Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ КАРДИОПРОТЕКТИВНЫХ СВОЙСТВ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ФИТОКОМПЛЕКСОВ ПОЛИФЕНОЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

ииэ1Л40и1

/

КРИКОВА Анна Вячеславовна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ КАРДИОПРОТЕКТИВНЫХ СВОЙСТВ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ФИТОКОМПЛЕКСОВ ПОЛИФЕНОЛЬНОЙ

ПРИРОДЫ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

? 2 ид? 2072

Пятигорск - 2012

005014802

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Смоленская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Новиков Насилий Егорович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Раменская Галина Владиславовна

Ведущая организация: ГБОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия Минздравсоцразвития России.

диссертационного , тигорская ГФА Мин-

здравсоцразвития России (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Пятигорская ГФА Минздравсоцразви— "-------

доктор медицинских наук, профессор Колодийчук Елена Владимировна

доктор биологических наук, доцент Доркина Елена Григорьевна

Защита состоится

часов на заседании

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного сове! профессор

Е.В. Компанцева

Аетуальность проблемы

Сердечно-сосудистые заболевания по-прежнему остаются одними из наиболее распространенных и занимают первое место в структуре смертности и инвалидизации населения. За последние два года в нашей стране от болезней системы кровообращения умерло 2,4 млн. человек. Смертность от сосудистых заболеваний стабильно составляет 57%, причем, почти 20% из этого числа умирают в трудоспособном возрасте (Голикова Т. А., 2009). Следует сказать, что первопричиной многих заболеваний сердца является нарушение метаболических процессов на клеточном и субклеточном уровне. Прежде всего, это касается мембранного перекисного окисления липидов, патологического накопления свободных радикалов, избыточного синтеза активных форм кислорода в миокарде (Абрамченко В. В., 2001; Шанин Ю. Н. и соавт., 2003; Шилов А. М., 2004; Зборовская И. А., 2005; Оковитый С. В., 2005; Басов А. А., 2007; Новиков В. Е. и соавт., 2007; Волчегорский И. А. и соавт., 2008; Коломац Н. М. и соавт., 2009; Гришин Д. В. и соавт., 2010). Поэтому вещества, препятствующие протеканию этих процессов в миокарде можно считать кардиопротекторами.

Для коррекции таких нарушений используется большое число лекарственных средств (Оковитый С. В., 2001; Новиков В. Е. и соавт., 2006, 2007, 2008; Евсеев А. В. и соавт., 2008; Сейфулла Р. Д. и соавт., 2009; Волчегорский В. А., 2010;), которые в определенной степени можно отнести к мембраностабилизирующим средствам, а также уменьшающим накопление свободных радикалов и активных форм кислорода (Котляров А. А. и соавт., 2002; Болотова Н. В. и соавт., 2003; Дугиева М. 3. и соавт., 2004; Султанов Г. А. и соавт., 2004; Строков И. А. и соавт., 2004; Симакова Т. Г. и соавт., 2007; Лебединский Н. М. и соавт., Косинец В. А., 2010).

В то же время известно, что многие вещества из группы флавоноидов проявляют высокую антиоксидантную активность (Разина Т.Г. и соавт., 2000; Балаболкин М.И. и соавт., 2000; Гайворонская В.В. и соавт., 2000; Арыстанова А.Ж. и соавт., 2001; Зенков Н.К., 2003; Голиков А.П., 2003;) и по некоторым данным могут подавлять активность или связывать свободные радикалы (Доркина Е.Г., и соавт., 2004; 2007; 2010; Климкина Е.И. и соавт., 2004; Шульпекова Ю.О., 2004; Дадали В.А. и соавт., 2007). Однако широкого применения в качестве кардиопротекторов флавоноиды не нашли. >_

Это связано с тем, что до настоящего времени глубокого фармакологического изучения кардиопротективного действия флавоноидов не проводилось. Фармакологическое исследование флавоноидов интересно еще и тем, что по сравнению с синтетическими лекарственными препаратами они обладают низкой токсичностью, отсутствием побочного действия, не вызывают лекарственной зависимости и могут использоваться независимо от возраста и состояния организма (Mansouri А. et al., 2001; Неверов И.В., 2001; Ernst А., 2004; Федин А.И. и соавт., 2004; Черешнев В.А. и соавт., 2004; Rubin R.N. et al., 2004; Ракитский B.H. и соавт., 2005).

Для выявления кардиопротективного действия флавоноидов необходимо, прежде всего, изучение вопросов их влияния на морфофункционапьные особенности работы миокарда, свободнорадикальные процессы в миокарде и сыворотке крови животных, стабилизацию мембраны клеток. Это позволит сформулировать характер фармакологического действия флавоноидов как лечебно-профилактических средств или их кардиопротективных свойств в целом.

Поэтому изучение фармакологических свойств индивидуальных флавоноидов и суммарных композиций с целью выявления их кардиопротективного действия является новым направлением и может считаться актуальной проблемой для фармацевтической науки и медицины в целом.

Цель исследования

Фармакологическое исследование индивидуальных соединений и фитоком-плексов полифенольной природы и выявление возможности их использования в качестве кардиопротективных средств.

'Задачи исследования;

1. Обосновать выбор растительных объектов для экспериментального изучения кардиопротективных свойств.

2. Провести определение острой токсичности веществ полифенольной природы из травы вики изменчивой (диосмин и сумма, содержащая арабиноглюкозид - и кси-логлюкозид диосметина, которая условно названа флавицином), из кожуры цитрусовых (гесперидин), из цветков бархатцев распростертых (патулетин и липофиль-ная фракция), из околоплодников и листьев ореха черного и ореха грецкого, из травы череды трехраздельной (фракции - экстрагент 40 и 96% этанол), из соплодий хмеля обыкновенного (липофильная фракция).

3. Изучить дозозависимое противоаритмическое действие индивидуальных соединений и фитокомплексов полифенолыюй природы при аритмогенных поражениях (кальция хлорид и строфантин К) на фоне однократного введения доксорубицина.

4. На моделях гипоксии с гиперкашшей и циркуляторной гипоксии в условиях доксо-рубициновой, алкогольной интоксикации и при остром иммобилизационно-болевом стрессе в сравнительном аспекте изучить дозозависимую антигипоксическую активность индивидуальных соединений и фитокомплексов полифенолыюй природы.

5. Изучить влияние кардионегативных агентов на функциональные особенности работы миокарда и исследовать влияние индивидуальных соединений полифеноль-ной природы на экспериментальных моделях аритмий сердца в условиях введения доксорубицина, спирта этилового и при остром иммобилизационно-болевом стрессе.

6. Изучить в сравнительном аспекте влияние наиболее активных кардиопротекторов при их курсовом введении на процесс перекисного окисления липидов в гомогена-те миокарда и сыворотке крови крыс, изменение показателей спонтанного гемолиза эритроцитов на фоне введения доксорубицина, спирта этилового, при моделировании острого иммобилизационно-болевого стресса.

7. Изучить влияние флавоноидов при лечебно-профилактическом введении в условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и при остром иммобилизацион-но-болевом стрессе на стабилизацию мембран кардиомиоцитов путем определения активности ферментов лактатдегидрогеназы, креатинкиназы и содержания ионов кальция в гомогенате миокарда в сравнении с триметилгидразиния пропионатом, цитофлавином и этилметилгидроксиииридина сукцинатом.

8. Изучить импедансометрическим методом состояние миокарда животных при интоксикации спиртом этиловым и в условиях введения диосмина и гесперидина на фоне этанола в сравнении с препаратами позитивного контроля.

9. Изучить морфологическую картину миокарда экспериментальных животных, подвергшихся воздействию доксорубицина, спирта этилового и острого иммобилизационно-болевого стресса и коррекции их кардионегативного действия индивидуальными соединениями полифенольной природы в сравнении с триметилгидразиния пропионатом, цитофлавином и этилметилгидроксипиридина сукцинатом.

Научная повнзнп исследования

Проведено систематическое фармакологическое исследование флавоноидных соединений разных химических групп (производные флавона, флавонона, флавоно-ла) по выявлению их кардиопротективного действия.

Критериями кардиопротективного действия флавоноидов были степень антиаритмического, антигипоксического действия, влияние на степень перекисного окисления липидов, на стабилизацию мембран клеток и гистоморфологическую картину миокарда животных.

В качестве флавоноидов использованы полифенольные соединения из травы вики изменчивой (диосмин и сумма, содержащая арабиноглюкозид - и ксилоглюкозид диос-метина, которая условно названа флавицином), из кожуры цитрусовых (гесперидин), из цветков бархатцев распростертых (патулетин и липофильная фракция), из околоплодников и листьев ореха черного и ореха грецкого, из травы череды трехраздельной (фракции - экстрагент 40 и 96% этанол), из соплодий хмеля обыкновенного (липофильная фракция). Нарушение работы миокарда вызывали с помощью кардионегативных агентов: доксорубицин, этанол и острый иммобилизационно-болевой стресс.

В результате исследований установлено, что наилучший лечебный эффект наблюдается для индивидуальных полифенольных соединений: флавон-7-рутинозид диосметина - диосмин и флаванон-7-рутинозид гесперитина - гесперидин, отличающихся между собой природой агликона.

Впервые на основании проведенных исследований взаимосвязи структура-действие выявлены вещества-лидеры - диосмин и гесперидин, оказывающие выраженный антиаритмический эффект на моделях хлоридкальциевой и строфантиновой аритмии в условиях алкогольного, доксорубицинового повреждений миокарда и при остром стрессорном воздействии в сравнении с антигипоксантами/антиоксидантами -триметилгидразиния пропионатом, цитофлавином и этилметилгидроксипиридина сукцинатом.

Выявлено, что выраженное антиаритмическое действие гесперидина и диосми-на сочетается с высокой антигипоксантной, антиоксидантной и мембраностабилизи-рующей активностью и подтверждается морфологическими данными, в некоторых случаях превосходя эффекты препаратов сравнения (триметилгидразиния пропионат, цитофлавин и этилметилгидроксипиридина сукцинат).

Практическая значимость работы

Обосновано перспективное направление создания кардиопротекторов для лечения и профилактики кардионегативных эффектов, вызванных доксорубицином, спиртом этиловым и стрессовыми факторами. Полученные данные свидетельствуют о перспективности дальнейшего углубленного изучения диосмина и геспсридина с целью создания традиционных и инновационных лекарственных форм на их основе. Представленные результаты могут послужить основанием для целенаправленного поиска веществ полифенольной структуры с кардиопротекторными свойствами.

Комплексное морфофункциональиое исследование карднопротективиых свойств диосмина и гесперидина позволяет рекомендовать диосмин и геспсридин для клинических испытаний в качестве кардиопротекторов, при лечебно-профилактическом применении в условиях терапии антрациклиновым антибиотиком доксорубицином, при алкогольной интоксикации, при профилактическом введении в условиях стрессорного воздействия.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Поиск кардиопротекторных веществ среди полифенольных соединений растительного происхождения является перспективным направлением в разработке и создании лекарственных препаратов для профилактики и лечения заболеваний, связанных с кардиотоксическим действием доксорубицина, спирта этилового и стресса.

2. Среди индивидуальных соединений и фигокомплексов полифенольной природы диосмин и гесперидин являются веществами-лидерами и при пероральном введении относятся к практически нетоксичным веществам.

3. Диосмин и гесперидин при курсовом введении оказывают выраженный антиаритмический эффект в условиях доксорубицинового, алкогольною и острого стрессорного повреждения миокарда экспериментальных животных, превосходящий в некоторых случаях по эффективности широко применяемые в практической медицине триметилгидразиния пропионат, цитофлавин и этилметилгидроксипиридина сукцинат.

4. Кардиопротекторная активность диосмина и гесперидина связана с наличием высокой антигипоксической активности, антиоксидантной и мембраностабилизи-

рующей активности в условиях доксорубицинового, алкогольного и стрессорного повреждения миокарда. 5. Морфологическое изучение миокарда крыс в условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и острого иммобилизационно-болевого стресса выявляет дисциркуляторные изменения, повреждение кардиомиоцитов с признаками нарушений сократительной способности и фрагментации мышечных волокон, характерных для нарушений ритма. Кардиоиегативные эффекты доксорубицина, этанола и стресса нивелируются введением диосмина и гесперидина в различных фар-макотерапевтических схемах лечения — уменьшают выраженность морфологических изменений.

Реализации результатов исследования

По результатам работы составлены информационные письма «Экспериментальное обоснование кардиопротективных свойств растительных и синтетических ан-тигипоксантов/антиоксидантов» и «Экспериментальное обоснование применения индивидуальных флавоноидов в качестве кардиопротективных средств», которые направлены в адрес Департаментов по здравоохранению Смоленской, Ярославской и Саратовской областей, результаты работы внедрены в научную работу ЦНИЛ (акт от 04.10.2011 г.) и кафедры госпитальной терапии СГМА (акт от 03.11.2011 г.). Результаты работы используются в ООО «НТФФ «Полисан» для научно-теоретического обоснования и пострегистрационного клинического применения при патологических состояниях, сопровождающихся метаболическими нарушениями со стороны миокарда (препарат цитофлавин, раствор для внутривенного введения), а также при монито-рировании нежелательных реакций (акт от 22.11.2011 г.), ООО «Научно-исследовательский центр биотехнологий» (акт от 01.12.2011 г.)

Результаты работы включены в лекционный материал для студентов лечебного, педиатрического, стоматологического, фармацевтического факультетов Смоленской, Ярославской государственной медицинской академии, Северо-Осетинского государственного университета им. К.Л. Хетагурова, Воронежского государственного университета, Владивостокского, Саратовского государственного медицинского университета им. В.И. Разумовского (акты от 03.02.2010 г., 29.01.2009 г., 26.04.2010 г., 13.01.2010 г., 21.12.2009 г., 13.01.2010 г.). По материалам настоящей работы получено 4 патента на изобретения и 1 рационализаторское предложение.

Апробация работы

Результаты и основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседании кафедры фармакологии с курсом фармации ФГ1К и ППС (2006, 2010), заседаниях проблемной комиссии по терапии СГМА (2006-2010). Материалы диссертационной работы доложены на 57-й, 63-й, 63-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск 2002, 2006, 2008), на Втором съезде кардиологов Южного федерального округа «Современные проблемы сердечнососудистой патологии» (Ростов-на-Дону 2002), на 2-ом Съезде Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва 2003), на II региональной научно - практической конференции молодых ученых и студентов Краснодарского края «Медицинская наука и здравоохранение» (Анапа 2004), на XII, XIII, XV, XVII, XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 2005-2011), на III Съезде фармакологов России - «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург 2007), на V Российской научно-практической конференции посвященной 15-летию Смоленского гуманитарного университета и 85-летию Санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации - «Здоровье и здоровый образ жизни: состояние и перспективы» (Смоленск 2007), юбилейной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной медицины» (Смоленск 2007), аптечном форуме «От производителя до аптеки и потребителя» (Москва 2007), конкурсе молодых ученых при администрации Смоленской области (Смоленск 2007), конференции «Медицинская наука, молодежь и современность» (Смоленск 2007), на очно-заочной конференции «Взаимодействие науки и практики» (Новополоцк-Смоленск-Белгород 2007), на пятой и шестой национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск 2007, 2009), на научно-практическом симпозиуме с международным участием «Свободно-радикальная медицина и антиоксидантная терапия» (Волгоград 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы здоровья и методы его сохранения» (Смоленск 2010).

Личный вклад автора

Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. Автором лично проведены фармакологиче-

ские эксперименты. В выполненной работе автором непосредственно осуществлена статистическая обработка полученных результатов, представлено научное обоснование с выводами и практическая реализация. Полученный результат изложен в научных публикациях и докладах, лично предложен автором для внедрения в практику.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 1, 2 и 3 паспорта специальности но фармакологии, клинической фармакологии.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 58 работ, из них в журналах, рекомендованных ВАК - 13. Внедрено одно рационализаторское предложение; получепо 4 патента на изобретения.

Структура н объем диссертации

Материал диссертации изложен на 363 страницах машинописного текста, иллюстрирован 51 таблицей и 101 рисунком. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов исследований, обсуждения и заключения, выводов и указателя литературы и приложения. Указатель литературы содержит 441 источник.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Экспериментальные исследования проведены на 535 наркотизированных хлоралгидратом (350 мг/кг) и бодрствующих белых крысах линии Вистар обоего пола массой 200-250 г, на 510 белых беспородных мышах и линии СВА обоего пола массой 19-21г. Животные содержались в условиях вивария, согласно правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ Р 5025892, ГОСТ 3 51000.3-96 и 51000.4-96) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997). Эксперименты были одобрены на заседании секции «Экспериментальные и общетеоретические работы» этическим комитетом Смоленской государственной медицинской академии (протокол от 09 ноября 2006 г. №2).

