Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Эффекты фракций а-1,3-карбоксиметилглюкана при острой массивной кровопотере

и9 .11 5 2

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАБООШЬИШ РОССИИ ШВОСИБ1РШЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗШЕШ

медицинский институт

На правах рукописи

ВЕРЕЩШЯ Евгений Иванович

ЭФЁЕКШ ФРАКЩЙ а-1,3-КАРБ0таШ№ЛтНА. ПРИ. ОСТРОЙ МАССИВНОЙ КГОБОПОТЕРЕ-

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат

дассертацт на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 1992

'О/ •

у /М/г

Работа выполнена в Института физиологии СО РАМН

Научный руководитель-доктор медицинских наук,профессор Т.А.Короленко

Официальные оппоненты:

доктор медицински! наук,профессор 0.Р. Грек кандидат медицинских наук, старший

научный сотрудник А.А.Зубаиш

Ведущая организация-Институт фармакологии Томского научного центра РАМН (г. Томск).

Защита диссертации состоится " "_199 г.

в _______ часов на-заседании Специализированного совета

К 084.52.03 ори Новосибирском ордена Трудового Красного Знамени медицинской институте МЗ РФ (адрес: 630091, Новосибирск, Красный проспект 52)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского медицинского института.

Автореферат разослан "_" _199 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат медицинских наук

В.И.Шарапов

О!;.••.. I ■ ЛЛ

бИоЛ*'«** 1 ё^А

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Преодоление отрицательных эффектов и последствий острой массивной кровопотери.(ОМК) остается одной из важнейших проблем биологии и медицины. Наблюдаемая тенденция к увеличению частоты и тяжести ОМК в современной медицинской практике способствует сохранению высокого уровня летальности в связи с кровотечениями, геморрагическим шоком, кровозамещением и лечением последствий ОМК - отека мозга, "шокового легкого", ге-пато-ренального синдрома (Б.К.Кулагин,1978; Е.А.Еагнер,1986). Указанная проблема остается актуально! и для условий плановой хирургии, где нередко из-за травматичности операций возникает ОМК и необходимость интенсивной терапии этого состояния. При этом оказались несостоятельными надежды, связанные с решением проблемы ОМК на путях применения донорской крови. Оказалось,что коррекция ОМК даже.аутокровью таит риск развития опасных патофизиологических сдвигов вплоть до проявлений полиорганной недостаточности (Ю.Шутеу с соавт.,1981).

В связи с изложенным представляется целесообразным поиск способов и фарлакологических средств, предотвращающих либо ослабляющих отрицательные эффекты ОМК и ее последствий. Одним из возможных конкретных направлений поисков является способ искусственного индуцирования неспецифической резистентности к факторам ОМК. Известно, что некоторые виды животных обладают повышенной резистентностью к ОМК, а среди животных, одного и того же вида также возможна различная резистентность к механической травме И ОМК (Ра1шег1о е.а.,1969).

Показано,что в формировании неспецифической резистентности к травме и кровопотере важную роль играет система мононуклеар-ных фагоцитов (СИФ). При этом установлено, что блокада СМФ влечет потерю толерантности к инфекционным заболеваниям, радиационному воздействию, переохлаждению, травме. Напротив, стимуляция СМФ сопровождалась развитием кросс-толерантности к указанным агрессиям (01 Ьиг1о,1987). Эти сведения дают основание считать обоснованным! поиски фармакологической модификации функций СМФ с целью увеличения неспецифической резистентности организма к (¡акторам ОЫК и ее последствий.

Б настоящее время с целью стимуляции пункции иЬй используют

лило- к полисахарида (продкгжозап, глшаны, маннаны, гетеропо-лисахариды). Принципиально доказана высокая эффективность некоторых фармакологических агентов при терапии последствий ионизирующих излучений, инфекционных, неопластических заболеваний, гиповолемического шока (А.Н.Маянский,Д,Н.Маянский,1989). Однако лишь в единичных работах содержатся сведения по результатам физиологических исследований стимуляторов СМФ, применяемых с целью предотвращения патологических сдвигов при ОМК. При всей очевидности существования защитного эффекта стимуляторов СМФ остается не ясным механизм их действий при геморрагическом шоке.

В связи с этим представлялось целесообразны,! изучение особенностей патофизиологических сдвигов после ОМК,' возникающей на фоне предварительной фармакологической стимуляции (Л®, так как установление значимых закономерностей моает облегчить поиски физиологически обоснованной тактики применения фармакологических стимуляторов СМФ при возникновении ОМК и геморрагического шока. Отметим, что лишь единичные работы посвящены исследованиям этого аспекта проблемы СЩ (А.А.Зубахин, 1988).

