Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое изучение мяты длиннолистной Mentha longifolia L.

На правах рукописи

005005899

СИДАКОВА ТАМАРА МАИРБЕКОВНА

ФАРМАКОГ НОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ МЯТЫ ДЛИННОЛИСТНОЙ МЕГ^ТНА ДОТОШНЛА Ь.

14.04.02 — фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ ^ ^ ^011

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЯТИГОРСК 2012

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреяедении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия» Министерству здравоохранени и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Попова Ольга Ивановна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Денисенко Олег Николаевич

кандидат фармацевтических наук Козлова Виктория Вячеславовна

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Московский государственный медицински университет им. И.М. Сеченова» Минздравсоцразвити России

Защита состоится <<Л&» ^мб'аг?^ 2012 года в^^асов на заседании диссертационного совета Д.208.069.01 при ГБОУ ВПО Пятигорская ГФА Минздравсоцразвития России (357532, Ставропольский край, Пятигорск, пр. Калинина, 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Пятигорская ГФА Минздравсоцразвития России

Автореферат разослан « 26» октября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета ¿¿у^* Е.В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Дикорастущие лекарственные растения до настоящего времени являются важной сырьевой базой для производства многих лекарственных препаратов. По прогнозам Всемирной Организации Здравоохранения доля фитопрепаратов в общем объеме лекарственных средств будет увеличиваться. Поэтому поиск новых сырьевых источников природных биологически активных соединений является актуальной проблемой.

Флора Кавказа отличается богатством, разнообразием и уникальностью видового состава. Среди них большой интерес представляют растения семейства яснотковые (Lamiaceae), содержащие такие биологически активные соединения, как терпеноиды, фенольные и полифенольные соединения.

На их основе созданы лекарственные препараты разнообразного фармакологического действия: спазмолитического, желчегонного, антимикробного, седативного, иммуномодулирующего и др. Однако многие виды изучены не достаточно, среди которых представители рода Mentha L. Научный интерес представляет мята длиннолистная (Mentha longifolia L.), так как широко распространена на территории России, а в предгорных и горных районах Кавказа образует заросли. Растение имеет значительную сырьевую массу, устойчиво к болезням и вредителям. Среди видов негибридного происхождения мята длиннолистная является наиболее полиморфным видом, что может проявляться как на морфологическом уровне, так н в значительной изменчивости содержания основных биологически активных соединений. В настоящее время мята длиннолистная применяется только в народной медицине в виде настоев н отваров для лечения заболеваний печени. Для внедрения данного вида мяты в медицинскую практику необходимо проведение исследований химического состава и разработка нормативной документации на сырьё. Поэтому фармакогностическое изучение мяты длиннолистной и стало предметом наших исследований, поскольку создаёт

з

предпосылки для обоснования возможности использования сырья мяты длиннолистной в официальной медицине как желчегонного средство.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось фармакогностическое изучение мять длиннолистной для расширения сырьевой базы потенциальных исгочнико лекарственных средств, обладающих желчегонным действием.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести фотохимический анализ травы мяты длиннолистной и изучит основные группы биологически активных соединений (БАС).

2. Выявить места произрастания и определить ориентировочные запасы сырь мяты длиннолистной травы в некоторых районах РСО-Алания.

3. Изучить возможность интродукции мяты длиннолистной в ботаническом сад Пятигорской ГФА.

4. Провести морфолого-анатомические исследования и выявить диагностически признаки сырья (травы) мяты длиннолистной.

5. Установить показатели качества сырья.

6. Определить острую токсичность и желчегонное действие извлечений из травь мяты длиннолистной.

Научная новизна полученных результатов.

В результате проведённых исследований установлен химический состав основны групп биологически активных соединений (БАС) мяты длиннолистной. Установлен наличие и количественное содержание в траве мяты длиннолистной эфирного масл флавоноидов, полисахаридов, фенолокислот, дубильных веществ, тритерпеновь соединений, изучен аминокислотный состав, определены макро- и микроэлементы.

Методом газожидкостной хроматографии изучен качественный со ста эфирного масла мяты длиннолистной, произрастающей на территории РСО-Алания В эфирном масле найдено 39 компонентов, из них идентифицированы п стандартным образцам б компонентов - терпинеол, лимонен, линалилацетат цитраль, кариофиллен, ментол. Методами химического и хроматографическог

4

анализа установлено наличие 14 соединений фенолыюй природы: флавоноиды (рутин, гесперидин, лютсолин-7 гликозид, кверцетин, дигидрокверцетин, кемпферол, аиигенин), фенолкарбоновые кислоты (галловая, кофейная, цикориевая, феруловая), кумарины (умбеллиферон, кумарин) и танин. Из них дигидрокверцетин, гесперидин, цикориевая и феруловая кислоты в траве мяты длиннолистной идентифицированы впервые.

