Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Экспериментальное обоснование клинического применения новых растительных антиоксидантов полифенольной природы

На правах рукописи

РГБ ОД

г о одт ьзз

БУНЯТЯН

Наталья Дмитриевна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ НОВЫХ РАСТИТЕЛЬНЫХ АНТИОКСИДАНТОВ ПОЛИФЕНОЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

Специальность 14.00.25 - фармакология.

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Купавна - 1999

Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И.М. Сеченов и в Украинской фармацевтической академии

Научные руководители:

доктор медицинских наук, член-корр. РАМН, профессор В.П. Фисенко доктор фармацевтических наук, профессор Л.В. Яковлева

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, член-корр. РАМН, профессор Т.А. Гуськова доктор фармацевтических наук С.П. Гладких доктор медицинских наук, профессор А.Г. Муляр

Ведущие учреждения:

НИИ фармакологии РАМН

Защита диссертации состоится " 29 " июня 1999 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 098.01.02 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически

активных веществ (ВНЦ БАВ) по адресу: 142450, Московская область, пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ

Автореферат разослан " 28 " мая 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук Т.Н.Робакидз1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Многочисленные работы последних лет показывают, что при действии на организм человека и животных различных неблагоприятных факторов химической и физической природы, стрессорных ситуаций формируется неспецифическая реакция, так называемая свободнорадикальная патология, или синдром пероксида-ции. Следствием этой реакции является возрастание уровня продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) клеточных мембран, которые способны вызывать окисление различных биологических субстратов и, тем самым, повреждать белки и липиды мембран, инактивировать ферменты, изменять структуры макромолекул, целостность клетки и внутриклеточных органелл. Указанные молекулярные механизмы лежат в основе развития различных заболеваний - лучевой болезни, атеросклероза, ишемической болезни сердца и мозга, некоторых злокачественных и алиментарных заболеваний, бронхиальной астмы, отравлений и др. (Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И.1985; Скакун Н.П., Шманько В.В., Охри-мович JI.M., 1995; Дюмаев K.M., Воронина Т.А., Смирнов Л.Д., 1995). Вместе с тем, не вызывает сомнений то, что активация ПОЛ в биологических мембранах играет большую (а в ряде случаев - определяющую) роль не только в развитии многих патологических состояний, но и в функционировании физиологических систем клетки. С процессом перекисного окисления ненасыщенных жирных кислот мембранных фосфолипидов животных клеток непосредственно связана скорость клеточного деления, состояние окислительного фосфорилирования, регуляция проницаемости мембран, синтез простагландинов и стероидов, деятельность многих ферментных систем (Болдырева A.A., 1990; Ленинджер А., 1985).

Необходимым условием функционирования клетки является поддержание нормального уровня процессов свободнорадикального окисления (СРО). Скорость и регуляция ПОЛ осуществляется многокомпонентной антиоксидантной системой (АОС), которая обеспечивает связывание и модификацию свободных радикалов, предупреждение образования и разрушения перекисей, экранирование функциональных групп белков и других биомолекул. В состав АОС входят ферменты и природные анти-оксиданты, встроенные в структуру мембраны и тормозящие процесс ПОЛ за счет как обменных реакций со свободными радикалами и пере-кисными соединениями, так и путем создания более компактной структуры мембран, уменьшающей доступ кислорода к липидам.

Раскрытие роли свободнорадикального окисления структурных ли-пидов биологических мембран в первичных физико-химических процессах адаптации дало основание к успешному применению антиоксидантш в качестве средств неспецифического повышения устойчивости организма к физическим и химическим экологическим факторам и показало целесообразность их использования в качестве лечебно-профилактическш средств (Смирнов Л.Д., 1997; Дроговоз С.М. с соавт., 1998; Деримедведь Л.В., 1998).

Неспецифичность мембранопротекторного действия антиоксидан-тов, связанная с их непосредственным влиянием на физико-химические свойства и функциональную активность биологических мембран, в частности, на рецепторную функцию и активность мембраносвязанных ферментов, обеспечивает широкий спектр биологического действия этой группы препаратов (Дюмаев К.М., Воронина Т.А., Смирнов Л.Д., 1995).

В связи с вышеизложенным, актуальным является поиск и изучение веществ природного и синтетического происхождения с антиоксидант-ными и антирадикальными свойствами.

В настоящее время в медицинской практике в качестве природных антиоксидантов используются ферментные, витаминные препараты и биофлавоноиды. Поиск синтетических антиоксидантов проводится среди ароматических и гетероциклических соединений. Данная диссертационная работа вносит вклад в проблему создания препаратов антиоксидант-ного действия и посвящена фармакологическому изучению новых растительных антиоксидантов полифенольной природы, относящихся к био-флавоноидам и эллаготанинам.

Растительные флавоноиды характеризуются широким спектром действия: высокой Р-витаминной активностью, диуретическим, гипоазоте-мическим, гипотензивным, гипогликемическим, эстрогенным, спазмолитическим, желчегонным, гепатозащитным, неспецифическим противогис-таминным и другими эффектами, способствуют удалению радиоактивных веществ из организма (Robak J. et al, 1996; Middleton E., 1996; Chattopad-hyay R.R. et.al, 1992; Fosson E. et al., 1991; Mimica-Dukili N. et al., 1996; Shirwaikar A. et al., 1995; van Jaarsvelt H. et al., 1996; Колхир B.K. с соавт., 1995).

Наиболее изученными фармакологическими эффектами эллаготани-нов являются противовоспалительный, вяжущий, противогеморрагиче-ский и противомикробный (Беркало Л.А., 1992; Блинова К.Ф. с соавт., 1990).

Полифенольный тип строения биофлавоноидов и эллаготанинов обусловливает определенное сходство их эффектов, в частности, выраженную антиоксидантную активность (Барабой В.А., 1984; Иванченко В.А., 1989; Nawak N. et al., 1992; Takashi M., Takayuki S., 1997; Middleton E., 1996; Mitsuaki S.et al., 1995; Meyer В. et al., 1995; Oen Ke-Yu et al., 1993; Большакова И.В. с соавт., 1997; Saramet A. et al., 1996; Яковлева JI.B. с соавт., 1993). Многие авторы указывают на поликомпонентность антиокислительного действия растительных полифенолов. Так, в исследованиях in vitro и in vivo показано, что наличие подвижных атомов водорода в ароматической системе обусловливает способность к угнетению образования активных форм кислорода, обрыву цепей СРО (Рыжикова М.А. с соавт., 1997; Hong Chuang-Ye at al., 1995; Gomoglio A. et al., 1995; Nida S. et al., 1995; Halliwell В., 1991). Предполагают, что растительные флавоноиды действуют как антиоксиданты in vivo, благодаря их способности инактивировать гидроксильные радикалы (Shimoi К. et al., 1996; Ubeda A. et al, 1994; Costantino L. et al., 1994; Acker Saskia A.B.E. van et al., 1995; Притчина М.Г. с соавт., 1997). Доказано, что полифенольные соединения, образуя комплексы с Fe3+, являющимся важным фактором инициации СРО, препятствуют, тем самым, активации ПОЛ (Afunsev J.B., 1990; Budxianowski J. et al, 1991; Пахомов В.П., Никулина И.Н., 1997; Halliwell В., 1996). Кроме того, растительные фенолы модулируют активность ферментов, принимающих участие в процессах липопероксидации. Так, в условиях in vitro отмечено ингибирующее влияние флавоноидов на активность липооксигеназы и циклооксигеназы (Abad M.J., Bermejo P.,1991; Budxianowski J. et al, 1991), вместе с тем, в большинстве исследований выявлено повышение активности антиокислительных ферментов, в частности, супероксиддисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы, при действии как флавоноидов, так и дубильных веществ (Kiharu I. et al., 1996; Chen Zhi-Wu et al, 1995; Bordas E. et al, 1990; Altorjay J. et al., 1991). Существенным в антиоксидантном действии полифенолов является их си-нергическое взаимоотношение с другим естественным антиоксидантном -аскорбиновой кислотой (Shimoi К. et al., 1996; Сторожак Н.М. с соавт, 1997; Halliwell В, 1996; Nida S. et al, 1995). Характерно, что соединения, относящиеся к разным классам полифенолов, не в одинаковой степени ингибируют липопереокисление. Более высокой антиокислительной активностью обладают представители дубильных веществ (Иванченко В.А. с соавт, 1989; Cheisi M, Shweller R, 1995).

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Экспериментальное обоснование наличия гастро-, гепато-, радио- и кардиопротекторного действия у растительных антиоксидантов - производных эллаготанинов и биофлавоноидов.

Основные задачи исследования:

1. Изучить антиоксидантные свойства субстанций альтана, пифла-мина и эллаговой кислоты in vitro и in vivo, определить острую токсичность и терапевтический индекс.

2. Исследовать гастропротекторные свойства альтана на моделях поражения желудка, толстого кишечника и прямой кишки.

3. Выявить радиопротекторные свойства альтана при острой лучевой болезни у крыс.

4. Оценить гепатопротекторные свойства альтана и пифламина на модели хронического гепатита у крыс, а также влияние препаратов на процессы гидроксилирования в микросомах и энергообразования в митохондриях.

5. Изучить кардиопротекторные свойства эллаговой кислоты на моделях острого и хронического поражения миокарда.

Объектами исследования служили препараты эллаготанинов - альтан и эллаговая кислота, полученные из соплодий ольхи, и препарат биофла-воноидной природы - пифламин, полученный из травы гороха посевного.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые в качестве антиоксидантов предложены дубильные вещества группы эллаготанинов - альтан и эллаговая кислота. Полифенольная структура этих субстанций позволила предположить наличие у них антирадикальных и антиоксидантных свойств. В процессе изучения определен интервал эффективных доз препаратов (0,51,0 мг/кг), что позволило выявить мембраностабилизирующее и антиок-сидантное и исключить повреждающее действие эллаготанинов. Использование эллаготанинов в малых дозах открывает широкие возможности их применения в качестве нетоксичных и эффективных лекарственных средств.

Пифламин, как третий объект исследования в данной диссертационной работе, является новым препаратом традиционного направления природных биофлавоноидов. Вместе с тем, сумма биологически активных веществ пифламина впервые получена из травы гороха посевного и изучены его фармакологические свойства.

