Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Дерматопротекторные свойства мексидола в условиях редуцированного кровообращения на фоне нормогликемии и сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии

На правах рукописи

БАГМЕТОВА Елизавета Николаевна

ДЕРМАТОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА МЕКСИДОЛА В УСЛОВИЯХ РЕДУЦИРОВАННОГО КРОВООБРАЩЕНИЯ НА ФОНЕ НОРМОГЛИКЕМИИ И СОЧЕТАННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО САХАРНОГО ДИАБЕТА И ЭКЗОГЕННОЙ ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Старая Купавна - 2005 г.

Работа выполнена в Государственном учреждении Краснодарского края "Краснодарский краевой научно-исследовательский медицинский центр" и Кубанской государственной медицинской академии

Научный руководитель -

Официальные оппоненты:

член-корреспондент РАМН доктор медицинских наук профессор Галенко-Ярошевский Павел Александрович

доктор медицинских наук профессор Ковалева Виолетта Леонидовна;

доктор медицинских наук профессор Яворский Александр Николаевич

Ведущая организация - ГУ НИИ фармакологии

им. В.В.Закусова РАМН

Защита состоится « » 2005 г. в /¿^часов на

заседании диссертационного совета Д 217.004.01 при открытом акционерном обществе "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (ОАО "ВНЦ БАВ") по адресу: 142450, Московская обл., п/о Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОАО "ВНЦ БАВ".

Автореферат разослан •> —2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

профессор Корольченко Л.В.

J05-6JÏ6

¿168 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Общепризнано, что проблема сахарного диабета (СД) имеет важное медико-социальное значение в связи с его высокой распространенностью, тенденцией к увеличению частоты и тяжести осложнений и, как следствие, высокой инвалидиза-цией и смертностью больных. По данным экспертов ВОЗ, в настоящее время в мире насчитывается более 175 млн. больных СД, к 2010 г. их количество увеличится до 240 млн., а к 2025 г. достигнет 300 млн. В последние годы в Российской Федерации наблюдается прирост заболеваемости СД на 6 -10%, т. е. общее количество больных СД достигает 2 - 4% от всего населения (М.И.Балаболкин, 2000; И.И.Дедов, 2000; Б.Б.Салтыков, 2001; М.В. Шестакова, 2002; В.В.Трусов и соавт., 2004).

Известно, что СД влечет за собой развитие таких грозных осложнений, как микро- и макроангиопатии. При этом изменения в мелких сосудах носят специфический для СД характер, а поражения сосудов среднего и крупного калибра расцениваются как проявления раннего и распространенного склероза (М.И.Балаболкин и соавт., 2000; Л.Е.Бобырева и со-I авт., 2000; Б.Б.Салтыков, 2001; П.В.Ковалева, 2002; Kazuhirt, Michel, 1997; Turner, 1999). Г Наиболее частой локализацией микроангиопатий являются нижние конечности (преимущественно кожа стоп), глаза, почки, тогда как макроангиопатий - коронарные, церебральные и периферические сосуды (Л.А.Чугунова и соавт., 1999; М.И.Балаболкин, 2000; Н.Д.Тронько и соавт., 2002; С.В.Моисеев, В.В.Фомин, 2004; Rayaz, 2000; Fuhlendorff et al., 2000; Viraly, 2000). ''

В связи с этим важнейшими задачами современных фармакологии и диабетологии являются поиск, создание и внедрение в практическое здравоохранение высокоактивных лекарственных средств, способных специфически воздействовать на основные патогенетические звенья СД и обеспечить возможность профилактики и коррекции его сосудистых осложнений (М.Д.Машковский, 2002; И.И.Дедов, 1998; И.И.Дедов и соавт., 2002).

В патогенезе СД важная роль принадлежит активации процессов свободно-радикального окисления (В.И.Корчин, 2000; И.А.Бондарь и соавт., 2001; Н.И.Фадеева и соавт., 2001). Это послужило основанием для использования препаратов антиоксидантного типа действия (никотинамида, а-токоферола, а-липоевой кислоты и др.) в комплексном лечении больных СД (В.А.Горелышева и соавт., 1996; И.А.Строков и соавт., 1999; М.И.Балаболкин и соавт., 2000; И.А.Бондарь и соавт., 2001; А.С.Аметов, С.А.Казиханова, 2003; Pozzilli et al., 1997, 1999; Palmer et al., 1998; Bursell et al., 1999; Emmert et al., 1999).

