Исследование комплекса биологически активных веществ растения Polemonium coeruleum L.

Мальцева, Алевтина Алексеевна

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Исследование комплекса биологически активных веществ растения Polemonium coeruleum L.

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Мальцева, Алевтина Алексеевна Москва 2011 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Исследование комплекса биологически активных веществ растения Polemonium coeruleum L.

МАЛЬЦЕВА Алевтина Алексеевна

Исследование комплекса биологически активных веществ растения Ро1егпопшш соеги1еит Ь.

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва 2011

7 ДПР 2011

4842248

Работа выполнена в ГОУ ВПО Воронежский государственный университет

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук,

профессор Алла Анатольевна Сорокина

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

профессор Вера Ивановна Прокофьева

кандидат фармацевтических наук,

доцент Нина Васильевна Иващенко

Ведущая организация: ГОУ ВПО Курский государственный медицинский университет

Защита состоится » 69 2011г. в /?. оО часов на заседании диссертационного совета Д.208.040.09 в ГОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова по адресу: 119992, Москва, ул. Трубецкая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова по адресу: 117998, Москва, Нахимовский проспект, д.49.

Автореферат разослан «^>> 03 2011г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д.208.040.09 доктор фармацевтических наук,

профессор ¡//'л лй Садчикова Наталья Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Синюха голубая - Polemonium coeruleum L., семейства синюховые - Polemoniaceae, растение достаточно широко распространенное в средней полосе России. Корневища с корнями синюхи -Rhizomata cum radicibus Polemonii, включены в ГФ XI в качестве отхаркивающего средства, применяемого в форме отвара. Данный вид сырья не входит в фармакопеи ведущих стран мира.

Синюха голубая была предложена для медицинского применения профессором М.Н. Варлаковым в 1932г. как заменитель импортной сенеги и активно изучалась в 50-х - 60-х годах XX века. В СССР растение культивировалось в Белоруссии, западной части Украины, Прибалтике, Западной Сибири, центральной части Нечерноземья России. В настоящее время корневища с корнями синюхи имеют ограниченное применение и практически перестали реализовываться через аптечную сеть.

В народной медицине корневища с корнями синюхи имеют более широкое применение - не только как отхаркивающее средство, но и как седативное, противовоспалительное, ранозаживляющее,

кровоостанавливающее, антибактериальное и др. Помимо подземных органов в народной медицине используется надземная часть растения, которая в настоящее время является отходом при заготовке официнального сырья. Сырье синюхи не входит в фармакопеи ведущих стран мира.

Учитывая недостаточную изученность комплекса действующих веществ, разнообразную фармакологическую активность, отсутствие на фармацевтическом рынке лекарственных форм синюхи, а так же перспективу безотходного использования растения, углубленное изучение синюхи голубой следует считать актуальным.

Целью настоящего исследования является проведение углубленного комплексного изучения биологически активных веществ (БАВ) растения,

совершенствование имеющейся нормативной документации на сырье и изучение возможности получения лекарственных форм синюхи голубой.

Задачи исследования:

• Провести информационно-аналитические исследования по вопросам химического состава синюхи голубой, фармакологической активности и возможности получения новых лекарственных форм.

• С использованием современных физико-химических методов анализа провести углубленное изучение БАВ подземных и надземных органов синюхи голубой и разработать методики определения содержания БАВ в сырье.

• Провести микроскопическое исследование корневищ с корнями синюхи голубой с целью изучения вариабильности диагностически значимых признаков при измельчении сырья.

• Провести фармакогностическое изучение травы синюхи голубой как возможного дополнительного вида лекарственного растительного сырья.

• Провести исследования по вопросу получения и стандартизации экстракционных лекарственных форм из сырья синюхи.

• Провести фармакологическое изучение сырья и лекарственных форм синюхи голубой.

Работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармацевтической химии и фармацевтической технологии ГОУ ВПО Воронежский государственный университет по теме «Разработка новых и совершенствование существующих методов получения, оценки качества и стандартизации лекарственного растительного сырья, лекарственных средств природного, биотехнологического и синтетического происхождения», № Государственной регистрации темы - 01.200302927.

Научная новизна результатов исследования заключается в получении научно-обоснованных данных при экспериментальном изучении

состава БАВ сырья синюхи голубой: тритерпеновых сапонинов и флавоноидов. С использованием современных физико-химических методов (УФ-спектроскопия, ИК-спектроскопия и др.) дана их качественная и количественная характеристика. Разработана спектрофотометрическая методика количественного определения флавоноидов в сырье синюхи голубой. Проведено сравнительное химическое изучение корневищ с корнями и травы синюхи голубой, показана перспективность использования последней как дополнительного источника тритерпеновых сапонинов. Экспериментально подтверждены гипогликемическое действие и антиоксидантная активность сырья и жидких экстрактов синюхи голубой.

Практическая значимость полученных результатов состоит в изучении вариабельности диагностических признаков анатомического строения сырья синюхи голубой различных форм переработки (цельное и измельченное сырье) и их визуализации. Выявлены диагностически значимые признаки при идентификации измельченных корневищ с корнями синюхи. На основании результатов проведенных исследований внесены усовершенствования в фармакопейную методику количественного определения тритерпеновых сапонинов в корневищах с корнями синюхи. Проведенные исследования по стандартизации лекарственного растительного сырья были использованы при разработке проекта ФС на корневища с корнями синюхи голубой для Государственной фармакопеи XII издания. Обоснована возможность рационального безотходного использования растения синюха голубая -Ро1епюпшт соеш1еиш Ь., и расширения сырьевой базы за счет применения в качестве растительного сырья не только подземных органов, но и травы растения. Проведенные фармакологические исследования сырья синюхи позволяют расширить область применения растения. Показана возможность получения жидких экстрактов (1:1) из корневищ с корнями и травы синюхи голубой. Разработаны методики их стандартизации.

Внедрение результатов работы в практику. Результаты проведенных исследований используются в учебном процессе на кафедре фармакогнозии ГОУ ВПО Воронежский государственный университет и ГОУ ВПО Воронежская государственная медицинская академия им. H.H. Бурденко, что подтверждается соответствующими актами внедрения.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на пленарном заседании IV Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование-2010» (Воронеж, 2010г.), III Всероссийской научно-методической конференции «Фармобразование-2007» (Воронеж, 2007г.), научных конференциях кафедры управления и экономики фармации и фармакогнозии фармацевтического факультета ГОУ ВПО Воронежского государственного университета (Воронеж, 2006-2010гг.).

Публикации. Материалы диссертационной работы опубликованы в 21 печатной работе, из них 5 работ в рецензируемых журналах. Основные положения, выносимые на защиту:

• Результаты углубленного изучения качественного состава БАВ корневищ с корнями и травы синюхи голубой.

• Данные по разработке методик количественного определения тритерпеновых сапонинов и флавоноидов в сырье синюхи голубой.

• Результаты изучения вариабильности диагностически значимых признаков при измельчении корневищ с корнями синюхи голубой.

• Результаты макроскопическиго и микроскопического изучения травы синюхи голубой.

• Результаты изучения водных извлечений и жидких экстрактов 1:1 синюхи.

• Результаты исследования фармакологической активности сырья и жидких экстрактов (1:1) синюхи.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 184 страницах и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей 7 глав, выводов, списка литературы, состоящего из 171 источника, 24 - на иностранных языках, и приложения. Диссертация содержит 27 таблиц, 54 рисунка, в том числе 17 фотографий.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулирована научная новизна и практическая значимость работы. В первой главе на основании литературных данных обобщены сведения о ботанико-фармакогностической характеристике синюхи голубой, химическом составе, методах анализа основных биологически активных веществ в растительном сырье; нормативной документации на сырье синюхи; фармакологической активности и использовании сырья синюхи в медицине. Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследований, используемых при комплексном изучении основных групп биологически активных веществ синюхи голубой (тритерпеновых сапонинов и флавоноидов) и разработке методик стандартизации сырья. В третьей главе представлены результаты изучения тритерпеновых сапонинов и флавоноидов методом ТСХ. Четвертая глава посвящена изучению тритерпеновых сапонинов и флавоноидов синюхи спектральными методами. В пятой главе приведены результаты исследований по разработке методик количественного определения тритерпеновых сапонинов и флавоноидов в сырье синюхи. В шестой главе приведены материалы изучения вариабильности диагностически значимых признаков при измельчении корневищ с корнями синюхи голубой и фармакогностического изучения травы синюхи. В седьмой главе обобщены результаты получения и изучения водных и водно-спиртовых лекарственных форм сырья синюхи. Восьмая глава посвящена фармакологическому исследованию сырья и лекарственных форм синюхи. Приведены результаты изучения антиоксидантной,

мембранстабилизирующей и гипогликемической активности. Приложение включает проект ФС «Корневища с корнями синюхи».

Объекты и методы исследования

Объектами исследования служили высушенные корневища с корнями и трава синюхи, заготовленные в Воронежской области и стандартизованные (корневища с корнями) согласно требованиям ГФ XI, а также водные извлечения из сырья и жидкие экстракты (1:1).

Микроскопические исследования сырья проводили в соответствии с требованиями общих статей ГФ XI, визуализацию диагностических признаков осуществляли с помощью цифрового фотоаппарата «Canon А 630».

