Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование компонентов сбора "Табан Аршан" и разработка на его основе технологии водорастворимого экстракта

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ХИМИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи Для служебного пользования

Экз. № 000023 #

СЕМЕНОВА

Лариса Сергеевна

УДК 615.32:581.192

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ СБОРА «ТАБАН АРШАН» И РАЗРАБОТКА НА ЕГО ОСНОВЕ ТЕХНОЛОГИИ ВОДОРАСТВОРИМОГО ЭКСТРАКТА

15.00.02 -ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ И ФАРМАКОГНОЗИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

С.-ПЕТЕРБУРГ — 1994

)

Работа выполнена на кафедре фармакогнозии и аптечной технологии лекарств Санкт-Петербургского химико-фармацевтического института.

Научные руководители: кандидат фармацевтических наук, профессор К. Ф. БЛИНОВА доктор фармацевтических наук, профессор Б. Л. МОЛДАВЕР

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор И. А. САМЫЛИНА кандидат фармацевтических наук, доцент Б. К. КОТОВСКИИ

Ведущая организация—Ботанический институт им. В. Л. Комарова РАН.

заседании специализированного совета д,-и°4.63.01 Санкт-Петербургского химико-фармацевтического института но адресу: 197376, С.-Петербург, улица профессора Попова, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского химико-фармацевтического института (197376, С.-Петербург, улица профессора Попова, 14).

Защита состоится

1994 г. в И. 90

час. на

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета кандидат фармацевтических паук

А. В. РУСАК

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ *ктуальность темы. Актуальность темы обусловлена необходимостью юиска новых путей использования средств традиционной тибетской медицины, разработки лекарственных препаратов на их основе, необ-кодимостыо замены неудобных при применении, громоздких при хранении и транспортировке лекарственных растительных сборов современными технологичными водорастворимыми экстрактами.

На территории Бурятии практикующими ламами лекарями широко используется бальнеологический метод лечения различных заболевания. При этом в бальнеологической практике находят применение водные вытяжки как из индивидуального растительного сырья, так и из сборов различного состава. Наше внимание привлек 5-компонентный сбор под названием "ТаСан аршан". Сбор включает побеги багульника болотного, побеги мирикарни длиннолистной, побеги можжевельника сибирского, траву полыни холодной, траву эфедры односемянной. Ванны на основе этого популярного в тибетской и монгольской медицине сбора используют при лечении кожных и женских болезней, заболеваний почек, крови, суставов и др. В связи с з?им представляет значительный интерес замена сбора Табан аршан" водорастворимым экстрактом, обладающим аналогичной фармакологической активностью.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Санкт-Петербургского Химико -<{ермацев-тического института по проблеме 48.01 "Фармация" по разделу "Изучение лекарственной флоры" РАМН.

Цель настоящего исследования - фармакогностическое изучен«« сбора Твбан аршан" и его компонентов и разработка технологии водорастворимого экстракта для ванн с целью внедрения в научную медицину.

В задачи исследования входило : 1. Проведение фармакогностического исследования сбора "Твбан ар-

овн" и его компонентов, установление основных групп биологически активных соединения.

2. Выделение индивидуальных соединений из побегов мирикарш длиннолистной, в связи с почто полной неизученностью данного растения в химическом отношении, и идентификация их.

4. Разработка методик количественного определения основных групп действующих веществ в побегах мирикарии длиннолистной и в сборе Твбен вршн".

5. Составление карт ареалов растении, входящих в состав сбора, и определение возможных объемов заготовок.

6. Разработка проектов ВФС на траву полыни холодной, побеги мирикарии длиннолистной, побеги можжевельника сибирского, траву эфедр односемянной, сбор "Хвбан аршан".

5. Разработка технологии суммарного водорастворимого экстракта на основе сбора Табан аршан".

6. Проведение фотохимического анализа полученного экстракта и раз работка методов его стандартизации.

7. Проведение предварительных фармакологических исследований полу ченного экстракта.

8. Составление временной фармакопейной статьи и лвбораторно-техно логического регламента на экстракт.

Научная новизна:

Впервые проведено фармакогностаческое изучение 4 новых видое лекарственного растительного сырья из числа применяемых в тибетской медицине. Дана их ориентировочная фитохимическвя оценка, из) чен состав аминокислот. Определены морфологические и микроскопические признаки сырья и числовые показатели, необходимые для составления нормативно-технической документации на сырьё и сбор. Из побегов мирикарш длиннолистной выделены б природных фе-

ольных соединения, из которых А ндентифицированы с флавонолами верцетином, рвинетином, твмвриксвтином и иэокверцитрином, 2 отне-ены к галловой кислоте и метиловому эфиру 3-метокси-4,5-дигидрок-ибензойной кислоты..

