Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Дерматопротекторные свойства сочетания реамберина и рексода на фоне сахарного диабета, осложненного экзогенной гиперхолестеринемией(экспериментальное исследование)

На правах рукописи

ЗЕЛЕНСКАЯ Анаит Владимировна

ДЕРМАТОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА СОЧЕТАНИЯ РЕАМБЕРИНА И РЕКСОДА НА ФОНЕ САХАРНОГО ДИАБЕТА, ОСЛОЖНЕННОГО ЭКЗОГЕННОЙ ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИЕЙ (экспериментальное исследование)

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

5 ИЮН 2014

005549821

Старая Купавна - 2014

005549821

Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России)

Научный руководитель: член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Галенко-Ярошевский Павел Александрович

Официальные оппоненты:

Покровский Михаил Владимирович, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», кафедра фармакологии, заведующий кафедрой;

Волчегорский Илья Анатольевич, заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармакологии, заведующий кафедрой

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации

Защита состоится «08» июля 2014 г. в «10:30» часов на заседании диссертационного совета Д 217.004.01, созданного на базе ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» (ОАО «ВНЦ БАВ», 142450, Московская область, Ногинский район, г. Старая Купавна, ул. Кирова, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОАО «ВНЦ БАВ» и на сайте www.vncbav.ru

Автореферат разослан «М » А£@<Р 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Яснецов Виктор Владимирович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Одним из наиболее распространенных в мире заболеваний эндокринной системы является сахарный диабет (СД), составляющий более 50% от всей эндокринной патологии. Количество больных СД с каждым годом неуклонно растет. К настоящему времени зарегистрировано более 230 млн. человек, страдающих СД, что составляет 6% взрослого населения. По прогнозам ВОЗ к 2030 г. в мире число больных СД увеличится до 366 млн. человек. Высокий уровень инвалидизации и смертности от СД (3-е место среди непосредственных причин смерти) определяет его как серьезную медико-социальную проблему, что послужило основанием назвать ситуацию с СД «эпидемией неинфекционного заболевания» (М.И. Балаболкин и соавт., 2005; И.И. Дедов, М.В. Шестакова, 2011; A.C. Аметов, 2011,2014; Т.А. Мелешкевич и соавт., 2011).

Известно, что СД сопровождается нарушениями периферического кровообращения, которые нередко влекут за собой ишемические повреждения различных органов и тканей, в частности кожи, и как следствие могут вызывать в них серьезные морфофункциональные изменения, вплоть до некротических. Развитие ишемии тканей в значительной мере индуцируется нарушениями микроциркуляции и изменением реологических свойств крови (Е.В. Кижаев, 1983; И.В. Алексанян и соавт., 1984; С.А. Муслимов, 2000; Р.Т. Нигматулин и соавт., 2003; Д.М. Аронов, 2009; H.A. Данилова, 2010; В.М. Бенсман, 2010; A.C. Аметов, 2011; М.Б. Анциферов, Е.Ю. Комелягина, 2013; J.R. Dushay et al., 2013; R. Vahora et al., 2013).

В основе ишемического повреждения тканей при СД лежит гипоксия, феномен оксидативного стресса, угнетение энергопродукции в клетках и, как следствие, нарушение метаболических процессов (П.А. Галенко-Ярошевский и соавт., 2001; Е.А. Чикобава и соавт., 2002; В.И. Шумаков и соавт., 2002; В.В. Афанасьев, 2005; И.И. Павлюченко, 2005; К.А. Бедросова и соавт., 2013; В.Е. Новиков, О.С. Левчен-кова, 2013; A.C. Аметов, 2014; Т.Н. Sanderson et al., 2013; P. Zhang et al., 2013).

Несмотря на то, что к настоящему времени созданы лекарственные препараты [а-адреноблокаторы - дигидроэрготоксин, фентоламин, тропафен и др.; биогенные стимуляторы биохимических процессов - актовегин и солкосерил; препараты витаминов РР - никотиновая кислота, В, - тиамин и В2 - рибофлавин; препарат про-стагландина Е. - алпростадил; антигипоксаиты и антиоксиданты - мексидол и ди-бунол], активизирующие в коже микроциркуляцию и обменные процессы (A.B. Покровский и соавт., 1996; М.Д. Машковский, 2010; Ю.Ю. Кирячков, М.В. Полу-эктова, 2012; Д.Н. Нурманбетов и соавт., 2013; L.L. Sukharev, A.A. Guch, 1994), они не всегда проявляют высокую фармакотерапевтическую активность и могут вызывать различные побочные явления [фентоламин и тропафен: ортостатический коллапс, тахикардию, набухание слизистой носа и др.; актовегин и солкосерил: аллергические реакции; витамины РР (покраснение лица и верхней половины туловища, аллергическую крапивницу, парестезии и др.), Bi (аллергические реакции) и В2 (нарушение функции почек, аллергические реакции); алпростадил: снижение артериального давления, головные боли, гиперемию в месте инъекции; мексидол: аллергические реакции, сонливость, сухость во рту и др.; дибунол: аллергические реакции, токсическое поражение печени, повреждения тканей легкого, которые могут инициировать воспалительный процесс и развитие опухолей] (Н.Г. Гусева,

2002; С.Г. Бурчинский, 2008; М.Д. Машковский, 2010; М.Б. Плотников и соавт., 2010). Это диктует необходимость поиска и разработки высокоактивных дермато-протекторных средств, повышающих устойчивость кожи в условиях редуцированного кровообращения (PK), особенно инициированного СД (A.B. Тегай, 2004; Т.Н. Хропова, 2004; E.H. Багметова, 2005; Ю.Ю. Федченко, 2005; О.Н. Гулевская и соавт., 2013; В.В. Селецкая, З.К. Ешева, 2013). В этом направлении большой интерес представляют такие препараты метаболического типа действия, как реамберин и рексод.

Реамберин - изотонический сбалансированный детоксицирующий инфузион-ный раствор, в состав которого входит меглюмина натрия сукцинат, синтезированный на основе янтарной кислоты (ЯК). Последняя, как известно, является естественным эндогенным субстратом клетки - интермедиатом цикла Кребса. ЯК улучшает тканевое дыхание, снижает концентрацию лактата, пирувата и цитрата, которые накапливаются в клетке при развитии гипоксии, и усиливает образование энергии, необходимой для обеспечения регенераторных процессов при ишемии тканей (C.B. Оболенский, 2002; Г.Л. Вышковский и соавт., 2004; В.В. Афанасьев, 2005; И.А. Волчегорский и соавт., 2008; Е.Л. Карасулова и соавт., 2013). Натрия сукцинат, как экзогенный адаптоген, повышает резистентность тканей (в том числе и при СД) к повреждающим воздействиям, улучшает окислительно-восстановительные и энергетические процессы в тканях, что обусловливает наличие у него мембраностабилизирующего и противогипоксического действия (П.А. Галенко-Ярошевский и соавт., 2001, 2012; В.В. Афанасьев, 2005; Т.А. Воронина, 2012; В.К. Леонтьев и соавт., 2012; Е.Л. Карасулова и соавт., 2013).

Рексод представляет собой рекомбинантную супероксидцисмутазу (СОД) человека, получаемую по генноинженерной технологии с использованием в качестве продуцента культуры дрожжей Saccharomyces cerevisiae (штамм Y2134). СОД является ферментом антиоксидантной системы (АОС) клеток, защищающим их от токсического воздействия активных форм кислорода (АФК), накопление которых в клетке приводит к развитию таких патологических процессов, как гипоксия, воспаление и др. АФК и свободные радикалы, образующиеся в процессе перекисного окисления липидов (ПОЛ), оказывают воздействие на соединительную ткань (гиа-луронововую кислоту) и на все компоненты клеток, что приводит к угнетению тканевого дыхания, процессов гидроксилирования в микросомах и дисбалансу клеточного метаболизма (П. Щвец, 1996; Н.К. Зенков и соавт., 2001; A.B. Гейниц и соавт., 2003; Л.А. Дмитриева, Е.П. Просвирова, 2004; А.Ю. Андреев и соавт., 2005;

A.B. Ваваев и соавт., 2007; Т.В. Гайворонская, 2008; П.А. Галенко-Ярошевский,

B.В. Гацура, 2009; В.В. Селецкая, З.К. Ешева, 2013).

Показано, что СОД удаляет супероксидные радикалы и предотвращает образование гидроксильного радикала и синглетного кислорода, снижает накопление в очаге воспаления нейтрофилов, которые секретируют значительные количества лизосомальных ферментов, разрушающих близлежащие ткани, нормализует окислительные процессы с участием свободных кислородных радикалов и предупреждает разрушение биомембран, связанное с активацией ПОЛ (Р. Бекманн и соавт., 1995; Б.А. Парамонов, 1999; Т.А. Пичукова и соавт., 1999; И.В. Чурилова и соавт., 1999, 2002; A.B. Стефанов и соавт., 2004; Т.В. Гайворонская и соавт., 2007; П.А. Галенко-Ярошевский, В.В. Гацура, 2009; S.M. Drogovoz, L.V. Derimedved, 1998).

Исходя из приведенных данных, представлялось целесообразным исследовать

дерматопротекторные (ДП) свойства реамберина, рексода и их сочетания в условиях РК на фоне нормо- и гипергликемии, индуцированной аллоксановым СД (АСД), осложненной экзогенной гиперхолестеринемией (ЭГХ).

Цель работы: выявить дерматопротекторное действие реамберина, рексода и их сочетаний в условиях редуцированного кровообращения на фоне нормо- и гипергликемии, вызванной аллоксановым сахарным диабетом, осложненной экзогенной гиперхолестеринемией.

Основные задачи исследования:

1. Исследовать острую токсичность реамберина [при внутривенном (в/в) введении мышам и крысам], рексода [при в/в и внутрибрюшинном (в/бр) введениях мышам] и их сочетания (при в/в введении крысам).

2. Провести сравнительное исследование влияния реамберина, рексода и их сочетания на выживаемость кожи крыс в условиях РК на фоне нормо- и гипергликемии, индуцированной АСД, осложненной ЭГХ.

3. Изучить влияние реамберина, рексода и их сочетаний на пролиферативную активность и ПОЛ остео- и фибробластов крыс.

4. Исследовать молекулярные механизмы ДП действия реамберина, рексода и их сочетания в опытах на крысах.

Научная новизна. В представленной работе впервые обосновано гистопро-текторное действие реамберина и его сочетания с рексодом — способность повышать выживаемость тканей (кожи) в условиях РК.

Показано, что реамберин и, особенно, композиция реамберин + рексод при парциальной ишемии кожи, моделированной в области хвоста, спины и передней брюшной стенки крыс на фоне нормо- и гипергликемии, индуцированной АСД, осложненной ЭГХ, оказывают ДП (антинекротическое) действие, которое может быть обусловлено активизацией энергетических процессов и повышением резервных возможностей системы антиоксидантной защиты.

