Фармакогностическое изучение видов рода Alchemilla L. Пермского края

Зорина, Елена Владимировна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение видов рода Alchemilla L. Пермского края

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Зорина, Елена Владимировна Пермь 2009 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое изучение видов рода Alchemilla L. Пермского края

На правах рукописи

0034

Зорина Елена Владимировна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВИДОВ РОДА АЬ СНЕМ1ЫА Ь. ПЕРМСКОГО КРАЯ

Специальность 15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

А!-; ¿ииа

ПЕРМЬ-2009

003470360

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

кандидат фармацевтических наук, профессор Олешко Григорий Иванович Официальные оппоненты:

заслуженный работник высшей школы РФ действительный член Российской экологической академии, действительный член Академии технологической кибернетики Украины, доктор фармацевтических наук, профессор Фурса Николай Сергеевич,

ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

кандидат фармацевтических наук, доцент

Калина Милитина Александровна, ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 16 июня 2009 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГОУ ВПО ПГФА Росздрава по адресу 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48. Тел/факс. (342) 2129-006, тел. 2123-445.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО ПГФА Росздрава по адресу: 614070 г. Пермь, ул. Крупской, 46.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте ПГФА http './/www, psfa.ru 15 мая 2009 г.

Автореферат разослан 15 мая 2009 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент

'У-

И.А. Липатникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Аюуальность темы. Одной из глобальных медико-социальных проблем мирового здравоохранения является стремительный рост распространения сахарного диабета. Экспертами ВОЗ сахарный диабет был признан неинфекционной эпидемией XX века. Сахарный диабет поражает большое число людей всех социальных групп во всем мире, им страдают от 1,5 до 5% населения планеты. Экспертная прогностическая оценка позволяет считать, что к 2010 году в мире будет насчитываться более чем 230 млн., а к 2025 году - 300 млн. больных сахарным диабетом, из которых 80-90% приходится на больных диабетом 2-готипа.

Поиск и разработка новых высококачественных и безопасных препаратов для лечения и профилактики сахарного диабета - одна из актуальных задач современной фармацевтической науки.

Фармакотерапевтическая активность фитопрепаратов обусловлена гармоничным сочетанием биологически активных веществ. Гипогликемическую активность обусловливают флавоноиды, которые способствуют увеличению ионов кальция, и стимуляции секреции инсулина ß-клетками поджелудочной железы; аскорбиновая кислота, потенцирующая саха-роснижающий эффект флавоноидов; полисахариды препятствующие всасыванию углеводов в кишечнике. Эти группы веществ, а также полифенольные соединения оказывают противовоспалительный, диуретический, антигипоксический и другие эффекты важные в комплексной терапии сахарного диабета.

Растения рода Alchemilla L. перспективны для изучения в данном аспекте. Они широко распространены на территории Европейской части России, в том числе Пермского края, который является одним из центров видообразования рода.

Цель исследования - изучение возможности использования в медицинской практике травы манжетки и фитопрепаратов из неё в качестве противодиабетических средств. Задачи исследования:

1. Изучить морфолого-анатомические признаки и фитохимические характеристики видов манжетки в Пермском крае, объективно представляющих род Alchemilla L.

2. Исследовать эколого-ценотические характеристики манжетки обыкновенной, приёмы и сроки заготовки, и динамику накопления биологически активных веществ (БАВ) сырья для разработки «Инструкции по заготовке и сушке травы манжетки». Обосновать возможности и перспективы заготовки и запасы сырья манжетки в Пермском крае

3. Изучить товароведческие показатели, разработать методику количественного определения БАВ травы манжетки для проекта фармакопейной статьи «Alchemillae herba» -«манжетки трава».

4. Определить оптимальные условия получения экстракта травы манжетки сухого и разработать проект нормативной документации -ФСП на экстракт травы манжетки сухой.

5. Изучить фармакологическую активность травы манжетки и экстракта травы манжетки сухого.

Научная новизна. Проведено комплексное фармакогностическое исследование нового вида сырья - трава манжетки.

Выявлены диагностические признаки в морфолого-анатомическом строении вегетативных и генеративных органов 20 видов рода Alchemilla L. и содержащиеся в них БАВ: флавоноиды, полисахариды, аскорбиновая кислота, окисляемые вещества

Изучена динамика накопления в траве манжетки БАВ, в том числе свободных аминокислот в течение вегетационного периода. Изучено влияние сезонного изменения морфометри-ческих показателей на содержание БАВ в траве манжетки.

Определены запасы сырья и выявлены перспективы заготовки травы манжетки в Пермском крае. Исследована возможность использования отавы в качестве дополнительного источника сырья манжетки.

Выявлена гипогликемическая и гиполипидемическая активность настоя и экстракта травы манжетки сухого. Выявлено иммунокорригирующее действие настоя и экстракта травы манжетки сухого, развитие которого связано с их способностью восстанавливать фагоцитоз, уровень Т- и В-лимфоцитов, экспрессию рецепторов иммунокомпетентных клеток. Приоритет проведённых исследований подтверждён Патентом РФ на изобретение (Заявка на выдачу патента № 2008100346/15(000378), решение от 28.11.2008г.) Практическая значимость.

Научно обоснована возможность заготовки травы манжетки от сборного вида Alchemilla vulgaris L. и использования травы манжетки в качестве лекарственного средства и сырья для получения экстракта травы манжетки сухого.

Разработан проект «Инструкции по заготовке и сушке травы манжетки». Определены ресурсы травы манжетки и перспективы её заготовки в Пермском крае. Разработана и валидирована методика количественного определения суммы флавонои-дов в траве манжетки. Методика адаптирована для сквозной стандартизации настоя и экстракта травы манжетки сухого.

Установлены параметры стандартизации травы манжетки, показатели качества включены в проект ФС «Alchemillae herba» - «манжетки трава».

Получена субстанция «экстракт травы манжетки сухой», установлены параметры её стандартизации, установлена гипогликемическая, иммунокоррегирующая и гиполипидемическая активность. Показатели качества включены в проект ФСП «Extractum herbae Alchemillae siccum» - «.Экстракт травы манжетки сухой». Разработан лабораторный технологический регламент получения экстракта травы манжетки сухого. Проведена апробация получения экстракта травы манжетки сухого на ООО «Биохиммаш», г. Москва.

Результаты проведённых исследований используют в учебном процессе кафедры фармакогнозии, на факультете дополнительного профессионального образования, в интернатуре ГОУ ВПО ПГФА Росздрава и в качестве лекционного материала - в отделении повышения квалификации фармацевтов ГОУ ДПО Пермского областного центра повышения квалификации работников здравоохранения. Положения, выносимые на защиту:

• фотохимический анализ и валидация методики количественного определения суммы флавоноадов в траве манжетки;

• товароведческий анализ травы манжетки;

• исследования динамики накопления БАВ травы манжетки;

• исследования сырьевой базы травы манжетки в Пермском крае;

• фитохимический анализ настоя и экстракта травы манжетки сухого и его стандартизация;

• изучение фармакологической активности настоя и экстракта травы манжетки. Публикация материалов исследования и апробация работы. По теме диссертации

опубликовано 10 работ, в том числе монография и патент. Материалы диссертационной работы представлены на научно - практических конференциях профессорско-преподавательского состава Пермской государственной фармацевтической академии (Пермь 2005, 2006, 2007гг.), на международной (Российско-китайской) научной конференции (Пермь 2007 г); на международном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 2003, 2004 гг.)

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в ГОУ ВПО ПГФА Росздрава в соответствии с планом научно-

исследовательских работ по теме «Изучение лекарственной флоры РФ» (номер Государственной регистрации 01:9.10.018875). Тема утверждена на заседании Учёного совета Пермской государственной фармацевтической академии (протокол № 3 от 24 ноября 2005 г).

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 200 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (6 глав), общих выводов, списка литературы и приложений; иллюстрирована 30 рисунками и 106 таблицами. Список литературы включает 245 источников, в том числе 10 - на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цели и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы, основные положения, выносимые на защиту.

В обзоре литературы (глава 1) обобщены данные о современном состоянии исследований химического состава, морфологической характеристики, фармакологической активности и условий произрастания видов рода Alchemilla L. Глава 2 посвящена описанию объектов и методов исследования.

В главе 3 приведены данные сравнительной характеристики видов рода Alchemilla L. по морфолого-анатомическому строению и химическому составу.

В главе 4 изложены материалы по разработке «Инструкции по заготовке и сушке травы манжетки»., . •■

В главе 5 приведены исследования по разработке проекта Фармакопейной статьи «Alchemil-lae herbar - «манжетки трава».

В главе 6 приведены исследования по разработке технологии получения экстракта травы манжетки сухого и его стандартизация.

В главе 7 представлены материалы по гипогликемической, иммуномодулирующей и гипо-липидемической активности настоя и экстракта травы манжетки сухого. Приложение включает проекты ФС«А1сЬетШае herba» - «манжетки трава», ФСП «Extrac-tum herbae Alchemillae siccum» - «Экстракт травы манжетки сухой» и материалы, подтверждающие практическую значимость проведённых исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объектами исследования служили около 200 чистых и смешанных образцов различной степени встречаемости видов манжетки, объективно представляющих род Alchemilla L. в Пермском крае. Заготовку проводили в с 2001 по 2007 гг., сушили воздушно-теневым способом, хранили в соответствии с требованиями ГФ XI в.1, стр. 296. Семь образцов'сырья использовали для разработки товароведческих показателей, а также водные, водно-этанольные извлечения из травы манжетки, хлороформные, этилацетатные фракции из экстракта травы манжетки сухого, полученные в условиях лаборатории, и субстанция «экстракт травы манжетки сухой», полученная на ОАО «Биохиммаш», г. Москва.

Для проведения качественного фотохимического анализа использовали химические реакции, методы восходящей хроматографии на бумаге и УФ-спектрофотометрии.

Количественное определение основных групп БАВ проводили: флавоноидов в пересчёте на рутин методом дифференциальной спектрофотометрии; полисахаридов гравиметрическим методом; аскорбиновой кислоты и суммы окисляемых веществ титриметрическим методом по ГФ XI, вып. 1, 2. Содержание суммы свободных аминокислот определяли по методике, разработанной совместно с д.ф.н., профессором Ярыгиной Т.Н. (Заявка на выдачу патента № 2009111168(015134), разрешение от 26. 03. 2009 г.)

Изучение элементного состава травы манжетки и экстракта травы манжетки сухого проводили с помощью дифракционного спектрографа ДФС-13-1 методом атомно-адсорбционной пламенной спектрометрии в аккредитованном аналитическом испытательном центре ОАО «Уральская центральная лаборатория», г. Екатеринбург.

Ресурсоведческие исследования проводили методом работы на конкретных зарослях.

Изучение товароведческих показателей проводили в соответствии с требованиями ГФ XI и ОСТ 91500.05.001—00 «Стандарты качества лекарственных средств».

Экстракт травы манжетки сухой получали на ОАО «Биохиммаш», г, Москва, по разработанной нами технологии.

Изучение показателей качества экстракта сухого проводили в соответствии с требованиями общей статьи «Экстракты» (ГФ XI, вып. 2, с. 160).

Изучение микробиологической чистоты травы манжетки и экстракта проводили на кафедре микробиологии ГОУ ВПО ПГФА Росздрава (зав. каф., проф., д.ф.н.. Одегова Т.Ф.)

Изучение гипогликемической, гиполипидемической и иммунокоррегирующей активности настоя и экстракта травы манжетки проводили под руководством проф., д.м.н, Юшко-вой Т.А. на кафедре фармакологии ГОУ ВПО ПГФА Росздрава (зав. каф., проф., д.м.н. Юшков В.В.).

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИДОВ РОДА Alchemilla L.

В результате макроскопического исследования на образцах 20 видов манжетки установили видовую принадлежность и выделили признаки, очерчивающие границы видов. Это характер опушения стеблей и черешков прикорневых листьев; форма, степень вырезанности и опушение листовой пластинки; форма и количество лопастей листа; число, форма зубцов лопастей листовой пластинки; консистенция и характер опушения соцветия; форма, опушение и окраска гипантия, листьев чашечки и подчашия. Подтвердили сложность видовой идентификации растений и то, что изменение диагностических признаков после сушки делает определение подлинности сырья по видам практически невозможным. Микроскопически исследованные виды манжетки имели общий план анатомического строения стебля, черешка, листовой пластинки и цветка.

Детальное изучение морфолого-анатомических признаков видов рода Alchemilla L. позволило выделить наиболее часто встречаемые признаки рода и с учетом их вариабельности составить описание внешних и микроскопических признаков сборного вида Alchemilla vulgaris L. _

I op

0 H

14 15

о ЧЭ

2-е направление

Рис. 1. Схема совмещенной хроматограммы спиртоводных извлечений травы манжетки 20 видов родаАкЬетШа Ь. (1-е направление-система 1- Б:У:В - 4:1:2; 2-е направление-система 2-У:В- 15:85)

Таблица 1

Характеристика пятен веществ на двумерных хроматограммах видов манжеток

№ пятна вещества Rr* в системах Окраска пятен веществ Максимумы поглощения доминирующих веществ при длине волны, нм

Б:У:В У:В УФ-свет У Ф + пары аммиака после обработки А1С1»

видимый свет УФ-свег

1 0,35 0,03 фиолетовое белое светло-желтое лимокко-желтое 257 и 367

2 0,41 0,13 коричневое желтое желтое лимонно- желтое 207 и 278

3 0,37 0,41 ярко-желтое ярко-желтое ярко-желтое ярко-желтое 278 и 373

4 0,57 0,37 коричневое желтое желтое желто-коричнев. 258 и 362

5 0,75 0,53 фиолетовое голубое - голубое

6 0,59 0,54 фиолетовое голубое - голубое

7 0,63 0,79 фиолетовое голубое - голубое 205 и 271

8 0,17 0,70 темное желто-зеленое ярко-желтое ярко-желтое

9 0,24 0,63 темное желтое желтое желтое

10 0,20 0,55 темное желтое желтое желтое

11 0,52 0,18 желтое светлое светло-желтое голубое

12 0,54 0,20 фиолетовое голубое светло-желтое голубое

13 0,62 0,71 фиолетовое голубое - коричневое

14 0,11 0,24 темное зеленое желтое коричневое

15 0,11 0,80 темное темное - -

iö 0,22 0,12 темное желтое желтое лимонно-желтое

'Примечание: даны средние значения величины.