Безусловно, интерес к исследованию возможностей стимуляторов СШ, способности их увеличивать резистентность организма к повревдаэдим факторам ОМК возрастает благодаря появлению препаратов, пригодных для применения в клинической практике. Наиболее перспективными в этом плане считаются препараты на основе В-1,3-глюкана, отличающиеся по растворимости и молекулярной массе (Й.Шандула, 1991; ш Ьиа1о,1986). Важно и то, что эти препараты, как правило, химически модифицированы с целью изменения их растворимости (Й.Шандула,1991). Одним из таких препаратов является в-1,3-карбсжмслетилглюкан (К!ЛГ)(Хилгаеский Институт, Братислава, Чехо-Словакия), обладащий выраженной стимулирующей активностью на СМФ. Однако пределы защитного действия препарата при шоке, в частности, геморрагическом, не изучены.' Сложность заключается в том, что в зависимости от молекулярной массы и растворимости бидо выделено несколько фракций препарата. Это означает существование различий в активности фракций глю-кана, так как известно, что растворимость препарата влияет на его эффективность при инфекционных, грибковых заболеваниях,действии ионизирующего излучения (Аг-Ьигззоп ё.а., 1989). Поэтому

оправдано исследование функциональных особенностей конкретных фракций препарата с целью выявления наиболее эффективных препаратов при терапии гиповолемического шока.

Аргументами в пользу актуальности выяснения физиологично-сти применения фармакологических стимуляторов СМФ при кровопо-тере являются противоречивые мнения исследователей на этот счет. Так, если увеличению фагоцитарной активности СЩ,а также секреции эйкозановдов, эндогенных опиатов и антилротеиназ отводится рещаюцая роль в формировании неспецдфкческой. резистентности организма, то такие продукты секреции макрофагов,как про-теиназы, лейкотриены, активные формы Og, играют прямо противоположную роль. Поэтому очевидно, что еще предстоит выяснение пределов активности определенных стимуляторов СМФ и клинической эффективности применения конкретных фармакологических форм стимуляторов СЗ®.

Щль и задачи исследования. Цель работы - изучить особенности патофизиологических проявлений острой массивной крово-потери при предварительном применении с целью защиты организма различных фракций в-I, З-карбоксиметшгглшана и выяснить возможные механизмы защитного действия стимуляторов СМФ при крово-потере. для достижения поставленной цели были сформулированы ' следующие задачи:

1. Исследовать влияние полурастворимой (1-я фракция) и растворимой (2-я фракция) фракций КМГ на функциональную активность* клеток CMS.

2. Оценить влияние предварительного введения 1-й фракции КМГ на течение раннего постгеморрагического периода.

3. Изучить эффект предварительного применения 2-й фракции КМГ при острой массивной кровопотере.

4. Оценить роль фагоцитарной функции СМФ и антидротеиназной системы в течении раннего постгеморрагического периода в условиях стимуляции CIS.

Научная новизна. Изучены in vitro и in vivo особенности фармакологического влияния различных фракций В-I, З-карооксиме-тилглюкана (К.ЕГ), отличающихся по молекулярной массе и растворимости, на функцию СГй. Установлен выраженный протекторный эффект лолурастворлыой фракции КыГ при острой массивной кровопотере. Его реализация происходит после предварительного (24 ча-

са) введения полурастворилод фракции ШГ внутривенно в дозе 25 мг/кг и заключается е снижении тяжести проявлений ОМК и летальности. Установлено, что конкретные механизмы защитного эффекта КС не связаны с усилением фагоцитарной функции С!,Э и увеличением антипротеиназного потенциала, а реализуются благодаря увеличении скорости, и мощности механизмов естественной компенсации . острой гиповолеши и нарушений транспорта кислорода на тканевом уровне.

Теоретическое и практическое значение работы. Решение поставленных в настоящей работе задач представляется перспективным дая дальнейших поисков средств предупреждение жизненно опасных нарушений гомеостаза вследствие ШК и высокотрав:яатичкых хирургических вмешательств. Такими средствами могу? являться препараты стимулятора функции С?.'Ф £-1,3-карбсжсиыегалглшана. В развитии неспецифической резистентности к кровопотер СКФ играет чрезвычайно ваанур роль, что еще недостаточно учитывается в современной медицинской практике. Установленные в работе неоднозначные возможности двух фракций КЖ" и связанная с этим различная резистентность ж кровопотере могут привлечь внимание специалистов. При изучении дингмтпш ОЩ, газообмена к КОС в постгеморрагическом периоде установлено, что полурас творимая фракция: MF обладает выраженным защитным эффектом при возникновении G.UC в случае предварительного применения. Проведение комплекса биохимических исследований позволило уточнить представления о физиологической роли фагоцитоза и ичгибиторов прстеиназ в индуцированной резистентности организма к факторам (Ш. Получеоше сведения о пригодных для клинического применения препаратов на основе £-1,3-глажана на функцнонаяьнун активность макрофагов in vivo и in vitro могут быть использованы для определения оптимальной области применения указанных препаратов (онкология, хирургия, инфекционные болезни).

Положения, выносимые на защиту:

1. Различные фракции КМГ при применении in vitro к in vivo оказывают неоднозначное влияние на функции СЩ>.

2. Применение полурастворимой фракции КМГ в дозе 25 ыг/кг за 24 часа до ОМК оказывает выраженное защитное действие на организм.

3. Применение растворимой фракции КМГ в дозе 25 мг/кг за

72 часа до кровопотери оказывает негативное воздействие на течение раннего постгеиоррагического периода.