ИК-спектры регистрировали в диапазоне средних частот 400 - 4000 см"' на ИК-спектрометре с Фурье-преобразованием «Nicolet 6700/8700» с приставкой Smart Accessories и последующей обработкой программой OMNIC. УФ-спектры получали с помощью прибора СФ 2000-01. Спектральный диапазон прибора - от 200 до 750. Для получения КР-спектров образцов использовали прибор РАМАН-модуль к ИК-Фурье спектрометру марки «Nicolet NRX-FT Raman».

Флуориметрический анализ растительного сырья и препаратов синюхи проводили с помощью прибора «Анализатор жидкости «Флюорат-02-Панорама».

Отвар корневищ с корнями синюхи и настой травы синюхи готовили согласно методике общей статьи ГФ XI, вып. 2, с. 147 «Настои и отвары» и «Инструкции по изготовлению в аптеке жидких лекарственных форм» (Приложение к приказу МЗ РФ от 21.10.97. №308). Жидкие экстракты (1:1) корневищ с корнями и травы синюхи готовили методом перколяции.

Изучение гипогликемизирующей активности сырья и препаратов синюхи голубой проводили с использованием глюкозо-толерантного теста (ГТТ) на здоровых животных. Антиоксидантную активность сырья и

препаратов определяли титриметрически по методике Т.В.Максимовой с соавторами.

В работе использовали реактивы, стандарты, растворители, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации. Статистическую обработку экспериментальных данных проводили фармакопейным методом и с помощью программы «Б1а1151юа - 6.0».

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Анализ биологически активных веществ синюхи голубой методом ТСХ

С помощью известных фармакопейных реакций и методик в сырье синюхи определены тритерпеновые сапонины, флавоноиды, полисахариды, кумарины, дубильные вещества, жирное масло. Для дальнейшего более подробного изучения были взяты две основные группы БАВ синюхи -тритерпеновые сапонины и флавоноиды.

В соответствии с поставленными задачами были подобраны оптимальные условия хроматографирования тритерпеновых сапонинов и флавоноидов сырья синюхи голубой на пластинках «БогЬШ» и рассчитаны основные критерии эффективности хроматографического процесса.

Для анализа сапонинов сырья синюхи оптимальными являются: элюирующая система бутанол - спирт этиловый - аммиак (7:2:5), детектирующий реагент - 25% спиртовой раствор фосфорновольфрамовой кислоты с последующим прогреванием в течение 5 минут при температуре 105°С. На хроматограммах обнаруживаются 6 зон сапонинов с ЯГ от 0,13 до 0,55. Изучена возможность использования для детектирования хроматограмм реакции гемолиза эритроцитов. Установлено, что способностью к гемолизу обладает только часть сапонинов, что позволяет предположить наличие в растительном сырье синюхи двух групп сапонинов, различающихся по способности к гемолизу эритроцитов крови.

При определении флавоноидов в сырье синюхи методом ТСХ лучшие результаты наблюдаются при использовании элюирующей системы

этилацетат- кислота муравьиная-вода (10:2:3), а в качестве проявляющего регента - 2% спиртового раствор алюминия хлорида с последующим детектированием в УФ-свете. При просматривании хроматограмм в УФ свете при длине волны 365 нм обнаруживается 5 (корневища с корнями) и 6 (трава) флуоресцирующих зон с Rf от 0,32 до 0,95.

Изучение сырья синюхи голубой спектральными методами Для изучения сапонинов с использованием спектральных методов анализа из сырья синюхи предварительно получили очищенную сумму сапонинов.

Были получены ИК-спектры сырья синюхи и ИК- спектры очищенной суммы сапонинов. Проведено отнесение характеристических частот поглощения в ИК-спектрах исследуемых объектов. Попытка детальной расшифровки ИК-спектров растительного сырья синюхи и полученных из него очищенных индивидуальных сапонинов показала, что выбрать характерный участок спектра, позволяющий идентифицировать исследуемые вещества с должной специфичностью, не представляется возможным. Поэтому нами рекомендовано использование метода ИК-спектроскопии как возможного метода подтверждения подлинности растительного сырья синюхи только как «отпечатков пальцев».

Была изучена возможность применения Рамановской спектроскопии для идентификации тритерпеновых пентациклических сапонинов и флавоноидов в сырье синюхи и лекарственных формах на его основе. Показано, что данный метод не пригоден для анализа сапонинов синюхи, т.к. они не дают характерных, пригодных для идентификации полос в спектральной области прибора.

Для изучения возможности идентификации флавоноидов был получен спектр комбинационного рассеяния (KP-спектр) стандартного образца рутина (рис.1), имеющий максимум в области 8650 см"1 и максимум малой интенсивности в области 7350 см"1. Сравнение KP-спектров PCO рутина,

сырья синюхи и жидких экстрактов (рис. 1-3) показало, что все КР-спектры имеют пик в области 8650 см"1, что может свидетельствовать о наличии рутина в анализируемых объектах. КР-спектры водных извлечений сырья синюхи характерных максимумов в данной области не имели.

I. 8 8650-'

7350™'

Рисунок 1. КР-спектр РСО рутина

8650«.' (

Рисунок 2. КР - спектры сырья синюхи: 1 - трава, 2 - корневища с корнями

Рисунок 3. КР - спектры жидких экстрактов 1:1 сырья синюхи: 1 - травы, 2 -корневищ с корнями

Разработка методики количественного определения сапонинов в сырье синюхи голубой

При количественном определении суммы сапонинов в сырье синюхи с использованием фармакопейной спектрофотометрической методики, было установлено, что при рекомендуемой длине волны (>1=381 нм) максимум поглощения незначителен, в то же время имеется выраженный максимум поглощения при 282±2нм (рис.4). Установлено, что наибольший выход сапонинов из сырья синюхи обеспечивается при использовании в качестве экстрагента спирта этилового 70%, а не при использовании рекомендованного 90% спирта этилового.

Учитывая установленные факты и необходимость усовершенствования нормативной документации (НД) на сырье синюхи, были проведены исследования по модификации существующей методики определения содержания суммы тритерпеновых сапонинов в корневищах с корнями синюхи. Проведена оптимизация пробоподготовки и подобраны оптимальные условия проведения анализа: соотношение объемов исследуемой пробы и кислоты серной концентрированной 1:1, время нагревания реакционной смеси 1 час, в качестве аналитической предложена длина волны 282 нм. В выбранных условиях получена градуировочная зависимость для определения суммы сапонинов методом УФ-спектрофотометрии по реакции с концентрированной кислотой серной.

Достоверность результатов аналитического определения доказывалась установлением критериев правильности, точности, диапазона линейности, прецизионности количественного определения аналита в соответствии с ОФС «Валидация фармакопейных методов». Статистическую обработку данных проводили в соответствии с ОФС ГФ XI. Оценка правильности подтверждена результатами анализа модельных смесей, точность метода описывается метрологическими характеристиками в соответствии с ГФ XI. Результаты прецизионности оценивались при проведении анализа

исследуемого образца в рекомендованном ОФС числе повторностей. Метрологические характеристики представленные в табл. 1

282 нм

300 350 400 длина волны, нм

450

500

Рисунок 4. Спектры поглощения продуктов реакции исследуемых образцов с концентрированной кислотой серной: раствора [}-эсцина (1), спиртовых извлечений из корневищ с корнями синюхи (2), травы синюхи(З)

Таблица 1. Метрологические характеристики УФ - спектрофотометрической методики определения суммы тритерпеновых сапонинов сырья синюхи голубой в пересчете на р-эсцин (Р=95, п=5)

Лекарственное растительное сырье Параметры

Г X Б2 Б Эх 1(Р,0 ±ДХ Е,%

Корневища с корнями 4 20,9 1,04 1,02 0,45 2,78 1,26 6

Трава 4 19,2 0,66 0,81 0,36 2,78 1,01 5,2

Разработка методики количественного определения флавоноидов в сырье синюхи голубой

Изучена возможность применения для количественного определения суммы флавоноидов в сырье синюхи спектрофотометрической методики, основанной на образовании окрашенных продуктов взаимодействия флавоноидов со спиртовым раствором алюминия хлорида, имеющих характерный максимум поглощения при длине волны 415±2нм.

Количественное содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин определяли, используя вариант дифференциальной спектрофотометрии.

Проведены исследования по адаптации методики к растительному сырью синюхи. Подобраны оптимальные условия проведения анализа: время, необходимое для созревания окраски продуктов реакции и их стабильность во времени. В выбранных условиях получена градуировочная зависимость для определения суммы флавоноидов методом УФ-спектрофотометрии по реакции с хлоридом алюминия (рис.5, 6.).

Метрологические характеристики разработанной методики

представленные в табл.2.

о,в

0,5

•А I-

о о

¡Е 0,4 о с с

5 0.3 к

и ©

= о,2

0,1

415 им

370

390 410

длина волны, нм

430

450

470

Рисунок 5. Фрагменты спектров поглощения продуктов реакции флавоноидов с алюминия хлоридом: спиртовой раствор рутина (1), спиртовое извлечение травы синюхи (2), спиртовое извлечение корневищ с корнями синюхи (3)

о о

ь о

с. с

и а>

т р

с о

концентрация раствора рутина, С %

Рисунок 6. Градуировочная зависимость оптической плотности раствора от концентрации рутина

Таблица 2. Метрологические характеристики УФ- спектрофотометрической методики определения суммы флавоноидов сырья синюхи голубой в пересчете на рутин (Р=95, п=5)

параметры / X 5"1 5 Р ±ЛХ с, %

Корневища с корнями 4 0,59 0,002 0,047 0,021 95% 2.78 0,06 9,9

Трава 4 0,97 0,0025 0,05 0,022 95% 2,78 0,06 6,4

Разработка флуориметрической методики количественного определения сапонинов в растительном сырье синюхи голубой

Была изучение возможность количественного определения суммы флавоноидов сырья синюхи методом флуориметрии.