ПРАКТИЧЕСКАЯ И ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

Экспериментальное изучение гастро-, радио-, гепато- и кардиопро-текторных свойств альтана, пифламина и эллаговой кислоты послужило обоснованием для внедрения препаратов в медицинскую практику. На сегодняшний день препараты находятся на различных этапах внедрения. Представленные в диссертации результаты экспериментов были включены в отчеты по доклиническому изучению субстанций и таблеток альтана и пифламина, которые направлены в Фармакологический Комитет Украины. В настоящее время для таблеток альтана успешно завершены две фазы клинических испытаний, и препарат разрешен к медицинскому применению и внедрению в промышленное производство в качестве противовоспалительного и репаративного средства для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (Выписка из протокола заседания ФК МЗУ № 5 от 30.05.96 г.). Таблетки пифламина находятся в первой фазе клинических испытаний в качестве гепатопротектора (Выписка из протокола заседания ФК МЗУ № 4 от 30.04.98 г.).

В результате проведенных исследований предложены два новых ан-тиоксидантных препарата альтан и эллаговая кислота, которые впервые получены на основе дубильных веществ группы эллаготанинов, что открывает перспективы для дальнейшего поиска антиоксидантов.

Кроме того, предложенные препараты альтан, пифламин и эллаговая кислота являются объектами для широкого фармакологического изучения с целью выявления новых показаний для их применения.

Научно-практическое значение имеют результаты по изучению механизмов гастро-, гепато- и кардиопротекторного действия, связанные с мембраностабилизирующим и антиоксидантным действием препаратов.

АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ была проведена на V и VI Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", (Москва, 1998, 1999); на республиканской научно-практической конференции, посвященной 75-летию Украинской фармацевтической академии, (Харьков, 1996); на международной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения проф.Д.П.Сало, Харьков, 1998.

Материалы данной диссертации отражены в 29 печатных работах, из них 18 статей, 10 тезисов и 1 монография.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Работа изложена на 325 страницах машинописного текста и включает 67 таблиц, 40 рисунков, 395

источников литературы, из них 95 - иностранных авторов.

Диссертация состоит из введения, восьми глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Объекты исследования - альтан и эллаговая кислота получены из соплодий ольхи клейкой (Alnus glutinosa L.) и серой (Alnus cinerea L.) семейства березовых (Betulaceae), а пифламин - из надземной части гороха посевного - однолетнего культивируемого растения -Pisum sativum L. семейства бобовых (Fabaceae).

In vitro исследование антиоксидантной активности субстанций пиф-ламина, альтана и эллаговой кислоты проводили на модельных системах ферментативного и аскорбатзависимого ПОЛ микросом печени полярографическим методом. Микросомы из печени выделяли кальциевым методом по Kamath S.A. (1972). Содержание белка в микросомах определяли по методу Loury О.Н. (1957).

Концентрации Ю50 альтана, пифламина и эллаговой кислоты и их ошибку рассчитывали с использованием метода наименьших квадратов по Хаджаю Я.И. (1965).

Антиоксидантные свойства исследуемых объектов в системе in vivo изучали на модели острого токсического гепатита у мышей, вызванного введением тетрахлорметана (Методические рекомендации по экспериментальному изучению желчегонной, холеспазмолитической, холелити-азной и гепатопротекторной активности новых лекарственных средств, Харьков, 1994). Интенсивность процесса ПОЛ в печени оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) в гомогенате печени тиобар-битуровым методом по Стальной И. Д. и Гаришвили Т.Г. (1977), диеновых конъюгатов (ДК) по методике Стальной И.Д. (1977). Восстановленный глутатион (GSH) оценивали по методу, описанному Beutler E.D.et al. (1963).

Острую токсичность субстанций с расчетом среднелетальных доз изучали при однократном пероральном и парентеральном (внутрибрю-шинном) введении по методам Литчфилда-Уилкоксона и по Пастушенко Т.В. с соавт. (1975). По выраженности токсических свойств вещества классифицировали по Сидорову К.К. (1973) как малотоксичные и практически нетоксичные.

Биологически активные вещества альтана представлены альнитани-

нами 1-1У.

о ^н,он ноКрн^)

АльнитанинI

Диэфир гексаоксидифеноила-3-(0-сх,р-1--арабопиранозидо)-3-(0-а,р-0-ксилопиранозид)

Альнитанин II

Диэфир гексаоксидифеноила-1-(0-а-1_-арабопиранозидо)-1-(0-р-0-глюкопиранозид)

ОН

он

снрн

но

но

он

Альнитанин

Диэфир гексаоксидифеноила-1-(0-р-0-ксилопиранозидо)-1-(0-р-0-глюкопиранозид)

НО

но

НО/)—Б)

он

Альнитанин IV

Диэфир гексаоксидифеноила-1-(0-а-1.-арабопиранозидо)-1-(С)-р-0-глюкопиранозид)

Препарат эллаговой кислоты представляет собой индивидуальное вещество.

Эллаговая кислота

Фенольный состав пифламина включает флавоноидные агликоны, их гликозиды и гидроксикоричные кислоты.

Флавоноидные агликоны

он о

он о

Лютеолин

(5,7,31,4'-тетрагидроксифлавон)

Кверцетин (3, 5,7,3 ',41-пентагидроксифлавон )

ОН О

Кемпферол (3,5,7,41- тетрагидроксифлавон)

о.

V-0

Гидроксикоричные кислоты

о.

н

Н3с

■6

он

Феруловая кислота

ОН

п-Гидроксикоричная кислота

(4-гидрокси-3-метоксикоричная кислота)

(4-гидроксикоричная кислота)

Изучение фармакологической активности растительных препаратов проведено на экспериментальных моделях патологических состояний, ведущим звеном патогенеза которых является ПОЛ: язвенно-некротические поражения желудка и толстого кишечника, хронический гепатит, острый токсический миокардит, кардиомиопатия.

Поражение слизистой оболочки желудка (СОЖ) вызывали смесью этанола с преднизолоном (Алиев А.Д., 1973). В качестве стандартного препарата сравнения использовали алантон, полученный из корней девясила высокого.

Состояние животных оценивали по степени выживаемости и гематологическим показателям: содержание эритроцитов, гемоглобина, СОЭ, лейкоцитарная формула (Предтеченский В.Е., 1964). Противоязвенное действие оценивали визуально по площади язв и по показателю язвенного индекса (ЯИ) (Зупанец И.А., 1988).

Экспериментальный сигмоидит у крыс, вызывали уксусной кислотой по методике, описанной риграйпк Ь.Я. с соавт. (1990). Формалиновый проктит моделировали по Латипову А. с соавт. (1978) в нашей модификации (Бунятян Н.Д., 1999). На моделях поражения толстого кишечника альтан изучали в сравнении с салазопиридазином. Препараты толстой кишки и участки слизистой различных зон прямой кишки подвергали микроскопическому исследованию методами световой и электронной микроскопии. Гематологические показатели изучали так, как указано

выше. Интенсивность процессов ПОЛ при деструктивных воспалительных процессах в сигмовидной и прямой кишке и динамику их изменения под влиянием препаратов оценивали в крови и печени, животных по показателям МДА, ДК, GSH как описано выше, активность каталазы определяли по Королюк М.А. с соавт. (1988), активность аспартатами-нотрансферазы (АсАТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ), как индикаторных ферментов цитолиза, определяли по Reitman S., Frankel S.A., (1957) и Bergmeyer H.U. (1974).

Изучение противорадиационной активности таблеток альтана проводили на модели острой лучевой болезни у крыс (ОЛБ) при общем рентгеновском облучении в дозе СД 70/30 на аппарате РУМ-17 при следующих технических условиях: V=190 kB, I - 10mA; поле 40x40 см, мощность дозы 50,7р/мин. Фильтры 0,5 мм Си + 1,0 мм AI. Поглощенная доза по мягким тканям составляла 6,0 Гр. Оценка радиопротекторной активности препарата проводилась по общепринятым критериям: 30-суточной выживаемости, фактору уменьшения дозы, индексу эффективности по Ярмо-ненко (% гибели облученных крыс/% гибели облученных крыс + препарат), частоте развития характерных клинических признаков лучевого поражения, гематологическим показателям крови, миелограмме костного мозга бедренной кости (Методические указания по экспериментальному и клиническому изучению средств терапии радиационных поражений и медико-биологические требования к этим средствам, Москва, 1978).

В плазме крови и эритроцитах определяли содержание основных электролитов (калий, натрий, кальций) методом пламенной фотометрии на приборе ПАФ-2. Состояние гемопоэза исследовали путем изучения мембранных структур эритроцитов периферической крови, которые являются оптимальной моделью для оценки молекулярно-структурных конформаций мембран в условиях радиационных и других повреждающих воздействий. Для этого изучали устойчивость эритроцитов к кислотному гемолизу. Регистрацию времени и скорости гемолиза проводили на автоматическом цитоформометре с измерением светорассеяния клеточных суспензий в малых углах в кювете с магнитной мешалкой и с последующей обработкой данных на ЭВМ (Божок О.В., 1997)

Электрические параметры эритроцитов (сопротивление цитоплазмы, относительная проводимость), а также величины объема и диаметра, ток пробоя мембран, напряжение пробоя исследовали на электроцитоанали-заторе с компьютерной обработкой данных ЭЦА-2М. Ткани желудка, тонкого кишечника и печени подвергались гистоморфологическому ана-

лизу унифицированными светооптическими методами.

Изучение гепатопротекторной активности субстанций и таблеток альтана и пифламина проводили на модели хронического токсического поражения печени у крыс, вызванного этанолом и тетрахлорметаном.

Этанол в сочетании с подкожным введением тетрахлорметана вводили в течение 30 дней по методу Скакуна Н.П. и Ковальчука С.Ф. (1987). В качестве препарата сравнения использовали отечественный гепатопро-тектор растительного происхождения - силибор. В желчи, ткани печени и сыворотке крови изучали биохимические показатели функционального состояния печени. В сыворотке крови определяли активность аланинами-нотрансферазы (АлАТ) и АсАТ (Reitman S., Frankel S.A., 1957), уровень щелочной фосфатазы (ЩФ) по методу Боданского (Колб В.Г. с соавт., 1982), общий белок - биуретовым методом, церулоплазмин - модифицированным методом Ревина (Колб В.Г. с соавт., 1982), фибриноген (Балуда В.П. с соавт., 1980), общие липиды - по реакции с сульфованилиновым реактивом (Колб В.Г. с соавт., 1982). Влияние на желчеобразование при патологии печени исследовали по методике Скакуна Н.П. и Олейник А.Н. (1967). Концентрацию желчных кислот и холестерина определяли по методу Мирошниченко В.П. с соавт.(1978). Время выведения бромсульфа-леинового красителя определяли по методу Израйлет Л.И. с соавт. (1976).

