Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование надземной части шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi)

На правах рукописи

Чирикова Надежда Константиновна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ШЛЕМНИКА БАЙКАЛЬСКОГО (Scutellaria baicalensis Georgi)

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

□□3 1S9573

Улан-Удэ - 2ии /

003159573

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН

Научный руководитель доктор фармацевтических наук,

профессор

Асеева Тамара Анатольевна

Официальные оппоненты доктор фармацевтических наук,

профессор

Маняк Виктор Андреевич

кандидат фармацевтических наук Ломбоева Светлана Сергеевна

Ведущая организация

Всероссийский институт лекарственных и ароматических растений

Защита состоится " 25 " октября 2007 г. в Ю00 час. на заседании диссертационного совета К 003.028.01 в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г.Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Бурятского научного центра СО РАН

Автореферат разослан "_" сентября 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук

Хобракова В.Б.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Поиск новых лекарственных растений и создание на их основе фитопрепаратов остаются в настоящее время одной из основных задач фармации. В частности, большое значение имеют исследования по разработке растительных препаратов, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний печени и желчевыводящих путей, сердечно-сосудистой системы и воспалительных процессов.

В этом отношении перспективным является исследование лекарственных растений из арсенала тибетской медицины. К числу таких растений относится шлемник байкальский (,Scutellaria baicalensis Georgi, сем. Lamiaceae), надземная часть и корни которого используются тибетской медициной в терапии гепатобилиарной и сердечно-сосудистой систем, а также при воспалительных заболеваниях. Корни S. baicalensis входят в регистр лекарственных средств России (Radix Scutellariae baicalensis № 70/729/1 [F] 1 Ф.Г.), как миотропный спазмолитик, анксиолитическое, седативное и снотворное средство.

Корни S. baicalensis - ценное лекарственное сырье с ограниченной в пределах России сырьевой базой. При создании лекарственных средств из корней S. baicalensis следует учитывать то, что заготовка этого сырья может привести к истощению популяций, поэтому нами предлагается использование в качестве сырья надземной части растения. В связи с возможностью использования надземной части S. baicalensis в качестве ценного лекарственного сырья, возникает необходимость его фармакогностического изучения. Химический состав надземной части S. baicalensis изучен недостаточно. Все вышесказанное явилось предпосылкой к выбору надземной части S. baicalensis в качестве объекта исследования.

Цель и задачи исследования. Целью исследования является ботанико-фармакогностическое изучение надземной части S. baicalensis, определение химического состава и показателей качества надземной части, разработка способа получения и стандартизация антиоксидантного средства на ее основе.

В задачи исследования входило: -изучить ресурсы природных ценопопуляций S. baicalensis-, -выявить анатомо-диагностические признаки надземной части S. baicalensis и исследовать анатомическое строение цветков, листьев и стеблей;

-определить показатели качества надземной части S. baicalensis',

-определить качественный состав и количественное содержание

биологически активных соединений надземной части & багса/еши; -разработать методику количественного определения суммарного

содержания флавоноидов в надземной части Ьшса1егий\ -разработать способ получения экстракта шлемника байкальского сухого;

-разработать нормативную документацию на лекарственное сырье -траву ЬмсЫегии и сухой экстракт.

Научная новизна работы. Для 5. Ьа1са1еп.чм выявлено 5 новых природных ценопопуляций, определен их возрастной состав и ресурсы. Изучено анатомическое строение надземной части 5. Ьакакт^. Исследован качественный состав и определено количественное содержание биологически активных веществ в надземной части 5. Ьтса1ет1з. Изучен состав органических кислот: выделены и идентифицированы винная, лимонная, яблочная, малоновая, янтарная и фумаровая кислоты. В составе свободных углеводов установлено присутствие глюкозы, галактозы и сахарозы. Из комплекса водорастворимых полисахаридов выделено 3 новых полимера (8В\\М, 8ВУ/-2, 8ВУ/-3), относящихся к классу арабино-3,6-галактанов. Выделены и охарактеризованы пектиновые вещества и гемицеллюлозы. Исследован элементный состав надземной части и корней & ¿«/са/едуи. Установлено наличие корреляционной связи флавоноиды - элементы. Изучен групповой состав флавоноидов; установлено присутствие скутеллярина, гиспидулина, лютеолина, апигенина и их гликозидов. Проведено количественное определение содержания флавоноидов в образцах надземной части 5. Ьтса1етЬ из 18 ценопопуляций Читинской области, а также в различных органах исследуемого вида. Определен состав свободных и связанных аминокислот, фотосинтетических пигментов (каротиноиды, хлорофиллы). Установлено наличие алкалоидов (холин, стахидрин), тритерпеновых соединений (урсоловая кислота, р-ситостерин), антоцианов (дельфинидин и его гликозиды) и фенолокислот (феруловая, хлорогеновая, розмариновая и кофейная).

Практическая значимость работы. Выявлены наиболее продуктивные ценопопуляции 5. Ьшса1етк и определены ресурсы данного вида растения. Установлены критерии подлинности и качества лекарственного сырья, выявлены анатомо-диагностические признаки и определены товароведческие показатели. Разработана методика количественного определения содержания флавоноидов в надземной части 5. ¿й/са/е/ии и экстракте шлемника байкальского сухом.

Разработан способ получения средства (сухого экстракта), обладающего антиоксидантной активностью.

Разработаны Инструкция по сбору и сушке лекарственного сырья, проекты Фармакопейных статей предприятия на траву шлемника байкальского, экстракт шлемника байкальского сухого.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной конференции Monos-15 (Улан-Батор, 2005); научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д.мед.н. Базарона Э.Г. (Улан-Удэ, 2006); II Международном симпозиуме по химии растительной медицины (Улан-Батор, 2006); Всероссийской конференции с международным участием "Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии" (Улан-Удэ, 2006); 7 Международном симпозиуме по химии природных соединений (Ташкент, 2007).

По результатам исследований опубликовано 7 работ, в том числе 2 статьи в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, которые отражают основное содержание диссертационной работы.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Настоящая работа выполнена в Отделе биологически активных веществ в соответствии с программой и планом научно-исследовательских работ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по проекту № 146 "Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация", утвержденному президиумом СО РАН.