Разработаны и включены в соответствующие разделы проектов вС методы стандартизации побегов мирикарии длиннолистной, сбора Табан аршан" и сухого водорастворимого экстракта "Табан аршн" ю содержанию флавоноидов.

Впервые разработана научно-обоснованная технология сухого во-;о растворимо го экстракта на основе многокомпонентного лекарствен-ого сборе для применения а бальнеологии.

ЛокаЭено ранозажизляющее и селатнвное действие экстракта при тсутствии токсичности.

практическая энa^a^^юcть работы. Впервые показана возможность замесы многокомпонентных растительных сборов сухими экстрактами для [аружного применения в бальнеологии. Оптимизированы условия полу-вния экстракта. Наработаны 5 партий сухого экстракта "Табан арен", который содержит те же Биологически активные вещества, что и Сор и показана воспроизводимость технологии экстракта.

На основании проведенных исследований разработаны проекты ВФС 1а "Побеги мирикарии длиннолистной", "Побеги можжевельника сибир-:кога", "Траву полыни холодной", "Траву эфедры односемянной", "Сбор "Табан аршн", "Сухой водорастворимый экстракт "Табан аршан".

Составлен лабораторный регламент на производство экстракта.

В результате экспедиционных исследований районов произраста-!ия в Бурятии четырех видов лекарственных растений, производящих :ырье для сбора "Табан аршан", определен их ресурсно-сырьевой потенциал, показана возможность обеспечения сырьем от дикорастущих ¡астений промышленного производства экстракта при его внедрении в

медицинскую практику.

Наличие сырьевой Сазы, фармакологическая активность экстракт! состав биологически активных веществ экстракта, аналогичный coctî ву сбора, позволяют рекомендовать экстракт "Табан ершен" для вне; рения в практическую медицину. Экстракт передан на доклинические испытания в Отдел тибетской медицины Е^рятского научного центра. Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены на объединенных заседаниях кафедр фармакогнозии, фармацевтической химии и аптечной технологии лекарств СПХФИ, Санкт-Петербург (1992 г, 1993 г, 1994 г.), на Всероссийской конференции "Химия и технология лекарственных веществ" (Санкт-Петербург, 1994 г). Фраг менты диссертации опубликованы в 4-х статьях. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (1 глава), характеристики материалов и методов (1 глава), материалов собственного исследования (5 глав), обсужд< ния результатов, выводов, списка литературы и 8 приложений. Рабо-излохена на ~î$4 страницах, иллюстрирована 47 таблицами, 3 спектр< граммами, 13 рисунками. Литературный указатель содержит 185 исто' ников, из них 22 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В обзоре литературы даны краткие сведения о применении ванн растительными добавками в тибетской и современной медицине, об и пользовании растений, входящих в состав сбора "Твбан аршан" в та бетской, монгольской, народной, научной медицине, а также о хими ческом составе растений и их фармакологическом исследовании. Предварительная <$итохимическая оценка компонентов сбора Твбан аршак" и водной вытяжки из всего сбора Из пяти компонентов сбора только багульник болотный являете официнальным видом; полынь холодная, можжевельник сибирский, эфе

ра односвжшкая срввнита/ько подробно изучэкы в хжйческом отколе- ' ним. Ке изучена жрикария дл«Нолстная. Ее следовало подвергнуть более детальному фотохимическому изучению. Кроме того, учитшввя влвшив географического факторе на содержание биологически вкЗДв-ных вежств, необходимо было определить их наличие в сырье, собранной на территории Забайкалья, а также выОрать группы биологически активных вевеств, приходных для стандвртмэвцм* сырья и комплексного водорвстеорюсго экстракте.

Ориенпфовочпй фшохтмвсю« анадоз компонентов сбора и

*

самого сбора проведен согласно сВчепржятым методжам. Обнаружено, что все.виды сцзья содержат аииюкислота, фенотьные кислэты, фла-вонсиды. Во всех компонентах, за исключением полми холодной, присутствует также дубильные везества. Азотсодержащие соеди::гння основного характера содержатся в побегах жржарж дакнолстной, траве эфедра односемянной*, кумаржы - б багульюке Солотнбм, полыни холодной; эфирные масла. - в бвгулзнике болотном, полжи холодной, можжевельнике сИЗирском. Эти группы биологически активных веществ обнаружены и в сборе. Полученные результаты представлены в табл. Г (Приложение 1).

