Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Экспрессия антигенов класса II главного комплекса гистосовместимости на клетках крови при хронических заболеваниях легких

министерство здравоохранения российской федерации институт иммунологии

На правах рукописи

Медведева марина Ивановна

экспрессия антигенов класса ii главного комплекса гистосовместимости на клетках крови при хронических заболеваниях легких

l4.oo.36 - аллергология и иммунология

автореферат диссертэнии на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1992

Работа выполнена в Институте инчуновогии Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители: доктор недииинских наук, профессор н. в. Недунипын доктор недииинских наук, профессор А. и. Борисова

Официальные оппоненты: доктор биологических наук л. А. Захарова доктор недииинских наук, профессор а. А. Ярилин

Ведущее учреждение: Российский Государственный

на заседании специализированного совета Л 074. 09. 01 при Институте иннунологии Нинздрава РФ по адресу: 115478. г. Носква. Каширское шоссе. 24. корп. 2.

С диссертацией ножно ознакомиться в библиотеке Института иммунологии Нинздрава РФ.

Автореферат разослан "_____"____________1992 г.

Недицинский Университет

зашита диссертации состоится

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических на у

А. в. колобсч

общая характеристика работы

Актуальность тены. одной из актуальных,проблем современной иммунологии является.проблема роли генов главного комплекса гис-тосовнестиности <ГКР) класса II и их продуктов в функпионированни иммунной систены и поддержании иммунологического гомеостаза. молекулы класса II участвуют в распознавании собственных и чужерод-родннх антигенов, обеспечивают нежклеточное взаимодействие на всех этапах развития иммунного ответа (Unarmе Б. R.. 198S; Allen P. н. et. al.. 1984.1987; Grey Н. н. et. ai., 1985). Они выполняют также широкую биологическую Функцию, инеюшую значение для норнальной жизнедеятельности организма и играют определенную роль в развитии патологии (Недунииын н. В.. Алексеев д п. . 1987; Thorsby Е. et. al. . 1985).

Одной из важных сторон э.той проблены является эндогенная регуляция синтеза и экспрессии молекул класса II. В настоящее время установлено, что эти процессы находятся под контролен лимФоки-нов. среди которых существенную роль отводят интерферону <Вес-HerS.,1985; Rhodes J. et. a 1. . 1986; Basham Т. et. al.. 1987).

Изучение экспрессии антигенов класса II ча иммуноконпетент-яых клетках при различных заболеваниях представляет большой интерес. так как уровень экспрессии таких антигенов на поверхностных мембранах клеток во многом определяет их функциональную активность (Greaves н. F..et. al,. 1979: Yem А. V.. parmely М- J., 1981) и состояние иммунной систены при различных видах патологии (Коненков В. и. с соает. .1986; shiranawa F. et. al., 1985; mzutam H. et, al., 1987; Razinddln S. К. et. al. . 1988).

заболевания легких занимают одно из ведущих мест по распространенности среди хронических заболеваний и связаны с наибольшей

с

утратой трудоспособности. Однако патогенез данных заболевания остается во многом неизученным. Установлено, что нарушение иммунологических механизмов завиты у больных является одной из суиествен-ных причин формирования хронических заболевании легких (ХЗЛ) <чучадин а. г. с соавт., 1964; Борисова а. м., 1905). Изучение иннун-ного статуса во показателям 1 и II уровня не раскрывает всех механизмов патогенеза заболевания. Это создает предпосылки для более углубленного из ученияиямурологических механизмов, лехавих в основе развития данной патологии.

Определение экспрессии антигенов класса II на клетках периферической крови при ХЗЛ. а также коррекция выявленных нарушения с помсвьо медицинских препаратов интерферона имеет больаое теоретическое и практическое значение, это важно как для понимания механизмов развития патологического процесса, так и для дифференцированного подхода к терапии указанных заболеваний. Кроме того, показатель экспрессии антигенов класса II мохет быть использован в качестве дополнительного критерия в опенке иннунного статуса в нор' и при патологии.

Дель исследования. Выяснить особенности экспрессии антигенов класса II ГКГ на клетках периферической крови больных хз/1 и изучить за- ->нонеРности изменения этой экспрессии у больных в зависимости от фазы заболевания в процессе иммунокорригирловей терапии препаратом лейкинФерона.

Задачи исследования'. 1. Изучить экспрессии антигенов класса II ГКГ на различных фракциях клеток периферической крови больных ХЗЛ и здоровых яиц. г. Выявить особенности изменения экспрессии молекул класса II на клетках крови больных хзл в зависимости от клинических проявления заболевания н иммунологических показателей I и II уровня, з изучить динамику экспрессии антигенов класса ц на клетках

крови больных ХЗЛ в результате имнунокорригирушея терапии, в частности препаратом леякинФерона. для опенки эффективности применения данного препарата.

4. определить чувствительность клеток крови больных хзл к стану лируюшену экспрессию антигенов класса II действию медицинских препаратов интерферона в условиях in vitro.

5. Изучить показатели интерферонового статуса больных хзл и зависимость изиенения экспрессии нолекул класса И на клетках периферической крови от уровня эндогенного интерферона.

Научная новизна.

