Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое изучение Lapsana communis L.

/

На правах рукописи

ЛОГУТЕВ СЕРГЕЙ ВИКТОРОВИЧ

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ LAPSANA COMMUNIS L.

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

005050834 2 1 НАР 2013

Курск-2013

005050834

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова Валентина Николаевна Официальные оппоненты:

Будко Елена Вячеславовна, доктор фармацевтических наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующая кафедрой общей и биоорганической химии

Даргаева Тамара Дарижаповна, доктор фармацевтических наук, профессор, Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН, главный сотрудник отдела стандартизации и сертификации

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «¿О » ^-¿^у? Г^ 2013 г. в/^Рчасов на заседании диссертационного совета Д 208.0^9.03 при ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного

Пашин Евгений Николаевич

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Сахарный диабет является одной из наиболее актуальных проблем здравоохранения многих стран. Это связано, прежде всего, с ростом заболеваемости, им страдают от 1,5 до 5% населения планеты; а также высоким уровнем смертности. Сахарный диабет считается четвертой из наиболее частых причин смерти в индустриально развитых странах. Для комплексного лечения больных сахарным диабетом эффективно применение фитотерапии, т.к. фитопрепараты имеют ряд преимуществ, среди которых практическое отсутствие противопоказаний, низкая токсичность, широкий спектр фармакологической активности и редко проявляемые побочные эффекты.

Источником новых лекарственных растений и фитопрепаратов является богатейший опыт народной медицины.

Широкое применение в народной медицине нашли растения семейства Астровых (Asteraceae), одним из представителей которого является бородавник обыкновенный (Lapsana communis L.). Бородавник обыкновенный в виде сока из свежих листьев применяется в народной медицине для лечения сахарного диабета. Кроме гипогликемической активности бородавник обыкновенный оказывает противовоспалительное и обезболивающее действия, которые являются важными в комплексной терапии сахарного диабета.

Бородавник обыкновенный имеет достаточную сырьевую базу, он широко распространен в областях средней полосы европейской части России. Однако химический состав его изучен недостаточно.

В связи с вышесказанным бородавник обыкновенный представляет интерес для фитохимического и фармакологического исследования.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилось фармакогностическое изучение травы бородавника обыкновенного, произрастающего на территории Центральной России, с выделением групп действующих веществ, а также выбор методов стандартизации и диагностики сырья.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: • фотохимическое изучение бородавника обыкновенного;

• выделение и исследование полисахаридов;

• изучение фенольных соединений;

• разработка методик количественного определения основных групп биологически активных веществ;

• разработка товароведческих показателей сырья;

• проведение морфолого-анатомических исследований бородавника обыкновенного с целью выявления диагностических признаков для определения подлинности сырья;

• проведение фармакологического скрининга;

• разработка практических рекомендаций по сбору и сушке данного вида сырья.

Научная новизна. Проведено фотохимическое изучение травы бородавника обыкновенного. Установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, кумаринов, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов).

Впервые изучен аминокислотный и элементный состав травы бородавника обыкновенного. Обнаружено 17 аминокислот, из которых 7 являются незаменимыми. Установлено наличие 35 макро-, микро- и ультрамикроэлементов, 7 из которых являются эссенциальными и 7 - условноэссенциальными.

Различными методами хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в траве бородавника обыкновенного идентифицировано 20 веществ фенольной природы: кумарины: умбеллиферон, дикумарин, дигидрокумарин, скополетин; флавоноиды: витексин, изовитексин, гесперидин, рутин, лютеолин-7-гликозид; производные дубильных веществ: танин, ЭГКгаллат, эпикатехин, катехин; производные фенолкарбоновых кислот: галловая, цикориевая, хлорогеновая, кофейная, феруловая, коричная, розмариновая кислоты. 16 соединений фенольной природы для данного вида установлены впервые.

Впервые выделены и изучены полисахариды бородавника обыкновенного. Полисахариды представлены водорастворимым полисахаридным комплексом,

пектиновыми веществами, гемицеллюлозами А и Б. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Проведено определение функциональных групп пектиновых веществ.

Для объективной оценки качества травы бородавника обыкновенного впервые разработаны методики спектрофотометрического определения суммы флавоноидов, гидроксикоричных кислот и гравиметрическое определение суммы полисахаридов.

Впервые проведено морфолого-анатомическое изучение надземной части бородавника обыкновенного. Установлены диагностические признаки для определения подлинности сырья. Разработаны числовые показатели, регламентирующие качество сырья.

Скрининговые фармакологические исследования показали наличие у бородавника обыкновенного противовоспалительного, сахароснижающего, обезболивающего и антибактериального действия.