Впервые установлено, что при сочетании реамберина с алпростадилом (ваза-простаном) ДП активность последнего существенно увеличивается. Кроме того, сочетание реамберина с рексодом по способности повышать выживаемость кожи в условиях РК практически сопоставимы с вазапростаном.

Научно-практнческая значимость работы. Полученные результаты исследований являются основанием целесообразности клинического изучения реамберина, композиций реамберин + рексод и реамберин + вазапростан в качестве ДП средств при РК в коже, вызванном травматическими повреждениями и СД.

Связь темы диссертации с планом научно-исследовательской работы учреждения. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармакологии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России «Поиск и изучение кардио-, нейро- и дерматотропных веществ среди гетероциклических соединений и веществ метаболического типа действия» (№ гос. регистрации 01201263450) .

Внедрение в практику результатов исследования. Результаты исследований ДП активности реамберина и его сочетаний с рексодом и вазапростаном внедрены в учебный процесс кафедр фармакологии Кубанского, Ростовского и Волгоградского государственных медицинских университетов.

Композиция реамберин + вазапростан используется в клинической практике кафедр общей хирургии и сосудистой хирургии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Реамберин, рексод и их сочетания при однократном введении мышам и крысам проявляют низкую токсичность.

2. В условиях ишемии тканей хвоста, кожи спины и передней брюшной стенки крыс, вызванной нарушением в них кровообращения, реамберин, рексод и в большей мере их сочетание при 1- и 7-кратном введениях обладают гистопротек-торным действием.

3. Вазапростан и, особенно, его сочетание с реамберином при частичной арте-риовенозной недостаточности кожного лоскута (КЛ) передней брюшной стенки крыс повышают его выживаемость. Сочетание вазапростана с рексодом не обладает ДП действием.

4. При артериовенозной недостаточности КЛ передней брюшной стенки крыс на фоне нормо- и гипергликемии, индуцированной АСД, осложненной ЭГХ, сочетание реамберина с рексодом (в/в в течение 14 дней) обладает ДП действием и оказывает нормализующее влияние на углеводный и липидный обмен.

5. Реамберин, рексод и в большей мере их сочетания оказывают протекторное действие на культивируемые остео- и фибробласты крыс при токсическом воздействии на них метаболическими гипоксантами натрия цианидом (NaCN) и 2,4-динитрофенолом (ДНФ).

6. При ишемии кожи, вызванной моделированием кожной складки (КС) в области спины крыс, реамберин, рексод и в большей мере их сочетание активизируют в ней энергетические процессы и повышают резервные возможности АОС.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на расширенных заседаниях (17.11.2010 г., 06.10.2011 г., 23.05.2012 г. и 23.12.2013 г.) Краснодарского краевого отделения Российского научного общества фармакологов с приглашением представителей кафедр фармакологии, клинической фармакологии и функциональной диагностики ФПК и ППС, нормальной физиологии, общей и клинической патофизиологии, биологии с курсом медицинской генетики, клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики ФПК и ППС, общей хирургии, факультетской хирургии с курсом анестезиологии и реаниматологии, госпитальной хирургии, глазных болезней, пропедевтики и профилактики стоматологических заболеваний, ортопедической стоматологии, хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии, стоматологии ФПК И ППС ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России, кафедры анатомии и морфологических дисциплин НОЧУ ВПО КМИ, кафедры органической химии ФГБОУ ВПО «КубГТУ» и Краснодарского филиала ФГБУ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» Минздрава России, а также на конгрессе «Человек и лекарство. Краснодар - 2008» (16-18 октября 2008 г., г. Краснодар), VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием по клинической фармакологии, посвященной 90-летию профессора A.A. Столярчука «Клиническая и экспериментальная фармакология метаболических корректоров, органопротек-ция, доказательная медицина» (10 - II ноября 2010 г., г. Винница, Украина) и на первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Проблемы разработки новых лекарственных средств» (3-5 июня 2013 г., ФГБУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН, г. Москва).

Личный вклад автора. Автор принимал непосредственное участие в выборе направления и разработке дизайна исследования. Все эксперименты проведены ав-

тором лично или при его активном участии. Автор самостоятельно проводил статистическую обработку результатов исследований и их анализ, формулирование выводов и рекомендаций, принимал активное участие в подготовке публикаций по результатам работы (авторский вклад составил 80%).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 13 работ, из них 4 в журналах, рекомендованных ВАК при Министерстве образования и науки Российской Федерации и 1 монография.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 183 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 2 глав с описанием результатов собственных исследований, заключения, выводов, научно-практических рекомендаций, благодарности, списка принятых сокращений, библиографии, включающей 367 источников на русском и 72 - на иностранных языках. Работа содержит 47 рисунков и 22 таблицы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ I. Материалы и методы исследования

Изучение ДП свойств реамберина (производитель «Научно-технологическая фармацевтическая фирма "ПОЛИСАН"», Россия, г. Санкт-Петербург) и рексода (производитель Федеральное государственное унитарное предприятие «Государственный Научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов» Федерального медико-биологического агентства России, г. Санкт-Петербург) и их сочетаний проведено согласно Методическим рекомендациям по количественной оценке влияния препаратов на жизнеспособность тканей в условиях PK, разработанным Б.И. Любимовым и соавт. (1986), Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (ред. Р.У. Хабриев, 2005) и Руководству по проведению доклинических исследований лекарственных средств (под ред. А.Н. Миронова и соавт., 2012).

Эксперименты выполнены на нелинейных животных: 224 мышах и 912 крысах обоего пола массой 18,0 - 30,0 и 165,0 - 220,0 г, находившихся в обычных условиях вивария на стандартном пищевом рационе согласно принятым требованиям (П.П. Гамба-рян, Н.М. Дукельская, 1955; И.П. Западшок и соавт., 1983; H.H. Каркищенко, 2004).

Острую токсичность (определение летальных доз, вызывающих 5, 16, 50, 84, 95 и 99 % гибели животных — ЛДз, ЛД16, ЛД50, -И; ls:- ЛД95 и ЛД99) реамберина, рексода и их сочетаний исследовали в опытах на мышах и крысах по методу В.Б. Прозоровского (1962). Наблюдение за животными вели в течение 2-х недель.

Гистопротекторное действие реамберина, рексода и их сочетания изучали в опытах на хвостах крыс по разработанному нами методу (A.B. Агаджанова и соавт., 2008). Гистопротекторное действие препаратов и их сочетания оценивали по длине некротизированной части хвоста (НЧХ) на 3 и 7-е сутки после перевязки сосудов.

ДП действие реамберина, рексода и их сочетаний в условиях ишемии кожи, вызванной формированием КС на спине крыс, исследовали по методу, описанному В.П. Галенко-Ярошевским и соавт. (2005). Эффективность действия препаратов и их сочетания определяли на 3 и 7-е сутки после создания ишемии путем измерения длины некротизированной части КС (НЧКС) с помощью сантиметровой линейки.

Влияние реамберина, рексода, алпростадила (вазапростана) и их сочетаний на выживаемость КЛ в условиях его частичной артериовенозной недостаточности изучали в экспериментах на крысах по методу, описанному Е.В. Кижаевым и со-

авт. (1986). На 3, 7 и 10-е сутки проводили замеры площади некроза KJI по методу, описанному K.M. Фенчиным (1979).

Влияние реамберина в сочетании с рексодом на выживаемость KJI передней брюшной стенки в условиях АСД, осложненного ЭГХ, изучали в опытах на крысах по методам, описанным В.Г. Барановым и соавт. (1983), Е.В. Кижаевым и соавт. (1986), В.И. Корчиным и соавт. (1992), JI.E. Бобыревой (1998), М.А. Юриной, O.A. Адейкиной (2002), В.И. Яньковой и соавт. (2002).

Инсулинзависимый СД воспроизводили путем в/бр введения крысам аллоксана в дозе 135 мг/кг. Через 2 недели после моделирования СД животным в течение 14 дней внутрижелудочно через зонд вводили холестерин в виде эмульсии (40 мг/кг в 0,5 мл растительного масла). К эмульсии добавляли эргокальциферол (12500 ЕД/кг) для усиления пероксидного стресса и параллельно в течение 14 суток подопытным группам животных в/в вводили реамберин (25 мг/кг) в сочетании с рексодом (0,02 мг/кг), а контрольным - физиологический раствор (физ. р-р) в объемах, эквивалентных объемам вводимых препаратов.

На 15 сутки после введения сочетания реамберина с рексодом в области передней брюшной стенки крыс формировали КЛ с перевязкой сосудов (артерии и вены) с одной стороны и на 10-е сутки оценивали эффективность действия препаратов по величине зоны некроза. Затем отбирали по 7 крыс из каждой группы для определения в крови содержания глюкозы, общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), холестерина липопротеинов высокой плотности (ХС-ЛПВП) и ß-липопротеинов (ß-ЛП). При этом использовали автоматический биохимический анализатор KONELAB-30 (корпорация Thermo Fisher Scientific, США).

Влияние реамберина, рексода и их сочетаний на нролиферативную активность остео- и фибробластов исследовали по методу, описанному В.Н. Меладзе и соавт. (2002), Т. Mosmann (1983). В данной серии опытов использовали 16 новорожденных белых крыс для получения культур остео- (теменной кости) и фибробластов (кожи).

Экспериментальную модель гипоксии создавали путем добавления в лунки субтоксических доз NaCN до концентрации 0,2 ммоль и ДНФ - до 0,5 ммоль (С.А. Rahn et al., 1991) с последующей инкубацией в течение 1 суток.

Цитотоксичность оценивали с помощью МТТ-теста. В основу методики положена способность дегидрогеназ, имеющихся в живых клетках, переводить водорастворимый 3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,2-дифенилтетразолий бромистый (МТТ) бледно-желтого цвета в нерастворимые в воде голубые кристаллы формазана (Т. Mosmann, 1983).

Исследование влияния реамберина, рексода и их сочетаний на ПОЛ остео- и фибробластов крыс проводили по методу, описанному В.Н. Меладзе и соавт. (2002).

По содержанию соединений, реагирующих на 2-тиобарбитуровую кислоту (ТБК), определяли интенсивность процессов ПОЛ.

Влияние реамберина на функциональную активность митохондрий в условиях ишемии кожи изучали в опытах на крысах по методу, описанному В.П. Галенко-Ярошевским и соавт. (2005). После карантина животных в случайном порядке рандо-мизировали по 8 особей на 3 группы. Крысам интактной группы в/в вводили 0,64 -0,81 мл физ. р-ра (в зависимости от массы крысы и объема раствора реамберина, в котором содержалась исследуемая доза меглюмина натрия сукцината) в течение 3-х дней после удаления шерсти в области спины. У животных контрольной группы воспроизводили ишемию кожи путем прошивания ее шелковой нитью в области спины,

создавая КС длиной 4,5 — 5,0 см и высотой 1 см. Затем, через 1 ч и последующие 3 суток, в/в вводили физ. р-р в объемах, эквивалентных объемам растворов реамберина. Крысам подопытной группы через 1 ч после воспроизведения ишемии кожи и в течение 3-х дней в/в инъецировали реамберин (25 мг/кг). Далее в гомогенатах кожи и крови животных определяли содержание адениловых и пиримидиновых нуклеотидов, креатинфосфата (КФ), цитохрома С, лактата, пирувата, малонового диальдегида (МДА), ферментативную активность сукцинат- и НАД'Н-убихинон-редуктазной систем, активность ферментов антиоксидантной защиты - глутатионпероксидазы (ГП) и СОД, а также активность креатинфосфокиназы (КФК), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), аланин- (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ).