В гомогенате печени определяли уровень гликогена по методу Кем-па и Китца (Прохорова М.И. с соавт., 1965), уровень МДА и GSH определяли так, как описано выше. Проводили гистоморфологическое исследование ткани печени общеизвестным методом световой микроскопии.

Исследования влияния препаратов на процессы микросомального гидроксилирования проводили в условиях поражения печени крыс тетрахлорметаном. О гидроксилазной активности микросом судили по скорости окислительного гидроксилирования субстрата амидопирина (Чистяков В.В. с соавт., 1977).

Кардиопротекторные свойства субстанции и таблеток эллаговой кислоты исследовали на модели острого изадринового миокардита у крыс и хронической этанол-фуразолидоновой кардиомиопатии. Острое поражение миокарда моделировали путем внутримышечного введения изадрина в течение 4 суток (Тринус Ф.П. с соавт., 1974), хроническое - введением этанола с фуразолидоном (Яковлева Л.В. с соавт., 1999). Исследования проведены в сравнении со стандартным препаратом-антиоксидантом - витамином Е в дозе 50 мг/кг (Сальникова С.И., 1989). Функциональное co-

стояние миокарда оценивали по показателям электрокардиограммы (ЭКГ) с использованием электрокардиографа ЭК 1Т-03 М2 во втором стандартном отведении (Мурашко В.В, Струтынский A.B., 1991; Сумароков А.Б, Михайлов A.A., 1975), активности цитолитических процессов (АсАТ), и по показателям весового коэффициента сердца (ВКС). Интенсивность процессов ПОЛ определяли по динамике показателей уровня МДА, активности СОД - по скорости ингибирования аутоокисления адреналина (Брусов О.С. с соавт, 1976), каталазы, GSH в гомогенате миокарда и сыворотке крови крыс.

Изучение влияния субстанций пифламина, альтана и эллаговой кислоты на биоэнергетические процессы в изолированных интактных митохондриях и в условиях поражения печени крыс этанолом проводили in vitro. Субстратом дыхания для изолированных митохондрий служил сук-цинат в концентрации 10"2 М. Интенсивность дыхания определяли по скорости потребления кислорода в метаболических состояниях 3 и 4 по Чансу. Потребление кислорода суспензией митохондрий регистрировали на полярографе LP-7e (Чехия) с использованием закрытого платинового электрода типа Кларка при температуре 30°С среды инкубации (Мосолова И.М. с соавт, 1975).

Длительное применение препаратов per os, предполагаемое в клинике, а также имеющиеся в литературе данные о неоднозначном влиянии дубильных веществ и биофлавоноидов на функциональную активность желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), определили необходимость изучения влияния пифламина, эллаговой кислоты и альтана на двигательную активность ЖКТ, состояние слизистой оболочки и секреторную функцию желудка.

Изучение местнораздражающего действия и влияния препаратов на секрецию желудочного сока у крыс проводили по методу Андреевой Н.И. и Шаровой С.Д.; (1978), действие на моторику ЖКТ изучали по методу Sticknay I.S. с соавт. (1951).

Обработка результатов проведена с помощью коэффициентов Стью-дента (t), х2 и непараметрическими методами математической статистики по Уайту и Фишеру (Беленький М.Л, 1963; Гублер Е.В, Генкин A.A., 1973).

Всего в работе использовано 50 различных методов исследования.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Высокий процент содержания фенольных соединений в альтане, пифламине и собственно эллаговой кислоте позволил предположить наличие у этих препаратов антиоксидантных свойств, что потребовало экспериментального подтверждения.

In vitro на микросомах печени крыс определяли изоэффективные концентрации субстанций по антиоксидантной активности, а также препаратов сравнения - ионола и силибора по их способности уменьшать скорость потребления кислорода микросомами. Исследования показали, что независимо от условий эксперимента (ферментативное или аскор-батзависимое ПОЛ), изученные субстанции можно расположить в один ряд по степени нарастания ГО50 или, что аналогично, степени снижения антиоксидантных свойств: эллаговая кислота-» альтан-> силибор—> пифламин-» ионол (таблица 1).

Таблица 1 -Влияние субстанций пифламина, эллаговой кислоты и аль-

тана на ПОЛ микросом печени крыс

№ Препарат Ш50, мкг/мл Число

п/п Ферментативное Аскорбатзави- наблю-

ПОЛ симое ПОЛ дении

1. Субстанция пифламина 260,00±25,00* 270,00±2б,00* 6

2. Субстанция эллаговой кислоты 6,00±0,50* 2,00±0,15* 6

3. Субстанция альтана 10,00±0,80* 11,00±0,90* 6

4. Силибор 65,00±6,00* 64,00±6,00* 6

5. Ионол 500,00±50,00* 480,00±45,00 6

Примечания:

1) ГО50 - концентрация препаратов в мкг/мл, ингибирующая процессы ПОЛ микросом на 50%;

2) * - различия достоверны по отношению к ионолу, Р<0,05;

3) Ш50 выражали в мкг/мл, так как изучаемые растительные субстанции содержат комплекс биологически активных веществ, что не позволяет рассчитать молекулярную массу.

Стандартизированная субстанция альтана содержит 60% эллагота-нинов, содержание эллаговой кислоты в препарате по ВФС соответствует 80%, чем и объясняется более выраженная эффективность эллаговой кислоты в сравнении с альтаном. Анализируя связь антиоксидантной активности и химической структуры ряда изученных соединений, необходимо отметить, что более выраженный эффект проявляют препараты дубильных веществ: эллаговая кислота и альтан в сравнении с биофлавоно-идными препаратами пифламином и силибором, что соответствует данным литературы (Cheisi М., Shweller R., 1995).

Более выраженная антиоксидантная активность дубильных веществ, вероятно, обусловлена высокой комплексообразовательной способностью, что приводит к связыванию ионов Fe2+, являющихся обязательным компонентом модельных систем ферментативного и неферментативного ПОЛ (Барабой В.А., 1984).

Уровень антиоксидантной активности пифламина также представляет практический интерес, так как в условиях ферментативного и аскор-батзависимого ПОЛ он превосходит подобный показатель ионола в 1,9 и 1,8 раза.

Сопоставление результатов по ферментативному и аскорбатзависи-мому ПОЛ показало, что каждый изученный объект в равной мере угнетает оба вида перекисного окисления. Выраженное антиоксидантное действие субстанций при аскорбатзависимом ПОЛ позволяет предположить их активность in vivo, так как при патологических состояниях повышаются преимущественно процессы неферментативного ПОЛ (Губский Ю.И., 1989).

Данное предположение было подтверждено в эксперименте in vivo на модели острого тетрахлорметанового гепатита у мышей. Тетрахлорме-тан в экспериментальной фармакологии используется как классический мембранотропный токсин, вызывающий усиление СРО и ПОЛ. Тетра-хлорметан, активируясь на цитохроме Р-450, образует радикал СС13\ который является инициатором свободнорадикального окисления. Под влиянием изученных субстанций динамика показателей ПОЛ была направлена на восстановление их исходного уровня (рис.1).

140 120 100 80 60 40 20 0

вкп

И К BifrE П А ЭК

GSH

150 100 50 0

ib

шт * ^ ^ ' 1 Т **

И К ВетЕ П А ЭК

МДА

I

ДК

И К ВкгЕ П А ЭК

200 150 100 50 О

т

ч

fA, \\

\V

И К ВитЕ П А ЭК

Рис. 1 - Влияние субстанций эллаговой кислоты, альтана и пифламина на процесс ПОЛ при токсическом гепатите (in vivo). Динамика показателей представлена в % по отношению к интактному контролю.

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ:

И - интактный контроль; К - контрольная патология; ВитЕ - витамин Е в дозе 50 мг/кг; А -альтан в дозе 1 мг/кг; П - пифламин в дозе 100 мг/кг; ЭК - эллаговая кислота в дозе 1 мг/кг; ВКП - весовой коэффициент печени; СБН - восстановленный глутатион; МДА - малоновый диальдегид; ДК -диеновые конъюгаты.

* - р< 0,05 по отношению к интактному контролю ** - р< 0,05 по отношению к контрольной патологии

Надо полагать, что наличие в химическом составе изученных препаратов полифенольных соединений определяет проявление их антирадикальной активности. Эти соединения являются донорами легкоподвижных атомов водорода (Барабой В.А., 1984; Дюмаев K.M., Воронина Т.А, Смирнов Л.Д., 1995), взаимодействующих непосредственно со свободными радикалами и прерывающих реакции липопероксидации. Вместе с тем, атомы водорода или их электроны могут использоваться для восстановления и пополнения фонда компонентов АОС, особенно быстро расходуемых (токоферолы, аскорбиновая кислота, глутатион и др.), что и подтверждают результаты наших исследований.

Субстанции изучали в нескольких дозах, что позволило выявить эффективные дозы для пифламина, альтана и эллаговой кислоты, составившие, соответственно, 100 мг/кг, 1 мг/кг и 1 мг/кг.

Изучение острой токсичности, как обязательной характеристики фармакологических субстанций, с определением показателя ЛД50 позволило классифицировать последние по степени их токсичности.

При однократном пероральном введении эллаговая кислота и пиф-ламин относятся к "относительно безвредным" (Сидоров К.К., 1973), так как их ЛД50 > 15000 мг/кг. Субстанция альтана в этих же условиях исследования оценена как малотоксичное соединение (ЛД50 для мышей составляет 5420 (4400+6450) мг/кг, а ЛД50 для крыс - 8500 (7820+9330) мг/кг).

Для уточнения класса токсичности пифламина и эллаговой кислоты ЛД50 рассчитывали при парентеральном пути введения. ЛД50 пифламина составила для крыс 4150 (3450+4880) мг/кг и для мышей - 3700 (3060+4340) мг/кг, что при данном пути введения характеризует субстанцию пифламина также как "относительно безвредную". ЛД5о эллаговой кислоты при внутрибрюшинном введении для мышей составляет 736 (669+804) мг/кг, а для крыс -662 (620+743) мг/кг, что позволяет оценить эллаговую кислоту как малотоксичное вещество.

Субстанции альтана, пифламина и эллаговой кислоты не обладают видовой чувствительностью, так как коэффициент видовой чувствительности (КВЧ) меньше 3 (ЛД50тах/ЛД50т|П) и по показателю терапевтического индекса (ГИ) имеют широкий диапазон условнотерапевтических доз (отношение ЛД50/условнотерапевтическая доза, которое соответственно равно: ТИП> 150, ТИА = 5420, ТИ эк> 15000).