На защиту выносятся результаты изучения ресурсов, анатомического строения, данные химического исследования биологически активных веществ, их сезонной динамики накопления и методы оценки качества сырья и сухого экстракта надземной части S. baicalensis.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 180 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, шести глав экспериментальной части, общих выводов и приложений, 63 таблиц, 60 рисунков, списка литературы, включающего 151 источника, из которых 26 иностранных.

Во введении сформулированы актуальность темы, новизна и практическая значимость работы, цели и задачи исследования.

В первой главе приводится ботаническое описание шлемника байкальского, его ареал и ресурсы, данные литературы по

химическому составу и применению в народной и тибетской медицине, а также сведения о фармакологической активности S. baicalensis.

Во второй главе дана характеристика объектов и приведены использованные методы исследования.

Третья глава посвящена изучению возрастного состава и ресурсообеспеченности природных ценопопуляций S. baicalensis.

В четвертой главе приводятся результаты фармакогностического исследования: определены анатомо-диагностические признаки, проведен товароведческий анализ и дана предварительная фитохимическая характеристика надземной части S. baicalensis.

В пятой главе изложены результаты экспериментальных исследований по выделению и идентификации органических кислот, углеводов, аминокислот, алкалоидов, фенольных соединений, фотосинтетических пигментов, тритерпеновых соединений и элементного состава S. baicalensis. Представлены результаты по изучению сезонной динамики накопления основных групп БАВ в надземной части S. baicalensis', исследованию химического состава стеблей, листьев, цветков и корней S. baicalensis; раскрыто влияние химического состава почвы на химический состав надземной части S. baicalensis.

Шестая глава содержит данные по разработке методов оценки подлинности сырья и методики количественного определения содержания флавоноидов в надземной части S. baicalensis.

В седьмой главе приводятся результаты исследований по разработке способа получения экстракта шлемника байкальского сухого, а также определения критериев подлинности, химического состава и срока годности.

В приложении включены копии нормативных документов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служили надземная и подземная части Scutellaria baicalensis Georgi, собранные в 2005-2007 г. в Читинской области в разные периоды вегетации. При изучении возрастной структуры использовали общепринятые методики (Работнов,1950; Ценопопуляции... 1976, 1988; Заугольнова, 1982; Злобин, 1989); для оценки возрастной структуры ценопопуляций S. baicalensis были рассчитаны индекс возрастности, эффективности, восстановления и замещения, а также индекс старения (Глотов, 1998; Жукова, 1995; Животовский, 2002). Микропрепараты для анатомического анализа готовили по общепринятым методикам (Государственная..., 1989;

Джапаридзе, 1953). Определение товароведческих показателей и показателей качества проводили согласно ГФ XI (Государственная..., 1989).

Аналитическую хроматографию осуществляли на бумаге (FN-2, 4, 12, 16), в тонком слое (ВЭТСХ пластины Sorbfil, Армсорб), Сефадексе G-100. ВЭЖХ проводили на жидкостном хроматографе Gliston. Препаративную хроматографию проводили на полиамиде, Сефадексе G-100, бумаге FN-8, катионите КУ-2-8 (Н+-форма).

Температуру плавления исследуемых соединений определяли в запаянных капиллярах на приборе для определения температуры плавления IA-9100. Оптическое вращение определяли на поляриметре Coers, 1 = 10 см при 20°С. Потенциометрический анализ проводили на Ионометре универсальном ЭВ-74 со стеклянным хлорсеребряным электродом. Спектры поглощения в УФ и видимой областях снимали на приборах Cecil 2011 в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. ИК-спектры регистрировали на ИК-Фурье спектрометре Perkin-Elmer на стекле КРС-5. 13С ЯМР-спектры получены на ЯМР-спектрометре Varian-УХК 500S, рабочая частота 125.7 МГц и J=140 Гц, спектры сняты в дейтероводе и дейтеродиметилсульфоксиде. Эмиссионно-спектральный анализ проводили на спектрографе ДФС-8.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Ресурсоведческое исследование надземной части Scutellaria baicalensis Georgi

В изученных ценопопуляциях (ЦП) S. baicalensis встречается в гмелинополынно-осоково-разнотравных (ЦП-1), нителистниково-чиевых (ЦП-2), осоково-пионовых (ЦП-3), осоково-полынно-разнотравных (ЦП-4), а также чиево-холоднополынных ассоциациях (ЦП-5). Видовая насыщенность фитоценозов колеблется от 20 до 38 видов высших растений. Обилие S. baicalensis по шкале Друде колеблется от sol до sp.

Определенное соотношение возрастных групп в ЦП дает достаточно четкое представление о жизненном состоянии популяции, ее способности к самовоспроизведению и перспективах развития. По составу онтогенетических групп ЦП S. baicalensis по классификации Т.А. Работнова нормальные, полночленные. Анализ возрастной структуры ЦП S. baicalensis показал, что возрастные спектры, в основном, одновершинные. ЦП-1 и ЦП-3 можно отнести к молодым, нормальным ценопопуляциям. В ЦП-2 также преобладают генеративные растения, но по сравнению с другими онтогенетическими группами данная ценопопуляция имеет

центрированный спектр с максимумом на группу средних генеративных растений. В ряде случаев наблюдаются бимодальные спектры (ЦП-4 и ЦП-5).

Согласно классификации "дельта-омега" ЦП распределились следующим образом: переходные - ЦП-1 и ЦП-3 близки к зреющим популяциям со = 0.64-0.65, Д - 0.37-0.38; ЦП-2 близка к зрелым популяциям ю = 0 51, Д = 0.7; зрелые - ЦП-4 со = 0.71, Д = 0.49; стареющие - ЦП5 ю = 0.72, Д = 0.56.