впервые с поношыо моноклональных антител ико-i изучена экспрессия антигенов класса II на клетках крови больных хзл. Установлена определенная закономерность изменения показателей экспрессии молекул класса II при данной патологии посравнению с аналогичными показателями доноров. Показано снижение числа клеток, несущих изучаемые антигены во фракяиях мононуклеаров и монопитов и повышение их во фракпии Т-лимфоцитов. Значения плотности экспрессии во всех изучаемых фракциях клеток у больных ХЗЛ в большинстве случаев превыаали показатели доноров.

впервые установлена зависимость экспрессии молекул класса II от клинических проявлений-заболевания, в том числе от Фазы болезни. Показало, что снижение числа клеток, экспрессируюпшх антигены класса II. одновременно во фракяиях моноцитов и т-лимфоиитов у больных ХЗЛ свидетельствует о наиболее тяжелом течение процесса и малой эффективности проводимой терапии, что соответствует Фазе обострения процесса. В Фазе рениссии указанные показатели характеризуют нестойкую относительную ремиссию с возможным последующим разЕгитиен обострения заболевания.

впервые в группе вольных хзл изучена экспрессия hla-DR. -DP. -ik} антигенов. .Показано изменение экспрессии'продуктов генов sees

трех локгсов HLA г больных • разные «азы заболевших

Впервые изучена динамика экспрессии антигенов класса II на клетках кровя больных ХЗЛ. получавши курс лечения лейкинфероном. установлен корригиргвакй эффект препарата на экспрессн» молекул класса II ва мембранах моношггов я Т-яимфо гитов крови.

Впервые проведена опенка отвечаемости клеток крови больных ХЗЛ на стимулиргавее экспрессию молекул класса II действие медицинских препаратов интерферона в условиях m vitro с целью воэноа ности прогнозирования эффективности использования лейкинферона в :градии ХЗД Показано, что клинический эффект от применения данного препарата не зависел от показателей тестов in vitro. « практическая значимость работы.

В работе дана характеристика экспрессии антигенов класса21 на иммуиокомпетентных клетках периферической крови больных ХЗЛ.

показано прогностическое значение одновременного снижения числа монопитов и Т-лииФошггов. экспрессирямвих антигены класса П-в Фазе обострения указывающего на тяхелое течение обострения а к фазе ремиссии являвшееся предвестником обострения.

Терапия лейкинфероном нохет быть использована как иммуномо-дглиртойее средство н как способ коррекции экспрессии антигенов класса :i на иннунокоипетентных клетках крови при ХЗЛ

определение экспрессии антигенов класса II на клетках периферической крови может быть использовано как дополнительный пар; метр в оценке иммунного статуса при ХЗЛ и иохет быть реконендов. но для использования в научных лабораториях и клинике в качеств, критерия" оценки тяжести заболевания и выбора целенаправленной т радии.

1?ояожергсЕ. выяосииые на зашггу. 1. с помовьв ноноклоиальных антител ико-l я HLA-D8. -DP. -DO г больных ХЗЛ установлено изменение числа клеток крови, веслих а

тнгены класса II и плотности экспрессии этих антигенов на поверхностных мембранах клеток по сравнению с аналогичными показателями доноров.

2. Выявленные изменения экспрессии антигенов класса II зависят 01 Фаза процесса и клинических проявления заболевания.

3. на Фоне положительного клинического эффекта лейкинферон оказывает корригируюшее влияние на показатели экспрессии молекул класса ii на клетках крови при хзл.

4. отвечаемость клеток крови больных хзл на стимулирующее экспрессию антигенов класса II действие медицинских препаратов интерферона снижена.

5. Показатели интерферонового статуса у больных ХЗЛ изменены — уровень эндогенного интерферона повышен, способность лейкоцитов продуцировать интерферон в ответ на действие индуктора снижена.

Апробация работы, основные положения работы доложены на I Всесоюзном конгрессе по болезням органов дыхания (Киев, 1990 г.), на международном симпозиуме "Система мононуклеарных Фагоцитов в норме и при патологии' (Новосибирск. 1990 г. ), на конференциях молодых ученых института иннунологии Минздрава РФ (Москва. 1969. 1990 гг. ). на нежлабораторной конференции института иннунологии.

Диссертация апробировава на заседании секции Ученого совета Института имнунологии Нинэдрава РФ (Москва. 1991 г/).

публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ: журнальных статей - 1. статей в сборник - 1. тезисов - б.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы. главы, посвяшенной описанию материала и методов исследования. У глав собственных исследований, обсуждения и выводов. Указатель литературы включает источник, в тон числе^?-^отечественных авторов и /^¿зарубежных, диссертация иллюстрирована

/ рис гиками в Л^табшшаии.

содержание работы

материалы и методы исследования.

исследована экспрессия антигенов класса II гкг на клетках периферической крови 96 больных хз/1 (39 мужчин и 57 женщин). находившихся на стационарном лечении в клинике института иммунологии. в Фазе обострения обследовано 5" человек, в Фазе ремиссии -37. наибольшее число больных находилось в трудоспособной возрасте от 20 до 50 дет. средняя продолжительность заболевания составила 20 лет.