4. Защитный эффект КМГ после ОМК обусловлен благоприятными влияниями на механизмы естественной компенсации ОЦК и транспорта кислорода.

5. Индуцированная Kf.iT резистентность организма к повреждающим факторам не связана с усшгешгем фагоцитоза и увеличением антипротеиназного потенциала.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Всесоюзном симпозиуме с международным участием по хроническому воспалению (Новосибирск, 1991); Международном симпозиуме "к1ИШ-91" (!.!юнхен, ФРГ, 1991); Европейской конференции по микроциркуляции (Лондон,Великобритания:, 1992); представлены на I Российский конгресс "Человек и лекарство" (Москва,1992).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста; состоит из введения,четырех глав (обзора литературы, материалов и методов исследований,собственных результатов^- две главы), обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка испаль-; зованной литературы (104 - отечественных и 129 - иностранных источников). Работа содержит 6 таблиц, 3 схемы, 16 рисунков.

содержание работы

Натериал и методы исследований. Работа выполнена на 986 с а щах мшей линии СБА. Кровопотеря в объеме 5($ ОЩС или Ъ,Ъ% массы тела осуществлялась путем быстрого (в течение 2-3 мин) забора крови из ретроорбиталыюго синуса в условиях эфирной анестезии. Известно, что подобный объем острой кровопотери у шекопитаодих сопровождается явлениями геморрагического шока и без интенсивной терапии может быть смертельным (М.Г.Вейль, Г. Шубин,1971; ■ Е.А.Вагнер с соавт.,Г986).

В работе использованы две франции в-I,З-карбоксиыетилглю-кана (ic.1T) (производство .Химического Института,Братислава, Че-хо-Словакия). Препарат представлен д.м.н. л.Шандула в рамках межинститутского научного сотрудничества. Первая - полураство-

римая фракция (молекулярная масса более 10 ) и вторая — растворимая фракция (молекулярная масса менее 1,2.ТО5). Полурастворимая фракция вводилась внутривенно за 24 часа, растворимая фракция вводилась за 72 часа до яровопотери. Функциональную активность изолированных перитонеальных макрофагов оценивали по способности восстанавливать нитросшпш тетразолий (НВТ, Serva,ФРГ). Функциональная активность Ci,K in vivo оценивалась по способности очищения крови от частиц коллоидного углерода по методу, предложенному Benaceraff е.а.,(1957). Изменения ОЦК оценивали с помощью I-альбушна; изменения газообмена и кислотно-основного состояния (КОС) - по Аструл.

Определение лактата крови и активности ЛДГ проводили с помощью стандартных наборов фирмы Eoeíiringer Mannheim (ФРГ). АКТИВНОСТЬ "АЛТ в сыворотке крови определяли по üeitman и Frankel (1957), щелочной фосфатазы (ЩФ) - по Bodansky (1972). Активность кислой фосфатазы (КФ) в сыворотке'крови определяли с помощью глицерофосфата, активность ß-галактозидазы исследовали с использованием в качестве субстрата í-Д-галактопиранозида (Barrett, 1972). Активность *C-¡--aiiriiTpiiiciiHa («¿[-AT) в сыворотке, крови оценивали с помощью этилового эфира и-бензоил-ъ-аргинина (Б.Ф.Еартикова, Г. С.Пасхина,1979).

Статистическую обработку полученных данных осуществляли с определением средней арис^метическо!! (.'.!), среднего квадратичес-кого отклонения ($"), ошибки средней арифметической (т ).Достоверность различий между группами определялась по критерию Сть-вдента (t) с последующим определением критерия вероя ности(р) и доверительного интервала (tm).

Результаты исследования

I. Изменения некоторых показателей гомеостаза и функционального состояния Cl.í'í при применении фракций КМГ

При оценке стимулирующего эффекта фракций КМГ на функциональную активность СШ> in vivo било отмечено, что введение полурастворимого ЮТ внутривенно в дозе 25 мг/кг сопровоадалось увеличением индекса фагоцитоза в 2 раза через 24 часа. Повышенные значения индекса фагоцитоза сохранялись в течение семи суток. При введении растворимо:! íTpaiai/iii 1СЛГ увеличение индекса фагоцитоза было отмечен^ ч-.регз 72 часа, после чего следовало

быстрое снижение до контрольных значений (рис.1).

Рис Л. Изменения К-индекса при применении фракций КМГ. По оси абсцисс - время (сут.); по оси ординат -индекс фагоцитоза (К), ¡здесь и далее (рис.2 и 3) заштрихована область значений показателя, соответствующая интактным животным.

На основании результатов исследований индекса фагоцитоза были обоснованы оптимальные сроки изучения протекторных свойств глюканов при развитии ОМК. В частности, кровопотерю целесообразно вызывать через 24 часа после введения 1-й фракции ШЛГ и через 72 часа после введения 2-й фракции КМГ, то есть на пике функциональной активности СШ>.

