Автореферат и диссертация по медицине (14.00.08) на тему:Экспериментальное изучение высокочистых жидких перфторорганических соединений при интравитреальном введении

Г 73 ОД 2 НОЯ

Па правах рукописи

КУЛИКОВ Алексей Николаевич

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЫСОКОЧИСТЫХ жидких ПЕРФТОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ ПРИ ИНТРАВ1Н РЕАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ

14.00.08 - глазные болезни 14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата .медицинских наук

Санкт-Петербург 1997

Работа выполнена в Военно-медицинской академии.

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук профессор В.Ф. Даннличев

Доктор биологических наук А. П. Новожилова

Научный консультант: Доктор химических наук профессор Б.Н. Максимов

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук профессор A.A. Куглеев Кандидат медицинских наук Ф.Н. Макаров

Ведущее учреждение - 3 Центральный военный клинический госпиталь имени A.A. Вишневского

Защита диссертации состоится «15» декабря 1997 года в 14.00 часов на заседании диссертационного совета Д 106.03.03 в Военно-медицинской академии (194044, Санкт-Петербург, ул. Лебедева, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке академии.

Автореферат разослан «14» ноября 1997 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор A.C. Киселев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Жидкие перфторорганические соединения обладают уникальными для офтальмохирургии физико-химическими свойствами: прозрачность, близкие оптическим средам глаза коэффициенты преломления, химическая инертность, а главное - высокий удельный вес, почти в 2 раза больший, чем у СТ. Благодаря этому ЖПФОС стали незаменимым «инструментом» при выполнении витреоретанальных хирургических вмешательств [Глинчук Я.И. и др., 1992; Федоров С.Н. и др., 1994; Chang S. et al, 1987, 1989; Cool G.E. et al, 1995; Peyman G.A. étal, 1995;].

В то же время следует отметить отсутствие единой точки зрения на проблему использования жидких перфторуглеродов в хирургии сетчатки и СТ. Большинство применяемых в настоящее время ЖПФОС оказывают, при длительном пребывании в витреальной полости, выраженное в той или иной степени местное раздражающее действие на ткани глаза [Ронкина Т.И. и др., 1993; Chang S., 1987; Velikay M. et al, 1993], что вынуждает использовать данные препараты лишь интраоперационно и заменять их в конце хирургического вмешательства на более инертный материал [Greve M.D.G., et al, 1994; Stolba U. et al, 1995]. Другие исследователи утверждают, что некоторые ЖПФОС можно оставлять в полости СТ [Тахчвди Х.Н. и др., 1995; Bottoni F„ et al, 1994], но при этом называют разные сроки допустимого интравитреального пребывания одних и тех же веществ.

Значимость проблемы определяется тем, что все жидкие имплантаты СТ кроме ЖПФОС имеют удельный вес меньше 1,3 г/см3, вследствие чего их тампонирующее воздействие на оболочки глазного яблока зачастую, особенно при осложнении послеоперационного периода пролиферативной вигреоретинопатией, оказывается недостаточным и развивается рецидив отслойки сетчатки. Поэтому экспериментальное изучение толерантности тканей глаза при интравитреальном применении ЖПФОС с целью опреде-

ления допустимых сроков инграокулярного пребывания этих препаратов является актуальной проблемой современной витреоретинальной хирургии. В ходе этих исследований осуществляется поиск соединения из числа ЖПФОС, которое можно было бы в конце хирургического вмешательства оставить в полости СТ для надежной фиксации сетчатки по меньшей мере на 15 сут - минимальный срок, необходимый для формирования хориоре-тинальных сращений в зонах лазеркоагуляции или криоаппликации.

Решение проблемы осуществляется в двух направлениях. С одной стороны в результате усовершенствования технологии производства синтезируются уже известные ЖПФОС с повышенной химической чистотой, которые лучше переносятся тканями глаза [Velikay M., et al, 1995], с другой -предлагаются новые жидкие перфторорганические соединения [Глинчук Я.И. и др., 1996; Blinder K.J., et al, 1991; Flores-Aguilar M. et al, 1995].