В Фазе обострения среди исследованных больных хроническим бронхитом (хб) I стадии 13 человек имели изолировалиус форму хб. у в больных имело несто сочетание хб и хронической пневмонии (хп). Среди больных хб II стадии го человек имели только хб. у 13 было сочетание хб и хп. V всех 5 больных с хб III стадии имелось сочетание хб и XII. в Фазе ремиссии у 26 больных имел место хб I и II степени тяжести, у 11 - сочетание хб н хп.

Болыжнство больных хз/1 имели сопутствующие заболевания, среди которых наиболее часто встречались заболевания /ЮР-органов и желудочно-юдаечиого тракта, в т. ч. дисбактериоз кишечника. Основными осложнениями г больных ХЗЛ были: эмфизема легких, диффузный пиевиосклероз. хроническое легочное сердце, бронхоэктазы. Фиброз, трахеебронхиальная дискинезня. Микробная Флора была в основном представлена ассоциаций г-4 видов микробов: стрептококка зеленящего, гноеродного, пневмонии, золотистого стафилококка, неяссерин. реже - монокультурой.

В динамике обследовано 43 человека, экспрессия HLA-DR. -DP. -Iкз антигенов исследована г 21 больного ХЗЛ 26 больных наряду с

традиционной терапией получали препарат летсинферона внутримышечно по »0.ООО ME через день в течение 5 дней. Интерфероновый статус исследовав г 32 больных хзл.

Контролем служила группа 40 здоровых доноров из отделения ii-реяивания крови ВОНИ (г.Москва).

В работе использованы препараты интерферона: 1) лейкинФерон — препарат а-интерферона с противовирусной активностью ю. ООО НЕ/мл. изготовленный в НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи (г. Москва), 2) а-интерферон нативный для интраназального применения с противовирусной активностью 320 ед/мл (Научно-производственное объединение "Имнунопре-парат". г.Уфа).

Ноноклональные антитела НКО-1. направленные к нономорфкым детеркинантан антигенов класса II пег (Предприятие по производству бактерийных препаратов нииэм. г. Горький). Ноноклональные антитела HLA-DR. -DP, -DO (фирны "Becton DlCKlnson". СНА).

в работе использовали клетки периферической крови человека, фракпию мононуклеаров получали из гепаринизированноя крови (25 ЕД гепарина на 1 мл крови) путем центрифугирования в градиенте плотности Фиколла-верограФина <d= i ■ 07т г/сн5). нонопиты выделяли на пластиковых чашках, предварительно обработанных ЭТС. как фракцию прилипающих к пластику мононуклеаров при инкубации клеточной взвеси в течение 1 ч при 37* с в атносфере 5"/. С02. Йосле отделения монопитов из неприлипаюших к пластику клеток выделяли фракцию, обогашенную Т-лимфоцитами, методом 'panning". Фракция клеток, не прилипающая к пластику, покрытону антителами против Is человека, содержала преимущественно T-линФопита Тестирование чистоты выделенной фракции проводили с помощью непряной иммунофлуоресценпии. с использованием ноноклояаяьных антител ОКТЗ и в реакции Е-розет-кообразования.

Реакцию непрямой инкуноФлуоресценчки проводили с применени-

ем нон окл овальных антител ИКО-1 или hla-DR. -DP. -dq. взвесь клеток (конпентрапия 4-5x10*6 нлн/нл) инкубировали в 96-дуночных планшетах в течение 49-60 мняут при 4*С с ранее подобранными дозами препарата моноклональных антител. После отмывания клетки вновь инкубировали с препаратом FlTC-нечегошх Flab'>г-ФРагментов UG кролика, специфичных к I«G мыши, при 4'С в течение 45-60 минут. Затем клетки Фиксировали 1* раствором параФормадьдегида в течение 15 минут при комнатной температуре, и хранили в темноте при 4'С не более 5-7 дней. Результаты опытов учитывали с поношью п. сточной оитометрии на приборе "Epics с-. Экспрессию антигенов класса II опенивалн по двум показателям: числу клеток, несущих изучаемые антигены, и плотности экспрессии молекул класса II на поверхностных ненбранах клеток, оцениваемой по интенсивности Флуоресценции.

Стимулирующий экспрессию антигенов класса II эффект действия препаратов интерферона in vitro оценивали после инкубашш клеток с препаратами интерферона, в опытных образцах взвесь клеток 13-4)хю*б кл/мл инкубировали в течение 46 часов в среде для культивирования (RPMI-1640. 10* этс. г юн - L-глутамина. 5хю"-5Н 2-неркаптоэтанола, 5нМ HEPES-буфера. loo ЕД/нл пенициллина и 100 мкг/мл грептомишша) с добавлением препаратов интерферона в дозе 100 ед/ил для а-интерферона и 100 или 300 НЕ/мл для лейкинферо на. Контролем служили клетки, инкубированные в аналогичных условиях в среде без интерферона.

Эффект действия препаратов интерферона оценивали по величине индекса стимуляции <ис> экспрессии антигенов класса II по от-нонению к контролю. ИС1 расчитывали по числу клеток, несувих антигены класса II. НС2 - по плотности экспрессии.

ИнтерФероновыя статус оцесгчали по двум показателям: титрам эндогенного а-интерферона в плазме крови и способности лейкоцитов

s

проаудировать а-интерферон в ответ на действие индуктора - вируса болезни Ньюкасла, .