Все исследованные образцы манжетки давали положительную реакцию на флавоноиды, полисахариды, аскорбиновую кислоту и дубильные вещества. Качественные реакции и одномерная хроматография на бумаге в системах 1 и 2 показали идентичность исследуемых видов манжеток. Методом двухмерной восходящей хроматографии на совмещённой хрома-тограмме 20 видов манжеток обнаружили не менее 16 веществ фенольной природы, 11 из которых по значению Rf и изменению окраски пятен предварительно отнесены нами к фла-воноидам (рис. 1, табл. 1). Вещества с 1 по 10 и 16 присутствовали во всех видах, из них доминировали 1, 2, 3, 4 и 7. Вещества с 11 по 15 являются маркерами видов рода А1-chemilla L.

Максимальное содержание флавоноидов - 4,00% наблюдали в образцах манжетки сарматской, минимальное - 2,18% в м. Линдберга и м. коротколопастной. Содержание полисахаридов колебалось от 7,20% в м. остроугольной до 10,02% в м. шершавостебельной. Концентрация аскорбиновой кислоты составила от 0,13% в м. остроугольной и м. семиугольной, до 0,23% в м. замедленной. Сумма окисляемых веществ находилась в пределах от 8,12% в м. тонкопильчатой до 11,38% в м. коротколопастной. Статистический анализ не выявил достоверных различий между видами манжеток по содержанию флавоноидов, полисахаридов, аскорбиновой кислоты и суммы окисляемых веществ (табл. 2). Установили близость качественного состава фенольного комплекса (одним из доминирующих компонентов которого является рутин) и количественного содержания флавоноидов, полисахаридов, аскорбиновой кислоты и суммы окисляемых веществ в образцах видов манжеток.

Полученные данные по морфологии, анатомии, химическому составу согласуются с данными единичных определений других видов манжеток Пермского края и литературными данными по другим регионам, что позволяет объединить виды рода Alchemilla L. под названием Alchemilla vulgaris L., как производящего растения для заготовки сырья «Aichemil-lae herba».

Таблица 2

Количественное содержание БАВ в видах манжетки_

№ п.п Вид манжетки Содержание БАВ, %

сумма флавоноидов сумма окисляемых веществ полисахариды аскорбиновая кислота

1. Манжетка клобучковая A Ichemiila glomerulans Bus. 2,40±0,12 9,97±0,11 8,18±0,61 0,14±0,003

2. M. остроугольная = M. осгролопастная A. aaiiangula Bus- A. acutiloba Opiz 2,85±0,08 8,25±0,03 7,20±0,10 0,13±0,001

3. M. замедленная A. mnctalrix luz. 2,81±0,10 10,03±0,15 8,24±0,32 0,23±0,001 5

4. M. сизоватая A. glaucescens Wallr. 2,20±0,06 8,76±0,07 8,16±0,24 0,15±0,003

5. M. горная = M, пастушья A. mnnliœla Opiz = A. patforalix Bus. • 3,30±0,05 8,25±0,01 9,30±0,09 0,15±0,005

6. M. семиугольная A. hcpiagvna Juz. 2,50±0,07 9,20±0,04 8,70±0,18 0,13±0,002

7. M. сибирская A. sibirica Zam. 3,71 ±0,05 9,89±0,05 8,76±0,43 0,20±0,004

8. M. городковатая A. subcrenala Bus. 2,62±0,11 10,53±0,25 8,54±0,21 0,19±0,003

9. M. неправильная A. irregularis Alech. 2,99±0,02 9,01 ±0,14 8,54±0,34 0,16±0,003

10. M. шершавостсбельная A. hirsulicaulis Lindb. fil. 3,23±0,04 8,77±0,13 10,02±0,33 0,17±0,002

11. M. горообразная A. glabriformis Juz. 2,77±0,10 10,21±0,12 7,98±0,92 0,15±0,003

12. M. тупая A ci:tuMj B;is ( A. samudssonii Rothm. Ex Frohner) 2,20±0,06 8,88±0,15 9,12±0,И 0,19*0,003

13. M. острозубчатая = M. балтийская A. acutidens Lindb.fil. = A. hallica Sam. ex Juz. (A. nebulosa 0. Sain.) 3,74*0,13 9,81±0,06 8,47±0,23 0,21 ±0,003

14. M. коротколопастая A. breviloha Lindb. fil. 2,18±0,05 11,38±0,32 8,30±0,22 0Д2±0Д)3

15 M. Линдберга A. lindbergiana Juz. 2,18±0,06 8,29±0,10 8,02±0,86 0,20±0,004

16 M. изящная A. gracilis Opiz 3,02±0,11 9,60±0,12 8,99±0,61 0,14±0,003

17 M. волнисголисггная A. cymaluphylla Juz. 2,58±0,04 9,02±0,08 9,66±0,19 0,15±0,003

18 M. тонкопильчатая A. arguiiserrala Lindb. fil. 3,20±0,06 8,12±0,17 8,33±0,12 0,18±0,002

19 M голая A. glabra Neyg. (A. alpesiris auch., non F.W.Schmidt) 3,5б±0,03 9,05±0,13 8,52±0,33 0,20±0,003

20 M. сарматская = M. щетинковатая A. sarmalica Juz. = A. sirigpsula Lindb. fil. 4,00±0,12 10,50±0,06 8,02±0,54 0,16±0,003

M. обыкновенная -A. vulgarisl.. (сборный вид = смешанные образцы) 2,14-4,81 8,34-14,12 7,42-14,46 0,13-0,24

ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ НАКОПЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ТРАВЕ МАНЖЕТКИ Вегетативные и генеративные органы манжетки отличаются по общему качественному составу фенольных соединений. При этом наибольший спектр веществ отмечали на хрома-тограммах у цветков (до 21), наименьший у осевых органов растения (12). Это объясняется специфическими особенностями физиологических функций каждого из исследованных органов манжетки и согласуется с литературными данными по другим растениям.

Доля флавоноидов в общем качественном составе фенольных соединений в органах преобладала. В стеблях и черешках флавоноиды составили 91%, в цветках - 86%, в листьях -

63%. Из числа доминирующих компонентов на хроматограммах листьев и цветков идентифицировали рутин.

Во всех органах манжетки обыкновенной содержатся флавоноиды; наибольшее содержание их наблюдали в цветках (до 4,11%) и листьях (до 3,76%), наименьшее в стеблях (до 1%) и черешках (до 0,99%). Достоверные отличия в содержании флавоноидов в органах манжетки учтены нами при разработке числовых показателей проекта ФС.

Наблюдали сезонную зависимость качественного состава фенольных соединений по фазам вегетации растения.

В начале вегетации и в период бутонизации доля флавоноидов в качественном составе фенольных соединений практически не претерпевала изменений и составила 44, 43% соответственно. К цветению она достигала максимума — 56% и далее снижалась к фазе созревания плодов до 44%. На хроматограммах фаз вегетации в числе доминирующих веществ идентифицирован рутин.

Содержание флавоноидов в образцах манжетки, заготовленных в разные периоды вегетации растения, находилось в пределах от 2,00% до 3,82%. Концентрация флавоноидов по среднему показателю в фазу бутонизации (3,09 %) превышала незначительно аналогичный показатель в фазах начала вегетации (2,94%), цветения (2,51%) и плодоношения (2.74%). Статистически результаты не имеют достоверных отличий между собой, что позволяет вести заготовку сырья от растений, находящихся в различных фенологических фазах развития.

Наблюдали два цикла развития манжетки (рис. 3). Первый цикл - с мая до середины июля, когда растение проходило все фазы вегетации до увядания. Второй цикл с середины июля до конца вегетации характеризовался появлением молодых побегов, первоначально прикорневыми листьями и в дальнейшем развитием стеблей с листьями и соцветиями.

Содержание действующих веществ в образцах манжетки на фоне изменения морфомет-рических показателей (рис. 2), составило: флавоноидов от 2,49 до 4.01 %, полисахаридов от 6,99 до 8,76 %, суммы окисляемых веществ от 7,79 до 12,52 % (рис. 3 А).

Содержание аскорбиновой кислоты варьировало от 0,13 до 0,38 %, резкое снижение её содержания с 0,28 до 0,18 % наблюдали после заморозков (рис. 3 Б).

Рис. 2. Динамика массовой доли надземных органов манжетки в образцах сырья, заготовленного в течение вегетационного периода подекадно

В образцах с большей долей листовых пластинок и соцветий наблюдали увеличение содержания БАВ; при возрастании доли стеблей или черешков в сырье манжетки, их содержание снижалось.

Статистический анализ не выявил достоверных различий в содержании БАВ травы манжетки при подекадном сборе. Т.е. изменение доли соцветий и листьев, а также стеблей и черешков не оказывает существенного влияния на содержание флавоноидов, полисахари-

дов, окисляемых веществ, аскорбиновой кислоты, что благоприятно для заготовки сырья в любую декаду кроме периода заморозков.

В траве манжетки методом восходящей хроматографии на бумаге обнаружили 10 свободных аминокислот, в том числе валин, лейцин, изолейцин, метионин, треонин, алашш, глицин, серин, глугаминовая и аспарагиновая кислота. Присутствие в траве манжетки станина, глутаминовой и аспарагиновой кислот согласуются с литературными данными.

Динамика содержания аминокислот в сырье манжетки в целом совпадает с таковой для ведущих групп БАВ. Но прослеживается более чётко.

В цветках манжетки накапливалось максимальное содержание свободных аминокислот (в среднем 0,89%). Далее оно уменьшалось в ряду листья (0,74%) > черешки (0,62%) > стебли (0,42%).

Прослеживали явную тенденцию к возрастанию концентрации аминокислот в траве манжетки от фазы начала вегетации к цветению. В период плодоношения наблюдали резкое снижение их концентрации почти вдвое.

При подекадной заготовке сырья в течение периода вегетации максимальные концентрации аминокислот манжетки отмечали в начале циклов развития: 2,41% - в первом цикле и 1,95%- во втором. Это связано с началом ростовых процессов, когда метаболизм аминокислот направлен главным образом на синтез белка (Рис. 3 В). Колебания содержания суммы свободных аминокислот в течение вегетационного периода манжетки были тесно связаны с развитием листовых пластинок. Причём, в первом цикле развития это стеблевые листья, по мере уменьшения их роста и доли в сырье с 21 до 6,5%, уменьшалось содержание аминокислот с 2,41 до 0,60%, во втором - листья прикорневой розетки, при их росте и увеличении доли в сырье количество аминокислот повышалось с 0,60 до 1,95%.

Дальнейшее развитие листьев манжетки второго цикла в осенний период сопровождалось снижением концентрации свободных аминокислот до 0,67% и последующим возрастанием их содержания до 0,97% в образце, заготовленном после заморозков.

Содержание флавоноидов в траве манжетки существенно зависело от условий места произрастания. Так, внутри зоны №1 наибольшее содержание данной группы соединений (5,48%) обнаружено в образце Юсьвенского района, характеризующегося дерново-сильноподзолистыми почвами и пихтово-еловой-травяно-кустарничковой растительностью; наименьшее (2,18%) в образце Соликамского района с дерново-кислыми почвами и сосновыми с берёзой лесами (табл. 3). Колебания содержания флавоноидов прослеживали в образцах внутри других ботанико-географических зон.

Варьирование показателей содержания полисахаридов, окисляемых веществ и аскорбиновой кислоты внутри каждой зоны находилось в пределах ошибки опыта и не имело существенных различий. Средние значения концентраций БАВ манжетки по зонам имеют близкие значения, что позволяет говорить об отсутствии зональной зависимости (табл. 4).

Таким образом, в образцах травы манжетки, заготовленных на территории Пермского края обнаружили значительный потенциальный запас групп активных соединений. В целом, содержание флавоноидов составило от 2,0 до 5,0%, полисахаридов - от 6,5 до 16,0%, окисляемых веществ - от 8,10 до 14,1 %, аскорбиновой кислоты - от 0,1 до 0,2%.

В исследованных образцах травы манжетки обнаружили эссенциальные и условно эс-сенциальные микроэлементы, их концентрации уменьшались в ряду: Мп (75,9-491,5 мг/кг)> гп > Си > V > Сг > № > РЬ > Со > Мо > Бп (0,15-0,21 мг/кг). Содержание элементов, отражающих антропогенную нагрузку на растительные объекты, уменьшалось в ряду: Т1 (113,7515,0 мг/кг)>Бг >Ва >Ъ\ >У >№ >5с >Оа >УЬ >В1 > Ag (0,01-0,08 мг/кг).

Содержание свинца (0,68-2,06мг/кг) в образцах не превышало предельно допустимые концентрации (ПДК), установленные СанПиНом 2.3.2.1078-01 и ЕФ5.