На предприятиях РНЦ «Прикладная химия» (г. Санкт-Петербург), во-первых, синтезируется целый ряд ЖПФОС, во-вторых технология очистки перфторуглеродов, кроме общепринятых операций, включает оригинальный приоритетный сорбционный метод, позволяющий достичь не менее 99% массовой доли основного продукта. Поэтому мы в своей работе реализовали оба указанных направления изучения жидких перфтороргани-ческих имплантатов СТ. Следует отметить, что ЖПФОС производства РНЦ «Прикладная химия» ранее не изучались ни в экспериментальной, ни в клинической офтальмологии.

Цель работы

Экспериментальное обоснование возможности применения высокочистых ЖПФОС производства РНЦ «Прикладная химия» в витреоретинальной хирургии.

Задачи исследования

1. Выработать методику экспериментального витреоретинального хирургического вмешательства, адекватного цели исследования.

-32. Провести стандартизацию используемых элекгрофизиологических показателей для данной популяции животных, системы аппаратуры и лаборатории.

3. Обосновать возможность и длительность интравитреального применения высокочистых ПФТБА, ПФД и 6МФ-130.

4. Определить характер клеточной реакции, развивающейся в полости СТ при длительном интравитреальном применении изучаемых ЖПФОС.

5. Исследовать газообмен высокочистых ПФТБА, ПФД и 6МФ-130 при длительном интравитреальном применении.

6. Подготовить материалы для получения разрешения на клиническое испытание высокочистых ПФТБА, ПФД и 6МФ-130 в витреорети-нальной хирургии.

Научная новизна

1. Экспериментально обоснована возможность клинического испытания высокочистых ПФТБА, ПФД и 6МФ-130 производства РНЦ «Прикладная химия» в витреоретинальной хирургии.

2. Определены допустимые сроки безопастного интравитреального применения высокочистых ПФТБА, ПФД и 6МФ-130.

3. Рекомендован для временной послеоперационной тампонады вит-реальной полости перфторполиэфир 6МФ-130.

4. Продемонстрированы возможности и преимущества сканирующей электронной микроскопии в качественной и количественной оценке клеточной реакции, развивающейся в полости СТ при длительном интравитреальном применении ЖПФОС;

5. Обосновано применение регистрации р02 и рС02 в качестве показателей биологической активности ЖПФОС.

Практическая значимость

Подготовлены материалы и получено разрешение (протокол заседания Ученого Совета Военно-медицинской академии № 9 от 29.04.1996 г.)

на клиническое испытание ПФТБА, ПФД и 6МФ-130 производства РНЦ «Прикладная химия» в витреоретинальной хирургии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Высокочистые ПФТБА, ПФД и 6МФ-130 производства РНЦ «Прикладная химия» могут быть рекомендованы для клинического испытания в витреоретинальной хирургии.

2. Высокочистые ПФТБА и ПФД имеют ограниченный срок безопа-стного ишравитреального применения и могут бьггь использованы преимущественно иетраоперационно.

3. Высокочистый перфторполиэфир 6МФ-130 может быть использован как интраоперационно, так и для временной послеоперационной тампонады оболочек глазного яблока.

4. При длительном интраветреальном применении ЖПФОС вызывают неспецифическую воспалительную клеточную реакцию, направленную на отграничение и изоляцию чужеродного материала.

5. Химическая инертность - обязательное, но не единственное требование к ПФОС, применяемым интравитреально. Важное значение имеет также биологическая инертность препарата.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на IX Международном симпозиуме по изучению перфторуглеродных соединений в медицине и биологии «Perfluorocarbon' 96» (Пущино, 1996), III Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1996), XXXIX научной конференции студентов и аспирантов медицинских вузов и НИИ Санкт-Петербурга (Санкт-Петербург, 1996), XL конференции студентов и аспирантов морфологических кафедр и лабораторий Санкт-Петербургских вузов и НИИ, посвященной 125-летию со дня рождения академика АМН СССР профессора В.Н. Шевкуненко (Санкт-Петербург, 1997), III Международной конференции стран СНГ по функциональной нейроморфологии,

посвященной 100-летию со дня рождения чл.- корр. АН и АМН СССР Н.Г. Колосова (Санкт-Петербург, 1997), Офтальмологической подсекции хирургической секции УМС ГВМУ МО РФ (Санкт-Петербург, 1997), Всеармейской научной конференции «Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в военной медицине» (Санкт-Петербург, 1997).