Статистическая обработка данных проводилась на компьютере типа ibm pc/xt. с использованием прогрэнны "statgraph" фирмы

Microsoft v.г.t. достоверность уровня различия сравниваемых вели»

чин оценивали с понотию t - критерия Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение.

выявлена значительная вариабельность показателей числа клеток. экспрессируюших антигены класса II и плотности экспрессии, изучаеных антигенов на различных сублопуляпиях клеток крови больных X3/L

Установлено, что в 41-50* случаев количество клеток, несущих антигены класса II. во фракциях нононуклеаров и монопитов крови больных хз/1 достоверно снижено по сравнению с аналогичными показателями доноров и составило в этих группах больных 5. б*о. 7Х и 18. 3H. 4Z соответственно, во фракции Т-лииФопитов в 70/ случаев ванный показатель достоверно превышал аналогичное значение доноров и составил 5. 6i0. зх (табл. 1).

Установлено, что в отличие от распредел ния количества кле-гок. экспрессируюших молекулы класса II. в большинстве случаев (42-58*> плотность экспрессии на поверхностных ненбранах изучае-<ых фракций клеток составила значения достоверно превышающие ана-иогичные показатели доноров (табл. 2).

Возможно значительная вариабельность исследуемых показателей у больных ХЗ/1 обусловлена разнообразием клинических прошений заболевания, данную группу больных составили липа с сроническин бронхитом, а также с сочетанным проявлением хрони-(еского бронхита и хронической пневмонии. Больные отличались по гтрпени активности, тяжести течения заболевания, длительности ¡рунического процесса и ассоциацией

Таблица 1

Количество клеток крови, экспрессирлоших антигены класса II» в группе больных хзл и доноров

Иссле- Уровень нононуклеары ноношггы Т-лимфоциты

дуемые значе-

группы ния число клеток, несуща антигены класса II (в *>

частота наблюдения (в

ХЭЛ высокие 23. 5" »9. 211. 9»" 5. 6±0. 3»«

1т 70

средние 12. »10. 4 29. 9*1. 9 2. 2*0. 1

33 25 23

низкие 5. 6*0. ?«• 16. 3*1. 1. 22.0. 1

50 «1 7

Доноры 11. но. б 31. 612. 9 2. 210. 2

Примечание: уровень достоверности различия между больными ХЗЛ и донорами (р<о. 01). никробной флоры. V всех больных течение основного заболевания было отягошено сопутствующими заболеваниями, обусловленными очагами хронической инфекции, таким образом, исследуемая группа больных хзл характеризовалась неоднородностью и неоднотипностью течения патологического процесса.

Ножно предположить, что причиной выявленного снижения числ; клеток, экспрессируюоих антигены класса II. являются генети^есю Факторы, вследствие которых у конкретных индивидов экспрессия м< лекуд класса II слабо выражена, либо нарушение эндогенных механизмов регуляции синтеза и экспрессии молекул класса II на кпет

Таблица 2

плотность экспрессии антигенов класса II на клетках крови больных хзл и доноров

Иссле- Уровень мононуклеары нонопиты т-лимФопиты

дуемые значения -----------\----------------------------------

группы плотность экспрессии (в усл. ед.)

частота наблюдений (в '•)

хзл высокие 64. iu. з»» Т5.7гг. б«« тз. 5*г. 5»» 58 57 42

средние 49. ПО. 8 50. 2*0.8 54. б±0. 7

33 29 38

низкие 41. 5±1. 5" 40. 8±0. 6« 42. 5il.7»»

9 14 20

Доноры 49.8*1.4 50.1*2.4 56.6*3.1

примечание: • и «« - уровень достоверности различия нежду больными хзл и донорами (p<o. 05 и р<о. 01, соответственно).

ках. либо накопление в крови факторов, ингнбируюших экспрессию tэндотоксинов, простагландина Е2. кортикостероидов). По-видимому. следствием этого является неадекватность иннунного ответа клеток на антигенный стимул, следствием или причиной чего является хрони-задня заболевания.

повышение экспрессии антигенов класса II во Фракции Т-дин-Фопитов свидетельствует о том. что в большинстве случаев при хзл Т-клетки находятся в активированном состоянии за счет антигенного стимула - бактериальных или вирусных агентов, постоянно персисти-

руюиих в организме.

В отличие от больных, в группе доноров количество клеток, экс пре с с ируксшх антигены класса II, и плотность экспрессии, во всех изучаемых фракциях клеток, ве отличались значительным разброс он и находились на уровне средних значения.