ДП и антиоксидантное действие (АОД) рексода при ишемии кожи исследовали в опытах на крысах по методу, описанному В.П. Галенко-Ярошевским и соавт. (2005). Животных в случайном порядке рандомизировали по 7 особей на 3 группы: 1-я - интактная, 2-я — контрольная, 3-я — подопытная. У крыс 2-й и 3-й групп воспроизводили ишемию кожи по вышеописанному методу. За 1 час до воспроизведения ишемии животным 3-й группы в/бр вводили рексод в дозе 0,02 мг/кг, а 2-й группы -физ. р-р в эквивалентном объеме.

Далее в гомогенатах кожи и крови животных определяли содержание адениловых и пиримидиновых нуклеотидов, КФ, цитохрома С, лактата, пирувата, МДА, активность каталазы, СОД, уровень убихинона и ферментативную активность сукцинат-и НАД'Н-убихинон-редуктазной систем. Определение активности КФК проводили с помощью тест-набора «LaRoche», активность ГП, скорости генерации супероксидного аниона (СГ '02~), содержание АлАТ и АсАТ осуществляли с помощью набора «Био-Ла-Тест» («Lachema»), активность ЛДГ с использованием тест-системы «Диахим».

Влияние реамберина и рексода на показатели цитолитических, энергетических и антиоксидантных процессов в ишемизированной коже исследовали в опытах на крысах по методу, описанному В.П. Галенко-Ярошевским и соавт. (2005). Животных в случайном порядке рандомизировали на 4 группы (по 8 особей): 1-я - интактная, 2-я - контрольная, 3 и 4-я - подопытные. Ишемию кожи воспроизводили по вышеописанному методу. Крысам 3-й группы в/в вводили реамберин (25 мг/кг за 10 мин до воспроизведения ишемии), 4-й - композицию рексод (0,01 мг/кг в/бр за 1 ч до ишемии) + реамберин (6,25 мг/кг в/в за 10 мин до ишемии). Через 3-е суток в гомогенатах кожи и крови животных определяли активность КФК, сукцинатдегидрогеназы (СДГ), НАД*Н- и сукцинат-убихинон-редуктазной систем, ферментов АОС, уровень коэнзима Qu,, убихинона, СГ "02\ АлАТ и АсАТ определяли с помощью наборов «Био-Ла-Тест» («Lachema»), ЛДГ - с использованием тест-системы «Диахим».

Статистическую обработку результатов исследований проводили по М.Л. Беленькому (1963) и H.H. Самойлову (1970). При этом использовали программу «STAT Soft», а также программное обеспечение для IBM PC, разработанное на кафедре фармакологии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России. Статистическую достоверность результатов оценивали с помощью t критерия Стыодента.

II. Результаты исследования и их обсуждение

Острая токсичность и ДП свойства реамберина, рексода и их сочетания. Острая токсичность. Установлено, что показатели острой токсичности — ЛД5, ЛД]6, ЛД50, ЛД84, ЛД95 и ЛД99 — реамберина для мышей при в/в введении равны 4430,0, 6240,8, 12084,5 ± 1543,2, 17434,5, 19245,2 и 19903,7 мг/кг, для крыс -4617,8, 6110,8, 10929,0 ± 1393,7, 15340,0, 16833,0 и 17375,8 соответственно.

Рексод при в/в (0,5 мг/кг) и в/бр (1 мг/кг) путях введения мышам (по 12 животных в группе) не вызывал каких-либо признаков отравления как в ближайшие (3 ч), так и отдаленные (в течение 14 дней) сроки наблюдения.

В случаях использования сочетания реамберина с рексодом его острая токсичность, по сравнению с таковой реамберина, взятого отдельно, для крыс существенно снижалась. Так, ЛД5, ЛД16, ЛД50, ЛД84, ЛД95 и ЛД99 сочетания реамберина с рексодом равны 7259,4, 9358,9, 16134,4 ± 1772,6, 24436,8, 25200,3 и 26905,0, тогда как эти показатели для реамберина значительно ниже. При сопоставлении ЛД50 сочетание реамберина с рексодом в 1,5 раза менее токсично, чем реамберин, взятый отдельно.

Исследование гистопротекторного действия в опытах па хвостах крыс. Установлено, что на 3-й сутки эксперимента при применении реамберина в дозах 100, 50 и 25 мг/кг (в перерасчете на меглюмина натрия сукцинат) длина НЧХ составила 1,0, 1,7 и 0,0% против 33,4 % в контроле, на 7-е сутки - 20,7, 26,7 и 3,9% против 72,1% в контроле соответственно. При введении реамберина в дозах 12,5, 6,25 и 3,125 мг/кг длина некроза на 3-й сутки составила - 0,0, 0,0 и 5,7% против 15,4% в контроле, на 7-е сутки - 33,0, 45,0 и 51,4% против 66,1% в контроле соответственно. Разность длины НЧХ крыс контрольной и подопытной групп на 3 и 7-е сутки после применения реамберина в дозах 100, 50, 25, 12,5, 6,25 и 3,125 мг/кг составила 32,3 и 51,4, 31,6 и 45,4, 33,3 и 68,2, 15,4 и 33,1, 15,4 и 21,0, 9,7 и 14,7%, а выжившая часть хвостов (при сопоставлении НЧХ у этих групп животных в отмеченные сроки исследования) - 97,0 и 71,3, 94,9 и 63,0, 100,0 и 94,6, 100,0 и 50,1, 100,0 и 31,9, 63,0 и 22,2% соответственно (табл. 1).

Таблица 1. Влияние реамберина на выживаемость тканей в условиях РК при перевязке сосудов хвоста крыс (М ± т, п = 10)

Препарат Доза Длина некротизированной части хвоста, %

препарата, 3 сутки 7 сутки

мг/кг

1 2 3 4

Физ. р-р (контроль) [1] 33,35 ±6,71 72,06 ±2,81

Реамберин 100 0,95 ± 1,08 20,65 ± 7,25

[2] 32,3/97,0 51,4/71,3

р2-у < 0,001 р2-,< 0,001

Реамберин 50 1,70 ± 1,84 26,71 ±9,42

[3] 31,6/94,9 45,4/63,0

Рз-/< 0,001 ^.2>0,05 рз-1< 0,001 р1.2> 0,05

Реамберин 25 0,0 ± 0,0 3,89 ± 1,62

[4] 33,3/100,0 68,2/94,6

р4-1< 0,001 Р4-2 > 0,05 />.,-/<0,001 р4_2< 0,05

Р4-1 > 0,05 р4.з< 0,05

Физ. р-р (контроль) [5] 15,39 ±4,98 66,05 ± 7,58

Реамберин 12,5 0,0 ± 0,0 33,01 ±8,01

[6] 15,4/100,0 33,1/50,1

р«< 0,01 Рб.2> 0,05 /7« <0,01 Рб-2> 0,05

Рб-з > 0,05 Р6.4> 0,05 Рб-з > 0,05 а«<0,01

Окончание таблицы 1

1 2 3 4

Реамберин 6,25 0,0 ± 0,0 45,03 ± 6,06

[7] 15,4/100,0 21,0/31,9

/?7-5<0,01 р7-2 >0,05 р7.5< 0,05 р7-2 <0,02

Р7-з > 0,05 р?-4> 0,05 P7J> 0,05 Р7.4< 0,001

р?-б> 0,05 Р7-б> 0,05

Реамберин 3,125 5,70 ±2,81 51,37 ±6,60

[8] 9,7/63,0 14,7/22,2

р8.5> 0,05 ps.2> 0,05 ps-i> 0,05 №.2<0,01

Ps-з > 0,05 р8-4> 0,05 pSJ< 0,05 pS-4< 0,001

ps-,s >0,05 рз-7> 0,05 ps-,5 >0,05 ps.7 >0,05

Примечание. Здесь и в таблицах 2 и 3 в квадратных скобках - номера серий экспериментов контрольной и подопытных групп; в числителе - разность длины (в %) НЧХ контрольной и подопытных групп, в знаменателе - выжившая часть (в %) хвостов (при сопоставлении некроти-зированных частей контрольной и подопытных групп).

При применении рексода в дозах 0,01, 0,02 и 0,04 мг/кг на 3-й сутки эксперимента длина НЧХ составила 17,0, 6,6 и 5,2% против 11,2% в контроле, на 7-е сутки — 68,2, 53,5 и 53,3% против 72,7% в контроле соответственно. Разность длины НЧХ крыс контрольной и подопытной групп на 3 и 7-е сутки после применения рексода в дозах 0,01, 0,02 и 0,04 мг/кг оказалась равной -5,8 и 4,5, 4,6 и 19,3, 6,0 и 19,5%, а выжившая часть хвостов (при сопоставлении НЧХ у этих групп животных в отмеченные сроки исследования) - -51,8 и 6,2, 41,1 и 26,5, 53,6 и 26,8% соответственно (табл. 2).

Таблица 2. Влияние рексода на выживаемость тканей в условиях РК при перевязке сосудов хвоста крыс (М ± ш, п = 10)

Препарат Доза препарата, мг/кг Длина некротизированной части хвоста, %

3 сутки 7 сутки

Физ. р-р (контроль) [1] 11,16±3,14 72,70 ±4,11

Рексод [2] 0,01 17,04 ±3,36 -5,8/-51,8 P2-I > 0,05 68,19 ±5,63 4,5/6,2 Pl., > 0,05

Рексод [3] 0,02 6,60 ± 3,89 4,6/41,1 pi-i> 0,05 рз-2 > 0,05 53,45 ± 4,22 19,3/26,5 р;-,< 0,01 р3-2 > 0,05

Рексод [4] 0,04 5,22 ±2,16 6,0/53,6 р4-!> 0,05 р4.2< 0,01 Р4-з > 0,05 53,25 ± 5,52 19,5/26,8 Р4-1 < 0,02 р4_2> 0,05 Р4-з> 0,05

При сочетанием применении реамберина и рексода в минимальных дозах на 3-й сутки длина НЧХ составила 0,0% против 8,3% в контроле, на 7-е сутки - 2,2% против 73,7% в контроле. Разность длины НЧХ крыс контрольной и подопытной групп на 3 и 7-е сутки после применения сочетания реамберина с рексодом, взятых соответственно в дозах 6,25 и 0,01 мг/кг, составила 8,3 и 71,5%, а выжившая часть хвостов (при сопоставлении НЧХ у этих групп животных в отмеченные сроки исследования)- 100,0 и 97,0% соответственно (табл. 3).