% 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 -I-0,05 --

4 5 6 7 8 9 Периоды заготовки-декады

5 2,5Ц

0 5

1 1.5 "

5 1

6 0,6

Дата заготовки

Рис. 3. Динамика содержания." А -БАВ в траве манжетки, заготовленной подекадно; Б - аскорбиновой кислоты в траве манжетки; В - свободных аминокислот в траве манжетки

Среднее содержание БАВ в образцах травы манжетки,

№ п/п Ботанн- ко-географические зоны Административные районы и территории (единицы) Места заготовки Содержание БАВ, %

сумма фла-воноидов в пересчёте на рутин полисахариды сумма окисляемых веществ аскорбиновая кислота

1 Средне-таёжных елово — пихтовых лесов Юсьвенский суходольный луг на опушке смешанного леса 5,48 ±0,19 7,9 ± 0,3 14,1 ±0,6 0,17 ±0,006

Соликамский поляна у смешанного леса 2,82 ±0,07 2,87 ± 0,03 10,1 ±0,3 12,1 ± 0,2 0,16 ±0,005

разнотравный луг 3,23 ±0,11 _ * - -

луг на берегу реки 2,70 ±0,02 8,3 ±0,1 11,0 ± 0,3 0,14 ±0,003

поляна в лесу 2,62 ± 0,05 3,71 ±0,13 2,18 ±0,07 - - -

суходольный луг 2,49 ±0,09 — - -

Кудымкарский поляна у леса 4,40 ± 0,05 9,1 ±0,1 11,7 ± 0,4 0,15 ±0,002

Чердынский разнотравный луг на берегу реки 2,65 ±0,01 2,72 ± 0,04 9,6 ± 0,4 9,7 ± 0,5 0,13 ±0,004

поляна в лесу 3,74 ± 0,07 - - -

Гайнский заливной луг р. Кама 3,67 ±0,09 9,4 ± 0,4 13,1 ±0,2 0,15 ±0,001

Средние значения содержания БАВ по зоне №1 3,23 ± 0,02 9,1 ±0,1 12,0 ±0,2 0,15 ±0,002

Примечание: * - отсутствие данных

Варьирование показателей содержания микроэлементов в образцах манжетки между зонами и внутри ботанико-географических зон отражает геохимические особенности почв мест произрастания. Вышеизложенное даёт основание считать микроэлементы биологически активными веществами травы манжетки, а их количество подтверждает экологическую чистоту сырья.

Ресурсоведческие исследования проводили в Пермском районе на конкретных зарослях, объективно представляющих типичные места произрастания и фитоценозы манжетки обыкновенной с различной степенью её участия и типом луга, характерных не только для зоны Урала, но и средней полосы России (луг 1 - злаково-манжетково-васильковый, 2 -разнотравно-злаковый, 3 - вейниково-разнотравный, 4 - клеверно-злаково-разнотравный).

Биологический запас воздушно-сухого сырья (БЗС) исследованных лугов составил от 1 до 13 тонн; эксплуатационный запас сырья (ЭЗС) - от 0,6 до 9 тонн; возможный ежегодный объём заготовки (ВЕОЗ) - от 0,2 до 3 тонн.

На суммарной площади исследуемых зарослей в 11,6 га можно заготовить 4,4 тонны травы манжетки при однократном отчуждении надземной фитомассы.

На этих лугах проводилось сенокошение в двадцатых числах июня, в период цветения манжетки обыкновенной. Первое определение запаса сырья проведено после сенокошения, второе (в отаве) - в первых числах сентября. В отаве на луге №1 срезали надземную часть

цветущих экземпляров манжетки в середине августа (отава 1) и аналогично другим лугам в начале сентября (отава 2). Плотность запаса сырья (ПЗС) манжетки увеличивалась с 390 кг/га при ранней заготовке в отаве (отава 1) до 700 кг/га в сентябре. Таким образом, отав-ность манжетки изменялась от 36 до 64%, в зависимости от срока повторного отчуждения фитомассы (табл. 5).

Таблица 4

Среднее содержание БАВ в образцах манжетки обыкновенной, заготовленных в ботанико-географических зонах Пермского края_

№ п/п Ботанико-географические зоны Кол-во образцов Содержание БАВ, %

флавонои-ды полисахариды окисляемые вещества аскорбиновая кислота

1 Среднетаежных елово-пихто-вых лесов 14 3,23 ± 0,02 9,10± 0,1 12,0 ±0,2 0,15 ±,002

2 Южно - таежных Камско- Пе-чорско - Западноуральских пихтово-еловых лесов 10 2,80±0,02 10,0 ±0,1 10,8 ±0,1 0.15 ±,001

3 Широко лиственно-елово-пихтовых (подтаежных) лесов 27 3,09 ±0,01 8,6 ±0,1 9,9 ± 0,04 0,17 ±,001

4 Островной Кунгурской лесостепи 6 2,89 ±0,10 8,6 ±0,1 9,8 ±0,1 0,15 ±,001

5 Средне - и южнотаежных предгорных пихтово-еловых и ело-во-пихтовых лесов 14 3,36 ±0,02 9,8 ±0,1 9,9 ±0,1 0,14±0,007

6 Севро- и средне-таежных кед-рово-еловых горных лесов 8 3,29 ± 0,03 9,1 ±0,1 9,9 ±0,1 0.16 ±,002

В целом на исследуемых лугах, отавность манжетки находилась в пределах от 268 до 1294 кг/га, что составляло 56 - 67 % от фитомассы травы манжетки за первый укос. Прогноз запасов сырья манжетки на 4-х отавных лугах в сумме определён в 8,1 тонны (эксплуатационный запас), т.е. 62% дополнительно от массы сырья основного укоса.

Прогноз запасов травы манжетки на типичных местах обитания в Пермском районе Пермского края составляет 21 тонну ЭЗС.

Таким образом, сырьевая база манжетки обыкновенной в Пермском крае перспективна для промышленного сбора сырья.

При химической таксации образцов травы манжетки и статистической обработке данных установили, что содержание флавоноидов в образцах с генеративными побегами и без них, заготовленных во время основного укоса и в отаве, не имело существенных отличий (рис.4).

Содержание полисахаридов в цветущих экземплярах манжетки обыкновенной составило от 6,53 до 7,47%; окисляемых веществ - от 8,61 до 11,52%; аскорбиновой кислоты - от 0,15 до 0,16%. Достоверных различий между лугами по содержанию в траве манжетки полисахаридов, окисляемых веществ и аскорбиновой кислоты не обнаружено.

На основании выше изложенного, рекомендуем проводить заготовку сырья при первом укосе и с отавных лугов от цветущих и не цветущих экземпляров манжетки обыкновенной следующих вариантах: 1- в нескошенном фитоценозе, выбирая из травостоя траву манжет-ки;2 - из свежескошенного сена, выбирая траву манжетки; 3 - в отаве, срезая надземную часть.

№ луга Э, га Метод модельных экземпляров Отав- ность, %

состояние луга ср. масса модельного экз., г ПЗС, кг/га БЗС, кг ЭЗС, кг ВЕОЗ, кг; 1=2

1 1,5 основной укос 3,95 ±0,31 1076 ±117 1615 ±176 1264 421 36

отава 1 1,43 ±0,14 390 ±48 584 ± 72 440 147

отава 2 2,54 ±0,19 692 ±73 1038 ±110 818 273 64

2 2,3 основной укос 4,47 ±0,47 481 ± 107 1106 ±246 614 205 56

отава 2,49 ±0,13 268 ± 54 616±125 366 122

3 1,3 основной укос 7,84 ± 0,38 1943 ±131 2526 ±181 2164 721 67

отава 5,22 ± 0,58 1294 ±159 1682 ±207 1268 423

4 6,5 основной укос 9,98 ±0,97 1975 ±285 12836 ±1853 9131 3044 59

отава 5,88 ± 0,38 1163±145 7563 ± 943 5676 1892

Разработан проект «Инструкции по заготовке травы манжетки», регламентирующий сроки и приёмы заготовки сырья.

ИССЛЕДОВАНИЯ К РАЗРАБОТКЕ ПРОЕКТА ФАРМАКОПЕЙНОЙ СТАТЬИ «МАНЖЕТКИ ТРАВА»

Установили показатели качества по внешним и микроскопическим признакам. При определении подлинности сырья диагностическое значение имеют морфолого-анатомические характеристики листовой пластинки, цветка и стебля. Установлены числовые показатели", определена микробиологическая чистота травы манжетки. Установлена стабильность показателей качества травы манжетки в течение 3 лет.

Для раздела «Количественное определение» проекта ФС разработана и валидирована методика оценки качества травы манжетки по содержанию суммы флавоноидов в пересчёте на рутин. Дифференциальные спектры светопоглощения комплекса флавоноидов с 2% раствором алюминия хлоридом в извлечениях из травы 20 видов рода А1с1гетШа, травы манжетки смешанных образцов совпадают и характеризуются чётко выраженным максимумом поглощения при длине волны 405 ± 5 нм. Максимум поглощения дифференциальной кри-

вой флавоноидов травы манжетки совпадает с одним из максимумов поглощения комплекса PCO рутина с А1С13. Аналитическая длина волны 405 нм (рис. 5).

Рис. 5. Спектры комплекса флавоноидов извлечения травы манжетки и PCO рутина с А1С1;, Оптимальные условия извлечения флавоноидов: размер частиц сырья - > 0,5 < 1,0 мм, экстрагент- 70% этиловый спирт, трёхкратная экстракция по 30 мин. Соотношение объёмов извлечения и 2% раствора А1С13 -1:2. Образование устойчивого комплекса происходит 30 минут. Комплекс стабилен в течение часа. Относительная ошибка определения составила 2,59 % (табл. 6).

Таблица б

Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы ____флавоноидов в траве манжетки___

п / X S2 S Р.% t(PJ Д*

10 9 2,403 0,000757 0,02751 95 2,26 0,06217 2,59

Коэффициент корреляции линейного регрессионного графика составил г= 0,994, уравнение регрессии у = Ь-х + а, при b =0,015 , а = - 0,1074. Соблюдается линейная зависимость между величинами оптической плотности и содержанием флавоноидов в извлечениях из травы манжетки в интервале 25 - 150% от номинального значения определяемой величины.

Отсутствие систематической ошибки подтвердили методом добавок различных концентраций PCO рутина в извлечение из травы манжетки, результаты которого показали, что ошибка опыта находится в пределах ошибки единичного определения (табл. 7).

Испытания внутри и межлабораторной воспроизводимости валидируемой методики, проведённые в лабораториях кафедры фармакогнозии и РИЦ «Фарматест» ПГФА. указывают на прецизионность разработанной методики в условиях внутри и межлабораторной воспроизводимости результатов.

Таблица 7

Результаты количественного определения суммы флавоноидов в траве манжетки с использованием метода добавок PCO рутина_

Содержание флавоноидов. мг Ошибки

в извлечении добавлено в извлечении ожидаемое теорети- абсолютная, относи-

в пересчёте на PCO при добавле- чески в извлечении мг тельная, %

рутин рутина нии рутина при добавке рутина

44,5 11,9 56,5 56,4 0,1 0.18

44,5 12,4 57,1 56,9 0,2 0,35

44,5 18,0 61,7 62,5 0,8 1,28

44,5 18,0 63,1 62,5 0,6 0,96

Валидационная оценка методики, проведённая по характеристикам: специфичность, линейность, правильность и прецизионность (внутри и межлабораторная) в соответствии с

проектом ОФС «Валидация фармакопейных методов», подтвердила её пригодность для стандартизации травы манжетки.

ЭКСТРАКЦИОННЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ ИЗ ТРАВЫ МАНЖЕТКИ Настой 1:10 содержит больше БАВ (табл. 8) и проявляет достоверно высокую фармакологическую активность (табл. 13).

Таблица 8

Содержание флавоноидов, окисляемых веществ, полисахаридов и _аскорбиновой кислоты в настоях травы манжетки, %_

№ образца Флавоноиды Окисляемые Полисахариды Аскорбиновая

вещества кислота

настой настой настой настой настой настой настой настой

1:10 1:20 1:10 1:20 1:10 1:20 1:10 1:20

I 0,021± 0,020± 2,92± 2,26± 3,43± 2,301= 0,18± 0,17±

0.0004 0.0002 0,06 0,003 0,34 0,04 0,001 0,0003

2 0,020± 0,010± 4,61± 4,26± 2,63± 2,09± 0,18± 0,16±

0.0005 0,001 0,05 0,05 0,23 0,08 0,005 0,007

0,028± 0,011± 5,44± 5,31± 4,87± 2,72± 0,27± 0,21±

0,001 0.001 0,01 0,05 0,09 0,12 0,009 0,005

4 0,022± 0,011± 5,42± 5,23± 2,09± 1,29± 0,26± 0,21±

0,001 0,0002 0,06 0,06 0,03 0.06 0,001 0,001

5 0,021± 0,010± 4,61± 4,27± 2,20± 2,02± 0,22± 0,20±

0,0003 0,0002 0,04 0,06 0,05 0,02 0,005 0,003

6 0,023± 0,012± 4,40± 3,22± 2,46± 1,82± 0,23± 0,21±

0,001 0,001 0,06 0,02 0,20 0.08 0,006 0,005

Среднее 0,023 0,012 4,57 4,09 2,45 2,04 0,22 0,19

Достоверность t,=5,1964; t3 =0,7778; t,=l,9178; t, =1,6542;

Примечание. tK 2,2278.

В настое травы манжетки идентифицировали рутин из 8 обнаруженных веществ фе-нольной природы; свободные аминокислоты: лизин, гистидин, 0,Ь-треонин, изолейцин, 0,Ь-метионин, валин, глицин, глутаминовая и аспарагиновой кислоты.

Для сквозной стандартизации сырья и настоя предложена адаптированная для настоя методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчёте на рутин (табл. 9).

Таблица 9

Метрологические характеристики методики количественного __ определения суммы флавоноидов настоя травы манжетки _

п / X S2 5 Р,% <<rj ÁX

5 4 0,023 0,000057 0,00174 95 2,776 0,00078 3,39

Для получения экстракта травы манжетки сухого использовали параметры соотношения сырья и экстрагента, размера частиц установленные для настоя. Для экстракта дополнительно выбраны параметры: экстрагент (табл. 15); температура экстрагирования; продолжительность и кратность числа экстракций (равновесного состояния процесса настаивания).

Траву манжетки измельчают до размера частиц >1мм < Змм, экстрагируют водой очищенной в соотношении сырье : экстрагент -1:10 методом ускоренной дробной мацерации в экстракторе при температуре 90°± 5°С в три этапа: в течение 1часа, 45 мин. и 30 мин. Объединенные извлечения отстаивают, фильтруют, декантируют, упаривают в вакууме до 1/10 объёма и высушивают в распылительной сушилке.