Изучение онтогенетической структуры ЦП Читинской области показывает стабильность формы возрастных спектров с доминированием генеративных особей (63.5%), но устойчивость S. baicalensis в разных растительных сообществах неодинакова, о чем свидетельствует разное соотношение молодых, средневозрастных и старых генеративных особей. В ЦП-1 и ЦП-3 наблюдается наиболее высокая общая плотность по сравнению с другими ЦП (6.30 и 4.99 экз./м2, соответственно) и большее число генеративных особей (3.90 и 2.96 экз./м2, соответственно). Большое количество генеративных особей вида повышает репродукцию, т.к. S. baicalensis размножается только семенным путем. Урожайность надземной части S. baicalensis в исследованных ЦП варьирует в пределах 11.95+2.30 г/м2 и 26.87±4.37 г/м2. Биологический и эксплуатационный запас надземной части S. baicalensis в среднем составляет 81.82+2.46 кг и 56.41±2.58 кг соответственно. Средний объем ежегодных заготовок наиболее продуктивной ценопопуляции ЦП-3 равен 22.66 кг на 0.75 га. Учитывая особенности онтогенеза изучаемого вида, рекомендуем производить сбор сырья путем срезания надземных побегов, оставляя нижнюю часть побега с почками возобновления. Периодичность заготовок на одном и том же месте не должна превышать одного раза в 5 лет.

Фармакогностическая характеристика надземной части Scutellaria baicalensis Georgi.

При проведении анатомического исследования надземной части S. baicalensis выявлен ряд анатомо-диагностических особенностей: лист - устьичный аппарат диацитного типа, коленчатые и простые многоклеточные волоски с расширенным основанием и заостренным концом, эфиромасличные железки с 6-8 выделительными клетками; цветок - головчатые волоски и сосочковидные выросты 2 типов: гладкие и со складчатой кутикулой, средняя часть эпидермиса нижней губы венчика состоит из прямоугольных неизвилистостенных клеток;

стебель - проводящая система пучкового типа, количество основных проводящих пучков равно четырем, простые волоски.

Установлены следующие показатели качества лекарственного сырья. Цельное сырье. Потеря в массе при высушивании не более 10%; золы общей не более 10%; золы, нерастворимой в 10% кислоте хлористоводородной, не более 5%; листьев побуревших и почерневших не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, не более 5%; органической примеси не более 2%; минеральной примеси не более 0.5%.

Измельченное сырье. Потеря в массе при высушивании не более 10%; золы общей не более 10%; золы, нерастворимой в 10% кислоте хлористоводородной, не более 5%; побуревших и почерневших кусочков листьев не более 5%; частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм, не более 5%; органической примеси не более 2%; минеральной примеси не более 0.5%.

Порошкованное сырье. Потеря в массе при высушивании не более 10%; золы общей не более 10%; золы, нерастворимой в 10% кислоте хлористоводородной, не более 5%; частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, не более 10%.

По результатам предварительного фотохимического исследования в надземной части S. baicalensis установлено наличие алкалоидов, аминокислот, белков, дубильных веществ, иридоидов, каротиноидов, полисахаридов, тритерпеновых со е д й не ri и й !, : ку м ар и н о в >: флавоноидов и свободных углеводов. Производные антрацена, катехинов и сердечные гликозиды не обнаружены.

Химическое изучение надземной части Scutellaria baicalensis GeorgL

Органические кислоты. В результате хроматографического анализа (БХ) водного извлечения после обработки катионитом в надземной части S. baicalensis обнаружено шесть веществ, дающих положительную реакцию с бромкрезоловым зеленым. При сравнении хроматографической подвижности компонентов с таковой стандартных образцов показано присутствие винной (SA-1), лимонной (SA-2), яблочной (SA-3), малоновой (SA-4), янтарной (SA-5) и фумаровой кислот (SA-6). Для идентификации компонентов комплекса органических кислот надземной части S. baicalensis. проведено их выделение. Идентификацию выделенных веществ проводили с использованием данных температуры плавления исходных соединений и их анилидов, а также проб смешения, характерных качественных реакций, молекулярной массе, величины оптического вращения,

хроматографической подвижности, ИК- и |3С-ЯМР-спектроскопии. Основные физико-химические константы приведены в таблице 1.

Таблица 1

Физико-химические свойства веществ SA-1 - SA-5

Название М, г/моль Т.пл., °С Т.пл. анилида, "С „ 20 «D О > Ктаг Идентификация

SA-1 150 171 182 +12 1.00 Винная

SA-2 192 152 162 ■ - 1.09 Лимонная

SA-3 134 130 197 -6 1.25 Яблочная

SA-4 104 135 132 - 1.30 Малоновая

SA-5 118 187 228 - 1.36 Янтарная

SA-6 116 300 238 - 1.42 Фумаровая

Малоновая кислота обнаружена в представителе сем. Lamiaceae впервые. Все соединения выделены из S. baicalensis впервые.

Углеводы. Фракционирование углеводного комплекса надземной части S. baicalensis проводили с использованием схемы Бэйли (Bailey, 1967). В результате разделения получены фракции свободных углеводов, водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ и гемицеллюлоз, которые далее были подвергнуты более детальному исследованию с целью выяснения природы и предварительной оценки строения компонентов.

В составе фракции свободных углеводов хроматографически (ВЭТСХ) обнаружены глюкоза, галактоза и сахароза. Общее содержание свободных углеводов составляет 10.54%.

Водорастворимые полисахариды (SBW) надземной части S. baicalensis содержат углеводы 21.46±0.71%, азот 5.54±0.14%, фенолы

а20

20.79±0.62%, зольность 34.25±1.37%;"» +34° (с 1.0, Н20). После полного гидролиза найдены галактоза, глюкоза и арабиноза; уроновых кислот не обнаружено.

С применением фракционного осаждения этанолом SBW разделили на 5 компонентов: SBW-1, SBW-2, SBW-3, SBW-4 и SBW-5. Основные физико-химические характеристики и моносахаридный состав полученных компонентов приведены в таблице 2.

Гель-хроматография показала, что SBW-1 и SBW-3 являются гомогенными и их молекулярная масса (М) равна 2.3 и 3.5 кДа соответственно. SBW-2 - гетерогенен и содержит два вещества с М 2.2 и 3.5 кДа, доминирующим является менее высокомолекулярный

компонент. 8В\\М и 8В\У-5 также гетерогенные и содержат по 2 вещества с М 1.1 и 2.2 кДа.