В настоящем исследовании проведен фармакологический скрининг 12 веществ, среди которых индивидуальные соединения и фитокомплексы полифенольной природы. Все вещества получены на базе Пятигорской государственной фармацевтической академии. Скрининг осуществлен с применением дозы 30 мг/кг массы тела животного на фоне однократного введения доксорубицина гидрохлорида в дозе 1 мг/кг массы тела животного. Исследовались фитокомплексы природного происхождения и индивидуальные вещества полифенольной структуры, активность которых была предварительно теоретически спрогнозирована: индивидуальный флавоноид диосмин из травы вики изменчивой; сумма, содержащая арабиноглюкозид - и ксилоглюкозид диосмети-на, которая условно названа флавицином; индивидуальный флавоноид гесперидин из кожуры цитрусовых; сухие экстракты из околоплодника и листьев орехов черного и грецкого, фракции из травы череды трехраздельной; липофильная фракция и индивидуальный флавоноид патулетин из цветков бархатцев распростертых; липофильная фракция из шишек хмеля обыкновенного.

Учитывая, что все полифенольные комплексы и индивидуальные флавоноиды плохо растворимы или трудно растворимы в воде, растворы готовили предварительно суспендировав их с лецитином. Исследуемые полифенольные соединения вводили перорально путем принудительного зондирования.

В качестве препаратов позитивного контроля на всех этапах исследования использовались: триметилгидразиния пропионат - 100 мг/кг (милдронат) - Сппс1ех, эксклюзивный дистрибьютор в РФ Фармстандарт ОАО; цитофлавин - 1,5 мл/кг - Поли-сан НТФФ ООО; этилметилгидроксипиридина сукцинат - 50 мг/кг (мексидол) - Фар-масофт НИК ООО, произведено Эллара МЦ ООО. Препараты сравнения милдронат и мексидол вводили перорально, цитофлавин - внутрибрюшинно.

Доксорубициновая интоксикация Доксорубицин является как эффективным агентом группы антрациклинов, так и хорошо изученной моделью кардиомиопатии (Лушникова Е. Л. и соавт., 2004; За-рипова И. В., 2008). Механизм антрациклиновой токсичности связан с прямым, непосредственным повреждением кардиомиоцитов, и непрямым повреждающим действием, связанным с образованием свободных радикалов. Имеются данные о том, что наибольшее повреждающее действие оказывают не сами антрациклины, а их метаболиты - доксорубицинол. Токсические механизмы реализуются в повреждение миоци-

тов, прежде всего - миофибрилл, что приводит к нарушению сократительной способности миокарда и как следствие - к сердечной недостаточности (Сипров А. В., 2008). Учитывая то, что доксорубицина гидрохлорид вводится строго внутривенно, содержимое флакона растворяли в изотоническом растворе натрия хлорида. Приготовленный раствор вводили в дозах 1 мг/кг (в/в) и 10 мг/кг (внб) массы тела животного.

Алкогольная интоксикация Многообразные нарушения, развивающиеся в результате алкогольной интоксикации затрагивают практически все виды обмена веществ (Моисеев В. П. и соавт., 2009). К наиболее важным повреждающим эффектам, формирующимся на этапах катаболизма этилового спирта, относится интенсификация процессов свободно-радикального окисления липидов биомембран в различных органах. В методических указаниях по изучению препаратов для лечения алкоголизма лабораторным животным предоставляют свободный доступ к сосудам с алкоголем 10% или 15% раствором этанола. Диапазон концентраций спирта этилового варьирует от 10% до 30%. Некоторые эксперименты предполагают введение более высоких доз от 4,5 г/кг у крыс и 5,5 г/кг у мышей (Хабриев Р. У. и соавт., 2005) По литературным данным (Доркина Е.Г. и соавт., 2007) острое алкогольное отравление моделируют путем введения спирта этилового в дозе 7,5 мл/кг внутрибрюшинно в виде 33% водного раствора 2 раза в сутки. В наших экспериментах для моделирования повреждения миокарда спирт этиловый в виде 50% водного раствора вводили перорально через зонд в объеме 8 мл/кг массы тела животного в течение семи суток.

Острый иммобилизационно-болевой стресс По литературным данным (Островский О. В. и соавт., 1985; Дьяков А. А., 2002; Болотова Е.В., 2009) исследование кардиопротективного действия веществ проводится в условиях острого эмоционально-болевого стресса, вызываемого путем подвешивания животных за дорсальную шейную кожную складку длительностью 24 часа. В наших экспериментах использовали модель острого иммобилизационно-болевого стресса. Животных фиксировали за конечности на спине и за дорсальную шейную кожную складку длительностью 24 часа. О выраженности общего стрессорного воздействия на организм животного судили по состоянию триады стрессорного повреждения (изменение массы вилочковой железы, селезенки и надпочечников, эрозивно-

язвенное поражение слизистой оболочки желудка (Перцов С. С., 1995; Крюкова Н. О., 2010).

Изучение антиаритмической активности на хлоридкальциевой модели аритмии у крыс изложено в Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Хабриев Р. У. и соавт., 2005). Высокие дозы кальция хлорида (200-250 и до 300 мг/кг) вызывают тяжелые нарушения сердечного ритма, заканчивающиеся обычно летальной фибрилляцией желудочков. Крысам раствор 10% кальция хлорида вводится в хвостовую вену. В наших экспериментах хло-ридкальциевую аритмию индуцировали у крыс внутривенным (в яремную вену) быстрым (1-2 сек) введением кальция хлорида по 0,1 мл 10% раствора на 100,0 массы тела животного.

Строфантиновую модель аритмии индуцировали путем в/в (яремная вена) введения крысам строфантина К в дозе 0,5 мг/кг (Хабриев Р. У. и соавт., 2005). Электрокардиограмму регистрировали на портативном одноканалыюм ЭКГ аппарате Heart Mirror 1 IKO. За критерий антиаритмического эффекта принимали уменьшение в процентах случаев экстрасистолий, аритмий и процент предотвращения изучаемым веществом гибели животных.

Изучение острой токсичности проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ». Для расчета ЛД50 был использован метод Кербера (Хабриев Р. У. и соавт., 2005). Критериями оценки острой токсичности служили картина интоксикации и выживаемость животных в течение 48 часов. Дальнейшее наблюдение проводили в течение двух недель, причем в первый день после введения животные находились под непрерывным наблюдением.

Для оценки неврологического статуса животных в условиях эксперимента применялся тест «открытого поля» (ОП) в настоящее время широко применяется в различных экспериментальных исследованиях (Зарубина И. В. и соавт., 2006).

Изучение противогипоксического действия проводилось на моделях: 1) нормо-барическая гипоксия с гиперкапнией («баночная» гипоксия); 2) циркуляторная гипоксия (ишемия) мозга (Stockmans F., 1991; Гацура В. В, 1993; Воронина Т. А. и соавт., 2000, 2005).

Для косвенной оценки состояния перекисного окисления липидов в сыворотки крови крыс пользуются определением малонового диальдегида (МДА). Для определения ТБК-активных (реагирующих с тиобарбитуровой кислотой) продуктов в сыворотке крови крыс за основу был взят метод, основанный на превращении гидроперекисей липидов ПОЛ в МДА и окрашивании последнего с ТБК. Устойчивость эритроцитов к спонтанному гемолизу in vivo изучали по методу Ягера, основанного на фотометрическом определении экстинкции (540 нм) внеэритроцитарного гемоглобина, поступающего в среду вследствие спонтанного лизиса мембран эритроцитов, индуцированного перекисным окислением липидов кислородом воздуха (Строев Е. А. и со-авт.. 1986).

В гомогенате миокарда крыс определяли активность ферментов лактатдегидро-геназы (ЛДГ) креатинкиназы (КК). Эти исследования были выполнены на биохимическом анализаторе «Ultra» фирмы «Копе» (Финляндия) с использованием реактивов фирмы Olvex (Россия). Определение содержания ионов кальция строили по методу (Barnett R.N., et all., 1973): кальций в щелочной среде образует окрашенный комплекс с о-крезолфталеин комплексоном.

Биоимпедансометрию проводили на экспериментальной установке, состоящей из генератора ('.временного напряжения, двух регистрирующих напряжение устройств и электродов (Федоров Г. Н. и соавт., 2005). Биоимпедансометрию миокарда проводили в области верхушки, для чего вводили электроды из инертного металла в ткань на глубину I мм (частота тока 10 кГц, напряжение 1,02 V). Импеданс замеряли троекратно в разных точках на площади 5 мм2 с последующим расчетом средней вели-чиины импеданса (Zcp.). Эксперименты выполнены на базе центральной научно-исследовательской лаборатории СГМА.1

После декапитации животных сердца извлекали из грудной клетки и забирали для морфогистологического исследования2. Миокард крыс фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, после чего подвергали стандартной гистологической проводке с заливкой в парафин и изготовлением срезов толщиной 5-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. С полученных микропрепаратов изготовлены

' Выражаем благодарность заведующему центральной научно-исследовательской лабораторией ГБОУ ВПО СГМА Минздравсои-разаитмя России, старшему научному сотруднику, к.м.н. Г. II. Федорову

1 Благодарим за помощь в выполнении фрагмента работы к.м.н., доцента кафедры патологической анатомии ГБОУ ВПО СГМА

Минздравсоцразвития России А. С. Новикова

микрофотограммы, для этого использовали микроскоп «Ах^аг», цифровую камеру и пакет анализа изображений Видеотест 3.0. Гистологические исследования кардио-биоптатов выполнены на базе ОГБУЗ Смоленского областного института патологии под руководством директора д.м.н., профессора А. Е. Доросевича.

Методы статистической обработки Статистический анализ всех полученных данных проводили с помощью методов вариационной статистики. Статистическую достоверность оценивали путём применения ^критерия Стьюдента для непарных выборок. Проверку статистических гипотез осуществляли на уровне зависимости = 0,05 (Хабриев Р.У. и соавт., 2005).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Изучение кардиопротектнвной активности индивидуальных соединений и фитокомнлексов полифеиольной природы в условиях доксорубицннового повреждения миокарда животных

В ходе эксперимента установлено,, что согласно табуляции классов токсичности, исследуемые индивидуальные соединения относятся к малоопасным, а суммарные фракции полифенольной природы к умеренно опасным веществам (Сидоров К. К., 1970). Полученные результаты показали возможность применения полифенольных соединений в качестве лечебно-профилактических средств для фармакотерапии сердечно-сосудистых патологий разного экспериментального генеза.

При скрининговом изучении антиаритмическую активность всех соединений оценивали по выживаемости животных и времени жизни животных до необратимой остановки сердца, длительности аритмии или по ее предотвращению в условиях док-сорубициновой интоксикации. Исследуемые соединения вводили однократно перо-рально за 60 мин до в/в введения доксорубицина в дозе 1 мг/кг, затем через 30 минут в/в раствор кальция хлорида. Для в/в введения канюлировали яремную вену наркотизированных крыс (табл. 1).

Как следует из табл. 1 у интактных животных аритмии возникали в 100% случаев, экстрасистолии регистрировали в 42,8% случаев. По сравнению с интакгной группой, у контрольных животных введение кальция хлорида на фоне доксорубицина достоверно уменьшало время до появления первых нарушений сердечного ритма и до необратимой остановки сердца в среднем на 49%, развитие аритмий отмечено у всех животных, летальные исходы констатировали в 100% случаев.

Таблица 1- Влияние изучаемых объектов на течение аритмии, вызванной внутривенным введением кальция хлорида у крыс в условиях доксорубициновой интоксикации

Группы животных, п=6 Количество погибших животных, % Время (сек) жизни до остановки сердца у крыс Время (сек) восстановления синусового ритма у выживших крыс

Интакт 100 25,7±7,8 (п=7) 0

Контроль - доксорубицин, 1 мг/кг 100 13,1±5,5* (п=6) 0

Однократное введение лекарственных веществ +доксорубицин в дозе 1 мг/кг

Дносмин, 30 мг/кг 83,3 63,0±15,6*# (п=5) 720(п=1)

Гесперидин, 30 иг/кг 83,3 56,0±8,9*# (п=5) 60 (п=1)

Патулетин, 30 мг/кг 100 13,7±11,8 (п=6) 0

Флавицин, 30 мг/кг 100 12,5±4,1* (п=6) 0

Сухой экстракт из околоплодника ореха черного, 30 мг/кг 100 30,8±13,1# (п=6) 0

Сухой экстракт из околоплодника ореха грецкого, 30 мг/кг 66,6 27,5±15,0 (п-4) 120(п=2)

Сухой экстракт из листьев ореха черного, 30 мг/кг 100 15,3±10,8 (п=6) 0

Сухой экстракт из листьев ореха грецкого, 30 мг/кг 100 15,0±1,9 (п=6) 0

Липофильная фракция из цветков бархатцев распростертых, 30 мг/кг 100 79,1±5,8*# (п=6) 0

Фракция из травы череды трехраздель-ной (экстрагент 40% этанол), 30 мг/кг 100 17,5±5,2*(п=6) 0

Фракция из травы череды трехраздель-ной (экстрагент 96% этанол), 30 мг/кг 100 12,8±7,2*(п=6) 0

Липофильная фракция из шишек хмеля обыкновенного, 30 мг/кг 100 14,5±6,5*(п=6) 0

Примечаиия: 1. р<0,01 - * -достоверно относительно интактной группы животных; 2. р<0,05 -# - достоверно относительно доксорубицина; 3. здесь и далее - п - количество животных.

У животных, защищенных диосмином (табл. 1), введение кальция хлорида на фоне интоксикации доксорубицином привело к существенному увеличению продолжительности жизни животных (4,8 раза) относительно патологического контроля. Аритмии развивались в 100% случаев, тем не менее, отмечали выживаемость крыс в 16,7% случаев. Животные, которым однократно вводили гесперидин на фоне доксорубицина после введения аритмогенного фактора, достоверно дольше жили (4,3 раза) относительно патологического контроля. При 100% развитии аритмий выживаемость крыс зарегистрирована в 16,7% случаев.

В условиях аритмии (табл.1), у животных защищенных сухим экстрактом из околоплодника ореха грецкого, продолжительность жизни увеличилась в 2 раза относительно контрольных крыс. Хотя аритмии развивались в 100% случаев, тем не ме-

нее, было отмечено в 33,4% случаев выживание. В аналогичных условиях введение липофильной фракции из цветков бархатцев распростертых продемонстрировало наличие антиаритмической активности, которая проявлялась в увеличении продолжительности жизни животных в 6 раз относительно группы контрольных животных. При введении патулетина, хотя и наблюдали уменьшение экстрасистолий и возникновение аритмий на 16,7%, время жизни крыс было сопоставимо с патологическим контролем. Однократное введение флавицина совместно с доксорубицином сокращало время жизни крыс в условиях аритмии. В группе животных, которым вводили сухие экстракты из околоплодника ореха черного и из листьев ореха грецкого и черного, не вызывали восстановление сердечного ритма и летальность составила 100%. Антиаритмическая активность у фракций из травы череды трехразделыюй не была установлена, хотя было отмечено снижение развития экстрасистолий относительно контрольных значений. Эффекты под влиянием липофильной фракции из соплодий хмеля и доксорубицина были сопоставимы с патологическим контролем.

Изучение антигипоксических свойств у потенциальных кардиопротекторных препаратов является важным этапом их доклинического исследования. Для реализации этой цели моделировали циркуляторную и гипоксию с гиперкапнией (табл. 2).