Таблица 3. Влияние сочетания реамберина и рексода на выживаемость тканей в условиях РК при перевязке сосудов хвоста крыс (М ± т, п = 10)

Препараты и их сочетание Доза препарата, мг/кг Длина некротизированной части хвоста, %

3 сутки 7 сутки

Физ. р-р (контроль) [1] 8,26 ±3,14 73,65 ±5,16

Реамберин + рексод [2] 6,25 0,01 0,0 ± 0,00 8,3/100,0 Р2-1 < 0,02 2,16 ±0,42 71,5/97,0 р2-1< 0,001

Изучение ДП действия в условиях ишемии, моделированной КС в области спины крыс. В первой серии опытов с однократным превентивным введением реамберина, рексода и их сочетания на 3-й сутки во 2 - 4-й подопытных группах животных длина НЧКС составила 13,3, 10,4 и 15,7% против 31,4% в контроле, а на 7-е сутки - 36,1, 48,1 и 30,5% против 73,1% в контроле. Разность длины НЧКС животных контрольной и подопытных групп на 3 и 7-е сутки после применения реамберина (25 мг/кг), рексода (0,02 мг/кг) и сочетания реамберина (25 мг/кг) с рексодом (0,02 мг/кг), оказалась равной 18,1 и 37,0, 21,0 и 25,0, 15,7 и 42,6%, а выжившая часть КС (при сопоставлении НЧКС у этих групп животных в отмеченные сроки исследования) - 15,6 и 50,6, 66,9 и 34,2, 50,0 и 58,3% соответственно. Во второй серии опытов, при 7-кратном введении реамберина, рексода и их сочетания, на 3-й сутки во 2 - 4-й подопытных группах длина НЧКС составила 14,0, 26,0 и 4,7% против 21,8% в контроле, а на 7-е сутки - 35,6, 57,7 и 9,0% против 90,9% в контроле. Разность длины НЧКС крыс контрольной и подопытных групп на 3 и 7-е сутки после 7-кратного введения реамберина (по 25 мг/кг/сут), рексода (по 0,02 мг/кг/сут) и сочетания реамберина (по 25 мг/кг/сут) с рексодом (по 0,02 мг/кг/сут) составила 7,8 и 55,3, -4,2 и 33,2, 17,1 и 81,9%, а выжившая часть КС (при сопоставлении НЧКС у этих групп животных в отмеченные сроки исследования) - 35,8 и 60,1, -19,3 и 36,5, 78,4 и 90,1% соответственно (табл. 4).

Таблица 4. ДП действие реамберина, рексода и их сочетания (7-кратное в/в введение) при ишемии КС в области спины крыс (М ± ш, п = 12)

Препараты и их сочетание Доза препарата, мг/кг Длина некротизированной части КС, %

3 сутки 7 сутки

Физ. р-р (контроль) [1] 21,83 ± 1,94 90,86 ± 1,94

Реамберин 25 {175} 13,96 ±2,13 35,57 ± 4,62

И 7,8/35,8 55,3/60,8

р2-1 < 0,02 р2-!< 0,001

Рексод 0,02 {0,14} 25,98 ± 3,42 57,70 ± 3,24

[3] -4,2/-19,3 33,2/36,5

рз-1> 0,05 <0,01 рз-1< 0,001 р3.2< 0,001

Реамберин + 25 {175} 4,69 ± 1,39 9,03 ± 2,50

рексод 0,02 {0,14} 17,1/78,4 81,9/90,1

[4] Р4-1 < 0,02 Р4-2 > 0,05 р4.,< 0,001 р4.2< 0,001

Р4-з> 0,05 Р4-з< 0,001

Примечание. В скобках: квадратных - номера серий экспериментов, фигурных - суммарная доза; в числителе - разность длины (в %) НЧКС контрольной и подопытных групп, в знаменателе - выжившая часть (в %) КС (при сопоставлении некротизированных частей) контрольной и подопытных групп.

Исследование ДП действия при частичной артериовенозпой недостаточности КЛ в области передней брюшной стенки крыс. Установлено, что в первой серии экспериментов при однократном в/в введении реамберина, рексода и их сочетания после формирования КЛ во 2-й, 3 и 4-й подопытных группах на 3-й сутки площадь некроза составила 24,2, 26,2 и 12,2% против 34,9% в контроле, на 7-е сутки - 42,9, 39,3 и 36,5% против 65,7% в контроле, на 10-е сутки - 55,2, 62,2 и 44,3% против 82,5% в контроле. Разность площадей некротизированных частей КЛ (НЧКЛ) животных контрольной и подопытных групп на 3, 7 и 10-е сутки после введения реамберина (25 мг/кг), рексода (0,02 мг/кг) и сочетания реамберина (25 мг/кг) с рексодом (0,02 мг/кг) оказалась равной 10,7, 22,8 и 27,3, 8,7, 26,4 и 20,3, 22,7, 29,2 и 38,2%, а выжившая часть КЛ (при сопоставлении НЧКЛ у этих групп в отмеченные сроки исследования) - 30,7, 34,7 и 33,1, 24,9, 40,2 и 24,6, 65,0, 44,4 и 46,3% соответственно.

Во второй серии экспериментов при 7-кратном в/в введении реамберина, рексода и их сочетания площадь некроза КЛ во 2, 3 и 4-й подопытных группах на 3-й сутки составила 28,4, 23,6 и 11,0% против 34,9% в контроле, на 7-е сутки - 46,6, 40,2 и 32,5% против 68,7% в контроле, на 10-е сутки - 62,6, 62,3 и 39,8% против 80,7% в контроле. Разность площадей НЧКЛ животных контрольной и подопытных групп на 3, 7 и 10-е сутки после 7-кратного введения реамберина (по 25 мг/кг/сут), рексода (по 0,02 мг/кг/сут) и сочетания реамберина (по 25 мг/кг/сут) с рексодом (по 0,02 мг/кг/сут) составила 6,5, 22,1 и 18,1, 11,3, 28,5 и 18,4, 23,9, 36,2 и 40,9%, а выжившая часть КЛ (при сопоставлении НЧКЛ у этих групп крыс в отмеченные сроки исследования) - 18,6, 32,2 и 22,4, 32,4, 41,5 и 22,8, 68,5, 52,7 и 50,7% соответственно (табл. 5).

Таблица 5. Влияние реамберина, рексода и их сочетания (7-кратное в/в введение) на выживаемость КЛ, находящегося в условиях частичной артериовенозной недостаточности в опытах на крысах (М ± т, п = 13)

Препараты, их сочетание и дозы Площадь некроза КЛ, %

3 сутки 7 сутки 10 сутки

Физ. р-р (контроль) [1] 34,90 ±3,19 68,73 =ь 4,84 80,75 ± 3,80

Реамберин (по 25 мг/кг/сут) Г21 28,35 ± 1,56 6,5/18,6 Р2-1 > 0,05 46,58 ± 2,68 22,1/32,2 Р2-1 < 0,001 62,60 ± 2,59 18,1/22,4 Р2-1< 0,001

Рексод (по 0,02 мг/кг/суг) [31 23,64 ± 2,77 11,3/32,4 Рз-1 < 0,02 р3-2>0,05 40,21 ±2,51 28,5/41,5 р3-1< 0,001 рз-2> 0,05 62,28 ±3,11 18,4/22,8 /зз_, < 0,001 рз.2 > 0,05

Реамберин (по 25 мг/кг/сут) + рексод (по 0,02 мг/кг/сут) Г41 10,96 ± 1,82 23,9/68,5 р4.,< 0,001 Р4.2< 0,001 р4.з< 0,001 32,51 ±5,53 36,2/52,7 Р-1-1 < 0,001 р4-2< 0,05 р4.з>0,05 39,79 ±5,53 40,9/50,7 < 0,001 р_,.2< 0,01 р4.з <0,01

Примечание. Здесь и в таблицах 6 и 7 в квадратных скобках - номера серий экспериментов; в числителе - разность длины (в %) НЧКЛ контрольной и подопытных групп, в знаменателе - выжившая часть (в %) КЛ (при сопоставлении некротизированных частей) контрольной и подопытных групп.

В третьей серии экспериментов при в/в введении вазапростана и его сочетаний с рексодом и реамберином после формирования КЛ во 2, 3 и 4-й подопытных группах животных на 3-й сутки площадь некроза составила 22,6, 38,7, и 11,1% против 33,9% в контроле, на 7-е сутки - 29,0, 59,6 и 14,3% против 51,3% в контроле, на 10-е сутки -43,7, 79,8 и 27,1% против 75,6% в контроле. Разность площадей НЧКЛ животных контрольной и подопытных групп на 3, 7 и 10-е сутки после введения вазапростана (10 мг/кг лиофилизата, что составляет 4,15 мкг/кг действующего вещества), сочетаний вазапростана (10 мг/кг) с рексодом (0,02 мг/кг) и реамберином (25 мг/кг) оказалась равной 11,3, 22,3 и 31,9, -4,8, -8,3 и -4,2, 22,8, 37,0 и 48,5%, а выжившая часть КЛ (при сопоставлении НЧКЛ у этих групп крыс в отмеченные сроки исследования) - 21,5, 43,5 и 42,2, -14,2, -16,2 и -5,6, 67,3, 72,1 и 64,2% соответственно (табл. 6).

Таблица 6. Влияние вазапростана и его сочетаний с рексодом и реамберином на выживаемость КЛ в области передней брюшной стенки крыс, находящегося в условиях артериовенозной недостаточности (М ± ш, п = 9)

Препараты, их сочетания и дозы Площадь некроза КЛ, %

3 сутки 7 сутки 10 сутки

Физ. р-р (контроль) [1] 33,93 ± 3,69 51,31 ±2,38 75,60 ±2,86

Вазапростан (10 мг/кг) [2] 22,62 ± 1,79 11,3/21,5 р, .2 <0,02 29,0 ± 1,79 22,3/43,5 р,.2< 0,001 43,68 ± 2,38 31,9/42,2 0,001

Вазапростан (10 мг/кг) + рексод (0,02 мг/кг) Г31 38,73 ±2,14 -4,8/-14,2 Р1-1 > 0,05 р2-з< 0,001 59,61 ± 2,98 -8,3/-16,2 р;-з>0,05 Р2.1< 0,001 79,82 ±2,14 -4,2/-5,6 р,.з> 0,05 Р2-3< 0,001

Вазапростан (10 мг/кг) + реамберин (25 мг/кг) [4] 11,14 ± 1,43 22,8/67,3 Р1-4< 0,001 Р2-4 < 0,001 Рз-4< 0,001 14,33 ±2,14 37,0/72,1 /?,..,< 0,001 р2-4< 0,001 р3.4< 0,001 27,11 ±2,86 48,5/64,2 Р1-4< 0,001 р2-4< 0,001 рз-4< 0,001

Изучение ДП действия в условиях АСД, осложненного ЭГХ, в опытах на крысах. Установлено, что при применении сочетания реамберина с рексодом на фоне нормогликемии площадь некроза КЛ передней брюшной стенки в условиях его частичной артериовенозной недостаточности на 3, 7 и 10-е сутки составила 17,1, 38,0 и 46,1% против 28,8, 51,9 и 68,0% в контроле. При использовании реамберина в сочетании с рексодом на фоне АСД, осложненного ЭГХ, на 3, 7 и 10-е сутки площадь некроза КЛ была равна 22,2, 45,4 и 57,4% против 33,3, 63,2 и 82,8% в контроле. Разность площадей НЧКЛ животных контрольной и подопытных групп на 3, 7 и 10-е сутки после введения сочетаний реамберина (25 мг/кг) с рексодом (0,02 мг/кг) при нормогликемии и на фоне АСД, осложненного ЭГХ, составила 11,7, 13,9 и 21,9, 11,1, 17,8 и 25,4%, а выжившая часть КЛ (при сопоставлении НЧКЛ у этих групп в отмеченные сроки исследования) - 40,6, 26,8 и 32,2, 33,3, 28,2 и 30,7% соответственно (табл. 7).