В последние годы внимание фармакологов и клиницистов привлекают антиоксиданты, относящиеся к производным 3-оксипиридина, в частности мексидол и эмоксипин, способные воздействовать сразу на несколько звеньев патогенеза СД. Следует отметить, что мексидол, в отличие от эмоксипина, содержит в своей структуре янтарную кислоту (сукцинат), » которая, монополизируя дыхательную цепь (А.Ленинджер, 1976), помимо быстрого создания высокого уровня богатых энергией соединений, обладает свойством больше других субстратов цикла Кребса повышать содержание восстановленных митохондральных НАД и стимулировать протекание в клетке восстановительных процессов (Е.Б.Окон и соавт., 1976; П.А.Гапенко-Ярошевский и соавт., 2001). Показано, что производные 3-оксипиридина, наряду с антиоксидантными и антигипоксическими свойствами, способны проявлять гипогли-кемическое, гиполипидемическое, антикоагулянтное, антитромбогенное, антиагрегантное, мембранопротекторное и иммуномодулирующее действие (Л.Д.Смирнов, 1998; Л.Н.Сернов, 1996, 1998; В.И.Инчина и соавт., 1996, 2000; Л.Д.Лукьянова, 1999, 2000, 2002; П.А.Галенко-Ярошевский и соавт., 2001; Н.А.Волкова, 2003; Т.В.Тарасова, 2004 и др.).

Учитывая вышеизложенное, представлялось целесообразным исследовать дерматопро-текторные свойства мексидола в условиях экспериментального (аплоксанового) СД и экзо-

РС-С. H «í.-ti ■'¡..ИДЯ j

ЬМКЛЙОТЬаА Ji.r¡ei«pí>'pr

генной гиперхолестеринемии.

Диссертационная работа выполнялась в соответствии с государственной научно-технической программой "Борьба с наиболее распространенными болезнями" по теме "Сахарный диабет", Федеральной научно-технической программой "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения", являясь фрагментом комплексной научной темы "Поиск и изучение кардио-, нейро- и дер-матотропных веществ среди производных ГАМК, янтарной кислоты и гетероциклических соединений" (№ гос. регистрации 0920016063) лаборатории фармакологии нарушений периферического кровообращения Государственного учреждения Краснодарского края "Краснодарский краевой научно-исследовательский медицинский центр" (ГУ КК ККНИМЦ) и кафедры фармакологии Кубанской государственной медицинской академии (КГМА).

Цель работы. Исследовать влияние мексидола на выживаемость кожи в условиях редуцированного кровообращения на фоне нормогликемии и сочетанного воздействия экспериментального СД и экзогенной гиперхолестеринемии; сформулировать научно-практические рекомендации.

Основные задачи исследования. Для достижения поставленной цели планировалось решение следующих задач:

1. Исследовать влияние мексидола и взятых для сравнения эмоксипина и а-токоферола на выживаемость кожных лоскутов (КЛ), сформированных в области спины (у мышей и крыс) и передней брюшной стенки (у крыс), в условиях редуцированного (в том числе арте-рио-венозной недостаточностью) кровообращения.

2. Провести сравнительное изучение влияния мексидола, пентоксифиллина, актовегина и галидора на жизнеспособность КЛ (в области спины) интактных [без экспериментального сахарного диабета (ЭСД) и экзогенной гиперхолестеринемии (ЭГХ)] животных (мышей и крыс).

3. Исследовать влияние мексидола на выживаемость К Л (у крыс) в области спины и передней брюшной стенки в условиях артерио-венозной недостаточности на фоне сочетанного воздействия ЭСД и ЭГХ.

4. Провести сравнительное изучение влияния мексидола и натрия сукцината на приживление пересаженной кожи (у крыс) - свободного ауто- (АУДТ) и аллодермотрансплан-тата (АЛДТ) - и площадь раневого дефекта (РД).

5. Исследовать некоторые стороны механизма дерматопротекторного действия мексидола: влияние на микроциркуляцию и метаболические процессы в ишемизированной коже.

^ Научная новизна. Впервые показано, что мексидол по сравнению с эмоксипином и а-токоферолом более^выраженно повышает ^выживаемость КЛ в области спины (у мышей и крыс) и передней брюшной стенки (у крыс) в услоВияУредуцированного (в том числе артерио-венозной недостаточностью) кровообращения.

При сравнительном изучении влияния мексидола, пентоксифиллина, актовегина и галидора на жизнеспособность КЛ (в области спины) интактных животных установлено, что мексидол при подкожном введении (мышам) по дерматопротекторной активности и широте терапевтического действия (ШТД) значительно превосходит пентоксифиллин, однако уступает актовегину и, в большей мере, галидору. В условиях внутривенного инъецирования (крысам) мексидол по активности практически сопоставим с пентоксифиллином, а по ШТД уступает ему.

Показано, что мексидол в случаях изучения влияния его на выживаемость КЛ (у крыс) на фоне ЭСД и ЭГХ значительно повышает выживаемость КЛ в области как спины, так и передней брюшной стенки (при артерио-венозной недостаточности).

Установлено, что мексидол повышает приживление АУДТ (у крыс) и улучшает эпите-лизацию РД. Натрия сукцинат, взятый для сравнения в дозе, эквивалентной содержанию сукцината в нем и в мексидоле, проявляет в отмеченном плане менее значимую активность, а при увеличении дозы его в 2 раза - превосходит мексидол.