Таблица 2 - Дозозависимое влияние полифенольных соединений на выживаемость __мышей при гнноксии с гиперкапнией, (п=9) _

Группа Исследуемые вещества Время жизни животных, мин

1. Интакт 105,1±3,3

2. Доксорубишш 10 иг/кг 55,245,2

Изучаемые вещества + доксорубишш 10 мг/кг

3. Гесперидин 7,5 мг/кг + доксорубишш 10 мг/кг 63,8±10,6

4. Гесперидин 15 мг/кг 69,946,2

5. Гесиеридин 30 мг/кг 95,144,9*

6. Гесперидин 60 мг/кг 69,6410,6

7. Гесперидин 120 мг/кг 62,844,8

8. Диосмин 7,5 мг/кг 65,246,6

9. Диосмшк15 мг/кг 58,949,0

10. Диосмин 30 мг/кг 99,145,4*

П. Дносмин 60 мг/кг 72,848,6

12. Диосмин 120 мг/кг 68,346,0

13. Сухой экстракт из околоплодника ореха грецкого 7,5 мг/кг 49,045,6

14. Сухой экстракт из околоплодника ореха грецкого 15 мг/кг 39,643,4

15. Сухой экстракт из околоплодника ореха грецкого 30 мг/кг 54,745,6

16. Сухой экстракт из околоплодника ореха грецкого 60 мг/кг 41,4±3,1

17. Сухой экстракт из околоплодника ореха грецкого 120 мг/кг 43,244,0

18. Липофильная фракция из цветков бархатцев распростертых 7,5 мг/кг 42,643,9

Продолжение табл. 2

19. Липофильная фракция из цветков бархатцев распростертых 15 мг/кг 53,6±3,6

20. Липофильная фракция из цветков бархатцев распростертых 30 мг/кг 60,3±4,1

21. Липофильная фракция из цветков бархатцев распростертых 60 иг/кг 48,0±3,9

22. Липофильная фракция из цветков бархатцев распростертых 120 мг/кг 52,9±2,8

Примечания: 1. р<0,05 - *- достоверно по отношению к патологическому контролю.

Задача данного эксперимента состояла в том, чтобы подобрать наиболее эффективную дозу для исследуемых веществ-лидеров (диосмин, гесперидин, сухой экстракт из околоплодника ореха грецкого и липофильная фракция из цветков бархатцев распростертых) для проведения дальнейших опытов. Соединения вводили затри часа до моделирования гипоксии, доксорубицин вводили однократно внутрибрюшинно за час до моделирования гипоксического воздействия в диапазоне доз от 7,5 до 120 мг/кг на фоне доксорубицина в дозе 10 мг/кг однократно внб (табл.2).

Далее ангигипоксическую активность вществ-лидеров в наиболее активной дозе 30 мг/кг массы тела сравнивали с препаратами позитивного контроля: мексидолом, милдронатом и цитофлавином (рис.1).

Рисунок 1 - Влияние диосмипя и гесперндина на выживаемость мышей при гипоксии с гиперкапнией в условиях доксорубициновой интоксикации, (п=9)

Примечания; 1. р<0,05 - * - достоверно по отношению к интактным значениям: 2. р<0,001 - Н -достоверно по отношению к патологическому контролю.

По данным литературы (Зарубина И. В. И соавт., 2000; 2004; 2006) антигипок-санты, независимо от точки приложения их действия, в первую очередь должны увеличивать продолжительность жизни животных, подвергнутых воздействию острой гипоксии. В этом состоит их первичное антигипоксическое действие. В контрольной

группе животных продолжительность жизни мышей уменьшалась практически в два раза относительно интактных животных. При введении диосмина в условиях доксо-рубициновой интоксикации продолжительность жизни животных увеличилась в среднем на 94,9%. При введении гесперидина, в аналогичных условиях, продолжительность жизни мышей увеличилась достоверно на 102,5%.

В процессе изучения защитных свойств индивидуальных флавоноидов в опытах на мышах, подвергнутых острой гипоксии, было установлено достоверное повышение резистентности животных к кислородному голоданию относительно контрольной группы животных. Антигипоксический эффект диосмина и гесперидина был сопоставим с антигипоксичсской активностью препаратов сравнения.

Нередко одновременно встречается несколько типов гипоксии, что сопровождается наиболее глубокими нарушениями метаболизма, например, сочетание гипок-сической гипоксии с относительной ишемией. Представляло интерес изучить зависимость доза-эффекта субстанций гесперидина и диосмина на фоне доксорубицина в сравнительном аспекте на устойчивость животных к циркуляторной ишемии при лечебно-профилактическом введении в течение семи суток до гипоксии и трое суток после перевязки сонных артерий (табл. 3).

Таблица 3 - Влияние флавоноидов на выживаемость крыс при ишемии мозга

Группы животных, п=6 Выживаемость животных через

24 часа 48 часов 72 часа

Абс. % Абс. % Абс. %

Ложнооперированные животные 6 100 6 100 6 100

Животные с ишемией мозга 2 33 1 17 1 17

Контроль (доксорубиции+ишемия мозга) 2 33 1 17 _ *

Лечебно-профилактическое введение препаратов на фойе доксорубицина+ишемия мозга

Гесперидин 7,5 мг/кг 2 33 2 33 2 33

Гесперидин 15 мг/кг 3 50 3 50* 3 50*

Гесперидин 30 мг/кг 5 83* 5 83* 4 67*

Гесперидин 60 мг/кг 3 50 3 50* 2 33

Гесперидин 120 мг/кг 3 50 3 50* - .

Диосмин 7,5 мг/кг 3 50 3 50* 3 50*

Диосмин 15 мг/кг 2 33 2 33 2 33

Диосмин 30 мг/кг 4 67* 3 50* 3 50*

Диосмин 60 мг/кг 2 33 2 33 2 33

Дносмнн 120 мг/кг 2 33 2 33 1 17

Триметилгидразиния пропионат 100 мг/кг 5 83* 4 67* 4 67*

Цитофлавин 1,5 мл/кг 5 83* 3 50* 3 50*

Этилметилгидроксипиридина сукцинат 50 мг/кг 5 83* 5 83* 4 67*

Примечания: 1. р<0,05 - * - достоверные различия по отношению к патологическому контролю.

В соответствии с результатами проведенных исследований (табл. 3), отмечали 100 % выживаемость ложнооперированных животных через 48 часов после операции. К концу третьих суток все ложнооперированные животные остались живы (100% случаев). В группе крыс с двусторонней окклюзией сонных артерий в первые сутки гибель животных зарегистрирована в 67% случаев. На вторые сутки летальность животных данной группы составила 83% случаев. Через 72 часа после ишемии отмечено 17% выживших крыс. В группе крыс на фоне доксорубициновой интоксикации с двусторонней окклюзией сонных артерий через сутки погибло 66,6 % животных. В опыте отмечено, что контрольные животные, дольше других находились в боковом положении, медленнее выходили из наркоза. К концу вторых суток все животные погибли. При моделировании ишемии под влиянием субстанции гесперидина и диосмина наблюдалось достоверное увеличение выживаемости животных во все сроки наблюдения. Наиболее длительный достоверный антигипоксический эффект наблюдали под влиянием субстанций диосмина и гесперидина в дозе 30 мг/кг. В эксперименте отмечали снижение антигипоксического эффекта с увеличением дозы изучаемых веществ. Данный антигипоксический эффект был сопоставим с активностью препаратов сравнения.

Таким образом, в наших опытах показано, что в условиях доксорубициновой интоксикации резко возрастает влияние на организм гипоксических факторов. Гипок-сическая агрессия, индуцированная доксорубицином, сокращает продолжительность жизни экспериментальных животных в условиях острой гипоксии с гиперкапнией, а также значительно уменьшает выживаемость животных в острый период циркулятор-ной ишемии мозга. Индивидуальные полифенольные соединения диосмин и геспери-дин при однократном и лечебно-профилактическом введении на фоне доксорубициновой интоксикации оказывают защитное действие на обеих моделях гипоксии, что свидетельствует об их высокой антигипоксической активности.

В ходе изучения антиаритмической активности диосмина и гесперидина при однократном введении (табл. 4) установлено, что у интактных крыс при введении кальция хлорида аритмии и экстрасистолии возникали в 50 и 100% случаев соответственно.

Время жизни крыс до необратимой остановки сердца в среднем составило 18,6±2,4 сек. Выживших животных не отмечалось. По сравнению с интактной груп-

пой, у животных на фоне противоопухолевого антибиотика при введении кальция хлорида достоверно уменьшалось время до появления первых нарушений сердечного ритма и до необратимой остановки сердца в среднем на 42% относительно интактных значений. Возникновение аритмий и экстрасистолий зафиксировано в 100% случаев. Отмечена 100% гибель контрольных животных. В ходе эксперимента установлено, что индивидуальные флавоноиды при однократном применении на фоне противоопухолевого антибиотика, достоверно увеличивают продолжительность жизни животных (в среднем в 3 раза) после введения кальция хлорида относительно контрольных значений. Под влиянием диосмина выжило 50% крыс, у которых было зарегистрировано восстановление синусового ритма, экстрасистолии регистрировали в 66,6%, количество погибших крыс составило 50%. В группе крыс, которым вводили гесперидин, развитие аритмий и экстрасистолий регистрировали в 100%, количество погибших крыс составило 100%, время жизни до необратимой остановки сердца увеличилось в три раза относительно контрольных значений.

Таблица 4 - Влияние флавоноидов при однократном введении на течение аритмии, вы-

званной внутривенным введением кальция хлорида на фоне докеорубнцииа у крыс

Группы ЖИВОТНЫХ, 11=6 Количество погибших животных, % Время (сек) жизни крыс до необратимой остановки сердца Время (сек) восстановления синусового ритма у выживших крыс

Интакт 100 18,6±2,4 (п=6) 0

Контроль - доксоруби-цни 10 мг/кг 100 10,8*2,4* (п=6) 0

Однократное введение лекарственных веществ+доксорубицин в дозе 10 мг/кг

Дносмин 30 мг/кг 50 35,0±10,0 П (п=3) 143,3±32,1 (п=3)

Гесперидин 30 мг/кг 100 33,3±3,9#(п=6) 0

Примечания: 1. р<0,001-* - достоверно по отношению к интактным значениям; 2. р<0,05 - # -достоверно по отношению к патологическому контролю.

Учитывая, тот факт, что препараты растительного происхождения вводятся длительно и в разных режимах дозирования, следующий этап работы включал курсовое профилактическое введение диосмина и геспервдина с целью коррекции кардио-негативноро действия доксорубицина гидрохлорида.

Как следует из табл. 5, в группе интактных крыс после введения кальция хлорида аритмии развивались в 100% случаев, экстрасистолии отмечены в 33,3% случаев. У контрольных крыс аритмии и экстрасистолии возникали в 100% случаев, время жизни до необратимой остановки сердца составило 11,3±1,6 сек, гибель животных

отмечена в 100% случаев. В опыте доказано, что диосмин при профилактическом введении на фоне противоопухолевого антибиотика достоверно увеличивает продолжительность жизни животных при хлоркальциевой аритмии в 6 раз, а гесперидин в аналогичных условиях в 3 раза. Защитное действие при профилактическом введении в большей степени проявляет диосмин.

Таблица 5 - Влияние флавоноидов при курсовом профилактическом введении на течение аритмии, вызванной внутривенным введением кальция хлорида на фойе доксору-

бнцина

Группы ЖИВОТНЫХ, 11=6 Количество погибших животных, % Время (сек) жизни крыс до остановки сердца

Интакт 100 35,8±13,5 (п=6)

Контроль-доксорубиции 10 мг/кг 100 11,3±1,6* (п=6)

Профилактическое введение лекарственных веществ+доксорубнцип в дозе 10 мг/кг

Диосмин 30 мг/кг 100 67,5±6,8*#0 (11=6)

Гесперидин 30 мг/кг 100 31,6±1,8* # (п=6)

Примечания: 1. р<0,05 - * - достоверно по отношению к интактным значениям; 2. р<0,05 - # -достоверно по отношению к патологическому контролю; 3. р<0,05 - 0- достоверно относительно животных, которым профилактически вводили гесперидин на фоне однократного введения доксоруби-цина.

Учитывая наличие антиаритмической активности диосмина и гесперидина при однократном и профилактическом введении, следующий эксперимент мы посвятили изучению этого эффекта при лечебно-профилактическом введении в сравнительном аспекте (табл. 6, 7).

Таблица 6 - Влияние дносмипа и гесперидина при курсовом введении на течение аритмии, вызванной внутривенным введением кальция хлорида у крыс в условиях доксо-рубициновой интоксикации

Группы животных, п=6 Количество погибших животных, % Время (сек) остановки сердца у погибших крыс Время (сек) восстановления синусового ритма у выживших крыс

Ннтякт 100 27,5±6,9 (п=6) 0

Контроль - Доксорубицин 10 мг/кг 100 11,7±1,4" (п=6) 0

Лечебно-профилактическое введение лекарственных веществ+доксорубицин в дозе 10 мг/кг

Диосмин 30 мг/кг 85,7 58,8±11,6*#0 (п=6) 300,0 (п=1)

Гесперидин 30 мг/кг 85,7 17,8=4,2 *Ю+ (п=6) 360,0 (п=1)

Триметнлгидразиния пропионат 100 мг/кг 50 81,1±37,8*# (п=6) 0

Цнтофлавин 1,5 мл/кг 50 96,6±47,2 (п=3) 300,0± 120,0 (п=3)

Этилметилгидроксипи-ридина сукиинат 50 мг/кг 50 87,0±37,2 (|1=3) 370,3±104,8 (п=3)

Примечания: 1. р<0,0| - * - достоверно по отношению к интактным значениям; 2. р<0,05 - # -достоверно по отношению к патологическому контролю: 3. р<0,05 - 0 - достоверно относительно гесперидина, 4. р<0,01 - @ - достоверно относительно милдроната; 5. р<0,05 - + - достоверно относительно мексидола

При изучении антларитмической активности диосмина и гесперидина при лечебно-профилактическом введении (табл. 6) установили, что у интактных крыс при введении кальция хлорида развитие аритмий и гибель животных отмечена в 100% случаев. Экстрасистолии развивались у животных в 42,8% случаев. Продолжительность жизни крыс до необратимой остановки сердца составила 27,5±6,9 сек. В контрольной группе при введении кальция хлорида развитие аритмий и экстрасистолии и гибель животных зарегистрирована в 100% случаев, время жизни крыс до необратимой остановки сердца под воздействием доксорубицина уменьшилось в 2,3 раза. Индивидуальный флавоноид диосмин на фоне противоопухолевого антибиотика при лечебно-профилактическом введении достоверно увеличивает время необратимой остановки сердца животных при хлоркальциевой аритмии в 5 раз относительно контрольных животных. Под влиянием диосмина и гесперидина на фоне антибиотика было отмечено по одному выжившему животному.

При замене аритмогенного фактора кальция хлорида на строфантин К (табл. 7) установлено, что введение аритмогена интактной группе животных уже через 10 мин вызывает первые нарушения сердечного ритма, в 42% случаев - экстрасистолию и необратимую остановку сердца через 70 мин.

Таблица 7 - Влиянне диосмина и гесперидина при лечебно-профилактическом введении на течение аритмии, вызванной внутривенным введением строфантина К у крыс в ус_ловиях доксорубнциновой интоксикации

Группы животных, п=6 Количество погибших животных, % Продолжительность жизни (мни) до необратимой остановки сердца Время (мин) восстановления синусового ритма у выживших крыс

Интакт 100 70,0±15,4 (п=6) 0

Контроль- ДоксорубицинЮ мг/кг 100 31,6±2,5 * (п=6) 0

Лечебно-профилактическое введение лекарственных вешестн+доксотбишш в лоте 10 мг/кг

Диосмин 30 мг/кг 100 246,6±82,6 *# (п=6) 0

Геспериднн 30 мг/кг 66,6 225,0±28,8 (п=4) 70,5±0,71 (п=2)

Триметнлгидразиния пропионат 100 мг/кг 100 91,7±15,7 *» (п~6) 0

Цитофлавин 1,5 мл/кг 83,3 133,0±13,0 *# (п=5) 70,0 (п=1)

Этилметилгидроксипири-дина сукцинаг 50 мг/кг 66,6 112,5±12,5*#(п=4) 45,0±7,1 (п=2)

Примечания: 1.'-достоверно по отношению к интактным значениям; 2.#-достоверно по отношению к патологическому контролю.

Продолжительность жизни животных до необратимой остановки сердца под влиянием доксорубицина достоверно снизилась (в 2 раза) относительно интактных

крыс. На фоне доксорубицина время наступления первых нарушений сердечного ритма (чаще экстрасистолий), фибрилляций и остановка сердца после введения строфантина происходит значительно раньше, чем у интактных животных. Эти данные свидетельствуют о кардиотоксическом действии доксорубицина, о его аритмогенном действии. При защите миокарда гесперидином продолжительность жизни животных до необратимой остановки сердца увеличивается в 7 раз относительно контрольных крыс. Количество погибших животных в группе наблюдали в 66,6% случаев. Лечебно-профилактическое введение диосмина в условиях доксорубициновой интоксикации на фоне введения строфантина К увеличивает продолжительность жизни животных до необратимой остановки сердца в 8 раз относительно контрольной группы крыс. Количество погибших животных в группе наблюдали в 100% случаев.