при анализе экспрессии антигенов класса ii на новоцитах и Т-линфоцитах у больных хз/i с различной степень» активности процесса установлено, что в Фазе ремиссии заболевания отмечается преимущественное увеличение числа больных с низким содержанием моноцитов, экспресснруюших антигены класса ii. в Фазе обострение напротив - с высоким их содерханиен. так. в Фазе ремиссии в 4Т< случаев эти значения составили 19. 7±1. 9* (р<0.01). а в Фазе обострения в 48* случаев - 47.1*2.(р<0. 01>. при этом интересно распределение плотности экспрессии, как в Фазе ремиссии, так и обострения процесса отмечены высокие значения этого показателя во фракции моноцитов, значения плотности экспрессии составили 71.6*1.5 (р<0. 01) и 68.2x3. 4 (р<0. 01) усл. ед. соответственно, фракция Т-лимфошггов характеризуется высоким процентом числа кд ток. несущих молекулы класса ii, у больных, находящихся как в Ф зе ремиссии, так и обострения заболевания и высокой плотностыо экспрессии у больных, находящихся в фазе обострения процесса. Так. число т-лин! опитое. несущих антигены класса ii. в фазе реп сии составило 5. 2*0. 5* (р<о. 01). в Фазе обострения - 5. 8±0. 5* <р<0.01). значения плотности экспрессии распределились следухш образом - 54. OOiО. 92 и 74. 52*3. 74 <р<0.01) усл. ед. соответствег (рис. 1). •

Сопоставление экспресс! ч с клиническими проявлениями 3"5oj вания показало, что в Фазе обострения наиболее тяжелое течени« процесса и малая эффективность проводимой терапии отнечено у б< ных со сниженным числон одновременно моноцитов и Т-линФошггов.

6)

8Вт

?0 60 50 40 30 20 10 0

ШК9»

вдакш

Йлотг ямя*

,У ¡4. «

Р«ЯЙ>« иным)

¡жт «ввил МШш

На.о-к

14 __

•йЗШ!

киши

I !«

По

Т-Пф

По

Т-Пф

Рис. 1 экспрессия антигенов класса II ГКГ на клетках крови доноров (О ) и больных ХЗЛ (Ш ) в различные 4аэы заболевания (» - р<0. 01 >.

По оси ординат: а) - число клеток, несущих антигены класса II <в б) - плотность экспрессии (в усл. ед).

экспрессируадих молекулы класса II. В эту группу воили вольные с давностью заболевания 15-20 лет. с частотой репидивирования 4-6 раз в год. Течение основного заболевания было отягощено сопутствующими заболеваниями, множественными очагами хронической инфекции и ассоциацией микробной флоры. V большинства из охарактеризованной выше группы больных имело место сочетание нескольких микробных агентов ^ от 2 до 4 видов, в большинстве случаев отмечалось сочетание золотистого стафилококка с различными видами стрег-ококка или нейссерии. Известно, что стафилококковые антигены, в частности стафилококковый энтеротоксин. в своей структуре инеют высокое сродство к нолекулан класса II и даже к отдельным эпитопам (-DR и -кз). Возможно, выявленное у данных больных снижение количества моноцитов и Т-линфопитов. несущих молекулы класса II. частично связано с блокадой рецепторов нолекул класса II стафилококковыми антигенами.

В группе больных, находящихся в фазе ремиссии, нестойкая относительная реииссия с последующим обострением процесса также отмечена у лип со сниженным числом одновременно моноцитов и т-лимфоиитов. несущих молекулы класса II. исходя из данных клинического анализа ножка заключить, что сниженный процент моноцитов и т-лииФоцитов. экспресеируших изучаеные антигены, в Фазе обострения может служить прогностическим признаком собой тяжести течения обострения, а в Фазе ремиссии - предвестником обострения.

Сопоставление экспрессии антигенов класса II с инмунологичес кими показателями I и II уровня выявило в группе лип. находящихся в Фазе обострения со сниженным числом ионопитов и Т-линФопитов, несущих нолекулы класса II. снижение пролиФератнвного ответа Т-лк Фоиитов на митогены и снижение абсолютного количества В-линФопитс

у части больных ХЗЛ нами была исследована экспрессия HLA-DR. -DP. -DQ антигенов во фракциях моноцитов и т-линфошггов. Изучение

продуктов этих яокусов. кодируемых генами ньл класса II. представляет интерес с точки зрения различной Функциональной значиности этих субъединиц в развитиии иммунного ответа.

Изучение распределения ША-Сй. -1)Р. -1X5 антигенов в группе

больных хзл выявило у большинства больных ХЭЛ снижение числа мо»

нопитов. экспресируюших изучаемые антигены, по всем трем локусам НЬА. среди Т-лимФопитов выявлено увеличение -01?< ♦) и -БР( + ) клеток. Повышение числа Т-лимфошггов установлено лишь в 1/3 случаев. У 1/3 больных было значительное (в 2. 5 раза) снижение числа -ЮЭ( + ) клеток и составила значения 0. 3*0. ул (табл. 3 ).

Таблица 3

экспрессия НЬА-ОИ. -БР. -IX) антигенов на клетках периферической крови больных хзл и доноров

фракции Исслед. число клеток, экспрессируюших НЬА-антигены (в х) клеток группы -И* -1)Р -1ХЭ

ноно- ХЗЛ

питы доноры

Т-ЛНН- ХЗЛ 5.41.0.4»» 3. 3±0. 3«« 1. 6±0.2«»

Фопиты Доноры 3.3+0.5 1.6.Ю.1 о. 7*.о. 1

Примечания: »» - уровень достоверности различия между

больными хзл и донорани <р<0. 01), среди лиц со сниженным количеством -1Х5<») Т-линФоцитов были преимущественно больные, находящиеся в Фазе ремиссии, у них также отмечено и низкое содержание -И}(*) ноноцитов. Для Фазы обострения характерно увеличение экспрессии продуктов генов всех трех локусов НЬА среди Т-лимФоцитов, а во фракции ноноцитов снижение

23. 7*2. 9»« 46. 2±4. 9

14. 211. 2«» 24. Т±.1. 7

9. 9*0. 9"» 17. 4£1. в

клеток, возножно. иэненение экспрессии ш.а-рк. -ор и -со антигенов на ноноцитах и Т-линФоцитах может иметь значение в иммунологических неханизнах патогенеза хзл.