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, восьми глав собственных исследований, заключения и выводов.

Список литературы содержит 185 наименований, из которых 64 отечественных и 121 иностранных.

Работа иллюстрирована 67 рисунками и 5 таблицами.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа носила экспериментальный характер и была направлена на изучение толерантности тканей глаза при интравитреальном применении в течении 30 сут высокочистых ЖПФОС производства РНЦ «Прикладная химия»: ПФТБА, ПФД и 6МФ-130.

Хирургическое витреоретинальное вмешательство на глазах животных осуществляли в условиях максимального мидриаза следующим образом. После местной и общей анестезии, отграничения операционного поля в нижних квадрантах выполняли конъюнктивотомию по лимбу и отсепа-ровку конъюнктивы до экватора. В 3-4 мм от лимба производили точечную диатермокоа1уляцию оболочек и накладывали провизорный шов вокруг коагулята. Под операционным микроскопом прокалывали оболочки глазного яблока через коагулят иглой с наружным диаметром 0,9 мм и, визуализируя задний отрезок глазного яблока через контактную лишу, механическим витреотомом иссекали 0,5 мл СТ. Вместо частично удаленного вит-реума инъецировали ЖПФОС или изотонический раствор натрия хлорида в

том же объеме. Глазное яблоко герметизировали завязыванием провизорного шва. Ушивали конъюнктиву.

Работа выполнена на 107 кроликах (214 глаз) породы «Шиншилла». Распределение глаз животных по группам и объем выполненных исследований представлены в табл. 1.

Были выделены следующие группы наблюдения:

• Первая экспериментальная группа включала глаза животных, в которые после частичной механической витрэктомии вводили высокочистый пер-фторполиэфир 6МФ-130;

• Во второй экспериментальной группе изучали ПФТБА;

• В третьей экспериментальной группе - ПФД;

• Контрольная группа состояла из животных, на глазах которых частично иссеченное CT было заменено изотоническим раствором натрия хлорида;

• Интактные глаза кроликов исследовались для нормирования электрофизиологических показателей и морфологической картины.

В работе применялись методики:

- клиническая - офтальмоскопия непрямым налобным бинокулярным офтальмоскопом «НБО-3» с фоторегистрацией на ретинокамере «RCM 310»;

- элекгрофизиологические - запись ОЭРГ и ЗВП на специализированной системе «MBN-Элекгроретинограф»;

- морфологические - световая микроскопия, ТЕМ и SEM - под микроскопами «Opton», «Hitachi Н-300», «JEM 100-СХ»;

- биохимическая - регистрация рОг и рСОг на анализаторе газов крови «ABL 330».

Полученные результаты подвергались статистической обработке с помощью пакета прикладных программ «Statgraphics».