Полученные результаты позволили рассчитать эффективные дозы для человека с помощью коэффициента видовой устойчивости по Ры-

боловлеву Ю.П. (1979) и определить содержание действующих субстанций в одной таблетке. Эти количества соответственно составили для аль-тана -10 мг, для пифламина - 0,125 мг и для эллаговой кислоты - 10 мг.

Следующей задачей явилось изучение эффективности субстанции и таблеток альтана на экспериментальных моделях язвенного поражения желудка и толстого кишечника у крыс.

Изучение фармакологической активности субстанции альтана на модели этанол-преднизолонового поражения слизистой желудка, проведенное в четырех дозах, показало, что с увеличением дозы противоязвенная эффективность альтана снижается (табл. 2).

Таблица 2 - Состояние слизистой оболочки желудка крыс при лечении субстанцией альтана на модели этанол-преднизолонового поражения_

Условия опыта Доза, мг/кг Число жив. в группе Состояние слизистой желудка

в баллах % животных с язвами Язвенный индекс

Контрольная патология - 8 20,0±1,8 100,0 20,00

Альтан 50 6 10,0±1,6* 83,3 8,33

Альтан 25 5 2,3±0,8* 60,0 1,56

Альтан 10 8 1,8±0,8* 62,5 1,13

Альтан 1 8 0,8б±0,34* 57,1 0,49

Примечание:

*- различия достоверны по отношению к контрольной патологии (р<0,05).

Так, альтан в дозе 10 мг/кг в 7 раз активнее, чем в дозе 50 мг/кг, а в дозе 1 мг/кг - в 2 раза активнее, чем в дозе 10 мг/кг. Скорее всего, такая зависимость объясняется тем, что с уменьшением дозы альтана убывает его способность, как дубильного вещества, вызывать коагуляцию белков и повреждать клеточные мембраны (Барабой В.А, 1984). В дозе 1 мг/кг альтан, по-видимому, сохраняет способность связываться с белками в минимальной степени, что позволяет проявиться антиоксидантным и мембраностабилизирующим свойствам. Скакун Н.П. с соавт. (1995) опи-

сали мембранотропность соединений полифенольного ряда, которая обусловлена их способностью встраиваться в гидрофильную фазу мембран и, таким образом, выполнять функцию наиболее легко мобилизуемого анти-оксидантного резерва. Это сказывается на сохранности и сбалансированности взаимоотношений ПОЛ/АОС и стабилизации фосфолипидной матрицы мембран.

Проведенное в следующей серии опытов сравнительное изучение таблеток альтана и алантона на данной модели показало, что альтан в дозе 1 мг/кг и алантон в дозе 24 мг/кг оказывают достоверное положительное влияние на развитие язвенного дефекта. Снижается число животных с язвами в группе, площадь язв и значение ЯИ. Результаты экспериментов позволяют заключить, что на модели этанол-преднизолоновой язвы желудка у крыс таблетки альтана оказывают выраженное лечебное действие на СОЖ, сопоставимое с таковым для алантона. При этом оба препарата проявили достоверно выраженный противоязвенный эффект.

На модели уксуснокислого сигмоидита у крыс при лечении таблетками альтана в дозах 10 и 1 мг/кг, как и в предыдущей серии экспериментов, установлена достоверная обратная зависимость эффекта от дозы. Это еще раз свидетельствует о том, что фармакологическое действие альтана на данных моделях связано с антиоксидантным и мембраностабилизи-рующим действием (Барабой В.А., 1984; Скакун Н.П. с соавт., 1995).

В серии экспериментов на модели сигмоидита проведено сравнительное изучение таблеток альтана в наиболее эффективной дозе 1 мг/кг с препаратом салазопиридазином в дозе 120 мг/кг, который широко используется в клинике для лечения язвенных колитов. В данном исследовании салазопиридазин можно рассматривать как аналог альтана по фармакологическому эффекту, но с иным механизмом действия.

Лечение язвенного сигмоидита у крыс в течение 9 дней показало, что альтан и салазопиридазин значительно снижают интенсивность некротических проявлений и выраженность воспалительной реакции в ткани слизистой (рис. 2). Положительная динамика процессов ПОЛ наблюдалась преимущественно под влиянием альтана, в то время как салазопиридазин достоверно повышал МДА и снижал запасы вБН.

Исследование протекторных свойств альтана в дозе 1 мг/кг на модели формалинового проктита у крыс показало, что данный препарат, как и салазопиридазин, препятствует ульцерогенным проявлениям, вызванным формалином и более эффективно, чем салазопиридазин угнетает воспалительный процесс в слизистой оболочке прямой кишки (табл. 3).

Б.ммг

Площадь некроза

300 250 200 150 100 50 ■ 0

% 350 -

Состояние слизистой сигмовидной кишки в баллах

}

(

ш

'МЖ&

К

МДА в печени

%

250 — 200 -•• 150 100 50 0

ДК в печени

** у

— 1

и К А С

%

120 100 80 60 40 20 О

СвН в печени

% в сыворотке крови

120-----

100 80 60 40 20 0

Рис. 2 - Влияние таблеток альтана на состояние слизистой и процессы ПОЛ при уксуснокислом сигмоидите. Динамика показателей МДА, ДК и ОБН представлена в % по отношению к интактному контролю.

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ: МДА - малоновый диальдегид; ДК - диеновые конъюгаты; ввН - восстановленный глутатион; И - интактный контроль; К - контрольная патология; А -таблетки альтана в дозе 1 мг/кг; С - салазопиридазин в дозе 120 мг/кг; * - различия достоверны по отношению к интактному контролю, р<0,05;** - различия достоверны по отношению к контрольной патологии, р<0,05; *** - различия достоверны по отношению к опытной группе, получавшей альтан, р<0,05.

Таблица 3 - Влияние таблеток альтана на состояние слизистой оболочки прямой кишки на модели формалинового проктита_

№ п/п Условия опыта п Площадь некроза, мм2 Состояние слизистой оболочки в баллах Длина пораженного участка в %

1 Контрольная патология 8 180,00±26,02 2,40±0,98 27,00±3,17

2 Альтан, 1 мг/кг 10 24,20±9,77* 0,35±0,17* 3,70±2,97*

3 Салазопиридазин, 120 мг/кг 10 43,80±15,36* 1,80±0,4б** 7,30±5,89*

Примечания:

1)* - отклонение достоверно по отношению к контрольной патологии, Р<0,05;

2)** - отклонение достоверно по отношению к альтану, р<0,05;

3) п - количество животных в группе.

Данный эффект опосредован, по-видимому, угнетением процессов липопереокисления и восстановлением компонентов АОС, о чем убедительно свидетельствует динамика показателей ПОЛ (табл. 4).

Так, под влиянием альтана происходит достоверное уменьшение количества МДА в ткани печени и крови. Увеличение количества СБН и уменьшение активности каталазы указывают на восстановление АОС животных. Салазопиридазин также достоверно снижал количество конечного продукта ПОЛ - МДА и активность фермента АОС каталазы только в гомогенате печени. Однако, количество вБИ достоверно не отличалось от контрольной патологии.

Уровень АсАТ, характеризующий интенсивность процессов цитолиза, достоверно снижался в группе животных, получавших альтан. Под влиянием салазопиридазина уменьшение АсАТ имело характер тенденции и достоверно не отличалось от контрольной патологии.

Анализ результатов биохимических исследований согласуется с макроскопическими данными. У животных, получавших таблетки альтана

и салазопиридазина, достоверно уменьшались площадь некроза и длина пораженного участка прямой кишки. В опытной группе животных, получавших альтан наблюдалось достоверное уменьшение отека, гиперемии, количества кровоизлияний, по сравнению с нелеченными животными (табл.3).

Таблица 4 - Влияние таблеток альтана на показатели ПОЛ у

крыс на модели формалинового проктита

Показатель Условия опыта

Интактный контроль Контрольная Патология Альтан, 1 мг/кг Салазопири-дазин, 120 мг/кг

Число животных 10 8 10 10

Гомогенат печени

МДА, мкмоль/г 9,71±2,32 68,20±6,35* 37,14±6,15** 16,67±2,25**

Катал аза, мккат/г 116,87±0,32 118,53±0,27* 115,04±1,45** 117,68±0,16**

ОБН, усл.ед. 12,87±5,25 1,03±0,36* 6,14±1,90*'** 5,95±2,бб

Сыворотка крови

МДА, мкмоль/л 1,73±0,1б 3,57±0,38* 0,90£0,15** 2,03±0,25**

Катал аз а, мккат/л 117,10±0,49 117,89±0,25 114,62±1,90 117,08±0,74

вЗН, усл.ед. 3,07±0,38 2,24±0,46 3,38±1,19 3,43±1,40

ЛДГ, мккат/л 7,00±3,12 12,52±0,13 8,50±4,00 8,70±4,00

АсАТ, ммоль/ч.л 0,25±0,05 0,47±0,05* 0,30±0,05** 0,38±0,0б

Примечания:

1)* - отклонение достоверно по отношению к интактному контролю, Р<0,05;

2)** отклонение достоверно по отношению к контрольной патологии, Р<0,05.

Исследования ультраструктурных изменений клеток как сигмовидной, так и прямой кишки при применении альтана и салазопирида-зина показали, что альтан увеличивает число рибосом, нормализует структуру митохондриальной оболочки и способствует возрастанию числа крист. Наблюдается не только прекращение развития деструктивного процесса, но и повышение метаболической активности, улучшение биоэнергетики, обеспечение синтетических и репаративных процессов, протекающих на уровне клеточной и внутриклеточных мембран.

Таким образом, анализ полученных результатов свидетельствует о выраженном действии таблеток альтана. По некоторым биохимическим показателям (АсАТ и ОБН), а также по влиянию на интенсивность воспаления слизистой оболочки прямой кишки альтан превосходит препарат сравнения салазопиридазин.

Различия в репаративной активности альтана и салазопиридазина можно объяснить различиями в механизме их фармакологического действия: альтан действует на клеточном уровне как мембранопротектор, а противовоспалительное действие салазопиридазина связано с угнетением синтеза простагландинов, что, как известно, может препятствовать процессам репарации (Яковлева Л.В. с соавт, 1988).

Указанные результаты убедительно подтверждают, что выраженный гастропротекторный эффект альтана на моделях язвенно-некротических поражений различных отделов ЖКТ, проявляется в дозе 1 мг/кг, в которой он оказывает антиоксидантное и мембраностабилизирующее действие.