Из обнаруженных групп >ш не наши в лггературе данных о составе ампокислот изучаемых наж растений, которые также могут оказывать фармакологический эффект. Поэтому было проведено определение состава аминокислот в исследуемых видах сьфья. Суму аминокислот подучим путем экстрагирования исследуемого сырья г Х-ноя хлористоводородной кислотой, извлечение исслвдоваж методом нисходящей бумажной хроматографии. Определение качественного состава ат-жжислот в исследуемых видах сырья показало, что их количество составляет от 3 до 14. При этой нанболыим разнообразием 6*июкис-лот отлччатся побеги мирнкарми дямжмйстной, трава полни холод-

ной, трава эфедры односемянной. Результата представлены в твбл. 2 (Приложение 2).

Фвриакогностичесхое изучение растительного сырья, входящего в

состав сбора Твбан аршан*

Сырье, входящее в состав сборе Табан аршан", за исключением багульника болотного, не относится к ((врмвкопейным видам, поэтому был проведен его полный <}врмакогностический анализ. Определены внешние и микроскопические признаки как основные критерии оценки подлинности сьрья и сбора. Числовые показатели, количественное содержание дубильных веществ, эфирных масел, экстрактивных веществ проведено согласно ГФ 11. Подобраны оптимальные условия для количественного определения эфирных масел в побегах можжевельника сибирского и траве полыни холодной. Количественное содержание сумм алкалоидов в траве эфедры односемянной проведено по методике, используемой для травы эфедры хвощевой (9С 45-525-72). Фермакогнос-тическое «следование указанных четырех видов сырья проведено . впервые. Разработанные нами числовые показатели рекомендованы для включения в проекты BJC на сырье и сбор. Разработка проектов BtC проведена в соответствии с требованиями ГФ 11 вып. 1 и 2, ОСТом 42-1-71 "Порядок разработки, согласования и утверждения нормативно-технической документации на лекарственные средства и лекарственное растительное сырье" и СТП 64-10-39-17-80.

Из всех объектов в химическом отношении наименее исследована мирикария длиннолистная. В побегах растения одной из основных групп действупяих веществ являются фенольные соединения.

В результате качественного изучения флавоноидных соединений методой двумерной хромвтогрвфии на бумаге в системах н-бутанол-ук-сусная кислота-вода,/ЕЭВ/ 4:1:2 и 15 Ж уксусная кислота обнаружено, что побеги мирикарии длиннолистной содержат не менее 17 инди-

видуальных флавоноидных совладений и 7 фенолъных кислот. Характер окраски пятен в УФ-свете до и после обработки различными диагнос-иирушими реактивами по схеме, предложенной Б. А. Бандшовой (1'965), позволяет предположить, что в основном, все флавоноидные соединения мзгут быть отнесены к производным флавонола.

Детальному исследованию с идентификацией выделенных соединений были подвергнуты флаеоноиды и фенольные кислоты.

Выделение сумм флввоноидов из надземных частей проводили последовательной экстракцией 40-, 70- и 95 % этанолом. Объединенные вытяжки упаривали в вакууме до водного остатка и обрабатывали пет-ролейным эфиром, а затем хлороформом для очистки их от смол, хлорофилла и других сопутствующих веществ. Из очищенных водных экстрактов сумму флввоноидов извлекали этилацетатом. Зтилацетатная и хлороформная фракции были использованы для выделения индивидуальных веществ. Схема выделения и разделения фенолъных соединений представлена на рис. 1 . .

С помощью препаративной бумвюгай, тонкослойной, адсорбционной колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте,-дробной кристаллизацией из хлороформной фракции выделили 3 агликона <А-1, А-г и А-3), из этилацетатной фракции -' гликозид (Г-1) и два производных галловой кислота (Д-1 и Д-2). ;

На оснойании качественных реакций; втом числе и реакции по Бривнту, было предварительно установлено, что три соединения, выделенные из хлороформной фракцйи, относятся к флавоноловым агликона»; соединение, выделенное из этилацетатной фракции относится к флавоноловым глйкозйДам. Для установления их структуры "использовали химические и фюико-химического методы анализа (определение " температуры плаваний Ьеществ, их полных ацетатов й смешнных проб со свидетелями, анализ продуктов щелочной деструкции и дезметили-

40 X этанол

70 X этанол >

ООъадаенный водно-спнртоаый экстракт

Отгонка растворителя

| Сгуцвнньй экстракт

Обработка хлорофорюн

Обработка

петролесьши

э#фоя

, о<««|еннш от сопутст-веиэств

Хло|

Водный остаток

— колонка 1

А-1

X

А-2

X

- Обработка .-/ зпишетвтон

Лпмсон*

Эпшаетапвя Фракция.