Таблица 1

Объем и структура проведенных исследований

Методики исследования Г руппы наблюдения Всего

1 2 3 4 5

Изучаемые ЖПФОС Контроль Норма

6МФ-130 ПФТБА ПФД 0,9% N301

Офтальмоскопия (*) 53 53 54 42 12 214

Регистрация ОЭРГ (»*) 591 528 540 438 166 2263

СМ сетчатки (*) 14 14 14 14 5 61

ТЭМ сетчатки (*) 14 14 14 14 5 61

Регистрация ЗВП (**) 45 45 45 45 36 216

СМЗН(*) 5 5 5 5 5 25

ТЭМЗН(*) 5 5 5 5 5 25

СМ шварт стекловидного тела (*) 3 3 3 — — 9

РЭМ сетчатки (*) 15 15 15 15 5 65

РЭМ задней капсулы хрусталика (*) 5 5 5 5 5 25

Определение р02 ирС02 (*) 25 25 25 25 5 105

Примечания: * - число глаз; ** - число регистрации.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Офтальмоскопические исследования проводили на всех глазах кроликов перед экспериментальным хирургическим вмешательством, непосредственно после него, ежедневно в течение первых 5 сут, в дальнейшем -раз в 5 дней и перед энуклеацией. Они продемонстрировали, что частичная механическая витректомия с заменой иссеченного СТ изотоническим раствором натрия хлорида не вызывала видимых изменений, за исключением формирования к концу срока наблюдения полупрозрачных шварт по ходу операционного раневого канала в 18% случаев (рис.1).

Такие же шварты были зафиксированы в экспериментальной группе с введением перфторполиэфира 6МФ-130 в 26% случаев, при этом сам препарат весь срок наблюдения (30 сут) не эмульгировался - лежал одним «пузырем».

ПФТБА, введенный в витреальную полость животных, сразу после операции подвергался эмульгации, которая нарастала с каждым днем, несколько затрудняя визуализацию глазного дна. Формирование мембран отмечалось в 73% случаев, шварты к концу наблюдения становились непрозрачными, простирались по ходу операционного раневого канала, по поверхности и между «каплями» ПФТБА, по задней капсуле хрусталика, фиксируя к ней отдельные частицы препарата. В 42% случаев в нижних квадрантах выявлялись дистрофические изменения сетчатки и «нежные» пре-ретинальные мембраны.

В экспериментальной группе животных, которым частично иссеченное СТ заменили ПФД, отмечали практически те же изменения, что и у кроликов, которым вводили ПФТБА. Образование мембран и шварт в стекловидной полости было зафиксировано к 30-м суткам в 79% наблюдений. Непрозрачные мембраны простирались к ДЗН, по задней поверхности хрусталика и между частицами ПФД, фиксируя отдельные «капли» к хрусталику и к ретине. Дистрофические изменил сетчатки и образование пре-

10Контроль П6МФ-130 . . ППФТБА ЕЗПФД

Рис. 1. Выраженность пролиферативной реакции в витреальной полости у животных контрольной и экспериментальных групп на 30-е сутки по данным офтальмоскопии.

Рис. 2. Динамика амплитуды волны «Ь» ОЭРГ животных контрольной и экспериментальных групп.

ретинальных мембран в нижних квадрантах наблюдали к концу эксперимента в 53% случаев. Кроме того на 5 глазах (18%) ретинит был зафиксирован и в верхних квадрантах.

Местное раздражающее действие ЖПФОС на сетчатку при их интра-вигреальном применении изучали, регистрируя ОЭРГ в динамике и выполняя морфологические исследования ретины с помощью световой и трансмиссионной электронной микроскопии.

Стандартизация ОЭРГ осуществлялась путем троекратной регистрации исходных (нормальных) показателей на всех 214 глазах животных. Анализировали амплитуду волны «Ь», которая в среднем составляла 180,5 мкВ. Этот показатель, в соответствии со «Стандартом» ISCEV, является максимально комбинированным и рекомендован для использования в клинической практике.

Сравнительный анализ динамики амплитуды волны «Ь» ОЭРГ (рис.2) показал, что на 2-3-и сутки после витреоретинального хирургического вмешательства исследуемый показатель резко снижается как в контрольной, так и в экспериментальных группах без достоверных различий между ними (р>0,05), что свидетельствует о неспецифическом угнетении биоэлектрической активности сетчатки после тяжелой операционной травмы. В дальнейшем в контрольной и в I экспериментальной группе (6МФ-130) наблюдали восстановление анализируемого показателя практически до исходного 100% уровня без статистически значимого различия между этими группами. Таким образом, при интравитреальном пребывании 6МФ-130 в течение 30 сут ретинопатия не выявлялась. Во II и в III экспериментальных группах (ПФТБА и ПФД соответственно) положительная динамика амплитуды волны «Ь» на определенном этапе наблюдения прекращалась - показатель выходил на «плато», при этом достоверность различий (р<0,05) по сравнению с контролем, выявленная с помощью статистическо-

го анализа была зафиксирована в этих группах на 5-е и 15-е сутки соответственно, что свидельствует о реализации патологического воздействия ПФТБА и ПФД на сетчатку в указанные сроки.