Получены спектры возбуждения и спектры регистрации раствора рутина с добавлением спиртового раствора алюминия хлорида, значительно усиливающего флуоресценцию (рис.7). Установлены рабочие максимумы методики (А. тах возб=426 нм, Хтах рег=522 нм). В выбранных условиях получена градуировочная зависимость для определения суммы флавоноидов

методом флуориметрии по реакции с хлоридом алюминия (рис.8). Рассчитаны метрологические характеристики методики (табл.3).

0 5- 426 нм

= 0,45 ■ ж 5. п л Гш

522 нм

400

450

500

550

420

620

длина волны, нм

Рисунок 7. Фрагменты спектров возбуждения (1) и регистрации (2) комплекса рутина с алюминия хлоридом при определении его методом флуориметрии

Рисунок 8. Градуировочная зависимость показателя флуоресценции от

концентрации стандартного раствора рутина для диапазона высоких концентраций (0,1 - 1%)

Флуориметрический метод может быть использован для определения флавоноидов в сырье синюхи, однако сравнительный анализ двух разработанных методик показал, что флуориметрическая методика дает заниженные значения по сравнению со спектрофотометрической методикой, имеющей меньшее значение стандартного отклонения и большее значение коэффициента корреляции (0,991).

ОД 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9 1

концентрация раствора рутина, С %

Таблица 3. Метрологические характеристики флуориметрической методики определения суммы флавоноидов сырья синюхи голубой в пересчете на рутин (Р=95, п=5)

Лекарственное растительное сырье Параметры

Г X в V Кр.О ±ДХ е,%

Корневища с корнями 4 0,091 0,00015 0,007 0,003 2,78 0,009 12,1

Трава 4 0,243 0,000)7 0,0132 0,006 2,78 0,007 6,8

Изучение характеристик подлинности сырья синюхи голубой

В настоящее время на корневища с корнями синюхи голубой в РФ существуют два нормативных документа - статья 74 ГФ XI и изменение №1 к ГФ XI от 08.07.1998г. Проведенные информационно-аналитические исследования показали, что в разделе «Внешние признаки» дается достаточно подробная характеристика внешнего вида цельного и измельченного сырья. В разделе «Микроскопия» отсутствуют характеристики анатомического строения цельных корневищ синюхи, а также измельченных корневищ с корнями синюхи. Нормативная документация на траву синюхи отсутствует, т.к. данное сырье в официнальной медицине не используется.

В соответствии с современными требованиями к НД на ЛРС было проведено углубленное микроскопическое изучение строения подземных органов синюхи, дана характеристика анатомического строения цельных корневищ. При изучении вариабильности диагностически значимых признаков сырья при измельчении установлено, что диагностическое значение имеют: крупные, тангентально вытянутые клетки первичной коры с неравномерно утолщенными оболочками с каплями жирного масла; изредка встречающиеся мелкие крахмальные зерна, обрывки спиральных, реже сетчатых или лестничных сосудов; крупные клетки эндодермы,

клеточные оболочки которой окрашиваются Суданом III; клетки эпидермиса, имеющие тонкие опробковевшие оболочки (рис.9-13).

Рисунок 10.

Поперечный срез корня синюхи Синюха голубая. Давленый препарат Увеличение х 125 корня. Клетки паренхимы. Сосуды

ксилемы. Увеличение х125.

Рисунок 11. Синюха голубая.

Давленый препарат корня. Клетки первичной коры. Зерна крахмала. Увеличение х125.

Рисунок 12. Синюха голубая.

Давленый препарат корня. Клетки паренхимы. Капли жирного масла. Увеличение х125.

В ходе изучения характеристик подлинности травы синюхи дано описание внешних признаков и анатомического строения цельного и измельченного сырья, определены некоторые числовые показатели.

Исследование жидких лекарственных форм сишохи голубой Дана характеристика водных извлечений синюхи: отвара корневищ с корнями и настоя травы (прозрачность, цветность, запах, вкус, рН).

Хроматографически показано, что водные извлечения синюхи отличаются от исходного сырья по качественному составу сапонинов и флавоноидов. С помощью разработанных методик в водных извлечениях определено содержание суммы тритерпеновых сапонинов в пересчете на р - эсцин и суммы флавоноидов в пересчете на рутин (табл.4).

Таблица 4. Содержание биологически активных веществ в сырье и лекарственных формах синюхи голубой

ЛРС лекарственная форма Содержание, %

Сумма сапонинов Сумма флавоноидов

Корневища с корнями синюхи отвар 1,28±0,11 0,100 ±0,004

жидкий экстракт 9,44±0,64 0,410 ±0,037

Трава синюхи настои 1,00±0,071 0,370 ±0,035

жидкий экстракт 7.60±0,57 0,960 ±0,123

Недостатком водных извлечений растительного сырья является ограниченный срок годности (не более 3-х суток), поэтому из изучаемого сырья были получены жидкие экстракты (1:1) и дана их характеристика (описание внешних признаков, прозрачность, цветность, рН, вкус). Жидкие экстракты были стандартизованы в соответствии с требованиями ГФ XI по сухому остатку, содержанию спирта и тяжелых металлов. При хроматографическом изучении качественного состава жидких экстрактов сырья синюхи показано, что в них переходит практически вся сумма тритерпеновых сапонинов и флавоноидов. С помощью достоверных образцов доказано присутствие ликвиритина, рутина и кверцетина. Дана количественная оценка содержания БАВ в изучаемых лекарственных формах синюхи (табл.4).

Изучение фармакологической активности сырья и препаратов синюхи голубой

С использованием титриметрической методики Т.В.Максимовой с соавт. проведена оценка антиоксидантной активности сырья и лекарственных форм корневищ с корнями и травы синюхи. Показано, что сапонины синюхи

не обладают антиокеидантными свойствами. В то же время флавоноиды растения проявляют высокую антиоксидантную активность. Из лекарственных форм наибольшую активность проявляет жидкий экстракт травы синюхи голубой.

На культуре инфузорий Paramecium caudatum было определено мембраностабилизирующее действие полученных препаратов. Установлено, что жидкий экстракт корневищ с корнями синюхи проявляет максимальную мембраносгабилизирующую активность в концентрации МО'8. Отвар корневищ с корнями синюхи такой активностью не обладает и в большинстве случаев снижает жизнеспособность клеток. Лекарственные формы травы синюхи проявляли активность в двух разведениях - жидкий экстракт в концентрациях МО"4 и МО"10, настой - МО"3 и МО"9.

Первичная оценка гипогликемического действия проводилась в опытах на здоровых мышах на модели глюкозотолерантного теста. Установлено, что жидкие экстракты корневищ с корнями и травы синюхи, а также очищенная сумма сапонинов корневищ с корнями синюхи проявляли гипогликемические свойства (рис.13). Выраженной гипогликемической активностью обладал жидкий экстракт корневищ с корнями, его эффект развивался через 1 час после попадания в организм, однако являлся коротким по длительности (около 30 минут). Очищенная сумма сапонинов корневищ с корнями синюхи проявляла наименее выраженный, запаздывающий по отношению к глюкозной нагрузке гипогликемический эффект: начало эффекта - через 1,5 часа после попадания в организм, длительность - около 30 мин.

Наиболее благоприятным фармакокинетическим профилем гипогликемической активности обладал жидкий экстракт травы. Гипогликемический эффект жидкого экстракта травы синюхи был достаточно длительным и наиболее физиологичным, начинал проявляться через 60 минут после попадания в организм, обеспечивая снижение уровня гликемии в течение последующих 1,5 часов.

Гликемия, % к исходным значениям по группе

Исходно 0 мин. 30 мин.

—♦—Контроль -о— Глибенкламид —*— очищенная сумма сапонинов корневищ с корнями синюхи

60 мин.

120 мин.

-жидкии экстракт корневищ с корнями синюхи

—♦—жидким экстракт травы синюхи

Рисунок 13. Динамика гликемии у животных по данным ГТТ

Сравнение гипогликемической активности жидкого экстракта травы синюхи с действием глибенкламида показало, что экстракт не снижал гликемию натощак и концентрацию глюкозы крови ниже нормальных значений (рис.13), что позволяло избежать риска гипогликемии. Полученные данные дают возможность рассматривать жидкий экстракт травы синюхи в качестве регулятора пранднальной гликемии растительного происхождения.

ВЫВОДЫ

1. С использованием современных физико-химических методов анализа проведено углубленное изучение биологически активных веществ синюхи голубой. Показано, что корневища с корнями и трава синюхи имеют различный состав тритерпеновых сапонинов и флавоноидов. Установлено, что в растительном сырье синюхи присутствуют две группы сапонинов, различающиеся по способности к гемолизу эритроцитов крови. В корневищах с корнями синюхи идентифицированы рутин и ликвиритин, в траве - рутин и кверцетин.