Второй раздел работы посвяшен изучению влияния инмуномодуля-торов. в частности, препарата лейкинФерона на динанику экспрессии антигенов класса 11 у больных ХЗ/1, леченных указанным препаратом, леякинферон - это комбинированный препарат а-интерФерона и пито-кинов. облааагчпий широкин спектрон иммунобиологического действия. Нами была иследована его способность к коррекции экспрессии антигенов класса II на иннуноконпетентных клетках.

Среди больных были отдельно выделены группы с исходно низкими и исходно высокими показателями чи па моноцитов и т-лимфопи-тов. экспрессируюших нолекулы класса II. Отмечено, что в Фазе обострения во фракции моноцитов после лечения у большинства больных возрастает число клеток, экспрессируюших антигены класса II в обоих группах, причем сушественое увеличение отнечено в группе с исходно низкини значениями, во Фракции т-лимФопитов у большинства больных отнечено увеличение числа клеток в группе с исходно низкини значениями и снижение - с исходно высокими независимо от Фазы заболевани (рис. 2).

В результате терапии больных ХЗЛ прет:атани тактивияа и миелопида также наблюдалось изменение экспрессии антигенов класса II на ноноиитах и т-линФопитах, однако степень выраженности ноду-лируюших экспрессию эффектов и число больных, у которых было отмечено изменение экспрессии, было ниже, чем при применении лейкинФерона. Так. наибольший стимулирующий экспрессию эффект на моноцитах был выявлен при применении лейкинФерона. такин образом, препарат лейкинФерона может быть' рекомендован в качестве одного из эффективных инмунокорригируюших средств в терапии хзл.

6

Рис. г динаника экспрессии антигенов класса II ГХГ на

нонопитах и Т-линФоиитах у больных ХЗЛ. леченных лейкинФеронон. в зависимости от Фазы заболевания

(« - р<0. 05) < □ ) - до лечения; < ■ ) - после лечения, по оси ординат - число клеток, несущих антигены класса II (в ¡о.

С целью прогноза эффективности использования лейкинФероиа i терапии хзл до начала лечения проведены тесты in vitro по изучению отвечаености клеток крови больных хзл на стинудируюоее эксп рессию действие медицинских препаратов интерферона (табл. 4,5).

Установлено, что у больных хзл отвечаеность клеток крови i vitro изненена и зависит от вида препарата, его дозы и клиничес

таблиаа ч

Отвечаеность клеток крови доноров и больных хзл на действие препаратов интерферона в динамике (ИС1;

Препа- Иссле- Доноры раты дуемые

интер- Фракции HCl ферона клеток

Больные хзл до лечения после лечения

Z ИС1 Z ИС1 у-

)

а-интер- Нн Ферон Но ЮОед/ил ЛФ

2.221.0.13 вз 1.9740.20 63 2. 20i0. 15 80

1.75*0. 09«» 83

1. 49¿0. 09 64

2. 07¿0. 14 58

1.85*0.25 81 1.30*0.06 68 1.81*0.17 73

лейкин- Нн Ферон Но 100КЕ/МЛ ЛФ

1, 8210. 24 50

2. 0010. 13 42 1. 92*0. 07 48

1.53¿0.07 50 1.48*0. 08»« Зг' 1.40*0. 07«• 44

1.66*0.24 52 1. 56*0. 18 48 1 42 *Я. 07»»47

лейкин- нн Ферон Но ЗООНЕ/мл ЛФ

2. 20*0. 80 22 1.7610.56 27

1.36*.0. 08 50 1. 31*0. 10 40

1.7Т*0. 36 63 1.26*0.05 57

1.20*0.00 -1.25*0.06 66 1. 36*.0. 05 62

Примечание:« и »« - уровень достоверности различий иехд: донорами и больными ХЗЛ (р<0. 05 и р<0. 01, соответственно).

ких проявления заболевания.

Так. у больных хзл. исследованных до начала лечения, выявлено снижение значения ИС1 и НС2. Кроне того, выявлено снижение количества больных. у которых отмечался эффект in vitro по сравнению с донорами.

Таблица 5

отвечаемость клеток крови доноров и больных ХЭЛ по изменению плотности экспрессии (ис2)

препа- нссле- Доноры Больные хзл

раты дуеные до лечения после лечечия

интер- фракции НС2 х ИС2 * ИС2 ¡с

Ферона клеток

а-интер- ин 1.40*0.05 63 Ферон Но 1. 44±0.04 55 100ед/ил ЛФ 1.46*0.06 43

1.1610.03»» 39 1.1810.03«« 53 1.23*0.02«« 45

1. 1810. ОТ 44 1. 12*0. 02« 44 1. 37*0. 13 57

леЯХИН- Кн 1.22*0.01 52 Ферон Но 1.27*0.02 56 100НЕ/МЛ ЛФ 1.35*0.03 55

i. 17J.0. 03 39 1.17*0.01«» 51 1.17*0.01«« 43

1. 20ifl. 03 48 1. 25iO. 08 45 1. 35*0. 14 47

лейкин- Нн 1.35*0.05 22 1.13*0.03 50 0.90*0.0 --Ферон Но 1.15*0.02 36 1.13*0.01 60 1.20±0. О ЗООНЕ/нл ЛФ 1.24*0.06 45 1.13*0.01 52 1. 25±0. 05 25

Дринечение: обозначения сн. табл. 4 При сопоставлению! ИС у больных, находящихся в различных Фазах заболевания установлено, что в Фазе ремиссии HCl был выше аналогичного показателя больных, находящихся в Фазе обострения.