Изучение морфологической картины ретины нижних квадрантов животных контрольной и экспериментальных групп на 3-й сутки после витре-оретинального хирургического вмешательства с помощью трансмиссионной электронной микроскопии в сравнении с ультраструктурой сетчатки интактных кроликов позволяет сделать вывод, что наблюдаемые в опытных группах изменения при своей выраженности однотипны, а следовательно, неспецифичны и определяются лишь тяжелой операционной травмой.

На 30-е сутки после хирургического вмешательства в контрольной и

I экспериментальной группе (6МФ-130) морфологическая картона свидетельствует о практически полной реабилитации и высокой функциональной активности фоторецепторов и пигментного эпителия, в то время как во

II и в III экспериментальных группах (ПФТБА и ПФД соответственно) на 30-е сутки наблюдаются выраженное, вплоть до грубой деструкции, повреждение ультраструктуры фоторецепторов - реализация ретинотоксиче-ского эффекта данных препаратов.

Трансмиссионная электронная микроскопия позволила также выявить к концу эксперимента на поверхности внутренней глиальной пограничной пластинки сетчатки единичные неактивные макрофаги у животных I экспериментальной группы (6МФ-130). Эти же клетки были зафиксированы в значительно большем количестве у кроликов на 30 сут. во II (ПФТБА) и в III (ПФД) экспериментальных группах, при этом ультраструктура макрофагов свидетельствовала о повышенной функциональной активности, а в их цитоплазме обнаруживались гигантские вакуоли правильной формы, содержащие частицы ЖПФОС. Эти данные показывают, что 30-сугочное интравигреальное пребывание 6МФ-130 вызывает умеренную миграцию макрофагов, находящихся в состоянии функционального

покоя, а нахождение в полости СТ ПФТБА и ПФД стимулирует выраженную клеточную реакцию, при этом макрофаги стремятся поглотить и переварить частицы этих препаратов, оказывающих патологическое воздействие на окружающие ткани.

Местное раздражающее действие ЖПФОС на зрительный нерв при их ишравитреальном применении изучали, регистрируя вспышечные ЗВП в динамике и выполняя морфологические исследования ЗН с помощью световой и трансмиссионной электронной микроскопии.

Стандартизация ЗВП осуществлялась путем троекратной регистрации исходных (нормальных) показателей на всех 214 глазах животных. Анализировали латентность наиболее стабильного показателя - второго позитивного пика (Р2), которая в среднем составляла 85,5 мс.

Латентность второй позитивной волны ЗВП на вспышку в контрольной и в I экспериментальной группах в первые дни после витреоретиналь-ного хирургического вмешательства статистически достоверно снижается, а затем плавно восстанавливается к концу срока наблюдения до нормального уровня (рис.3). Мы трактуем выявленную нами данную закономерность как проявление транзиторного реактивного ослабления тормозных механизмов обратной связи при передаче возбуждения по проводящим путям зрительного анализатора.

После частичной механической витректомии с введением ПФТБА снижение латентности Р2 в начале эксперимента к концу срока наблюдения сменяется резким, статистически достоверно (р<0,05) отличающимся от контроля увеличением регистрируемого показателя, а у животных, которым инъецировали ПФД, такой же значимый рост Р2 ЗВП отмечается уже с 10-х суток. Мы расцениваем эти изменения как реализацию патологического воздействия данных ЖПФОС на ЗН при их длительном ишравитреальном применении, которое проявляется во II экспериментальной группе (ПФТБА) на 25-е сутки, а в III (ПФД) - на 10-е сутки наблюдения.

Рис. 3. Динамика латентности Р2 ЗВП на вспышку у кроликов контрольной и экспериментальных групп.