2. Разработаны методики качественного хроматографического обнаружения тритерпеновых сапонинов и флавоноидов в сырье синюхи голубой.

3. Проведено изучение биологически активных веществ синюхи (тритерпеновых сапонинов и флавоноидов) спектральными методами. Показано, что ИК-спектроскопшо рациональнее использовать в анализе очищенных индивидуальных тритерпеновых сапонинов. Получен КР-спектр стандартного образца рутина, имеющий максимум в области 8650 см'1 и максимум малой интенсивности в области 7350 см"1, а также КР -спектры сырья и лекарственных форм синюхи. Показана возможность использования метода РСС для идентификации флавоноидов в сырье и лекарственных формах синюхи голубой.

4. Оптимизирована спектрофотометрическая методика количественного определения суммы тритерпеновых сапонинов в пересчете на (З-зсцин в сырье синюхи.

5. Разработаны спектрофотометрическая и флуориметрическая методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в сырье синюхи.

6. С использованием микроскопического метода изучена вариабильность диагностически значимых признаков при измельчении корневищ с корнями

синюхи голубой. Установлено, что диагностическое значение имеют обрывки спиральных, реже сетчатых или лестничных сосудов, клетки эпидермиса с тонкими опробковевшими оболочками, крупные клетки эндодермы, оболочка которых окрашивается Суданом III, паренхимные клетки с каплями жирного масла и мелкими крахмальными зернами. Выявленные признаки визуализированы.

7. Изучены характеристики подлинности травы синюхи. Выявлены и визуализированы диагностические признаки анатомического строения стебля, листа и цветка синюхи.

8. Из корневищ с корнями и травы синюхи получены жидкие экстракты (1:1) и проведена их стандартизация. Сравнительным анализом показано, что жидкие экстракты являются более рациональной лекарственной формой по сравнению с водными извлечениями, т.к. в них переходит максимальное количество сапонинов и флавоноидов, содержащихся в растительном сырье.

9. Установлено наличие антиоксидантного, мембраностабилизируещего и гипогликемического действия лекарственных форм корневищ с корнями и травы синюхи голубой.

10. Материалы исследований были использованы при разработке проекта ФС «Корневища с корнями синюхи» для Государственной Фармакопеи XII издания.

Основное содержание диссертационной работ отражено в публикациях:

1. Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Боева С.А., Сливкин А.И., Бузлама A.B., Мироненко Н.В. Получение сапонинсодержащего препарата синюхи голубой, его стандартизация и первичная оценка гипогликемического действия // Труды молодых ученых ВГУ.-2006.-№1-2.-с.99-102.

2. Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Сливкин А.И., Мироненко Н.В. Исследование возможности количественного определения сапонинов синюхи голубой методом УФ-спектрофотометрии // Науч. Труды VII

Международн. Науч.-практич. Конф. «Здоровье и образование в ХХ1веке». - М. 2006,- 23-26 ноября 2006г. -Т.1.-С.320-321.

3. Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Боева С.А., Сливкин А.И., Селеменев В.Ф., Мироненко Н.В. Получение и стандартизация сапонинсодержащего препарата синюхи голубой //Сорбционные и хроматографические процессы. - Воронеж.-2006.-т.6, вып.6,- ч.4,- с.1450-1454.

4. Мальцева A.A., Боева С.А., Брежнева Т.А., Бузлама A.B., Сливкин А.И. Сапонины растений Beta vulgaris L. и Polemonium coeruleum L. особенности получения, сравнительная оценка гипогликемической активности // Вестник Воронеж. Гос. Ун-та. Сер. Химия, биология, фармация. - Воронеж. - 2007, №1.- с.99-102.

5. Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Боева С.А., Сливкин А.И., Мироненко Н.В. Исследование возможности количественного определения тритерпеновых сапонинов методом УФ-спектрофотометрии // Вестник Воронеж. Гос. Унта. Сер. Химия, биология, фармация. - Воронеж, 2007, - №2. с. 142-144.

6. Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Сливкин А.И., Селеменев В.Ф., Мироненко Н.В. Хроматографическое исследование сапонинного состава растительного сырья и фитопреператов синюхи голубой // Сорбционные и хроматографические процессы. - Воронеж. - 2007.- т.7, вып.4.- с.695-698.

7. Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Мироненко Н.В., Боева С.А. Количественное определение тритерпеновых сапонинов в некоторых видах лекарственного растительного сырья //Материалы 3-й Всерос.науч,-метод. конф. «Фармобразование-2007». - Воронеж. 2007 - 22-24 марта 2007г.,- Ч.1.- с.80-81.

8. Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Сливкин А.И. Получение и исследование экстракционных фитопрепаратов синюхи голубой //. Материалы 3-й Всерос.науч.-метод. конф. «Фармобразование-2007». - Воронеж. 2007- 2224 марта 2007г.,- ч. 1- с.222-224.

9. Мальцева A.A., Брежнева Т.А.,Сливкин А.И. Сравнительное исследование сапонинного состава высушенных подземных и надземных частей растения Polemonium coeruleum L. // Материалы 3-й Всерос.науч.-метод. конф. «Фармобразование-2007». - Воронеж. 2007- 22-24 марта 2007г.,-Ч.1.- с.225-227

Ю.Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Сливкин А.И. Исследование сапонинного состава экстракционных препаратов синюхи голубой //Всероссийский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тез, докл. - М. 2007.- 1620 апреля 2007г. - с.844.

П.Мальцева A.A., Бакалова Н.В., Брежнева Т.А., Сливкин А.И. Определение флавоноидов в лекарственном растительном сырье синюхи голубой // Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации: материалы межрегион. Науч.-практ. Юбилейной конф. - Воронеж. - 2008,- 6-7 февраля 2008 г. - с.290-292.

12.Мальцева A.A., Андриенкова A.B., Брежнева Т.А., Сливкин А.И. Исследование возможности количественного определения сапонинов синюхи голубой методом хроматоспектрофотометрии //Проблемы здоровьесбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации: материалы межрегион. Науч.-практ. Юбилейной конф. - Воронеж,- 2008. - 6-7 февраля 2008 г. - с.287-289.

13.Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Бузлама A.B., Сливкин А.И. Изучение гипогликемизирующей активности сапонинов растения Polemonium coeruleum L. //«Здоровье и образование в XXI веке». Науч. тр. IX междунар. Конгресса. - М. 2008. 27-30 ноября 2008 г.- с.385.

М.Мальцева A.A., Брежнева Т.А., Бузлама A.B., Сливкин А.И. Получение, стандартизация и исследование фармакологической активности сапонинсодержащего препарата синюхи голубой // «Науки о человеке». Материалы X конгресса молодых ученых и специалистов. - Томск: СибГМУ. - 2009,- с. 118-119.

15.Мальцева A.A., Гвоздевский П.А. Определение некоторых групп БАВ в растительном сырье Polemonium coeruleum L. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр.- Пятигорск: Пятигорская ГФА,- 2009. - Вып.64.-с.81-82.

16.Мальцева A.A., Брежнева Т. А., Камаева Г.М., Сливкин А.И. Микроскопическое исследование листьев Polemonium coeruleum L Н Всероссийский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тез. Докл. -М., 2009.-c.695.

П.Мальцева A.A., Гвоздевский П.А., Брежнева Т.А., Сливкин А.И. Флавоноиды растения Polemonium coeruleum L. и предварительная оценка их антиоксидантной активности // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр.- Пятигорск: Пятигорская ГФА. - 2010,- Вып.65.-с.89-90.

18.Мальцева A.A., Сорокина A.A., Брежнева Т.А., Сливкин А.И. Оценка гипогликемического действия препарата синюхи голубой //Фармация.-2010.-№2.-с. 18-20.

19.Мальцева A.A., Сорокина A.A., Брежнева Т.А., Сливкин А.И. Выбор оптимальных условий хроматографирования флавоноидов растения Polemonium coeruleum L.//Материалы 4-й Всерос.науч.-метод. конф. «Фармобразование-2010». - Воронеж. - 2010.- 20-22 апреля 2010г. - ч.2.-с.371-373.

20.Мальцева A.A., Сорокина A.A., Брежнева Т.А., Сливкин А.И. Получение жидких экстрактов (1:1) корневищ с корнями синюхи голубой // Материалы 4-й Всерос.науч.-метод. конф. «Фармобразование-2010». -Воронеж,- 2010. - 20-22 апреля 2010г. - ч.2,- с.369-370.

21. Мальцева A.A., Сорокина A.A. Синюха голубая: химический состав, фармакологические свойства // Фармация.-2010.-№5 - с. 54-56.

Подписано в печать 02.03.11. Формат 60x84 'Лб. Усл. печ. л. 1,45. Тираж 100 экз. Заказ 237.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии Издательско-полиграфического центра Воронежского государственного университета. 394000, Воронеж, ул. Пушкинская, 3

Оглавление диссертации Мальцева, Алевтина Алексеевна :: 2011 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика семейства синюховые — Ро1етошасеае.

1.2. Ботанико-фармакогностическая характеристика синюхи голубой.

1.3.Заготовка, сушка и хранение лекарственного растительного сырья «Корневища с корнями синюхи».:.

1.4. Химический состав синюхи голубой.

1.5.Методы выделения, идентификации и количественной оценки сапонинов синюхи голубой.

