствует увеличение экскреции креатинина.

Определенная положительная динамика была отмечена при проведении этимологических исследований. В условиях длительного введения ПФК незабудочника активность гамма-глютамилтрансферазы была существенно подавлена, что следует рассматривать как положительный момент лечения.

Таким образом, изучение влияния ПФК незабудочника на течение гломерулонефрита в дозе 100 мг/кг выявило положительную динамику в развитии заболевания.

Основываясь на вышеприведенных экспериментальных данных по изучению влияния на функцию почек в норме, антиоксидантной, противовоспалительной и антимикробной активностей, ПФК клеточной культуры незабудочника шелковистого является перспективным сырьем для дальнейшего изучения и получения на его основе безопасных и эффективных лекарственных средств.

ВЫВОДЫ

1. В результате курсового введения полифенольного комплекса клеточной культуры незабудочника шелковистого здоровым крысам в дозе 100 мг/кг внутрижелудочно выявлено достоверное увеличение диуреза, сопровождающееся угнетением канальцевой реабсорбции электролитов и усилением клубочковой фильтрации.

2. Фитокомплекс клеточной культуры незабудочника обладает выраженным противовоспалительным (антиэкссудативным) действием на модели каррагенинового отека лапы крыс, не проявляя существенного влияния на течение хронического воспалительного процесса.

3. В экспериментах in vitro выявлено стимулирование спиртовыми извлечениями полифенольного комплекса клеточной культуры незабудочника антиоксидантной системы и подавление общей прооксидантной активности.

4. Профилактическое применение полифенольного комплекса клеточной культуры незабудочника в дозе 100 мг/мл приводит к увеличению общей прооксидантной и антиоксидантной активностей за счет стимуляции свободно-радикального окисления и ферментативной защиты от оксидативного стресса, вызванного ишемией почки.

5. В опытах in vitro выявлен выраженный антибактериальный эффект в отношении культур: Escherichia coli, Pseudomonadas aeruginosa, Staphylococcus aureus, специфичных для инфекционных заболеваний уринарного тракта.

6. Терапевтическое применение фитокомплекса клеточной культуры незабудочника способствовала снижению тяжести течения экспериментального гломерулонефрита (снижая уровень протеинурии и ферментурии, преимущественно за счет р-глютамилтрансферазы).

7. Полифенольный комплекс клеточной культуры незабудочника шелковистого является перспективньш источ!шком для создания на его основе лекарственных средств нефропротективного действия.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

Работы опубликованные в журналах, рекомендованных ВАК:

1. Зяблова О.Н. Фармакологическая активность препаратов клеточных культур некоторых растений семейства бурачниковые / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова, И.В. Макарова // Бюллетень сибирской медицины., 2006. - т.5, приложение 2. - с. 60-62.

2. Зяблова О.Н. Клеточная культура Eritrichium sericeum Lehm. (Boraginaceae) -источник полифенольных соединений, обладающих фармакологической активностью / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев,

B.П. Булгаков, О.В. Азарова, В.М. Веселова, Ю.В. Инюшкина, Ю.Н. II Химико-фармацевтический журнал., 2008. - Т. 43, № 6. - С. 32-35.

Работы, опубликованные в других источниках:

3. Зяблова О.Н. Полифенольные соединения клеточных культур некоторых представителей семейства бурачниковые как потенциальный источник растительных антиоксидантов / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов,

C.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова, И.В Макарова // Медицинский вестник Башкортостана. - Уфа, 2006. -с. 123-124.

4. Зяблова О.Н. Диуретическое действие препарата незабудочника шелковистого в условиях длительного введения крысам / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова, И.В. Макарова, В.М. Веселова, Ю.В. Инюшкина, Ю.Н. Журавлева И Труды международной научно-практической конференции «Фармакология и фармакотерапия: Достижения и перспективы»/ Махачкала: ДГМУ, 2006. - с. 170-172.