Практическая значимость. Полученные результаты позволяют расширить сведения о химическом составе, фармакологической активности бородавника обыкновенного. Результаты фармакологических исследований являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего углубленного изучения данного растения с целью внедрения его в научную медицину.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- методика количественного определения суммы флавоноидов в траве бородавника обыкновенного (Акт внедрения в работу ОКК ЗАО фирма «Здоровье» от 16.01.2012; акт внедрения в работу фармацевтического факультета ФГБОУ ВПО «Северо-Осетинский государственный университет им. К.Л. Хе-тагурова» от 10.03.2012);

- методика количественного определения суммы полисахаридов в траве бородавника обыкновенного (Акт внедрения в работу ОКК ЗАО фирма «Здоровье» от 16.01.2012; акт внедрения в работу фармацевтического факультета ФГБОУ ВПО «Северо-Осетинский государственный университет им. К.Л. Хе-тагурова» от 10.03.2012).

Положения, выносимые на защиту:

результаты фотохимического исследования травы бородавника обыкновенного;

- данные по изучению фенольных соединений и полисахаридов; методики количественного определения флавоноидов, полисахаридов и гидроксикоричных кислот;

результаты морфолого-анатомических исследований с установлением диагностических признаков сырья;

- результаты разработки и определения показателей доброкачественности травы бородавника обыкновенного;

- результаты предварительных фармакологических исследований бородавника обыкновенного.

Апробация работы. Основные положения диссертации апробированы и представлены на научно-методической конференции «Гаммермановские чтения» (Санкт-Петербург, 2011); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Традиции и инновации фармацевтической науки и практики» (Курск, 2011); на международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (Москва, 2011); на X Международной научно-практической конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2012); на III Международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (Владикавказ, 2012); на 77-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность» (Курск, 2012).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 1200500732).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ, 4 из них в журналах, рекомендуемых ВАК.

Личный вклад автора. Автор принимал участие в определении цели исследования и путей ее реализации, планировании и выполнении экспериментов. Автором проводились фитохимические, морфолого-анатомические и фармакологические виды исследования, анализ, статистическая обработка, научное обоснование и обобщение полученных результатов. Доля автора в сборе, анализе и обобщении информации по теме диссертации составляет 90%. В работах, выполненных в соавторстве, использованы результаты исследования с долей личного участия автора 80-90%.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 165 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы «Объекты и методы исследования», экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, приложения. В тексте содержится 37 таблиц, 58 рисунков. Список цитируемой литературы включает 161 литературный источник, из них 16 - на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цель и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы, основные положения, выносимые на защиту.

В первой главе (обзор литературы) приведены сведения, отражающие современное состояние изучения бородавника обыкновенного, его применение в народной медицине, фармакологические исследования.

Во второй главе изложены объекты и методы исследований.

Материал третьей главы отражает результаты изучения качественного и количественного состава групп биологически активных веществ травы бородавника обыкновенного.

Четвертая глава посвящена исследованию морфологических и микродиагностических признаков, товароведческих показателей травы бородавника обыкновенного, разработке методик количественного определения флавонои-дов, гидроксикоричных кислот и полисахаридов.

В пятой главе приведены результаты изучения фармакологической активности травы бородавника обыкновенного.

В приложении содержатся материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объект исследования Объектом нашего исследования явилась трава бородавника обыкновенного, заготовленная в течение 2010-2012 гг. на территории Курской области. Траву заготавливали в различные фазы вегетации - начало вегетации, бутонизация, цветение, плодоношение.

Изучение качественного и количественного состава биологически

активных веществ травы бородавника обыкновенного На основании фитохимических исследований в траве бородавника обыкновенного установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, кумаринов, производных фенолкарбоновых кислот, флавоноидов), минеральных элементов.

При количественном определении установлено, что содержание суммы азотистых оснований в траве бородавника обыкновенного составляет 0,15±0,002% (в том числе холина 0,14±0,003%), аскорбиновой кислоты 0,52±0,02%, суммы свободных органических кислот 5,43±0,15%, тритерпеновых сапонинов 0,116±0,005%, дубильных веществ 4,33±0,15%, каротиноидов 8,12±0,2 мг%.