1.5.1. ТСХ в анализе сапонинов синюхи голубой.

1.5.2. Методы количественного определения сапонинов синюхи голубой.

1.6.Современные методы фармацевтического анализа в исследовании сырья и лекарственных форм синюхи голубой.

1.7. Анализ нормативной документации на сырье синюхи голубой.

1.8. Фармакологическое действие и применение синюхи голубой в медицине.

Выводы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.

ГЛАВА 3. Изучение биологически активных веществ синюхи голубой.

3.1. Изучение сапонинов синюхи голубой методом ТСХ.

3.2. Изучение флавоноидов синюхи голубой методом ТСХ.

ГЛАВА 4. Исследование растительного сырья синюхи голубой спектральными методами.

4.1. Получение очищенной суммы сапонинов из растительного сырья синюхи голубой.

4.2.Иеследование растительного сырья синюхи методом ИК — спектроскопии.

4.2.1. ИК — спектроскопия тритерпеновых сапонинов синюхи голубой.

4.2.2. РЖ - спектроскопия флавоноидов синюхи голубой.

4.3. Идентификация основных групп действующих веществ синюхи голубой методом Рамановской спектроскопии.

ГЛАВА 5. Разработка методов количественного определения биологически активных веществ в растительном сырье синюхи голубой.

5.1. Определение суммы сапонинов в растительном сырье синюхи голубой.

5.1.1.Отработка условий количественного определения тритерпеновых сапонинов в сырье синюхи.

5.1.2. Определение суммы сапонинов в растительном сырье синюхи голубой.

5.2. Определение суммы флавоноидов в растительном сырье синюхи голубой методом УФ-спектрофотометрии.

5.3. Определение суммы флавоноидов в растительном сырье синюхи голубой методом флуориметрии.

ГЛАВА 6. Изучение характеристик подлинности сырья синюхи голубой.

6.1. Микроскопическое исследование корневищ с корнями синюхи голубой.

6.1.1.Изучение анатомического строения цельных корневищ с корнями синюхи.

6.1.2.Изучение анатомического строения измельченных корневищ с корнями синюхи.

6.2. Изучение характеристик подлинности травы синюхи голубой.

6.2.1. Характеристика внешних признаков травы синюхи голубой.

6.2.2. Изучение анатомического строения травы синюхи голубой.

6.3. Определение некоторых числовых показателей сырья синюхи голубой.

ГЛАВА 7. Получение и анализ лекарственных форм синюхи голубой.

7.1. Изучение водных извлечений сырья синюхи.

7.2. Получение и анализ жидких экстрактов синюхи.

ГЛАВА 8. Изучение фармакологической активности сырья и препаратов синюхи голубой.

8.1. Изучение антиоксидантной активности синюхи голубой.

8.2. Оценка мембраностабилизирующего действия препаратов синюхи голубой.

8.3. Изучение гипогликемизирующей активности лекарственных форм синюхи голубой.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Мальцева, Алевтина Алексеевна, автореферат

Актуальность темы. В настоящее время большое внимание уделяется физико-химическиим и фармакологическим исследованиям лекарственных растений, используемых в официнальной и народной медицине.

Одним из таких растений является синюха голубая — Polemonium coeruleum L., семейства синюховые — Polemoniaceae, достаточно широко распространенная в средней полосе России. Корневища с корнями синюхи — Rhizomata cum radicibus Polemonii, включены в ГФ XI в качестве отхаркивающего средства, применяемого в форме отвара. Данный вид сырья не входит в фармакопеи ведущих стран мира.

Синюха голубая в 1932г. была предложена для медицинского применения профессором М.Н. Варлаковым (Томский медицинский институт) как заменитель импортной сенеги и активно изучалась в 50-х - 60-х годах XX века. В СССР растение культивировалось в Белоруссии, западной части Украины, Прибалтике, Западной Сибири, центральной части Нечерноземья России. В настоящее время корневища с корнями синюхи имеют ограниченное применение и практически перестали реализовываться через аптечную сеть.

В народной медицине корневища с корнями синюхи имеют более широкое применение — не только как отхаркивающее средство, но и как седативное, противовоспалительное, ранозаживляющее, кровоостанавливающее, антибактериальное и др. Помимо подземных органов в народной медицине используется надземная часть растения, которая в настоящее время является отходом при заготовке официнального сырья.

Учитывая недостаточную изученность комплекса действующих веществ, разнообразную фармакологическую активность, отсутствие на фармацевтическом рынке лекарственных форм синюхи, а так же перспективу безотходного использования растения, углубленные исследования синюхи голубой следует считать актуальными.

Целью настоящего исследования является проведение углубленного комплексного изучения биологически активных веществ (БАВ) растения, совершенствование имеющейся нормативной документации на сырье и изучение возможности получения лекарственных форм синюхи голубой.

Задачи исследования:

• Провести информационно—аналитические исследования по вопросам химического состава синюхи голубой, фармакологической активности и возможности получения новых лекарственных форм.

• Провести микроскопическое исследование корневищ с корнями синюхи голубой с целью изучения вариабильности диагностически значимых признаков.

• Провести фармакологическое изучение сырья и препаратов синюхи голубой

Научная новизна результатов исследования заключается в получении научно-обоснованных данных при экспериментальном изучении состава БАВ сырья синюхи голубой: тритерпеновых сапонинов и флавоноидов. С использованием современных физико-химических методов (УФ-спектроскопия, ИК-спектроскопия и др.) дана их качественная и количественная характеристика. Разработана спектрофотометрическая методика количественного определения флавоноидов в сырье синюхи голубой. Проведено сравнительное химическое изучение корневищ с корнями и травы синюхи голубой, показана перспективность использования последней как дополнительного источника тритерпеновых сапонинов. Экспериментально подтверждены гипогликемическое действие и антиоксидантная активность сырья и жидких экстрактов синюхи голубой.

Практическая значимость полученных результатов состоит в изучении вариабельности диагностических признаков анатомического строения сырья синюхи голубой различных форм переработки (цельное и измельченное сырье) и их визуализации. Выявлены диагностически значимые признаки при идентификации измельченных корневищ с корнями синюхи. На основании результатов проведенных исследований внесены усовершенствования в фармакопейную методику количественного определения тритерпеновых сапонинов в корневищах с корнями синюхи (фрагмент экстракции). Проведенные исследования по стандартизации лекарственного растительного сырья были использованы при разработке проекта ФС на корневища с корнями синюхи голубой для Государственной фармакопеи XII издания. Обоснована возможность рационального безотходного использования растения синюха голубая - Ро1етопшш соеги1еит Ь., и расширения сырьевой базы за счет применения в качестве растительного сырья не только подземных органов, но и травы растения. Проведенные фармакологические исследования сырья синюхи позволяют расширить область применения растения. Показана возможность получения жидких экстрактов (1:1) из корневищ с корнями и травы синюхи голубой. Разработаны методики их стандартизации.

Основные положения, выносимые на защиту:

• Результаты углубленного изучения качественного состава БАВ корневищ с корнями и травы синюхи голубой.

• Результаты макроскопическиго и микроскопического изучения травы синюхи голубой

• Результаты изучения водных извлечений и жидких экстрактов 1:1 синюхи голубой.

• Результаты исследования фармакологической активности сырья и жидких экстрактов (1:1) синюхи.

Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование комплекса биологически активных веществ растения Polemonium coeruleum L."

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

3. Проведено изучение биологически активных веществ синюхи (тритерпеновых сапонинов и флавоноидов) спектральными методами. Показано, что ИК—спектроскопию рациональнее использовать в анализе очищенных индивидуальных тритерпеновых сапонинов. Получен КР-спектр стандартного образца рутина, имеющий максимум в области 8650 см"1 и максимум малой интенсивности в области 7350 см"1, а так же КР -спектры сырья и лекарственных форм синюхи. Показана возможность использования метода РСС для идентификации флавоноидов в сырье и лекарственных формах синюхи голубой.

4. Оптимизирована спектрофотометрическая методика количественного определения суммы тритерпеновых сапонинов в пересчете на р-эсцин в сырье синюхи.

6. С использованием микроскопического метода изучена вариабильность диагностически значимых признаков при измельчении корневищ с корнями синюхи голубой. Установлено, что диагностическое значение имеют обрывки спиральных, реже сетчатых или лестничных сосудов, клетки эпидермиса с тонкими опробковевшими оболочками, крупные клетки эндодермы, оболочка которых окрашивается Суданом III, паренхимные клетки с каплями жирного масла и мелкими крахмальными зернами. Выявленные признаки визуализированы.

9. Установлено наличие антиоксидантного, мембранстабилизируещего и гипогликемического действия лекарственных форм корневищ с корнями и травы синюхи голубой.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Мальцева, Алевтина Алексеевна

1. Абизов Е.А. Химическое изучение листьев Elaeagnus angustifolia L. / Е.А. Абизов, О.Н. Толкачев // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. — 2008. - №4. — С. 40-42.

2. Абрамова Л.М. Опыт выращивания Polemonium caeruleum L.b лесостепной зоне Башкортастана / Л.М. Абрамова, O.A. Каримова, М.В. Лебедева // Вестн. Оренбургского гос. ун-та. 2009. - № 9. - С. 100-103.