11 Retina 0 Lens

Рис. 4. Количество клеточных элементов на сетчатке и задней капсуле хрусталика в поле зрения при 1000-кратном увеличении - на 30 сут. - по данным РЕМ

Трансмиссионная электронная микроскопия ЗН на поперечных срезах в его орбитальной части на 30-е сутки шправитреального пребывания высокочистых ПФОС производства РНЦ «Прикладная химия» полностью коррелировала с результатами регистрации вспышечных ЗВП. Морфологическая картина миелинизированных нервных волокон, глиальных клеток и микрососудов характеризовалась лишь реактивными обратимыми изменениями. Во II экспериментальной группе (ПФТБА) наряду с реактивными, наблюдались необратимые деструктивные преобразования отдельных аксонов. Улмраструктура ЗН кроликов на 30-е сутки ин-травитреального пребывания ПФД повреждается в наибольшей степени. В то время как глиальные клетки и микрососуды подвержены преимуществ венно реактивным изменениям, значительная часть нервных волокон подвергается необратимой трансформации.

Клеточная реакция, развивающаяся в полости СТ при длительном интравшреальном применении ЖПФОС, исследовалась с помощью растровой электронной микроскопии, позволяющей оценить наблюдаемые изменения как качественно так и количественно, а также с помощью световой микроскопии.

Клеточная реакция на поверхности внутренней глиальной пограничной пластинки сетчатки животных в контрольной и экспериментальных группах отличается качественно: на 30-е сутки после частичной механической витректомии с заменой иссеченного стекловидного тела изотоническим раствором натрия хлорида или 6МФ-130 макрофаги неактивны, а после интравитреального пребывания ПФТБА или ПФД имеют признаки высокой функциональной активности. Количественно клеточная реакция на поверхности сетчатки в разных группах также имеет отличия, будучи незначительно выраженной в контроле и после 30 сут интравитреального пребывания 6МФ-130, или, напротив, резко выраженной во II (ПФТБА) и в III (ПФД) группах (рис.4).

Клеточная реакция на внутренней поверхности задней капсулы хрусталика у кроликов в разных группах имеет качественные отличия: на 30-е сутки после частичной механической витректомии с заменой иссеченного стекловидного тела изотоническим раствором натрия хлорида клетки неактивны, в I экспериментальной группе (6МФ-130) - макрофаги неактивны, а фибробласты умеренно продуцируют коллаген, во II и в III группах функциональная активность клеток обоих типов очень высока. Количественно клеточная реакция на поверхности хрусталика также имеет статистически значимые различия в контрольной и экспериментальных группах.

Имеются качественные различия между клеточными реакциями, наблюдаемыми на сетчатке и на хрусталике: на поверхности внутренней гли-альной пограничной пластинки ретины были обнаружены лишь макрофаги, на задней капсуле хрусталика - как макрофаги, так и фибробласты. При количественной оценке выраженность клеточной реакции на хрусталике почти на порядок превышает число клеток, зафиксированных на сетчатке.

Морфологическое исследование мембран и шварт, формирующихся в витреальной полости при длительном пребывании в ней высокочистых ЖПФОС производства РНЦ «Прикладная химия» с помощью световой микроскопии показало отсутствие в их составе глиальных клеток и клеток пигментного эпителия. Этот факт указывает на то, что зафиксированная клеточная реакция не является витреоретинальной пролиферацией. Выявление макрофагов, фибробластов и коллагеновых волокон свидетельствует о том, что мы наблюдаем неспецифическую воспалительную реакцию в ответ на введение чужеродных веществ, направленную на их отграничение и изоляцию.