Л

Волный остаток не исследовался

—колонка 2

Г-1

Г-2

1 Г-3

Л-1 Л-2

Фвнол>ные кислот

Глжоэнды

Рис. 1 Схема выделения и разделения фенолнш соединений из побегов мфмаарж длиннолистной Кзгг1свг1а 1ояв±Го11а (1ШЛ.) Ногой).

ррваша, даншм УФ-спектроскопии, элементного анаяоа и т. д.). О прцтд юности флваоноидных веществ к группе флввонолоа свидетель стеулг максидош поглоиения в области I от 365 до 374 ни; в оОлвс ТИП от 250 до 258 нк. Имнпчисац» аглжона и сахарного компонента гмсоэша провоями на основа»« анализа продуктов кислотнс

го гидролиза, а также по данным УФ- и ИК-спектроскопического анализа. Он отнесен к 3-0-монозидам. Для определения конфигурации гликозидноя связи использовали результаты ферментативного гидролиза и ИК-спектроскопии. В табл. 3 (Приложение 3) представлены некоторые физико-химические характеристики выделенных соединений. Выделенные агликоны идентифицированы как кверцетин, ремнетин и твма-риксетин, гликозид - как иэокверцигрин.

Для идентификации производных фенольных кислот были использованы температуры плавления этих соединений, смешанных проб со свидетелями, значения ЯГ на хрокатограммах, результаты качественных реакций в сравнении со свидетелями, данные УФ-, ИК -спектроскопии, элементного анализа. В табл. 3 (Приложение 3) представлены физико-химические характеристики выделенных соединений. Были идентифицированы галловая кислота и метиловый эфир 3-метокси-4,5-дигидрок-сибензойной кислота-

Анализ химического состава сбора "Табан аршан" и его компонентов показал, что все они содержат фенольные соединения - флаво-ноиды и фенольные кислэты, обладающие широким спектром фармакологического действия. С их присутствием, вероятно, связано и лечебное действие ванн на основе сбора "Табан врман". Поэтому мы сочли необходимым для характеристики побегов мирикарии длиннолистной, сбора и сухого экстракта ввести определение количественного содержания суммы флавонондов как важного показателя стандартизации этих объектов по основной группе действующих веществ.

Для определения количественного содержания флввоноидов разработаны спектрофотометрические методики, основанные на способности флеаоноидных соединений образовывать комплексы с хлоридом алюминия, обладапоие значительной интенсивностью поглощения в УФ-облас-ти: Установлено, что вгликоновый состав представлен в основном

производим! флввонолов, поэтому максимум поглощения регистрировала в сравнении с раствором кверцетина-стандарта, выпускаемого промышленностью. Установлено оптимальное время и концентрация кислоты в спирте для процесса гидролиза. С целью очистки от сопутствующих веществ, мешающих определению в случае со сбором "Габен аршан" и экстрактом. полученный гидролизат упаривали после нейтрализации и сумму флавоноидов извлекали этилацетатом. Эти методики просты в исполнении и легко воспроизводимы. Они рекомендованы для включения в проекта временных фармакопейных статей на лекарственное сырье и экстракт на основе сбора. Для побегов мирикарии длиннолистной содержание флавоноидов должно быть не менее 0,5 %, для сбора не менее 0,3 %, для экстракта не менее 0,5 X.

Для определения широты произрастания растений, сырье которых входит в сбор, были составлены карта ареалов распространения полыни холодной, можжевельника сибирского, мирикарии длиннолистной на территории России. Все виды занимают значительные территории.

Для решения вопроса обеспеченности сырьем производства экстракта ТаОан аршан" нами проведено определение урожайности сырья исследуемых растений с использованием единой методики, разработанной сотрудниками НПО "ВИЛАР" и СТОИМ. Урожайность определяли методом учетных площадок. Она составляет 37-47 кг/га для полыни холодной, 100-600 кг/га для мирикарии ддтнолистной, 540-658 кг/га для можжевельниса сибирского и 60-73 кг/га для эфедры односемянной сухой массы.

Полученные результаты указывают на значительную сырьевую базу исследуемых видов на территории Бурятии и обеспеченность сырьем от дикорастущих видов промышленного производства сухого экстракта на основе сбора "Чабан аршан".

Технология водного извлечения на основе сбора "Табан аравн" и

его <$итохимический анализ.

Анализ традиционных технологий водных извлечений из сборов, применяемых тибетскими ламами-лекарями в бальнеологической практике^ показал, что, как правило, вытяжка готовится из всего сбора в целом. При решении вопроса получения водорастворимого экстракта для ванн надо было проведено сравнение двух вариантов технологии: получение экстракта из всего сбора в целом и получение индивидуальных извлечений из отдельных компонентов сбора с их последующим объединением.