Найдены оптимальные условия идентификации флавоноидов (метод ТСХ) и определения их количенственного содержания (метод дифференциальной УФ-спектрофотометрии) в траве мяты длиннолистной.

Из надземной части мяты длиннолистной выделены полисахариды, определено их количественное содержание, изучен качественный моносахаридный состав. Изучена динамика накопления эфирного масла и флавоновдов в траве мяты длиннолистной по фазам вегетации; определены оптимальные сроки заготовки сырья.

Впервые для данного вида сырья - мяты длиннолистной травы - установлены диагностические признаки, числовые показатели, нормы качества сырья и срок его годности. Для стандартизации сырья осуществлён выбор оптимальных методик для количественного определения эфирного масла и флавоновдов. Оптимизированы условия экстракции флавоноидов из травы мяты длиннолистной.

Проведены ресурсоведческие исследования в ряде районов РСО-Алания, составлены карты-схемы размещения зарослей мяты длиннолистной, определены запасы сырья - травы мяты длиннолистной в четырех районах (Алагирском, Кировском, Моздокском, Правобережном). Установлен объем возможных ежегодных заготовок данного лекарственного растительного сырья в 3-х районах республики - до 3 т сухого сырья. В результате фенологических наблюдений за развитием мяты при интродукции в условиях ботанического сада Пятигорской ГФА составлены фенологические спектры и установлено преимущество вегетативного размножения растения.

Предварительными фармакологическими исследованиями извлечений и травы мяты длиннолистной доказано желчегонное действие и определена остра токсичность. В эксперименте на животных установлено, что водные и спиршвы извлечения из травы мяты длиннолистной относятся к 4 классу токсичное (1Х)5о>250мг/кг) по степени воздействия на организм.

Практическая значимость. Для нового вида эфирно-масличног лекарственного растительного сырья «Мяты длиннолистной трава» определень диагностические признаки, установлены нормы качества и разработаны методш . определения основных ь действующих веществ. ^ Прикладное значение работь заключается в разработке проекта ФСП на мяты длиннолистной траву составлении инструкции по её заготовке и сушке. Показана возможности применения травы мяты длиннолистной в медицинской практике в качеств желчегонного средства.

Внедрение результатов исследования По результатам исследовани составлен проект ФСП «Мяты длиннолистной трава». Методики анализ включенные в проект ФСП, апробированы в лаборатории ГУП Ростовской облает «Фармацевтический центр» (акт апробации от 11.11.2009г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно исследовательских работ ГБОУ ВПО Пятигорской ГФА Минздравсоцразвип России (номер государственной регистрации 01200112164).

Апробация работы и публикации. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждались на ежегодных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии в 2007-2011г.г., Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики» (г. Владикавказ, 2009г). По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, из них 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Положения, выносимые на защиту:

- результаты фотохимического изучения основных групп БАС надземной части мяты длиннолистной^

результаты ресурсоведческих и интродукционных исследований мяты длиннолистной;

- показатели подлинности и нормы качества сырья мяты длиннолистной;

- результаты изучения острой токсичности и желчегонной активности извлечений из травы мяты длиннолистной.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 177 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы, посвященной материалам и методам исследования, 3-х глав собственных исследований, включает 39 таблиц, 35 рисунков, список литературы, состоящий из 141 источников, в том числе 7 иностранных авторов.

Основное содержание работы

Материалы и методы исследования. Объектом исследования явилась трава мяты длиннолистной (Mentha longifolia L.), заготовленная в четырех районах РСО-Алания (Алагирском, Кировском, Моздокском и Правобережном). Для разработки нормативной документации, методик качественного и количественного определения БАС использовали всю верхушечную часть растения (30-50см). Заготовленное в течение 2007-2010 гг. и высушенное сырье представляло собой смесь цельных и частично измельченных различной длины облиственных стеблей с цветками, а также кусочки стеблей, листьев, соцветий и цветков. Отбор проб проводили согласно ГФ XI и ОФС 42-0013-03. Пробы для исследования хранили в лаборатории в соответствии с требованиями ГОСТ 17768-90. Для получения извлечений, содержащих различные группы БАС, использовали воду очищенную (ФС 42-261997), спирт этиловый различной конценрации (ГОСТ 18300-82). Для обнаружения, разделения, идентификации, выделения и количественного определения БАС в исследуемом сырье использовали качественные реакции, спектральные, хроматографические и другие общепринятые методы анализа. Эфирное масло

7

получали фармакопойным методом 2 (метод гидродистилляции, время перегонки часа). Анализ элементного состава мяты длиннолистной травы проводили использованием эмиссионного спектрального анализа (метод испарения га кратер угольного электрода).

Для установления товароведческих показателей и морфолого-анатомически признаков сырья использовали методики ГФ XI и ГФ XII изданий Интродукционные исследования мяты длиннолистной проводили на опытно участке Ботанического сада Пятигорской ГФА (г. Пятигорск).