3. Ажурова Т.А. Гиполипидемическое и сахароснижающее действие комплексного растительного средства / Т.А. Ажурова, С.М. Николаев, В.Г. Банзаракшеев // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. — 2007. № 2. - С. 27-29.

4. Антиоксидантные свойства лекарственных растений / В.Ф. Громовая и др. // Хим.-фарм. журнал. 2008. - Т.42, № 1. - С. 26-29.

5. Антиоксидантные свойства экстрактов листьев бадана толстолистного / И.В. Шилова и др. // Хим.-фарм. журн. 2006. - Т. 40, № 11. - С. 3942.

6. Артюшенко З.Т. Атлас описательной морфологии высших растений. Плод / З.Т. Артюшенко, A.A. Федоров. Л. : Наука, 1986. - 392 с.

7. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. М. : Медицина, 1983. - 340 с.

8. Баранов В.Г. Экспериментальный сахарный диабет / В.Г. Баранов, И.М. Соколоверова, Э.Г. Гаспарян. Л. : Наука, 1983. - 198 с.

9. Барков Н.К. Методы оценки психофармакологических средств в эксперименте / Н.К. Барков, В.В. Закусов // Фармакология и токсикология. 1973. - № 6. - С. 730-739.

10. Ботаника: Анатомия и морфология растений / А.Е. Васильев и др.. -М. : Просвещение, 1978. 480 с.

11. Брежнева Т.А. Выделение и исследование сапонинов сахарной свеклы : дис . канд. фарм. наук / Т.А. Брежнева. М., 2003. - 199 с.

12. Бубенчикова В.Н. Разработка показателей качества листьев земляники лесной / В.Н. Бубенчикова, И.Л. Дроздова // Фармация. 2002. - № 6. -С. 16-18.

13. Бугрим H.A. Сапонины корней синюхи обыкновенной / H.A. Бугрим, С.А. Носовицкая // Аптечное дело. 1953. - Т. 2. - С. 45-47.

14. Бузунова М.М. Гемолитический индекс синюхи лазурной и синюхи Ван-Брюнте / М.М. Бузунова // Тезисы XI научной конференции. -Томск, 1952.-С. 29-30.

15. Бухаров В.Г. Исследование гликозидов Polemonium coeruleum / В.Г. Бухаров, В.А. Шайхутдинов, Л.Н. Карнеева // Химия природ, соединений. 1969. - № 6. - С. 498-504.

16. Бухаров В.Г. Некоторые данные о строении Генина-гликозида Polemonium coeruleum / В.Г. Бухаров, Л.Н. Карнеева, В.А. Талан // Химия природ, соединений. 1969. -№ 5. - С. 452-453.

17. Бухаров В.Г. Строение углеводных цепей полемониозида / В.Г. Бухаров, Л.Н. Карнеева, В.А. Талан // Химия природ, соединений. -1969.-№6.- С. 511-515.

18. Валидация аналатических методик для производителей лекарств : Типовое руководство предприятия по производству лекарственных средств / под ред. В.В. Береговых. М. : Литтерра, 2008. - 132 с.

19. Варлаков М.Н. Замена импортной сенеги корнями Polemonium coeruleum L. / М.Н. Варлаков // Фармация. 1943. - № 1. - С. 31 -36.

20. Варлаков М.Н. Избранные труды / М.Н. Варлаков. М. : Медицина, 1963.- 172 с.

21. Васильев B.H. Заметки по систематике и географии рода Polemonium L / B.H. Васильев // Ботанические материалы Гербария Ботанического института АН СССР. 1953. - Т. 15. - С. 214-228.

22. Вейдерпасс Н. Изготовление эталонного эксракта синюхи (Extractum Polemonii coerulei) / Н. Вейдерпасс, JI. Кирш // Учен, записки Тартус. ун-та. 1954. - Вып. 36. - С. 192-198.

23. Влияние сапонинов сахарной свеклы на организм животных / В.М. Смоляр и др. // Вопросы питания. 1985. - № 2. - С. 55-58.

24. Выделение нативных агликонов из тритерпеновых гликозидов тихоокеанской голотурии Cucumaria japónica / В.Ф. Шарыпов и др. // Химия природ, соединений. 1985. -№ 1. - С. 55-58.

25. Выделение, химический состав и гиполипидемическая активность суммы флавоноидов из Thermopsis altherniflora / З.А. Хушбатова и др. // Хим.-фарм. журн. 2001. - Т. 35, № 3. - С. 35-37.

26. Галибина А.Н. Синюха лазурная как отхаркивающее средство / А.Н. Галибина // Новые лекарственные растения Сибири, их лечебные препараты и применение. — Томск, 1959. С. 40-43.

27. Гацура В.В. Фармакологические аспекты в экспериментальной медицине и биологии / В.В. Гацура, A.C. Саратиков. Томск, 1977. -133 с.

28. Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии / Ф. Гейсс. М. : Мир, 1999.-405 с.

29. Георгиевский В.П. Физико-химические характеристики флавоноидных соединений / В.П. Георгиевский. — Ростов н/Д : Изд-во Ростов, гос. унта, 1998.-С. 13.

30. Гинзбург B.JI. К истории открытия комбинационного рассеяния света / В.Л. Гинзбург, И.Л. Фабелинский // Вестн. Рос. Академии наук. 2003. -Т.73,№3.-С. 215-227.

31. Гипогликемическая активность новых производных а-оксикарбоновых кислот / А.И. Краснова и др. // Разработка, исследование и маркетингновой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. Пятигорск, 2009. -Вып. 64. - С. 455-456.

32. Головко Д.Н. О сушке корней синюхи / Д.Н. Головко. 1950. — № 2. — С. 29-30.

33. Голубева И.С. Использование Рамановской Спектроскопии для идентификации сырья и настоя корней алтея / И.С. Голубева, A.A. Сорокина // Фармация. 2009. - № 2. - С. 10-12.

34. Гончарова Т.А. Энциклопедия лекарственных растений: (лечение травами) / Т.А. Гончарова. 3-е изд. испр. и доп. — М. : Изд. Дом МСП, 2001.-Т. 2.-528 с.

35. Государственная фармакопея РФ. 12 изд. — М. : Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. — Ч. 1. - 704 с.

36. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. - М. : Медицина, 1989. -Вып. 2: Лекарственное растительное сырьё. — 400 с.

37. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. - М. : Медицина, 1987. -Вып. 1 : Общие методы анализа.-335 с.

38. Государственный реестр лекарственных средств, разрешенных к медицинскому применению. М., 2004. - С. 1319.

39. Гусев С.П. Агротехнические указания по возделыванию лекарственных растений / С.П. Гусев, А.П. Кирьянов. М. : Сельхозгиз, 1950. - 121 с.

40. Дедиева A.A. К вопросу о приготовлении настоев и отваров / А.П. Дедиева // Фармация. 1992. - № 4. - С. 47-49.

41. Действие экстракта из корней синюхи голубой (Polemonium coeruleum L.) на опухолевые клетки / М.В. Егорова и др. // Рос. онкол. журн. — 1998.-№ 1.-С. 45-48.

42. Изменение №1 к ГФ XI, вып.2, ст.74. «Корневища с корнями синюхи» от 08.07.1998г.

43. Изучение флавоноидов сборов на основе листьев бадана толстолистного / JI.M. Федосеева и др. // Химия растительного сырья. 2006. - №4. - С. 49-54.

44. Интродукция растений природной флоры СССР. М. : Наука, 1979. -430 с.

45. Искендеров Т.Б. Исследование метаболитов тритерпеновых сапонинов сапарала / Т.Б. Искандеров, К.Ф. Оружева // Фармация. 1990. - № 2. -С. 55-59.

46. Использование ТСХ для идентификации биологически активных веществ в некоторых видах лекарственного сырья / A.C. Саушкина и др. // Сорбционные и хроматографические процессы. 2001. - Т. 1, вып. 5.-С. 902-905.

47. Казицына JI.A. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии / JI.A. Казицына, Н.Б. Куплетская. М. : Высш. шк, 1971.-264 с.

48. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография: в 2 т. / Ю. Кирхнер. М. : Мир, 1981.- Т. 1.-616 е.; Т. 2.-528 с.

49. Киселева T.JL Лекарственные растения в мировой медицинской практике: государственное регулирование номенклатуры и качества / Т.Л. Киселева, Ю.А. Смирнова. М. : Изд-во Профессиональной ассоциации натуротерапевтов, 2009. - 295 с.

50. Ковалев И.П. Спектроскопическое исследование природных гликозидов: дис . канд. хим. наук / И.П. Ковалев. Харьков, 1966. -168 с.

51. Количественное определение суммы тритерпеновых сапонинов в корневищах с корнями синюхи / Ю.А. Голяк и др. // Хим.-фарм. журнал. 2008. - Т. 42, № 8. - С. 16-18.

52. Крылов П.Н. Флора Западной Сибири : Руководство к определению западно-сибирских растений / П.Н. Крылов. Томск, 1937. - 2417 с.

53. Курочкин Е.И. Лекарственные растения. — 6-е изд., испр. и доп. — Самара : Изд-во «ABC», 2001. 560 с.

54. Кусова Р.Д. Фитохимическое изучение плодов лоха узколистного, произрастающего в Северной Осетии / Р.Д. Кусова // Фармация. 2006. -№ 3. - С. 10-12.

55. Левина P.E. Морфология и экология плодов / P.E. Левина. Л. : Наука, 1987.-160 с.