В составе экстракта идентифицировали рутин из 8 веществ фенольной природы и 9 из 1 ¡обнаруженных аминокислот, в их числе лейцин, изолейцин, метионин, треонин, лизин, аланин, глицин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты.

Содержание эссенциальных и условно эссенциальных микроэлементов в экстракте уменьшалось в ряду: Мп (369,0мг/кг) > Сг = V > N1 = Си = 2п > Со > РЬ > Эп > Мо (0,74мг/кг). Концентрация микроэлементов, отражающих антропогенную нагрузку уменьшалась в ряду: П (822,0 мг/кг) > Ва > 8г > Ъ\ > У = № > 8с = ва > Ое = Ве > В1 = УЬ > к% (0,06мг/кг). Содержание тяжёлых металлов РЬ (2,55 мг/кг) не превышает предельно допустимые концентрации (ПДК), установленные СанПиНом 2.3.2.1078-01 и ЕФ5.

Для сквозной стандартизации экстракта предложена адаптированная методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчёте на рутин. Методика обладает хорошей воспроизводимостью, относительная ошибка среднего измерения при доверительной вероятности 95% составила-3,61% (табл. 10).

Таблица 10

Метрологическая характеристика спектрофотометрического метода количественного определения

флавоноидов в экстракте манжетки сухом

п / X 5 Р,% Ах

5 4 3,82 0,02 0,16 95 2,П6 0,138 3,61

Разработаны показатели качества и включены в проект ФСП «Экстракт травы манжетки сухой».

Содержание БАВ в экстракте манжетки сухом 5 серий составило: флавоноиды 3,7 -4,1%, окисляемые вещества-4,7 - 5,5%, полисахариды - 24,3- 33,4%, аскорбиновая кислота - 0,3 - 0,3% (табл. 11).

Таблица 11

Содержание биологически активных веществ в экстракте манжетки сухом, %_

Номер серии Группы БАВ

сумма флавоноидов в пересчёте на рутин полисахариды сумма окисляемых веществ в пересчёте на танин аскорбиновая кислота

1 3,77 ±0,12 26,37 ± 3,87 5,85 ±1,47 0,33 ±0,02

2 4,10 ±0,09 31,52±4,91 4,01 ± 0,37 0,33 ±0,01

3 3,73 ±0,15 33,36 ± 0,70 4,70 ± 0,37 0,31 ±0,01

4 3,75 ±0,14 24,31 ±4,17 3,25 ± 0,36 0,31 ±0,03

5 3,77 ±0,19 33,09 ± 1,06 3,23 ± 0,36 0,32 ± 0,02

Определены технологические характеристики экстракта: содержание влаги- 3,72%, насыпную массу при свободном падении- 0,3 г/см3, насыпную массу при уплотнении- 0,4 г/см3. Определение сыпучести и угла естественного откоса экстракта с помощью метода вибрирующей воронки на приборе ВП-12А показало, что экстракт травы манжетки сухой не сыпучий.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НАСТОЯ И ЭКСТРАКТА ИЗ ТРАВЫ МАНЖЕТКИ В максимально введенной перорально дозе настой травы манжетки каких-либо проявлений токсического действия не выявлено. ЛД 50 настоя травы манжетки превышает 11,7 г/кг. Максимально введенная перорально доза экстракта травы манжетки составляет 10 г/кг. Расчетная ЛД 50 экстракта травы манжетки равна 8 г/кг. Настой и экстракт травы манжетки относятся к малотоксичным (табл. 12).

Гипогликемическое действие у настоя и экстракта травы манжетки подтверждено на модели экспериментального диабета, индуцированного аллоксаном.

Острая токсичность__

Серии опытов Максимально использованная доза лд50

Настой травы манжетки 14 ООО мг/кг 11 700 мг/кг

Экстракт травы манжетки 10 ООО мг/кг 8 000 мг/кг

Настой и экстракт травы манжетки не изменяли уровня глюкозы в крови у интакгных крыс во все сроки наблюдения. Гипогликемический эффект проявлялся уменьшением глюкозы в крови по сравнению с фоном во все сроки наблюдения. О чём свидетельствуют достоверные отличия между уровнем глюкозы в крови контрольных (нагрузка глюкозы) и опытных (настой травы манжетки + нагрузка глюкозы, экстракт травы манжетки + нагрузка глюкозы) животных.

Таблица 13

Сравнительная оценка гипогликемической и гиполипидемической

Серии опытов Кол-во животных Уровень глюкозы, ммоль/л Общий холестерин, ммоль/л Триглице-риды, ммоль/л

30 мин 120 мин

Контроль 6 4,31±0,11 4,11±0,08 4,32±0,21 0,72±0,09

Аллоксановый диабет 6 9,97±0,22 *•• 1 10,01±0,05 ••* 1 5,66±0,07 1 1,94±0,02 *** 1

Аллоксановый диабет + настой манжетки (1:10) 6 6,23±0,04 *«• г *«* 2 6,15±0,06 1 2 4,88±0,05 1 **4 г 1,03±0,03 1 **• г

Аллоксановый диабет + настой манжетки (1:20) 6 7,55±0,15 1 2 7,18±0,07 2 4,98±0,03 *м' 2 1,06±0,01 1 2

Аллоксановый диабет + настой черники П: 101 6 5,42±0,21 1 *** 2 3 5,41±0,15 1 **4 ( 2 3 4,84±0,03 1 •*• 2 0,93±0,03 2

Аллоксановый диабет + настой черники (1: 20*1 6 6,78±0,14 ••• 1 2 3 6,95±0Д1 1 2 5,20±0,07 2 3 1,ООН),03 • 1 2

Примечание: =р<0,05; =р<0,01; =р < 0,001; 1-по сравнению с контролем; 2-по сравнению с агшоксановым диабетом; 3 - по сравнению с настоем травы манжетки (в равных концентрациях)

О специфичности данного эффекта свидетельствует дозозависимый эффект настоя и экстракта. Принципиальное значение имеет их способность проявлять гипогликемическое действие независимо от тяжести химически вызванного нарушения углеводного обмена.

Поскольку аллоксановый диабет сопровождается также и нарушением липидного обмена, то выявленная способность настоя и экстракта травы манжетки снижать уровень общего холестерина и триглицеридов свидетельствует о наличии гиполипидемического действия. Таким образом, настой и экстракт травы манжетки обладают типичными фармакологическими свойствами, присущими антидиабетическим препаратам. Антидиабетическая активность настоя травы манжетки несколько уступала фитопрепарату сравнения - настою побегов черники (табл. 13).

Сравнительный анализ влияния фитопрепаратов на аллоксановый диабет показал, что экстракт травы манжетки сухой в дозе 50 мг/кг по выраженности гипогликеми-ческого действия достоверно уступает настою черники. Экстракт травы манжетки сухой в дозе 50 мг/кг достоверно превосходил настой черники по влиянию на уровень общего холестерина. Аналогичная ситуация наблюдалась и в отношении снижения уровня триглицери-дов. В этом случае экстракт травы манжетки сухой в дозе 50 мг/кг превосходил настой черники. Гак, если экстракт травы манжетки сухой снижал уровень триглицеридов в 3,2 раза, то настой черники - лишь в 2,1 раза (р < 0,001).

Установлено, что сухие спиртовые экстракты, полученные при использовании в качестве экстрагента этиловый спирт, в дозе 50 мг/кг не проявили существенной гипогликеми-ческой активности на модели аллоксанового диабета (табл. 14). Спиртоводные экстракты травы манжетки не перспективны в качестве гипогликемических средств.

Таблица 14

Влияние сухих спиртовых экстрактов травы манжетки

Серии опытов Концентрация экстрагента, % Доза, мг/кг Количество животных Снижение уровня глюкозы, %

30 мин 120 мин

Водный экстракт травы манжетки сухой - 50 6 33,5 ± 0,4 36,4 ±0,6

Спиртовым экстракт травы манжетки сухой 40 50 6 16,4 ±1,3 19,9 ±1,7 ***2

50 50 6 25,8 ±0,5 14,4 ±0,8

60 50 6 19,9 ±2,3 0,0 ± 0,0 ***2

70 50 6 13,6 ± 0,8 8,3 ±0,7 ***2

80 50 6 30,7 ± 0,8 14,3 ±0,8 ***!

Таблица 15

Влияние настоя травы манжетки на иммунодефицит

Серии опытов Доза Количество Количество

животных Т - лимфоциты В-лимфоциты

Контроль - 6 55,7 ± 1,5 16,8 ± 1,1

Циклофосфан 50 мг/кг 6 23,5 ±1,3 5,2 ±0,7

Циклофосфан+ настой 50 мг/кг 6 53,0 ±1,0 18,7 ±0,8

травы манжетки (1:10) + 1мл/100г ***2

Циклофосфан + 50 мг/кг 6 45,7 ±1,4 14,0 ±0,5

экстракт травы манжетки + 50 мг/кг

Примечание: " = р < 0,01; = р < 0,001;

I- по сравнению с контролем; 2- по сравнению с циклофосфаном

В генезе. сахарного диабета существенную роль играют и аутоиммунные процессы. На модели лекарственно индуцированного иммунодефицита установлено, что, настою и экстракту травы манжетки присуще самостоятельное иммун ом оду лирую щее действие. Об этом свидетельствовало устранение.лейкопении, уменьшение патологических сдвигов морфологического состава крови, которые типичны для вызванного циклофосфа-ном иммунодефицита. Настой и экстракт травы манжетки устраняли иммунодепрессивное действие циклофосфана на Т- и В-лимфоциты (табл. 15).

По-видимому, данный эффект связан с прямым влиянием их на соответствующие популяции лимфоцитов. Гипотеза подтверждена влиянием фитопрепаратов на экспрессию рецепторов Т-лимфоцитов. Настой и экстракт травы манжетки устранял эффект трипсина в отношении Т-рецепторов (табл. 16).

Таблица 16

Серии опытов Доза Количество животных Фагоцитарная активность нейтрофилов, %

Контроль - 6 48,5±1,3

Циклофосфан 50 мг/кг 6 33,7±0,6

Циклофосфан + настой травы манжетки (1:10) 50 мг/кг + 1мл/100г 6 43,4±1,1 ***2

Циклофосфан + экстракт травы манжетки 50 мг/кг + 50 мг/кг 6 44,5±1,8 "**2

Примечание: " = р<0,01;"' =р<0,001;

1- по сравнению с контролем; 2- по сравнению с циклофосфаном Иммунокорригирующее действие настоя и экстракта травы манжетки включает ещё и фагоцитозстимулирующий эффект. Фитопрепараты манжетки восстанавливали фагоцитоз у крыс с экспериментальным иммунодефицитом.

Таким образом, настой и экстракт травы манжетки сухой обладают типичными фармакологическими свойствами, присущими антидиабетическими препаратам и иммунокоррек-торам.

ВЫВОДЫ

1. Результаты исследований по морфологии, анатомии, химическому составу травы манжетки и литературные данные позволили объединить виды рода Alchemilla L. под названием Alchemilla vulgaris L., как производящего растения для заготовки сырья «Alchemil-lae herba».

2. На основании результатов эколого-ценотической характеристики, морфометрического анализа и динамики накопления БАВ, исследований по срокам и приёмам заготовки разработана «Инструкция по заготовке травы манжетки».

3. Сырьевая база манжетки обыкновенной в Пермском крае перспективна для промышленного сбора сырья. Прогноз запасов травы манжетки в Пермском районе Пермского края составил 21 т эксплуатационного запаса сырья.

4. Установлена возможность заготовки травы манжетки в 2 срока: основной укос в период массового цветения и в период отрастания в отаве. Сбор сырья на отавных лугах позволит увеличить объёмы заготовки травы манжетки до 62% дополнительно от массы сырья основного укоса.

5. Разработан проект ФС «Alchemillae herba - манжетки трава», регламентирующий качество сырья манжетки. Предложена валидированная методика количественного опре-

деления в траве манжетки суммы флавоноидов в пересчёте на рутин. Установлены показатели подлинности и доброкачественности сырья.

6. Определены условия получения экстракта травы манжетки сухого, обеспечивающие максимальное содержание флавоноидов, полисахаридов, аскорбиновой кислоты, суммы окисляемых веществ и фармакологическую активность. Разработан проект ФСП «£х-tractum herbae AlchemiHae siccum» - «Экстракт травы манжетки сухой» и составлена технологическая схема получения экстракта травы манжетки сухого.

7. Выявлена гипогликемическая, гиполипидемическая и иммунокорригирующая активность настоя и экстракта травы манжетки сухого, что позволяет рассмагривать траву манжетки как лекарственное средство и сырьё для получения новых антидиабетических средств и иммунокорректоров растительного происхождения.

Список опубликованных работ:

1. Влияние фитопрепаратов на функциональную активность рецепторов инсулина / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, Т.А. Юшкова, Е.А. Голышева// Новая технологическая платформа биомедицинских исследований : материалы науч.-пракг. конф., Ростов н/Д, 16-17 октября 2006 г. - С. 13.

2. Зорина, Е.В. Исследование химического состава и фармакологической активности экстракта травы манжетки / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, Т.А. Юшкова // Человек и лекарство : тез. докл. XII Рос. нац. конгр., Москва, 18-22 апр. 2005 г. - М., 2005. - С. 755.

3. Зорина, Е.В. Количественное определение суммы флавоноидов в траве манжетки / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, А.Б.Седова // Вест. ПГФА. - 2007. - № 2. - С. 234-238.

4. Зорина, Е.В. Исследования по разработке нормативной документации на траву манжетки / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, А.Б. Седова // Фармация - 2009. - № 1. - С. 11-15.

5. Исследование некоторых видов манжеток как возможного гипогликемического средства / А.Б. Седова, Е.В. Зорина, Е.В. Челпанова, Г.И. Олешко // Человек и лекарство : тез. докл. X Рос. нац. конгр., Москва, 7- 11 апр. 2003 г. - М., 2003. - С. 660.