Фармакологическая активность извлечений из мяты длиннолистной травь установлена согласно методическим указаниям Фармакологического Комитета М РФ. Острую токсичность настоя мяты длиннолистной определяли по метод Кербера.

Срок годности сырья устанавливали на образцах, собранных в 2007 году хранившихся в соответствии с ГОСТ 11768-90 в условиях лаборатории. Кажды полгода определяли содержание эфирного масла, суммы флавоноидов, экстрактивных веществ, извлекаемых водой, и числовые показатели сырья. Фотохимическое исследование мяты длиннолистной травы В результате исследования БАС травы мяты длиннолистной, установлено присутствие эфирного масла, фенольных соединений, полисахаридов, тритерпеновых соединений, дубильных веществ, аминокислот, макро- и микроэлементов. Результаты исследования количественного содержания эфирного масла в образцах сырья мяты длиннолистной, заготовленного в фазу массового цветения в 2007-2009 гг, приведены в таблице 1.

Таблица 1 - Содержание эфирного масла в траве мяты длиннолистной в фазу

Район заготовки сырья Содержание эфирного масла, %

2007г. 2008г. 2009г.

Алагирский 2,82±0,02 2,90±0,03 2,88±0,03

Правобережный 2,86±0,01 ЗДШ.01 2,96=10,02

Кировский 2,94±0,02 3,10±0,02 3,12±0,02

Полученные образцы эфирного масла представляли собой подвижную,

8

легколехучую светло-желтую, с приятным специфическим запахом жидкость со следующими константами: показатель преломления Пд5 1,459-1,600, кислотное число - 1,21-1,30; эфирное число - 11,2(^11,50. Качественный состав эфирного масла мяты длиннолистной и количественное содержание идентифицированных компонентов в нём устанавливали методом газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ). Оптимальные условия анализа эфирного масла травы мяты длиннолистной методом ГЖХ были выбраны экспериментально, в качестве стандартных образцов терпеноидов были использованы: а-терпениол, гераниол, кариофиллен, лимонен, цитраль ч линалилацетат производства Sigma - Aldrich Chemie.H Fluka Chemie.

Время, мин

9 - а-герпинеол, 14-лимонен, 22-линалиладетаг,25-цитраль, 3]-кариофиллен, 36-ментол

Рисунок 1 - Хроматограмма эфирного масла травы мяты длиннолистной (Образец 2007г.)

В результате хроматографирования в исследуемом образце эфирного масла из мяты длиннолистной (2007г.) найдено 39 компонентов, из них идентифицированы по стандартным образцам 6 компонентов - а-терпинеол (14,6%), лимонен (11,4%), линалилацетат (3,4%), цитраль (1,7%), кариофиллен (1,5%), ментол (1,2%).

Преобладающими компонентами масла среди идентифицированных являются а-терпинеол и лимонен. Содержание моноциклического терпена ментола, характерного для эфирного масла мяты перечной, в исследуемых образцах масла мяты длиннолистной невелико (1,2-1,4%).

В эфирном масле мяты длиннолистной, собранной в 2008 г. методом ГЖХ

установлено наличие 37 компонентов, из них также идентифицированы п стандартным образцам моноциклические монотерпены - а-терпинеол, лимонен ментол, алифатические монотерпены - линалилацетат и цитраль, сесквитерпен - а кариофиллен (Таблица 2).

Таблица 2 - Количественное содержание основных компонентов эфирног масла мяты длиннолистной

Вещество Содержание компонентов эфирного масла, %

Образец №1 2007 года Образец №2 2008 года

а-Терпинеол 14,6 10,2

Лимонен 11,4 13,5

Линалилацетат • 3,4 2,7

Цитраль 1,7 2,1

а-Кариофиллен 1,5 1,6

Ментол 1,2 1,4

Количественное содержание эфирного масла в обоих образцах сырья составляет от 2,82-3,11%.

Как следует из данных таблицы 2 образцы эфирного масла мяты длиннолистной по содержанию основных компонентов отличаются незначительно. Различия в составе эфирного масла, собранного в одних и тех же районах PCO -Алания, но в разные годы, подтверждает общие закономерности, характерные для эфирно-масличных растений, о том, что содержание эфирного масла и его компонентный состав зависит от климатических условий. Лето 2008 г. было жарким и сухим, средняя температура 32°С.

В таблице 3 приведены результаты изучения влияния местообитания мяты длиннолистной на накопление эфирного масла по фазам вегетации.

Экспериментально установлено, что содержание эфирного масла в образцах сырья травы мяты длиннолистной, собранных в сухих местах на склонах гор в различных районах увеличивается от 2,78% (фаза цветения, Кировский район) до 3,22% (фаза цветения, Алагирский район).

Содержание эфирного масла в образцах сырья, собранных в увлажненных

ю

местах в аналогичные фазы развития составляет 1,52% (Кировский район) и 2,34% (Алагирский район).