Показано, что механизм дерматопротекторного действия мексидола может быть обусловлен положительным влиянием его на микроциркуляцию и энергетические процессы в ишемизированной коже.

Научно-практическая ценность работы. Проведенные исследования расширяют представления о фармакологических свойствах мексидола и обосновывают целесообразность углубленных доклинических исследований его для представления в Фармакологический комитет МЗСЗ РФ с целью получения разрешения на клинические испытания в качестве средства, повышающего выживаемость кожи при диабетических ангиопатиях и кожно-пластических операциях.

Результаты изучения дерматопротекторной активности мексидола включены в программу обучения студентов на кафедрах фармакологии КГМА, Ростовского и Волгоград! ского государственных медицинских университетов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Мексидол при одно- и, в большей мере, многократном введениях (мышам и крысам) способен повышать выживаемость кожи в условиях редуцированного (в том числе и арте-рио-венозной недостаточностью) кровообращения, превосходя в этом отношении эмокси-пин и а-токоферол.

2. В опытах на КЛ интактных животных мексидол при подкожном инъецировании (мышам) по дерматопротекторной активности и ШТД более значим, чем пентоксифиллин. В условиях внутривенного введения (крысам) по первому показателю сопоставим с пенток-сифиллином, а по второму - уступает ему.

3. Мексидол при многократном подкожном введении животным с ЭСД и ЭГХ (у крыс) значительно повышает выживаемость КЛ в области спины и КЛ передней брюшной стенки, находящихся в условиях артерио-венозной недостаточности.

4. Мексидол повышает приживление АУДТ и улучшает эпителизацию РД (у крыс), превосходя в этом отношении натрия сукцинат, взятый для сравнения в эквивалентной дозе (по содержанию сукцината), или уступая ему (при увеличении эквивалентной дозы сукцината в два раза).

5. Дерматопротекторная активность мексидола может быть связана со способностью ' его оказывать положительное влияние на микроциркуляцию и энергетические процессы в

ишемизированной коже.

Апробация работы. Материалы и положения диссертации доложены и обсуждены на , расширенных заседаниях (22.05.04 г., 18.10.04 г., 24.12.04 г.) Краснодарского краевого отделения Российского научного общества фармакологов с приглашением представителей лаборатории фармакологии нарушений периферического кровообращения ГУ КК ККНИМЦ, кафедр фармакологии, клинической фармакологии, госпитальной терапии с курсом эндокринологии, отоларингологии, общей хирургии, факультетской хирургии с курсом анестезиологии, хирургии педиатрического и стоматологического факультетов, хирургической стоматологии, ортопедической стоматологии, военной и экстремальной медицины КГМА и органической химии Кубанского государственного технологического унивЕДОпиюации. По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Объем и структура работы. Материалы диссертации изложены на 165 страницах компьютерного текста. Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований,

обсуждения полученных результатов, выводов, научно-практических рекомендаций, списка литературы и приложений.

Работа иллюстрирована 30 рисунками и 18 таблицами. Библиография включает 361 источник литературы, из которых 231 отечественных и 130 иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ I. Материалы и методы исследования

Исследование выполнено на 218 белых беспородных мышах-самцах и 1058 крысах-самцах (из них белых беспородных 1042, линии Вистар - 16) массой 0,018 - 0,030 и 0,120 -0,220 кг соответственно. Эксперименты проведены в соответствии со статьей 11-й Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации (1964) и "Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных" (1985).

Изучение влияния веществ на выживаемость КЛ на ножке проводили в опытах на интактных животных (на мышах и крысах) и на животных (крысах), подвергнутых сочетан-ному воздействию ЭСД и ЭГХ, по методам, описанным И.В.Алексаняном и соавт. (1984), В.М.Шолоховым (1986), К.С.Васьковым (1989), В.И.Горовым (1991), А.Л.Костенко (2000), Т.Н.Хроповой (2004), А.В.Тегай (2004).

Мексидол и взятые для сравнения антиоксиданты эмоксипин и а-токоферол вводили однократно (мышам перед формированием КЛ) и многократно (ежедневно в течение 3-х и 14-ти дней крысам, первое введение - до оперативного вмешательства). Вещества исследовались в широком диапазоне доз.

Оценку результатов исследования проводили через 24 (у мышей) и 72 ч (у крыс) после формирования КЛ. При этом использовали следующую градацию: ЗП - значительно повышает (более 50%) выживаемость КЛ, УП - умеренно повышает (от 18 до 50%), СП - слабо повышает (от 15 до 18%), НИ - не изменяет (± 15%), СС - слабо снижает (от - 15 до - 18%), УС - умеренно снижает (от -18 до -50%).