Исследован аминокислотный состав травы бородавника обыкновенного и проведено его количественное определение с использованием аминокислотного анализатора марки ЬКВ 4151 «Альфа Плюс». Аминокислоты представлены ас-парагиновой кислотой, треонином, серином, глутаминовой кислотой, проли-ном, цистеином, глицином, аланином, валином, метионином, изолейцином, лейцином, лизином, тирозином, фенилаланином, гистидином, аргинином. Установлено, что суммарное содержание свободных аминокислот составляет 1,40 мг / 100 мг, среди них сумма незаменимых аминокислот составляет 0,44 мг /100 мг. Аминокислотный состав бородавника обыкновенного исследован впервые.

Методом эмиссионного спектрального анализа в золе травы бородавника обыкновенного установлено наличие 35 макро- и микроэлементов, 7 из которых являются эссенциальными и 7 - условноэссенциальными. Содержание свинца, кадмия, ртути и бериллия в сырье - ниже предела обнаружения, что соответствует требованиям допустимого содержания тяжелых металлов, регламентированным СанПин 2.3.2.1078-01. Образцы сырья оказались экологически безопасными. Минеральный состав травы бородавника обыкновенного изучен впервые.

При помощи различных методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в траве бородавника обыкновенного идентифицировано 20 веществ фенольной природы: кумарины: умбеллиферон, дикумарин, дигидроку-марин, скополетин; флавоноиды: витексин, изовитексин, гесперидин, рутин, лютеолин-7-гликозид; производные дубильных веществ: танин, ЭГКгаллат, эпикатехин, катехин; производные фенолкарбоновых кислот: галловая кислота, цикориевая кислота, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, феруловая кислота, коричная кислота, розмариновая кислота (табл. 1).

Таблица 1

Фенольные соединения листьев травы бородавника обыкновенного, _идентифицированные методом ВЭЖХ_

Группа БАВ Идентифицированные вещества Содержание веществ в выделенной смеси, %

Витексин 2,25

Изовитексин 13,65

Флавоноиды Гесперидин Рутин Цинарозид (лютеолин-7-гликозид) 4,43 1,15 4,68

Кумарины Умбеллиферон Дикумарин Дигидрокумарин Скополетин 4,73 2,31 1,70 4,24

Галловая кислота 2,37

Фенолкарбоновые кислоты Цикориевая кислота Хлорогеновая кислота Кофейная кислота Феруловая кислота Коричная кислота Розмариновая кислота 5,01 5,85 0,45 3,20 5,59 0,37

Танин 10,32

Дубильные вещества ЭГКгаллат Эпикатехин 4,44 2,64

Катехин 0,23

Из данных табл. 1 видно, что преобладающими веществами среди кумари-нов являются умбеллиферон и скополетин; среди флавоноидов - изовитексин и цинарозид, среди дубильных веществ - танин, а среди фенолкарбоновых кислот - хлорогеновая, коричная и цикориевая кислоты.

Для выделения полисахаридов сырье предварительно обрабатывали спиртом этиловым 70% для удаления фенольных соединений, а далее шрот сырья использовали для выделения полисахаридных комплексов. Полисахаридные комплексы получали последовательно фракционно: водорастворимые полисахариды (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлозы (ГЦ А и ГЦ Б) (рис. 1).

Выход ВРПС составил 6,03%, ПВ - 12,87%, ГЦ А - 3,13%, ГЦ Б - 1,1%.

Для анализа полисахаридных комплексов их подвергали гидролизу раствором кислоты серной (1 моль/л). Хроматографией в гидролизатах ВРПС обнаружили 5 веществ моносахаридного характера: арабинозу, галактозу, ксилозу, рамнозу, глюкуроновую и галактуроновую кислоты; в гидролизатах пектиновых веществ 4 моносахарида: арабинозу, галактозу, рамнозу, галактуроновую кислоту; в гидролизатах ГЦ А и ГЦ Б 3 вещества: галактозу, ксилозу и рамнозу.

Содержание моносахаридов определяли денситометрически после хроматографии гидролизатов в тонком слое сорбента (система растворителей: н-бутанол-кислота уксусная-вода 3:1:1). Установлено, что в водорастворимых полисахаридных комплексах преобладающими являются арабиноза (6,3%), галактоза (5,9%). Основу пектиновых веществ составляет галактуроновая кислота (81,3%). В гемицеллюлозе А и Б преобладающим моносахаридом является ксилоза, содержание которой составляет 8,1% и 7,6% соответственно.

Титриметрическим методом определены некоторые аналитические характеристики пектиновых веществ: содержание свободных карбоксильных групп (5,43%), метоксилированных карбоксильных групп (0,53%), метоксильных групп (0,36%). Исследуемые пектиновые вещества характеризуются невысокой (Х<50%) степенью этерификации.

Рис. 1. Схема выделения полисахаридных комплексов из травы бородавника обыкновенного.