Таким образом, при введении аритмогенных факторов - кальция хлорида и строфантина К крысам на фоне лечебно-профилактического введения диосмина и гесперидина в условиях доксорубициновой интоксикации установили кардиопротек-тивное действие, которое проявилось в увеличении продолжительности жизни животных до остановки сердца и в более полном восстановлении функционального состояния миокарда крыс. Антиаритмические эффекты были сопоставимы с эффектами препаратов позитивного контроля.

Установлено, что диосмин и гесперидин ингибирующе влияют на процессы пе-роксидации в гомогенате миокарда и сыворотке крови крыс. Антиоксидантные эффекты флавоноидов были сопоставимы с активностью препаратов сравнения.

При определении степени спонтанного гемолиза эритроцитов установлено (рис. 2). что при введении доксорубицина степень гемолиза достоверно увеличивалась в среднем на 48% относительно интактных показателей. На фоне введения диосмина в условиях доксорубициновой интоксикации степень гемолиза снижалась на 27,8% (р<0,05) по сравнению с контролем. При лечебно-профилактическом введении гесперидина на фоне доксорубицина достоверно снижался спонтанный гемолиз эритроцитов на 28.9% (р<0,05). При курсовом введении триметилгидразиния пропионата на фоне введения противоопухолевого антибиотика степень гемолиза эритроцитов снижался на 19,1% относительно доксорубицина. Цитофлавин и этилметилгидрокси-пиридина сукцинат понижали данный показатель на 29,7% соответственно относительно контрольных значений.

too

группы ж

Ш локспрубипин н ДО« 1 Ol4(/K>

■ пиосмни п дом ЗО MI /К1 -(-докгорз'Пицин ■> дои Юмг/кг т 1сс1№ридн11 п дою ЗОмг/кг+аошоруГшшш ■> дою Юмг/кг

тримстнлгндртиния пропиошг в дою IООмг/кг+доксор^бнияк в дож 1 Пиг/ьл Я. цигофляпин ■> объеме 1 ,SmJI/KI+Локсорубииин п доэе IIImi /ki

О .гнлметилгилрокенпириликп ivkiihhiit п дою SO мг/ю+доксор^биции и яте Юмг/ю

Рисунок 2 - Влияние диосмина и гссперидиня при лечебно-профилактическом введении на степень спонтанного гемолиза эритроцитов по Ягеру, п=6

Примечания: 1. р<0,05 - # - достоверность различий по отношению к патологическому контролю.

В эксперименте о динамике метаболических процессов судили по активности ферментов лактатдегидрогеназы и креатинкиназы в тканях миокарда (табл. 8).

Таблица 8 - Влияние диосмина и гесперидина на активность ферментов лакгатдегидро-_геназы и креатинкиназы в тканях миокарда на фоне доксорубицина

Группы животных, п=6 Показатели

ЛДГ (МЕ/л) КК (МЕ/л)

Интакт 172,2±21,8 40,66±8,16

Контроль - доксорубицин, 10 мг/кг 546,3±26,6* 50,50±8,68

Лечебно-профилактическое введение лекарственных веществ+ доксорубицин в дозе 10 мг/кг

Диосмин в дозе 30 мг/кг 386,2±40,2*#0&(й 41,16±6,24#

Гесперидин в дозе 30 мг/кг 456,0±47,12*# 40,00±6,92#

Триметилгидразинин пропионат 100 мг/кг 469,8±20,9*# 44,16±8,01

Цитофлавин 1,5 мл/кг 452,0±24,6*# 39,83±10,57

Этилметилгидроксипиридина сукцинат 50 мг/кг 442,5±33,7*# 39,67±7,71#

Примечания: 1. * - достоверно по отношению к интактным значениям (р<0,01); 2. # - достоверно по отношению к патологическому контролю (р<0,01); 3. 0 - достоверно по отношению к триме-тилгидразиния пропионату (р<0,01); 5. & - достоверно относительно цитофлавина (р<0,01); 6. @ -достоверно относительно этилметилгидроксипиридина сукцината (р<0,05).

При введении доксорубицина в гомогенате миокарда крыс наблюдается достоверное увеличение содержания фермента ЛДГ относительно интактных значений в 3 раза. В группе животных, защищенных гесперидином, в условиях доксорубициновой интоксикации данный показатель достоверно снижался относительно контрольных значений и был сопоставим с эффектом препаратов сравнения. У контрольных крыс содержание фермента креатинкиназы в миокарде крыс было выше в 1,25 раза. В группе крыс, защищенных диосмином и гесперидином, в условиях доксорубициновой интоксикации данный показатель был достоверно ниже контрольных значений.

В эксперименте установлено, что в условиях доксорубициновой интоксикации в гомогенате миокарда повышается содержание ионов кальция (рис. 3). В группе крыс, которым осуществляли курсовое введение гесперидина и диосмина данный показатель был достоверно ниже контрольных значений на 55 и 53% соответственно. Данные были сопоставимы с эффектами препаратов сравнения.

m кокт|мип>-д<жсо|9бнпин и дозе 1»мг/и

ЬХ яиоспии в дозе ЗОмг/ю +доксорувииин в дозе i Олпг/кг

III гесиернаин ■ > дозе ЗОмг/и +доксорубииин » дозе 1 Омг/ю

hï ишифлаиин и ойьеме 1 ,Sмл/га+докеоруСидиII в дозе IOmi /ю

П милмстнлгидроксипнриднпа сукцинит в дозе 50мг/кг)-доксорубипин в дозе Юиг/кг

Рисунок 3 - Относительные показатели динамики обмена ионов кальция в тканях миокарда крыс под влиянием диосмина, гесперидина и препаратов позитивного контроля в условиях доксорубициновой интоксикации, (п=6)

Примечания: 1. # достоверно относительно контрольных значений (р<0,001).

При обзорном рассмотрении гистологических препаратов миокарда левого желудочка сердца интактных крыс установлена типичная морфологическая картина, характерная для неизмененного миокарда. Кардиомиоциты расположены продольными параллельными пучками. Ядра кардиомиоцитов имеют овальную форму, ориентированы вдоль продольной оси волокон и занимают центральное положение, с нежной структурой хроматина. Между мышечными волокнами и параллельно им располагаются мелкие тонкие прослойки рыхлой соединительной ткани с небольшим количеством веретеновидных фибробластов.

Доксорубицин при однократном введении в дозе 10 мг/кг на 7-е сутки вызывает в миокарде левого желудочка сердца, выраженные морфологические изменения. В целом, кардиомиоциты уменьшенного диаметра, уплощенные на поперечных срезах, отдельные группы набухших кардиомиоцитов с гомогенизацией цитоплазмы. Пучки мышечных волокон извитые, волнообразные, без дискомплексации, надрывов и фрагментации. В этих волокнах исчезает поперечная исчерченность, ядра светлые, наблюдается очаговая вакуолизация цитоплазмы кардиомиоцитов с появлением мел-

ких (пылевидных) оптически пустых вакуолей. Интерстициальные пространства — без выраженных изменений, однако на отдельных участках отмечается их расширение, в них видны редкие нейтрофильные гранулоциты, лимфоциты. В межмышечных прослойках видны расширенные тонкостенные капилляры с агрегатами из малоизме-ненных эритроцитов. Обнаруживаются признаки деструкции (миоцитолиза и миоци-толизиса) отдельных кардиомиоцитов, отмечаются некрупные групповые очаги некроза кардиомиоцитов, в этих зонах отмечается наличие очагов инфильтрации поли-морфноядерными гранулоцитами, лифмоцитами (рис. 4).

тешйЮг-

// 1 V > Ч

/'М щш /

щ VI }Щ\

Рисунок 4 - Микроскопическое исследование среза сердца крысы (доксоруби-цин в дозе 10 мг/кг). Здесь и далее окраска гематоксилин-эозином. Ув.х400

Рисунок 5 - Микроскопическое исследование среза сердца крысы. 15-е сутки после курсового введения диоемина на доксоруби-цина.

1М1

' I >1 '

Рисунок 6 - Микроскопическое исследование среза сердца крысы. 15-е сутки после курсового введения гесперидина на фоне док-сорубицина.

Изменения, выявляемые после курсового введения диоемина (рис. 5) и гесперидина (рис. 6) на фоне действия доксорубицина, свидетельствуют о наличии сосудистой реакции, но значительно слабее выраженной. Признаки повреждения кардиомиоцитов имеют менее выраженный, очаговый характер с уменьшением площади участков дезорганизации, миоцитолиза.

2. Изучение кардиопротективной активности флавоноидов при остром иммоби-лизационно-болевом ст рессорном поражении миокарда животных

Влияние стрессорных факторов на организм приводит к нарушению обмена веществ в различных органах и тканях, стрессорные факторы могут потенцировать многие заболевания, в том числе и сердечно-сосудистой системы. Основным патологическим состоянием, возникающим при этом, является гипоксия.

Экспериментальные исследования показали, что профилактическое (семь суток) применение диосмина и гесперидина при моделировании гипоксии с гиперкап-нией в условиях острого стресса оказывают антигипоксический эффект, сопоставимый с препаратами сравнения, т.е. достоверно увеличивают продолжительность жизни мышей при гипоксии (рис. 7).

В группе животных, которым с профилактической целью вводили гесперидин, продолжительность жизни мышей при гипоксии с гиперкапнией достоверно увеличивалась на 20% относительно контрольной группы животных. Защитное действие диосмина проявилось в увеличение времени жизни животных в среднем на 17,4% (р<0,05) в условиях острого иммобилизационно-болевого стресса относительно контроля.

! I

Рисунок 7 - Влияние диоемина и гееперидина на выживаемость мышей при гипоксии с гиперкапнией в условия острого иммобилизационно-болевого стресса, (п=6)

Примечания: 1. р<0,05 - * - достоверно по отношению к интактным значениям; 2. р<0,05 - # -достоверно по отношению к патологическому контролю.

Как видно из табл. 9 в группе ложнооперированных крыс к концу эксперимента все 100% животных остались живы. В группе животных с двустронней перевязкой сонных артерий к окончанию третьих суток гибель животных регистрировали в 83% случаев. Пятьдесят процентов смертных случаев в контрольной группе отмечено в первые семь часов после окклюзии, при этом в группах животных защищенных диос-мином, гесперидином и препаратами позитивного контроля до семи часов не было зарегистрировано ни одного летального исхода, а 50% смертных случаев было зафиксировано от 8 до 10 часов после окклюзии. Летальность в контрольной группе составила 100% к концу трех суток.

Таблица 9 - Влияние диосмииа и гссперидина на выживаемость крыс при цнркулятор-

ной ишемии мозга в условиях острого иммобилизационно-болевого стресса

Группы ЖИВОТНЫХ, П=Й Выживаемость животных через

24 часа 48 часов 72 часа

Абс. % Абс. % Абс. %

Ложнооперированные животные 6 100 6 100 6 100

Животные с ишемией мозга 2 33 1 17 1 17

Контроль - (стрссс+ишемия мозга) 3 50 2 33 _

Профилактическое введение препаратов на фоне острого нммобшппациошго-болсс стресса+ишемия ого

Гесперидин в дозе 30 мг/кг 3 50 3 50 I 17

Диосмин в дозе 30 мг/кг 3 50 3 50 2 33*

Триметилгидразиния пропионат 100 мг/кг 4 67 4 67* 1 17

Цитофлавин 1,5 мл/кг 3 50 3 50 1 17

Этилметилгидроксилиридина сукцинат 50 мг/кг 3 50 3 50 2 33*

Примечания: 1. р<0,05 - * - достоверные различия относительно патологического контроля.

Оценка влияния диосмина и гесперидина на чувствительность миокарда крыс к аритмогенным факторам (кальция хлорид и строфантин К) производилась через 3 часа после окончания стрессирования (табл. 10, 11).

Таблица 10 - Влияние диосмина и гесперидина на течение аритмии, вызванной внутривенным введением хлористого кальция у наркотизированных крыс после острого им___мобилизационно-болевого стресса

Изучаемое вещество Количество погибших животных, % Время (сек) необратимой остановки сердца у погибших крыс Время (сек) восстановления синусового ритма у выживших крыс

Интакт 83,3 31,40±5,81(п=5) 300,0 (п=1)

Контроль - острый нммоби-лнзационно-болевой стресс 83,3 22,20±8,52 (п=5) 160,0 (п=1)

Профилактическое введение лекарственных веществ + острый иммобилнзациоино-болевой стресс

Дносмин 30 мг/кг 33,3 300,0±84,8 (п=2) 340,0±43,2 (п=4)

Геспериднн 30 мг/кг 66,7 490,0±34,64 (п=4)*# 160,0±141,4(п=2)

Триметилгидразиния пропионат 100 мг/кг 66,7 220,0±71,64 (п=4)*# 500,0±28,28 (п=2)

Цитофлавин 1,5 мл/кг 33,3 325,0±35,35 (п=2)# 505,0±330,4 (п=4)

Этилметилгидроксипиридн-на сукцинат 50 мг/кг 16,7 80,0 (п=1) 550,0±239,7 (п=5)

Примечания: I. * - достоверно по отношению к иптактным значениям; 2. # - достоверно по отношению к патологическому контролю.

При введении кальция хлорида (табл. 10) в контрольной группе развитие аритмий зарегистрировано в 100% случаев, экстрасистолий у 50% животных, гибель животных отмечалась в 83,3% случаев. Время жизни контрольных крыс, перенесших

острый стресс, до необратимой остановки сердца достоверно от интактных значений не различалось, тем не менее, у выживших животных время восстановления синусового ритма уменьшилось в 1,8 раза относительно интактных животных. На фоне профилактического введения индивидуального флавоноида диосмина в условиях острого стресса достоверно увеличивалось время необратимой остановки сердца животных при хлоркальциевой аритмии в 13,5 раз относительно контрольных животных. Важно отметить, что при 100% развитии аритмий, наличие экстрасистолий отмечали в 16,7% случаев и гибель животных регистрировали у 33,3% животных. Под влиянием геспе-ридина в аналогичных с диосмином условиях было в 83,3% случаев отмечено развитие аритмии, гибель крыс регистрировали в 66,7% случаев. Время жизни животных до необратимой остановки сердца увеличилось в 20 раз относительно контрольных крыс.

Введение строфантина К (табл. И) интактной группе животных вызывает нарушения сердечного ритма в 33,3%, в 50% случаев - экстрасистолию и необратимую остановку сердца через 70 мин.

Таблица 11 - Влияние диосмина и гесперидипа течение аритмии, вызванной внутривенным введением строфантина К у наркотизированных крыс после стресса

Группы ЖИВОТНЫХ, 11=6 Количество погибших животных, % Время (мин) жизни до необратимой остановки сердца у погибших крыс Время (мин) восстановления синусового ритма у выживших крыс

Иптакт 50 73,3±5,7(п=3) 86,6±20,8(п=3)

Контроль - острый иммо- билтацнонно-болевой стресс 100 100,0±12,6*(п=6) 0

Профилактическое введение лекарственных веществ+ острый иммобилизационно-болевой стресс

Дмосмин 30 мг/кг 0 0 103,3±28,0 (п=6)

Гесперидин 30 мг/кг 0 0 91,7±30,6 (п=6)

Три метилгидразинин пропионат 100 мг/кг 0 0 135,0±90,7 (п=6)

Цитофлавин 1,5 мл/кг 16,7 130,0 (п=1) 76,0±И,4 (п=5)

Этплметилгидроксипирн-дина сукцинат 50 мг/кг 16,7 125,0 (п=1) 81,2±26,7 (п=5)

Примечания: 1, * - достоверно относительно интактных значений.

Продолжительность жизни контрольных животных до необратимой остановки сердца при введении аритмогенного фактора достоверно снизилась относительно интактных крыс (табл.11). После перенесенного стресса у контрольных животных нарушения сердечного ритма и гибель животных отмечено в 100% случаев. В группах

животных, которым осуществляли профилактическое введение диосмина и гесперидина, в условиях острого иммобилизационно-болевого стресса при введении строфантина К не приводит к гибели животных, отмечается развитие аритмий и экстра-систолий в 16,7% случаев соответственно.

При профилактическом введении диосмина в условиях стресса количество ТБК-активных продуктов в сыворотке крови крыс было на 34% меньше относительно контроля. В группе крыс, принимавших гесперидин в аналогичных условиях, данный показатель снижался на 17% относительно контрольных значений. Введение диосмина в условиях острого иммобилизационно-болевого стресса привело к снижению ТБК-активных продуктов на 29% относительно контроля. При введении гесперидина в аналогичных условиях данный показатель снижался на 21% относительно контрольных значений. Антиоксидантный эффект был сопоставим с эффектами препаратов сравнения. Установлено, что диосмин и гесперидин ингибирующе влияют на процессы пероксидации в гомогенате миокарда крыс.