Таблица 2

Физико-химические характеристики и моносахаридный состав компонентов вВ\У

Показатель 8В\У-2 вВ\У-4 8В\У-5

Выход, % от 22.53 9.92 34.64 1.64 0.62

йд ,"(с 1,Н20) +32 +30 +37 - -

Реакция с йодом - - - + +

Моносахаридный состав, моль%

Ага 21.8 33.4 22.7 - -

ва1 64.2 52.7 74.6 - -

Ос 13.9 13.8 2.6 99.9 99.9

По результатам ИК-спектроскопии, периодатного оксиления и распада по Смиту, а также хромового окисления по Хоффману установлено, что 8В\\М, 8В\У-2 и БВи'-З представляют собой разветвленные а-(1—>6)-связанные гетерогалактаны, содержащие в боковых цепях остатки р-(1—»3)-связанных арабинозы и глюкозы.

В надземной части 5. Ьа1са1епш содержится до 2% пектиновых веществ (БВР). Суммарный комплекс представляет собой слабоокрашенное аморфное вещество; содержание углеводов 57.15±1.14%, галактуроновой кислоты 45%, азота 1.81 ±0.06%, золы

а20

1.10±0.06%, О +152° (с 0.25, 10% Ш3). Средневесовая молекулярная масса, определенная вискозимерически, составляет 35 кДа. Из нейтральных углеводов обнаружены галактоза, арабиноза, глюкоза и рамноза в соотношении 3:1.5:1.2:0.5. Частичным гидролизом БВР получен полигалактуронан, состоящий только из остатков

а20

галактуроновой кислоты с 13 +192° (с 0.25, 10% МН3). ИК-спектр которого подобен таковому исходного БВР.

В результате периодатно-азотнокислого окисления полигалактуронана идентифицирована винная кислота, что возможно только при наличии 1—>4-связи в основной цепи. Таким образом, пектин надземной части 5. Ьа1са1ет1$ представляет собой а-(1—>4)-связанный гетерополигалактуронан, содержащий остатки нейтральных углеводов в боковых цепях.

При выделении гемицеллюлоз надземной части 5. Ьа1са1ет1з получено две фракции групп А и Б - вВНА и вВНВ. Основные физико-химические характеристики приведены в таблице 3.

Таблица 3

Физико-химические характеристики гемицеллюлозных фракций __надземной части S. baicalensis_

Содержание в сырье, % Содержание, % а20 . UD , ' (с 5% КОН)

углеводов лигнина золы азота

SBHA 7.13 25.25±0.88 33.12±0.87 17.31±0.31 4.47±0.16 -24

SBHB 11.81 11.53±0.50 12.16±0.27 59.13±0.64 1.88±0.06 -11

Фракционированием SBHA с применением последовательного осаждения этанолом получено 3 компонента - SBHA-1, SBHA-2 и SBHA-3; гель-хроматография показала их гетерогенность.

После полного гидролиза компонентов SBHA-1, SBHA-2 и SBHA-3 в качестве доминирующего мономера обнаружена глюкоза, составляющая до 70% от общего содержания; кроме того, установлено присутствие галактозы, ксилозы, маннозы и арабинозы. Гемицеллюлозный компонент SBHB гомогенен (М 12 кДа). Основным моносахаридом полимера является ксилоза.

Азотсодержащие соединения. Установлено присутствие 14 аминокислот в свободном состоянии: Ala, Asn, Cys, Gin, Glu, Gly, lie, Met, Pro, Ser, Tre, Val, у-аминомасляной кислоты и фосфоэтаноламина. Доминирующими являются Pro, Gly и Asn. После гидролиза основной состав аминокислот сохраняется; появляются Asp, His, Lys, Phe и Туг. Общее содержание свободных аминокислот в надземной части S. baicalensis составляет 0.42-0.51%. Из 8 незаменимых аминокислот в надземной части S. baicalensis присутствуют 4 - Val, Ile, Tre и Met, содержание которых составляет до 8% от общего содержания аминокислот.

Качественный анализ извлечений надземной части 5. baicalensis свидетельствует о присутствии алкалоидов. Общее содержание алкалоидов составляет 0.33-0.36%. Анализ с применением клиновидной хроматографии фракции алкалоидов показал присутствие двух веществ, совпадающих по подвижности со стахидрином и холином, причем содержание последнего выше.

Фенольные соединения. Хроматографический анализ показал присутствие флавоноидов в виде агликонов и гликозидов, но из-за значительного их содержания отнесение к определенным группам флавоноидов не представлялось возможным.

С использованием препаративной БХ и колоночной хроматографии на полиамиде выделено 2 вещества, идентифицированных как скутеллярин и гиспидулин, а также установлено присутствие лютеолина и апигенина и их гликозидов.

В результате ВЭЖХ-разделения спиртового извлечения надземной части S. baicalensis выявлено наличие кофейной (/R = 3.83 мин), хлорогеновой (iR = 7.32 мин), розмариновой (fR = 7.64 мин), феруловой кислот (/R = 11.70 мин), а также апигенина (/R = 17.18 мин) (рис. I).

Из комплекса антоцианов цветков 5. baicalensis выделено 3 соединения, идентифицированных с дельфинидином и его гликозидами, содержащими в качестве углеводного компонента глюкозу. Общее содержание антоцианов в цветках S. baicalensis составляет 8.71%.

Рис. 1. Результаты ВЭЖХ-разделения спиртового извлечения (70% спирт этиловый) надземной части Я. ЬшсаЫт'к

Идентифицированы:- 2 - кофейная кислота, 4 - хлорогеновая кислота, 5 -розмариновая кислота, 6 - феруловая кислота, 9 - апигенин.

В ходе качественного анализа надземной части 5. Ад/ш/едаи на наличие дубильных веществ установлено, что в сырье содержатся гидролизуемые и конденсированные производные. Общее содержание

дубильных веществ, определенное трилонометрическим методом, составляет 2.25-2.70%.

Элементный состав. Исследованию по характеру накопления 29 элементов были подвергнуты надземные и подземные части 5. Ьтсакюя, а также почвы, собранные с 5 мест произрастания растения. Установлено, что в отличие от корней в надземной части не обнаружено*^, ва,-Бс и УЬ.