Исследование подлинности и показателей качества травы бородавника обыкновенного

Возможность применения в медицинской практике травы бородавника обыкновенного, делает необходимым разработку показателей качества и характеристик подлинности для данного вида сырья.

В результате макроскопического исследования были выявлены морфологические признаки травы бородавника обыкновенного. Сырье представляет собой смесь цельных или частично измельченных олиственных верхушек стеблей, длиной не более 40 см, с цветками и плодами разной степени развития, не содержащую грубых частей стебля. Цветоносные стебли ветвистые, равномерно олиственные, опушенные, в поперечном сечении ребристые, диаметром до 0,4 см, заканчиваются метельчатым соцветием, веточки которого несут мелкие корзинки, диаметром до 1,5 (2,0) см. Снаружи корзинки покрыты оберткой, при основании которой имеются еще 3-5 мелких чешуек. Цветки язычковые, в 1,5 раза длиннее обертки. Нижние листья черешковые лировидно-перисто-раздельные с очень крупной, округло-яйцевидной верхушечной долей, средние - продолговато-яйцевидные, верхние - сидячие, ланцетные, заостренные. Листья длиной до 10 см, опушены редкими волосками.

Цвет стеблей и листьев - зеленый, цветков - желтый. Запах травянистый. Вкус водного извлечения - горький.

Проведенные анатомические исследования позволили выявить основные микродиагностические признаки травы бородавника обыкновенного.

Стебель на поперечном срезе ребристый, с полой сердцевиной, пучкового типа строения (рис. 2). Клетки эпидермиса прямостенные, многоугольные, продольно вытянутые или паренхимные. Имеются сосочковидные выросты. Устьица немногочисленные, аномоцитного типа. Обнаружены головчатые волоски, состоящие из округлой многоклеточной головки и длинной многоклеточной многорядной ножки, тонкие стенки клеток которой нередко спадаются.

На поперечном срезе нижняя сторона черешка выпуклая, с тремя выступающими ребрами, верхняя - вдавленная (рис. 3). Имеются длинные узкие бо-

новые выросты, являющиеся частью нисбегающего основания листа. Эпидер-мапьные клетки ровноконтурные, продольно вытянутые, с прямыми или скошенными концами. Проводящие пучки коллатерального типа. Их количество варьирует от 6 до 8. Имеются устьица аномоцитного типа. Встречаются простые и головчатые волоски.

Клетки эпидермиса на обеих сторонах листа извилистостенные, но контур клеток нижнего эпидермиса более извилистый. Устьица аномоцитного типа, встречаются как на верхнем, так и на нижнем эпидермисе, но на нижнем они более многочисленные (рис. 4, 5). На обеих сторонах листовой пластинки обнаружены простые многоклеточные волоски разных типов (рис. 6).

Эпидермис на обеих сторонах листочка обертки имеет сходное строение. Клетки эпидермиса варьируют по форме. В основании листочка клетки прямоугольные или почти квадратные, иногда со слегка извилистым контуром. В оболочках клеток хорошо заметны поры. В средней части листочка клетки продольно вытянутые, очень длинные, прямоугольные или веретеновидные. По краю, а также по всей поверхности обеих сторон листочка хорошо видны со-сочковидные выросты эпидермальных клеток. Обнаружены простые и головчатые волоски (рис. 7).

При изучении венчика нами выявлено, что в нижней его части эпидермис на обеих сторонах состоит из продольно вытянутых, прямоугольных или ромбовидных прямостенных клеток. В средней части венчика контур клеток верхнего эпидермиса - слабоволнистый, нижнего - волнистый. На верхушке отгиба венчика форма клеток эпидермиса варьирует от паренхимной до прозенхимной, стенки клеток городчато-зубчатые. По краю отгиба венчика, а также на его верхушке имеются сосочковидные выросты. На верхушке венчика расположены многочисленные одноклеточные бахромчатые волоски (рис. 8). В средней и нижней части венчика обнаружены 1-2-клеточные остроконусовидные волоски с зауженным погруженным основанием и 3-4-клеточные волоски с основанием из 2-3 клеток с тонкими, спадающимися стенками и остроконусовидной конечной клеткой с более толстыми оболочками (рис. 9).