Известно, что полифенольные соединения и биофлавоноиды являются истинными антиоксидантами и проявляют антирадикальное действие. В связи с этим, нами высказано предположение об антирадиационных свойствах эллаготанинов, что и было проверено на примере альтана на модели ОЛБ, вызванной общим рентгеновским облучением крыс.

Под действием альтана в дозе 1 мг/кг выживаемость животных (П1=:70) достоверно превысила этот показатель в группе контрольной патологии (п2=70) в 2,5 раза (рис.3). Данная величина является индексом противорадиационной эффективности альтана - 2,5 (70%/28%) и позволяет оценить последнюю, как очень высокую. Применение таблеток альтана достоверно снижало проявление признаков ОЛБ. Частота кишечных расстройств на 5-6 сутки уменьшилась в 6-4,5 раза. В 2 раза снизилось развитие капиллярных нарушений. В период с 12 по 18 день в 5-3 раза уменьшилась частота возникновения геморрагического синдрома. Общее со-

стояние экспериментальных животных значительно улучшилось в сравнении с контрольными, что подтверждается динамикой показателей массы тела животных. Морфологические исследования подтвердили защитное действие альтана на структуру печени, слизистую желудка и тонкого кишечника при ОЛБ.

Рис. 3 - Влияние таблеток альтана на выживаемость крыс в условиях

общего облучения в дозе 6,0 Гр. * - отклонение достоверно по отношеншо к контрольной патологии (в интервале с 7 по 30 день опыта Р<0,05 по критерию х,2); п ]>2 - количество животных в группах в начале эксперимента; п3 - количество животных в группе, получавшей альтан в дозе 1 мг/кг, на 15 сутки эксперимента;

п 4 - количество животных в группе контрольной патологии на 15 сутки эксперимента.

В ткани печени контрольных животных наблюдалась неправильная ориентация печеночных балочек. Гепатоциты имели бледно окрашенную цитоплазму и ядра с конденсированным гиперхромным хроматином. Эн-доплазматические и купферовские клетки размещены неравномерно, атипичной формы, увеличены в размерах. Протоки Диссе инфильтрированы эритроцитами. Указанные нарушения свидетельствуют о деструктивных изменениях и функциональной неполноценности печени вследствие де-зинтоксикационной перегрузки.

Применение апьтана способствовало сохранности структуры, а, следовательно, и функции печени. У животных опытной группы наблюдалось значительное сокращение участков деструкции и инфильтрации ткани эритроцитами. Печеночные балочки, образованные гепатоцитами, имели четкую ориентацию. Особенно заметно обнаруживалась сохранность купферовских клеток.

Морфоструктура ткани желудка и кишечника в условиях рентгеновского облучения также претерпевала выраженные деструктивные изменения. Многослойный плоский эпителий преджелудка был истончен, на поверхности видны ороговевающие пласты. Железы фундальной части имели рыхлое строение с разрушенными апикальными отделами. Количество главных клеток резко уменьшено, тогда как обкладочных - увеличено. В тонком кишечнике наблюдали выраженные дистрофические изменения крипт и ворсинок.

Альтан, введенный животным на фоне облучения, способствовал восстановлению указанных нарушений. Структура преджелудка и железистой части преимущественно соответствовала норме. Под влиянием препарата существенно ослаблялись пострадиационные дистрофические и деструктивные изменения крипт и ворсинок тонкого кишечника.

У крыс с ОЛБ пострадиационные изменения претерпевала система кроветворения. На первой неделе наблюдалась дегенеративно-некротическая фаза первичного опустошения костномозгового кроветворения и клеточного фонда периферической крови с нарушением процесса созревания клеток в костном мозге. Указанные изменения происходили на фоне сдвига дифференциации миелоидного ростка в сторону лимфо-поэза.

Под влиянием таблеток альтана происходила выраженная модификация гематологического пострадиационного синдрома.

Спустя 7 суток в этой группе животных в периферической крови наблюдалась достоверная динамика в сторону восстановления количества лимфоцитов, моноцитов, миелокариоцитов. Одновременно в костном мозге число клеток эритрона достоверно было более высоким, нежели у нелеченных крыс (82% против 57%) на фоне более высокого уровня сохранения (в 6 раз) миелокариоцитов. Последующая существенная активация восстановительных процессов, как в сторону пролиферации, так и дифференциации клеточных клонов имеет место, начиная со 2 недели после воздействия радиации. Активная репарация в костномозговом пуле и

нормализация процессов созревания основных клеточных популяций, в особенности нейтрофильных гранулоцитов, наблюдается в восстановительной фазе.

Изучение электролитного обмена показало, что уменьшение кишечного синдрома при применении альтана сопряжено с повышением содержания калия и натрия в плазме и эритроцитах.

Результаты исследования устойчивости эритроцитов к гемолизу, вызванному различными концентрациями HCl, достоверно подтвердили мембраностабилизирующее действие альтана.

Таким образом, итогом проведенных исследований на модели ОЛБ у крыс является установление противорадиационного и подтверждение ан-тиоксидантного, гастропротекторного и мембраностабилизирующего действия эллаготанинов на примере альтана.

Как показывают данные литературы, наиболее общепринятым в современной медицине является использование антиоксидантов для лечения заболеваний печени (Скакун Н.П. с соавт., 1995). Дезинтоксикацион-ная функция печени по отношению к экзогенным веществам и эндогенным продуктам метаболизма осуществляется в мембранах эндоплазмати-ческого ретикулума гепатоцитов, где локализованы оксидазы со смешанными функциями. Функция данных ферментов связана с двумя внемито-хондриальными цепями переноса электронов, зависимыми от НАДФ-Н и НАД Н и с цитохромом Р-450 (Арчаков А.И., 1975). Известно, что при функционировании цитохрома Р-450 происходит образование активных форм кислорода, в частности, супероксидного аниона (Тиунов Л.А., 1981; Чекман И.С. с соавт.,1984). Усиление функции цитохрома и активация окислительного фосфорилирования в митохондриях при заболеваниях печени сопровождаются генерацией активных форм кислорода, в первую очередь, супероксидного аниона. Последнему отводится главная роль в активации процессов ПОЛ при поражении печени. Гиперактивация ПОЛ и развитие синдрома цитолиза являются типичным проявлением патологии печени, независимо от характера повреждающего агента (Подымова С.Д., 1984.; Хазанов А.И., 1988).

Считают, что любой патологический процесс, приводящий к нарушению функции печени, в той или иной мере отражается на обмене ли-пидов и структурной организации мембран гепатоцитов. Это сказывается на ПОЛ мембран, которое играет роль регулятора их проницаемости. Интенсификация ПОЛ может вызывать нарушения структуры и функции гепатоцитов. Кроме того, многие авторы полагают, что данный процесс яв-

ляется одним из универсальных механизмов повреждения и гибели клеток любых органов, в том числе и гепатоцитов (Скакун Н.П. с соавт, 1995).

Выявление основополагающего значения процессов ПОЛ в патогенезе заболеваний печени привело к использованию в их терапии антиок-сидантов.

В связи с этим в данной работе представляло интерес изучить гепа-топротекторные свойства новых потенциальных препаратов антиокси-дантного действия.

Для изучения гепатопротекторной активности были выбраны два препарата - альтан и пифламин, действующие вещества которых относятся к различным фотохимическим классам: альтан содержит производные эллаготанинов, пифламин - растительные биофлавоноиды. Обоснованием данного выбора явились данные о применении в клинической практике гепатопротекторов на основе растительных биофлавоноидов (силибор, легалон, конвафлавин и др.). Целесообразность изучения гепатопротек-торных свойств альтана заключается в том, что в доступной нам литературе мы не нашли данных об изучении гепатопротекторного действия эл-лаговой кислоты и ее производных. В связи с этим, представляло интерес сопоставить гепатопротекторную активность пифламина, содержащего биофлавоноиды, которые традиционно используются в качестве гепатопротекторов, и альтана - представителя дубильных веществ, содержащего комплекс полифенольных соединений.

Нами изучено влияние растительных антиоксидантов альтана и пифламина на течение экспериментального поражения печени, вызванного тетрахлорменаном в сочетании с этанолом, как обоснование возможности использования их в качестве гепатопротекторов.

Препаратом сравнения служил гепатопротектор биофлавоноидной природы силибор в дозе 25 мг/кг (Скакун Н.П, Шманько В.В. с соавт, 1995).

Гепатотоксичность тетрахлорметана обусловлена его влиянием на мембраны гепатоцитов. Определенное значение имеет действие тетра-хлорметатана на липиды мембран как растворителя. Владимировым Ю.А. и Арчаковым И.А. (1972) описан механизм поражения печени тетрахлор-метаном, который в процессе метаболизма образует свободные радикалы, инициирующие процессы СРО и ПОЛ. В свою очередь, повреждение мембран, индуцированное тетрахлорметаном и продуктами его метаболизма, как и продуктами ПОЛ, приводит к солюбилизации ферментов

протоплазматических, микросомальных, лизосомальных, митохондри-альных и других мембран и к их повреждению. Последнее сопряжено с нарушением обмена веществ и энергии, нарушением функции и структуры гепатоцитов (Slater T.F., 1982).

По данным Олейник А.Н. (1994), при сочетанном введении крысам этанола и тетрахлорметана происходят глубокие нарушения со стороны функции печени: повреждаются секреция желчи, синтез и выделение желчных кислот. Тетрахлорметан на фоне хронической алкогольной интоксикации ускоряет (до 8-12 против 12-20 недель) формирование экспериментального цирроза печени у крыс. Ведущую роль в патогенезе поражения печени, возникающего в связи с действием гепатотоксических ксенобиотиков на фоне острой алкогольной интоксикации, наряду с другими факторами, играет интенсификация ПОЛ (Матвеев В.В. с соавт., 1993), хотя роль ПОЛ при поражении печени, возникающим при длительном воздействии тетрахлорметана и этанола в литературе освещена мало.

При длительной интоксикации тетрахлорметаном и этанолом развивается цитолитически-холестатическое поражение печени (Губский Ю.И., 1989). В нашем эксперименте на цитолитический характер этой патологии указывает увеличение активности аминотрансфераз в сыворотке крови (АлАТ), на холестатический - тенденция к повышению активности ЩФ и нарушению желчеобразования (рис. 4).

Контрольная патология сопровождалась снижением энергетических запасов (уровень гликогена) и активации процессов ПОЛ (возрастание МДА и снижение GSH).