Как видно на рис. 8, введение диосмина в условиях острого стресса привело к снижению степени спонтанного гемолиза эритроцитов на 29% относительно контроля. При введении гесперидина в аналогичных условиях данный показатель снижался на 21% относительно контрольных значений.

Рисунок 8 - Изменение спонтанного гемолиза эритроцитов по Ягеру при профилактическом введении диосмина и гесперидина, п=6

Примечания: I ,р<0,05 - # - достоверно по отношению к патологическому контролю.

В эксперименте установлено (табл. 12), что в условиях острого иммобилизационно-болевого стресса при профилактическом введении диосмина и

гесперидина крысам в гомогенате снижается активность ферментов лактатдегидроге-назы и креатинкиназы относительно стрессированных крыс без медикаментозной защиты.

Таблица 12 - Активность ферментов лактатдегидрогеназы и креатинкиназы в тканях J^ll^oкapдi^Jфьlc под влиянием диосмина и гесперидина в условиях острого стресса

Группы животных, 11=6 Показатели

ЛДГ (МЕ/л) КК (МЕ/л)

Интакт 172,2±26,8 40,6±8,2

Контроль - острый иммобилизационно-болевой стресс 396,3±71,8* 46,7±2,6

Профилактическое введение лекарственных веществ+ острый иммобилизационно-болевой стресс

Диосмин 30 мг/кг 305,0±53,5*# 43,0±7,4

Гесиеридин 30 мг/кг 236,0±34,4*# 45,8±8,1

Триметнлгидразиния иропионат 100 мг/кг 226,3±52,8*# 42,2±7,5

Цитофлавин 1,5 мл/кг 229,3±41,0*# 44,6±7,3

Этилметилгидроксипиридина сукцинат 50 мг/кг 234,1±32,4*# 42,3±7,2

Примечания: 1. р<0,05 - * - достоверно относительно интактных значений; 2. р<0,05 - # - достоверно относительно контрольных значений.

Экспериментально установлено, что при повреждении миокарда содержание ионов кальция в гомогенате миокарда достоверно увеличивается в группах животных, перенесших стресс. Введение флавоноидов в группе стрессированных крыс, которым вводили с профилактической целью гесперидин содержание ионов кальция в гомогенате миокарда крыс достоверно (р<0,05) снижалось на 59 % относительно контроля (острый иммобилизационно-болевой стресс). При введении диосмина в аналогичных условиях данный показатель достоверно (р<0,05) уменьшался на 62% относительно контрольных значений.

■ (■уппиаитшимх >.■■■• •!«•'■•.-ос ■ к| |1чиоб||;1Н1ннн<1Ии»-Гми1еи<1Й стресс и Л""С1И"И " >«•»»•• ЗМмгЛо *»сг|м.1й иммибилимциопио-болевой с^ксс

И гриме|ш<|-ил|<т»111м пртпниикг п л«г«е 1«(1мг/к1 Юстрый иппобили■лциошю Лолево» стресс " Ии<'«флми»«и и ибы'ме 1.5мл/к1+пС1рый ИМмиГнишчящюнно-болоИиО стресс

>Ти.'11ИСТ||ЛГ№1|М1КСНПИр*<Л1111н сукнинит в доте 5(1мГ/«ст+острыЯ кмм■■бнлншциони^балевой с-грссс

Рисунок 9 - Содержание ионов кальция в гомогенате миокарда крыс, подвергшихся введению диосмина и гесперидина в условиях острого стресса, п=6

Примечания: 1. р<0,05 - # - достоверно относительно контрольных показателей; 2. р<0,05 - @ -достоверно относительно милдроната.

При визуальном анализе СОЖ через 4 часа после окончания стрессорного воздействия в 66,7% случаев отмечались язвенные и в 33,3 % случаев эрозивные поражения, помимо этого оказалось, что у 5 животных из 6 определялись точечные кровоизлияния под СОЖ в количестве 7±1. У животных, получавших диосмин, отмечались меньшие поражения слизистой оболочки желудка, язвенные поражения и эрозии отмечены в 33,3 % случаев, точечные кровоизлияния под СОЖ были у 3 крыс из 6 в количестве 3±1. Крысы, получавшие гесперидин, так же имели меньшие повреждения СОЖ в сравнении с контрольной группой. В этой группе язвенные поражения и эрозии отмечены в 33,3 % случаев, точечные кровоизлияния под СОЖ были у 3 крыс из 6 в количестве 4±1. При введении милдроната язвенные поражения и эрозии отмечены в 33,3 % случаев, у 50% крыс было отмечено наличие точечных кровоизлияний под СОЖ в количестве 5 -1. Под влиянием цигофлавина язвенные поражения и эрозии отмечены в 33,3 % случаев, точечные кровоизлияния под СОЖ были у 3 крыс из 6 в количестве 2±1. При приеме мексидола отмечены у 2 крыс точечные кровоизлияния под СОЖ в количестве 2±1, язвенных поражений не наблюдали, эрозивные поражения были отмечены в 66,6% случаев.

При взвешивании надпочечников, вилочковой железы и селезенки (табл. 13) у крыс через 4,5 часа после окончания стрессирования оказалось, что масса надпочечников у контрольных (стрессированных) животных была в среднем на 31,2% больше чем в группе интактных животных, масса тимуса в среднем оказалась на 45,6% меньше массы тимуса интактных крыс, масса селезенки уменьшилась в среднем на 33,6% относительно интактных значений.

В группе животных, получавших диосмин, масса надпочечников уменьшилась на 4,5%, масса тимуса увеличилась на 18,9%, масса селезенки на 20,7% относительно показателей контрольной группы крыс. У животных, получавших гесперидин, масса надпочечников уменьшилась на 7,3%, масса тимуса увеличилась на 16, 3%, масса селезенки увеличилась на 22,2% относительно показателей контрольной группы крыс. Под влиянием триметилгидразиния пропионата масса надпочечников достоверно не изменилась относительно контроля (1,9%), масса тимуса увеличилась на 21,3%, масса селезенки увеличилась на 20% относительно патологического контроля. Цитофлавин - масса надпочечников уменьшилась в среднем на 16,2%, масса тимуса увеличилась на 19,5%, масса селезенки увеличилась на 26,6% относительно контрольных значе-

ний. При введении этилметилгидрокеипиридина сукцината масса надпочечников уменьшилась на 17,6%, масса тимуса увеличилась на 51,7%, масса селезенки увеличилась на 21,1% относительно контроля.

Таблица 13 - Изменение массы надпочечников, тимуса и селезёнки животных при им-мобилизационно-болевом стрессе и при введении исследуемых соединений

Гесперидин, 30 мг/кг

Группы животных, п=6

Масса надпочечников, мг/0,1кг массы тела

Масса тимуса, мг/0,1кг массы тела

Масса селезёнки, мг/0,1кг массы тела

Интакт

28,20± 2,80

108,5±8,9

339,16±30,4

Контроль - острый стресс

37,0±3,16

59,0±7,6

225,0±21,67

Профилактическое введение лекарственных веществ + оетрьш стресс

Диосмин, 30 мг/кг

Триметилгидразиния про-пионат 100 мг/кг

270,0± 16,4*

Цитофлавин 1,5 мл/кг

Этилметилгидроксипириди-на сукцинат 50 мг/кг

30,5±2,7*

Примечания: I. р<0,05 - * - достоверно относительно патологического контроля; 2. р<0,05 -достоверно относительно милдроната.

В миокарде животных, подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу, ядра некрупные, вытянутые, с мелкоглыбчатым хроматином. Поперечная ис-черченность нечеткая. Достаточно выражены признаки фрагментации кардиомиоци-тов — мышечные волокна истончены, извитые, местами надорванные, с очагами миоцитолиза и диапедезных кровоизлияний (рис. 10).

Рисунок 10 - Миокард левого желудочка сердца крысы, перенесшей острый иммобилизационно-болевой стресс

Рисунок 11 - Миокард левого желудочка сердца крысы, перенесшей острый иммобилизационно-болевой стресс+диосмин

Рисунок 12 - Миокард левого желудочка сердца крысы, перенесшей острый иммобилизационно-болевой стресс + гесперидин

При микроскопическом исследовании миокарда животных, подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу и введению диосмина в дозе 30 мг/кг, клетки четко дифференцированы, сохранена исчерченность, периваскулярного отека и инфильтрации нет. Явления фрагментации практически отсутствуют (рис. 11). В группе животных, подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу и введению гесперидина в дозе 30 мг/кг, микроскопическая картина идентична картине при введении диосмина - клетки четко дифференцированы, структура их сохранена, интерстициалыюго и периваскулярного отека, фрагментации кардиомиоцитов нет (рис. 12).

При микроскопическом исследовании миокарда животных подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу и введению этилметилгидроксипиридина сукцината клетки четко дифференцируются, отеков, очагов некроза нет. В миокарде животных, подвергшихся введению цитофлавина после перенесенного стресса, клетки четко дифференцируются, отеков, очагов некроза нет, поперечная исчерченность сохранена. В группе животных подвергшихся стрессу и введению триметилгидрази-ния пропионата, в миокарде при микроскопическом исследовании мышечные волокна очагово истончены, имеется слабо выраженный межмышечный отек, периваскуляр-ная лимфоцитарная инфильтрация. Структура клеток и мышечных пучков сохранена.

3. Изучение кардиопротективной активности флавонондов при алкогольном повреждении миокарда животных

Существует мнение (Моисеев В.П. и соавт., 2009), что этанол и его метаболит ацетилальдегид оказывают прямое повреждающее воздействие на клеточные и субклеточные мембраны кардиомиоцитов, связанное с их способностью растворять ли-пиды и увеличивать текучесть биологических мембран. На определенном этапе интоксикации это может вызывать нарушение обмена веществ в миокарде и ингибиро-вание основных путей утилизации энергии в клетках сердца, в результате угнетения функции дыхательной цепи митохондрий возникает гипоксия миокарда.

Исследования были посвящены сравнительному изучению антигипоксической активности диосмина и гесперидина на фоне введения спирта этилового в течение семи суток (рис. 13).

Рисунок 13 - Влияние диосмина и гесиеридина на выживаемость мышей при гипоксии с гиперкапнией в условия алкогольной интоксикации, (п=9)

Примечания: 1. р<0,05 * - достоверно по отношению к интактным значениям; 2. р<0,05 # -достоверно но отношению к патологическому контролю.

Экспериментально установлено, что контрольные животные жили в условиях гипоксии с гиперкапнией на 50% меньше интактпых. Защитное действие диосмина проявилось в увеличение времени жизни животных на 46% в условиях алкогольной интоксикации относительно патологического контроля. В группе животных, которым вводили гесперидин, продолжительность жизни мышей при гипоксии достоверно увеличивалась на 25,6% относительно контроля. Применение диосмина и геспериди-на на фоне этанола (семь суток) при глобальной ишемии мозга, оказывают антиги-поксический эффект, достоверно увеличивая продолжительность жизни животных, и удлиняют период до первого смертельного исхода (табл. 14).

Таблица 14 - Влияние диосмииа и гесперидина на выживаемость крыс при ниркуля-_торной ишемии мозга в условиях алкогольной интоксикации_

Группы животных, п=6 Выживаемость животных через

24 часа 48 часов 72 часа

Абс. % Абс. % Абс. %

Ложнооперированные животные 6 100 6 100 6 100

Животные с ишемией мозга 2 33 1 17 1 17

Контроль - этанол+ишемии мозга 1 17 0 0 0 0

Лечебное введение лекарственных веществ+ишемия мозга на фоне спирта этилового

Гесперидин 30 мг/кг 2 33 2 33* 0 0

Дносмин 30 мг/кг 3 50* 3 50* 0 0

Триметилгидразиния прочионат 100 мг/кг 1 17 1 17 0 0

Цитофлавин 1,5 мл/кг 2 33 1 17 1 17

Этилметилгидроксипиридииа сукцинаг 50 мг/кг 2 33 1 17 1 17

Примечания: р<0,05 * - достоверные различия по сравнению с патологическим контролем.

При хлоридкальциевой аритмии (табл. 15), сравнивая защитное действие индивидуальных флавоноидов диосмина и гесперидина, можно отметить, что более полное восстановление функционального состояния миокарда наблюдается в случае применения диосмина относительно контрольных групп животных, по процентному количеству выживших животных диосмин также превосходил активность препаратов сравнения.

Таблица 15 - Влияние диосмина и гесперидина на теченне аритмии, вызванной внутривенным введением кальции хлорида у крыс а условиях алкогольной интоксикации

Группы животных, п=6 Количество погибших животных, % Время (сек) необратимой остановки сердца у погибших крыс Время (сск) восстановления синусового ритма у

Интакт 100 44,17*14,9 (п=6) 0

Контроль - этанол 50% 8 мл/кг 100 24,17*9,2* (п=6) 0

Лечебное введение лекарственных вешеетв+спирт тшпшй

Диосмин 30 мг/кг 50 70,0±17,3#(п=3) 233,3*57,7 (п=3)

Гесперндип 30 мг/кг 83,3 226,0*45,6*0 (п=5) 200,0(11=1)

Триметилгидразиния пропионат 100 мг/кг 33,3 103,0*78,18 (п=4) 420,0±169,7(п=2)

Цитофлавин 1,5 мл/кг 100 93,67±29,81 (п=6) 0

Этилметилгидроксипиридина сукцинат 50 мг/кг 83,3 70,8*9,12*# (11=5) 500,0 (п=1)

Примечания. 1.'-достоверно по отношению к интактным значениям; 2.#-достоверно по отношению к патологическому контролю.

Таблица 1С - Влияние диоемнна и гесперидина на течение аритмии, вызванной внутри —венным введением строфантина К у крыс на фоне алкогольной интоксикации

Группы животных, п=6

Интакг

Контроль - спирт этиловый

Количество погибших животных, %

100

100

Время (мин) необратимой остановки сердца у погибших крыс

85,0*16,4 (п=6)

55,0±5,5* (п=6)

Время (мин) восстановления еппусового ритма у выживших _крыс_

0

Диосмин 30 мг/кг

Лечебное введение лекарственных веществ+спирт этиловый

0

Геспериднн 30 мг/кг

Триметилгидразиния про-пчочат 100 мг/кг

Цитофлавни 1,5 мл/кг

Этилметилгидроксипириди-на сукцинат 50 мг/кг

83,3

66,7

50

33,3

83,3

74,0±4,1# (п=5)

72.5±2,8# (п=4)

94,33±28,91 (п=3)

100,0*42,42 (п=2)

75,0±20,61 (п=5)

95,0 (п=1)

100,0^42,4 /и=2)

110,Шг17,32 (п-3)

97,5*59,09 (п=4)

150,0 (п=1)

Примечания: 1.»-достоверно относительно интактнон группы животных; 2.#-достоверно относительно спирта этилового.

Учитывая повреждающее действие спирта этилового можно заключить, что диосмин и гесперидин, как индивидуальные соединения, обладают кардиопротектив-пым действием в условиях данной патологии.

Свободно проникая к самым различным клеткам, этанол оказывает действие на их плазматические мембраны. В условиях алкогольной интоксикации активация сво-боднорадикапьного окисления зарегистрирована в миокарде (Антоненков, В. Д., 1992). В этой связи при определении антиоксидангной активности геспсридина и ди-осмина в сравнительном аспекте установлено, что при введении диосмина или геспе-ридина на фоне этанола количество ТБК-акгивных продуктов в сыворотке крови крыс снижалось на 52% и 42% соответственно относительно контроля. Установлено, что диосмин и гесперидин также ингибирующе влияют на процессы пероксидации в го-могенате миокарда крыс. Введение диосмина на фоне этанола привело к снижению степени спонтанного гемолиза эритроцитов па 30% относительно контроля. При введении гесперидина в аналогичных условиях данный показатель снижался на 31% относительно контрольных значений (рис. 14).