При определении стимулирующего эффекта фракций КМГ на изолированных перитонеальных резидентных макрофагах было отмечено, что растворимая фракция ЮТ обладает более выраженным стимулирующим действием на метаболизм изолированных макрофагов и генерацию активных форм О2 по сравнению с полурастворимой фракцией КМГ. Если в контроле лишь 33,0+2,6^ клеток обладали способностью к генерации активных форм 02, то при обработке резидентных макрофагов растворимой фракцией КМГ их число возрастало до 87,3+3,4$. При применении полурасгворимой фракции КМГ число НСТ-восстанаВливащих макрофагов возрастало до 54,3+4,2^. Обе фракции препарата вызывали увеличение активности ДДГ, ЩФ и

КФ в сыворотке крови.-Через 24 часа после введения внутривенно 25 мг/кг полурастворимого КМГ активность ЛДГ возрастала более чем в 3 раза, Цу - более чем в 2 раза, а активность IS в сыворотке крови - на 36$.

Свободная активность К& в гомогенатах печени увеличивалась с 30,2+2,3$ до 45,0+2,1$ от общей активности (р^0,01). Внутривенное введение растворимого КМГ сопровождалось выраженным повышением активности ЛДГ в 3,5 раза, ЩЗ - в 3 раза, КФ в сыворотке крови - на 43$. Свободная активность КФ в гомогенатах печени увеличивалась до 43,2+3,Активность AJIT, и в-галактозидазы в сыворотке крови при применении обеих_фракций КМГ в указанные сроки не изменялась. Подобные изменения активности цктоплазмати-ческих и лизосомных ферментов является результатом стимуляции фагоцитов (Dieter е.а.,1991) и объясняется как секрецией, так и "утечкой" мгеточных ферментов в результате модификации мембран стимулированных фагоцитов.

Таким образом, обе фракции КМГ оказывали выраженное стимулирующее воздействие на макрофаги in vivo и in vitro. Однако отмечены существенные отличия в стимулирующем действии фракций КМГ. Полурастворимая фракция КМГ в данной дозе оказывала более выраженное воздействие на функциональную активность СМ, оцениваемую по фагоцитозу. Растворимый. КЫГ оказывал преимущественно воздействие на метаболизм макрофагов с усилением генерации активных форм 02>и секрецию клеточных ферментов. Обе фракции КМГ не оказывали воздействия на газообмен, КОС, концентрацию лактата в сыворотке крови, ОЦК. Ранее бшго показано, что применение липополи-сахаридов in vitro сопровождалось усилением синтеза и секреции антипротеиназ, в частности c^-j—AT (ВагЪеу-Моге1,1991). Однако при применении in vivo обеих фракций КМГ происходило снижение активности ¡¿-¡-AT в сыворотке крови с 46,0+0,5 до 40,2+1,2 Ш/ыл (р <0,001) (Полурастворимый КМГ) и до 36,2+1,2 КЕ/мл (р ^0,001) (растворимый КМГ). По-видимому, снижение активности ¿-¡-AT связано с его инактивацией в результате усиления секреции активных форм 02 и протеиназ в результате стимуляции фагоцитов (Travis ¡.а.,1989).

2. Изменение показателем гомеостаза при не-корригируеиой острой массивной кровопотере

Острая массивная кровопотеря (ОгЖ) в объеме 5С% ОЦК вызывала гибель пяти из 20 животных в течение суток. При повторной кровопотере в объеме 0Щ через I час после первого кровопускания (50$ ОЦК) все подопытные животные погибли вскоре после кровопотери (табл.1).

Таблица I

Детальность при однократной и двукратной кровопотере у мышей СБА с предварительным применением КМГ

Вид кров о л о т е р и

Группы однократная ' двукратная

число летальность, животных % число ' животных летальность, %

Контроль (ОЖ) 20(5) 25 18(18) 100

1-я фракция КМГ + ОМК 20(1) 5 20( 8) 40

2-я фракция KT.ÎT + ОМК 20(8) 40 16(16) 100

Фракции КМГ вводили мызам однократно в дозе 25 мг/кг внутривенно за 24 часа до кровопотери. Посторную кровопотери осуществляли в объеме 30$ 0Ц{ через I час после первого кровопускания (5от ОЦК). 'Число погибших животных указано в скобках .

В ранний постгеморрагический период отмечена удовлетворительная компенсация ОЦК в течение первых 15-иин. По мнению Ра1шегао е.а. (1968), быстрая компенсация ОЩ в течение первых минут после кровопотери оказывает положительную роль на течеш;е постгеиоррагического периода, однако не предотвращает развития иока и высокую летальность при массивной кровопотере. Действительно, по данным настоящей работы, максимум изменений ОЦК был отмечен через I час после кровопотери, когда дефицит объема крови достигал 33% от исходного (рис.2, и 3).

Снижение ОЦК сопровождалось увеличением концентрации общего белка крови на 12* от исходного. Подобные изменения являются характеры^! дая геморрагического пока и пбъясшгзтся

Рис.2. Изменения ОЦК после кровопотери при применении 1-й фракции КМГ: по оси абсцисс - время после кровопотери (часы); во оси.ординат - ОЦК {% от массы тела).