При определении соотношения концентраций элементов показано, что для надземной части характерно большее накопление Ай, Ва, Мл, Р и Тх\\ для остальных элементов наблюдается концентрирование в корнях. Сравнение данных о содержании элементов в надземной и подземной частях 5. Ьа1са1еп$Ы из различных ценопопуляций обнаружило изменчивость концентрирования в широких пределах. Элементы А1, Ве, Са, Ьа, У, "П, V отличаются низким уровнем вариации для надземной и подземной частей. В остальном характер варьирования содержания элементов для обеих частей растения отличается. Аномальный уровень варьирования отмечен для У (надземная часть), Ре, N1, Р, РЬ (подземная часть). 5. Ьшсактя отличается низкими уровнями КБН элементов: достоверное накопление в надземной части наблюдается для Ag (КБН = 1.48-2.10), Са (КБН = 1.40-2.75), (КБН = 1.00-1.83) и Р (КБН = 0.93-13.75); в подземной - Са (КБН = 1.01-3.57), (КБН = 1.08-1.38) и Р (КБН до 6.38).

При сравнении концентраций ряда элементов с величиной кларка установлено, что надземная часть 5. Ьа1са1етЬ является умеренным накопителем А1, Ва, Сг, Си, Ре, Мп, реже V, причем для Ре и Мп наблюдаются случаи сверхконцентрирования. Для подземной части характерно накопление этих же элементов, только особенностью является достоверное сверхконцентрирование А1, Сг и Ре.

Проведенный регрессионный анализ результатов анализа элементного состава растений обнаружил высокую корреляционную зависимость (г2 > 0.5) между отдельными парами элементов: для надземной части - Си-Ре, Мп-Ре, Сг-Ре, Мп-Си, Сг-Си; для подземной части - Со-Ре, Сг-Ре, Со-Си, т.е. для элементов, представленных в ферментных системах фенольного биосинтеза. При составлении объединенной матрицы корреляций для обеих частей растения остается только одна пара - Ре-Сг, влияние которой, вероятно, наибольшее.

Химический состав морфологических групп Б. Ьамакт'к. Для изучения химического состава органов надземной части 5. Ьа'юсйет'ю

исследованы образцы сырья, рекомендуемого в качестве лекарственного сырья, т.е. собранные в фазу цветения; также параллельно определялся состав биологически активных соединений подземных органов растения в этой же фазе развития.

Групповой состав углеводного комплекса в разных органах S. baicalensis отличается довольно резко. Цветки содержат наибольшее количество свободных углеводов (27,40%) и водорастворимых полисахаридов (1.83%), что объясняется интенсивностью метаболических процессов в данном генеративном органе. Для листьев характерны средние показатели по всем группам углеводов. Наибольшее накопление гемицеллюлоз (11.37%) характерно для стеблей, причиной чего является их опорная функция. Максимальной содержание полисахаридов (17.25%) отмечено в корнях, главным образом за счет группы пектиновых веществ (10.15%).

Различия в содержании фенольных соединений в органах S-baicalensis касаются не только качественного состава, но и количественного содержания. Содержание 6-оксифлавонов и флаванонов максимальное в корнях (32.57%), а в надземной части - в цветках (26.76%); аналогичная картина наблюдается для общего содержания флавоноидов - 45.72 и 35.94%, соответственно. Для производных лютеолина и апигенина в надземной части доминирующим органом являются листья (10.53%).

Общее содержание липидов по органам отличается незначительно и составляет 1.59-1.87%. Наибольшее содержание тритерпеновых соединений и каротиноидов отмечено в листьях, которые также являются концентратором хлорофиллов (до 11.50%).

Разработка методов контроля качества надземной части Scutellaria baicalensis Georgi

Для надземной части S. baicalensis в качестве критериев подлинности определено 3 показателя: положительная цианидиновая реакция; вид спектра поглощения реакционной смеси цианидиновой реакции; вид спектра поглощения спиртовогр извлечения (70% спирт этиловый).

При анализе спектров поглощения спиртовых извлечений из надземной части S. baicalensis установлено, что прямой спектр может бь|ть использован для количественного определения 6-оксифлавонов и фдаванонов - наличие максимума при 285 нм, а дифференциальный -для определения флавонов, производных лютеолина и апигенина.

¿■н 250 350

Рис. 2. Спектры поглощения спиртового извлечения надземной части Л". Ьа1сакт1\ (I) и стандартных образцов веществ свидетелей (II).

А - прямой спектр, II - скутеллярин; Б - дифференциальный спектр, II - лютеолин-7-гликозид

Доминирующим соединением флавоноидного комплекса является скутеллярин, спектр поглощения которого совпадает с таковым спиртового извлечения надземной части & Ьшса1ет1$ (рис.2А), поэтому он может быть использован в качестве стандартного вещества для определения содержания соединений обладающих максимумом поглощения в области 278-288 нм, который свойственен 6-оксифлавонам и флаванонам. Для дифференциального спектря, характерно наличие максимума в длинноволновой области (405 нм). Аналогичное поведение характерно для производных лютеолина и апигенина. Лютеолин-7-гликозид также обладает максимумом 405 нм, поэтому его использовали для определения содержания флавоноидов второй группы: производных лютеолина и апигенина (рис.2Б).

Оптимальными были выбраны следующие параметры экстракции: экстрагент 70% спирт этиловый, температура экстракции 100°С, степень измельчения 2 мм, 1 и 2 контакты фаз 1:100 по 60 мин, 3 контакт фаз 1:50 по 30 мин.

Оценку правильности разработанной методики проводили с использованием общепринятых экспериментов: способом "введено-найдено", независимых и параллельных определений. Средняя ошибка из трех определений для трех образцов находится в достаточно узких пределах 0.02-0.83%, т.е. анализируемые компоненты определяются с достаточной точностью, и результаты анализа можно считать правильными. Отклонение от среднего в эксперименте из трех независимых определений не превышает 2%, что свидетельствует об удовлетворительной воспроизводимости методики.

Метрологические характеристики разработанной методики определены для надземной части, собранной из 5 ценопопуляций (табл.4). Относительная ошибка определения не превышает значения 3.5%.

Установлены следующие показатели качества надземной части 5. ¿а/ся/егай: содержание флавоноидов в пересчете на скутеллярин должно быть не менее 8%; флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид должно быть не менее 2%; суммарное содержание флавоноидов должно быть не менее 10%.