56. Литтл Л. Инфракрасные спектры адсорбированных молекул / Л. Литтл. -М.: Мир, 1969.-514 с.

57. Лотова Л.И. Морфология и анатомия высших растений / Л.И. Лотова. -М. : Изд-во Эдиториал УРСС, 2000. 528 с.

58. Маевский П.Ф. Флора средней полосы Европейской части России / П.Ф. Маевский, под ред. А.Г. Еленевского, С.Р. Майфова. — 10 испр. и доп. М. : Товарищество научных изданий КМК, 2006. - 600 с.

59. Маевский П.Ф. Флора средней полосы Европейской части СССР / П.Ф. Маевский. М.; Л. : Сельхозгиз, 1954. - 916 с.

60. Машковский М.Д. Лекарственные средства : в 2 т. Изд. 14-е. - М. : ООО «Новая Волна», 2001. - Т. 1. - 540 с.

61. Машковский М.Д. Лекарственные средства : в 2 т. Изд. 14-е. - М. : ООО «Новая Волна», 2001. - Т. 2. - 608 с.

62. Мироненко Н.В. Сорбционно-спектрофотометрическое определение тритерпеновых сапонинов — производных олеаноловой кислоты : дис. . канд. хим. наук / Н.В. Мироненко. Воронеж, 2010. - 170 с.

63. Миронов В.И. Влияние синюхи лазурной на свертываемость крови / В.И. Миронов // Фармакология и токсикология. 1967. - № 6. - С. 709.

64. Нагорная В.А. Определение сапонинов в продуктах сахарного производства / В.А. Нагорная, Р.Т. Жижина, А.К. Карташов // Сахарная промышленность. 1966. — № 8. - С. 39-43.

65. Наканиси К. Инфракрасная спектроскопия и строение органических соединений / К. Наканиси. М. : Мир, 1965. - 216 с.

66. Нго Зиэп Т.Т. Разработка методики количественного определения суммарного содержания флавоноидов в траве пустырника спектрофотометрическим методом / Т.Т. Нго Зиэп, Е.В. Жохова // Химия растительного сырья. 2007. - № 4. - С. 73-77.

67. Носов A.M. Лекарственные растения / A.M. Носов. М. : ЭКСМО -Пресс, 1999. - 350 с.

68. Определение молекулярной массы тритерпеновых сапонинов Аралии маньчжурской спектрофотометрическим методом / Т.Л. Генкина и др. // Химия природ, соединений. — 1969. — № 6. — С. 501-503.

69. Павлов С.А. Синюха лазоревая / С.А. Павлов. СПб. : Лениздат, "Ленинград", 2005. - 128 с.

70. Панченков М.М. Комбинированное лечение язвенной болезни сушеницей и синюхой / М.М. Панченков // Хим. медицина. — 1950. -№ 3. С. 28.

71. Получение сапонинов из корнеплодов столовой свеклы и первичная оценка их фармакологического действия / С.А. Атаманова и др. // Хим.-фарм. журн. 2005. - № 12. - С. 29-31. %

72. Получение сухого экстракта из корней девясила высокого и изучение его химического состава / С.А. Матасова и др. // Хим.-фарм. журн. -1999.-№2.-С. 119-123.

73. Пономарев В. Д. Спектры поглощения пентациклических тритерпеноидов в серной кислоте / В.Д. Пономарев, Э.Т. Оганесян, В.Ф. Семенченко // Химия природ, соединений. 1971. - № 2. - С. 147150.

74. Пономарев В.Д. Экстрагирование растительного сырья / В.Д. Пономарев. — М. : Медицина, 1976. 210 с.

75. Попов А.И. Элементный анализ корневищ с корнями синюхи голубой / А.И. Попов, В.А. Попков // Химия природ, соединений. 1993. - № 4. --С. 49-51.

76. Попов А.П. Траволечебник. Лечение лекарственными травами / А.П. Попов. Екатеринбург : ООО «У - Фактория», 2000. - 560 с.

77. Потехина Л.Н. Фармакогнозия и действующие начала нового отхаркивающего растения синюхи (Ро1етопшт соеги1еит Ь.) / Л.Н. Потехина // Новые лекарственные растения Сибири, их лечебные препараты и применение. - Томск, 1946. - Вып. 2. - С. 76-78.

78. Правила сбора и сушки растений. -М.: Медицина, 1995. 328 с. 88:Приказ №308 МЗ РФ от 21.10.97. «Об утверждении инструкции по изготовлению в аптеке жидких лекарственных форм». - Москва, 1997. - 44 с.

79. Природные флавоноиды / Д.Ю. Корулькин и др.: Новосибирск : Академическое изд-во 'Тео, 2007. — 232 с.

80. Разработка и исследование противодиабетического сбора / В.А. Челомбитько > и др. // Разработка; исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. — Пятигорск, 2009. Вып. 64.-С. 118-119.

81. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование: Семейства Caprifoliaceae-Pläntaginaceae / под ред. П.Д. Соколова. Л. : Наука, 1990. - Т. 5. - 328 с.

82. Розенцвейг П.Э. Технология лекарств и галеновых препаратов / П.Э. Розенцвейг, Ю.К. Сандер. Л. : Медицина, 1967. - 772 с.

83. Самылина И.А. Лекарственное растительное сырье, проблемы стандартизации / И.А. Самылина // Медико-фармацевтический Форум, 29 окт.- 2 нояб. 2002 г. : тез. докл.'-М., 2002. С. 133-134.

84. Самылина И.А. Сравнительное изучение настоек календулы / И.А. Самылина, Н.С. Терешина // Фармация. 2005. - № 6. - С. 6-8.

85. Самылина И.А. Фармакогнозия : Атлас : в 2 т. / И.А. Самылина, О.Г. Аносова. М. : ГЭОТАР - Медиа, 2007. - Т. 1. - 192 с.

86. Самылина И.А. Фармакогнозия : Атлас : в 2 т. / И.А. Самылина, О.Г. Аносова. М.: ГЭОТАР - Медиа, 2007. - Т. 2. - 384 с.

87. Селиванчикова И.Б. Изучение компонентного состава фенольных соединений в гомеопатических настойках туи методом ТСХ. Сообщ. 1 / И.Б. Селиванчикова, М.Н. Лякина, З.П. Костенникова // Фармация. -2001.-№3.-С. 19-21.

88. Селиванчикова И.Б. Изучение компонентного состава флавоноидов в гомеопатических настойках туи методом спектрофотометрии. Сообщ. 3 / И.Б. Селиванчикова, М.Н. Лякина, З.П. Костенникова // Фармация. -2001.-№6. -С. 14-16.

89. Сидакова Т.М. Изучение тритерпеновых соединений травы мяты длиннолистной (Mentha longifolia L.) / Т.М. Сидакова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. Пятигорск, 2010. - Вып. 65. - С. 119-120.

90. Синюха лазурная / под ред. П.К. Енина, А.Д. Туровой. М. : Медгиз, 1955. - 15 с.

91. Скирдов И.В. Определение сапонина в сточных водах сахарного производства / И.В. Скирдов, В.В. Сахненко, Л.И. Ткаченко // Сахарная промышленность. 1983. - № 6. - С. 15-17.

92. Сливкин А.И. Физико-химические и биологические методы оценки качества лекарственных средств / А.И. Сливкин, В.Ф. Селеменев, Е.А. Суховерхова. Воронеж : Изд-во Воронеж, гос. ун-та, 1999.-368 с.

93. Сливкин А.И. Функциональный анализ органических лекарственных веществ / А.И. Сливкин, Н.П. Садчикова. Воронеж : Изд-во Воронеж, гос. ун-та, 2007. - 426 с.

94. Смит А. Прикладная ИК-спектроскопия / А. Смит. М. : Мир, 1982.-328 с.

95. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология : Руководство для врачей / С .Я. Соколов. М. : Медицинское информационное агентство, 2000. - 976 с.

96. Солдатова Т.Г. Таблетки из сухого экстракта сушеницы и синюхи / Т.Г. Солдатова // Фармакология и токсикология. 1956. - № 2. - С. 59-60.

97. Сорокина A.A. Разработка проекта общей фармакопейной статьи «Настои» / A.A. Сорокина, И.П. Рудакова, И.А. Самылина // Фармация. -2010.-№4. -С. 3-6.

98. Сорокина A.A. Теоретическое и экспериментальное обоснование стандартизации настоев, отваров и сухих экстрактов из лекарственногорастительного сырья : автореф. дис. д-ра фарм. наук / A.A.

99. Сорокина. Москва, 2002. - 48 с.

100. Сорокина A.A. Фитотерапия сахарного диабета у детей / A.A. Сорокина, В.П. Кукса, А.К. Углицких // Медицииский научный и учеб.-метод. журн. 2001. - № 4. - С. 60-65.

101. Способ отбора веществ-адаптогенов : а.с. 9901189 СССР / B.C. Бузлама; опубл. 21.09.82.113. . Справочник по заготовке лекарственных растений / Д.С. Ивашин и др.. Киев : Урожай, 1989. - 288 с.

102. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии / О.Б. Рудаков и др.. Воронеж : Водолей, 2004. - 528 с.

103. Сумина Е.Г. Тонкослойная хроматография. Теоретические основы и практическое применение / Е.Г. Сумина, С.Н. Штыков, Н.В. Тюрина. Саратов : Изд-во Саратов, гос. ун-та, 2002. - 102 с.