ОЦК,$ м.т.

Ч.

7

контроль

' 2-я фракция КМГ+ОМК <508 ОЦК)

хЬ мин 1 час

а часа

Рис.3. Изменения ОЦК после острой массивной кровопотери при применении 2-й фракции ШГ: по оси абсцисс -время после кровопотери (часы); по оси ординат -ОЦК (¡5 от массы тела).

секвестрацией форменных элементов и феноменом "бегства" плазмы ИЗ СОСУДИСТОГО русла (В.К.КуЛаГИН, 1978). У тппгстгпгт «квотных нормализация ОЩ отмечалась к третьему часу. Компенсация достигалась за счет интерстициалъной жидкости, о чем свидетельствовало выраженное снижение гематокрита (на 38$) и концентрации общего белка крови (на 2955) к третьему часу после ОИК.

Со стороны показателей газообмена, КОС и концентрации диктата крови через I час после кровопотери были отмечены изменения, типичные для геморрагического шока: ацидемия, лакт ацидемия, снижение р^ и BtyHbOg. Концентрация лактата крови возвращалась к исходному уровню через 3 часа после кровопотери, однако нормализации рН, p^Og и st^Ht^ к этому сроку не наблюдалось (табл.2).

При оценке клиренса крови от частиц коллоидного углерода в данной группе отмечено выраженное снижение фагоцитоза в первые часы после кровопотери, причем наиболее выраженные изменения индекса фагоцитоза - снижение в 5 раз - были зарегистрированы спустя 3 часа после кровопотери (табл.З). Известно, что фагоцитарная активность СМФ зависит не только от функциональной активности макрофагов, но и микровдркудяции в паренхиматозных органах (Altura, 1984). Поскольку к третьему часу после ЯК отмечалась частичная нормализация кровообращения, очевидно, что подавление фагоцитоза связано с токсический действием физиологически активных веществ, а также блокадой элементов CUS объектами фагоцитоза (А.Н.Маянский, Д.Н.Маянский, 1989). Фагоцитарная активность восстанавливалась через 24 часа после кровопотери.

В сыворотке крови через I час после кровопотери отмечался рост активности ферментов-маркеров клеточного повреждения. Активность АЛТ, ЛДГ, 1ДФ и КФ в указанные сроки увеличивалась в 2 раза; активность в-галактозидазы увеличивалась через I час после кровопотери на 66£ (табл.4). Свободная активность КФ в гсмогенатах печени увеличивалась до 43,2+2,Щ от общей активности. Полученные данные свидетельствуют о выраженном повреждении тканей в раннем постгеыоррагическом периоде. ШК вызывала также снижение активности «¿j-AT в сыворотке крови с 46, Qt 1,2 до 32,0+2,1 Ш/ш (р<0,001), то есть на 25? от исходной активности (рис.4).

Таблица 2

Показатели газообмена и кислотно-основного состояния у мышей СБА при острой массивной кровопотере при предварительном применении фракций КМГ (№+ т)

Показатели газообмена и КОС

Интактные

Фракции КМГ

1-я (24 часа) 2-я (72 часа)

Ра02, мм рт.ст. раС02,мм рт.ст.

Нва02,

%

р\02, ым рт.ст.

РуС02,мм рт.ст.

Нв-у02. %

лактат крови, мшоль/л____

97,6*2,8

54,1+3,4

7,32+0,02

98,5+0,5

23,8+4,7

60,1+4,7

81,7+1,4

2137+138

97,041,9 49,0+0,7 7,35+0,006 98,0+0,8 26,0+1,6 64,1+2,1 80,0+1,4

1772+103

93,1+2,5 47,1+2,2 7,34+0,007 98,2+0,5 28,2+2,1 59,0+2,8 77,2+1,7

1808+107

ра02, мм рт.ст. раС02,ым рт.ст.

Нва02, %

ру02, мм рт.ст.

РуС02,мм рт.ст.

Нв\02, %

лактат крови, мкмоль/л

Контроль: 102,7+7,3 48,8+4,3 7,05+0,03*** 98,(¿0,4 9,5+1,1* 73,2+3,5 73,5+2,0***

5385+473***

I час после 85,2+3,4 43,7+4,5 7,22^0,02* 99,1+0,4 51,0+4,4*** ' 81,1+8,2 77,1+2,7

3272+269***

0?Ж:

81,4+4,4

52,0+4,5

7,14+0,02***

97,8+0,4

46,0+3,9**

67,0+3,8

72,0+2,1***

5707+482***

ра02, мм рт.ст. раС02,мм рт.ст.

Ру02, мм рт.ст.

руС02,ММ рт.ст.