Под действием таблеток альтана, пифламина и препарата сравнения силибора наблюдали тенденцию к уменьшению цитолиза (АлАТ), достоверное повышение запаса GSH и тенденция к накоплению гликогена. Биофлавоноидные препараты силибор и пифламин достоверно подавляли активность ПОЛ, в то время как альтан, содержащий эллаготанины, не оказывал влияния на уровень МДА в печени. Анализ показателей желчеотделения и экскреторной функции (табл.5) также подтверждает более выраженное гепатопротекторное действие пифламина в сравнении с аль-таном.

Рис. 4 - Гепатопротекторное действие таблеток альтана и пифламина на модели хронического поражения печени, вызванного тетрахлор-метаном и этанолом. Динамика показателей выражена в % по отношению к интактному контролю УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ:

И - интактный контроль; К - контрольная патология; А - таблетки альтана в дозе 1 мг/кг; П - таблетки пифламина в дозе 100 мг/кг; С -силибор в дозе 25 мг/кг; * - р< 0,05 по отношению к интактному контролю; ** - р< 0,05 по отношению к контрольной патологии.

Таблица 5 - Показатели бромсульфалеиновой пробы при лечении крыс

субстанцией альтан в условиях экспериментального хронического гепатита, вызванного тетрахлорметаном в сочетании с этанолом (п=б)_

№ п/п Условия опыта Время появления лилового окрашивания желчи (мин) Время исчезновения лилового окрашивания желчи(мин)

1. Интактный контроль 7,00±1,45 19,75±1,19

2. Контрольная патология 7,75*1,38 42,50±5,01*

3. Патология +- силибор 25 мг/кг 9,25±1,14 28,25±3,57*;**

4. Патология + альтан 1 мг/кг 15,60±4,30 30,20±4,79*

5. Патология + пифла-мин 100 мг/кг 6,67±0,85 21,00*4,26*'**

Примечания:

1)* - отклонения достоверны по отношению к интактному контролю, Р<0,05;

2)** - отклонения достоверны по отношению к контрольной патологии, Р<0,05;

3)п - количество животных в группе.

Под влиянием пифламина наблюдали достоверное повышение скорости секреции желчи, синтеза желчных кислот и тенденцию к повышению холестерина в желчи. В отличие от пифламина, альтан достоверно повышал скорость секреции желчи, но на состав желчи положительного действия не оказывал.

Вероятно, это обусловлено наличием в пифламине не только веществ полифенольной природы, но и высоким содержанием свободных аминокислот, а также легкоусваеваемых углеводов и гликопротеинов.

Изучение гистоструктуры печени различных групп животных пока-

зало, что длительное сочетанное введение тетрахлорметана и этанола вызывает у крыс жировую дистрофию печени, нарушение внутриорганной гемодинамики, вакуолизацию гепатоцитов. У части животных превалирует макровезикулярный стеатоз с микрокистами и нарушением структуры ткани. Дистрофические процессы в ткани печени преобладают над про-лиферативными. Альтан, пифламин и препарат сравнения силибор уменьшают жировую дистрофию печени, вакуолизацию и усиливают пролиферативные процессы.

Гепатопротекторный эффект альтана и пифламина обеспечивается антиоксидантными свойствами растительных полифенолов, которые входят в состав этих препаратов. Считают, что предотвращение жировой дистрофии печени связано со способностью полифенолов восстанавливать белковосинтетическую функцию гепатоцитов и процесс образования липопротеидов. Механизм действия полифенолов связан в данном случае с их способностью блокировать активность рибонуклеаз (Губский Ю.И., 1989).

Среди прочих реакций, участвующих в метаболизме ксенобиотиков и эндогенных продуктов обмена определенное место занимает процесс гидроксилирования, осуществляемый микросомами. При поражении печени гидроксилазная активность микросом резко снижается, а при лечении гепатопротекторами - восстанавливается. Уровень гидроксилазной активности микросом, с одной стороны, может быть показателем глубины функционального поражения печени, а с другой - свидетельствовать о выраженности фармакологического эффекта используемого гепатопро-тектора.

В связи с этим представляло интерес изучить влияние новых растительных антиоксидантов альтана и пифламина на функциональное состояние процесса гидроксилазной активности микросом печени в условиях ее поражения тетрахлорметаном.

На рис. 5 представлены результаты изучения влияния альтана и пифламина на процесс гидроксилирования амидопирина в условиях острого токсического гепатита у крыс, вызванного тетрахлорметаном. Арча-ковым А.И. (1975) показано, что тетрахлорметан вызывает резкое снижение содержания цитохрома Р-450 в микросомах. Нами установлено, что растительные антиоксиданты альтан и пифламин достоверно повышают активность процесса гидроксилирования, что свидетельствует об их способности восстанавливать целостность поврежденных метаболитами ПОЛ мембран эндоплазматического ретикулума, а также предотвращать

разрушение микросомальных ферментов гепатоцитов, в частности, цито-хрома Р-450. Результаты данного эксперимента подтвердили мембрано-стабилизирующее действие альтана и пифламина.

%

120 -р 100 80 — 60 — 40 —

20 —

1

о —

Рис. 5 - Влияние субстанций и таблеток альтана и пифламина на активность микросомального окислительного гидроксилирования амидопирина в условиях токсического поражения печени крыс тет-рахлорметаном. Активность микросомального окислительного гидроксилирования выражена в % по отношению к интактному контролю.

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ:

И - интактный контроль; К - контрольная патология; А1 - субстанция альтана в дозе 1 мг/кг; А2 - таблетки альтана в дозе 1 мг/кг; П1 - субстанция пифламина в дозе 100 мг/кг; П2 - таблетки пифламина в дозе 100 мг/кг;

* - р<0,05 по отношению к интактному контролю; ** - р<0,05 по отношению к контрольной патологии.

Усиление свободнорадикального окисления липидов в кардиомио-цитах является одним из достоверных первичных звеньев механизма ишемического поражения миокарда. Это явилось основанием экспериментального изучения кардиопротекторных свойств эллаговой кислоты на двух моделях: изадринового миокардита и этанол-фуразолидоновой кардиомиопатии.

Известно, что катехоламины являются инициаторами ПОЛ и торможения антиоксидантных защитных реакций. Повышение нагрузки на

миокард приводит к гипоксии, выключению дыхательной цепи митохондрий, что вызывает возбуждение адренергической регуляции и этим замыкает порочный круг развития патологии. Указанный механизм развивается под действием изадрина, как синтетического Р-адреномиметика.

Анализ результатов (рис. 6) экспериментов при изадриновом миокардите у крыс, получавших субстанцию эллаговой кислоты в дозе 1 мг/кг в сравнении с витамином Е в дозе 50 мг/кг показал, что применение эллаговой кислоты, в отличие от витамина Е, привело к достоверному снижению ВКС и уменьшению цитолиза кардиомиоцитов (АсАТ), по сравнению с группой контрольной патологии. Это свидетельствует об ослаблении экссудативных и альтеративных процессов в миокарде. Достоверное повышение зубца К на ЭКГ под влиянием эллаговой кислоты и витамина Е можно расценить как компенсаторное увеличение возбудимости желудочков в условиях острой патологии миокарда и развития сердечной недостаточности. Ослабление явлений ишемии (смещение БТ-интервала над изолинией на ЭКГ) вызывала только эллаговая кислота, в отличие от а-токоферола (рис.б). Витамин Е, как кардиопротектор, уступает эллаговой кислоте по влиянию на данный показатель.

Результаты изучения состояния процессов ПОЛ представлены на рис.7. Установлено, что эллаговая кислота и препарат сравнения витамин Е подавляют СРО, уменьшая содержание МДА в гомогенате миокарда и сыворотке крови. Антиоксидантная активность обоих препаратов на данной модели обеспечивалась также протекторным влиянием на компоненты АОС клеток (активность СОД, каталазы и ОБН). Однако необходимо отметить, что витамин Е в меньшей степени, чем эллаговая кислота в виде субстанции и таблеток снижает уровень МДА в сыворотке крови.

Известно, что витамин Е является структурным антиоксидантом, обладает антирадикальной активностью и, в меньшей мере, способностью вступать в реакции окисления-восстановления. В предыдущих разделах работы на примере альтана было показано, что его фармакологический эффект на различных моделях связан с выраженным мембраностабилизи-рующим действием. Сходство химического строения альтана и эллаговой кислоты позволяет считать тождественными и механизмы их действия. Как было указано ранее, выраженная способность полифенолов к ком-плексообразованию (Скакун Н.П, 1995), по-видимому, определяет механизм мембраностабилизирующего действия эллаготанинов.

Рис. 6 - Результаты исследований ВКС, АсАТ и показателей ЭКГ при изадриновом миокардите у крыс. Динамика показателей приведена в % по отношению к интактному контролю.

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ: И - интактный контроль; К - контрольная патология;

ЭК - субстанция эллаговой кислоты в дозе 1 мг/кг; ВитЕ - витамин Е в дозе 50 мг/кг; * - р< 0,05 по отношению к интактному контролю; ** - р< 0,05 по отношению к контрольной патологии.

% 400 •

МДА в сыворотке

300 200 4 100 о

*

¡щ

- V.* •> — _■

---

==

==

И К ЭКВитЕ

о/о СОД в сыворотке

200

И К ЭКВитЕ

%

250 200 150 100 50 0

СБН в сыворотке

*

чед

Щ ==

■

Я

И К ЭКВитЕ

% МДА в гомогенате 600

%

СОД с гомогенате

Катал аз а в гомогенате

500 400 300 200 100 0

*

«я *1** .

Ш

В щ _

И К ЭКВитЕ

120 100 80 60 40 20 0

* ш £»/«1*/**

и к ЭК ВитЕ

%

300 250 200 150 100 50 0

т*

Щ ¡гай

Ч 'ч \S-vJ. г;../

** **

"Г ¿щ:

И К ЭКВитЕ

Рис. 7 - Влияние субстанции эллаговой кислоты и витамина Е на процессы ПОЛ у крыс при изадриновом миокардите. Динамика показателей выражена в % по отношению к интактному контролю. УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ: И - интактный контроль; К - контрольная патология; ЭК - субстанция эллаговой кислоты в дозе 1 мг/кг; ВитЕ - витамин Е в дозе 50 мг/кг; * - р< 0,05 по отношению к интактному контролю; ** - р< 0,05 по отношению к контрольной патологии.

Учитывая, что механизмы антиоксидантного действия витамина Е и эллаговой кислоты в основном идентичны, преимущество фармакологического действия эллаговой кислоты на модели изадринового миокардита может быть связано с ее большей биологической доступностью для клетки и проявлением мембраностабилизирующего действия на уровне субклеточных мембран. Это убедительно показано для эллаготанина альтана электронно-микроскопическими исследованиями при изучении его гас-тропротекторного действия.