В обоих случаях использовались одинаковые параметры, способные повлиять на качество приготовляемых экстрактов. Измэльценность сырья составляла 3 мм, а качестве экстрагента использовали воду очищенную. Вытяжки получали, моделируя методику, описанную в классическом руководстве по тибетской медицине.

Полученные вытяжки подвергнуты качественному и количественному фотохимическому анализу.

Результата качественного анализа, проведенного согласно методикам, использованным при анализе сырья и сбора, свидетельствуют о том, что в суммарных вытяжках, независимо от способа приготовления, присутствует один и тот же набор биологически активных веществ: дубильные вещества, флввоноиды. аминокислоты и фенолокислоты. Найдено, что в вытяжках, полученных обоими методами содержится не менее 27 флввоноидных соединений, 17 фенолокислот, 7 аткжис-лот, которые хроматографически идентифицированы с П, Ь-лейцином, Ь-пролином, В.Ь-валином, аминоуксусной кислотой, 1-гистидином, Ь-глутамином, Ь-ергинином.

Критериями количественной оценки качества экстрактов, полу-

ценных двумя способами, служили количественное содержание дубильных и экстрактивных веществ. Количественное содержание дубильных веществ и масса сухого остатка в водной вытяжке, приготовленной из сбора в целом, выше. Технология водного извлечения из всего сбора менее трудоемка и более экономична. Поэтому при получении в дальнейшем водорастворимого экстракта на основе сбора Табан аршан" водную вытяжку получали из всего сбора.

Для определения оптимальных условии извлечения биологически активных веществ из исследуемого сбора нами изучено влияние различных факторов на процесс экстрагирования. При этом было отобрано 5 факторов, оказывающих влияние на процесс экстракции ( табл. 4 ).

Таблица 4

Характеристика переменных факторов, влияющих на процесс экстрагирования биологически активных веществ из сбора.

Факторы

Уровни Измельчен- Темпера- Гидро- Продолжи- Количество

ность сырья тура эк- модуль тельность экстракция

(мм) стракции Го процесса экстракции

/А/ /в/ /С/ (мин.) /Д/ /Е/

1 2 70 1:10 30 1

2 3 80 1:20 45 2

3 5 90 1:40 60 3

4 7 95 1:50 90 4

5 10 100 1:70 120 5

Критериями оценки качества получаемых вытяжек служили количество извлекаемых экстрактивных и дубильных веществ (в X).

Для оптимизации условий экстрагирования биологически активны»

веществ из сбора Табан аршан" был использован метод латинского квадрата с построением плана 5x5.

Для установления значимости влияния факторов был проведен дисперсионный анализ результатов эксперимента. При этом было установлено, что наиболее существенными оказались факторы А (Г =9,4) и Е (Г =30,15), далее следует фактор С (Т -3,9).Что касается факторов В и Д, то они оказались менее значимыми (Г - 1,5). Уровень значимости составил Л. =0,05.

Наиболее высокий выход дубильных и экстрактивных веществ наблюдался при условиях сочетания факторов А^С^д^, т. е. когда измельценность сырья составляла 3 мм, температура процесса экстракции 95*"Ь, соотношение сырья и зкстрагента 1:20, оптимальное число экстракций свежими порциями зкстрагента - два при общей продолжительности процесса экстракции два часа.

Параметры, полученные в результате оптимизации технологии экстракта, были в дальнейшем использованы при наработке сухого водорастворимого экстракта в лабораторных условиях и составлении лабораторного регламента.

Технологическая схема процесса представлена на рис. 2

Полученный экстракт во всех случаях представляет собой порошок темно-коричневого цвета, горького вкуса, характерного запаха, гигроскопичен. Экстракт легко растворим в холодной воде, очень легко в горячей воде, плохо в этиловом спирте и хлороформе. Всего по этой технологической схеме было наработано 5 партий экстракта.

Для стандартизации полученного экстракта были.определены такие показатели, как растворимость препарата в воде очищенной, содержание влаги, наличие тяжелых металлов, количественное содержание дубильных веществ и флавоноидов. Для количественного определе-

Рис. 2 Технологическая схеме производства сухого водорастворимого экстракта из сбора "ТвОен ершен*.

ния суммы флввоноидных соединений в экстракте использована спект-рофотометрическая методика, разрвОотвнная нами для сбора "ХвСен аривн", с небольшими изменениями. Анализу были подвергнута все полученные партии экстракта. Образцы всех партий содержат влагу в количестве от 1,4 до 2,0 X; флввоноиды от 0,70 до 0,74 X; дубильные вещества от 20,9 до 22,6 X, величина {Я колеблется в пределах от 5,22 до 5,30.