Рис. 4. Фрагмент верхнего эпидермиса листовой пластинки (увел. х200) 1 - устьица

Рис. 2. Поперечный срез стебля (увел. *35) 1 - эпидермис; 2 - проводящие пучки; 3 - паренхима сердцевины; 4 - полость

Рис. 5. Фрагмент нижнего эпидермиса листовой пластинки (увел. *300)

1- устьица; 2 - двухрядный волосок с бородавчатой кутикулой

Рис. 3. Поперечный срез черешка (увел.х35) 1 - многорядный головчатый волосок; 2 - эпидермис; 3 - колленхима; 4 - проводящие пучки; 5 - основная паренхима

штщшшйшші ' іШ

і ' \< • {

І

«ЁЁЯЖ

Рис. 6. Фрагмент верхнего эпидермиса края листа (увел, х НО)

1 - двухрядный волосок с однорядной верхушкой и бородавчатой кутикулой; 2 - двухрядный волосок с бородавчатой кутикулой

, /ул-гу /

Рис. 8. Фрагмент эпидермиса отгиба венчика (увел. х400)

I - сосочковидные выросты; 2 - бахромчатые волоски; 3 - клетки с городчато-зубчатыми стенками

Рис. 7. Фрагмент эпидермиса верхушки листочка обертки (увел. х200)

1 - многоклеточные однорядные тонкостенные волоски; 2 — сосочковидные выросты клеток

Рис. 9. Фрагмент эпидермиса края нижней части венчика (увел. х400)

1- трехклеточный волосок с 2-клеточным тонкостенным основанием и остроконусовидной конечной клеткой с более толстой оболочкой; 2 - ромбовидные клетки эпидермиса

Установлены числовые показатели качества сырья: содержание золы общей не более 10%; золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной, не более 1%, влажность не более 13%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой очищенной, не менее 30%.

Для объективной оценки качества травы бородавника обыкновенного впервые разработаны методики количественного определения флавоноидов, гидроксикоричных кислот (спектрофотометрические методики) и полисахаридов (гравиметрическая методика).

Для количественного определения суммы флавоноидов разработана спек-трофотометрическая методика. В ее основе лежит спектрофотометрический метод, основанный на реакции флавоноидов с алюминия хлоридом в среде спирта этилового 70%. Оптимальные условия экстракции суммы флавоноидов определяли на одном образце сырья. Установлено, что максимальный выход флавоноидов из сырья достигается при степени измельчения 2 мм и экстракции спиртом этиловым 70% в течение 45 минут. Подобрана концентрация - 3% и объем алюминия хлорида - 5 мл. Исследованы спектры поглощения извлечений из травы бородавника обыкновенного спиртом этиловым 70% с алюминия хлоридом. В результате установлено, что максимум поглощения спиртового извлечения из травы бородавника обыкновенного с алюминием хлоридом находится в области 395 нм и совпадает с максимумом поглощения ГСО цинарозида (ООО «Фитопанацея») с алюминия хлоридом в среде спирта этилового 70%. Расчет содержания суммы флавоноидов вели с использованием удельного показателя поглощения ( Е^м ) комплекса цинарозида с алюминия хлоридом. Содержание суммы флавоноидов в траве бородавника обыкновенного колеблется от 0,69% до 0,90%. Установлена норма содержания не менее 0,6%. Валидацию методики количественного определения проводили по линейности, повторяемости, воспроизводимости и правильности. Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что разработанная методика легко воспроизводима, доступна, занимает минимум рабочего времени, не требует дорогостоящих реактивов.

В основе количественного определения гидроксикоричных кислот лежит метод прямой спектрофотометрии. Определены оптимальные условия экстракции суммы гидроксикоричных кислот: степень измельчения 1 мм, экстрагент спирт этиловый 70%, время экстракции 60 минут. В результате проведенных исследований установлено, что максимум поглощения спиртового извлечения находится в области 325 нм и совпадает с максимумом поглощения ГСО хлоро-геновой кислотой в среде спирта этилового 70%. Расчет содержания суммы гидроксикоричных кислот вели по удельному показателю поглощения хлороге-новой кислоты ( е'см ) ("Р1ика" Германия). Содержание суммы гидроксикоричных кислот в траве бородавника обыкновенного колеблется от 4,55% до 8,22%. В результате проведенных исследований установлена норма содержания суммы гидроксикоричных кислот не менее 4%. Ошибка метода количественного определения суммы гидроксикоричных кислот с 95% вероятностью не превышает 3,96%.

Для количественного определения водорастворимых полисахаридов использован гравиметрический метод, основанный на экстракции суммы полисахаридов из сырья водой очищенной с последующим осаждением их спиртом этиловым 96%, высушиванием осадка и его взвешиванием.