При биохимическом исследовании состояния показателей углеводного и ли-пидного состава крови у животных подопытной группы установлено, что при применении сочетания реамберина с рексодом на фоне АСД и ЭГХ уровень глюкозы

Таблица 7. Влияние сочетания реамберина и рексода на выживаемость КЛ передней брюшной стенки при его частичной артериовенозной недостаточности на фоне АСД, осложненного ЭГХ, в опытах на крысах (М ± ш, п = 13)

Препараты, их сочетания, дозы, условия эксперимента Площадь некроза КЛ, %

3 сутки 7 сутки 10 сутки

Физ. р-р (нормогликемия) [1] 28,81 ± 1,33 51,94 ± 1,50 68,0 ± 0,93

Реамберин, 25 мг/кг + рексод, 0,02 мг/кг (нормогликемия) [2] 17,13 ± 1,12 11,7/40,6 Р1-2< 0,001 38,0± 1,12 13,9/26,8 р 1.2 <0,001 46,12 ± 1,28 21,9/32,2 р,.2< 0,001

Физ. р-р (АСД + ЭГХ) [31 33,33 ± 1,38 р,.з< 0,05 ^<0,05 63,21 ± 1,24 Р1~з< 0,001 р2.з< 0,001 82,82 ± 1,01 р,.3< 0,001 Р2-3 < 0,001

Реамберин, 25 мг/кг + рексод, 0,02 мг/кг (АСД + ЭГХ) [4] 22,24 ± 1,18 11,1/33,3 ры< 0,01 р«<0,01 Рз-4< 0,001 45,43 ± 0,76 17,8/28,2 Р,-4< 0,001 р2-4< 0,001 0,001 57,40 ± 0,99 25,4/30,7 р,.4< 0,001 р2-4< 0,001 рз-4< 0,001

крови составил 6,03 ммоль/л против 9,48 ммоль/л в контрольной группе (№ 3), а при использовании этого сочетания в группе животных с нормогликемией уровень глюкозы оказался равным 5,04 ммоль/л против 5,54 ммоль/л в контроле (№ 1), т.е. у крыс контрольной группы с АСД и ЭГХ (№ 3) уровень глюкозы крови в 1,7 раза выше, чем у животных контрольной группы сравнения (№ 1). В то же время применение композиции реамберин + рексод на фоне АСД и ЭГХ способствует снижению уровня глюкозы в 1,6 раза по сравнению с контрольной группой (№ 3) (рисунок).

При применении сочетания реамберина с рексодом в условиях АСД и ЭГХ уровень ОХС крови крыс составил 1,74 ммоль/л против 2,29 ммоль/л в соответствующей контрольной группе (№ 3). На фоне нормогликемии в подопытной группе животных ОХС составил 1,74 ммоль/л против 1,46 ммоль/л в контроле, т.е. применение сочетания реамберина и рексода на фоне АСД и ЭГХ способствует снижению уровня ОХС в 1,3 раза по сравнению с показателями контрольной группы (№ 3) (рисунок).

мМ/л □ Физ. р-р, нормогликемия

Рисунок. Сравнительная активность сочетания реамберина (25 мг/кг) и рексода (0,02 мг/кг) при влиянии их на показатели глюкозы и липидов крови в условиях нормогликемии и АСД, осложненного ЭГХ, в опытах на крысах

Показатели ТГ в подопытной группе крыс на фоне АСД и ЭГХ были равны 1,14 ммоль/л против 3,14 ммоль/л в соответствующем контроле (№ 3), а в условиях нормогликемии — 0,44 ммоль/л против 0,67 ммоль/л в контрольной группе (№ 1). Применение сочетания реамберина и рексода на фоне АСД и ЭГХ приводит к снижению уровня ТГ в 2,8 раза по сравнению с контрольной группой (№ 3) (рисунок).

Уровень Р-ЛП в подопытной группе крыс с АСД и ЭГХ составил 7,49 ммоль/л против 11,63 ммоль/л в соответствующей контрольной группе (№ 3), а в условиях нормогликемии — 5,75 ммоль/л против 5,81 ммоль/л в контроле (№ 1), т.е. при АСД и ЭГХ уровень р-ЛП в контрольно группе (№ 3) в 2 раза выше, чем у животных группы сравнения (№ 1), а в подопытной группе (№ 4) в 1,3 раза выше, чем в подопытной группе сравнения (№ 2), но в 1,6 раза ниже, чем в контрольной группе с АСД и ЭГХ (№ 3) (рисунок).

В подопытной группе крыс на фоне АСД и ЭГХ уровень ХС-ЛПВП составил 2,24 ммоль/л против 0,57 ммоль/л в соответствующем контроле (№ 3), а в условиях нормогликемии - 2,15 ммоль/л против 2,26 ммоль/л в контрольной группе (№ 1), т.е. при АСД и ЭГХ в контрольной группе (№ 3) уровень ХС-ЛПВП снизился в 4 раза, а при применении сочетания реамберина с рексодом в условиях АСД и ЭГХ содержание ХС-ЛПВП увеличилось в 3,9 раза по сравнению с контролем (№ 3) (рисунок).

Анализ ДП действия реамберина, рексода и их сочетаний. Влияние на пролиферативную активность остео- и фибробластов крыс. Проведенные исследования показали, что на культуры остео- и фибробластов реамберин и рексод токсического действия не оказывали. При внесении в среду инкубации реамберина (10, 50 и 100 мг/мл), рексода (0,0001, 0,0005 и 0,001 мг/мл) и их сочетания (10 и 0,0001, 50 и 0,0005, 100 и 0,001 мг/мл) наблюдалась отчетливая тенденция к повышению метаболической и пролиферативной активности клеток, однако различия не были достоверны.

При добавлении в среду инкубации ЫаСМ и ДНФ наблюдалось снижение степени адгезии к субстрату (уменьшение их площади и увеличение межклеточного расстояния). При этом под действием ЫаСЫ и ДНФ рост остеобластов подавлялся на 22 и 44%, а фибробластов - на 21 и 62,5% соответственно.

Применение реамберина и рексода на фоне гипоксии, индуцированной №СЫ и ДНФ, приводило к нормализации адгезии и количества культивируемых остео- и фибробластов. Существенных отличий в действии реамберина, рексода и их сочетаний не выявлено.

Наиболее выраженный протекторный эффект рексод проявлял на модели гипоксии, индуцированной ДНФ. Данные, полученные в ходе исследования, подтверждают наличие у рексода антиоксидантной, антигипоксантной и цитопротек-торной активности.

Реамберин на фоне гипоксии, вызванной ДНФ, также повышал жизнеспособность культур клеток, благодаря поддержанию потенциала митохондриальных мембран.

Учитывая, что ИаСМ угнетает дыхательную цепь и приводит к накоплению продуктов цикла трикарбоновых кислот, возможно, что реамберин, который являет собой слабощелочной буфер, в условиях гипоксии способствует нормализации метаболических процессов.

Влияние на ПОЛ остео- и фибробластов крыс. Установлено, что введение субтоксических доз ЫаСЫ и ДНФ в среду инкубации приводило к увеличению уровня ТБК-активных продуктов в остеобластах на 12 и 18% и в фибробластах на 7 и 8% соответственно.

Реамберин (10, 50 и 100 мг/мл) и рексод (0,0001, 0,0005 и 0,001 мг/мл) при суточной инкубации в интактных условиях не оказывали влияния на процессы ПОЛ в остео- и фибробластах.

Введение реамберина, рексода и их сочетаний в инкубационную среду культивируемых остео- и фибробластов с гипоксией, индуцированной ЫаСЫ и ДНФ, приводило к снижению содержания ТБК-реактивных продуктов.

Влияние реамберина на функциональную активность митохондрий в условиях ишемизированной кожи крыс. При ишемии кожи, вызванной моделированием КС в области спины, на 3 сутки отмечалось резкое повышение (в 1,6 раза) активности ЛДГ гомогенатов кожи, которое сопровождалось в плазме крови увеличением активности АлАТ на 71,4% и АсАТ на 37,6 % (табл. 8). Эти изменения, а также увеличение в 3,8 раза активности КФК и в 2,9 раза индекса цитолиза (отношение КФК/АсАТ) подтверждают развитие и прогрессирование деструктивных изменений в зоне ишемии кожи.