Таблица .3 - Результаты изучения количественного содержания эфирного масла в траве мяты длиннолистной по фазам вегетации в зависимости от

Фаза вегетации Район заготовки сырья, местообитание

Алагирский Правобережный

Сухое место Увлажненное место Сухое место Увлажненное место

Содержание эфирного масла, %

Стеблевание 1,66ЬО,02 1 Д2±0,01 1,44±0,02 1,33±0,01

Бутонизация 2,16±0,02 1,88±0,02 2,11±0,02 1,67±0,01 '

Цветение 3,22±0,01 2,34±0,01 3,0040,02 2,18±0,02

Плодоношение 3,11±0,02 2,66±0,02 2,88±0,01 2,54±0,02

Фаза вегетации Район заготовки сырья, местообитание

Кировский Моздокский

Сухое место Увлажненное место Сухое место Увлажненное место

Содержание эфирного масла, %

Стеблевание 1,66±0,01 1,55±0,02 1,35±0,02 1,24±0,02

Бутонизация 1,45±0,02 1,38±0,01 1,55±0,01 1,44±0,01

Цветение 2,78±0,02 1,52±0,02 3,11±0,02 2,90±0,02

Плодоношение 2,78±0,01 2,65±0,02 2,77±0,01 2,65±0,02

накапливается в фазу бутонизации и цветения растений как в увлажненных, так и в сухих местах, достигая максимума (3,11-3,22%), а затем постепенно снижается в фазу плодоношения (2,54%). По-видимому, это можно объяснить как испарением, так и прекращением синтеза эфирного масла в изучаемом растении. В образцах сырья, собранных от растений, произрастающих в Алагирском районе, по сравнению с образцами сырья собранными в других районах, обнаружено более высокое содержание эфирного масла в фазе цветения. Этот результат, по-видимому, обусловлен более благоприятными климатическими условиями данного района для произрастания мяты длиннолистной и накопления эфирного масла.

Таким образом, очевидно, что максимальное накопление эфирного масла в

траве мяты длиннолистной происходит в фазу цветения растения, произрастающего на открытых сухих местах.

В таблице 4 приведены результаты изучения содержания эфирного масла в частях растения, представляющих лекарственное растительное сырьё «трава».

Таблица 4 - Содержание эфирного масла в различных частях травы мяты длиннолистной (п=6), заготовленной в Алагирском районе (верхушечная часть растения, 30-50 см)

образца Листья Соцветия Стебли

1 2,60*0,02 3,45*0,01 0,15±0,02

2 2,56*0,01 3,15*0,03 0,08*0,01

3 2,73±0,03 3,32*0,02 0,12*0,01

4 2,44*0,02 3,50*0,01 0Д6±0,01

5 2,20*0,01 3,40±0,01 0,10±0,02

6 2,35*0,01 3,25*0,03 0,10*0,02

Изучение динамики распределения эфирного масла в траве мяты длиннолистной показало, что наибольшим его содержанием отличаются соцветия (3,15-3,50%). В листьях накапливается несколько меньшее его количество (2,202,73%). В стеблях в фазу цветения образуется наименьшее количество эфирного масла - не более 0,16%. С целью установления оптимального качества заготавливаемого сырья было определено содержание эфирного масла в различных частях стебля мяты длиннолистной и в листьях, изменивших окраску (таблица 5).

Таблица 5 - Содержание эфирного масла в различных частях стебля мяты длиннолистной и листьях, изменивших окраску

Орган растения Массовая доля эфирного масла в % в воздушно-сухом сырье (п=6)

Образец №1 Образец №2

Верхушечная часть стебля (до 20см) 0,22±0,01 0,18*0,01

Средняя часть стебля (до 50 см) 0,18*0,02 0,15*0,02

Нижняя часть стебля (60-70см) 0,08±0,02 0,10±0,02

Листья пожелтевшие 0,24*0,01 0,22*0,01

Листья побуревшие 0,20*0,02 0,18*0,02

Экспериментально установлено, что наиболее продуктивными из надземных органов мяты длиннолистной по накоплению эфирного масла являются листья и соцветия. Это позволили рекомендовать для заготовки верхушечную часть растения (30-50 см) в фазу цветения.

Для определения флавоноидов и фенолокислот готовили спирто-водные извлечения из травы мяты длиннолистной и разделяли их фракционированием по растворимости. Методом бумажной хроматографии в траве мяты длиннолистной идентифицированы 8 веществ фенольной природы: кверцетин, рутин, лютеолин-7-гликозид, апигенин, лютеолин, галловая, кофейная и феруловая кислоты. Для изучения качественного состава фенольных соединений травы мяты длиннолистной использовали также метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

. Методом ВЭЖХ установлено, что трава мяты длиннолистной содержит 34 вещества фенольной природы, которые представлены флавоноидами, фенолокислотами, кумаринами и дубильными веществами (таблица 6).