Для объективной оценки дерматопротекторной активности веществ рассчитывали дозы, вызывающие эффект, равный 16 (ЭД,6) и 30 (ЭД30)%, выраженные в мг/кг.

Изучение влияния мексидола, эмоксипина и а-токоферола (в дозах 25, 15 и 30 мг/кг/сутки подкожно соответственно в течение 3-х дней) на выживаемость КЛ передней брюшной стенки в условиях недостаточности артериального кровоснабжения и при венозном стазе проводили в опытах как на интактных, так и подвергнутых сочетанному воздействию ЭСД и ЭГХ (только мексидол) наркотизированных (этаминал натрия 50 мг/кг внутрибрюшинно) крысах (Е.В.Кижаев и соавт., 1987). Оценку выживаемости кожи проводили (на 3-й день) путем измерения площади ее некротизированной части, выражаемой в % (К.М.Фенчин, 1979; К.С.Васьков, 1989; В.И.Горовой, 1991; А.В.Тегай, 2004).

Исследование дерматопротекторной активности мексидола и взятого для сравнения пентоксифиллина, используемого при нарушениях периферического кровообращения, проводили в опытах на КЛ (в области спины) мышей и крыс. Препараты вводились животным подкожно (мышам) и внутривенно (крысам) в широком диапазоне доз. Сравнительную оценку активности мексидола и пентоксифиллина проводили путем сопоставления их ЭДзо, выраженных в мг/кг и мМ/кг. Кроме того, дерматопротекторная активность мексидола сравнивалась (по ЭДз0) с таковой актовегина и галидора [по данным В.И.Горового (1991)].

Для изучения дерматопротекторного действия мексидола в условиях сочетанного воздействия ЭСД и ЭГХ было сформировано 4 группы крыс:

1 - интактные животные, которые в течение опыта содержались на обычном (стандартном) рационе вивария - 50 особей (исход). 4

2 - животные, которым однократно внутрибрюшинно инъецировали аллоксан (135 мг/кг) и спустя 2 недели (по завершении формирования стабильного СД) в последующие 14 дней (ежедневно) внутрижелудочно вводили масляную суспензию холестерина (40 мг/кг в 0,5 мл растительного масла). Для усиления пероксидного стресса к эмульсии добавляли эр-гокальциферол (витамин Д) из расчета 12500 ЕД/кг - 50 особей (контроль).

3 - животные без ЭСД и ЭГХ, получавшие в течение 14 дней только мексидол (25 мг/кг/сутки подкожно) - 35 особей;

4 - животные с ЭСД в условиях ЭГХ, которым одновременно с холестерином вводился мексидол (25 мг/кг/сутки подкожно) - 50 особей.

За время подготовки крыс к исследованию дерматопротекторного действия мексидола летальность их в 1, 2, 3 и 4 группах составила 8, 12, 0 и 2% соответственно.

Одна часть крыс 1, 2 и 3 групп (7, 8 и 9 животных соответственно) подвергалась активной эйтаназии (А.П.Зильбер, 1998, 2002) путем декапитации под эфирным наркозом на 29-й день эксперимента с предварительным 16 - 17 ч голоданием. После этого у животных в сыворотке крови исследовались следующие показатели углеводного и липидного обменов: содержание глюкозы - глюкозооксидазным методом с помощью стандартного набора реактивов "Глюкоза-ФКД" (Россия), общего холестерина, триглицеридов и холестерина ЛПВП -с помощью стандартных наборов реактивов фирмы "Ольвекс" на анализаторе ФП-901 (Финляндия), (3-липопротеидов - энзиматически калориметрическим методом на электрофо-токалориметре КФК-3.

У другой части животных 1, 2, 3 и 4 групп (39, 36, 35 и 40 соответственно) на 29-й день опыта формировались КЛ в области спины и передней брюшной стенки. В последней модификации КЛ артерио-венозная недостаточность создавалась окклюзией следующих сосудов: артерии, вены, артерии и вены одновременно. Исследование выживаемости КЛ в условиях сочетанного воздействия ЭСД и ЭГХ проводили по методам, аналогичным таковым для интактных животных.

Влияние мексидола и взятого для сравнения натрия сукцината на приживление пересаженной кожи [АУДТ и АЛДТ в области спины - в форме круга (диаметром 25 мм) площадью 490,5 мм2] изучали в экспериментах на 82 крысах (В.М.Шолохов, 1986).