6. Морфолого-анатомическое строение генеративных органов представителей рода А1-chemilla / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, А.Б. Седова, Е.В. Челпанова // Достижения и перспективы в области создания новых лекарственных средств : материалы науч.-практ. конф., посвящ. 70-летию ПГФА, Пермь, 27-28 нояб. 20Q7 г. - С. 432-436.

7. Седова, А.Б. Лекарственные растения в лечении сахарного диабета: Монография / А.Б. Седова, Е.В. Зорина. - Пермь: ГОУ ВПО «ПГФА Росздрава», 2006. - 227с.

8. Способ получения средства, обладающего гипогликемической и иммуномодулирующей активностью/ Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, Т.А. Юшкова, В.В. Юшков. Заявка на выдачу патента № 2008100346/15(000378), решение от 28. 11. 2008г.

9. Фармакогностическое изучение видов рода Alchemilla / Е.В.Зорина, А.Б.Седова, Г.И.Олешко С.Д., Марченко // Человек и лекарство : тез. докл. XII Рос. нац. конгр., Москва, 18-22 апр. 2005 г. - М., 2005. - С. 755.

10.Zorina, E.V. DEFINITION of the FACTORS INFLUENTIAL IN ACCUMULATION FLA-VONOIDS In a GRASS ALCHEMILLA ORDINARY / E.V. Zorina, G.I. Oleshko, A.B. Se-dova : materials of the 2-nd Russian-Chinese international scientific conferences on pharmacology «Fundamental pharmacology and pharmacy-clinical practice». - Perm, 2006. - P. 70.

Оглавление диссертации Зорина, Елена Владимировна :: 2009 :: Пермь

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика растений рода Alchemilla L.

1.1.1. Систематика рода Alchemilla L.

1.1.2. Ареал, растительные зоны и места обитания растений р ода манжетка.

1.1.3. Влияние антропогенных факторов на развитие манжетки.

1.1.4. Заготовка и сушка травы манжетки.

1.1.5. Использование манжетки в научной и народной медицине

России и других стран.

1.1.6. Состояние изученности химического состава и фармакологической активности манжетки.

1-2- БАВ противодиабетического действия.

Выводы по главе 1.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Макро и микроскопические методы анализа.

2.2.2. Методы обнаружения и идентификации БАВ.

2.2.3. Методики количественного определение БАВ.

2.2.4. Фитоценотические и ресурсоведческие методы исследования.

2.2.5. Методы определения технологических параметров.

2.2.6. Методы фармакологического исследования.

2.2.7. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВИДОВ РОДА Alchemilla L.

3.1. Исследования морфолого-анатомических признаков.

3.2. Сравнительный фитохимический анализ видов рода Alchemilla L.

3.2.1. Изучение качественного состава.

3.2.2 Количественное определение.

Выводы по главе 3.

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЯ К РАЗРАБОТКЕ ПРОЕКТА

ИНСТРУКЦИИ ПО ЗАГОТОВКЕ ТРАВЫ МАНЖЕТКИ»

4.1. Изучение динамики накопления БАВ травы манжетки.

4.1.1. Динамика качественного состава флавоноидов и других фенольных соединений.

4.1.2. Содержание БАВ в органах манжетки обыкновенной и в образцах сырья, заготовленного в разные фазы вегетации.

4.1.3. Динамика морфометрических показателей.

4.1.4. Сезонная динамика накопления флавоноидов, полисахаридов, окисляемых веществ и аскорбиновой кислоты.

4.1.5. Обнаружение и динамика накопления свободных аминокислот.

4.2. Ресурсоведческие исследования.

4.2.1. Содержание БАВ в образцах травы манжетки из разных районов заготовки.

4.2.2. Накопление микроэлементов в траве манжетки.

4.2.3. Ресурсоведческие характеристики манжетки обыкновенной на модельных лугах.

4.2.4. Изучение перспективы использования отавы при заготовке травы манжетки.

4.2.5. Особенности заготовки травы манжетки и прогноз запасов сырья 104 Выводы по главе 4.

ГЛАВА 5. К РАЗРАБОТКЕ ПРОЕКТА ФАРМАКОПЕЙНОЙ СТАТЬИ «МАНЖЕТКИ ТРАВА»

5.1. Показатели подлинности.

5.2. Числовые показатели.

5.3. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов.

Выводы по главе 5.

ГЛАВА 6. ЭКСТРАКЦИОННЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ ИЗ ТРАВЫ МАНЖЕТКИ

6.1. Исследования по оптимизации условий приготовления настоя тр авы манжетки.

6.2. Исследование химического состава настоя травы манжетки.

6.2.1. Обнаружение и количественное определение флавоноидов, полисахаридов, окисляемых веществ и аскорбиновой кислоты.

6.2.2. Обнаружение и количественное определение свободных аминокислот в настое травы манжетки.

6.3. Разработка и стандартизация экстракта травы манжетки сухого.

6.3.1. Оптимизация условий экстрагирования.

6.3.2. Технологическая схема получения экстракта.

6.3.3. Исследование качественного состава экстракта.

6.3.4. Количественное определение БАВ в экстракте.

6.3.5. Изучение элементного состава экстракта травы манжетки.

6.3.6. Параметры стандартизации и установление срока годности экстракта.

6.3.7. Определение технологических параметров экстракта травы манжетки сухого.

Выводы по главе 6.

ГЛАВА 7. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ФИТОПРЕПАРАТОВ ТРАВЫ МАНЖЕТКИ

7.1. Острая токсичность.

7.2. Гипогликемическая активность.

7.2.1. Гипогликемическая активность настоя травы манжетки.

7.2.2. Гипогликемическая активность экстракта травы манжетки сухого

7.3. Иммунотропная активность.

7.3.1. Иммунотропная активность настоя травы манжетки.

7.3.2. Иммунотропная активность экстракта травы манжетки.

Выводы по главе 7.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Зорина, Елена Владимировна, автореферат

Актуальность темы. Одной из глобальных медико-социальных проблем мирового здравоохранения является стремительный рост распространенности сахарного диабета. Экспертами ВОЗ сахарный диабет был признан неинфекционной эпидемией XX века. По различным источникам от сахарного диабета в мире страдают от 1,5 до 5% населения планеты. Сахарный диабет поражает большое число людей всех социальных групп во всем мире [42, 182].Экспертная прогностическая оценка позволяет считать, что к 2010 году в мире будет насчитываться более чем 230 млн., а к 2025 году — 300 млн. больных сахарным диабетом, из которых 80-90% приходится на больных диабетом 2-го типа [21, 67, 74, 112,163].

В связи с этим, поиск и разработка новых высококачественных и безопасных препаратов для лечения и профилактики сахарного диабета продолжает оставаться одной из актуальных задач современной фармацевтической науки.

Имеются многочисленные сведения о возможности использования лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов при лечении сахарного диабета [103, 104, 107, 124, 179, 188, 200, 202, 223, 236, 238, 243, 244]. Их высокая фармакотерапевтическая активность обусловлена гармоничным сочетанием и взаимодействием биологически активных веществ, содержащихся в растениях [2, 191, 192, 193, 201, 217, 222]. Гипогликемическую активность обусловливают флавоноиды, которые способствуют увеличению ионов кальция и стимуляции секреции инсулина (3-клетками поджелудочной железы; аскорбиновая кислота, потенцирующая сахароснижающий эффект флаво-ноидов; полисахариды, препятствующие всасыванию углеводов в кишечнике. Эти группы веществ, а также полифенольные соединения оказывают противовоспалительный, диуретический, антигипоксический и другие эффекты, важные в комплексной терапии сахарного диабета.

Растения рода Alchemilla L. перспективны для изучения в данном аспекте [166, 172]. Они широко распространены на территории Европейской части России, в том числе Пермского края, который является одним из центров видообразования рода.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования является изучение возможности использования в медицинской практике травы манжетки и фитопрепаратов из неё в качестве противодиабетических средств.

Задачи исследования:

2. Исследовать эколого-ценотические характеристики манжетки обыкновенной, приёмы и сроки заготовки, динамику накопления биологически активных веществ (БАВ) сырья для разработки «Инструкции по заготовке и сушке травы манжетки». Обосновать возможности и перспективы заготовки и запасы сырья манжетки в Пермском крае

4. Определить оптимальные условия получения экстракта травы манжетки сухого и разработать проект нормативной документации — ФСП на экстракт травы манжетки сухой.

5. Изучить фармакологическую активность травы манжетки и экстракта травы манжетки сухого.

Научная новизна. Проведено комплексное фармакогностическое исследование нового вида сырья — трава манжетки.

Изучена динамика накопления в траве манжетки БАВ, в том числе свободных аминокислот в течение вегетационного периода. Изучено влияние сезонного изменения морфометрических показателей на содержание БАВ в траве манжетки.

Практическая значимость. Научно обоснована возможность заготовки травы манжетки от сборного вида Alchemilla vulgaris L. и использования травы манжетки в качестве лекарственного средства и сырья для получения экстракта травы манжетки сухого.

Разработан проект «Инструкции по заготовке и сушке травы манжетки».

Определены ресурсы травы манжетки и перспективы её заготовки в Пермском крае.

Разработана и валидирована методика количественного определения суммы флавоноидов в траве манжетки. Методика адаптирована для сквозной стандартизации настоя и экстракта травы манжетки сухого.

Получена субстанция «экстракт травы манжетки сухой», установлены параметры её стандартизации, установлена гипогликемическая, иммунокорре-гирующая и гиполипидемическая активность. Показатели качества включены в проект ФСП «Extractum herbae Alchemillae siccum» - «Экстракт травы манжетки сухой». Разработан лабораторный технологический регламент получения экстракта травы манжетки сухого. Проведена апробация получения экстракта травы манжетки сухого на ООО «Биохиммаш», г. Москва.

Результаты проведённых исследований используют в учебном процессе кафедры фармакогнозии, на факультете дополнительного профессионального образования, в интернатуре ГОУ ВПО ПГФА Росздрава и в качестве лекционного материала — в отделении повышения квалификации фармацевтов ГОУ ДПО Пермского областного центра повышения квалификации работников здравоохранения.

Внедрение результатов исследования.

Разработан проект ФС «Alchemillae herba» - «манжетки трава». Разработана «Инструкция по заготовке и сушке травы манжетки». Результаты проведённых исследований используют в учебном процессе кафедры фармакогнозии, на факультете дополнительного профессионального образования, в интернатуре ГОУ ВПО ПГФА Росздрава и в качестве лекционного материала - в отделении повышения квалификации фармацевтов ГОУ ДПО Пермского областного центра повышения квалификации работников здравоохранения.

Апробация полученных результатов. По теме диссертации опубликовано 9 работ. Материалы диссертационной работы представлены на научно — практических конференциях Пермской государственной фармацевтической академии (Пермь, 2007гг.), на международной Российско-Китайской научной конференции (Пермь, 2006г); на международном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003, 2005 гг.)

Положения, выносимые на защиту:

• фитохимический анализ и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве манжетки;

• товароведческий анализ травы манжетки;

• исследования динамики накопления БАВ травы манжетки;

• исследования сырьевой базы травы манжетки в Пермском крае;

• фитохимический анализа настоя и экстракта травы манжетки сухого и его стандартизация;

• изучение фармакологической активности настоя и экстракта травы манжетки.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО ПГФА Росздрава (номер Государственной регистрации 01.9.10.018875) в рамках программы «Изучение лекарственной флоры РФ». Тема утверждена на заседании Учёного совета Пермской государственной фармацевтической академии (протокол № 3 от 24 ноября 2005 г).

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое изучение видов рода Alchemilla L. Пермского края"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

2. На основании результатов эколого-ценотической характеристики, мор-фометрического анализа и динамики накопления БАВ, исследований по срокам и приёмам заготовки разработана «Инструкция по заготовке травы манжетки».

3. Сырьевая база манжетки обыкновенной в Пермском крае перспективна для промышленного сбора сырья. Прогноз запасов травы манжетки в Пермском районе Пермского края составил 21т эксплуатационного запаса сырья.

5. Разработан проект ФС «Alchemillae herba — манжетки трава», регламентирующий качество сырья манжетки. Предложена валидированная методика количественного определения в траве манжетки суммы флавоноидов в пересчёте на рутин. Установлены показатели подлинности и доброкачественности сырья.

6. Определены условия получения экстракта травы манжетки сухого, обеспечивающие максимальное содержание флавоноидов, полисахаридов, аскорбиновой кислоты, суммы окисляемых веществ и фармакологическую активность. Разработан проект ФСП «Extractum herbae Alchemillae siccum» — «Экстракт травы манжетки сухой» и составлена технологическая схема получения экстракта травы манжетки сухого.

7. Выявлена гипогликемическая, гиполипидемическая и иммунокорриги-рующая активность настоя и экстракта травы манжетки сухого, что позволяет рассматривать траву манжетки как лекарственное средство и сырьё для получения новых антидиабетических средств и иммунокор-ректоров растительного происхождения.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Зорина, Елена Владимировна

1. Агафонцева, А.В. Флора сосудистых растений переходной полосы от подзоны южной тайги к подзоне широколиственно-хвойных лесов в пределах Пермского края. 03.00.05 — ботаника : автореф. дис. канд. биолог, наук / А.В. Агафонова. — Пермь, 2006. 22 с.

2. Ажунова, Т.А. Полисахаридный комплекс Aloe arborescens mill как средство дополнительной терапии сахарного диабета / Т.А. Ажунова, С.М. Николаев, А.Д. Бакуридзе // Раст. ресурсы. — 2004. Вып. 1. - С. 76-81.

3. Акопов, Н.Э. Важнейшие лекарственные растения и их применение / Н.Э. Акопов. Ташкент : Медицина, 1990. - С. 21 - 25; 265-266.