Таблица 6 - Результаты исследования состава фенольных соединений спиртовых извлечений травы мяты длиннолистной методом ВЭЖХ

Идентифицированные фенольные соединения Время удерживания, Мин Массовая доля в общей сумме фенольных соединений, %

Фенолкарбоновые кислоты

Галловая к-та 3,43 4,39

Кофейная кислота 5,54 1,00

Цикориевая кислота 6,02 0,55

Феруловая кислота 7,12 1,14

Флавоноиды

Рутин 8,37 1,85

Гесперидин 11,02 0,79

Лютеолин-7 гликозид 13,06 2,41

Кверцетин 27,45 1,12

Дигидроквертецин 29,43 0,38

Кемпферол 55,85 6,79

Апигенин 63,52 2,33

Кумарины

Умбеллиферон 2,77 1Л1

Кумарин 11,93 1,93

Дубильные вещества

Танин 3,86 0,62

Из таблицы 6 следует, что из фенолокислот наибольшее количество содержится галловой кислоты (4,39%), флавоноидные соединения представлены

преимущественно кемпферолом (6,79%), лютеолин-7-гликозвдом (2,41%), апигенином (2,33%) и рутином (1,85%).

Количественное определение суммы флавоноидов в траве ^мяты длиннолистной проводили методом дифференциальной спектрофотометрии по реакции с алюминия хлоридом.

Содержание суммы флавоноидов в траве мяты длиннолистной составило 2,55± 0,06%. Результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Результаты количественного определения суммы флавоноидов в траве мяты длиннолистной

Навеска сырья, г Значение оптической плотности, О Содержание суммы флавоноидов, % Метрологические характеристики

1,0101 0,444 2,57 Я = 2,55 50 - 0,04266 ЮО = 1,67%

0,9899 0,429 2,53

1,0012 0,449 2,62

1,0010 0,437 2,55

0,9899 0,424 2,50

1,0102 0,436 2,52

мяты длиннолистной

изучали по фазам вегетации и органам растения (таблица 8).

Таблица 8 - Динамика накопления флавоноидов в траве мяты длиннолистной

Район заготовки сырья, местообитание

Фазы вегетации Правобережный Кировский Моздокский Алагнпский

С У С У С У С У

Стеблевание 1,87 1,38 1,56 1Д4 1,38 0,98 1,43 1,38

Бутонизация 2,64 1,88 1,70 1,56 1,75 1,42 2,40 1,44

Цветение 2,58 1,78 1,50 1,28 1,48 1,38 1,45 1,50

Плодоношение 1,67 1,52 1,28 1,15 1Д0 0,96 1,45 1,10

Экспериментально установлено, что максимальное накопление суммы флавоноидов происходит в период бутонизации (1,42%-2,64%) и цветения (1,48%-2,58%) растения.

Следует также отметить, что в фазу цветения растения накапливается максимальное содержание эфирного масла в сырье. При исследовании

хлороформной фракции тритерпеновых соединений методом ТСХ обнаружено наличие олеаноловой кислоты.

Для определения количественного содержания тритерпеновых соединений в траве мяты длиннолистной был использован гравиметрический метод. Их содержание составило 2,02-5,50%. Методом спектрального анализа на приборе ДФС-8-1 изучен макро- и микроэлементный состав травы мяты длиннолистной. В золе мяты длиннолистной обнаружено 25 элементов, среди которых преобладающими являются калий (до 30,0%), кальций (до 10,0%), кремний (до 6,0%), магний/до 3,0%), а также микроэлементы - железо (0,3%), марганец (0,1%) и цинк (0,03%). В водных извлечениях из мяты длиннолистной травы определено количественное содержание полисахаридов, дубильных веществ и органических кислот (таблица 9). Идентификацию и количественное определение содержания аминокислот проводили на аминокислотном анализаторе ААА 339М (идентифицировано 15 аминокислот, преобладает кислота глютаминовая). Результаты количественного определения основных БАС в траве мяты длиннолистной приведены в таблице 9.

Таблица 9 - Количественное содержание основных групп БАС травы мяты длиннолистной

НАС Метод определения Содержание

Эфирное масло Гцдродистилляция 3,22 ±0,02

Флавоноиды в пересчёте на рутии Дифференциальная УФ-спеюрофотомегрия 2,57±0,02

Фенолокислоты (в пересчете на кислоту галловую) Спектрофотомеггрия 2,36±0,01

Полисахариды Гравиметрия 11,10±13,7О

Тритерпеновые сапонины Гравиметрия 3,50±0,04

Дубильные вещества Перманганагомегрия 8,07 ±0,23

Свободные аминокислоты (в сумме) Спеетрофотометрия по реакции с шшгидрином 0,63±0,01 ----

Важнейшим условием использования дикорастущего вида ЛРС, является наличие сырьевой базы. Определение запасов проводили на конкретных зарослях в

15

фазу цветения растений. Урожайность определяли методом учетных площадок. На основании экспериментальных данных рассчитывали биологический и эксплуатационный запасы, объем возможных ежегодных заготовок травы мяты длиннолистной в 3-х районах РСО-Алания (таблицаЮ).