В опытах на приживление АУДТ мексидол (мол. масса 255,0 Д, в том числе сукцината -118,0 Д) и натрия сукцинат (мол. масса динатрия сукцината гексагидрата без воды 160,0 Д, с учетом молекул воды - 268,0 Д) вводились животным подкожно в область передней брюшной стенки. При этом первый препарат использовался в дозе 25 мг/кг/сутки, второй - в ' дозе, эквивалентной содержанию сукцината в нем (71,3%) и в мексидоле (46,3%) - 16,2 мг/кг/сутки, и в два раза превышающей ее - 32,4 мг/кг/сутки. Оба вещества вводились животным в течение всего периода наблюдения - 20 дней. Оценку приживления АУДТ и , АЛДТ и эпителизации РД проводили каждые 5 дней по площади некроза пересаженной кожи и уменьшению РД, выраженным в % (В.И.Русаков, 1971; К.М.Фенчин, 1979; К.С.Васьков, 1989; В.И.Горовой, 1991).

Изучение влияния мексидола на микроциркуляцию в коже проводили1 в экспериментах на наркотизированных (гексенал 100 мг/кг внутрибрюшинно) крысах линии Вистар. С помощью одиночных швов на спине животного в области грудинно-поясничного отдела позвоночника создавалась продольная кожная складка высотой 1 см и длиной 4,5 - 5 см. Через 72 ч после создания складки животное повторно наркотизировалось по той же схеме, после чего проводилась имплантация катетеров в бедренную артерию и бедренную вену.

1 Исследования проведены на кафедре фармакологии фундаментальной медицины (зав. - профессор О С Медведев) Московского государственного университета им М В Ломоносова совместно с кандидатом медицинских наук Д И Шашуриным, за что выражаем ему благодарность

Через катетер в бедренной артерии, подключенный к электроманометру, производилась регистрация артериального давления (АД), через катетер в бедренной вене вводился дополнительный наркоз (гексенал в дозе 20 мг/кг каждые 15 мин) и мексидол. Перед началом эксперимента у каждого животного методом лазерной допплерометрии (флоуметр BLF-21 фирмы Transonic Systems, Inc. США) регистрировался кожный кровоток в области основания складки, после чего датчик переставлялся на вершину кожной складки.

После начала регистрации АД и кожного кровотока на вершине складки животное случайным образом определялось в одну из двух экспериментальных групп. Крысам из первой группы производилось внутривенное введение мексидола в дозе 25 мг/кг, животным из второй группы препарат вводился подкожно в той же дозе. Запись АД и кожного кровотока продолжалась в течение часа после введения препарата. В последующем для анализа выбирались небольшие (5 - 10 с) фрагменты записи с интервалом 5 мин, в которых рассчитывались измеряемые показатели. По кривой АД определялись: систолическое, диастолическое, среднее и пульсовое АД, частота сердечных сокращений (ЧСС). Из среднего АД и кожного кровотока рассчитывалось общее периферическое сопротивление сосудов (ОПСС).

Влияние на гистоморфологические изменения в АУДТ изучали1 в опытах на крысах, которые были разделены на две группы, одной - в течение 4-х дней подкожно вводили мексидол в дозе 25 мг/кг/сутки, другая служила контролем. На 5-е сутки после пересадки кожи-животных подвергали эвтаназии посредством диэтилового эфира и брали кусочки кожи для исследования. При этом один ее кусочек помещали в 10% нейтральный формалин для последующей заливки в парафиновые блоки. Приготовленные срезы окрашивали гематоксилин-эозином и азур Ii-эозином для изучения общей морфологии. Из второго кусочка в крио-сгате готовили срезы толщиной 10 микрон, которые предназначались для гистоэизимати-ческих исследований.

С целью изучения влияния мексидола на энергетический обмен в АУДТ определяли локализацию и степень активности аденозинтрифосфатазы (АТФаза, КФ 3.6.1.3), сукцинат-дегидрогеназы (СДГ, КФ 1.3.99.1) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ, КФ 1.1.1.27). Для исследования активности и локализации АТФазы использовали метод Wachtein, Meisel (1957), СДГ - Берстона (1965), ЛДГ - Лилли (1969). Для оценки состояния транспортных процессов в дополнение к АТФазе проводили гистохимическое исследование щелочной фосфатазы (ЩФ) по методу Gomori (1952).

Для объективизации результатов гистохимических исследований и получения количественных показателей использовали метод морфометрии (С.М.Блинков, Г.Д.Моисеев, 1961). При этом морфометрическому анализу подвергали доминирующие показатели, в качестве которых были определены: высота эпителиального покрова с учетом выраженного утолщения эпидермиса кожи в исследуемый период; длина активно функционирующих капилляров, которые изучались после постановки гистохимической реакции на ЩФ.

Результаты морфометрических исследований обрабатывались статистически по методу С.В.Гублер (1978) с использованием критерия Стьюдента.