Лактат крови, мкмоль/л_

Контроль: 72,3+1,5 47,5+1,6 7,09+0,01*** 26,¿2,2** 70,6+2,6**

3793+147***

3 часа после (Ж:

79,1+2,9

54,2+2,6

7,3(М),01

32,0+3,1

70,1+2,6

2653+478

72,0+2,6*** 48,0+1,8 7,15+0,02*** 41,(¿2,1 71,1+2,1

1470+121

Полурастворимый. (1-я фракция) КМГ и растворимый (2-я фракция) ИИ вводились в дозе 25 мг/кг внутривенно за 24 и 72 час до ОМК соответственно; п= 10 в каздой группе; *р-~0,05; ** р<0,01 ; ***р^0,001. _

Таблица 3

Влияние фракций ШГ на индекс фагоцитоза (К-индекс) у мышей СБА до и после ОМК (М+ т)

Время после ОМК к- -индекс

контроль 1-я фракция 2-я фракция

0 час до ОМК 0,055+0,004 0,117+0,008*** 0,110+0,01*

I час после ОМК 0,040+0,003 0,057+0,006 0,047+0,006

3 час после 01,ж 0,011+0,001*** 0,023+0,004*** 0,017+0,003**

24 час после ОМК 0,041+0,004 0,059+0,004 0,059+0,007

Фракции КМГ вводились внутривенно в дозе 25 мг/кг; п= 10 в каждой группе; *р<0,05 по сравнению с контролем до крово-потери; ** р<0,01; ***р<0,001.

Таблица 4

Изменения активности клеточных ферментов после кровопо-тери при предварительном применении фракций КМГ (М+ш)

Изучаемые показатели

Интактные

Фракции КМГ

1-я фракция 2-я фракция

ЛДГ. Цц/л 296+24 921+35*** 1058+95***

МТ, мшоль/м». ч 0,74+0,03 7,4+0,04 0,57+0,09

КФ.кмоль Рн/ман-л 4,4+0,25 6,0+0,4* 6,3+0,33*

в-галактозвдаза, НМОЛЬ ЫИР/МШ'Л 0,27+0,25 0,23+0,04 0,17+0,022

ЩФ,НМОЛЬ Рн/мИИ'Л 23,5+3,3 46,5+5,0*** 64,5+4,6***

ЛДГ, З^ц/л МТ, мшоль/м л. н КФ, нмоль Рн/мин.л в-галактозидаза,

НМОЛЬ ШЛ?/ШШ'Л

ЩФ,нмоль Рн/мин-л

Контроль: 643+24*** 1,62+0,14** 9,3+1,0***

0,45+0,03*** 47,5+4,0*

01; ***р<0,

I час после кровопотери: 813+86*** 1328+80*** 1,10+0,04* 2,20+0,20*** 6,9+0,25***. 7,7+0,50***

0,24+0,03 14,0+4,6***

0,19+0,01 57,5+4,4***

* р <0,05; ** р <0 тактными кивотныш.

001 - по сравнению с ин-

^i—AT,

контроль

1-я франция KMT

2-я фракция КМГ

I 2 3 4 5 6

Рис.4. Изменения активно с ra^j—антитрипсина через I час после CMC при предварительном применении фракций ЖГ: I - жнтактные; 2 - 1-я фракция luff, через 24 часа; 3 - 2-я фракция КМГ, через 72 часа; 4 - контроль + ОЖ (50$ ОЩ); 5-1-я фракция КШ? + ОМК; € - 2-я фракция КМГ + ОМК.

Таким образом, острая массивная кровопотеря в объеме 50^ ОЦК в течение раннего постгеморрагического периода сопровождалась развитием изменений показателей гомеостаза, характерных дай геморрагического шока.

3. Ранний посггеморрагический период в условиях предварительной стимуляции СМФ фракциями ЖГ

Полурасгворимая фракция КМГ, судя по результатам выживаемости животных,оказывала выраженное защитное действие при введении указанной дозы за 24 часа до ОЖ. Так,если в контрольной группе из 20 животных в течение 24 часов после кровопотери погибло пять мышей, то при'предварительном применении полурастворимой фракции КМГ из 20 погибла одна мышь. При повторной кровопотере в объеме 30^ ОЦК через I час после первого кровопускания (50$ ОЦК) из 20 животных погибло лишь 8 (табл.1).

" 'При оценке изменений 0Щ после кровопотери отмечено быстрое,в течение 15 мин,, восстановление ОЦК и отсутствие измене-объема крови через I и 3 час(рис.2 и 3). Компенсация ОЩ

происходила преимущественно за счет интерстициальной жидкости, о чем свидетельствовали изменения гемагокрита и концентрации общего белка в течение первых 15 мин после кровопотери; гема-токрит снижался в первне 15 мин на ЗСа концентрация общего белка сыворотки крови - на 25$ от исходного. При предварительном применении полурастворимого КМГ также отмечалось развитие ацидемии через I час после кровопотери, однако снижение рН ар-.-териальной крови в данной группе было менее выражено по сравнению о другими группами. Хотя увеличение pvOg и stHByOg в данной груше свидетельствовало о снижении утилизации кислорода тканями, выраженной гипоксии не отмечалось, о чем косвенно свидетельствовало лишь незначительное увеличение лактата крови (табл.2).

.Через 3 часа после кровопотери была отмечена полная нормализация показателей газообмена и КОС.