Таблица 10 - Запасы сырья (травы) мяты длиннолистной в 3-х районах РСО-Алания

Районы Урожайность воздушносухо го сырья, г/м2 Площадь зарослей, га Биологическ ий запас, кг Эксплутационн ый запас, кг Ежегодные заготовки, кг

Алагирский 52,£¿0,9 6,6 3484,8 2787,8 929,3

Кировский 45,6±0,7 4,0 1824,0 1459,2 486,4

Правобережный 50,6±0,8 12,5 6325,0 5060,0 1686,7

'Итого: ' ■ 23,1 11633,8 ' 9307,0 3102,4

Из полученных результатов следует, что в изученном регионе объемы ежегодных заготовок травы мяты длиннолистной могут составить до 3 т сухого сырья.

Интродукция мяты длиннолистной

Работа проводилась на опытных участках ботанического сада Пятигорской ГФА. При проведении «продукционных исследований руководствовались «Методикой исследований при интродукции лекарственных растений», разработанной в ВИЛАРе. Учитывая биологические особенности мяты длиннолистной (практически не образует семян) растения выращивались отрезками корневищ. Заготовку посадочного материала проводили в сентябре - октябре в Правобережном районе РСО-Алания. Ширина между рядами составила 25 см, глубина 10-12 см. Посадку мяты длиннолистной проводили осенью и весной. Эксперимент показал, что в условиях Ставропольского края оптимальной следует считать осеннюю посадку (вторая половина октября), когда складывается благоприятный уровень влажности почвы. При посадке мяты нельзя допускать длительного разрыва между операциями укладки корневищ в борозды и их заделки, что может привести к пересыханию почвы и обезвоживанию корневищ. Изучение динамики роста биомассы травы мяты длиннолистной при вегетативном размножении в условиях интродукции показало, что в фазу бутонизации и цветения растение отличается наибольшей сырьевой массой.

Результаты анализа образцов сырья травы мяты длиннолистной в условиях интродукции показали, что по содержанию эфирного масла (2,64-3,10%) и флавоноидов (2,35-2,54%)^ они не уступают образцам сырья, собранным^ от дикорастущих растений, что свидетельствует о возможности введения в культуру мяты длиннолистной.

Разработка показателей и норм качества сырья мята длиннолистной травы. Обоснование возможности применения в медицинской практике мяты длиннолистной травы требует разработки проекта ФСП.

~ /уЦ" 1 ~ эпидермальные клетки

\_MjL 2-устьица 2 " >Л 3 - простой многоклеточный волосок

// / ; г *. у / ; // - .

. * // (-......4 < > N / а/ 4 - железка

4 - железка

5 — головчатый волосок

6 - многоклеточный головчатый волосок

Рисунок 2 - Верхняя эпидерма листа Для обоснования показателей подлинности сырья проведено изучение микроскопических признаков и установлены диагностические.

Стенки клеток верхней эпидермы слабоизвилистые, устьица аномоцитного типа, трихомы представлены простыми многоклеточными волосками со щетинистой поверхностью. Железистые волоски расположены строго по жилке. Головчатые волоски имеют 1-2 клеточную ножку и одноклеточную крупную, вытянутую головку, содержат секрет желтого цвега.

Эпидермальные клетки нижней стороны листа изодиаметрической формы, стенки сильноизвилистые, устьица встречаются часто, диацитного типа. Трихомы представлены простыми многоклеточными волосками, расположенными обильно по всей поверхности листа. Основание волоска 2-3 клеточное. Железки расположены достаточно часто.

1. эпидермальные клетки

2. устьичный аппарат

3. железки

4. простые многоклеточные волоски с бородавчатой поверхностью

5. эпидермальные клетки жилки

6. головчатый волосок

!^

Рисунок 3 — Нижняя эпидерма листа

В результате проведенных исследований установлены требования к качеству

сырья, которые представлены в таблице 11.

Внешние признаки сырья определяли визуально (Г'Ф XI, вып.1, с.256): кусочки стеблей от светло-зеленого до беловато-зеленого цвета, листьев сизо-зеленого и | седовато-белого цвета, цветков розовато-сиреневого цвета различной формы. Запах ароматный, вкус водного извлечения - горьковато-вяжущий.

Микроскопические признаки (ГФ XI, вып.1, с.278): стенки клеток верхней эпидермы слабоизвилистые, устьица аномоцитного типа. Эпидермальные клетки нижней стороны листа изодиаметрической формы, стенки сильно извилистые, | устьица диацитного типа. Волоски простые со щетинистой поверхностью, железистые, расположенные строго по жилке; головчатые на 1-2 клеточной с одноклеточной головкой.