В практической кардиологии наряду с острой патологией большой удельный вес имеют хронические заболевания миокарда.

Установлено, что кардиомиопатия (КМП) развивается вследствие переутомления миокарда, в результате хронического механического затруднения его работы или физического напряжения, воздействия острой или хронической инфекции, изменения гормонального звена регуляции. Однако большая часть КМП - исход различных интоксикаций (Ганджа И.М., 1991). Одним из основных токсических агентов, вызывающих данную патологию, является этанол. Степень воздействия этанола на клетки миокарда зависит от количественных и качественных характеристик ферментов, расщепляющих его, к которым относятся алкогольдегидроге-наза и каталаза (Грудцин Г.В., 1991). Дефицит этих ферментов, а также нарушение их функциональной активности снижают защитные свойства клеток миокарда от патогенного воздействия этанола и его метаболита -ацетальдегида, что ведет к развитию КМП. Алкогольдегидрогеназный путь расщепления этанола почти полностью осуществляется печенью, а кардиомиоциты обладают лишь незначительной алкогольдегидрогеназ-ной активностью (Грудцин Г.В., 1991). Кроме того, этанол в небольшом количестве метаболизируется каталазной системой печени и миокарда. При нарушении функции печени вследствие длительного систематического употребления алкоголя повышается интенсивность каталазного пути обмена этанола, в том числе в кардиомиоцитах. Возросший каталазный путь обмена этанола при хроническом алкоголизме не в состоянии полностью метаболизировать этанол и ацетальдегид, которые циркулируя в крови в повышенных концентрациях, повреждающе воздействуют на миокард. Следовательно, уменьшение содержания алкогольдегидрогена-зы и каталазы в печени и снижение активности каталазы в миокарде служат главным пусковым механизмом развития алкогольной кардиомиопа-тии (АКМП). Далее этанол оказывает непосредственное действие на кардиомиоциты, изменяя их ионную проницаемость и вызывая потерю мио-

кардом ионов калия, фосфора и магния. Развивающееся блокирование митохондрий приводит к нарушению энергетического обмена и активации адренергического влияния на миокард. Катехоламины интенсивно повышают процессы ПОЛ в биологических мембранах, что вызывает прямое нарушение структуры мембран, изменяя их липидный состав и нарушая функцию мембранных ферментов (Скакун Н.П. с соавт, 1985).

В результате указанных изменений нарушается межклеточный транспорт, в клетках происходит накопление окисленных продуктов, что может привести к их гибели. Пораженный очагами некроза миокард, теряет способность справляться с возложенной на него нагрузкой (Резников K.M. с соавт, 1985). Нарушается его сократительная функция, появляются очаги электрической нестабильности, вызывающие нарушение проводимости миокарда.

Исходя из перечисленных фактов, в патогенезе АКМП, по-видимому, ключевую роль играет инициация процессов ПОЛ в клеточных мембранах, поэтому целесообразным является применение антиок-сидантных средств.

По данным литературы, в комплексной терапии АКМП применяются антиоксиданты прямого действия - кверцетин и ионол (Жданюк Ю.И, 1992).

В связи с вышеизложенным, представляло интерес изучить кардио-протекторное действие эллаговой кислоты на модели этанол-фуразолидоновой КМП. На данной модели эллаговую кислоту изучали в сравнении с препаратом кверцетином. Морфологическое изучение миокарда подтвердило, что АКМП развивалась по принципу микронекрозов с преобладанием альтеративных процессов (Резников K.M. с соавт, 1985). При гистологическом изучении препаратов ткани миокарда контрольных животных наблюдали фрагментарный лизис мембран кардиомиоцитов, увеличение межклеточных пространств, развитие отека, изменение формы кардиомиоцитов и мелкие очаги некроза. Наблюдалась также лейкоцитарная инфильтрация миокарда. В препаратах, выполненных из левого желудочка миокарда, кардиомиоциты были выраженно гипертрофированы. Установлено, что эллаговая кислота, в равной степени, как и кверцетин, снижает цитолиз кардиомиоцитов, что косвенно может свидетельствовать о мембраностабилизирующем влиянии препаратов. В отличие от кверцетина, исследуемый препарат достоверно значимо уменьшает ВКС (табл.б).

Таблица б - Результаты исследования влияния субстанции и таблеток эл-лаговой кислоты и кверцетина на ВКС и АсАТ при этанол-фуразолидоновой кардиомиопатии у крыс.

№ п/п Условия опыта п ВКС АсАТ, ммоль/ч.л

1 Интактный контроль 10 0,26±0,01 0,50±0,02

2 Контрольная патология 5 0,42±0,03* 0,75±0,04*

3 Субстанция эллаговой кислоты в дозе 1 мг/кг 9 0,31 ±0,01*'** 0,60±0,02*'**

4 Таблетки эллаговой кислоты в дозе 1 мг/кг 8 0,29±0,00*'** 0,60±0,01*'**

5 Препарат сравнения, кверцетин в дозе 5 мг/кг 6 0,42±0,04* 0,64±0,02*'**

Примечания:

1)* - отклонение достоверно по отношению к интактному контролю, р<0,05;

2)** - отклонение достоверно по отношению к контрольной патологии, р< 0,05;

3) п - количество животных в группе.

Изучение влияния препаратов на состояние процессов СРО в данной серии экспериментов подтвердило их антиоксидантное действие (рис.8). Последнее проявилось нормализацией содержания ДК и МДА и активности ключевых ферментов АОС: СОД, каталазы и уровня 08Н как в гомогенате миокарда, так и в сыворотке крови.

Значительное преимущество субстанции и таблеток эллаговой кислоты на модели этанол-фуразолидоновой КМП у крыс в сравнении с кверцетином проявлялось в коррекции функциональных нарушений миокарда на ЭКГ.

И КЭК1ЭК2КВ ИКЭК1ЭК2Кв И КЭК1ЭК2Кв И КЭК1ЭК2Кв И КЭК1ЭК2Кв

Показатели в гомогенате миокарда

МПА ГПГТ Кятячямя Гт<;н тпс

И КЭК1ЭК2КВ И КЭК1ЭК2КВ И КЭК1ЭК2Кв И КЭК!ЭК2Кв И КЭК1ЭК2Кв

Рис. 8 - Показатели ПОЛ у крыс при этанол-фуразолидоновой кардио-миопатии под влиянием эллаговой кислоты и кверцетина. Динамика показателей выражена в % по отношению к интактному контролю.

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНЫ: И - интактный контроль; К - контрольная патология;

ЭК1 - субстанция эллаговой кислоты в дозе 1 мг/кг; ЭК2 - таблетки эллаговой кислоты в дозе 1 мг/кг; Кв - кверцетин в дозе 5 мг/кг;

* - р< 0,05 по отношению к интактному контролю;

** - р< 0,05 по отношению к контрольной патологии.

На первой неделе эксперимента эллаговая кислота достоверно нормализует повышенную проводимость в миокарде (QRS=0,018 сек по отношению 0,010 сек в группе контрольной патологии), а также достоверно повышает потенциалы поляризации желудочков и предсердий (соответственно R=0,520 мВ против 0,270 мВ и Р=0Д 00 мВ против 0,070 мВ в контрольной патологии) и потенциал реполяризации желудочков (Т=0,170 против 0,090 в контрольной патологии). В группе контрольной патологии развивается выраженная брадикардия (снижение частоты сердечных сокращений - ЧСС) и снижение систолического выброса (уменьшение систолического показателя - СП).

К концу эксперимента (10 неделя) эллаговая кислота, в отличие от кверцетина, достоверно увеличивает ЧСС в сравнении с контрольной патологией, хотя этот показатель остается достоверно ниже интактного контроля, а также достоверно повышает систолический выброс (СП% = 45,06 против 21,56 в группе контрольной патологии). Под влиянием кверцетина все вышеперечисленные показатели сохраняются на уровне контрольной патологии.

Весьма показательными на данной модели являются результаты по изучению общего состояния животных. Под действием эллаговой кислоты наблюдается тенденция к снижению гибели животных и увеличению прироста массы тела в сравнении с контрольной патологией. В отличие от кверцетина, эллаговая кислота достоверно снижает интенсивность атаксии, которая является результатом токсического влияния этанола на ЦНС.

Гистологические исследования морфоструктуры миокарда экспериментальных групп подтвердили более выраженное кардиопротекторное действие эллаговой кислоты

Исследования показали, что эллаговая кислота проявляет выраженное кардиопротекторное действие, в механизме которого, по-видимому, преобладает прямой антиоксидантный эффект, а также способность восстанавливать фонд естественных антиоксидантов клетки. Эффективность эллаговой кислоты превосходит активность стандартных антиоксидант-ных препаратов - витамина Е и кверцетина.

Учитывая, что функциональное состояние исследуемых органов: печени, миокарда и ЖКТ зависит от интенсивности энергообразования, изучено влияние альтана, пифламина и эллаговой кислоты на процессы окислительного фосфорилирования в митохондриях. Исследования проведены на изолированных митохондриях в условиях in vitro. Введение животным альтана и пифламина предотвращало разобщение процессов

окислительного фосфорилирования, вызванное этанолом, на что указывает восстановление величины дыхательного контроля по Чансу. Это свидетельствует об усилении сопряженности процессов клеточного дыхания и окислительного фосфорилирования (табл.7).

Таблица 7 - Влияние субстанций альтана и пифламина на функциональную активность митохондрий печени крыс в условиях острого токсического гепатита, вызванного этанолом (п = 6)

Условия эксперимента Показатель дыхания

Уз У4 ДК

Интактный контроль 34,35±2,40 11,45±0,78 3,00±0,21

Контрольная патология (этанол) 15,24±1,29* 12,70±0,91 1,20±0,12*

Этанол + альтан в дозе 0,5 мг/кг 38,53±2,53** 12,43±1,10 3,10±0,22**

Этанол + альтан в дозе 1,0 мг/кг 36,11±2,41** 11,50±0,60 3,14±0,23**

Этанол + пифламин в дозе 100,0 мг/кг 34,22±2,12** 11,80±0,73 2,90±0,19**

Этанол + пифламин в дозе 500,0 мг/кг 36,30±2,39** 12,10±0,85 3,00±0,20**

Примечания:

1)* - отклонение достоверно по отношению к интактному контролю. Р<0,05;

2)** - отклонение достоверно по отношению к контрольной патологии. Р<0,05;

3)Уз - скорость поглощения кислорода митохондриями при окислении сукцината в присутствии АДФ в состоянии 3 по Чансу,

нмоль Ог'мин-1 «мг"1 белка;

4)У4 - скорость поглощения кислорода митохондриями в присутствии сукцината в состоянии 4 по Чансу, нмоль 02 «мин *мг 1 белка;

5)ДК=У3/У4 - дыхательный контроль, отношение скорости поглощения кислорода митохондриями при окислении сукцината в присутствии АДФ к скорости потребления кислорода на сукцинате;

6)п - количество животных в группе.