Возможно, изменение отвечаемости клеток крови больных на действие медицинских препаратов интерферона связано с изменением ре-велторного аппарата клеток, присутствием в сыворотке больных факторов блокирующих или нейтрализующих действие интерферона и др.

В группе больных ХЗЛ. получавших лейкинферон. отвечаемость клеток крови in vitro была снижена как по ИС1. так и по ИС2. После лечения отнечена тенденция к возрастанию индексов стимуляции. во их значения продолжали оставаться ниже уровня значений доноров (рис. 3). Клинический эффект наблюл пся у 24 из 26 больных и не зависел от показателей тестов m vitro.

Поскольку естественным регулятором экспрессии антигенов клас са II на клетках является интерферон, проведено исследование ин-терферонового статуса больных ХЗЛ и сопоставление экспрессии молекул класса II с титрами эндогенного интерферона.

У больных хзл в большинстве случаев отмечено повышение титров эндогенного а-интерферона в плазме до 48 ИЕ/нл (у здоровых лип - менее 4 НЕ/мл). причем наибольаее число таких больных - 88; находилось в Фазе обострения, способность лейхошггов периферической крови больных хзл продупировать а-интерферон была снижена в более чем половине случаев и составила значения менее !92 КЕ/ид (у доноров 256-512 ИЕ/нл). при этом показатели интерфероновой реакянн лейхошггов больных, находящихся в фазе обострения, были снижены более значительно, чем в Фазе ремиссии.

По-видимому, повыиеиие титров эндогенного а-интерферона в плазме больных ХЗЛ обусловлено постоянным присутствием никробных агентов в организме, индуцирующих непрерывный синтез интерферона Снижение способности лейкоцитов продуцировать а-интерферон. возможно связано с неспособностью ответа лейкоцитов к выработке интерферона вследствни истошеь..л.

Сопоставление числа моноцитов и 7-лимфоцитов, весужих акту-

!>ис, J отвечаеность клеток крови на стимулирующее экспрессию антигенов класса II действие лейкинФерона in vitro у доноров и больных хзл, леченных данный препаратом

<• - р<о. 05; »» - р<0. on ( В ) - доноры; ( □ ) - больные ХЭЛ до лечения: ( В I - больные ХЗЛ после лечения Цифры внутри столбиков процент лиц. у которых наблюдался стимулируший эффект

m vitro.

гены класса II. с уровнен эндогенного а-интерферона в плазме кг ви больных ХЗЛ выявило, что как при низких - ненее 4 НЕ/мл. та» при высоких - до 48 НЕ/мл титрах а-интерферона. количество кмеч экспрессируюших антигены класса II. в обоих ♦ракпих клеток былс высоким.

Таким образом, в результате проделанной экспериментальной работы и проведенного клинико-иммунологического анализа впервые установлены закономерности изменения показателей : ;спрессии ант генов класса II на клетках крови у вольных ХЗЛ, выявлена взаимс связь экспрессии с клиническими проявлениями заболевания и опре делены пути коррекции экспрессии молекул класса II с помошыо леякииферона.

Полученные данные позволяют предположить возможное учасп антигенов класса II в иммунологических механизмах патогенеза х; определение экспрессии антигенов класса II важно также для диФ< рениированного выбора терапии ХЗЛ. —

ВЫВОДЫ

1 При исследовании экспрессии антигенов класса II гкг на клетках периферической крови больных ХЗЛ установлена определен ная закономерность изненения изучаемых показателей экспрессии ! сравнению с аналогичными значениями доноров, у больных ХЗЛ выя: но преимущественное снижение числа клеток, несущих антигены кл са п. вр фракциях мононуклеаров и моноцитов и повышение их во фракции т-лимфопнтов. Плотность экспрессии этих антигенов на п верхмостных мембранах изучаемых фракций клеток в большинстве с чаев повышена.

2. В группе больных ХЗЛ в Фазе ремиссии заболевания прес-6 дают больные с низким содержанием моноцитов, несущих антигены

класса IX. в Фазе обострения напротив - с высоким содержанием подобных моноцитов. Плотность экспрессии на поверхностных ненб-ранах моношггов как в фазе ремиссии, так и обострения процесса высокая. Для т-линфопитов характерно повышение содержания клеток, несуиих нолекулы класса II, независимо от Фазы заболевания и высокая плотность экспрессии у больных, находящихся ч Фазе обострения процесса.