При предварительном применении полурастворимого КМГ происходило незначительное, по сравнению с другими группами,повышение активности АЛТ в сыворотке крови на 60$ через I час после ОМК. Активность других исследуемых ферментов в сыворотке крови и гомогенагах печени через I час после кровопотери не изменялась. При оценке клиренса крови от частиц коллоидного углерода во всех трех группах была отмечена выраженная депрессия фагоцитоза уже через I час после кровопотери. Максимум депрессии фагоцитоза был отмечен, как и в других группах, через 3 часа после кровопотери, когда К-ивдекс снижался с 0,117+0,01 до 0,059±0,01. Однако индекс фагоцитоза в группе с предварительным применением полурастворимого КМГ был вше (р -с0,01) по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе и не отличался от значений у интактных животных, (табл.3).

При предварительном применении полурастворимого КМГ отмечено незначительное (10$) снижение активности «¿р-АТ через I ч после кровопотери, что свидетельствовало о более благоприятном течении раннего лостгеморрагичеекого периода по сравнению с контрольной группой (рис.4).

Таким образом, предварительное применение полурастворимого КМГ оказывает защитное действие при ОМК, предотвращая либо уменьшая тяжесть геморрагического шока.

Предварительное применение растворимого КМГ сопровождалось

увеличением легальности по сравнению с другими экспериментальными группами. В этой группе из 20 животных, подвергнутых по-ку, погибло восемь мышей. При повторной кровопотере (табл.1) погибли все подопытные животные. При анализе причин, повлекших увеличение летальности в данной группе, отмечено, что предварительное введение растворимого ЭДЗГ в данной дозе за 72 часа до кровопогери вызывало нарушение механизмов компенсации ОЦК, что сопровождалось значительным снижением скорости восстановле-. ния ОЩ по сравнению с контрольными результатами. Через 15 мин после кровсшотери отмечено вырааенное снижение ОЦК (рис.3) почти в 2 раза. Незначительное снижение геыатокрита на 16$ от исходного и отсутствие изменении концентрации общего белка в перше минуты после нровопотери свидетельствовали о слабом поступлении экстравазальной жадности в сосудистое русло. Сраженный ■ дефицит ОЩ сохранялся также и через I час после кровопотери; полная компенсация гшгаволемии у выкивпшх животных отмечена лишь через 3 часа после кровопотери. Как и в других экспериментальных группах восстановление исходного объема достигалось за счет интерстлциальной еидкости.

. Применение растворимой фракции SUT сопровождалось развитием ацвдемии, лактаоддеши на фоне повышенных значений Pv®2 ^Р^ D,DDI) через I час после жрованотери (табл.2). Подобные изменения со стороны газового состава крови, кислотно-основного состояния ж концентрации дактата свидетельствовали о нарушениях микроцщшужции по типу шунтирования крови с развитием гипоксии тканей«

Применение растворимой фракции ЖГ не предотвращало связанного с жровопотерем роста активности АКТ, ЩФ, ДДГ. Активность ЩФ увеличивалась на ДДГ - на 25?, а активность АЯТ увеличивалась ¿алее чаы в 3 раза. Rxecre с теза активность КФ и в-, галактоздцазы в сыворотки крови, а танке КФ в гоыогенатах печени не изменялась (табл.4).

Еах ж в других экспериментальных группах в первые часы после кровопотери отмечено вырааенное снижение индекса фагоцитоза почти на BQfo через 3 часа после (табл.3), Ллнамяка индекса фаладгаоза при применении растворимой фракции КШ? не отличалась от изменений з других группах, однако фракции оказывали различный эффект на течение раннего люстгеыоррагичесхого пери-

ода. Отсюда следует, что состояние фагоцитарной функции СМФ в раннем постгеморрагичемкм периоде является вакннм, но не основным фактором, способствующим формировании толерантности организма к ОЫК и определяжщш исход геморрагического шока.

Спустя I час после кровспотери в данной группе было отмечено выраженное, на 27? от исходного значения, снижение активности oij-AT в сыворотке крови (рис.4). Истощение? антипротеи-назного потенциала также свидетельствует о тяжелом течении раннего постгеморрагкческого периода. Полученные результаты позволяет предполагать перспективность применения в клинической практике препаратов на основе в -I, З-карбаксимЕТШШликана в качестве фармакологических протекторов при угрозе ШК и геморрагического пока.

ВЫВОДЫ.

1. Обе исследуемые фракции а—I,3-карбоксшестлгшпкана(КМГ) вызывали выраженную стщуянцию СШ при введении внутривенно в дозе 25 мг/кг мылам СБА, а также в культуре изащкзванннзс резидентных перитонеальных макрофагов. Полурастворимая фракция. ККГ оказывала более значительное действие на фагсгцитарнув функцип CLS, однако растворимый КИТ обладал более выраженным стимуэшру-вдкл действием на метаболизм макрофагов.