□ к<н; 11, > II. ; и и [п 11 ни I. и 1.1 ч

БЗ /1и<к'мип в Ион- ЗОмг/кг+снирг этиловый Ы l4.CIU.fWMI И IH.ll' 3()МГ/КГ+СПИ|ТГ -этиловый

а ТрИМсГИЛ! НЩМПИНИИ МРОПНОНЩ Н .1IIИ' |11(1м1 /|СГ - |-||||[|[ ЭТИЛОВЫЙ

О ПИШфЛЙВИП И Ofll.l-.MI- 1,5М-1|/К1 1||11Н||[ -этиловый

И III IМI- III II 11.11,)|.I .111|||»1 IIIIIII СукПИННТ II ДО 1С 50МГ/К1 +СПИрт -ЭТИЛОВЫЙ

Рисунок 14 - Влияние диосмина и гесперидина в условиях алкогольной интоксикации на спонтанный гемолиз эритроцитов по Ягеру, п=6

Примечания: р<0,05 # - достоверно по отношению к патологическому контролю.

Далее определяли активность ЛДГ и КК в гомогенате миокарда крыс (табл. 17).

Таблица 17 - Активность ферментов лактатдегидрогеназы и креатинкиназы в тканях миокарда под влиянием флавоноидов в условиях алкогольной интоксикации

Группы животных, п=6 Показатели

ЛДГ (МЕ/л) КК (МЕ/л)

Интакт 172,2±26,8 40,6±8,2

Контроль - этанол 50% в объеме 8 мл/кг 477,66±104,0* 64,16±9,3*

Лечебное введение лекарственных веществ+спирт этиловый

Диосмин, ЗОмг/кг 247,3±30,4*# 46,5±8,3#

Гесперидин, ЗОмг/кг 216,8±41,6*# 51,0±4,9*#

Триметилгидразиния пропионат 100 мг/кг 224,3±30,8*# 50,2±12,2#

Цнтофлавин 1,5 мл/кг 240,8±37,4*# 4<э,3±0,4#

Этилметилгидроксипирнднна еукцинат 50 мг/кг 201,8±46,7# 47,6±8,0#

Примечания: I. р<0,05- * - достоверно по отношению к интактным значениям; 2. р<0,05 -# -достоверно по отношению к патологическому контролю.

При введении спирта этилового в гомогенате миокарда крыс наблюдается достоверное увеличение активности фермента ЛДГ относительно интактных значений в 3,5 раза. В группе животных, защищенных гесперидином, в условиях алкогольной интоксикации данный показатель относительно контрольных животных достоверно снижался на 55%. При введении диосмина на фоне алкогольной интоксикации данный показатель достоверно снижался относительно контрольных животных на 48%.

Активность фермента креатинкиназы в миокарде контрольных крыс было выше в 1,5 раза относительно интактных значений. В группе крыс, защищенных диосмином и гесперидином, в условиях алкогольной интоксикации данный показатель был достоверно ниже контрольных значений на 28 и 21% соответственно. В миокарде животных, которым вводили препарат сравнения милдронат, данный показатель в условиях алкогольной интоксикации достоверно снижался на 22%. При введении цитофлавина на фоне спирта этилового наблюдали достоверное снижение данного показателя на 28% относительно контроля. При введении мексидола наблюдали достоверное снижение содержания креатинкиназы в миокарде крыс в условиях алкогольной интоксикации на 26% относительно контрольных значений.

В ходе эксперимента установлено, что в условиях алкогольной интоксикации при введении диосмина и гесперидина крысам понижается содержание ионов кальция в гомогенате миокарда относительно контрольных крыс без медикаментозной защиты (рис. 15).

СО конгрпль-спирг этншшый

ЕЯ диосмин в до 1с ЗОмг/кг+снир! этиловый

Е Гссперидин о до »е ЗОмг/кгЧ-спиргг »'гм-ПовыИ

03 грчметпг идротиния пропиошп ■> ДОН' 1 (Юмг/кг+снн[» Тш юпый С: мигоф лш.ии г» объеме I ,5мл/кг-»-С11И|ТГ этиловый

и >1И'1Металг ид роке ипиршипи сукцинптв лип- 50мг/кг+сгшрг :>тшювы1|

Рисунок 15 - Содержание ионов кальция в миокарде крыс, подвергшихся введению диосмина и гесперидина в условиях алкогольной интоксикации, п=6

Примечания: I. # - достоверно относительно спирта этилового (р<0,05).

Изменение импеданса ткани, как показателя сопротивления электрическому току, на наш взгляд, может являться свидетельством морфо-функциональных изменений в миокарде (табл. 18).

Таблица 18 - Влияние диосмина и гесперидина на величину импеданса ткани миокарда в условиях алкогольной интоксикации

Группы животных, п=6 /-.„Ом

Интакгнаигруппа 203,3±28,46

Контроль - спирт этиловый 50% в объеме 8 мл/кг 159,0±21,82*

Лечебное введение лекарственных веществ+спирт этиловый

Диосмин 30 мг/кг 202,0±20,66 #о<а,&

Гесперидин 30 мг/кг 190,3±17,48#

Тримегилгидразиния пропионат 100 мг/кг 191,8±15,53Ш

Цитофлавин 1,5 мл/кг 175,3±14,20#

Этилметилгндроксиииридина сукцинат 50 мг/кг 186,8±19,55#

Примечание: 1. р<0,05 - * - достоверно относительно интактной группы животных: 2. р<0,05 -Н - достоверно относительно патологического контроля: 3. О - достоверно относительно этилметил-гидроксипиридина сукцината (р<0,05); 4. р<0,05 - @ - достоверно относительно цитофлавина; 5. & -достоверно относительно тримегидгидразиння пропионата (р<0,05).

Можно думать, что при алкогольной интоксикации нарушается, прежде всего, водно-электролитный баланс, так как он имеет решающее значение для электрохимической проводимости тканей. Показатели импедансометрии миокарда подтверждают активное кардиопротскторное действие полифенольных соединений, превосходящее эффекты препаратов позитивного контроля.

При алкогольной интоксикации (рис. 16) наблюдаются неспецифические изменения, свидетельствующие о значительном повреждении миокарда: отмечается набухание кардиомиоцитов, диффузно рассеянные некрупные очаги некроза, миоцитоли-зиса и миоцитолиза, умеренная периваскулярная лимфоцитарная инфильтрация, признаки фрагментации кардиомиоцитов, характерные для фибрилляции и нарушений ритма. Имеющиеся проявления можно объяснять как прямым мембранотоксическим действием алкогольной интоксикации, гак и вторичными дисциркуляторными нарушениями. В группе животных, подвергшихся введению спирта этилового и диосмина (рис. 17), при микроскопическом изучении миокарда его структура нарушена незначительно — явления интерстициального отека выражены слабо, очаги миоцитолиза -малочисленные, мелкие. Структура ядер на нарушена, практически нет периваску-лярной инфильтрации. Явлений фрагментации мышечных пучков практически нет. У животных, подвергшихся введению спирта этилового и гесперидина (рис. 18), при гистологическом исследовании в миокарде незначительно выраженный отек, очагов

некроза не выявлено, периваскулярной инфильтрации нет. Отмечаются некрупные очаги дискомплексации мышечных пучков, и достаточно типична - очаговая пролиферация фибробластов перикапиллярно.

Рисунок 16 - Гистологиче- Рисунок 17 - Гистологический срез миокарда живот- ский срез миокарда животного группы крыс, полу- ного группы крыс, получавших спирт этиловый чавших диосмин на фоне спирта этилового

Рисунок 18 - Гистологический срез миокарда животного группы крыс, получавших гесперидин на фоне спирта этилового

Таким образом, учитывая данные литературы и результаты собственных исследований, полученных в ходе выполнения настоящей работы, можно предполагать возможность использования диосмина и гесперидина в качестве эффективных карди-опротекторов для предупреждения инициации повреждения миокарда различного ге-неза. Это даёт основание рекомендовать проведение дальнейших экспериментальных исследований указанных соединений на других моделях повреждения миокарда, а также проведение клинических испытаний кардиопротекторных свойств полифе-нольных соединений.

ВЫВОДЫ

1. Обоснован выбор веществ полифенольной природы из травы вики изменчивой (диосмин и сумма, содержащая арабиноглюкозид - и ксилоглюкозид диосметина, которая условно названа флавицином), кожуры цитрусовых (гесперидин), цветков бархатцев распростертых (патулетин и липофильная фракция), околоплодников и листьев ореха черного и ореха грецкого, травы череды трехраздельной (сухие экстракты); соплодий хмеля обыкновенного (липофильная фракция) для поиска лекарственных веществ с кардиопротекторной активностью.

2. Изучена острая токсичность флавоноидов и установлено, что согласно табуляции классов токсичности, исследуемые индивидуальные соединения относятся к малоопасным, а суммарные фракции полифенольной природы к умеренно опасным веществам. Для диосмина и гесперидина 1ЛЭ5О>6000 мг/кг массы тела животного.

3. Изучено дозозависимое противоаритмическое действие флавоноидов и доказано, что из всех выбранных для фармакологического исследования индивидуальные соединения диосмин, гесперидин и полифенольные композиции из околоплодника ореха грецкого и цветков бархатцев распростертых в дозе 30 мг/кг обладают выраженным антиаритмическим действием на фоне введения кальция хлорида в условиях доксорубициновой интоксикации (1 мг/кг).

4. Изучена антигипоксическая активность флавоноидов в сравнительном аспекте с препаратами позитивного контроля. Установлено, что диосмин и гесперидин в дозе 30 мг/кг массы тела увеличивают продолжительность жизни животных во все сроки наблюдения на моделях гипоксии с гиперкапнией и циркуляторной гипоксии в условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и при остром им-мобилизационно-болевом стрессе.

5. Изучена антиаритмическая активность веществ-лидеров в сравнительном аспекте с препаратами позитивного контроля. Доказано, что диосмин и гесперидин в дозе 30 мг/кг при однократном, профилактическом, лечебном и лечебно-профилактическом введении оказывают антиаритмическое действие на фоне доксорубициновой, алкогольной интоксикации и при остром иммобилизационно-болевом стрессе на экспериментальных моделях аритмий сердца (хлоридкальцие-вой и строфантиновой).

6. Изучено влияние флавоноидов на процесс перекисного окисления липидов мембран. Установлено, что диосмин и гесперидин при различных схемах введения (профилактическое, лечебное и лечебно-профилактическое) ингибируют процесс перекисного окисления липидов в гомогенате миокарда и сыворотке крови крыс и процесс спонтанного гемолиза эритроцитов на фоне введения доксорубицина гидрохлорида, спирта этилового и при остром иммобилизационно-болевом стрессе.

7. Изучено влияние флавоноидов на стабилизацию мембран кардиомиоцитов путем определения активности ферментов лактатдегидрогеназы, креатинкиназы и содержания ионов кальция в гомогенате миокарда. Установлено, что профилактиче-

ское, лечебное и лечебно-профилактическое введение диосмина и гесперидина на фоне доксорубицина, спирта этилового и при остром иммобилизационно-болевом стрессе в гомогепате миокарда крыс понижают активность ферментов лактатде-гидрогеназы, креатинкиназы и снижают содержание ионов кальция.

8. Методом импедансометрии подтверждена возможность выявления функциональных нарушений работы миокарда в условиях алкогольной интоксикации и установлена их коррекция диосмином и гесперидином в дозе 30 мг/кг массы тела животного.

9. В условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и острого иммобилиза-ционно-болевого стресса при микроскопическом изучении имеются дисциркуля-торные изменения и повреждение кардиомиоцитов с признаками нарушений сократительной способности и фрагментации мышечных волокон, что характерно для нарушений сердечного ритма и фибрилляции миокарда. Введение диосмина и гесперидина в различных фармакотерапевтических схемах лечения (профилактическое, лечебное и лечебно-профилактическое) в условиях антрациклиновой, алкогольной интоксикации и острого иммобилизационно-болевого стресса уменьшают выраженность морфологических изменений — явления деструкции, "фрагментации кардиомиоцитов, миоцитолиза и миоцитолизиса либо не отмечаются, либо носят менее выраженный, очаговый характер.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Монографии

1. Новиков, В. Е. Кардиотоксичность антрациклиновых антибиотиков и ее коррекция био-флавоноидами: монография / В. Е. Новиков, А. В. Крикова. - Смоленск- Издательство СГМА, 2008. - 92с.

2. Патенты

1. Патент 2341188 Российская Федерация, МПК А61В 5/05. Способ биоимпедансомстрии миокарда в эксперименте // А. В. Крикова [и др.]. - № 2007133763; заявл 10 09 2007 опубл. 20.12.2008. Бюл. № 35,- 3 с.

2. Патент 2347525 Российская Федерация, МПК А61В 5/00. Способ диагностики алкогольной кардиомиопатии в эксперименте // А. В. Крикова [и др.]. - № 2007133056' заявл 03.09.2007; опубл. 27.02.2009. Бюл. № 6,-3 с.

3. Патент 2355041 Российская Федерация, МПК G09B 23/28. Способ диагностики антрациклиновой кардиомиопатии в эксперименте //А. В. Крикова [и др.]. -X« 2007145869- заявл 10.12.2007; опубл. 10.05.2009. Бюл. № 13.-3 с.

4. Патент 2414921 Российская Федерация, МПК А61К 36/48. Стресс-протекторное средство // А. В. Крикова [и др.]. - № 200145349; заявл. 07.12.2009; опубл. 27.03.2011. Бюл. № 9 -7 с.

5. Рационализаторское предложение. Способ воспроизведения аритмии с помощью кальция хлорида в эксперименте // В.Е. Новиков, A.B. Крикова, И.О. Крюкова - .№1518 от 02.04.2007 г. '

3. Работы, опубликованные в журналах, рекомендованных ВАК

1. Крикова, А. В. Эффективность растительных флавоноидов в условиях субхронической интоксикации этанолом / А. В. Крикова, О. Э. Оганесян, Э. Ф. Степанова // Научное обозрение- М.: «Наука», 2005. - №6. - С.16-18.

2. Влияние липофильной фракции хмеля обыкновенного на гемодинамику бодрствующих крыс при профилактическом введении / А. В. Крикова [и др.] // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии,- 2005. - №1. - С. 54-56.

3. Крикова, А. В. Возможность коррекции кардиотоксического действия противоопухолевого антибиотика растительными флавоноидами / А. В. Крикова, Э. Ф. Степанова // Вестник новых медицинских технологий - 2005.-Т.XII, №3-4.-С. 94-97.

4. Степанова, Э. Ф. Технология приготовления таблеток с микрокапсулами диосмина / Э. Ф. Степанова, А. В. Крикова // Вестник новых медицинских технологий. - 2006,-T.XI1I, №2.-С. 144.

5. Биологическая активность растительных источников флавоноидов / А. В. Крикова [и др.] // Фармация. - 2006.-N3.- С. 36-37.

6. Крикова, А. В. Профилактика аритмогенного действия доксорубицина полифенольными соединениями / A.B. Крикова, Э. Ф. Степанова // Омский научный вестник. - 2006,- Ч. 1 .№3 (37). - С. 145-147.

7. Крикова, А. В. Противоаритмическое действие флавоноидов при аритмогенных поражениях миокарда на фоне субхронического введения спирта этилового / А. В. Крикова // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии - 2006. - №4. - С. 54-56.

8. Изучение фармакологической активности суммарных комплексов череды трехразделыюй / А. В. Крикова [и др.] // Кубанский научный медицинский вестник. - Краснодар, 2006,-№10 (91).-С. 62-66.

9. Крикова, А. В. Эффективность диосмина и гесперидина при стрессе у крыс / А. В. Крикова // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.-2007.-№2.-С. 45-47.

10. Тюренков, И. Н. Влияние доксорубицина на чувствительность миокарда к действию аритмогенных факторов / И. Н. Тюренков, Э. Ф. Степанова, А. В. Крикова//Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. Приложение. - Волгоград,-2008.-№4 (28).-С. 2-3.

11. Состав и биологические свойства полифенолов череды трехразделыюй / А. В. Крикова [и др.] // Фармация. - 2008,-№1,- С. 33-35.

12. Изучение фармакологической активности полифенольных соединений в условиях алкогольной интоксикации / А. В. Крикова [и др.] // Бюллетень сибирской медицины,- 2011.-Т.10, №5.-С,70-73.

13. Крикова, А. В. Влияние диосмина и гесперидина на морфофункциональное состояние миокарда крыс при остром стрессорном воздействии / A.B. Крикова, В.Е. Новиков, A.C. Новиков // Медицинский Вестник Северного Кавказа,- 2011,-№3.-С. 61-64.

4. Прочие работы по теме диссертации

1. Изучение биологической активности глицина и гесперидина на нормотензивных животных / А. В. Крикова [и др.]. Пятигорск, 2002.-19с. - Деп. ВИНИТИ РАН 11.07.02, №1310-В2002.