В исследованиях in vitro на интактных митохондриях печени крыс выявлено, что альтан, пифламин и эллаговая кислота не влияют на скорость потребления кислорода при окислении сукцината.

Обнаруженные антиоксидантные, метаболические и мембраноста-билизирующие свойства новых растительных антиоксидантов, позволяют предположить, что точкой приложения их действия являются не только наружная мембрана клетки, но и более глубокие субклеточные мембраны, в том числе, митохондриальные.

Поскольку изученные препараты предложены в виде таблетирован-ной лекарственной формы, то есть предназначены для перорального применения, нами было изучено их влияние на состояние ЖКТ. Показано, что таблетки альтана и эллаговой кислоты не оказывают влияния на секреторную функцию желудка и двигательную активность кишечника. Субстанция и таблетки пифламина достоверно снижают секреторную функцию желудка и повышают двигательную активность желудочно-кишечного тракта. Все изученные препараты улучшают состояние слизистой желудка при исследовании их местнораздражающего действия на интактных животных.

Таким образом, альтан и эллаговая кислота могут использоваться вне зависимости от сопутствующих функциональных нарушений желудочно-кишечного тракта. Пифламин может быть рекомендован как гепа-топротектор у больных с гиперацидными состояниями.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что полифенольные препараты растительного происхождения - альтан, пифламин и эллаговая кислота обладают выраженными антиокислительными свойствами, превышающими эффективность синтетического антиоксиданта ионола.

2. По степени снижения антиоксидантной активности при ПОЛ (или нарастания ГО50) изученные субстанции в сравнении со стандартным ингибитором окисления ионолом можно расположить в следующей последовательности: эллаговая кислота—» альтан—» пифламин-» ио-нол.

3. Эффективные дозы по антиоксидантной активности для альтана, эл-

лаговой кислоты и пифламина соответственно составляют 1 мг/кг, ' мг/кг и 100 мг/кг. По показателю острой токсичности (ЛД50) пифла мин и эллаговая кислота относятся к классу относительно безвредны) веществ, а альтан - к классу малотоксичных соединений.

4. В интервале от 1 до 10 мг/кг наблюдается обратная зависимость меж ду дозой альтана и его гастропротекторной активностью.

5. Показана противоязвенная активность альтана на экспериментальны) моделях поражения желудка и различных фрагментов толстого ки шечника.

6. Пифламин проявляет гепатопротекторную активность, сравнимую < активностью силибора. Пифламин более выраженно, чем альтан, вое станавливает нарушенные функции печени: экскреторную, секретор ную и синтетическую на фоне хронического гепатита у крыс.

7. Эллаговая кислота оказывает выраженное кардиопротекторное дей ствие на моделях острого изадринового миокардита и хроническое кардиомиопатии у крыс, превосходящее активность стандартны) препаратов антиоксидантного действия - витамина Е и кверцетина.

8. Альтан и пифламин восстанавливают процессы микросомальногс гидроксилирования при остром тетрахлорметановом гепатите у крыс.

9. Альтан и пифламин предотвращают разобщение процессов окисления и фосфорилирования в митохондриях, вызванное этанолом.

10. Установлено, что в механизме фармакологического действия альтана пифламина и эллаговой кислоты на использованных моделях патологии ведущим является мембраностабилизирующее и антиоксидантное действие.

11. Экспериментально показана перспективность использования в медицинской практике потенциальных лекарственных средств - растительных антиоксидантов альтана, пифламина и эллаговой кислоты.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Перспектива использования антиоксидантов, отобранных среди лекарственных веществ в медицине и биологии // Тез.докл. Ш Всесо-юзн.конф. "Биоантиоксидант".-М., 1989.-С. 149-150.

2. Сравнительный анализ активности рекомбинантной и эритроцитар-

42

ной СОД при модельной патологии печени // Матер, научн.-практ. конф., посвящ. 75-летию Укр. фарм. академии. -Харьков, 1996.-С.282-283. (соавт. Деримедведь Л.В., Чурилова И.В.).

3. Рынок лекарств - взгляд в будущее // Матер.научно-практ.конф., посвящ. 75-летию Укр.фарм.академии,- Харьков, 1996,- С. 381. (соавт. Велик Г.В., Шуванова Е.В.).

4. Гепатозащитные свойства растительных антиоксидантов // Матер. V Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство". - М., 1998.- С.353.

5. Гепатозащитная активность субстанции альтан //Матер. V Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство". - М., 1998.- С.353.

6. Изучение кардиопротекторной активности нового растительного ан-тиоксиданта - субстанции эллаговой кислоты // Матер. V Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство". - М., 1998.- С.423. (соавт. Яковлева Л.В., Ивахненко А.К.).

7. Изучение гепатозащитных свойств субстанции пифламина // Матер. V Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство". - М., 1998,- С.556. (соавт. Герасимова O.A., Чикиткина В.В. и др.).

8. Оптимизация антиоксидантной терапии гепатита // Матер. V Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство". - М., 1998,- С.65. (соавт. Дроговоз С.М., Деримедведь Л.В., Журавель Е.В.и др.).

9. Гепатозахисш властивост1 шфламщу - пол1фенольного препарату з трави гороха nociBHoro.// Юишчна фармащя.- 1998.- Том 2,- № 1,-С.71-74. (соавт. Яковлева Л.В., Чшткша В.В.та ш.).

10. Защитное действие эллаговой кислоты при экспериментальном миокардите // Эксперимент, и клин, фармакология,- 1998,- № 3,- С.32-34. (соавт. Яковлева Л.В., Ивахненко А.К.).

11. Гепатопротекторное действие эллаготанинов // Эксперимент, и клин.фармакология. 1998.- Т. 61,- № 5,- С.53-55. (соавт. Чикиткина В.В., Яковлева Л.В.).

12. Изучение безвредности растительного гепатопротектора пифламина // Фармация.- № 6, 1998.- С.26-27. (соавт. Герасимова O.A., Чикиткина В.В.и др. ).

13. Вивчення токсичних властивостей рослинного гепатопротектора шфламша в хрошчному експеримешт // Юпшчна фармащя, 1998.- Т. 2.- №3,- С.95-98. (соавт. Герасимова О.О., Яковлева Л.В.).

14. Изучение аллергизирующих свойств нового гепатопротектора - пифламина // Матер, международной конф., посвящ. 75-летию проф. Д.П.Сало. - Харьков: Основа, 1998.- С. 58-61.

15. Перспективы СОД-содержащих препаратов в медицине // Матер, международной конф., посвящ. 75-летию проф. Д.П.Сало. - Харьков: Основа, 1998.- С. 98-103. (соавт. Деримедведь JI.B., Карташевский И.Г.и др.).

16. Влияние субстанции эллаговой кислоты на течение ультрафиолетовой эритемы // Матер, международной конф., посвящ. 75-летию проф. Д.П.Сало. - Харьков: Основа, 1998.- С. 116-122. (соавт. Ивахненко

A.К., Сербии А.Г.).

17. Пифламин - новый гепатопротектор из травы гороха посевного // Матер. международной конф., посвящ. 75-летию проф. Д.П.Сало. -Харьков: Основа, 1998.- С. 360-365. (соавт. Яковлева JI.B., Герасимова O.A.).

18. Експериментально-клЬпчне вивчення нового гепатопротектора шфламша // Юншчна фармащя, 1999.- Т.З.- № 1,- С. 51-53. (соавт. Ба-бак О.Я., Kynraip I.E. та ш.).

19. Препараты-антиоксиданты на основе эллаготанинов в лечении заболеваний внутренних органов // Матер. VI Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство". - М., 1999.- С.391. (соавт. Яковлева JI.B., Фисенко

B.П. и др.).

20. Эффективность субстанции пифламина при лекарственном поражении печени // Матер. VI Росс.нац. конгресса "Человек и лекарство". -М., 1999.-С.391. (соавт. Л.В.Яковлева, О.А.Герасимова и др.).

21. Перекисне окисления лшщв та антиоксиданти при виразковнЗ хвороб! шлунка // Юпшчна фармащя.- 1999,- Т.З.- № 1.- С. 27-29. (соавт. Яковлева Л.В., Сахарова Т.С., та ш.).

22. Эффективность растительного полифенольного препарата пифламина при лекарственном поражении печени // Эксперимент, и клин, фармакология,- 1998.- Т. 61,- № 6 - С. 48-50. (соавт. Яковлева Л.В., Герасимова О.А.и др.).

23. Природные ангиоксиданты - как гепатопротекторы // Эксперимент, и клин, фармакология.- 1999.- Т. 62.- № 2.- С. 64-67. (соавт. Герасимова O.A., Сахарова Т.С.и др.).

24. Фармакологическое изучение радиопротекторного действия альтана // Матер, науч.-произв.сем. по созданию новых лек.средств.- Белго-род.-1999,- С. 60-65. (соавт. Френкель Л.А., Яковлева Л.В. и др.).

25. Хроническая фуразолидоново-алкогольная кардиомиопатия у крыс е эксперименте // Матер, науч.-произв.сем. по созданию новых

лек.средств.- Белгород.-1999,- С. 98-105. (соавт. Ивахненко А.К, Яковлева JI.B.).

16. Применение растительных препаратов для профилактики и лечения радиационных поражений (обзор литературы) // Матер, науч,-произв.сем. по созданию новых лек.средств.- Белгород.-1999.- С. 4859.

11. Специфическая токсичность субстанции пифламина // Матер, науч.-произв.сем. по созданию новых лек.средств.- Белгород.-1999.- С. 280287. (соавт. Яковлева Л.В, Герасимова O.A. и др.).

28. Экспериментальное изучение влияния таблеток "Альтан" на течение формалинового проктита // Матер, науч.-произв.сем. по созданию новых лек.средств,- Белгород.-1999.- С. 41-47.

19. Гепатопротекторное действие растительных антиоксидантов. - М.: Издательский дом «Русский врач», 1999. - 115 с.