4. Аксельруд, Г.А. Экстрагирование. Система твердое тело-жидкость / Г.А. Аксельруд, В.М. Лысянский. Л. : Химия, 1974. - 254 с.

5. Александров, П. Н. Влияние рутина и эскуламина на некоторые модели асептического воспаления / П.Н. Александров и др. // Фармакология и токсикология. 1986. - N 1. - С. 84.

6. Алёхина, Н.Д. Синтез аланина в корнях проростков кукурузы при пониженной температуре / Н.Д. Алёхина, Е.Д. Ширшова // Физиология растений. 1985. - Т. 32, № 4. - С. 702.

7. Андреева, В.Ю. Исследование химического состава надземной части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L.S.L. / В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина // Химия раст. сырья. 2000. - № 2. - С. 79-85.

8. Андреева, В.Ю. Разработка методики количественного определения флавоноидов в траве манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L.S.L. / В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина. // Химия раст. сырья. 2000. - № 1.-С. 85-88.

9. Арзамасцев, А.П. Валидация аналитических методов / А.П. Арзамасцев, Н.П Садчикова, Ю.А. Харитонов // Фармация. № 4. - 2006 - С. 8-12.

10. Артамонов, В. Манжетка трава алхимиков. / В. Артамонов // Наука и жизнь. - 1995. - № 10. - С. 158-160.

11. Ассортимент лекарственных сборов на фармацевтическом рынке России / B.JI. Багирова, И.А. Баландина, Г.А. Сокольская и др. // Новая аптека. Директор аптеки. 2004. - № 3. - С. 65-70.

12. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР / Всесоюзный НИИ лек, растений. М. : ГУГК, 1976. - С. 1-98.

13. Атлас лекарственных средств. — М : Мир, Оникс XXI век, 2001. -С. 740-776.

14. Багирова, B.JI. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / B.JI. Багирова, В.А. Северцева. СПб. : СпецМир, 2001.223 с.

15. Баева, В.М. RAPD-анализ ДНК рода манжетки. / В.М. Баева, В.К. Боброва, А.В. Троицкий // Фармация. 1998. - № 2. - С. 38-41.

16. Баева, В.М. Изучение морфогенетической изменчивости у видов рода манжетки. / В.М. Баева, К.П. Глазунова. // Современные проблемы фармацевтической науки и практики : сб. науч. тр. М, 1999. - Т. 38, ч. 2. -С. 155-157.

17. Баева, В.М. Изучение полифенольного состава водных извлечений травы некоторых видов манжетки. / В.М. Баева, A.M. Можайский // Фармация. 2001. - № 5. - С. 25-26.

18. Баева, В.М. Сравнительное изучение химического состава представителей рода манжетки. / В.М. Баева, С.А. Сасов. // Современные аспекты изучения лекарственных растений : сб. науч. тр. М., 1995. — Т. 36. -С. 242-244.

19. Балаболкин, М.И. Состояние и перспективы борьбы с сахарным диабетом / М.И. Балаболкин // Проблемы эндокринологии. 1997. - № 5. - С. 3-9.

20. Бандюкова, В.А. Фенольные соединения и их биологические функции / В.А. Бандюкова // Некоторые итоги изучения химического состава растений Северного Кавказа : материалы 1-го Всесоюз. симпозиума по фенол, соединениям. М., 1968. - С. 95.

21. Барабой, В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений / В.А. Барабой. Киев : Наукова думка, 1976. - 260 с.

22. Барнаулов, О.Д. Введение в фитотерапию / О.Д. Барнаулов. СПб. : Лань, 1999. - 160 с.

23. Беликов, В. В. Избирательный метод анализа флавоноидов и фито химических препаратов / ВНИИХ-ТЛС / В.В. Беликов, Т.В. Точкова, Н.Т. Колесник // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств. - М., 1991. - Т. 2, ч. 2. - С. 13.

24. Берхин, Е. Б. Методы изучения действия новых химических соединений на функцию почек / Е.Б. Берхин // Хим.-фармац. журн. 1977. -№5.-С. 3-1 1.

25. Блинков, И. А. Лекарственные растения в клинике / И.А. Блиников. М., 1983.

26. Бородин, Ю.М Влияние полифенольных соединений из травы манжетки обыкновенной на морфофункциональное состояние щитовидной железы крыс при действии низких температур. / Ю.М. Бородин, В.Г.

27. Селятицкая, JI.A. Обухова. // Бюл. эксперимент, биологии и медицины. — 1999. Т. 127, № 6. - С. 697-699.

28. Бубенчикова, В.Н. Лабазник шестилепестный: аминокислотный и минеральный состав / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Сухомлинов // Фармация. -2005.-№6.-С. 9-11.

29. Буданцев, А.Л. Дикорастущие полезные растения России. / А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. СПб. : СПХФА, 2001. - 663 с.

30. Вайс, Р.Ф. Фитотерапия. / Р.Ф. Вайс, Ф. Финтельмангин. М. : Медицина, 2004. - 427 с.

31. Васильев, В.П. Аналитическая химия : учебник для студентов вузов, обучающиеся по хим.-технол. : спец. в 2 кн. / В.П. Васильев. 2 изд., перераб. и доп. - М. : Дрофа, 2002. - Кн.2 : Физико-химические методы анализа. — 384 с.

32. Вахитова, С. X. Безлекарственные методы лечения сахарного диабета / С.Х. Вахитова, К.С. Юсупов. — Уфа : Башкир, кн. изд-во, год.

33. Верещагин, В.И. Полезные растения Западной Сибири / В.И. Верещагин, К.А. Соболевская, А.И. Якутова. М. : Изд-во АН СССР, 1959. -С.163-164.

34. Виноградова, Т.А. Практическая фитотерапия / Т.А. Виноградова, Б.Н. Гажев. -М.: Эксмо-пресс, 2001. 638 с.

35. Влияние комплексного растительного средства «Дабефит» на течение экспериментального диабета / С.М. Николаева, Т.А. Ажунова, З.М. Занабадарова и др. // Раст. ресурсы. 2004. - Т. 40, № 3. - С. 101-105.

36. Влияние лютеолина и лютеолин-7-глюкозида на липидный обмен при экспериментальном атеросклерозе / Л.И. Лисевицкая Л. И. и др. //

37. Актуальные вопросы фармации. — Пятигорск. 1968. — Вып. 1. - С. 176.

38. Вопросы рационального использования и сырьевая база лекарственных растений России : учеб. пособие по фармакогнозии / В.Ф. Левинова, Г.А. Иванова, А.В. Хлебников и др.; под. ред. Г.И. Олешко. 2-е изд. (стереотипное). - Пермь.- 2006. - 172 с.

39. Всемирная организация здравоохранения / МДФ. Программа по диабету. Доклад исследовательской группы ВОЗ «Сахарный диабет» / 1211, Женева, 27, Швейцария. 1985.

40. ВФС 42-1609-86. Побеги черники обыкновенной / З.С. Петрик, В.В. Вандышев, Д.И. Баранаускайте, О.Г. Алентьева // Лекарств, растениеводство : экспресс-информ. 1988. - № 4. - С. 89-90.

41. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / под. ред. Е.Е. Сироткиной. Томск : Изд-во Томе, ун-та, 1987. - С. 138-161.

42. Гемореологические свойства экстрактов из некоторых видов растений, содержащих флавоноиды. / М.Б. Плотников, А.А. Колтунов и др. // Раст. ресурсы. 1998. - Вып.1. - С. 87-90.

43. Георгиевский В.В., Казаринов Н.А., Каррыев М.О. Фихико-химические методы анализа биологически-активных веществ растительного — происхождения В.В. Георгиевский, Н.А. Казаринов, М.О. Каррыев. -Ашхабад.: Высш. шк., 1976. С. 144-178.

44. Георгиевский, В.П. Биологически активные веществалекарственных растений. / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук М.: Наука, 1990. - 333 с.

45. Гипогликемическая активность флавоноидов / В.Н. Ковалев, Н.Ф. Комисаренко, Л.Д. Халеева и др. // Фармацевт, журн. — 1985. № 1. - С. 5155.

46. Гипогликемические свойства и биологически активные вещества цветков и плодов Tilia cordata Mill / JI.A. Ашаева, Б.Р. Григорян, Е.Н. Гриценко и др. // Раст. ресурсы. 1991. - Вып. 4. - С. 60-65.

47. Гипогликемическое действие экстракта из Galega officinalis (Fabaceae), культивируемой на Алтае / Т.В. Якимова, Т.М. Ухова, В.Н. Буркова и др. // Растит, ресурсы. 2005. - Т.41, вып. 2. - С. 134 - 138.

48. Глазунова, К.П. Манжетка обыкновенная — перспективное лекарственное растение / К.П. Глазунова, В.М. Баева // Человек и лекарство : тез. докл. V Рос. нац. конгр., Москва, 21-25 апреля 1998 г. -М., 1998. С. 45.

49. Говорухин, B.C. Флора Урала / B.C. Говорухин. — Свердловск : Свердлов, обл. изд-во, 1937. 538 с.

50. Головкин, П.А. Биологически активные вещества растительного происхождения : в 3-х томах / П.А. Головкин и др.. М. : Наука. - 2001. - Т. 1-С. 515-525.

51. Гончарова, Т.А. Энциклопедия лекарственных растений : Лечение травами / Т.А. Гончарова. М. : МСП, 1997. - Т. 1. - 560 с.

52. Городинская, В. Тайны целебных трав / В. Городинская. М. : Совет. Россия, 1989. - С. 227-228.

53. Горчаковский, П.Л. Растительный мир высокогорного Урала / П.Л. Горчаковский. М. : Наука, 1975.

54. Государственная фармакопея СССР : в 2-х т. / М-во Здравоохранения Рос. Федерации. 11-е изд., доп. и перераб. - М.: Медицина, 1987.-Т. 1.-335 с.

55. Государственная фармакопея СССР : в 2-х т. / М-во Здравоохранения Рос. Федерации. 11-е изд., доп. и перераб. — М.: Медицина, 1987. - Т. 2. - 398 с.

56. Государственный реестр лекарственных средств. Перечень уникальных номеров (индексов) лекарственных средств : справ, материалы производителей лек. средств / Фонд фармац. информ. М., 2001. - С. 206.

57. Государственный стандарт Российской Федерации. Точность (правильность прецизионность) методов и результатов измерений. ГОСТ ИСО 5725-1-2002.

58. Гравель, И. В. Региональные проблемы экологической оценки растительного сырья и фитопрепаратов на примере Алтайского края : автореф. дис. .д-ра фармац. наук. М., 2005. - 48 с.

59. Громнацкий, Н.И. Диабетология / Н.И. Громнацкий. Курск, 1998. - 228 с.

60. Губанов, И.А. Лекарственные растения / И.А. Губанов. М. : Изд-во Моск. гос. ун-та, 1983. - С. 68-70.

61. Губергриц, А.Я. Лекарственные растения Удмуртии / А.Я. Губергриц, А.В. Мишин. Ижевск : Удмурт, кн. изд-во, 1958. - С. 31-32.

62. Давыдова, В.Н. Современные технологии получения сухих экстрактов и их ассортимент / В.Н. Давыдова // Новая аптека. 2002. - № 4. -С. 64-71.

63. Демидова, И.Ю. Лечение сахарного диабета 2 типа / И.Ю. Демидова // Фарматека. 2002. - № 5. - С. 3 - 7.

64. Дерябина, Ф. И. Сведения о народных лекарственных растениях Коми-Пермяцкого национального округа / Ф.И. Дерябина. Л., 1965.

65. Дерябина, Ф. И. Фармакогностическое изучение растений народной медицины Коми-Пермяцкого национального округа / Ф.И. Дерябина. Л., 1965.

66. Дикорастущие растения и грибы в медицине и кулинарии / Д.Т. Жоголев, Л.Л. Галин, И.И. Добросердова и др.; под общ. ред. Э.А. Нечаева. М. : Воениздат, 1994. - 448 с.

67. Динамика содержания аминокислот в почках и листьях Betula pubescens, В. pendula (Betulaceae) в течение вегетационного периода./ Т.А. Шуляковская, Л.В. Ветчинникова, А.В. Репин, С.М. Шредере // Раст. ресурсы. 2007. - Т. 43, вып. 4. - С. 87-94.

68. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта / Б.А. Доспехов. М. : Агропромиздат, 1985. - 351 с.

69. Ефимов, А. С. Сахарный диабет / А.С. Ефимов, Я.Л. Германюк, С.Г. Геннес. — Киев : Здоровье, 1983. 224 с.

70. Забелина, В.Д. Витамины для больных сахарным диабетом: в чем важность проблемы / В.Д. Забелина // Provisorum. 2004. - № 1. - С. 17-20.

71. Задачи изучения новых лекарственных растений / И.И. Брехман, В.Д. Деряпа, М.Л. Гринкевич, А.С. Саратиков // Раст. ресурсы. 1983. - Т. 19, вып. 4. - С. 438-444.

72. Зайцев, Г. Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике / Г.Н. Зайцева. М. : Наука, 1984. - 423 с.

73. Запромётов, М. Н. Фенольные соединения. Распространение, метаболизм и функции в растениях. М., 1993. - 212 с.

74. Запрометов, М.Н. Основы биохимии фенольных соединений : учеб. пособие для биологических специальностей университетов / М.Н. Запрометов. М.: Высш. шк., 1974. - 214 с.

75. Захаров, В JI. Лекарственные вещества из растений и способы их производства / В.Л. Захаров, Н.И. Либизов, Х.А. Асланов. Ташкент : ФАН. - 1980. - С. 3-34.

76. Заявка на выдачу патента № 2008100346/15(000378). Способ получения средства, обладающего гипогликемической и иммуномодулирующей активностью / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, Т.А. Юшкова, В.В. Юшков. Решение от 28.11.2008.

77. Земцова, Г.Н. Флавоноиды как лекарственные препараты / Г.Н. Земцова, В.А. Бандюкова // Фармация. 1982.- № 3. - С. 68-69.