Изучение влияния мексидола на показатели цитолитических процессов, энергепШ-ческого обеспечения и антиоксидантной системы в ишемизированной кожи проводили2 в экспериментах на наркотизированных (гексенал 60 мг/кг внутрибрюшинно) крысах-самцах. Животные были рандомизированы на 3 группы (по 7 крыс в каждой): 1 - интактная, 2 -

' Опыты проведены при научной консультации зав кафедрой гистологии с эмбриологией КГМА профессора Г М Могильной, за что выражаем ей благодарность

2 Эксперименты проведены совместно с Республиканским научно-исследовательским центром медицинский биофизики и внедрения новых биомедицинских технологий им Н В Карсанова (директор - доктор биологических наук Г В Сукоян), г. Тбилиси б

контрольная, 3 - опытная. Крысам 1 -й группы подкожно вводили 0,2 мл физиологического раствора в течение 3 дней, 2-й - через 1 ч после моделирования ишемии кожи (путем прошивания шелковой нитью кожной складки длиной 4,5 - 5,0 см, высотой 1,0 см в области верхней трети спины) также инъецировали (подкожно) 0,2 мл физиологического раствора (в течение 3-х дней), 3-й - спустя 1 ч после воспроизведения ишемии кожи вводили (подкожно) мексидол в дозе 25 мг/кг (в течение 3-х дней). Материал для биохимических исследований брали на 4-е сутки из стандартного участка кожи (середины складки - вершины).

Содержание адениловых и пиридиновых нуклеотидов, креатинфосфата (КФ), цитохрома с, лактата, пирувата, малонового диальдегида (МДА), а также гликолитическую активность, активность СОД и катал азы определяли в безъядерных гомогенатах кожи по методам, описанным С.В.Васильевой и соавт. (2002) и А.В.Задорожным и соавт. (2004). Активность креатинфосфо-киназы (КФК) исследовали с помощью тест-набора "LaRoche", а глутатионпероксидазы - по Chen et al. (2000). Активность ЛДГ определяли с использованием тест-систем "Диахим" по реакции с 2,4-динитрофенил-гидралазином, а активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспар-татаминотрансферазы (АсАТ) - с помощью наборов "Био-Ла-Тест" ("Lachema"). Индекс цитолиза рассчитывали как отношение КФК/АсАТ. Ферментативную активность сукцинат- и НАДН-убихинон-редуктазной систем определяли без добавления экзогенного убихинона (А|) и с добавлением его in vitro (А2) (Littarru et al., 1972). Дефицит убихинона и коэффициент активации убихинонзависимых ферментных систем рассчитывали по формулам:

дефицит убихинона = (А2 - А,)/А2 • 100%, коэффициент активации фермента = (А2 - А|)/А, • 100%,

где А) - активность сукцинат- или НАДН-убихинон-редуктазной систем в пробах без экзогенного убихинона; А2 - активность тех же ферментативных систем после добавления в реакционную смесь убихинона.

Ферментативную активность выражали в мкмоль на 1 мг белка митохондрий за минуту. Содержание убихинона определяли по Л.О.Чернухиной и соавт. (1974).

Статистическую обработку данных, учитываемых в градированной форме, проводили по М.Л.Беленькому (1963) и с помощью таблиц Н.Н. Самойлова (1970). Учет результатов исследований, выраженных в альтернативной форме, определение ЭД]6 и ЭД30, границ доверительного интервала и терапевтических индексов, или ШТД (ЛД50/ЭД16, ЛД50/ЭДзо), осуществляли по методам, описанным В.Б.Прозоровским (1962) и МЛ.Бе-леньким (1963), с использованием разработанных на кафедре фармакологии КГМА программ для ЭВМ IBM PC XT.

II. Результаты исследований и их обсуждение

Влияние на выживаемость KJI в опытах на интактных животных. Сравнительная дерматопротекторная активность мексидола, эмоксипина и а-токоферола.

Влияние на выживаемость KJI на питающей ножке в опытах на мышах Проведенные исследования показали, что мексидол при однократном подкожном введении способен проявлять дерматопротекторное действие. Так, при применении препарата в дозах 30, 40 и 50 мг/кг выживаемость КЛ, по сравнению с контролем (физ. раствор), прогрессивно увеличивалась, равняясь 11,3, 20,9 и 35,9% соответственно.

Эмоксипин (10, 20 и 30 мг/кг) и а-токоферол (20, 30 и 40 мг/кг), взятые для сравнения, в принятых условиях эксперимента не обладали существенной дерматопротекторной активностью.

Выявленная зависимость доза - эффект для мексидола позволила рассчитать ЭД,6 и ЭДзо, которые оказались равными 34,5 и 45,9 мг/кг (0,14 и 0,18 мМ/кг) соответственно.

Влияние на выживаемость KJI на питающей ножке в опытах на крысах В результате

проведенных исследований установлено, что мексидол при однократном подкожном введении проявляет дерматопротекторное действие. Так, при использовании препарата в дозах 20, 30 и 40 мг/кг выживаемость КЛ постепенно возрастала, равняясь 10,2, 15,0 и 20,6% соответственно. С увеличением дозы мексидола до 50 мг/кг наблюдалась некоторая стабилизация дерматопротекторного эффекта (18,3%), т. е. он существенно не отличался от такового, имевшего место при использовании предыдущей дозы.