3. Установлена зависимость экспрессии антигенов класса II на нонопитах и т-лимфоцитах периферической крови больных хзл от клинических проявлений заболевания. Одновременное снижение числа ионоцитов и Т-линФопитов. экспрессируюших антигены класса ii. является прогностическим признакон. который в Фазе обострения может :видетельствовать об особой тяжести течения процесса и возможной чалой эффективности традиционной терапии. В случае ремиссии -сказанные показатели ногут быть оценены как предвестники скорого обострения процесса.

Изменение экспрессии ньа-ок. -СР и -ЕХ) антигенов на моно-иггах и Т-лимфоцитах крови при хзл зависит от Фазы заболевания. 3 Фазе ремиссии у большинства больных устаногпено снижение числа •Ю(*> моноцитов и т-линфопитов. в Фазе обострения - снижение Е>К(») мояопитов и увеличение числа т-лимФоцитов. экспрессируюших 1итигекы класса II всех трех локусов. Выявленные изненения свидетельствуют об участии антигенов этих субрайонов в иннунологичес-:их механизмах патогенеза данных заболеваний.

5. Положительный клинический эффект препарата лейкинФерона очетается с его иммуиокорригируюшим действием на экспрессию нтигенов класса II на нонопитах и т-линфопитах периферической рови больных хзл. вызывая ее повышение у лиц с исходно низкими ваченияни и снижение - с исходно высокими.

6. Наблюдается снижение отвечаемости клеток периферической

крови больных хэл на спмулируювее экспрессии антигенов класса I действие препаратов интерферона в условиях in vitro по сравнению с донорами. Клинический эффект лейкинФерона не зависит от выявля емых положительных или отрицательных значений тестов m vitro до начала терапии.

7. Ннтерфероновьгя статус больных ХЗЛ характеризуется высокими титрами эндогенного а-интерферона в плазме и низкой способность» лейкоцитов периферической крови продуцировать а-интерферо в ответ на действие индуктора. Как при низком, так и при высокой уровне эндогенного интерферона в плазме крови число моношггов и T-лимфоцитов, яесуиих антигены класса II. повышено.

в. определение экспресии антигенов класса II на клетках пер» Ферической крови больных ХЗЛ может быть использовано в качестве одного из показателей опенки иммунного статуса.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ГЕНЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Уровень экспрессии антигенов (АГ) ГКГ класса II один из п< раметров опенки иммунного статуса при патологии. - В сб. тезисов "Реабилитация иммунной системы". Дагомыс. 1990. с.349 (соавт. X. В. Авдеева, о. А. Поровина. А. Н. Борисова, с. А. Макарова. Д. 1. Лукн. нова).

г. Хронические неспецифические заболевания легких (ХНЗЛ). Экспрессия антигенов класса II на клетках крови. Иммунокорриги-руюаее действие интерферона. - В сб. тезисов I Всесоюзного кояг ресса по болезням органов дыхания, киев. 1990. N317 (соавт. х. я Авдеева, к и. Борисова, с. а. Макарова, в. П. Кузнецов. Н. В. медуницы 3. интерферон как модулятор экспрессии антигенов класса II н моноцитах человека в норме и при патологии. - материалы междуна родного синпоэиума "Система но нухлеаоных Фагоцитов в норме и при патологии". Новосибирск. 1090. с. 11-12 (соавт. A.M. Борисова

л. Макарова, л. с. Матвеева, а в. Иедгниикн).

4. Оценка интерферонового статуса при патологии, иннунокорри-•ируюоее действие лейкинФерсна. - Материалы пленуна 'Экологические (спекта инмунопатологичеаких состояния*. Ална-Ата. 1990. с. 13 (соавт. х. И. Авдеева, н. а Недунипын. г. ногиева. л. с. Матвеева.

5. П. Боркова).

5. Иннунонодулирушие свойства препаратов интерферона. - в сб. •Современные аспекты применения интерферонов и других иммуномоду-1яторов", Москва. 1990. с. 76 (соавт. Н. в. Недунииын. ж. И. Авдеева.

н. Борисова. С. А. Макарова. Л. С. Матвеева).

6. экспрессия антигенов главного комплекса гистосовнестиности (ГКГ) класса II на клетках крови при хронических неспецифических заболеваниях легких и ее изменение под влиянием интерферона. -

В сб. "Влияние Факторов внешней среды на реактивность организна". тон 2. Хиев-вороЕияовг*>ад.--1990. с. Чрч-105. (соавт. ж. И. Авдеева. А. м. Борисова. С. А. Макарова, н. В. Медунипын).

7. Экспрессиия антигенов (АГ) класса II главного комплекса гистосовместимости (НЬА-ВК. -0Р. -IX» на клетках крови при хронических заболеваниях легких (ХЭЛ). - Тезисы и ждународного симпозиума по аллергологии и клинической имнунологии. ллна-лта, 1992 (принято в печать) (соавт. ж. И. Авдеева. А. н. Борисова,Н. В. недунипын).

в. Экспрессия антигенов главного комплекса гистосовнестиности класса II на клетках крови здоровых доноров и больных хроническими завояеванняни легких. Имнунология. 1992 «принято в печать) (соавт. X и. Авдеева. А. И. Борисова.. Н. В. Медунипын).

участок множительной техники яонц амн ссср подл. • к печати {2 .'2 {¿¿л •' — шш ^ тираж |с о эк*