Изучение условий количественного определения водорастворимых полисахаридов показало, что оптимальными условиями, обеспечивающими максимальный выход из сырья, являются: степень измельчения сырья - 1 мм, трехкратная экстракция водой в течение 90 минут (3 раза по 30 минут), использование четырехкратного объема спирта этилового 96% для осаждения полисахаридов. Содержание суммы водорастворимых полисахаридов в траве бородавника обыкновенного колеблется от 6,03% до 8,19%. На основании этих данных установлена норма содержания суммы полисахаридов не менее 6%. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 4,17%.

Для оптимизации сроков заготовки травы бородавника обыкновенного проведено изучение накопления основных групп действующих веществ (фла-воноидов, полисахаридов и гидроксикоричных кислот) по фазам вегетации. Ус-

тановлено, что максимальное количество флавоноидов в траве бородавника обыкновенного накапливается в фазу бутонизации и составляет 1,07±0,04%, несколько ниже оно в период цветения (0,90±0,04%). Максимальное содержание полисахаридов наблюдается в фазу цветения (8,19±0,23%). Наибольшее накопление гидроксикоричных кислот происходит в фазу цветения и составляет 8,22±0,26%. На основании изложенного установлено, что оптимальным сроком заготовки травы бородавника обыкновенного является фаза цветения.

Изучение фармакологической активности бородавника обыкновенного

Исследование острой токсичности настоя в дозах от I г/кг до 5 г/кг, водорастворимых полисахаридов в дозах от 100 мг/кг до 300 мг/кг показало, что все они по классификации К.К. Сидорова относятся к классу практически нетоксичных.

Проведено изучение гипогликемической, противовоспалительной, обезболивающей и антибактериальной активности фитопрепаратов травы бородавника обыкновенного.

Гипогликемическую активность фитопрепаратов оценивали по их влиянию на содержание глюкозы в крови при ее пероральном введении в виде 40% раствора в дозе 4 г/кг веса кролика. Оценивая полученные результаты можно прийти к заключению, что под действием настоя и 30% водно-спиртового извлечения происходило снижение уровня глюкозы в крови, причем лучшие результаты наблюдались при введении 30% водно-спиртового извлечения.

Для оценки противовоспалительной активности определяли влияние фитопрепаратов из травы бородавника обыкновенного на разные стадии процесса воспаления. Под действием фитопрепаратов происходило угнетение степени развития отека конечности мышей, вызванное введением формалина. Изучение антиэкссудативной активности показало, что настой и водорастворимые полисахариды по своей активности превосходят таковое действие ацетилсалицило-

вой кислоты (25,43%). Противовоспалительный эффект фитопрепаратов при этом составил 50,35% (настой) и 52,94% (водорастворимые полисахариды).

Установлено, что настой и водорастворимые полисахариды оказывают влияние на пролиферативную фазу воспаления, которое менее выражено, чем у препарата сравнения индометацина (68,50%), но статистически достоверно по сравнению с контролем, при этом уменьшение образования гранулемы происходит на 54,81% (водорастворимые полисахариды) и 51,04% (настой).

Изучение влияния фитопрепаратов на проницаемость капилляров у кроликов показало, что только водорастворимые полисахариды оказывают данное действие, которое проявляется в увеличении латентного периода появления пятен окрашивания от 3,96±0,18 мин (контроль) до 5,81±0,28 мин и уменьшении их диаметра от 1,74±0,03 см (контроль) до 1,22±0,05 см.

Выявлена анальгезирующая активность настоя на модели «горячей пластинки» и модели «корчей». Наиболее выраженное обезболивающее действие выявлено при химическом раздражении, вызванном 0,75% раствором кислоты уксусной. Под действием настоя травы бородавника обыкновенного происходило достоверное снижение количества корчей (10,00±0,82) по сравнению с контрольной группой животных (30,33±1,54), что говорит о выраженном аналь-гезирующем действии на химический раздражитель.

Изучена антибактериальная активность настоя и пектиновых веществ травы бородавника обыкновенного. Наиболее выраженную антибактериальную активность исследуемые фитопрепараты проявили в соотношении 1:2.

ВЫВОДЫ

1. Проведено фитохимическое изучение травы бородавника обыкновенного. Установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений, аминокислот, макро- и микроэлементов.

2. С использованием различных методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в траве бородавника обыкновенного идентифицировано 20 веществ фенольной природы: кумарины: умбеллиферон, дикумарин, дигид-рокумарин, скополетин; флавоноиды: витексин, изовитексин, гесперидин, рутин, лютеолин-7-гликозид; производные дубильных веществ: танин, ЭГКгал-лат, эпикатехин, катехин; производные фенолкарбоновых кислот: галловая, ци-кориевая, хлорогеновая, кофейная, феруловая, коричная, розмариновая кислоты. Новыми для травы бородавника являются 16 веществ фенольной природы.