78. Зенкевич, И. Г. Метод определения содержания гликозидов в суммарных экстрактах флавоноидов / И.Г. Зенкевич, В.М. Косман, С.П. Зиновьева // Раст. ресурсы. 1997. - Т. 3, вып. 2. - С. 91.

79. Зефирова, Г. С. Лечение сахарного диабета / Г.С. Зефирова. М.,1978.

80. Зорина, Е.В. Исследования по разработке нормативной документации на траву манжетки / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, А.Б. Седова // Фармация 2009. - № 1.-С. 11-15.

81. Зорина, Е.В. Количественное определение суммы флавоноидов в траве манжетки / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, А.Б.Седова // Вест. ПГФА. -2007.-№2. -С. 234-238.

82. Зыков, А.А. Структурные изменения паренхимы и стромы сердца при инфаркте миокарда и влияние на эти процессы биофлавоноидами / А.А.

83. Зыков, В.А. Головнев // Современные проблемы фармакологии и фармации : Всерос. науч.-практ. конф., Новосибирск, 18-19 мая 2005 г. Новосибирск, 2005.-С. 122-123.

84. Ибрагимов, Ф. И. Основные средства китайской медицины / Ф.И. Ибрагимов, B.C. Ибрагимова. М., 1960.

85. Иванов, С. И. Рецепты природы : Применение лекарственных растений / С.И. Иванов. JL, 1992. - 23 с.

86. Иванова, JI. И. Технология лекарственных форм : учебник : в 2 т. / Л.И. Иванова, Р.В. Бобылев, Т.П. Грядунова. М. : Медицина, 1991. - Т. 2. -544 с.

87. Избранные лекции по фармакогнозии / под ред. Г.И. Олешко. -Пермь, 2001. С. 91-102; 165-181; 195-204.

88. Изучение гипогликемической активности флавоноидов / В.Н. Ковалев, Н.Ф. Комиссаренко, В.П. Хиля и др. // Основные направления фармации (Рига). 1984. - С. 303 - 304.

89. Изучение динамики накопления флавоноидов в цветках липы (Tilia cordata Mill.) / Л.А. Ашаева, Е.Я. Ладыгина, Н.П. Артемова и др. // Фармация. 1987. - № 6. - С. 10-13.

90. Иллюстрированный определитель растений Пермского края / С.А. Овеснов, Е.Г. Ефимик, Т.В Козьминых и др. / под ред. д-ра биол. наук А.С. Овеснова. Пермь : Кн. мир, 2007. - 743 с.

91. Испакова, Б.А. Фенольные соединения растений рода Alchemilla / Б.А. Испакова, С.Б. Рахмадиева, М.С. Ержанова // Химия природ, соединений. 1991. - № 6. - С. 247-249.

92. Исследование некоторых видов манжеток как возможного гипогликемического средства / А.Б. Седова, Е.В. Зорина, Е.В. Челпанова, Г.И. Олешко // Человек и лекарство : тез. докл. X Рос. нац. конгр., Москва, 7- 11 апр. 2003 г.-М., 2003. С. 660.

93. Исследование нового вида сырья шрота цветков ноготков / И.В. Бурцева, Г.И. Олешко, В.Ф. Левинова и др. // Фармация. - 2004. - № 4. - С. 16-18.

94. Исследование химического состава и фармакологической активности экстракта травы манжетки / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, Т.А. Юшкова // Человек и лекарство : тез. докл. XII Рос. нац. конгр., Москва, 1822 апр. 2005 г. М., 2005. - С. 755.

95. Йорданов, Д. Фитотерапия. Лечение лекарственными травами / Д. Йорданов, П. Николов, А. Бойчинов. 4-е изд. - София : Медицина и физкультура, 1976. - 349 с.

96. Кит, С. М. О сахароснижающем действии лекарственных растений / С.М. Кит, Т.Т. Орлик // Врачебное дело. 1960. - №.2 - С. 617-622.

97. Кит, С.М. Лекарственные растения в эндокринологии / С.М. Кит, И.С. Турчин // Здоровье. 1986. - №. - С. 78.

98. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина Алма-Ата : Наука, 1978. - 220 с.

99. Ковалев, В. Н. Гипогликемическая активность флавоноидов / В.Н. Ковалев, Н.Ф. Комисаренко, Л.Д. Халеева // Фармац. журн. 1985. - № 1. - С. 51-55.

100. Ковалева, Н Г. Лечение растениями / Н.Г. Ковалева. М. : Медицина, 1971. - С. 96-98.

101. Коваленко, В. Ю. Использование манжетки обыкновенной как возможного гемореологического средства / В.Ю. Коваленко, Г.И. Калинкина, Т.П. Березовская. Томск : Изд-во Сибир. гос. мед. ун-та, 1998.-е. 123.

102. Количественное определение аминокислот в пыльце (обножке) / И.В. Духанина, А.Ю. Айрапетова, Г.Д. Лазарян, Ю.К. Василенко // Хим,-фармац. журн. 2006. - Т. 40, № 2. - С. 17-18.

103. Комисаренко, Н.Ф. Антигрибковая активность некоторых природных флавоноидов, фуранохромонов, кумаринов и антрахинонов / Н.Ф. Комисаренко и др. // Раст. ресурсы. 1991. - Т. 27, вып. 1. - С. 3.

104. Копытов, В.М. Сахарный диабет миф или реальность / В.М. Копытов // Здоровая семья. - 2005 № 2 . - С. 13-16.

105. Кортиков, В.Н. Полная энциклопедия лекарственных растений / В.Н. Кортиков, А.В. Кортиков. Ростов-на-Дону : Проф-Пресс, 2002. - 799 с.

106. Косьев, П. А. Полный справочник лекарственных растений / П.А. Косьев, 2002. С. 378.

107. Крылов, Г.В. Травник / Г.В. Крылов, Н.Ф. Козакова -Новосибирск : Дет. лит., 1993. 430 с.

108. Крылов, П.Н. О народных лекарственных растениях Пермской губернии / П.Н. Крылов // Гражданское общество естественных наук при казанском университете. 1876. - Вып. 2. - С. 49.

109. Куркин, В.А. Фармакогнозия : учеб. для студентов фармац. вузов / В.А. Куркин. Самара : СамГМУ, 2004. - 1180 с.

110. Кухарский, П.С. Фитотерапия в неоперативной гинекологии при миоме матки / П.С. Кухарский, В.Ф. Корсун // Практ. фитотерапия. 1999. -№2.-С. 9-23.

111. Лавренов, В.К. 500 важнейших лекарственных растений / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова. М. : ACT, 2003. - 510 с.

112. Лагерь, Л.А. Фитотерапия / Л.А. Лагерь. Красноярск : Изд-во Краснояр. ун-та. - 1988. - 272 с.

113. Ладынина, Е.А. Лекарственные растения в медицине и в быту / Е.А. Ладынина, Р.С. Морозова. — Ставрополь : Кн. изд-во. 1989. - С. 88-89.

114. Ладынина, Е.А. Фитотерапия / Е.А. Ладынина, Р.С. Морозова. — Л. : Медицина, 1990. 304 с.

115. Ладынина, Л. А. О сахароснижающих свойствах некоторых отечественных растений. Физиология и патология эндокринной системы / Л.А. Ладынина: материалы съезда эндокринологов УССР. Харьков, 1972.

116. Лапынина, Л.А. Выделение и изучение физиологически-активных соединений галеги лекарственной, как сырья, для получения сахароснижающего препарата : автореф. дис. канд. биол. наук / Л.А. Лапынина. Харьков, 1972. - С. 15.

117. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия : учеб. пособие / под ред. Г.П. Яковлевой, К.Ф. Блиновой. СПб. : СпецЛит, 2004. - 765с.

118. Лекарственные растения Сибири для лечения сердечнососудистых заболеваний / Н.В. Казаринова, М.Н. Ломоносова, В.М. Триль и др. Новосибирск : Наука, 1991. — 240 с.

119. Лекарственные растения Центрального Черноземья / В.И. Завражнов. и др. Воронеж : Изд-во Воронеж гос. ун-та, 1977. - С. 172-173.

120. Маевский, П.Ф. Флора средней полосы Европейской части СССР / П.Ф. Маевский; под общ. ред. Б.К. Шишкина. 8 изд., испр. и доп. — М. : Гос. изд-во сельс. лит., 1964. - 880 с.

121. Макарова, Л.С., Харитонова Н.П. Влияние некоторых экологических факторов на развитие и продуктивность шиповника коричного / Л.С. Макарова, Н.П. Харитонова // Раст. ресурсы. 1974. - Т. 10, вып. 2. - С. 234-236.

122. Мальцев, Г.И. Народно-медицинские знания коми-пермяков : средства растительного происхождения / Г.И. Мальцев. Кудымкар, 2003. -23 с.

123. Матвеева, Е.П. Биологическая продуктивность лугов СССР (равнинная часть) / Е.П. Матвеева // Раст. ресурсы. 1974. - Т. 10, вып. 4. -С. 473-489.

124. Махлаш, В.П. Лекарственные растения в народной медицине / В.П. Махлаш М. : Шва России, 1992. - С. 216.

125. Машковский, М. Д. Лекарственные средства : пособие для врачей : в 2-х ч. / М.Д. Машковский. 12-е изд. перераб. и доп. - М. : Медицина, 1992.-Ч. 1.-736 с.;Ч. 2.-е.

126. Методика бумажной хроматографии Сахаров, органических и аминокислот из растений. М. : Изд-во АН СССР, 1962. - 86 с.

127. Методика определения запасов лекарственных растений / А.И. Шретер, И.Л. Крылова, Н.А. Борисова и др.. М., 1986. - 52 с.

128. Методика определения запасов лекарственных растений. М., 1986.-52 с.

129. Методические указания по химическому анализу лекарственного растительного сырья / под ред. Г.И. Олешко. Пермь, 1979. - 115 с.

130. Методические указания по химическому анализу JIPC / Г.И. Олешко, Н.П. Харитонова, З.Ф. Сюзева и др.. Пермь : Изд-во Перм. гос. фармац. ин-та, 1979.

131. Методы исследования природных флавоноидов : метод, рекомендации для студентов научного студенческого общества / сост. A. JI. Шинкоренко, В.А. Бандюкова, A.JT. Казанов. Пятигорск : Минводы, 1977. — 70 с.

132. Методы клинических лабораторных исследований : учебник / В.С.Камышников, О.А. Волотовская, А.Б. Ходюкова и др.; под ред. B.C. Камышева 2-е изд., перераб. и доп. - Мн. : Белорус, наука, 2002. - 775 с.

133. Микроэлементы: краткая клиническая энциклопедия / И. JI. Блинков, А. К. Стародубцев, С. Ш. Сулейманов, Е.В. Ших. Хабаровск : ИПКСЗ, 2004.-210 с.

134. Минаева, В.Г. Лекарственные растения Сибири. 5-е изд. — Новосибирск : Наука, 1991. -430 с.

135. Минаева, В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование / В.Г. Минаева; под ред. М.Н. Запрометова. -Новосибирск : Наука, 1978. 257 с.

136. Миркин, Б.М. Словарь понятий и терминов современной фитоценологии / Б.М. Миркин, Г.С. Розенберг, Л.Г. Наумова. М. : Наука, 1989.-223 с.

137. Мишин, А.В. Зеленая аптека / А.В. Мишин. Ижевск : Удмуртия, 1978.-232 с.

138. Молчанов, Г.И. Интенсивная обработка лекарственного сырья / Г.И. Молчанов. М. : Медицина, 1981. - 208 с.

139. Мордовская, Г.Я. Лекарственные растения Среднего Урала / Г.Я. Мордовская, Л.Ф. Афанасьев. Свердловск : Среднеурал. кн. изд-во, 1973. -109 с.

140. Морозов, В.Г. Тималин и его иммунобиологическая активность / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // Иммунология гормонов тимуса / под ред. Ю.А.Гриневича, В.Ф.Чеботарева.-Киев, 1989.-С. 125-142.

141. Муравьёва, Т.И. Роль эссенциальных микроэлементов в сохранении здоровья / Т.И. Муравьева. — М. : Изд-во Рос. ун-та дружбы народов, 2006. С. 357-359.

142. Николайчук, JI. В. О растительных гипогликемизатах / JI.B. Николайчук, Е.С. Николайчук // Врачеб. дело. 1971. - № 6 - С. 103-106.

143. Новые сборы из лекарственного растительного сырья / Т.И. Плеханова, Н.В. Кудашкина, К.А. Пупыкина и др. // Новая аптека. Дир. аптеки. 2003. - № 11. - С. 75-76.

144. Ноздрюхина, JI.P. Нарушение микроэлементного обмена и пути его коррекции / JI.P Ноздрюхина, Н.И. Гринкевич. М.: Наука, 1980. - 280 с.

145. Носаль, М.А. Лекарственные растения в народной медицине / М.А. Носаль, И.М. Носаль. М. : Внешиберика, 1991. - С. 24-26.

146. Овеснов, С.А. Конспект флоры Пермской области / С.А. Овеснов. Пермь : Изд-во Перм. гос. ун-та, 1997. - 252 с.

147. Оценка безопасности лекарственного растительного сырья в БАДах и фитопрепаратах / В.А. Тутельян, И.А. Самылина, С.А. Хотимченко и др. // Фармация. 2009. - № 1. - С. 3-5.

148. Павлов, М. Энциклопедия лекарственных растений / М. Павлов -М. : Мир, 1998.-С. 467.

149. Пастушенков, А.В. Лекарственные растения / А.В. Пастушенков, В.Л. Пастушенков Л. : Лениздат, 1990. - С. 158-159.

150. Паушева, З.П. Практикум по цитологии растений / З.П. Паушева. -М., 1988.-270 с.

151. Перспективы создания сухих экстрактов / И.А. Самылина и др. // Фармация. 2006. - № 2. - С. 43-46.