104. Тахтаджян A.JI. Морфологическая эволюция покрытосемянных / А.Л. Тахтаджян. М. : МОИП, 1948. - 300 с.

105. Тахтаджян А.Л. Система и филогения цветковых растений / А.Л. Тахтаджян. Л. : Наука, 1966. - 611 с.

106. Тахтаджян А.Л. Система магнолиофитов / А.Л. Тахтаджян. Л. : Наука, 1987.-439 с.

107. Турова А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение / А.Д. Турова. М. : Медицина, 1974. - 424 с.

108. Турова А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение / А.Д. Турова, Э.Н. Сапожникова. М.: Медицина, 1982. - 288 с.

109. Турова А. Д. Лекарственные средства растительного происхождения: фармакологическое и клиническое изучение лекарственных растений / А.Д. Турова. М. : Медгиз, 1954. - 542 с.

110. Установление структуры органических соединений физическими и химическими методами / под ред. А. Вайсбергера. М. : Химия, 1967.-532 с.

111. Фармакогнозия : Атлас: в 3 т. / И.А. Самылина и др.. М. : ГЭОТАР - Медиа, 2009. - Т. 3. - 488 с.

112. Филькин A.M. Синюха лазурная (Историко-литературная справка) / A.M. Филькин // Аптечное дело. 1952. — № 6. - С. 21-25.

113. Флора СССР.-Л. : АН СССР, 1953.-Т. 19.-533 с.

114. Флора Центральной Сибири. Новосибирск, 1979. - 873 с.129. ФС 42 3120 - 05. Манинил.

115. ФС 42-3914-00. Глибенкламид.

116. Хазиев Р.Ш. Совершенствование технологии настоев из травы горца птичьего / Р.Ш. Хазиев, А.Г. Фролов // Фармация. 2001. - № 4. - С. 24-26.

117. Хазиев Р.Ш. Экстрагируемость флавоноидов травы зверобоя в настои / Р.Ш. Хазиев, A.A. Тынчерова // Фармация. 2006. - № 6. - С. 32-34.

118. Хайс И. Хроматография на бумаге / И. Хайс, К. Мацек. М. : Химия, 1962. - 851 с.

119. Харитонова Н.П. Материалы к разработке фарм. статьи на корневища с корнями синюхи / Н.П. Харитонова, Т.Ю. Когтева // V Всеросс. съезд фармацевтов : тез. докл. — Ярославль, 1987. С. 380-381.

120. Хасанова С.Р. Антиоксиданты и биологически активные соединения сборов / С.Р. Хасанова // Фармация. 2003. - № 4. - С. 2829.

121. Цимбалист H.A. Стандартизация сахаропонижающего сбора / H.A. Цимбалист, Т.А. Степанова, А.Е. Будо // Фармация. 2005. - № 4. -С. 12-14.

122. Цофина A.A. Синюха как седативное средство / A.A. Цофина // Фармакология и токсикология. 1946. - № 6. - С. 13.

123. Чижова Е.Т. О коэффициентах водопоглощения лекарственного растительного сырья / Е.Т. Чижова, Г.В. Михайлова // Фармация. -2001.-№ 1.-С. 35-37.

124. Шарова О.В. Флавоноиды цветков календулы лекарственной /

125. В. Шарова, В.А. Куркин // Химия растительного сырья. 2007. - №1.-С. 65-68.

126. Шаршунова М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии: в 2 т. / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец. -М. : Мир, 1980.-Т. 2.-610 е.- \

127. Шемерякина М.И. Количественное определение патринозидов В, С и D в корнях патринии средней денситометрическим методом / М.И. Шемерякина, JI.A. Орлова, Т.А. Бабаш // Хим.-фарм. журн. 1980. - № 1.-С. 56-58.

128. Щербинина Е.Ф. Фармакогностическое изучение синюхи голубой • флоры Западной Сибири : автореф. дис . канд. фарм. наук / Е.Ф.

129. Щербинина. Пятигорск, 1990. — 24 с.

130. Экспресс-биотест : Биологический мониторинг экологических систем : метод, указания. — Воронеж : Всероссийск. Научн.-исслед. вет. ин-т патологии, фармакологии и терапии, 1977. — 11 с.

131. Явич П.А. Исследования процессов форэкстракции и экстракции сапонинсодержащего сырья / П.А. Явич, А.В. Гоциридзе, Л.И. Чурадзе //Фармация.-2001.-№ 3.-С. 13-16.

132. Analysis and Quantitative Determination of Group В Saponins in Processed Soybean Productstt 1 / Charles L. Cantrell et al. // Phv Rochell. Allai.-2002.-Vol. 13.-P. 343-348.

133. Antioxidants : A Review / Sulekha Mandal et al. // J. of Chemical and Pharmaceutical Research.-2009.-Vol. l.-P. 102-104.

134. Antioxidants in plant foods and microalgae extracted using compressed fluids / J. A. Mendiola et al. // EJEAFChe. 2008. - Vol. 7 (8).-P. 3301-3309.

135. Brezhneva T.A. Quantitative analysis triterpene saponins by HPTLS with scanning densitometry / T.A. Brezhneva, V.F. Selemenev, A.I. Slivkin // Pharm.-chem. J. 1999. - Vol. 33, № 12. - P. 671-675.

136. Gliennie C.W. Flavonoid diversification in the Polemoniaceae / C.W. Gliennie, J.B. Harbome, C.A. Williams // Biochemical Systematics and ecology. 1977. - Vol. 5. - P. 107-115.

137. Gokulakumar B. Fourier transform infrared spectra (FT-IR) ianalysis of root rot desiase in sesame (SESAMUM INDICUM) / B. Gokulakumar, R. Narayanaswamy // Romanian J. Biophys. — 2008. Vol. 18, №3.-P. 217-223.

138. Harbome J.B. The flavonoids / J.B. Harbome, T.J. Mabry, H. Mabry. London : Chapman and Hall, 1974. - 1202 p.

139. Hiller K. Inhibitory activity of Polemonium saponin against fungi / K. Hiller, A. Paulict, E. Friendrich // Pharmazie. 1981. - Vol. 36, № 2. - P. 133-134.

140. Mabry T.Y. The systematic identification of flavonoids / T.Y Mabry, K.R. Marklham, M.B. Thomas. Berlin : Springer J, 1970. - 707 p.

141. Nadaroglu H. Antioxidant and radical scavenging properties of Iris Germanica / H. Nadaroglu, Y. Demir, N. Demir // XHM.-<f)apM. >KypH. -2007. T. 41, № 8. — C. 13-18.

142. Pourmorad F. Antioxidant activity, phenol and flavonoid contents of some selected Iranian medicinal plants / F. Pourmorad, S. Hosseinimehr, N. Shahabimajd // African J. of Biotechnology. 2006. - Vol. 5(11). - P. 1142-1145.

143. Preparative isolation of cyclolanostane-type saponins from Astragalus membranaceus Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao by TLC-MS/MS guided high-speed counter-current chromatography / Quan Bin Han et a I. // J. Sep. Sei. 2006. - Vol.30. - P. 280-286.

144. Stecka L. Identification of Polemonium saponosides / L. Stecka // Acta Pol. Pharm. 1968. - Vol. 25, № 4. - P. 463-469.

145. Stecka L. Occurense of saponins in some species of the genus Polemonium II. Separation and paper chromatography / L. Stecka // Diss. Pharm. Pharmacol. 1967. - Vol. 19, № 4. - P. 357-363.

146. Stecka L. Thin-layer chromatography of the saponins of Polemonium / L. Stecka // Diss. Pharm. Pharmacol. 1967. - Vol. 19, N. 4. - P. 364-370.

147. Tandon R. Chemical Examination of Polemonium coeruleum Linn. / R. Tandon, G.K., Jain, N.M. Khanna // Indian J. Chem. 1981. - Vol. 20. -P. 46-49.

148. Triterpenoid Saponins from Berries of Hedera colchica / V. Mshvildadze et al. // Chem. Pharm. Bull. 2001. - Vol. 49(6). - P. 752754.166. Über die saponine von Polemonium coeruleum L. / K. Hiller u. a. // Pharmazie. 1979. - Bd. 34, № 9. - S. 565-566.

149. Virge Vasar Application of antioxidants in rooting of Prunus avium L. microshoots / Virge Vasar // Acta Universitatis Latviensis, Biolog. 2004. -Vol. 67.-P. 251-256.

150. Vivek Kumar Gupta Plants as natural / Vivek Kumar Gupta, Surendra Kumar Sharma. // Natural product radiance. 2006. — Vol. 5(4). - P. 326334.

151. Wolf W.J. Thin Layer and Anion Exchange Chromatography of Soybean Saponins / W.J. Wolf, W.T. Betty // J. of the American oil chemists" society. 2007. - Vol. 47 (3). - P. 86-90.

152. Yjshikawa Masayki Bioaktive saponins and glycosides Senega radix / Yjshikawa Masayki // Chem. and Pharm. Bull. 1996. - Vol. 44, № 7. p. 1305-1313.

153. Yosioka I. Structure of theasapogtnol / I. Yosioka, T. Matsuda, T. Nishimura // Chem Ind. 1966. - Vol. 55. - P. 2202.