Эмоксипин (10, 20 и 30 мг/кг) и а-токоферол (10, 20 и 30 мг/кг), взятые в качестве препаратов сравнения, в принятых условиях опыта не оказывали значимого влияния на выживаемость КЛ.

В связи с тем, что дерматопротекторный эффект мексидола не достигал 30% уровня, была рассчитана только его ЭД16, которая составила 31,4 мг/кг, или 0,12 мМ/кг.

Согласно исследованиям Т.В.Тарасовой (2004), мексидол способен быстро восстанавливать морфофункциональную организацию различных органов и тканей (кишечника, печени, почек, легких, сердца, плазмы крови и лимфы) после первого введения, а эмоксипин и а-токоферол - после третьего.

Исходя из этого, представляло интерес провести сравнительное исследование дермато-протекторной активности мексидола, эмоксипина и а-токоферола при подкожном введении в течение 3-х дней после моделирования КЛ на питающей ножке.

Установлено, что в принятых условиях эксперимента мексидол в дозах 10, 15, 20, 25 и 35 мг/кг способен повышать жизнеспособность КЛ. При этом выжившая часть КЛ, по сравнению с контролем, составляла 12,0, 19,6, 32,4, 34,4 и 28,2% соответственно. Следует отметить, что при использовании последней дозы препарата отмечалась тенденция к снижению его дерматопротекторной активности.

Применение эмоксипина в дозах 5, 10, 15 и 25 мг/кг индуцировало повышение выживаемости КЛ на 8,1, 15,3, 19,5 и 16,4%, а а-токоферола, взятого в дозах 10, 20, 30 и 40 мг/кг, - на 7,2, 14,6, 18,7 и 16,3% соответственно. Важно отметить, что оба препарата в дозах 25 и 40 мг/кг проявляли тенденцию к снижению дерматопротекторного действия.

Обращает на себя внимание и тот факт, что выживаемость КЛ под влиянием мексидола превышала 30% уровень, тогда как применение эмоксипина и а-токоферола не дает такого результата.

Исходя из этого, для мексидола были рассчитаны ЭД,6 и ЭДз0, а для эмоксипина и а-токоферола - только ЭД)6, которые для первого составили 12,1 и 20,8 мг/кг (0,05 и 0,08 мМ/кг), для второго и третьего -11,4 и 24,3 мг/кг (0,07 и 0,06 мМ/кг) соответственно.

Сопоставление всех трех препаратов по ЭД16 в мг/кг выявило (рис. 1 а), что по активности мексидол в 2,0 раза превосходит а-токоферол и практически сопоставим с эмокси-пином. При выражении ЭД16 в мМ/кг мексидол в 1,2 и 1,4 раза соответственно более значим, чем а-токоферол и эмоксипин.

При определении ШТД (ЛД5о/ЭД16) для мексидола и эмоксипина установлено (рис. 1 б), что по этому показателю первый в 1,7 раза превосходит второй. Рассчитать ШТД для а-токоферола не представилось возможным из-за крайне низкой его токсичности (ЛД50 не установлена).

По данным Н.А.Волковой (2004), мексидол (5 и, в большей мере, 25 мг/кг), а также эмоксипин (12,5 мг/кг) и а-токоферол (30 мг/кг) при подкожном введении животным (крысам) в течение 14 дней на фоне сочетанного воздействия ЭСД и ЭГХ способны оказывать положительное влияние на некоторые показатели углеводного, белкового и липидного обменов, на состояние системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови и внутренних органов.

эд14 30] иг/кг 24,3*°

25

20 15 12,1 11,4 [ХП] т

10 5' ■ш1

О"' М э а-Т

Рис. 1. Сравнительная дерматопротекторная активность по ЭД16 (а) и широта терапевтического действия (б) мексидола (М), эмоксипина (Э) и а-токоферола (а-Т) (все препараты вводили подкожно в течение 3-х дней) в опытах на КЛ интактных крыс.

* р < 0,05 относительно мексидола.

°р < 0,05 относительно эмоксипина.

Исходя из этого, представлялось важным исследовать дерматопротекторную активность мексидола и взятых для сравнения эмоксипина и а-токоферола при подкожном введении, прежде всего, интактным крысам в течение 14 дней (11 дней до моделирования КЛ на питающей ножке и 3 дня после него).

Проведенные эксперименты показали, что мексидол в дозах 10, 15, 20, 25 и 30 мг/кг повышает жизнеспособность КЛ. При этом выжившая часть КЛ, по сравнению с контролем, составила 11,2, 23,6, 28,8, 35,2 и 31,2% соответственно. Обращает на себя внимание то, что в последней дозе имела место тенденция к снижению дерматопротекторного эффекта.