3. Впервые проведено изучение полисахаридов травы бородавника обыкновенного по фракциям: водорастворимый полисахаридный комплекс, выход которого составил 6,03%; пектиновые вещества -12,87%; гемицеллюлоза А - 3,13% и гемицеллюлоза Б - 1,10%. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Определено содержание функциональных групп пектиновых веществ.

4. Впервые для сырья «Бородавника обыкновенного трава» разработаны методики спектрофотометрического определения суммы флавоноидов с использованием дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на цинарозид и спектрофотометрического определения гидроксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид колеблется от 0,69% до 0,90%; содержание суммы гидроксикоричных кислот - от 4,55% до 8,22%. На основании этих данных установлена норма содержания флавоноидов не менее 0,6%, гидроксикоричных кислот не менее 4%. Проведена валидация методики спектрофотометрического определения флавоноидов по показателям линейности, повторяемости, воспроизводимости и правильности.

5. Впервые для сырья «Бородавника обыкновенного трава» разработана методика гравиметрического определения суммы водорастворимых полисахаридов. Содержание суммы полисахаридов колеблется от 6,03% до 8,19%. Установлена норма содержания суммы водорастворимых полисахаридов не менее 6%. Проведена метрологическая характеристика методики.

6. Изучена динамика накопления основных групп действующих веществ в различные фазы вегетации и определены оптимальные сроки заготовки сырья, в результате чего установлено, что максимальное содержание флавоноидов накапливается в фазы бутонизации (1,07%) и цветения (0,90%); водорастворимых полисахаридов и гидроксикоричных кислот в фазу цветения 8,19% и 8,22% соответственно. Поэтому траву бородавника обыкновенного целесообразно заготавливать в фазу цветения растения.

7. Проведено изучение морфологических и микродиагностических признаков травы бородавника обыкновенного (стебля, листа, черешка, обертки, венчика). Выявлены микродиагностические признаки: стебель в поперечном сечении округлый, ребристый, пучкового типа строения; черешок с нижней стороны выпуклый, с тремя выступающими ребрами, с 6-8 пучками коллатерального типа, расположенными полукругом; клетки эпидермиса нижней стороны листа более извилистые, чем верхней, устьица аномоцитного типа; клетки эпидермиса обертки и венчика варьируют по форме и размерам. Наиболее значимыми микродиагностическими признаками являются многообразие и расположение простых и головчатых волосков.

8. Установлены числовые показатели, характеризующие качество сырья: влажность не более 13%, золы общей не более 10%, золы, нерастворимой в 10% хлористоводородной кислоте, не более 1%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 30%.

9. Результаты скрининговых фармакологических исследований показали, что гипогликемической активностью обладают настой и 30% водно-спиртовое извлечение, противовоспалительной - настой и водорастворимые полисахариды, анальгезирующей - настой, антимикробной - настой и пектиновые вещества.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Логутев, С. В. Фитохимическое изучение бородавника обыкновенного / С. В. Логутев // Экология России и сопредельных территорий : материалы XV Междунар. эколог, студен, конф. - Новосибирск: НГУ, 2010. - С. 319.

2. Бубенчикова, В. Н. Азотистые основания бородавника обыкновенного / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев, В. А. Азарова // Университетская наука: Взгляд в будущее : материалы итог. науч. конф. сотрудников КГМУ, Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН и отд-ния РАЕН, посвящ. 76-летию Курск, гос. мед. ун-та : в 3 т. - Курск : Изд-во КГМУ, 2011. - Т. II. - С. 201-204

3. Бубенчикова, В. Н. Изучение пектиновых веществ бородавника обыкновенного травы (Lapsana communis L.) / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев, С. Н. Редькина // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. тр. / под ред. М. В. Гаврилина. - Пятигорск : Изд-во Пятигор. ГФА, 2011. - Вып. 66. - С. 30-31.

4. Бубенчикова, В. Н. Исследование состава органических кислот бородавника обыкновенного и герани луговой / В. Н. Бубеничкова, С. В. Логутев, Ж. А. Булатникова // XVIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» : сб. материалов конгр. (тез. докл.). - М., 2011. - С. 584.

5. Лекарственные растения центрального Черноземья и перспективы их практического использования / В. Н. Бубенчикова, Ю. А. Кондратова, С. В. Логутев, А. Ю. Малютина // Науч.-метод. конф. «Гаммермановские чтения-2011» : сб. науч. тр. - СПб.: Изд-во СПХВА, 2011. - С. 14-16.