Так как все выполненные исследования указывали на то, что толерантность тканей глаза к одинаково высокочистым ЖПФОС имеет существенные различия, мы предположили, что химическая чистота является не единственным требованием к препарату, применяемому для временной по-

слеоперационной тампонады оболочек глазного яблока. Важную роль играет также биологическая инертность ЖПФОС, определяемая физико-химическими свойствами. Мы провели сравнительную оценку биологической активности натрия хлорида и изучаемых перфторуглеродов при длительном ишравитреальном применении по результатам изменений р02 и рС02 и выявили при этом в тканях глаз экспериментальных животных контрольной группы выраженную, но обратимую послеоперационную гипоксию. Перфторполиэфир 6МФ-130 при пребывании в полости СТ умеренно участвует в газообмене с окружающими тканями (р02 и рС02 изменяются медленно и плавно), что свидетельствует о низкой биологической активности данного ЖПФОС. ПФТБА и ПФД при ишравитреальном применении оказывают существенное влияние на тканевой газообмен, интенсивно поглощая углекислый газ и теряя кислород, демонстрируя тем самым свою высокую биологическую активность.

ВЫВОДЫ

1. Результаты экспериментального изучения высокочистых 6МФ-130, ПФТБА и ПФД производства РНЦ «Прикладная химия» позволяют рекомендовать их доя клинического испытания.

2. В эксперименте предельный допустимый срок безопастного ин-травитреального применения высокочистого ПФТБА составляет 5 сут и регламентируется ретинопатией, развивающейся при более длительном использовании. В ходе клинического испытания препарат целесообразно использовать только интраоперационно.

3. В эксперименте предельный допустимый срок безопастного ин-травитреалъного применения высокочистого ПФД составляет 10 сут и регламентируется нейропатией, развивающейся при более длительном использовании. В ходе клинического испытания препарат целесообразно использовать в основном интраоперационно.

-174. При интравитреальном применении высокочистого перфторполи-эфира 6МФ-130 в течение 30 сут не было выявлено местного раздражающего действия на ткани глаз животных. В ходе клинического испытания препарат может быть использован как для интраоперационной, так и для временной послеоперационной тампонады сетчатки.

5. Формирование мембран и шварт в полости CT, наблюдаемое при длительном интравитреальном применении ЖПФОС, обусловлено неспецифической воспалительной реакцией в ответ на введение чужеродного материала, направленной на его отграничение и изоляцию.

6. Высокая химическая чистота - обязательное, но не единственное требование к ПФОС, применяемым для временной послеоперационной ин-травитреальной тампонады. Важное значение имеет также биологическая инертность.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. О нормальной элекгроретинограмме лабораторных животных // Тез. докл. итог. науч. конф. слушателей и клин, ординаторов I фак-та. -СПб., 1996. - С. 109 - 110. (Соавт. Чурашов C.B., Кутан А.М.)

2. Перфтортрибутиламин в комбинированном хирургическом лечении отслойки сетчатки травматической этиологии // Тез. докл. итог. науч. конф. слушателей и клин, ординаторов I фак-та. - СПб., 1996. - С. 109. (Соавт. Чурашов C.B., Мясникова O.E.)

3. Экспериментальное обоснование возможности длительной тампонады сетчатки отечественным перфторполиэфиром МФ-130 // Тез. докл. Шестой науч.-практ. конф. офтальмологов Республики Беларусь. - Минск, 1996. - С. 26. (Соавт. Даниличев В.Ф., Шишкин М.М., Новожилова А.П., Кутин A.M., Мясникова O.E., Максимов Б.Н.)

4. Экспериментальное обоснование к применению в офтальмохирур-гии отечественных перфторорганических соединений // Тез. докл. Ш-го Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство». - М., 1996. - С. 106. (Соавт. Дани-личев В.Ф., Шишкин М.М., Чурашов C.B.)

5. Выявление токсической реакции сетчатки с помощью растровой электронной микроскопии // Тез. докл. XXXIX науч. конф. студентов и аспирантов мед. ВУЗов и НИИ Санкт-Петербурга. - СПб., 1996. - С. 12-13. (Соавт. Мясникова O.E.)

6. Экспериментальное исследование толерантности сетчатки по данным ЭРГ при интравитреальном введении отечественного ПФПЭ // Актуальные проблемы современной офтальмологии. - Саратов, 1996. - С. 219221. (Соавт. Даниличев В.Ф., Шишкин М.М., Кутин A.M.)