Показатели Методы Нормы

Подлинность Флавоноиды Реакция с алюминия хлоридом тех Должно наблюдаться зеленовато-желтое окрашивание ^ На хромагограмме в УФ-свете при Х=254 нм должно обнаруживаться пятно желто-коричневого цвета с Яг =0,56 (рутин)

Количественное определение 1. Эфирное масло 2. Флавоноиды Экстрактивных веществ, извлекаемых водой 1. Гидродистиляция 2. Дифференциальная спектрофотометрия ГФ XI, вьт Л, с.295 Не менее 1,3% Не менее 1,2% Не менее 25%

Влажность ГФХ1, вып.1,с.285 Не более 8 %

Золы общей ГФ XI, вып.2, с.24 Не более 8 %

Золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной ГФ XI, вып.2, с.25 Не более 2 %

Органической примеси ГФ XI, вып.2, с.276 Не более 2 %

Минеральной примеси ГФ XI, вып.2, с.276 Не более 1 %

Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм ГФ XI, вып.2, с.275 Не более 9 %

Пожелтевших, побуревших и почерневших частей растения ГФХ1, вып. I, с.276 Не более 5 %

Микробиологическая чистота ГФ XII, ОФС 420067-07 Категория 4Б

Упаковка - В соответствии с ФСП, мешки, пачки

Маркировка - В соответствии с ФСП

Транспортирование - В соответствии с ФСП

Срок годности - 2 года

Условия хранения - В сухом, проветриваемом, защищенном от света месте

травы

По результатом исследований разработан проект ФСП «Мята длиннолистная трава» и инструкция по заготовке и сушке сырья.

Фармакологические исследования извлечений из травы мяты длиннолистной

г Планируя фармакологические исследования? мы учитывали сведения литературы о применении мяты длиннолистной в народной медицине, а также результаты выполненных исследований по химическому составу сырья. В качестве объектов исследования были выбраны настои и спиртовые извлечения травы мяты длиннолистной. Фармакологические исследования проводились совместно с к.ф.н., ст. препод, каф. биохимии и микробиологии Пятигорской ГФА Саджаей ЛА. и к.ф.н., препод, каф^биохимии и микробиологии Пятигорской ГФА Сергеерой Е.О.

Определение острой токсичности водных и спиртовых извлечений травы мяты длиннолистной проведено на экспериментальных животных (мышцах-самцах). Установлено, что по классификации К.К. Сидорова настой и спиртовое извлечение травы мяты длиннолистной относятся к классу опасности - малоопасные вещества.

Изучение желчесекреторой функции настоев и спиртовых извлечений травы мяты длиннолистной проведено на крысах. В качестве препарата сравнения использовали желчегонный препарат растительного происхождения «Фламин».

Таблица 20 - Влияние спиртового извлечения и настоя мяты длиннолистной на желчевыделительную функцию печени в норме_

Группы животных Общее количество желчи за 3 ч. мг/100г

Ингактная, N=8 538,9±23,61

Контроль (40% спирт 16мл/кг), N=8 527,4±26^8,Ри>0,01

Спиртовое извлечение из мяты длиннолистной, 1бмл/кг, N=8 (спирт 40%) 637,$¿30,32 Ри<0,01,+18,3%

Настой из мяты длиннолистной, 16мл/кгуЫ=8 692,3±31,18, Ри<0,01, +28,5%,Р„ЯОТ „„>0,01

Фламин 12,4 мг/кг, N=8 701,9±36,28 Ри<0,01, +30,2%

Результаты эксперимента по изучению влияния настоя и спиртового извлечения травы мяты длиннолистной на желчесекреторную функцию печени у интактных животных (крыс) подтверждают перспективность использования настоя мяты длиннолистной в качестве желчегонного средства.

Общие выводы

1. На основании проведённых фитохимических исследований установлено, что основными биологически активными соединениями травы мяты длиннолистной являются эфирное масло (1,54-3,22%), флавоноиды (1,28-2,57%), фенолкарбоцовые кислоты (2.24-2,36%), тритерпеновые соединения (2,063,50%), полисахариды (8,1-11,3%), дубильные вещества (8,02-8,09%). Кроме того, выявлено наличие 15 аминокислот, из которых 6 - незаменимые, а также определён макро- и микроэлементый состав.

2. Изучена динамика накопления эфирного масла и флавоноидов в траве мяты длиннолистной по органам растения и фазам вегетации. Установлено, что содержание эфирного масла и флавоноидов возрастает по мере развития растения и достигает максимума как в листьях, так и в соцветиях в фазу бутонизации - начала цветения.

3. Методом ГЖХ установлен компонентный состав эфирного масла мяты длиннолистной травы. С помощью стандартных образцов идентифицированы: а-терпинеол, лимонен, линалилацетат, цитраль, кариофиллен и ментол.