152. Петридес, П. Сахарный диабет / П. Петридес, JL Вайс, Г. Леффлер. М. - 1980.

153. Петриченко, В.М. Определение суммы флавоноидов в траве марьянника лугового / В.М. Петриченко, Е.Е. Галишевская // Фармация. -2004. -№ 1.-С. 24-25.

154. Петухова, О.В. Фармакогностическое изучение листьев земляники лесной и садовой региона Урала : дис. канд. фармац. наук / О.В. Петухова. -Пермь, 2003.- 154 с.

155. Плотников, М.Б. Теоретические и практические аспекты изучения лекарственных растений / М.Б. Плотников, А.А. Колтунов Томск, 1996. - С. 130-131.

156. Плохинский, Н.А. Биометрия / Н.А. Плохинский. М. : Изд-во Моск. гос. ун-та, 1970. - 367 с.

157. Пономарев, В.Д. Экстрагирование лекарственного сырья / В.Д. Пономарев. М.: Медицина, 1976. - 202 с.

158. Пономарева, М. Н. Изучение растительных ресурсов и технология фитохимических препаратов / М.Н. Пономарева. Пермь, 1975.

159. Попов, Д. М. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья / Д.М. Попов // Фармац. вест. 1995. - N 16 - С. 10.

160. Правила сбора и сушки лекарственных растений : сб. инструкций. -М. : Медицина, 1985. -С. 106-110.

161. Приоритеты фармацевтической науки и практики : материалы Заочной международ, конф., Москва, 31 октября 2005 г.

162. Прокопенко, А.П. Новые технологические приемы в производстве препаратов растительного происхождения. Исследования по изысканию лекарственных средств природного происхождения / А.П. Прокопенко //

163. Тезисы докладов Всесоюзной научной конференции. Л., 1981. - С. 34, 37.

164. Пустырский, И.Н. Энциклопедия лекарственных растений / И.Н. Путырский, В.Н. Прохоров. М. : Кн. дом, 2003. — 656 с.

165. Работнов, Т.А. Фитоценология / Т.А. Работнов. 2-е изд. - М. : Изд-во Моск. гос. ун-та, 1983. - 296 с.

166. Растения для нас : справочник / К.Ф. Блинова, В.В. Вандышев, М.Н. Комарова и др.; под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. СПб. : Учеб. кн., 1996.-С. 353-358.

167. Растения, применяемые при сахарном диабете // Раст. ресурсы. -1986.-Т. 22, вып. 3.

168. Растительная биотехнология лучшие продукты из лучших растений : материалы международ, симпозиума // Раст. ресурсы. - 2002. - Т. 38, вып. 1.-С. 124-127.

169. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения семейства Hydrangeaceae-Haloragaceae, их химический состав, использование / под ред. П.Д. Соколова. JI. : Наука, 1987. - С. 22.

170. Рациональная фармакотерапия : справочник терапевта : руководство для практ. врачей / Л.И.Дворецкий, П.Р. Абакарова,

171. Н.С.Алексеева, Е.К. Баранская и др.; ред.-сост. Л.И. Дворецкий. — М. : Литтерра, 2007. 976 с.

172. Ресурсоведение дикорастущих лекарственных растений / Г.И. Олешко, М.А. Просовский, В.Ф. Левинова, А.А. Донцов. Пермь, 1990. - 34 с.

173. Розенцвейг, П.Э. Технология лекарств и галеновых препаратов / П.Э. Розенцвейг, Ю.К. Сандер. Л. : Медицина, 1967. - С. 609-640.

174. Рубцов, В.Г. Зеленая аптека / В.Г. Рубцов. Л. : Лениздат, 1984. -С. 114-116; 118-119.

175. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М. - 2000. - 398 с.

176. Сандер, Ю.К. Технология и оборудование галеновых производств / Ю.К. Сандер. Л. : Медгиз, 1956. - С. 159-174.

177. Седова, А.Б. Фармакотехнологическое исследование сбора «Фармитин» / А.Б. Седова, М.А. Чиркова // Фармация в XXI веке: инновации и традиции: Санкт-Петербург, 7-8 апр. 1999 г. СПХФА, 1999. - С. 199.

178. Седова, А.Б. Исследования некоторых растений рода фасоль в качестве источников биологически активных веществ : автореф. дис. канд. фармац. наук / А.Б. Седова. Харьков, 1989. - С. 5.

179. Седова, А.Б. Лекарственные растения в лечении сахарного диабетамонография / А.Б. Седова, Е.В. Зорина; под ред. Г.И. Олешко. Пермь : Изд-во Перм. гос. фармац. акад., 2006. - 227 с.

180. Седова, А.Б. Фармакогностическое исследование противодиабетического сбора «Мираллин» / А.Б. Седова, Ю.В. Шестакова // Современные проблемы фармацевтической науки и практики : науч. тр. — М., 1999. С. 276-279.

181. Синтез и биологическая активность солей гетероциклических аминов и гетериламидов на основе 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот / Н.А. Пулина, В.В. Залесов, В.В. Юшков и др. // Вопр. биолог., мед. и фармац. химии. 2008. - № 2. - С. 37-40.

182. Совершенствование анализа и технологии настоев и отваров, содержащих флавоноиды / О.Г. Аносов, М.В. Колпакова, Н.И. Минникова и др. // Фармация. -1994. № 1. - С. 30-33.

183. Современные аспекты изучения лекарственных растений : сб. науч. тр. М.,1995. - Т. 34. - С. 242-244.

184. Современная фитотерапия / Под ред. член-корр. проф. д-ра В. Петкова. София: Медицина и физкультура, 1988. — 504 с.

185. Соколов, С.Я. Фитотерапия и фитофармакология : руководство для врачей / С.Я. Соколов. М. : Мед. информ. агентство, 2000. - 976 с.

186. Сокольская, Т.А. Методы стандартизации сухих экстрактов / Т.А. Сокольская, С.А. Пинеев, В.Н. Давыдова // Новая аптека. 2002. - № 3. - С. 64-66.

187. Сорокина, А.А. Фитотерапия сахарного диабета у детей / А.А. Сорокина, В.П. Кукес, А.К. Углицких // Мед. науч. и учеб.-метод. журн. -2001.-№4.-С. 60-65.

188. Сорокина, Е.В. Противодиабетическая активность сухого экстракта гимнемы лесной : автореф. дис. .канд. биолог, наук. / Е.В. Сорокина. Волгоград, 2008. - 27 с.

189. Средства для лечения сахарного диабета. Зарегистрированные патенты // Ремедиум. 2003. - № 10. - С. 71.

190. Стандарты качества лекарственных средств : отраслевой стандарт от 01.11.2001 № 91500.05.001.00 // КонсультантПлюс : Правовые акты по здравоохранению. 2005. - (Технология 3000, сер. 100).

191. Станков, С.С. Определитель высших растений Европейской части СССР / С.С. Станков, В.И. Талиев. -М. : Совет, наука, 1953. С. 381-391.

192. Сырокомская, И.В. Изменение состава, структуры и продукции фитомассы злаково- разнотравно- манжеткового сообщества под влиянием минеральных удобрений / И.В. Сырокомская // Раст. ресурсы. 1974. - Т. 10, вып. 3. - С. 337-349.

193. Теслов, С.В. О катехинах некоторых розоцветных Пермской области : науч. тр. / С.В. Теслов, Л.С. Макарова. Пермь : Перм. кн. изд-во, 1969. Вып. 3.-С. 217-223.

194. Технология и стандартизация лекарств / под ред. акад. И.А. Украины, В.П. Георгиевского и проф. Ф.А. Конева. Харьков : Ригер, 1996. -428 с.

195. Технология лекарственных форм : учебник : в 2-х т. / Р.В. Бобылев, Г.П. Грядунова, Л.И. Иванова и др.; под ред. Л.И. Ивановой. М. : Медицина, 1991. - Т. 2. - С. 352-410.

196. Турищев, С.Н. Фитотерапия / С.Н. Турищев. М. : Академия, 2003. - 240 с.

197. Фармакогностическое изучение видов рода Alchemilla / Е.В.Зорина, А.Б.Седова, Г.И.Олешко С.Д., Марченко // Человек и лекарство : тез. докл. XII Рос. нац. конгр., Москва, 18-22 апр. 2005 г. М., 2005. - С. 755.

198. Федоров, В.Я. Лекарственные растения Среднего Урала / В.Я. Федоров. Верх. Пышма : Вега, 1993. - 192 с.

199. Фенольные соединения Alchemilla tianschanica / Б. А. Мскакова, С. Б. Рахмудиева и др. // Химия природ, соединений. 1991. - № 6 - С. 551-854.

200. Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений : материалы международ, совещания, посвящ. памяти В.Г. Минаевой. Новосибирск, 1998. - 172 с.

201. Хайс, И.Н. Хроматография на бумаге / И.Н. Хайс. М. : Изд-во иностр. лит., 1962. — С. 134.

202. Халецкий, A.M. Исследование листьев черники / A.M. Халецкий, Е.К. Киселёва // Аптечное дело. 1952. - №1. - С. 52.

203. Харборн, Д.Б. Биохимия фенольных соединений / Д.Б. Харборн. — М. :Мир, 1968.-572 с.

204. Химический анализ биологически активных веществ лекарственного растительного сырья и продуктов животного происхождения / М.Д. Решетникова, В.Ф. Левинова, А.В. Хлебников и др.. Пермь, 2004. -335 с.

205. Химический анализ лекарственных растений : учеб. пособие для фармац. вузов / Е. Ладынина, Л.Н. Сафронович, В.Э. Отряшенкова и др.; под ред. Н.И. Гринкевич. М.: Высш. шк., 1983. - 176 с.

206. Хроматография на бумаге / под ред. И. Н. Хайса, К. Мацека. М. : Изд-во иностр. лит., 1962. - С. 134.

207. Чериоярова, Н.Н. О влиянии женьшеня на уровень сахара в крови у здоровых людей и у больных сахарным диабетом / Н.Н. Черноярова, О.М. Налётова // Материалы к изучению Жень-шеня и лимонника. JL, 1958-вып. 3-С. 88-92.

208. Челпанова, Е.В. Урожайность корневищ и фитоценотическая характеристика Poligonum bistorta L. в заповеднике «бесеги» (средний Урал) / Е.В. Челпанова //Раст. ресурсы. 2008. - Т. 39, вып. 3. - С. 37-40.

209. Шенников, А.П. Луговая растительность СССР / А.П. Шенников // Растительность СССР. 1938 . - Т. 1. - С. 438-506.

210. Широкова, И. В лабиринте растительных препаратов / И. Широкова, Л. Коковин // Рос. аптеки. 2002. - № 5. - С. 36-40.

211. Шлякова, Е. В. Определитель сорно-полевых растений нечерноземной зоны / Е.В. Шлякова. Л. : Колос, 1982. — 208 с.

212. Шретер, И. Зеленая аптека / И. Шретер; Всерос. НИИ лекарственных и аромат, растений. -М., 1992.

213. Элементный состав Pentaphylloides fruticosa (L.) О. Schwarz., произрастающего в горном Алтае / Е.П. Храмова, К.П. Куценогий, Н.М. Шкель и др. // Растит, ресурсы. 2000. - Т. 36, вып. 4 . — С. 59 - 67.

214. Энциклопедия практической фитотерапии / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова, В.Д. Онипко, Ю.В. Лавренов. Д. : Сталкер, 2001. - 592 с.

215. Юшков, В.В. Фармакология иммунокорректоров / В.В. Юшков, Т.А. Юшкова, А.С. Ларионов. Екатеринбург : УЦМФИ, 2005. - 164 с.

216. Юшкова, Т.А. Биологические свойства смазочно-охлаждающих жидкостей / Т.А. Юшкова, В.В. Юшков, Т.А. Кошкина. Пермь : Изд-во Перм. гос. ун-та, 2006. - 145 с.

217. Ярцева, И.Б. Количественное определение суммы флавоноидов в траве одуванчика лекарственного / И.Б. Ярцева, В.А. Куркин // Фармация. — 1996.-№4.-С. 24-27.

218. Adriansen Y.J., Scand. J. Immunol.// Adriansen Y.J., Osman C., Dogen van M. 1990. - Vol. 32. - P. 687-694.

219. Augusti, K.T. Hypoglycaemic action of bengalenoside, a glucoside isolated from Ficus bengalensis L. in normal and alloxan diabetic rabbits / K.T. Augusti // India J. Physiol. And Pharmacol. 1975. - Vol. 19, № 4. - P. 218 -220.

220. Europian Pharmacopeia 2005. - 5 Sedition.

221. Iwu, M.M. Anti-diabetic properties of Bredilia ferruginea leaves / M.M. Iwu // Planta med. 1980. - Vol. 39, № 3. - P. 247.

222. Marsch, C.A. Quercetin glucosiduronic acid from French bean / C.A. Marsch // Nature. 1955. - Vol. 176, № 1. - P. 176-177.(кверцитин из боба)

223. Matsuura, V. Pectic polysaccharides in cotyledons of kidney beans / V. Matsuura, C. Hatanaca, J. Orawa // Ber. Chart. Inst. Landwirt. Biol. Okayama Univ. 1974. - Bd. 16. - № 2. - S. 5764-5765. (полисахариды фасоли)

224. Pharmacopee Francaise. IX Edition. - 5-e suppl. - Juillet, 1979.

225. Shani (Michkinsky) Y., Yolt Schmied A Arch. Int. pfarmacidyn et ther.- 1974.-210, 1.-27-37.

226. The insulinotropic activity of Yumnema Sylvestre R. Br. in Indian medical herb used in controlling diabetes mellitus / K. Shanmuqasundaram, Paunerselvamc, P. Samudram, E. Shanmugasundaram // Pharmacol. Res. Commun. 1981. - № 10,5. - 475-486.

227. Villar, A. Stady of antihyperglycemic activity from Centaurea seridis, var. maritime / A. Villar // Planta med. 1980. - Vol. 39, № 3. - P. 248.