Для определения сроков годности партий экстракта, полученных в лабораторных условиях, руководствовались требованиям Временной инструкции 42-2-82 по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных веществ. Для обеспечения максимального срока годности экстракта его упаковывали в банки с винтовым горлом для лекарственных средств по ОСТ 64-2-71-80 из темного стекла с полиэтиленовой прокладкой, с пластмассовой крышкой по ОСТ 64-2-218-84, залитые парафином, вместимостью 50 мл. Экстракт хранили в темном прохладном месте при температуре не выше 20°С и влажности воздуха в помещении 60-65 3. Масса экстракта составляла 20,0 г. Проверку показателей экстракта проводили по истечении каждых 6 месяцев хранения.

Полученные результаты свидетельствуют о воспроизводимости основных показателей качества экстракта (содержание действующ« веществ, влажность, рН водного раствора) по истечении 12 месяцев естественного хранения.

Фармакологические исследования водорастворимого экстракта

Табвн ардюн"

Фармакологические исследования проводились под руководством доктора медицинских наук, профессора I.E. Лесиовской на кафедре

фармакологии СПХФИ.

Для проведения фармакологических исследований были использованы полученные в лабораторных условиях партии сухого водорастворимого экстракта "Табан аршн".

Опыты проводились на белых нелинейных крысах-самцах и мышах. Экстракт применяли в виде водного раствора. Были определены средние летальные дозы, которые для экстракта "Табан аршвн" составили 4000 мг/кг. Полученные данные свидетельствуют о том, что исследуемый препарат нетоксичен.

Рано заживляющее действие экстракта проверяли на модели линейной кожной раны крысы.

Для оценки ранозаживляющей активности экстракта были использованы две лекарственные формы - наружная, в виде 0,1 % мази с экстрактом на дифильной основе (ланолин безводный - вазелин 2:8) и внутренняя - 1 X микстура, вводимая в дозе 250 мг/кг. В качестве препаратов сравнения были использованы мазь "Флуцинар", мазь и желе "Солкосерил", широко применяемые в медицинской практике для заживления ран различного происхождения.

Результаты эксперимента свидетельствуют о выраженной раноза-живлянцей активности экстракта. При наружном способе применения он оказался более эффективен, чем мазь "Солкосерил", желе "Солкосерил'*, превышая их активность на 131 Ж, несколько уступает по эффективности мази "Флуцинар". Однако, при внутреннем применении значительно превосходит мазь и желе "Солкосерил" - на 209 %, а мазь "Флуцинар" на 10 X.

При выполнении опытов по оценке острой токсичности Было обнаружено, что экстракт способен угнетать ИНС. Для решения вопроса характера и степени действия исследуемого экстракта на центральную

нервную систему бшн поставлены две серии экспериментов. Исследовали влияния экстракта на это логические профкти животных, на их двигательную и поисковую активность, а также на скорость наступления и продолжительность гексенвлзвого сна. Опыты проводили на белых нелнеяаа крысах-самцах.

Исследование двигательной и поисковой актшности животных проводили, применяя метод открытого поля. Водный раствор экстракта вводили внутрибрпвмно. Полученные денные свидетельствуют о том, что сухой водорастворимый экстракт "Чабан аршвн" в дозе 100 мг/кг массы тела крыс на 34 * снижает ориентировочную активность, на 383 поисковую активность и на 35Х эмоциональную лабильность у крыс.

Вшяние экстракта на скорость наступления и продолжительность гсксскзязгого ска оценивали го оеэгпринятой методике с использованием гексенала в дозе 60 к'Jw. Экстракт вводили внутрибршинно. При этом было установлено, что исследуемый экстракт увеличивает продолжительность гексеналового сна на 81 % при введении в дозе 100 мг/кг , на 65 X - в дозе 10 мг/кг; также увеличивает продолжительность патентного периода на 133Х - в дозе 100 мг/кг, на 11 % в дозе 10 tr/кг.

Результаты обеих серде экспериментов показывают, что экстракт "ХаОан аршвн" окаэыввет выраженное депремирувдве действие на центральную нервную систему.

Для углубленных фармакологических исследований экстракт передан на доклмомЬские испытания в Отдел тибетской медицины Бурятского научюго центра.