Таблица 8. Влияние реамберина (25 мг/кг) на метаболические процессы в ишемизированной коже крыс (М ± т, п = 8)

Показатель Икгактная Ишемизированная кожа

кожа (норма) контроль | реамберин

КФК, МЕ/мл 8,6 ± 0,9 32,7 ±3,9*** 21,6 ± 2,0*+

АлАТ, мМ/мл 1,75 ±0,09 3,0 ±0,2** 2,88 ±0,08*

АсАТ, мМ/мл 1,25 ±0,03 1,72 ±0,9* 1,40 ± 0,06*+

Индекс цитолиза, КФК/АсАТ 6,43 ± 0,78 18,4 ± 1,6*** 15,3 ± 1,0**+

ЛДГ, мМ НАД/мг белка/ мин 0,17 ±0,01 0,27 ± 0,02** 0,24 ± 0,002*+

АТФ, мкМ/г влажной ткани 3,70 ±0,15 2,58 ± 0,09* 2,90 ± 0,07* *+

АДФ, мкМ/г влажной ткани 1,24 ±0,07 1,61 ±0,09* 1,40 ± 0,04+

АМФ, мкМ/г влажной ткани 0,53 ± 0,05 0,69 ± 0,05* 0,61 ±0,04*

АТФ/АДФ 4,00 ± 0,04 3,39 ±0,13 3,67 ±0,05

КФ, мкМ/г 4,1 ±0,2 3,2 ±0,1 3,35 ±0,18

НАД+, мкМ/г влажной ткани 2,9 ±0,1 2,2 ±0,1* 2,2 ±0,1*

НАД'Н, мкМ/г влажной ткани 3,0 ±0,1 3,2 ±0,1* 3,0 ±0,1*

НАД+/НАД-Н 0,97 ± 0,04 0,69 ± 0,07* 0,73 ± 0,06*

НАД++ НАД-Н, мкМ/г влажной ткани 5,9 ±0,1 5,4 ±0,1* 5,2±0,1*+

Лактат, мкг/г влажной ткани 413,0 ±7,0 704,0±36,0*** 718,0 ±32,0**

Пируват, мкг/г влажной ткани 5,8 ± 0,2 7,5 ±0,2** 7,7 ±0,3**

Лактат/пируват 71,2 ±2,0 93,9 ± 5,0* 93,2 ± 5,0*

СДГ, мкг формазана/мг белка/мин 6,95 ± 0,36 5,8 ± 0,2* 6,75 ± 0,22*+

Цитохром С, нМ/г влажной ткани 0,93 ± 0,03 0,91 ±0,02 0,91 ±0,03

НАД'Н -убихинон-редуктаза,

мкМ/мг белка/мин 20,9 ± 0,8 17,0 ± 1,3* 16,4 ±0,8**

Сукцинат-убихинон-редуктаза,

мкМ/мг белка/мин 1,19 ±0,03 0,81 ±0,04** 0,95 ± 0,06*+

Примечание. Здесь и в таблице 9: * р < 0,05, ** р < 0,01, *** р < 0,001 по сравнению с нормой; + р < 0,05, ** р< 0,01 по сравнению с контролем.

Под влиянием курса реамберина наблюдалось (со 2-го часа после воспроизведения ишемии) стойкое снижение активности АсАТ и КФК, которое на 3 сутки составило 18,6 и 33,9% соответственно. К этому времени индекс цитолиза уменьшился на 16,8%.

Энерготропное действие реамберина проявлялось в повышении общего пула АТФ на 12,4% и уменьшении содержания аденозиндифосфата (АДФ) на 13,0%, аденозинмонофосфата (АМФ) - на 11,6% (табл. 8). Под воздействием реамберина повышалось соотношение АТФ/АДФ, что указывает на обращение регуляторных процессов в сторону синтеза АТФ. Содержание пула КФ (при ишемии кожи на 3 сутки снижалось на 22,0%) возросло на 4,7%. Ишемия кожи характеризовалась одновременным повышением относительно нормального уровня лактата (на 70,5%) и пирувата (на 29,3%), в результате чего не происходило достоверного сдвига соотношения лактат/пируват и отсутствовал выраженный лактоацидоз. Таким образом, в условиях воспроизведенной модели ишемии кожи реамберин существенного влияния на содержание лактата, пирувата и отношения лактат/пируват не оказывал (табл. 8).

Содержание НАД+ в этих условиях уменьшилось на 24,1%, а НАД*Н увеличивалось на 6,7%. Отношение НАД+/ПАД-Н и редокс-потенциал системы энергетического обеспечения снижались на 28,9%, а показатель НАД+ + НАД»Н уменьшался на 8,5%. Под воздействием реамберина содержание НАД+ и ПАД-Н, а также редокс-потенциал системы энергетического обеспечения существенно не изменялись.

Основное энерготропное действие реамберина проявлялось в повышении резервных возможностей сукцинатзависимого пути транспорта электронов в дыхательной цепи митохондрий. Активность сукцинат-убихинон-редуктазной системы и СДГ при ишемии кожи снижались на 31,9 и 16,6%, а под влиянием реамберина повышались на 17,3 и 16,4% соответственно. Активность НАД-убихинон-редуктазной системы в условиях ишемии снижалась на 18,7% и существенно не изменилась при введении реамберина. Уровень цитохрома С практически не изменялся как при ишемии кожи, так и в ответ на введение реамберина.

Исходя из полученных данных, можно предположить, что СДГ и сукцинат-убихинон-редуктазная система являются мишенями действия реамберина, а повышение активности сукцинатзависимого окисления под влиянием реамберина — ключевым патогенетическим компенсаторным механизмом поддержания функциональной активности митохондрий при ишемии кожи.

В условиях ишемии кожи деструктивные изменения в митохондриях ведут к гиперпродукции АФК, что, в свою очередь, влечет за собой нарушения дезинток-сикационной способности кожи, нарастанию выраженности эндотоксикоза с вторичным повреждением мембран и прогрессированием постишемического отека (Е. Fosslien, 2001).

При ишемии кожи регуляторный механизм поддержания баланса между активностью ферментов системы антиоксидантной защиты нарушается. В области ишемии кожи активность СОД не повышалась (компенсаторно в условиях окислительного стресса), а, наоборот, снижалась на 12%. Активность каталазы поддерживалась лишь на «псевдонормальном» уровне, и только активность ГП повышалась на 12,5%. Под воздействием реамберина на 3-й сутки активность СОД повышалась до нормального уровня. Активность каталазы и ГП увеличивались на 16,2 и 11,3,

18,5 и 33,3% по сравнению с контролем и нормой соответственно. Содержание МДА в условиях ишемии и при введении реамберина существенно не изменялось (табл. 9).

Таблица 9. Влияние реамберина (25 мг/кг) на состояние системы антиокси-дантной защиты и ПОЛ в ишемизированной коже крыс (М ± ш, п = 8)

Показатель Интактная кожа (норма) Ишемизированная кожа

контроль реамберин

СОД, ЕД/мг белка/мин 0,25 ± 0,01 0,22 ±0,01* 0,26 ±0,0 Г

ГП, нМ НАДФ/мг белка 2,4 ±0,1 2,7 ±0,1* 3,2 ± 0,3**++

Каталаза, нМ НгСЬ/мг белка/мин 71,0 ±2,0 68,0 ± 4,0 79,0 ± 4,0*+

МДА, мкМ/мг белка 0,88 ±0,01 0,91 ± 0,03 0,88 ± 0,02

Исследование ДП и антиоксидантного эффектов рексода в условиях ишемизированной кожи крыс. При ишемии кожи активность КФК, ЛДГ, АлАТ, АсАТ и индекс цитолиза увеличивались на 288,3, 68,4, 51,0, 42,8 и 147,0% соответственно.

Под влиянием рексода на 3 сутки наблюдалось снижение КФК и ЛДГ (в крови) на 38,5 и 18,8%, а также активности АлАТ и АсАТ на 9,1 и 10,6% соответственно; индекс цитолиза уменьшался на 21,5%. Это позволяет полагать, что рек-сод купирует некротические процессы при ишемии кожи, уменьшает повреждающее действие эндотоксинов, выделяемых при некрозе кожи, на печень и сердце.

Применение рексода способствовало значительному увеличению эндогенной СОД в гомогенатах кожи: на 70% по сравнению с уровнем, зарегистрированным при ишемии, и на 25,9% относительно аналогичного показателя в интактной коже (табл. 10).

Таблица 10. Влияние рексода (0,02 мг/кг) на состояние системы антиокси-дантной защиты в ишемизированной коже крыс (М ± т, п = 7)

Показатель Интактная кожа (норма) Ишемизированная кожа

контроль рексод

СГ "О2", мкМ/мг белка х мин 33,0 ±5,0 64,0 ± 6,0 66,0 ± 6,0

СОД, ЕД/мг белка * мин 0,27 ±0,01 0,20 ±0,01* 0,34 ± 0,02*+

ГП, нМ НАДФ/мг белка 2,4 ±0,1 2,5 ±0,1* 3,1 ±0,2**++

Каталаза, нМ НгОг/мг белка х мин 71,0 ±2,0 64,0 ± 4,0 72,0 ± 4,0*+

МДА, мкМ/мг белка 0,87 ± 0,01 0,94 ± 0,03 0,84 ± 0,02

Примечание. Здесь и в таблице 11: * р < 0,05, **/;< 0,01,***/>< 0,001 по сравнению с нормой;+ р < 0,05, " р< 0,01 по сравнению с контролем.

Но, несмотря на это, СГ *02" в ответ на введение рексода не снижалась, а оставалась на уровне, зарегистрированном у животных контрольной группы. При этом активность процессов ПОЛ уменьшилась, содержание МДА снижалось на 10,6% до уровня нормы. В ответ на введение рексода наблюдалось повышение активности ГП и каталазы на 24,0 и 12,5% соответственно. Полученные данные указывают на то, что рексод при ишемии кожи способствует повышению резервных возмож-

ностей ферментативного звена системы антиоксидантной защиты в целом.

Под воздействием рексода на 3 сутки на 16,1% повышалось содержание КФ, однако практически не изменялось содержание адениловых нуклеотидов (табл. 11). Более выраженное действие рексод оказывал на пул пиримидиновых нуклеотидов (содержание НАД+ и редокс-потенциал ПАД'/НАД'Н увеличивались на 15,5 и 20,5% соответственно, а НАД'Н существенно не изменилась) и содержание коэн-зима <5ю (повышалось на 57,8%). Под влиянием рексода содержание лактата, повышенное при ишемии кожи, уменьшалось на 15,6%, а пирувата существенно не изменялось. В результате отношение лактат/пируват уменьшилось на 8,5%. Содержание цитохрома С и активность СДГ существенно не изменялись.

Таблица 11. Влияние рексода (0,02 мг/кг) на состояние системы энергетического обеспечения в ишемизированной коже крыс (М ± т, п = 7)

Показатель Интактная кожа (норма) Ишемизированная кожа

контроль рексод

Цитохром С, мкМ/мг 0,99 ± 0,04 0,92 ±0,01 0,92 ±0,01

АТФ, мкМ/г влажной ткани 3,51 ±0,04 2,54 ±0,10** 2,71 ±0,11*

АДФ, мкМ/г влажной ткани 1,44 ±0,03 1,64 ±0,03** 1,60 ±0,02**

АМФ, мкМ/г влажной ткани 0,53 ± 0,04 0,65 ± 0,04* 0,69 ±0,04*

КФ, мкМ/г 4,20 ±0,10 3,10 ±0,20** 3,60 ± 0,20*+

НАД*", мкМ/г 2,75 ± 0,05 2,0 ±0,10** 2,31 ± 0,06*+

НАД-Н, мкМ/г 2,72 ± 0,06 2,75 ±0,10 2,60 ±0,08

НАД1"/ НАД-Н 0,99 ± 0,02 0,73 ± 0,05* 0,88 ± 0,02*+

Коэнзим <3ю, мкг/г влажной ткани 1612,0 ±68,0 927,0 ±54,0*** 1463,0 ± 67,0+

Лактат, мкг/г влажной ткани 351,0 ±24,0 518,0 ±21,0** 437,0 ± 22,0*+

Пируват, мкг/г влажной ткани 5,4 ± 0,3 6,7 ± 0,6* 6,3 ± 0,4*

Лактат/пируват 66,0 ± 6,0 82,0 ± 9,0 75,0 ± 6,0

СДГ, мкг формазана/мг белка * мин 5,2 ± 0,2 4,7 ±0,1* 4,7 ±0,1*

ЛДГ, нМ НАД/мг белка * мин 0,19 ±0,01 0,32 ±0,02*** 0,26 ± 0,02*+

Влияние сочетания реамберина и рексода на показатели цитолитиче-ских, энергетических и антиоксидантных процессов в ишемизированной коже крыс. Установлено, что в ишемизированном участке кожи на 3 сутки уровень АТФ снижался на 29,6%, а содержание АДФ и АМФ повышалось на 29,8 и 30,2% соответственно, что приводило к снижению соотношения АТФ/АДФ на 45,6% (табл. 12). Также наблюдалось понижение уровня КФ на 28,6%. Монотерапия реамберином индуцировала повышение уровня АТФ на 12,8% и снижение АДФ на 13,0%, т.е. имел место сдвиг в сторону образования АТФ: соотношение АТФ/АДФ увеличивалось на 30,0%. При сочетанном применении реамберина и рексода (4-я группа) уровень АТФ повышался на 24,5%, АДФ снижался на 4,3%, а КФ увеличивался на 30%. Содержание лактата и соотношение лактат/пируват снижалось на 15,8 и 6,3% соответственно. Активность СДГ повышалась в меньшей мере, чем при монотерапии реамберином (3-я группа), а показатели активности НАД»Н-убихинон-редукта-зы и сукцинат-убихинон-редуктазы не имели существенных отличий от таковых при монотерапии реамберином (табл. 12).