Разработка способа получения экстракта шлемника байкальского сухого

Разработан способ получения экстракт шлемника байкальского сухого (ЭШБС). Для получения ЭШБС выявлены следующие параметры экстрагирования: экстрагент 70% спирт этиловый, температура экстракции 100°С, степень измельчения сырья 2 мм,

соотношение сырье: экстрагент 1:(18-22), двукратная экстракция в течение 90 мин и однократная в течение 30 мин. Выход ЭШБС - 2532% от массы сырья.

Таблица 4

Метрологические характеристики методики количественного определения содержания ф^авоноидов в надземной части £ ЬшШетк (я = 10, Р- 0.95, «р,Л =2.26)_

ЦП | % | & | | ±Алг, % 1 Е, %

флавоноидов в пересчете на скутеллярин

1 18.05 0.159 0.126 0.285 1.58

2 17.70 0.277 0.168 0.377 2.13

3 26.74 0.136 0.117 0.265 0.99

4 27.88 0.233 0.153 0.346 1.24

5 15.32 0.198 0.141 0.318 2.08

флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид

1 4.66 0.017 0.044 0.100 2.15

2 4.38 0.051 0.072 0.162 3.72

3 5.24 0.044 0.067 0.151 2.89

4 5.77 0.059 0.077 0.174 3.02

5 4.99 0.035 0.059 0.135 2.71

суммарное содержание флавоноидов

1 22.71 0.155 0.125 0.282 1.24

2 22.08 0.337 0.183 0.415 1.88

3 31.98 0.106 0.103 0.234 , 0.73

4 33.65 0.235 0.153 0.346 1.03

5 20.31 0.217 0.147 0.333 1.64

Все установленные оптимальные параметры процесса экстракции были внесены в основу пяти серий балансовых загрузок, на основании которых была разработана технологическая схема получения ЭШБС.

Экстракт шлемника байкальского сухой представляет собой аморфный порошок от коричневого до темно-коричнево цвета. Хорошо растворим в 50-70% спирте этиловом. Негигроскопичен, не комкуется.

Основываясь на принципе сквозной стандартизации растительного сырья и препаратов из него, нами предложено использование методики количественного определения флавоноидов в надземной части 5. Ьа\са1ет1$ для анализа ЭШБС.

Оценку правильности разработанной методики проводили способом "введено-найдено", независимых и параллельных определений. При исследовании методики способом "введено-

найдено" установлено, что относительная ошибка не превышает 1%. Средняя ошибка из трех определений для трех образцов составляет 00.24%.

Метрологические характеристики разработанной методики определены для 5 серий ЭШБС. Относительная ошибка определения не превышает значения 4% (табл.5).

Таблица 5

Метрологические характеристики методики количественного определения содержания флавоноидов в экстракте шлемника байкальского сухом (и = 10, Р- 0.95, ф, О = 2.26)

Серия | л:, % | S2 | Sv | ±Д*, % | Е, %

флавоноидов в пересчете на скутеллярин

071206 38.26 0.065 0.081 0.580 1.52

121206 37.43 0.026 0.051 0.371 0.99

210307 40.31 0.002 0.015 0.122 3.03

050407 38.32 0.001 0.013 0.100 2.78

120707 36.28 0.131 0.114 0.820 2.25

флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид

071206 10.35 0.012 0.035 0.253 2.45

121206 10.58 0.023 0.048 0.346 3.61

210307 12.68 0.019 0.043 0.313 2.47

050407 11.93 0.026 0.014 0.368 3.09

120707 13.58 0.017 0.041 0.296 2.18

суммарное содержание флавоноидов

071206 48.61 0.056 0.073 0.539 1.11

121206 47.01 0.082 0.091 0.648 1.38

210307 52.99 0.021 0.046 0.328 0.62

050407 50.25 0.042 0.065 0.467 0.93

120707 49.86 0.104 0.103 0.733 1.47

Установлено, что содержание флавоноидов в ЭШБС находится в следующих пределах: флавоноидов в пересчете на скутеллярин -36.28-40.31%, флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-глюкозид -10.35-13.58%, общее содержание флавоноидов - 47.01-52.99%.

Установлены следующие показатели качества ЭШБС: содержание флавоноидов в пересчете на скутеллярин должно быть не менее 30%; флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид должно быть не менее 10%; суммарное содержание флавоноидов должно быть не менее 40%.

В ходе определения химического состава установлено, что для ЭШБС характерны те же основные группы БАВ и индивидуальные соединения, что и для сырья. Элементный состав ЭШБС совпадает с

таковым исходного сырья за исключением Со и Li, которых не обнаружено. При сравнении содержания отдельных элементов в сырье, ЭШБС и шроте после получения ЭШБС следует отметить, что в препарат переходит более 80% Ва, Сг и Ni и более 50% Ag. Основная часть макро- и микроэлементов экстрагируется в количестве 20-40% от содержания в сырье. Наименьший переход в ЭШБС отмечается для А1, ~Fe, Mil*-Р, Si и Tiv Содержание тяжелых металлов в ЭШБС не превышает 0.05%.

Для характеристики ЭШБС были предложены следующие показатели качества: описание внешнего вида, подлинность, растворимость, потеря в массе при высушивании, микробиологическая чистота, содержание тяжелых металлов, содержание флавоноидов. Показатели качества регламентируются проектом ФСП.

С применением метода ускоренного хранения установлен предварительный срок годности ЭШБС - 2 года.

В экспериментах in vitro (ДФПГ-тест, деградация p-каротина в системе ДМС0-Н202) выявлена высокая антирадикальная и антиоксидантная виды активности ЭШБС.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что по возрастному состоянию ценопопуляции Scutellaria baicalensis относятся к нормальным, полночленным. Урожайность надземной части Scutellaria baicalensis в исследованных ценопопуляциях варьирует в пределах 11.95±2.30 г/м2 и 26.87±4.37 г/м2. Биологический и эксплуатационный запас надземной части Scutellaria baicalensis в среднем составляет 81.82±2,46 кг и 5б.41±2.58 кг соответственно. Средний объем ежегодных заготовок наиболее продуктивной ценопопуляции равен 22.66 кг на 0.75 га.