2. Крикова, А. В. Сердечно - сосудистые эффекты гесперидина у нормотензивных крыс / А. В. Крикова // Региональная конференция по фармации, фармакологии и подготовке кадров: материалы...-Пятигорск, 2002. - Вып. 57.-С. 168-169.

3. Крикова, А. В. Структурно - функциональные особенности коронарной гемодинамики при применении гесперидина / А. В. Крикова, Ю. Н. Мокин, Т. А, Лысенко // Региональная конференция по фармации, фармакологии и подготовке кадров: материалы...-Пятигорск, 2002. -Вып. 57.-С.168-169.

4. Матершов, С. В. Изучение влияния флавоноидов в сочетании с аспарагиновой кислотой на параметры системной гемодинамики у бодрствующих крыс / С. В. Матершов,

Г. В. Масликова, А. В. Крикова // Современные проблемы сердечно-сосудистой патологии: материалы второго съезда кардиологов Южного федерального округа 28 мая 2002г -Ростов-на-Дону, 2002. - С.285-286.

5. Крикова, А. В. Функциональное состояние миокарда при применении гссперидина у нор-мотензивных животных / А. В. Крикова, Т. А. Лысенко, Э. Т. Оганесян // Современные проблемы сердечно-сосудистой патологии: второго съезда кардиологов Южного федерального округа 28 мая 2002г. - Ростов-на-Дону.-2002. - С.256.

6. Исследование биологической активности соединений синтетического и природного происхождения / А. В. Крикова [и др.] // Фундаментальные проблемы фармакологии- тезисы доклЛ Съезда Рос. науч. общества фармакологов 21-25 апреля 2003 г. - М.:, 2003. - 4.1 .7. Пужалин, А. Н. Влияние физиологического раствора и солюбилизатора твин-80 на сердечно-сосудистую систему (точность регистрации данных сердечно-сосудистой системы при катетеризации) / А. Н. Пужалин, А. В. Крикова, M. Н. Ивашев. - Пятигорск 2003 -29 с. - Деп. ВИНИТИ РАН 12.11.02, №1947-В2002. '

8. Крикова, А. В. Кардиогемодинамические эффекты под влиянием комбинации глицина и гесперидина в условиях экспериментального ишемического инсульта / А В Крикова // Медицинская наука и здравоохранение: материалы И регион, науч.-практ. конф молодых ученых и студентов Краснодарского края 21-23 апреля, 2004. - Анапа, 2004.-С 150-152

9. Степанова, Э. Ф. Орех грецкий - источник биологически активных веществ для коррекции патологических состояний (обзор) / Э. Ф. Степанова, И. Н. Тюренков, А. В Крикова //1 ационалыюе питание: пищевые добавки и биостимуляторы, №3, 2004-М., 2004 -С 6062. '

10. К вопросу о возможности применения ореха черного в комплексной фармакотерапии сосудистых патологий / А. В. Крикова [и др.] // Рациональное питание: пищевые добавки и биостимуляторы.-М., 2004. -№3. - С.63-65.

П.Степанова, Э.Ф. Кардиогемодинамические эффекты под влиянием гесперидина у инсультных бодрствующих крыс / Э. Ф. Степанова, И. Н. Тюренков, А. В. Крикова // Успехи современного естествознания.-М., 2004. -№10. -С. 126.

12. Некоторые аспекты морфологических особенностей коронарной гемодинамики при применении природного флавоноида гесперидина / А. В. Крикова [и др.] // Успехи современного естествознания. -М., 2004. - №10. -С.129.

13. Степанова, Э. Ф. Влияние липосомального геля с фитокомпозицлей ореха черного арники горной, каштана конского на развитие и инволюцию венозного отека / Э. Ф. Степанова, H. Н. Камова, А. В. Крикова //Успехи современного естествознания.-М 2004 -С 130

14. Степанова, Э. Ф. Антиаритмические свойства растительного флавоноида диосмина на фоне введениядоксорубицина/Э. Ф. Степанова, A.B. Крикова, Г. С. Гаранян//Медлайн.

М,, 2005. • т. ™ С.39.

15. Крикова, А. В. К вопросу о коррекции кардиотоксического действия доксорубицина / А. И. Крикова, Э. Ф. Степанова // Медлайн. - М„ 2005. - №6. - С.40.

16. Степанова, Э. Ф. Антиаритмические свойства растительного флавоноида диосмина на фоне внутривенного введения доксорубицина / Э. Ф. Степанова, А В Крикова Г С Гаранян // Медлайн. - М., 2005. - №6. - С.39. '

17. Крикова, А. В. Возможность применения растительных флавоноидов при неблагоприятных последствиях противоопухолевой терапии / А. В. Крикова, Э. Ф. Степанова // Известия высших учебных заведений Северо- Кавказский регион. Фармакология Естественные науки,- Ростов-на-Дону, 2006.-С. 25-27.

18. Получение липофильной фракции из цветков Tagetes patula, ее качественный и количественный состав и изучение антиаритмической активности / А. В. Крикова [и др 1 // Пятигорск,-2006,-18с. - Деп. ВИНИТИРАН 13.01.06 №1Ю-В2006

19. Влияние суммарных фракций череды трехраздельной на гемодинамику нормотензивных крыс / А. В. Крикова [и др.] // Современные проблемы науки и образования - М., 2006, №2-С.-105-106.

20. Фитохимическое изучение состава надземной части растений Вики изменчивой (Vicia variabilis freyn et sint) и Вики Гроссгейма (Vicia grossheimii freyn et sint) / А. В. Крикова [и др.] // Человек и лекарство: тезисы докладов 13-го Российского национального конгресса 3-7 апреля 2006 г. -М, 2006. - С.609.

21. Антигипоксические эффекты диосмина и гесперидина / А. В. Крикова [и др.] // Человек и лекарство: тезисы докладов 13-го Российского национального конгресса 3-7 апреля 2006 г. - М, 2006. - С.779.

22. Крикова, А. В. Антиаритмическая активность суммарных экстрактов из череды трехраздельной / А. С. Микаэлян, А. В. Крикова // Человек и лекарство: тезисы докладов 13-го Российского национального конгресса 3-7 апреля 2006г. - М., 2006. - С.786.

23. Фармакологические эффекты липофильной фракции хмеля обыкновенного при профилактическом введении / А. В. Крикова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: материалы 60-й межрегиональной конференции по фармации, фармакологии - Пятигорск, 2006, - С.442-443.

24. Острая токсичность сухого экстракта из околоплодника и листьев ореха черного /

A. В. Крикова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: материалы 60-й межрегиональной конференции по фармации, фармакологии

- Пятигорск, 2006. - С.338-339.

25. Новиков, В. Е. Кардиопротекторное действие растительных флавоноидов на фоне алкогольной интоксикации этанолом / В. Е. Новиков, А. В. Крикова, Э. Ф. Степанова // Математическая морфология. Электронный математический и медико-биологический журнал.

- Т. 5. - Вып.4. - 2006. - URL: http://ww.smolensk.ru/user/sgma/MMORPH/N-12-html/novikov/novikov. html.

26. Крикова, А. В. Кардиопротективное действие антиоксидантов при антрациклиновой интоксикации и создание на их основе твердой лекарственной формы / А. В. Крикова, Н. О. Крюкова // Конкурс молодых ученых: Сборник материалов - Смоленск: Универсум, 2007.-С. 107-110.

27. Новиков, В. Е. Изучение антиоксидантного действия растительных флавоноидов на фоне доксорубицина гидрохлорида / В. П. Новиков, А. В. Крикова, Н. О. Крюкова//Пятая национальная научно-практическая конференция с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека», Материалы конференции - Смоленск, ФГУ «Смоленский ЦНТИ», 2007. - С. 114-116.

28. Новиков, В. Е. Эффективность мексидола при иммобилизационно-болевом стрессе крыс /

B. Е. Новиков, А. В. Крикова // Актуальные проблемы современной медицины: Сборник научных трудов - Смоленск: СГМА, 2007. - С.410-414.

29. Влияние фракций череды трехраздельной и суммарного экстракта из цветков бархатцев распростертых при аритмогенных поражениях на фоне доксорубицина / А. В. Крикова [и др.] // Аптечный Форум «От производителя до аптеки и потребителя»: Тезисы докладов -М., 2007. - С.-106-107.

30. Кардиопротективное действие диосмина при субхронической алкогольной интоксикации / А. В. Крикова [и др.] // Аптечный Форум «От производителя до аптеки и потребителя»: Тезисы докладов - М, 2007.-С. -111.

31. Леонов, С. Д. Применение биоимпедансометрии миокарда для оценки повреждающего действия этилового спирта в эксперименте / С. Д. Леонов, А. В. Крикова, Н. О. Крюкова// «Медицинская наука, молодежь и современность»: Материалы конференции - Смоленск, 2007. -С.53.

32. Новиков, В. Е. Влияние диосмина и гесперидина на устойчивость животных к гипоксии с гиперкапиней / В. Е. Новиков, А. В. Крикова // Фармакология - практическому здраво-

охранению: Материалы III съезда фармакологов России 23-27 сентября - СПб 2007 Т 7 Ч.1.-С.1-1751 -1-1752. ' ' ''

33. Новиков, В. Е. Антиаритмичсское действие милдроната, цитофлавнна и мексидола в условиях длительной алкоголизации / В. Е. Новиков, А. В. Крикова, Н О. Крюкова // Здоровье и здоровый образ жизни: состояние и перспективы. Медико-психологические, социальные, правовые и экологические аспекты: Сборник трудов V Российской научно-практической конференции посвящен 15-летию Смоленского гуманитарного университета и 85-летига Санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации - Смоленск, 2007. - С.365-367.

34. Леонов, С. Д. Применение бкоимпедансометрии миокарда для оценки повреждающего действия этилового спирта в эксперименте / С. Д. Леонов, Н. О. Крюкова, А. В. Крикова // Медицинская наука, молодежь и современность: Материалы конференции,- Смоленск,-2007. "С, 53.

35. Крюкова, Н. О. Эффективность мексидола и диосмина при иммобилизационно-болевом стрессе в эксперименте / Н. О. Крюкова, А. В. Крикова, С. Д. Леонов // Свободноради-кальная медицина и антиоксидантная терапия: Материалы научно-практического симпозиума с международным участием: Волгоград, 2008.-С.15.

36. Применение биоимпедансометрии миокарда для оценки кардиопротекторного действия мексидола в условиях хронической алкоголизации крыс / А. В. Крикова [и др.] // Человек и лекарство: Тез. докл.15 Рос. нац. конгресса 14-18anp.2008r.-M.-2008.-C.657.

37. Изучение гастропротекгорных свойств антигипоксантов при стресс-индуцированном уль-церогенезе / А. В. Крикова [и др.] // Человек н лекарство: Тез. докл.15 Рос. нац конгресса 14-18апр.2008г.-М.-2008.-С.647-648.

38. Кардиотокснческие эффекты анграцнклнновых антибиотиков / А. В. Крикова [и др ] // Научно-практический медицинский журнал «Медицинские вести регионов», Смоленск, №1, 2008.-С.50-53.

39. Krikova, А. V. Studying antioxidant of action of polyphenolic connections on the background of the alcoholic intoxication / A. V. Krikova, V. E. Novikov // Шестая национальная научно-практическая конференция с международным участием «Активные формы кислорода оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека». Материалы конференции. - Смоленск^ 2009. "С. 153~ 154.

40. Крюкова, Н. О. Стресс-индуцированное поражение желудка крыс и его коррекция диос-мином / Н. О. Крюкова, А. В. Крикова, В. Е. Новиков // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сборник научных трудов 2009г. - Пятигорск, 2009. — С. 457-458.

41. Влияние спирта этилового на миокард крыс / А. В. Крикова [и др.] // Актуарные проблемы фармацевтической науки и практики: сборник научных трудов Всероссийской научно-практической конференции 28-30 октября 2010 г. - Владикавказ, 2010. - С. 270-272.

42. Крикова, А. В. Возможность применения мексидола у животных с алкогольной интоксикацией / А. В. Крикова, А. С. Новиков // Человек и лекарство: тезисы докладов 17-го Российского национального конгресса 12-16 апреля 2010 г. - М., 2010. - С. 650-651.

43. Крикова, А. В. Антигипоксическая активность диосмина, гесперидина и препаратов позитивного контроля в условиях алкогольной интоксикации / А. В. Крикова, В. Е. Новиков // Проблемы здоровья и методы его сохранения: материалы Всероссийской научно-практической конференции 14-15 мая 2010 г. - Смоленск, 2010. - С. 76.

44. Крикова, А. В. Алкогольная интоксикация в формировании патологии миокарда / А. В. Крикова, А. С. Новиков // Человек и лекарство: тезисы докладов 18-го Российского национального конгресса 11-15 апреля 2011 г. - М., 2011. - С. 607-608

КРИКОВА Анна Вячеславовна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ КАРДИОПРОТЕКТИВНЫХ СВОЙСТВ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ФИТОКОМПЛЕКСОВ ПОЛИФЕНОЛЬНОЙ

ПРИРОДЫ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Подписано в печать 20.12.2011 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать ротапринтерная. Усл. печ. л. 3,0 Тираж 100 экз. Заказ № 845/1.

Отпечатано в ООО «Принт-Экспресс», г. Смоленск, пр-т Гагарина, 21. Тел.: (4812)32-80-70

Актуальность исследований

Сердечно-сосудистые заболевания по-прежнему остаются одними из наиболее распространенных и занимают первое место в структуре смертности и инвалидизации населения. За последние два года в нашей стране от болезней системы кровообращения умерло 2,4 млн. человек. Смертность от сосудистых заболеваний стабильно составляет 57%, причем, почти 20% из этого числа умирают в трудоспособном возрасте [Голикова Т. А., 2009]. Следует сказать, что первопричиной многих заболеваний сердца является нарушение метаболических процессов на клеточном и субклеточном уровне. Прежде всего, это касается мембранного перекисного окисления липидов, патологического накопления свободных радикалов, избыточного синтеза активных форм кислорода в миокарде [Абрамченко В. В., 2001; Шанин Ю. Н. и соавт., 2003; Шилов А. М., 2004; Зборовская И. А., 2005; Оковитый С. В., 2005; Басов А. А., 2007; Новиков В. Е. и соавт., 2007; Волчегорский И. А. и соавт., 2008; Коломац Н. М. и соавт., 2009; Гришин Д. В. и соавт., 2010]. Поэтому вещества, препятствующие протеканию этих процессов в миокарде можно считать кардиопротекторами.

Для коррекции таких нарушений используется большое число лекарственных средств [Оковитый С. В., 2001; Новиков В. Е. и соавт., 2006, 2007, 2008; Евсеев А. В. и соавт., 2008; Сейфулла Р. Д. и соавт., 2009; Волчегорский В. А., 2010], которые в определенной степени можно отнести к мембраностаби-лизирующим средствам, а также уменьшающим накопление свободных радикалов и активных форм кислорода [Котляров А. А. и соавт., 2002; Болотова Н. В. и соавт., 2003; Дугиева М. 3. и соавт., 2004; Султанов Г. А. и соавт., 2004; Строков И. А. и соавт., 2004; Симакова Т. Г. и соавт., 2007; Лебединский Н. М. и соавт., Косинец В. А., 2010].

В то же время известно, что многие вещества из группы флавоноидов проявляют высокую антиоксидантную активность [Разина Т.Г. и соавт., 2000;

Балаболкин М.И. и соавт., 2000; Гайворонская В.В. и соавт., 2000; Арыстанова А.Ж. и соавт., 2001; Зенков Н.К., 2003; Голиков А.П., 2003] и по некоторым данным могут подавлять активность или связывать свободные радикалы [Дор-кина Е.Г., и соавт., 2004; 2007; 2010; Климкина Е.И. и соавт., 2004; Шульпекова Ю.О., 2004; Дадали В.А. и соавт., 2007]. Однако широкого применения в качестве кардиопротекторов флавоноиды не нашли.

Это связано с тем, что до настоящего времени глубокого фармакологического изучения кардиопротективного действия флавоноидов не проводилось. Фармакологическое исследование флавоноидов интересно еще и тем, что по сравнению с синтетическими лекарственными препаратами они обладают низкой токсичностью, отсутствием побочного действия, не вызывают лекарственной зависимости и могут использоваться не зависимо от возраста и состояния организма [Mansouri А. et al., 2001; Неверов И.В., 2001; Ernst А., 2004; Федин А.И. и соавт., 2004; Черешнев В.А. и соавт., 2004; Rubin R.N. et al., 2004; Pa-китский B.H. и соавт., 2005].