В заключение следует отметить, что проведенные нами исследования подтверждает рационажность композиций тибетских сборов для ванн и возможность замены этих сборов сухими водорастворимьми эк-

страктвии Солее удобными в применении, чем сборы. —; ,-в ы В О л ы

1:. Впервые проведено, комплексное фармакогностическое исследование составных частей пятикомпонентного лекарственного сбора "Габен аршвн"., используемого в тибетской медицине в бальнеологии. Разработана технология сухого водорастворимого экстракта на основе этого «сбора с целью внедрения в практическую медицину.

2. Проведен ориентировочный фигохимический анализ компонентов сбора "Табан арпан", а твкхе самого сбора. Во всех видах обнаружен богатый состав аминокислот, наличие дубильных веществ, флавоноидов и фенольных кислот. Количественное содержание дубильных веществ и флавоноидов рекомендовано в качестве основных показателей для стандартизации,.сбора и сухого экстракта.

: 3. Из побегов мирикарии длиннолистной выделены и идентифицированы 6 фенольных соединений, из них 4 представлены флавонолами (кверцетин, рамнетин, тамариксетин, изокверцитрин); Z - феноло-кйслотвмн (галловая кислота и метиловый эфир 3-метокси-4,5-дигид-роксибензойной кислоты). Все соединения выделены из данного вида впервые.

- 4. Предложена спектрофотометрическая методика количественно-го определения флавоноидов в побегах мирикарии длиннолистной, сбо-ре"1абан аривн". Методики включены в соответствующие разделы проектов ЭФС.

5. Осуществлен макроскопический и микроскопический анализ сборами сырья,»входящего в его состав, установлены диагностические признаки«нечисловые показатели. На основании проведенных исследований разработаны НТД - проекты В4С: на побеги мирикарии длиннолистной, побеги можжевельника сибирского, траву полыни хо-

лодной, траву эфедры односемянной, на сбор "Табан аршвн".

6. Составлены ареалы трикврии длиннолистной, можжевельника сибирского, полыни холодной на территории России. Также определена урожайность сырья исследуемых видов. Она составляет 100-500 кг/га для мирикарии длиннолистной; 540-658 кг/га для можжевельника сибирского; 37-47 кг/га для полыни холодной; 60-73 кг/га для эфедры односемянной. Сырьевая база на территории Бурятии значительна. При организации промышленного производства сухого экстракта оно может быть обеспечено сырьем от дикорастущих видов.

7. Впервые разработана технология сухого водорастворимого экстракта на основе многокомпонентного лекарственного сбора для применения в бальнеологии, при этом установлена целесообразность получения водной вьггяжки из всего сбора. .

8. На основе экспериментальных исследований с использованием математического планирования определены оптимальные условия получения водорастворимого экстракта "Твбан ершен". Иэмельценность сырья 3 мм, температура процесса экстракции 95°С, соотношение сырья и экстрагента 1:20, оптимальное число экстракций свежими порциями экстрагента - два, общая продолжительность процесса экстракции два часа.

9. В лабораторных условиях получены 5 партий водорастворимого экстракта и разработан лабораторный регламент производства сухого экстракта. Установлены числовые показатели качества экстракта, рекомендованные для его стандартизации.

10. Определены условия и сроки хранения экстракта..

11. Проведены предварительные фармакологические исследования экстракта на.животных. Экстракт нетоксичен, ЕВзд составляет

4000 мг/кг массы животного, обладает выраженным ранозаживляицим и

го.

селвтшнки действием.

По теме днссврташм опублкованы следущие статьи:

1. Семенове Л. С., Саканян £. И. Белова К. Ф., Нолдавер Б. Л. К фитохинчвекому исследован») тибетского сбора для ввнн "Табан ершен"// СО. тез. межвузовской и 49-ой н*у*«о-практической конферен-цж профессорско-прелодваатальскоро состава. - Пермь, 1993. -

С. 17-18.

2. Семенова Л. С., Елиюва К. Нолдавер Б. Л., Саканян I. И. ЕЬ/ымров Б. Г. Лекарственные растений • бальнеологии // Растительные ресурсы. 1993. - вып. 1. - С. 83-88.

3. Семенова Л. С. Флавонсидные соедменда побегов мири<арии длинно астной // Растительные ресурсы. 1993. - вып. 2, С. 40-42.

4. Саканян I. И., Семенова Л. С.. Емюва К. Ф., Нолдавер Б. Л. Исследование побегов иирикарии длиннолистной // Материал* Всероссийской научюя конференции "Хммя и технология лекарственных ве-■0018". Санкт-Петербург, 1994. - С. 114.