При сочетанном применении реамберина и рексода (4-я группа) наблюдалось снижение активности КФК на 19,0 и 45,3%, ЛДГ- на 16,7 и 31,0%, АлАТ-на 9,7 и 13,3%,

Таблица 12. Влияние сочетания реамберина и рексода на метаболические процессы в ишемизированной коже крыс (М ± ш, п = 8)

Ишемизированная кожа

Показатель Интактная кожа, контроль, реамберин (25 мг/кг), 3-я группа реамберин (6,25 мг/кг) + рексод

1-я группа 2-я группа (0,01 мг/кг), 4-я группа

КФК, МЕ/мл 8,0 ± 0,6 32,0 ±3,9*** 21,6 ± 2,0**,+++ 17,5 ± 1,3* *+++°

АлАТ, мкМ/мл 1,95 ±0,10 3,0 ± 0,2** 2,88 ± 0,08* 2,60 ± 0,04* *++°

АсАТ, мкМ/мл 1,25 ±0,03 1,72 ±0,05* 1,40 ± 0,06*+ 1,44±0,06*+°

Индекс цитолиза, КФК/АсАТ 6,6 ± 0,4 18,4 ± 1,6*** 15,4 ± 1,0**+ 11,3± 1,1**++°

ЛДГ, мМ НАД/мг белка *мин 0,16 ±0,01 0,29 ± 0,02** 0,24 ± 0,02* *+ 0,20 ± 0,01*++°

АТФ, мкМ/г влажной ткани 3,65 ± 0,06 2,57 ±0,07** 2,90 ± 0,07* *+ 3,20 ± 0,03* *++0

АДФ, мкМ/г влажной ткани 1,24 ±0,07 1,61 ±0,09* 1,40 ± 0,04+ 1,54 ±0,05*°

АМФ, мкМ/г влажной ткани 0,53 ± 0,05 0,69 ± 0,05* 0,61 ±0,04* 0,63 ± 0,03*

КФ, мкМ/г 4,2 ± 0,2 3,0 ±0,1** 3,4 ± 0,1*+ 3,9 ± 0,2*+°

Лактат, мкг/г влажной ткани 359,0 ± 7,0 519,0 ±36,0*** 718,0 ± 32,0*,++ 437,0 ± 22,0**+°°

Пируват, мкг/г влажной ткани 5,5 ± 0,2 6,8 ±0,1** 7,7 ± 0,3**+ 6,7 ±0,3**

Лактат/пируват 66,0 ± 5,0 80,0 ± 8,0* 94,0 ± 5,0* 75,0 ± 6,0*°

СДГ, мкг формазана/мг

белка х мин 6,95 ± 0,36 5,8 ± 0,2* 6,75 ±0,22*° 6,2 ± 0,2**°

НАД'Н-убихинон-редуктаза,

мкМ/мг белка * мин 20,9 ± 1,4 17,5 ±0,9* 18,0 ± 1,0* 19,0 ± Г,0

Сукцинат-убихинон-редуктаза,

мкМ/мг белка х мин 1,22 ±0,08 0,80 ± 0,05** 0,95 ± 0,06*+ 1,05±0,06*++

Примечание. Здесь и в таблице 13: * р < 0,05, ** р < 0,01, *** р < 0,001 по сравнению с ин-тактной кожей, + р < 0,05, **р < 0,01, р < 0,001 по сравнению с кощролем, °р < 0,05, р < 0,01 по сравнению с кожей животных, получавших реамберин.

а индекса цитолиза - на 26,1 и 38,6% по сравнению с показателями 3-й (монотерапия реамберином) и 2-й (контрольной) групп соответственно. Активность АсАТ снижалась на 16,3% по сравнению с контрольной группой и практически не изменилась по сравнению с группой животных, получавших только реамберин (табл. 12). Можно предположить, что более выраженное ДП действие при сочетанном применении реамберина и рексода обусловлено резким увеличением резервных возможностей АОС по сравнению с применением одного реамберина.

При комбинированном использовании исследуемых препаратов активность ферментов АОС не только повышалась до уровня нормы, как под воздействием одного реамберина, но и превышала её. Так, показатель активности СОД увеличивался на 44%, каталазы - на 12,7%, а ГП - на 58,3%.

Повышение активности эндогенной СОД на фоне сочетанного применения реамберина и рексода сопровождалось уменьшением образования -02~ по сравнению с монотерапией реамберина и контрольной группой на 54,8 и 70,8% соответственно (табл. 13). Активирующее действие композиции реамберин + рексод (4-я группа) на защитные ферментные системы обеспечивало поддержание интенсивности липопероксидации на уровне, не приводящем к повреждению клеток: показатель МДА снижался до нормы.

Полученные результаты в экспериментах на модели ишемии кожи показали, что реамберин, особенно в сочетании с рексодом, оказывает выраженное ДП действие.

Таблица 13. Влияние сочетания реамберина и рексода на состояние системы антиоксидантной защиты и ПОЛ в ишемизированной коже крыс (М ± т, п = 8)

Показатель Интактная кожа, 1-я группа Ишемизированная кожа

контроль, 2-я группа реамберин (25 мг/кг), 3-я группа реамберин (6,25 мг/кг) + рексод (0,01 мг/кг), 4-я группа

СОД, ЕД/( мг белка х мин) 0,25 ±0,01 0,22 ±0,01* 0,26 ±0,0Г 0,36 ± ОДЙ*^0 СГ -02", мкМ/мг белка * мин 0,26±0,01 0,65 ±0,01*** 0,42 ± 0,03*^* 0,19 ± 0,01* ГП, нМ НАДФ/мг белка 2,4 ±0,1 2,7 ±0,1* 3,2±0,3**+ 3,8 ± 0,2**++о Каталаза, нМ Н2О2/МГ белках мин 71,0±2,0 68,0±4,0 79,0±4,0*+ 80,0±4,0*+ МДА, мкМ/мг белка 0,88 ±0,01 0,95 ±0,03 0,88 ±0,02 0,86±0,02+о

Исследуемые препараты приводят к снижению содержания ТБК-активных продуктов в клетках, способствуют нормализации окислительных процессов с участием свободных радикалов и предупреждают повреждение клеточных мембран, вызванное повышением активности процессов ПОЛ. Вышеперечисленные данные подтверждают наличие у реамберина и рексода антигипоксических, антиоксидант-ных и антицитолитических свойств.

При 3-дневном в/в введении реамберина крысам в условиях моделированной гипоксии в КС происходит коррекция альтернативного сукцинатоксидазного окисления, улучшение проникновения экзо- и эндогенного сукцината в митохондрии, повышение активности сукцинат-убихинон-редуктазы. Описанные сдвиги указывают на энерготропные эффекты реамберина при ишемии кожи, которые способствуют повышению резервных возможностей системы антиоксидантной защиты.

Превентивное введение рексода крысам при экспериментальной гипоксии КС способствует снижению индекса цитолиза, содержания МДА до уровня нормы, уменьшению активности процессов ПОЛ, повышению активности ГП. Полученные данные позволяют сделать вывод, что рексод в условиях ишемии кожи способствует повышению резервных возможностей ферментативного звена системы антиоксидантной защиты в целом и купирует некротические процессы, уменьшает повреждающее действие эндотоксинов, выделяемых при некрозе кожи, на печень и сердце.

Применение композиции реамберин + рексод в условиях ишемии кожи приводит к стимуляции защитных ферментных систем клеток, что позволяет поддерживать процессы липопероксидации на уровне, который не влечет за собой повреждение клеток (показатель МДА снижается до уровня нормы). Комбинированная терапия реамберином и рексодом вызывает повышение активности всех ферментов системы антиоксидантной защиты не только до уровня нормы, как при монотерапии реамберином, но и выше ее.

23

ВЫВОДЫ

1. Реамберин (внутривенно мышам - ЛД50 = 12084,5 мг/кг, крысам - ЛД50 = 10929,0 мг/кг), рексод (внутривенно и внутрибрюшинно мышам в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг соответственно не вызывает признаков отравления) и их сочетания (внутривенно крысам - ЛД50 = 16134,4 мг/кг) практически не токсичны.

2. При ишемии тканей хвоста и кожи крыс реамберин и рексод при однократном и многократном (в течение 7 дней) введениях обладают выраженным гисто-протекторным действием.

Сочетания реамберина с рексодом в принятых условиях эксперимента оказывают более выраженный гистопротекторный эффект, чем отдельно взятые препараты.

3. В условиях артериовенозной недостаточности кожного лоскута передней брюшной стенки крыс реамберин, рексод и, в большей мере, их сочетания при однократном и многократном внутривенном введении проявляют равнозначное дер-матопротекторное действие.

Вазапростан и, особенно, его сочетание с реамберином повышают выживаемость кожи. Сочетание вазапростана с рексодом не оказывает дерматопротектор-ного действия.

4. В условиях артериовенозной недостаточности кожного лоскута передней брюшной стенки крыс на фоне нормо- и гипергликемии, сочетанной с экзогенной гиперхолестеринемией, композиция реамберин + рексод при предварительном многократном (в течение 14 дней) внутривенном введении оказывает дерматопро-текторное действие. У крыс с экспериментальным (аллоксановым) сахарным диабетом сочетание реамберина с рексодом вызывает снижение в цельной крови содержания глюкозы, холестерина, триглицеридов, (3-липопротеидов и повышение уровня липопротеидов высокой плотности.