5. Зяблова О.Н. Антимикробная активность клеточных культур некоторых представителей дальневосточной флоры / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова, И.В. Макарова // Сборник научных трудов: Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции / под ред. E.H. Вергейчика, H.H. Каревой. -Пятигорск, 2007. - вып. 62.- с. 430-432.

6. Зяблова О.Н. Клеточная культура растений как возможный источник новых лекарственных средств (опыт изучения каллусов некоторых представителей дальневосточной флоры) / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова, И.В. Макарова // Материалы III Всероссийской конференции: Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья // под ред. Н.Г. Базарновой, В.И. Маркина. -Барнаул: изд-во Алт. Университета, 2007. - книга 2. - с. 378-382.

7. Зяблова О.Н. Влияние клеточных культур некоторых растений семейства бурачниковых на течение экспериментального гломерулонефрита / В.М.

Брюханов, Я.Ф, Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова, И.Е. Госсен, О.Н. Зяблова, И.В. Макарова // Материалы республиканской 'научной конференции: Создание новых лекарственных препаратов / под редакцией Е.Д. Гольдберга. - Томск: изд-во Том. Ун-та, 2007.-с. 81-83.

8. Зяблова О.Н. Влияние фитокомплексов клеточных культур дальневосточных растений на развитие экспериментального воспаления / В.М. Брюханов, О.В. Азарова, И.В. Макарова // Межвузовский сборник научных трудов: Естествознание и гуманизм. Современный мир, природа и человек / под ред. H.H. Ильинских. - Томск, 2007. - с. 82-83.

9. Зяблова О.Н. Клеточная культура растений как перспективный источник новых лекарственных средств, влияющих на функцию почек. / В.М. Брюханов, О.В. Азарова, И.В. Макарова /ЛГезисы докладов шестого Сибирского физиологического съезда. - Барнаул: Принтэкспресс, 2008, - в 2 томах, - т. 1. - с. 132,

Ю.Зяблова О.Н. Антиоксндаитные свойства фитокомплексов клеточных культур незабудочника шелковистого (Eritrichium sericeum Lehm) / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова, И.Е. Госсен // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов / под редакцией В.М. Гаврилина / Пятигорская ГФА - вып. 63. - С. 387-389. 11.Зяблова О.Н. Сравнительная оценка влияния фитокомплексов клеточных культур незабудочника дальневосточных растений на функцию почек у крыс / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова // Сборник научных трудов: Фармация из века в век. С.Петербург - часть 5. 2008 - с. 327-329. 12.3яблова О.Н. Клеточная культура дальневосточных представителей семейства Boraginaceae как источник полифенолов со специфической фармакологической активностью / В.М. Брюханов, Я.Ф. Зверев, В.В. Лампатов, С.А. Федореев, В.П. Булгаков, О.В. Азарова, В.М. Веселова // Новые достижения в химии и технологии растительного сырья // Материалы IV всероссийской научной конференции. - Барнаул 2009. - книга 2. с. 234235.

Список используемых сокращений

биологически активные вещества у - глютамилтрансфераза глутатионпероксидаза глутатаонпероксидаза каталаза

малоповый диальдегид мясопептонный агар нефротоксическая сыворотка общая антиоксидантная активность общая прооксидантная активность перекисное окисление липидов полифенольный комплекс супероксиддисмутаза свободно-радикальное окисление тиобабитуровая кислота тиобарбитурат реактивные продукты трихлоруксусная кислота

МАЗКО ОЛЕСЯ НИКОЛАЕВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЛИФЕНОЛЬНОГО КОМПЛЕКСА КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ НЕЗАБУДОЧНИКА ШЕЛКОВИСТОГО

(экспериментальное исследование)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 06.12.2011 Заказ № 754 Формат 60x90/16. Усл. печ. л. 1,5. Тираж 100 экз.

Отпечатано в Типографии «ПРИНТ-технология» г. Барнаул, Чкалова, 21