Приложение I Таблица I

Результаты предварительного фотохимического анализа растительного сырья, ^ходящего в состав сбора "Табан араан"

Ш ¡Группы биологически :11обеги багуль- ¡Побеги мири- :Побеги мож-п/п:активных соединений:ника болотного :карии длин- ;жевельника : : ¡нолистной -.сибирского

Трава полый; : Трава эфедры холодней :односемянной

I. Азотсодержащие соединения основного характера

£. Антраценовые производные

3. Дубильные вещества

4. Кардютокические гликозидь:

5. Кумарины

6. Сапонины

7. Фенольные кислоты

8. Флавоноидьг

9. Аминокислоты

О О

+-Н

О

+4

О

О

О

О О

О

о

о

о о

о о о

о о

Примечание: Знаки обозначают: "+++" - значительное содержание; " ++ " - реакция отчетливая;

" + " - следа; " 0 " - группа соединений не обнаружена

Приложение II Таблица 2.

Результаты исследования аминокислотного состава компонентов сбора "Табан аршан"

№ Наименование -.Окраска БУВ : БУВ :Побеги :Побеги :Побеги :Трава Трава

п/п:аминокислот :пятен 4:1:1:4:1:2 :багульника:ми рикарии :можжевельника:полыни эфедры

• • ; .•болотного :длиннолистной:сибирского ¡холодной односемянной

12 3 4 5 6 7 8 9 10

I. - лейцин фиол. 0,31 0,39 0 + 0 0 0

2. Ь -изолейцин фиол. 0,28 0,30 0 + 0 + 0

3. ь - пролин оранж. 0,19 0,24 0 + 0 + +

4. - валин розов. 0,26 0,33 0 + 0 + 0

5Д)»Х| -метионин фиол.-кор. 6. -треонин фиол. 0,23 0,33 0 + 0 0 0

0,14 0,18 + + 0 0 0

7. Ь-глуташшо- ф вая кислота * 0,14 0,18 + + 0 0

8. 1)#ь -аспара- 0,10 0,13 0

гиновая кис- фиол. + 0 + +

лота

9. в,!- Л -аланин фиол. 0,19 0,21 + 0 + +

10. - серин фиол. 0,11 0,13 0 + + + +

II. аминоуксусная кислота фиол. 0,12 0,14 0 + 0 + 0

12. - лизин фиол. 0,15 0,08 0 + 0 0 0

13.Ь - гистидин фиол. 0,05 0,09 0 0 0 0 0

14.Ь - аспарагин фиол. 0,06 0,09 0 0 + + +

15.Ь - глутамин фиол. 0,08 0,12 0 + 0 + +

Продолжение таблицы .2.

16. Ь - аргинин

17. D,L _ $ -фенил- I -аланин

18. D»L -триптофан фиол.

фиэл. фиол.

4 5

0,05 0,12

0,26 0,27

0,21 0,23

+

0 О

+

о о

о о о

о о о

10 +

о о

Всего обнаружено:

14

Примечание: " + " установлено наличие аминокислоты в исследуемом виде, "О " аминокислота не обнаружена

Приложение III Таблица 3

Физико-химические характеристики фенольных соединений мирикарии длиннолистной

Исследуе- :Темпе-:По-:_УФ-спектральные характеристики, нм_

:то же + хлорид :а;ломиния +хло-:ри^говодород-:ная кислота

Aj /гама- 259- I 253 256 +3 256 +3 279 +26 260 1- 7 260 + 7

риксетин 260 П 373 382 +9 37Ö +5 422 +49 425 +Ь2 422 +49

Ag /квер- 309- I 255 270 +15 260 +5 250 . - 5 270 +15 265 +10

иетт/ 310 п 374 390 +16 390 +16 320 -54 430 +56 430 +56

A3 /рам- 290- I 255 255 0 270 +15 270 +15 263 +6 263 +8

нетин/ 291 п 372 360 +6 ЗШ i-IS 335 -37 425 +53 425 +53

Г-1 /изо- 217- I 258 275 +17 265 +7 275 +17 273 +15 270 +12

кверцигрин 2X8 п 365 380 +15 363 +18 400 +35 424 +59 364 -I

Д-1/галло- I 270 260 -10 295 +25 275 +5 - - - -

237 вая кислота п

Д-2 /мети- 117 I 260 279 -I 325 +45 305 +25 - - - -

ловый эфир п - - - - - - - - - - -

3-метокси-

4,5-диокси-

бензойной

ли

:то же +

щества :ш:ав- :сь1;Мол- раст: ацетат •ления .пэг.зор в :натрия

:ще-:этаноле : :ния: :

°С

:то же + :то же + :то же +

:ацетат нат:этилат - :хлорид

:рия+борная:натрия :алюминия :к ислота :

кислоты