4. Методом ВЭЖХ в траве мяты длиннолистной идентифицированы галловая, кофейная, цикориевая, феруловая кислоты, умбеллиферон, танин, рутин, гесперидин, кумарин, лютеолин-7гликозид, кверцетин, дигидрокверцетин, кемпферол, апигенин.

5. На основании ресурсоведческих исследований мяты длиннолистной в 3-х районах РСО-Алания (Алагирском, Кировском, Правобережном) составлены карты-схемы размещения зарослей растений, определена их площадь (около 23 га). Объём ежегодных заготовок травы мяты длиннолистной с учётом природоохранных и ресурсосберегающих технологий, может составлять до 3 т сухого сырья.

6. Интродуционные исследования мяты длиннолистной показали целесообразность вегетативного размножения растения отрезками корневищ и возможность выращивания мяты длиннолистной в условиях Ставропольского края. Изучение

накопления сырьевой массы мяты длиннолистной и основных БАС (эфирного масла, флавоноидов и экстрактивных веществ) по фазам вегетации позволило обосновать $эоки заготовки мяты длиннолистной травы.

7. Изучено анатомическое строение надземных органов мяты длиннолистной. На основе полученных данных выявлены диагностические признаки травы. Макроскопические: форма и строение стебля и листьев, соцветия, цветков, характер опушения и их окраска. Микроскопические: волоски 4-6 клеточные с бородавчатой (щетинистой) поверхностью, головчатые и сосочковидные волоски, эфирно-масличные железки с 8 радиально расположенными выделительными клеткам, устьица диацитного тип, реже с 3 сопровождающими клетками.

8. Показано, что водные и спиртовые извлечения из травы мяты длиннолистной обладают низкой токсичностью и стимулируют желчевыделительную функцию печени.

9. Проведена стандартизация травы мяты длиннолистной согласно современным требованиям, предъявляемым к качеству лекарственного растительного сырья. Разработан проект ФСП «Мяты длиннолистной трава», составлена «Инструкция по сбору и сушке травы мяты длиннолистной».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Тохсырова, Т.М. Определение фенольных соединений травы мяты длиннолистной / Т.М. Тохсырова, О.И Попова II Фармация. - 2009. -№1.-С.24-25.

2. Сидакова, Т.М. Изучение влияния отвара и спиртового извлечения травы мята длиннолистной (МепШа ки^оИа Ь.) на секрецию желчи у крыс / Т.М. Сидакова, Л.А. Саджая, Е.О. Сергеева, О.И. Попова // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. - 2011. - №3. - С.30-31

3. Тохсырова, Т.М. Определение запасов мяты длиннолистной в предгорно-горных районах Республики Северная Осетия-Алания / О.И. Попова, Р.Дз. Кусова, Т.М. Тохсырова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. - Пятигорск, 2008. - Вып.63. - С. 84-85.

22

4. Тохсырова, Т.М. Определение эфирного масла в траве мяты длиннолистной (Mentha longifolia L.) / Т.М. Тохсырова, О.И. Попова, Л.С. Ушакова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. - Пятигорск, 2009. - Вып.64. - С. 113-115.

5. Сидакова, Т.М. Изучение динамики накопления флавоноидов в надземной части мяты длиннолистной (Mentha longifolia L.) / Т.М. Сидакова, О.И.Попова, Р.Д. Кусова// Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики: сб.науч.тр. Всерос. науч. практ. конф. СОГУ г.Владикавказ - Владикавказ, 2010. - С.59-62.

6. Сидакова, Т.М. Изучение тритерпеновых соединений травы мяты длиннолистной (Mentha longifolia L.) / Т.М. Сидакова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. - Пятигорск, 2010. - Вып.65. -С. 119-120.

7. Сидакова, Т.М. Сезонная динамика накопления эфирного масла в надземной части мяты длиннолистной (Mentha longifolia L.) / Т.М. Сидакова, О.И. Попова // Химия растительного сырья. - 2011,- №1. - С.189-190

8. Сидакова, Т.М. Исследование аминокислотного состава мяты длиннолистной Mentha longifolia L.) / Т.М. Сидакова, О.И. Попова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. - Пятигорск, 2011. -Вып.66. - С. 177-178.

9. Сидакова, Т.М. Определение острой токсичности водного и спиртового извлечений травы мяты длиннолистой (Mentha Longifolia L.) / Т.М. Сидакова, JI.A. Саджая, Е.О. Сергеева, О.И. Попова // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. - 2011. - №5. - С.13-15

СИДАКОВА ТАМАРА МАИРБЕКОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ МЯТЫ ДЛИННОЛИСТНОЙ MENTHA LONGIFOLIA L.

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 25.10.2011г. Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага книжно-журнальная. Печагп. ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ №

ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ»

(357532, г.Пятигорск, пр. Калинина, 11)