2. Исследовано анатомическое строение цветков, листьев и стеблей Scutellaria baicalensis. Выявлены следующие анатомо-диагностические признаки: наличие устьиц диацитного типа с обеих сторон листа; наличие коленчатых и простых многоклеточных волосков с расширенным основанием и заостренным концом на эпидермисе листа; присутствие эфиромасличных железок с 6-8 выделительными клетками на эпидермисе листовой пластинки, чашечки и лепестка; наличие головчатых волосков и сосочковидных выростов 2 типов (гладкие и со складчатой кутикулой) на эпидермисе лепестка венчика; наличие в средней части эпидермиса нижней губы венчика прямоугольных неизвилистостенных клеток; пучковое строение стебля, где количество основных проводящих пучков равно четырем.

3. Проведен товароведческий анализ надземной части Scutellaria baicalensis. Установлены показатели качества: потеря в массе при высушивании не более 10%, содержание минеральных и органических примесей не более 0.5% и не более 2% соответственно, содержание общей золы не более 10%, содержание золы, нерастворимой в 10% хлористоводородной кислоте, не более 5%.

4. При исследовании химического состава надземной, части Scutellaria baicalensis выделены и идентифицированы 6 органических кислот: винная, яблочная, лимонная, малоновая, фумаровая и янтарная.

Установлено присутствие свободных углеводов, в т.ч. глюкозы, галактозы и сахарозы. Выделены водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества и гемицеллюлозы, определен компонентный состав, и изучено их химическое строение. Впервые из надземной части Scutellaria baicalensis выделено 3 полисахарида, относящихся к классу арабино-3,6-галактанов.

Изучен групповой состав флавоноидов, который представлен флавонами (б-оксифлавонами и производными лютеолина и апигенина). Выделены и идентифицированы скутеллярин, гиспидулин.

Установлено наличие в надземной части Scutellaria baicalensis алкалоидов (холин, стахидрин), тритерпеновых соединений (урсоловая кислота, 13-ситостерин), антоцианов (производные дельфинидина), фенолокислот, дубильных веществ, аминокислот, фотосинтетических пигментов (ft-каротин, лютеин, хлорофилл а и хлорофилл Ь), макро- и микроэлементов.

5. Разработана методика определения количественного содержания флавоноидов в надземной части Scutellaria baicalensis (относительная ошибка определения не более 3.5%).

6. Разработан способ получения экстракта шлемника байкальского сухого. Определены показатели качества и предложена методика количественного определения флавоноидов в нем (относительная ошибка определения не более 4%). Исследован химический состав экстракта шлемника байкальского сухого и определены показатели качества.

7. Разработана и составлена нормативная документация на лекарственное сырье - траву Scutellaria baicalensis и сухой экстракт из нее.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Чирикова Н.К. Применение шлемника байкальского в традиционной монгольской медицине по тибетской рецептуре // Тез. докл. Международной конференции "Monos-15".- Улан-Батор, 2005.-С.92-93.

2. Чирикова Н.К. Содержание флавоноидов и дубильных веществ в надземной части шлемника байкальского в зависимости от мест произрастания // Экология Южной Сибири и сопредельных территорий,- 2006.- вып. 10.- т.1.- С.55-56.

3. Чирикова Н.К.. Асеева Т.А. Фармакогностическое изучение надземной части Scutellaria baicalensis Georgi II Вестник Бурятского государственного университета,- 2006.- Серия 11: Медицина.- вып.6.-С.102-104.

4. Чирикова Н.К. Шлемник байкальский как заменитель "хонг-лен" // Мат-лы науч.-практ. конф., поев. 75-летию д.мед.н. Базарона Э.Г.- Улан-Удэ, 2006,- С.41-42.

5. Chirikova N.K. Pharmacognostic Characteristic of Above-ground Part of Scutellaria baicalensis Georgi // Abstr. 2nd Int. Symp. Chem. Herbal Med. Mongolian Drugs.- Ulaanbaatar, 2006,- P.94

6. Бухашеева Т.Г., Санданов Д.В., Асеева T.A., Чирикова Н.К., Шишмарев В.М. Возрастная структура ценопопуляций и сырьевая фитомасса Scutellaria baicalensis Georgi (Lamiaceae) // Растительные ресурсы,- 2007.- т.43,- вып.4,- С.23-32.

7. Chirikova N.K.. Olennikov D.N. Chemical Composition of Aerial Part of Scutellaria baicalensis Georgi (Lamiaceae) // Abstr. 7th Int. Symp. Chem. Nat. Сотр. // Tashkent, 2007,- P.258.

Список сокращений

БАВ - биологически активное вещество БХ - бумажная хроматография

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭТСХ - высокоэффективная тонкослойная хроматография М - молекулярная масса ЦП - ценопопуляция

ЭШБС - экстракт шлемника байкальского сухой ЯГаг - подвижность относительно винной кислоты, хроматография на бумаге, подвижная фаза: ВиОН -- 85% НСООН (3:1), трехкратный подъем на высоту 30 см.

Подписано в печать 25.09.2007г.Формат 60x84 1/ 16. Бумага офсетная. Объем 1,3 псч. л. Тираж 100. Заказ №49.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

Актуальность темы. Поиск новых лекарственных растений и создание на их основе фитопрепаратов остаются в настоящее время одной из основных задач фармации. В частности, большое значение имеют исследования по разработке растительных препаратов, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний печени и желчевыводящих путей, сердечно-сосудистой системы и воспалительных процессов.

В этом отношении перспективным является исследование лекарственных растений t из арсенала тибетской медицины. К числу таких растений относится шлемник байкальский {Scutellaria baicalensis Georgi, сем. Lamiaceae), надземная часть и корни которого используются тибетской медициной в терапии гепатобилиарной и сердечнососудистой систем, а также при воспалительных заболеваниях. Корни S. baicalensis входят в регистр лекарственных средств России (Radix Scutellariae baicalensis № 70/729/1 [F] 1 Ф.Г.), как миотропный спазмолитик, анксиолитическое, седативиое и снотворное средство.