Для выявления кардиопротективного действия флавоноидов необходимо, прежде всего, изучение вопросов их влияния на морфофункциональные особенности работы миокарда, свободнорадикальные процессы в миокарде и сыворотке крови животных, стабилизацию мембраны клеток. Это позволит сформулировать характер фармакологического действия флавоноидов как профилактических, лечебных и лечебно-профилактических средств или их кардио-протективных свойств в целом.

Поэтому изучение фармакологических свойств индивидуальных флавоноидов и суммарных композиций с целью выявления их кардиопротективного действия является новым направлением и может считаться актуальной проблемой для фармацевтической науки и медицины в целом.

Цель исследования

Фармакологическое исследование индивидуальных соединений и фито-комплексов полифенольной природы и выявление возможности их использования в качестве кардиопротективных средств.

Задачи исследования:

1. Обосновать выбор растительных объектов для экспериментального изучения кардиопротективных свойств.

2. Провести определение острой токсичности веществ полифенольной природы из травы вики изменчивой (диосмин и сумма, содержащая арабиноглюкозид - и ксилоглюкозид диосметина, которая условно названа флавицином), из кожуры цитрусовых (гесперидин), из цветков бархатцев распростертых (патулетин и липофильная фракция), из околоплодников и листьев ореха черного и ореха грецкого, из травы череды трехраздельной (фракции - экстрагент 40 и 96% этанол), из соплодий хмеля обыкновенного (липофильная фракция).

3. Изучить дозозависимое противоаритмическое действие индивидуальных соединений и фитокомплексов полифенольной природы при аритмогенных поражениях (кальция хлорид и строфантин К) на фоне однократного введения док-сорубицина.

4. На моделях гипоксии с гиперкапнией и циркуляторной гипоксии в условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и при остром иммобилизацион-но-болевом стрессе в сравнительном аспекте изучить дозозависимую антиги-поксическую активность индивидуальных соединений и фитокомплексов полифенольной природы.

5. Изучить влияние кардионегативных агентов на функциональные особенности работы миокарда и исследовать влияние индивидуальных соединений полифенольной природы на экспериментальных моделях аритмий сердца в условиях введения доксорубицина, спирта этилового и при остром иммобилизационно-болевом стрессе.

6. Изучить в сравнительном аспекте влияние наиболее активных кардиопротекто-ров при их курсовом введении на процесс перекисного окисления липидов в гомогенате миокарда и сыворотке крови крыс, изменение показателей спонтанного гемолиза эритроцитов на фоне введения доксорубицина, спирта этилового, при моделировании острого иммобилизационно-болевого стресса.

7. Изучить влияние флавоноидов при лечебно-профилактическом введении в условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и при остром иммоби-лизационно-болевом стрессе на динамику энергетических процессов путем определения активности ферментов лактатдегидрогеназы, креатинкиназы и содержания ионов кальция в гомогенате миокарда в сравнении с триметилгидра-зиния пропионатом, цитофлавином и этилметилгидроксипиридина сукцинатом.

8. Изучить импедансометрическим методом состояние миокарда животных при интоксикации спиртом этиловым и в условиях введения диосмина и геспериди-на на фоне этанола в сравнении с препаратами позитивного контроля.

9. Изучить морфологическую картину миокарда экспериментальных животных, подвергшихся воздействию доксорубицина, спирта этилового и острого иммобилизационно-болевого стресса и коррекции их кардионегативного действия индивидуальными соединениями полифенольной природы в сравнении с три-метилгидразиния пропионатом, цитофлавином и этилметилгидроксипиридина сукцинатом.

Научная новизна исследования

Проведено систематическое фармакологическое исследование флавоно-идных соединений разных химических групп (производные флавона, флавоно-на, флавонола) по выявлению их кардиопротективного действия.

Критериями кардиопротективного действия флавоноидов были степень антиаритмического, антигипоксического, антиишемического действия, влияние на степень перекисного окисления липидов, на стабилизацию мембран клеток и гистоморфологическую картину миокарда животных.

В качестве флавоноидов использованы полифенольные соединения из травы вики изменчивой (диосмин и сумма, содержащая арабиноглюкозид - и ксилоглюкозид диосметина, которая условно названа флавицином), из кожуры цитрусовых (гесперидин), из цветков бархатцев распростертых (патулетин и липофильная фракция), из околоплодников и листьев ореха черного и ореха грецкого, из травы череды трехраздельной (фракции - экстрагент 40 и 96% этанол), из соплодий хмеля обыкновенного (липофильная фракция). Нарушение работы миокарда вызывали с помощью кардионегативных агентов: доксоруби-цин, этанол и острый иммобилизационно-болевой стресс.

В результате исследований установлено, что наилучший лечебный эффект наблюдается для индивидуальных полифенольных соединений: флавон-7-рутинозид диосметина - диосмин и флаванон-7-рутинозид гесперитина - гесперидин, отличающихся между собой природой агликона.

Впервые на основании проведенных исследований взаимосвязи структура-действие выявлены вещества-лидеры - диосмин и гесперидин, оказывающие выраженный антиаритмический эффект на моделях хлоридкальциевой и стро-фантиновой аритмии в условиях алкогольного, доксорубицинового повреждений миокарда и при остром стрессорном воздействии в сравнении с антигипок-сантами/антиоксидантами - триметилгидразиния пропионатом, цитофлавином и этилметилгидроксипиридина сукцинатом.

Выявлено, что выраженное антиаритмическое действие гесперидина и диосмина сочетается с высокой антигипоксантной, антиоксидантной и мембра-ностабилизирующей активностью и подтверждается морфологическими данными, в некоторых случаях превосходя эффекты препаратов сравнения (триметилгидразиния пропионат, цитофлавин и этилметилгидроксипиридина сукцинат).

Практическая значимость работы и

Обосновано перспективное направление создания кардиопротекторов для лечения и профилактики кардионегативных эффектов, вызванных доксору-бицином, спиртом этиловым и стрессовыми факторами. Полученные данные свидетельствуют о перспективности дальнейшего углубленного изучения ди-осмина и гесперидина с целью создания традиционных и инновационных лекарственных форм на их основе. Представленные результаты могут послужить основанием для целенаправленного поиска веществ полифенольной структуры с кардиопротекторными свойствами.

Комплексное морфофункциональное исследование кардиопротективных свойств диосмина и гесперидина позволяет рекомендовать диосмин и геспери-дин для клинических испытаний в качестве кардиопротекторов, при лечебно-профилактическом применении в условиях терапии антрациклиновым антибиотиком доксорубицином, при алкогольной интоксикации, при профилактическом введении в условиях стрессорного воздействия.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Поиск кардиопротекторных веществ среди полифенольных соединений растительного происхождения является перспективным направлением в разработке и создании лекарственных препаратов для профилактики и лечения заболеваний, связанных с кардиотоксическим действием доксорубицина, спирта этилового и стресса.

2. Среди индивидуальных соединений и фитокомплексов полифенольной природы диосмин и гесперидин являются веществами-лидерами и при перо-ральном введении относятся к практически нетоксичным веществам.

3. Диосмин и гесперидин при профилактическом, лечебном и лечебно-профилактическом введении оказывают выраженный антиаритмический эффект в условиях доксорубицинового, алкогольного и острого стрессорного повреждения миокарда экспериментальных животных, превосходящий по эффективности широко применяемые в практической медицине триме тилгидразиния пропионат, цитофлавин и этилметилгидроксипиридина сук-цинат.

4. Кардиопротекторная активность диосмина и гесперидина связана с наличием высокой антигипоксической активности, антиоксидантной и мембрано-стабилизирующей активности в условиях доксорубицинового, алкогольного и стрессорного повреждения миокарда.

5. Морфологическое изучение миокарда крыс в условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и острого иммобилизационно-болевого стресса выявляет дисциркуляторные изменения, повреждение кардиомиоцитов с признаками нарушений сократительной способности и фрагментации мышечных волокон, характерных для нарушений ритма. Кардионегативные эффекты доксорубицина, этанола и стресса нивелируются введением диосмина и гесперидина в различных фармакотерапевтических схемах лечения — уменьшают выраженность морфологических изменений.

Реализация результатов исследования

По результатам работы составлены информационные письма «Экспериментальное обоснование кардиопротективных свойств растительных и синтетических антигипоксантов/антиоксидантов» и «Экспериментальное обоснование применения индивидуальных флавоноидов в качестве кардиопротективных средств», которые направлены в адрес Департаментов по здравоохранению Смоленской, Ярославской и Саратовской областей, результаты работы внедрены в научную работу ЦНИЛ (акт от 04.10.2011 г.) и кафедры госпитальной терапии СГМА (акт от 03.11.2011 г.). Результаты работы используются в ООО «НТФФ «Полисан» для научно-теоретического обоснования и пострегистрационного клинического применения при патологических состояниях, сопровождающихся метаболическими нарушениями со стороны миокарда (препарат цитофлавин, раствор для внутривенного введения), а также при мониторировании нежелательных реакций (акт от 22.11.2011 г.), ООО «Научно-исследовательский центр биотехнологий» (акт от 01.12.2011 г.)

Результаты работы включены в лекционный материал для студентов лечебного, педиатрического, стоматологического, фармацевтического факультетов Смоленской, Ярославской государственной медицинской академии, Севе-ро-Осетинского государственного университета им. К.Л. Хетагурова, Воронежского государственного университета, Владивостокского, Саратовского государственного медицинского университета им. В.И. Разумовского (акты от 03.02.2010 г., 29.01.2009 г., 26.04.2010 г., 13.01.2010 г., 21.12.2009 г., 13.01.2010 г.). По материалам настоящей работы получено 4 патента на изобретения и 1 рационализаторское предложение.

Апробация работы

Результаты и основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседании кафедры фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС (2006, 2010), заседаниях проблемной комиссии по терапии СГМА (2006-2010). Материалы диссертационной работы доложены на 57-й, 61-й, 63-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск 2002, 2006, 2008), на Втором съезде кардиологов Южного федерального округа «Современные проблемы сердечно-сосудистой патологии» (Ростов-на-Дону 2002), на 2-ом Съезде Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва 2003), на II региональной научно - практической конференции молодых ученых и студентов Краснодарского края «Медицинская наука и здравоохранение» (Анапа 2004), на XII, XIII, XV, XVII, XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 2005-2011), на III Съезде фармакологов России - «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург 2007), на V Российской научно-практической конференции посвященной 15-летию Смоленского гуманитарного университета и 85-летию Санитарно-эпидемиологической службы Российской Федерации - «Здоровье и здоровый образ жизни: состояние и перспективы» (Смоленск 2007), юбилейной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной медицины» (Смоленск 2007), аптечном форуме «От производителя до аптеки и потребителя» (Москва 2007), конкурсе молодых ученых при администрации Смоленской области (Смоленск 2007), конференции «Медицинская наука, молодежь и современность» (Смоленск 2007), на очно-заочной конференции «Взаимодействие науки и практики» (Новополоцк-Смоленск-Белгород 2007), на пятой и шестой национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск 2007, 2009), на научно-практическом симпозиуме с международным участием «Сво-боднорадикальная медицина и антиоксидантная терапия» (Волгоград 2008), Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы здоровья и методы его сохранения» (Смоленск 2010).

Личный вклад автора

Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. Автором лично проведены фармакологические эксперименты. В выполненной работе автором непосредственно осуществлена статистическая обработка полученных результатов, представлено научное обоснование с выводами и практическая реализация. Полученный результат изложен в научных публикациях и докладах, лично предложен автором для внедрения в практику.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 1, 2 и 3 паспорта специальности по фармакологии, клинической фармакологии.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 58 работ, из них в журналах, рекомендованных ВАК - 13. Внедрено одно рационализаторское предложение; получено 4 патента на изобретения.

Структура и объем диссертации

Материал диссертации изложен на 363 страницах машинописного текста, иллюстрирован 51 таблицей и 101 рисунком. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов исследований, обсуждения и заключения, выводов и указателя литературы и приложения. Указатель литературы содержит 441 источник.

выводы

1. Обоснован выбор веществ полифенольной природы из травы вики изменчивой (диосмин и сумма, содержащая арабиноглюкозид - и ксилоглюкозид диосмети-на, которая условно названа флавицином), кожуры цитрусовых (гесперидин), цветков бархатцев распростертых (патулетин и липофильная фракция), околоплодников и листьев ореха черного и ореха грецкого, травы череды трехраз-дельной (сухие экстракты); соплодий хмеля обыкновенного (липофильная фракция) для поиска лекарственных веществ с кардиопротекторной активностью.

2. Изучена острая токсичность флавоноидов и установлено, что согласно табуляции классов токсичности, исследуемые индивидуальные соединения относятся к малоопасным, а суммарные фракции полифенольной природы к умеренно опасным веществам. Для диосмина и гесперидина 1Л)50 >6000 мг/кг массы тела животного.

3. Изучено дозозависимое противоаритмическое действие флавоноидов и доказано, что из всех выбранных для фармакологического исследования индивидуальные соединения диосмин, гесперидин и полифенольные композиции из околоплодника ореха грецкого и цветков бархатцев распростертых в дозе 30 мг/кг обладают выраженным антиаритмическим действием на фоне введения кальция хлорида в условиях доксорубициновой интоксикации (1 мг/кг).

4. Изучена антигипоксическая активность флавоноидов в сравнительном аспекте с препаратами позитивного контроля. Установлено, что диосмин и гесперидин в дозе 30 мг/кг массы тела увеличивают продолжительность жизни животных во все сроки наблюдения на моделях гипоксии с гиперкапнией и циркуляторной гипоксии в условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и при остром иммобилизационно-болевом стрессе.

5. Изучена антиаритмическая активность веществ-лидеров в сравнительном аспекте с препаратами позитивного контроля. Доказано, что диосмин и гесперидин в дозе 30 мг/кг при однократном, профилактическом, лечебном и лечебно-профилактическом введении оказывают антиаритмическое действие на фоне доксорубициновой, алкогольной интоксикации и при остром иммобилизацион-но-болевом стрессе на экспериментальных моделях аритмий сердца (хлорид-кальциевой и строфантиновой).

6. Изучено влияние флавоноидов на процесс перекисного окисления липидов мембран. Установлено, что диосмин и гесперидин при различных схемах введения (профилактическое, лечебное и лечебно-профилактическое) ингибируют процесс перекисного окисления липидов в гомогенате миокарда и сыворотке крови крыс и процесс спонтанного гемолиза эритроцитов на фоне введения доксорубицина гидрохлорида, спирта этилового и при остром иммобилизаци-онно-болевом стрессе.

7. Установлено, что профилактическое, лечебное и лечебно-профилактическое введение диосмина и гесперидина на фоне доксорубицина, спирта этилового и при остром иммобилизационно-болевом стрессе в гомогенате миокарда крыс препятствуют повышению активности лактатдегидрогеназы, сохраняя энергетическое обеспечение миокарда, более характерное для условий адекватной ок-сигенации.

8. Методом импедансометрии подтверждена возможность выявления функциональных нарушений работы миокарда в условиях алкогольной интоксикации и установлена их коррекция диосмином и гесперидином в дозе 30 мг/кг массы тела животного.

9. В условиях доксорубициновой, алкогольной интоксикации и острого иммоби-лизационно-болевого стресса при микроскопическом изучении имеются дис-циркуляторные изменения и повреждение кардиомиоцитов с признаками нарушений сократительной способности и фрагментации мышечных волокон, что характерно для нарушений сердечного ритма и фибрилляции миокарда. Введение диосмина и гесперидина в различных фармакотерапевтических схемах лечения (профилактическое, лечебное и лечебно-профилактическое) в условиях антрациклиновой, алкогольной интоксикации и острого иммобилизационно-болевого стресса уменьшают выраженность морфологических изменений — явления деструкции, фрагментации кардиомиоцитов, миоцитолиза и миоцито-лизиса либо не отмечаются, либо носят менее выраженный, очаговый характер.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Поиск эффективных кардиопротекторов с антигипоксантным и антиокси-дантным действием целесообразно вести среди растительных объектов, в состав которых входят соединения полифенольной природы.

2. Индивидуальные соединения диосмин (из травы вики изменчивой) и геспе-ридин (цедры цитрусовых) являются перспективными соединениями для дальнейшего фармако-технологического изучения с целью создания традиционных и инновационных лекарственных форм для перорального применения.

3. Проведение клинических испытаний кардиопротекторных свойств диосми-на и гесперидина.