5. Реамберин и рексод в условиях суточной инкубации с остео- и фибробла-стами не оказывают на них токсического воздействия и не проявляют существенного влияния на уровень перекисного окисления липидов. При гипоксии остео- и фибробластов, индуцированной субтоксическими дозами натрия цианида и 2,4-динитрофенола, реамберин, рексод и в большей мере их сочетания снижают уровень активных продуктов, реагирующих на тиобарбитуровую кислоту, способствуют нормализации окислительных процессов, протекающих с участием свободных радикалов, и предупреждают разрушение биологических мембран, вызванное активацией процессов перекисного окисления липидов.

6. Трехдневное внутривенное введение реамберина в условиях ишемизированной кожной складки в области спины крыс приводит к коррекции в ней альтернативного сукцинатоксидазного окисления путем улучшения проникновения экзо-и эндогенного сукцината в митохондрии, повышения активности сукцинатдегид-рогеназы и сукцинат-убихинон-редуктазы, что способствует возрастанию резервных возможностей системы антиоксидантной защиты ишемизированной кожи и позволяет купировать ускорение в ней перекисного окисления липидов.

7. Превентивное однократное внутрибрюшинное введение рексода в условиях моделированной (в области спины) кожной складки вызывает в ней снижение индекса цитолиза, содержания малонового диальдегида (до уровня нормы), ингиби-рование процессов перекисного окисления липидов и повышение активности глу-

татионпероксидазы, что обусловливает увеличение резервных возможностей ферментативного звена системы антиоксидантной защиты в целом и купирование некротических процессов, а также уменьшение повреждающего действия эндотоксинов на печень и сердце.

8. При ишемии кожи вызванной моделированием кожной складки в области спины крыс, превентивное введение сочетания реамберина с рексодом вызывает повышение в ней активности защитных ферментных систем, что способствует поддержанию процесса липопероксидации на безвредном для клеток уровне (содержание малонового диальдегида снижается до нормы). Комбинированная терапия реамберином и рексодом в принятых условиях эксперимента приводит к повышению активности всех ферментов системы антиоксидантной защиты не только до уровня нормы, как при монотерапии реамберином, но и превышала ее.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Сочетание препаратов метаболического типа действия реамберина и рексода, или рекомбинантной супероксиддисмутазы человека, рекомендуется для дальнейшего доклинического изучения с целью практического использования его в качестве дерматопротекторной композиции в условиях сахарного диабета осложненного атеросклерозом.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Галенко-Ярошевский, В. П. Протекторное действие реамберина на функциональную активность митохондрий в условиях ишемии кожи [Текст] / В.П. Галенко-Ярошевс-кий, A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), К.О. Федорович, Н.В. Лапина, A.C. Горелаш-вили, Т.М. Берберешвили, Г.В. Сукоян // Б юл. эксперим. биологии и медицины. - 2005. - Т. 140, № 10 - С. 436 - 439.

2. Галенко-Ярошевский, В. П. Антинекротический и антиоксидантный эффекты супероксиддисмутазы при ишемии кожи [Текст] / В.П. Галенко-Ярошевский, В.В. Галка, О.Н. Стоялова, A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), И.В. Лапина, ТВ. Гайворонская, Л.В. Попкова, И.В. Чурилова, A.C. Горелашвили, H.A. Антелава, Т.М. Берберашвили, Г.В. Сукоян // Бгол. эксперим. биологии и медицины. — 2006. - Т. 142, № 10. - С. 430 — 432.

3. Галенко-Ярошевский, В. П. Эффективность сочетанного применения СОД и реамберина при ишемии кожи [Текст] / В.П. Галенко-Ярошевский, A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), И.В. Лапина, Т.В. Гайворонская, Л.В. Попкова, И.В. Чурилова, A.C. Горелашвили, H.A. Антелава, Т.М. Берберашвили, Г.В. Сукоян // Бюл. эксперим. биологин и медицины. - 2006. - Т. 142, № 12 - С. 663 - 665.

4. Галенко-Ярошевский, В. П. Противоязвенная активность реамберина, мафусола и супероксиддисмутазы [Текст] / В.П. Галенко-Ярошевский, A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), О.Н. Стоялова, Л.Е. Зацепина, A.B. Сергиенко, М.Н. Ивашев // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2007. — приложение 3. - С. 20 - 21.

5. Попкова, Л. В. Влияние реамберина, рексода и их сочетания на пролиферативную активность остеобластов и фибробластов [Текст] / Л.В. Попкова, В.П. Галенко-Ярошевский, A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), И.А. Варлашкина, A.B. Семейкин, Н.Л. Шима-

новский, И.В. Чурилова // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2007. - приложение 3. -С. 97-101.

6. Попкова, Л. В. Влияние реамберина, рексода и их сочетания на перекисное окисление липидов остеобластов и фибробластов [Текст] / Л.В. Попкова, В.П. Галенко-Яро-шевский, A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), И.А. Варлашкина, A.B. Семейкин, Н.Л. Ши-мановский, И.В. Чурилова // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2007. — приложение 3. - С. 94- 96.

7. Агаджанова, А. В. (Зеленская, A.B.) Эффективность сочетанного применения реамберина и супероксиддисмутазы при редуцированном кровообращении в коже [Текст] / A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), О.Н. Стоялова, В.В. Галка, В.П. Галенко-Ярошевс-кий, Л.В. Попкова // Сб. тезисов и докладов конгресс «Человек и лекарство. Краснодар -2008».-2008.-С. 2-3.

8. Галка, В. В. Гистопротекторное действие эноксифола в условиях артериовенозной недостаточности [Текст] / В.В. Галка, A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), О.Н. Стоялова, В.П. Галенко-Ярошевский // Сб. тезисов и докладов конгресс «Человек и лекарство. Краснодар - 2008». - 2008. - С. 14.

9. Стоялова, О. Н. Исследование раздельного и сочетанного применения мафусола и супероксиддисмутазы в условиях артериовенозной недостаточности [Текст] / О.Н. Стоялова, A.B. Агаджанова (A.B. Зеленская), В.В. Галка, В.П. Галенко-Ярошевский, Л.В. Попкова // Сб. тезисов и докладов конгресс «Человек и лекарство. Краснодар — 2008». - 2008. —

10. Зеленская, А. В. Влияние реамберина в сочетании с рексодом на выживаемость кожного лоскута на передней брюшной стенки крыс в условиях нормо- и гипергликемии, осложненной экзогенной гиперхолестеринемией [Текст] / A.B. Зеленская, В.П. Галенко-Ярошевский // Юншчна та экспериментальна фармаколопя мстабо.'пчних коректор1в, органопротекщя, доказова медицина: мате pi ал и Всеукрашсько! науково-практично! конференцн з м1жнародною участю з юптчно! фармакологи, присвячено! 90-р1ччю професора О.О. Столярчука. - Вшниця. — 2010. - С. 219 - 221.

11. Галенко-Ярошевский, В. П. Современные проблемы коррекции нарушений окислительного гомеостаза в практике экспериментальной фармакологии [Текст] / В.П. Галенко-Ярошевский, О.Н. Гулевская, A.B. Зеленская, В.В. Селецкая, С.К. Богус, В.Л. Попков, C.B. Гацура// Новые технологии. -2011. — № 2. - С. 166 - 171.

12. Зеленская, А. В. Дерматопротекторное действие реамберина, рексода и их сочетания при редуцированном кровообращении [Текст] / A.B. Зеленская, А.П. Авакимова // Проблемы разработки новых лекарственных средств: материалы первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. - М., 2013. - С. 32.

13. Зеленская, А. В. Реамберин и рексод. Фармакотерапевтическая коррекция редуцированного кровообращения в коже при сахарном диабете [Текст] / A.B. Зеленская, П.А. Галенко-Ярошевский. - Краснодар: «Просвещение-Юг», 2013. - 202 с.

С. 86-87.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АДФ

АлАТ

АМФ

АОД

АОС

АсАТ

АСД

АТФ

- аденозиндифосфат

- аланинаминотрансфераза

- аденозинмонофосфат

- антиоксидантное действие

- антиоксидантная система

- аспартатаминотрансфераза

- аллоксановый сахарный диабет

- аденозинтрифосфат

ЛФК - активные формы кислорода

в/бр - внутрибрюшинно

в/в - внутривенно

ГП - глутатионпероксидаза

ДНФ - динитрофенол

KJI - кожный лоскут

КС - кожная складка

КФ - креатинфосфат

КФК - креатинфосфокиназа

ЛД5 - летальная доза, вызывающая 5% гибели животных

ЛД16 -летальная доза, вызывающая 16% гибели животных

ЛД50 - летальная доза, вызывающая 50% гибели животных

ЛДя - летальная доза, вызывающая 84% гибели животных

ЛД95 - летальная доза, вызывающая 95% гибели животных

ЛД99 - летальная доза, вызывающая 99% гибели животных

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

МДА - малоновый диальдегид

МТТ - 3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,2-дифенилтетразолий бромистый

НАД+ - никотинамиддинуклеотид (окисленная форма)

НАД'Н - никотинамиддинуклеотид (восстановленная форма)

НАДФ+ - никотинамиддинуклеотидфосфат (окисленная форма)

НАДФ'Н - никотинамиддинуклеотидфосфат (восстановленная форма)

НЧКЛ - некротизированная часть кожного лоскута

НЧКС - некротизированная часть кожной складки

НЧХ - некротизированная часть хвоста

ОХС - общий холестерин

ПОЛ - перекисное окисление липидов

PK — редуцированное кровообращение

СГ О2" - скорость генерации супероксидного аниона

СД - сахарный диабет

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

СОД - супероксиддисмутаза

ТГ - триглицериды

ТБК - 2-тиобарбитуровая кислота

физ. р-р - физиологический раствор

ХС-ЛПВП - холестерин липопротеинов высокой плотности

ЭГХ - экзогенная гиперхолесгеринемия

ЯК - янтарная кислота

NaCN - натрия цианид

ß-ЛП - ß-липопротеины

БЛАГОДАРНОСТИ

Выражаю благодарность и глубокую признательность член-корреспонденту РАМН, профессору Н.Л. Шимановскому (кафедра молекулярной фармакологии и радиологии ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, зав. - Н.Л. Шимановский) за предоставленную возможность проведения исследований на культивируемых остео- и фибробластах; главному научному сотруднику, доктору биологических паук Г.В. Сукоян (лаборатория биоэнергетики под руководством Г.В. Сукоян ФГБУ «НИИОПП» РАМН) за консультативную помощь в проведении биохимических исследований; доценту A.A. Евглевскому (кафедра гистологии с эмбриологией ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России, зав. - профессор Г.М. Могильная) за проведение совместных гистологических исследований, анализ полученных данных и подготовку научных публикаций.

Подписано в печать 05.05.2014 г. Отпечатано в типографии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России 350063 г. Краснодар, ул. Седина 4. Усл. п.л. 1,0. Тираж 100 экз.