6. Логутев, С. В. Изучение каротиноидов бородавника обыкновенного / С. В. Логутев // Молодежная наука и современность : материалы 76-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых : в 3 ч. - Курск : Изд-во КГМУ, 2011. -Ч. И.-С. 251.

7. Бубенчикова, В. Н. Сравнительная оценка макро- и микроэлементного состава некоторых видов растений семейств Asteraceae и Rosaceae / В. Н. Бубенчикова // Вести. Воронеж, гос. ун-та. Сер.: Химия. Биология. Фармация. - Воронеж, 2011. - № 2. - С. 181-184.

8. Бубенчикова, В. Н. Стандартизация травы бородавника обыкновенного по содержанию полисахаридов / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев, С. Н. Редькина // Науч. ведомости Белгород, гос. ун-та. Сер. Естественные науки. - Белгород, 2011. - № 9 (104), вып. 15/2. - С. 195-198.

9. Бубенчикова, В. Н. Исследование дубильных веществ бородавника обыкновенного и прозанника крапчатого / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев, А. Ю. Малютина // Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм : материалы Всерос. науч.-практ. ин-тернет-конф. с междунар. участием / редкол.: Т. А. Панкрушева [и др.]; Курск, гос. мед. ун-т. - Курск : Изд-во КГМУ, 2011. - С. 301-303.

10. Печенин, О. Д. Изучение антибактериальной активности травы бородавника обыкновенного и прозанника крапчатого / О. Д. Печенин, С. В. Логутев, А. Ю. Малютина // Молодые ученые в решении актуальных проблем науки : материалы II Междунар. науч.-практ. конф. - Владикавказ, 2011. - С. 251-252.

11. Бубенчикова, В. Н. Стандартизация некоторых видов семейства Asteraceae по содержанию флавоноидов / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев, А. Ю. Малютина //Традиционная медицина. -2011. — № 5.-С. 171-173.

12. Бубенчикова, В. Н. Определение показателей качества травы бородавника обыкновенного / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев // Традиции и иннова-

ции фармацевтической науки и практики : материалы Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием, посвящ. 45-летию фарм. фак-та. КГМУ / под ред.

B. А. Лазаренко [и др.]. - Курск : Изд-во КГМУ, 2011. - С. 304-306.

13. Изучение фенолкарбоновых кислот травы бородавника обыкновенного, девясила иволистного и прозанника крапчатого / В. Н. Бубенчикова,

C. В. Логутев, А. Ю. Малютина, А. В. Азарова // XIX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» : сб. материалов конгр. (тез. докл.). -М., 2012.-С. 358-359.

14. Логутев, С. В. Изучение состава флавоноидных соединений бородавника обыкновенного методом ВЭЖХ / С. В. Логутев // Студент и научно-технический прогресс : материалы 50-й Междунар. науч. студен, конф. (Секция : Химия). - Новосибирск : Изд-во НГУ, 2012. - С. 77-78.

15. Логутев, С. В. Анатомическое изучение листа бородавника обыкновенного / С. В. Логутев, С. С. Субботина // Молодежная наука и современность : материалы 77-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых : в 3 ч. -Курск : Изд-во КГМУ, 2012. - Ч. II. - С. 336.

16. Аминокислоты бородавника обыкновенного (Lapsana communis L.) и прозанника крапчатого (Achyrophorus maculatus L.) / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев, А. Ю. Малютина, С. С. Субботина // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы : материалы X Междунар. конф. / редкол.: В. А. Прокашева (отв. ред.) [и др.]. - Минск : Изд. центр БГУ, 2012. -С. 349-352.

17. Бубенчикова, В. Н. Изучение состава фенольных соединений бородавника обыкновенного методом ВЭЖХ / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев // Кластерные подходы фармацевтического союза: образование, наука и бизнес : сб. материалов II Междунар. науч.-практ. конф. / под ред. проф. И. В. Спичак. -Белгород : ИПК НИУ «БелГУ», 2012. - С. 126-128.

18. Логутев, С. В. Пектиновый комплекс травы бородавника обыкновенного и его антибактериальная активность / С. В. Логутев, О. Д. Герасимова // Молодые ученые в решении актуальных проблем науки : материалы III Междунар. науч.-практ. конф. - Владикавказ, 2012. - С. 219-220.

19. Бубенчикова, В. Н. Изучение анатомического строения травы бородавника обыкновенного / В. Н. Бубенчикова, Я. С. Трембаля, С. В. Логутев // Традиционная медицина. - 2012. - № 5. - С. 194-198.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 28.01.2013 г. Подписано в печать 04.02.2013 г. Формат 30х42'/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 230"А". Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.