Корни S. baicalensis - ценное лекарственное сырье с ограниченной в пределах России сырьевой базой. При создании лекарственных средств из корней шлемника байкальского следует учитывать то, что заготовка этого сырья может привести к истощению популяций, поэтому нами предлагается использование в качестве сырья надземной части растения. В связи с возможностью использования надземной части S. baicalensis в качестве ценного лекарственного сырья, возникает необходимость его фармакогностического изучения. Химический состав надземной части S. baicalensis изучен недостаточно. Все вышесказанное явилось предпосылкой к выбору надземной части S. baicalensis в качестве объекта исследования.

Цель и задачи исследования. Целыо исследования является ботанико-фармакогностическое изучение травы шлемника байкальского (S. baicalensis), определение химического состава и показателей качества надземной части, разработка способа получения и стандартизация антиоксидантного средства на ее основе.

В задачи исследования входило:

-изучить ресурсы природных ценопопуляций S. baicalensis;

- исследовать анатомическое строение цветков, листьев и стеблей и выявить анатом о-диагностические признаки надземной части S. baicalensis;

-провести товароведческий анализ надземной части S. baicalensis;

-определить качественный состав и количественное содержание биологически активных соединений надземной части Я. ЬшсЫегтя;

-разработать методику количественного определения суммарного содержания флавоноидов в надземной части 51. Ьшса1епз1я; '

-разработать способ получения экстракта шлемника байкальского сухого; -разработать нормативную документацию на лекарственное сырье - траву Ътссйе^тз и сухой экстракт.

Научная новизна работы. Для 51. Ьа1са1етчз выявлено 5 новых природных ценоиопуляций, определен их возрастной состав и ресурсы. Изучено анатомическое строение надземной части & ЬсйсаЫгшз. Исследован качественный состав и определено количественное содержание биологически активных веществ. Изучен состав органических кислот: выделено и идентифицировано 6 соединений. Изучен качественный и количественный состав свободных углеводов. Выделены водорастворимые полисахариды, пектины и гемицеллюлозы и определен их компонентный состав. Исследован элементный состав надземной части и корней & Ътса1е№18. Проведен сравнительный анализ характера накопления элементов в указанных морфологических группах, используя коэффициент биологического накопления. В результате корреляционного анализа показана концентрационная зависимость флавоноиды - элементы. Изучен групповой состав флавоноидов, который представлен флавопами, в том числе 6-оксифлавонами и производными лютеолина и апигенина. Проведено количественное определение содержания флавоноидов в образцах надземной части 5. Ьтса1егтз из 16 ценоиопуляций Читинской области, а также в различных органах исследуемого вида. Определен состав аминокислот, фотосинтетических пигментов (каротиноиды, хлорофилл). Установлено наличие алкалоидов, тритерпеновых соединений, антоцианов и фенолокнслот.

Установлено антиоксидантная и антирадикальная активность для извлечений и сухого экстракта из надземной части & Ъа1са1ет1$.

Практическая значимость работы. Определены ресурсы данного вида растения и выявлены наиболее продуктивные ценопопуляции 51. ЪтссЛетхя.

Установлены критерии подлинности и качества лекарственного сырья, выявлены анатомо-диагпостические признаки и определены товароведческие показатели надземной части 5. Ъа1са1ет1з.

Разработана методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в надземной части S. baicalensis и экстракте шлемника байкальского сухом.

Разработан способ получения средства (сухой экстракт), обладающего антиоксидантной и антирадикальной активностью.

Составлена инструкция по сбору и сушке лекарственного сырья. Разработаны проекты Фармакопейных статей предприятия на траву шлемника байкальского, экстракт шлемника байкальского сухого и Инструкции по сбору и сушке травы шлемника байкальского.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной конференции Monos-15 (Улан-Батор,

2005); научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д.мед.н. Базарона Э.Г. (Улан-Удэ, 2006); II Международном симпозиуме по химии растительной медицины (Улан-Батор, 2006); Всероссийской конференции с международным участием "Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии" (Улан-Удэ,

2006); 7 Международном симпозиуме по химии природных соединений (Ташкент, 2007).

По результатам исследований опубликовано 8 работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, которые отражают основное содержание диссертационной работы.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Настоящая работа выполнена в Отделе биологически активных веществ в соответствии с программой и планом научно-исследовательских работ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по проекту № 146 "Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация", утвержденному президиумом СО РАН.

На защиту выносятся результаты изучения ресурсов, анатомо-диагностические признаки сырья, данные химического изучения биологически активных веществ, их сезонной динамики накопления и методы оценки качества сырья и сухого экстракта надземной части S. baicalensis.

Выводы к главе 4

Определены внешние признаки надземной части 5". Ътса1епз1з.

В результате анатомического исследования надземной части 5". Ъшссйет'я установлены следующие диагностические признаки: лист - устьичный аппарат диацитного типа, коленчатые и простые многоклеточные волоски с расширенным основанием и заостренным концом, эфиромасличные железки с 6-8 выделительными клетками; цветок - головчатые волоски и сосочковидные выросты 2 типов: гладкие и со складчатой кутикулой, средняя часть эпидермиса нижней губы венчика состоит из прямоугольных неизвилистостенных клеток; стебель - проводящая система пучкового типа, количество основных проводящих пучков равно четырем, простые волоски.

Проведен товароведческий анализ и установлены показатели качества надземной части 5". Ьшсакп.^: потеря в массе при высушивании не более 10%, содержание минеральных и органических примесей не более 0.5% и не более 2% соответственно, содержание общей золы не более 10%,содержание золы, нерастворимой в 10% хлористоводородной кислоте, не более 5%.

По результатам проведенного предварительного фитохимического исследования в надземной части ЪтссЛет'м установлено наличие алкалоидов, аминокислот, белков, дубильных веществ, иридоидов, каротиноидов, полисахаридов, тритерпеновых соединений, кумаринов, флавоноидов и свободных углеводов; производные антрацена, катехинов и сердечные гликозиды не обнаружены.

ГЛАВА 5. Химическое исследование надземной части Scutellaria baicalensis Georgi.

5.1. Органические кислоты

Сведения об органических кислотах представителей сем. Lamiaceae малочисленны. По данным доступной научной литературы известно о присутствии 5 соединений в II видах этого семейства (табл.5.1.1). Наиболее распространенной является лимонная кислота, обнаруженная в 7 видах.