2. Полурастворимый. №Г в дозе 25 мг/кг внутривенно оказывал выраженное защитное действие при. введении за 24 часа до кроЕопотери, выразившееся в снижении летальности. Растворимый КГ.1Г вызывал противоположный эффект при введении той же дозы за 48 часов внутривенно. - ■

3. Предварительное введение паяурестворЕШГО KMC вело к усилению механизмов аутокошенсацик гиповолемии, что выразилось в быстром, в течение первые 15 низ, восстановлении гшга— волеиии. Растворимая фракция KSST вела к нарушению механизмов компенсации дефицита О ЦК, в результате чего у ттитчг животных нормализация ОДК пропсходшга лшь к третьему часу после кровопотери.

4. При предварительной использовании полурастворимой фракции КМГ показатели газообмена, КОС, концентрации лактата крови через I час свидетельствовали о транспорте кислорода, адекватном потребностям тканей. Предварительное применение раство—

римого КМГ приводило к изменениям газообмена и микроциркуляции, характерным для гипоксии на фоне шунтирования кровотока.

5. Обе фракции КМГ при внутривенном введении в указанной дозе вызывали повышение активности цитоплазматических и лизо-сомальных ферментов в сыворотке крови, а также увеличение свободной активности кислой фосфатазы в гомогенатах печени. Применение полурастворимой фракции КМГ предотвращало связанный с кровопотерей рост активности цитоплазматических и лизосомаль-ных ферментов в сыворотке крови и свободной активности кислой фосфатазы в гомогенатах печени. При предварительном применении растворимого КМГ отмечался дальнейший рост активности цитоплазматических ферментов в сыворотке крови, связанный с кровопотерей.

6. Изменения ОЩ, газообмена, КОС, активности лизосомаль-ных и цитоплазматических ферментов в сыворотке крови свидетельствуют о том, что предварительное применение полурасгворимого КМГ предотвращает развитие геморрагического шока при острой массивной кровопотере.

7. Фагоцитарная функция С® играет важную, но не решающую роль в формировании резистентности к ОМК, поскольку индуцируемое КМГ повшеыае фагоцитарного потенциала может сопровождаться даже увеличением летальности. Развитие резистентности к ОМК также не связано с усилением антипротеиназного потенциала крови.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные в настоящей работе результаты являются основанием для разработки основ применения дрожжевых полисахаридов и их дериватов в качестве протекторов при циркуляторном шоке в медицине, в частности, в хирургической практике.

2. При применении препаратов-стимуляторов СМФ в клинической практике необходимо учитывать их молекулярную массу и растворимость.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

I. Верещагин Е.И. Дразгалиев К.Ш.,Демиденко Н.Л., Архипов С.А. .Гилинский М.А. ,5шпаяина Е.Е.,Короленко Т.А. Возможности стимуляции системы мононуклеарных фагоцитов дрожжевыми полисахаридами и их эффект на резистентность организма к кро-

вопотере и действию холода// Баллетень СО РЖ!.- 1992,- № I.-С.80-84.

2. Короленко Т.А. .Верещагин Е.И..Уразгалиев К.Ш.,Сафина А.Ф., Кашкина М., Сандула й. Иммуномодуляторь^-дрожжевые полисахариды, лизосомотропные свойства и биологический эффект// 1-й Российский конкресс "Человек и лекарство".- М., 1992.- С.100.

3. Верещагин Е.И. Эффект в-1,3-карбоксиметилглпкана при острой массивной кровопотере// Тезисы докладов Итоговой конференции студентов и молодых ученых Новосибирского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.- Новосибирск, 1991,- С.29-30.

4. Korolenko i1.Д.,Rukavishnikova E.V.,Safina А.Р..Vereschagin е.a. Effect of chloroquine on endocytosis and liver lyaosomes// Acta Biologica Hungarica.- 1991.- V.42„- IT 2.- P-38.

5. Korolenko T.A.,Urasgaliev K.Sg.,Dtishkin Ы.1.,Safina A., Vereschagin E.I.,SanduLa J. Mechanism of macrophage stimulation induced by yeast polysaccharides and their derivates// б th Bratislava Symposium on saccharides.- 1992.- P.3-6»

6. Vereschagin E.I. ,Korolenko 1»A. ^-proteinase inhibitor and resistance to acute blood loss during injection of £-1,3-carnoxymethylglucan// Abstraction of International Conference "Kinin-91Munich,Germany.- 1991.

7. Korolenko T.A,,lJrasgalieir K.Sh.,Vereschagin E.I. liver . macrophage activation by lysosomotropic agents and role in cold exposure// Abstracts of 5 th International Symposium on cells of the hepatic sinusoid.- Tucson,Arisona(USA)f 1991.- P.37.

8. Vereschagin E.I.,Korolenko T.A. Semisoluble glucan: effect on microcirculation during hemorrhagic shock// Int.J.Mic-cocirculation.- 1992,- V.11.- N 1.- P.S46.

9. Korolenko H.A.,Vereschagin E.I.,Urasgaliev K.Sh. e.a. Imnunommodulatory and antiproteolytic function of acute phase proteins// Biological functions on acute phase proteins.-Krakow (Poland), 1992.- P.45.

Подписано к печати Заказ И ?б1 Формат бумаги 60x90, объем I п.л._Тирая 100 экз.

Отпечатано на рогапринтном участке типографии СО РАМН.