7. Отечественные перфторорганические соединения (ПФОС) в системе комбинированной хирургии передней пролиферативной вюреорети-нопатии (ППВР) II Тез. IX съезда офтальмологов Украины. - Одеса, 1996. -С. 447-448. (Соавт. Шишкин М.М., Даниличев В.Ф., Максимов Б.Н., Чурашов C.B.)

8. Состояние хрусталика при длительном экспериментальном интравитреальном применении высокочистых отечественных ПФОС // Сб. тез. XL конф. студентов и аспирантов морфологических каф. и лаб. Санкт-Петербургских ВУЗов и Науч.-исслед. ин-тов, посвящ. 125-летию со дня рожд. В.Н. Шевкуненко. - СПБ., 1997. - С. 23-24. (Соавт. Мясникова O.E.)

9. Способ атравматического взятия оболочек глаза для морфологических исследований // Сб. изобр. и рационализаторских предложений ВМе-дА - СПб., 1997. - Вып. 28. - С. 53-54. (Соавт. Новожилова АП., Мясникова O.E., Крейчман Г.С.)

10. Интраоперационная и временная послеоперационная тампонада витреапьной полости перфторполиэфиром 6МФ-130 в лечении отслойки

сетчатки // Сб. шобр. и рационализаторских предложений ВМедА. - СПб., 1997. - Вып. 28. - С. 29-30. (Соавт. Данилячев В.Ф., Шишкин М.М.)

11. Оценка толерантности структур глаза при интравитреальном применении ПФОС с помощью сканирующей электронной микроскопии // Тез. докл. III Междунар. конф. стран СНГ по функциональной нейромор-фологии, посвященная 100-летию со дня рождения Н.Г. Колосова. - СПб., 1997. - С. 49. (Соавт. Новожилова А.П., Крейчман Г.С., Мясникова O.E.)

12. Парциальное давление кислорода и углекислого газа высокочистых перфторорганических соединений при интравитреальном применении в эксперименте // Тез. Всерос. науч.-практ. конф., посвящ. 95-летию со дня рождения Т.И. Брошевского. - Самара, 1997. - С. 82-84. (Соавт. Даниличев В.Ф., Шишкин М.М.)

13. Морфологическое исследование клеточной реакции в полости стекловидного тела при интравитреальном применении ПФОС в эксперименте // Тез. Всеарм. науч. конф. «Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в военной медицине. - СПб., 1997. - С. 67-68. (Соавт. Новожилова А.П., Даниличев В.Ф., Шишкин М.М., Мясникова O.E., Парамонова Н.М., Савельева Н.И., Максимоа Б.Н.)

14. О результатах ограниченных клинических испытаний высокочистых ПФОС производства РНЦ «Прикладная химия» // Тез. Всеарм. науч. конф. «Физиологически активные вещества на основе перфторуглеродов в военной медицине. - СПб., 1997. - С. 133-136. (Соавт. Шишкин М.М., Даниличев В.Ф., Чурашов C.B.)

15. Экспериментальное обоснование применения перфторуглероди-стых жидкостей производства РНЦ «Прикладная химия» в витреорети-нальной хирургии // Перфторорганические соединения в биологии и медицине. - Пушино, 1997. - С. 126-130. (Соавт. Даниличев В.Ф., Шишкин М.М., Кутин А.М., Новожилова А.П., Мясникова O.E., Максимов Б.Н.)

Условные обозначения

ЖПФОС - жидкие перфторорганические соединения;

ЗВП - зрительные вызванные потенциалы на вспышку;

зн - зрительный нерв;

ОЭРГ - общая электроретинограмма;

ПФД - перфтордекалин;

ПФТБА - перфтортрибугиламин;

РНЦ - Российский научный центр;

РЭМ - растровая электронная микроскопия;

см - световая микроскопия;

ст - стекловидное тело;

тэм - трансмиссионная электронная микроскопия;

6МФ-130 - перфторполиэфир марки 6МФ-130;

р02 - парциальное давление кислорода;

рС02 - парциальное давление углекислого газа.