Использование эмоксипина в дозах 5, 10, 15 и 20 мг/кг вызывало дозозависимое повышение жизнеспособности КЛ на 8,9, 13,1, 20,3 и 17,3%, а а-токоферола, использованного в дозах 10, 20 и 30 мг/кг, - на 10,6 14,3 и 20,7% соответственно. Следует отметить, что эмоксипин в дозе 20 мг/кг проявлял тенденцию к снижению дерматопротекторного действия.

Весьма примечательным является то, что выживаемость КЛ при использовании мексидола превышает 30% рубеж, тогда как под влиянием эмоксипина и а-токбферола этот уровень не достигается. Это позволило рассчитать для мексидола ЭД16 и ЭД30, а для эмоксипина и а-токоферола - только ЭД16. Оказалось, что для первого препарата ЭД,6 и ЭД30 равны 11,8 и 20,9 мг/кг (0,05 и 0,08 мМ/кг), для второго и третьего ЭД)6 составила 11,6 и 21,6 мг/кг (0,07 и 0,05 мМ/кг) соответственно. При сопоставлении всех трех препаратов по ЭД(6 в мг/кг установлено, что по активности мексидол в 1,8 раза превосходит а-токоферол и существенно не отличается от эмоксипина. В случае выражения ЭД16 в мМ/кг мексидол сопоставим с а-токоферолом и в 1,4 раза превосходит эмоксипин.

Имеющиеся в нашем распоряжении данные о ЛД50 мексидола и эмоксипина позволили определить для них ШТД. Оказалось, что по этому показателю мексидол в 1,8 более значим, чем эмоксипин.

Сравнительная дерматопротекторная активность мексидола и пентоксифимина

Установлено, что мексидол при подкожном введении мышам в дозах 20, 40 и 50 мг/кг статистически достоверно повышает выживаемость КЛ на 15,3, 19,4 и 31,6% соответственно.

Применение пентоксифиллина в дозах 50, 75 и 100 мг/кг вызывало статистически значимое увеличение жизнеспособности КЛ на 17,7, 23,5 и 32,4% соответственно.

Сопоставление дерматопротекторной активности по ЭД30 в мг/кг мексидола и пентоксифиллина, а также актовегина и галидора [исходя из данных В.И.Горового (1991)] показа-

ло (рис. 2 а), что мексидол статистически достоверно в 2,0 и 7,9 раза соответственно превосходит пентоксифиллин и актовегин, в 1,3 раза менее значим или сопоставим с галидо-ром. Однако при выражении ЭД30 в мМ/кг оказалось, что мексидол в 1,8 раза превосходит пентоксифиллин, в 1,7 и 2,5 раза соответственно уступает галидору и актовегину.

По ШТД (рис. 2 б) мексидол в 2,7, 1,7 и 1,2 раза соответственно более значим, чем пентоксифиллин, галидор и актовегин.

Рис. 2. Сравнительная дерматопротекторная активность по ЭДзо (я) и широта терапев-1^ тического действия (б) мексидола (М), актовегина (А), галидора (Г) и пентоксифиллина (П) при подкожном введении в опытах на КЛ интактных мышей. * р< 0,05 относительно актовегина °р < 0,05 относительно пентоксифиллина 'В.И Горовой, 1991

При исследовании влияния внутривенного введения крысам мексидола на выживаемость К Л установлено, что препарат в дозах 2,5, 5 и 10 мг/кг статистически достоверно повышает выживаемость КЛ на 15,7, 22,9 и 34,1% соответственно.

Пентоксифиллин при аналогичном пути введения животным в дозах 2,5, 5 и 10 мг/кг также статистически значимо увеличивал жизнеспособность КЛ соответственно на 16,2, 20,3 и 38,3%.

Сопоставление ЭДзо, выраженных в мМ/кг, мексидола и пентоксифиллина показало, что первый существенно не отличается от второго. Что же касается ШТД, то мексидол имеет некоторое преимущество перед пентоксифиллином, превосходя его в 1,2 раза.

Сравнительное исследование влияния мексидола, эмоксипина и а-токо-ферола на выживаемость КЛ в условиях недостаточности артериального кровоснабжения и при венозном стазе у крыс Известно, что вещества, повышающие микроциркуляцию и активизирующие метаболические процессы в коже (лития оксибутират, натрия сукцинат, натрия ма-} лат и другие), способны проявлять дерматопротекторное действие в условиях артерио-1 венозной недостаточности (В.М.Шолохов, 1986; Е.В.Кижаев и соавт., 1986; К.С.Васьков, ' 1989; В.И.Горовой, 1991; А.В.Тегай, 2004; Т.Н.Хропова, 2004). »

Учитывая вышеизложенное, представляло интерес исследовать влияние мексидола, эмоксипина и а-токоферола на выживаемость КЛ при недостаточности артериального кровоснабжения и венозном стазе, влекущих за собой развитие соответственно сухого (белого) или влажного (красного) некроза (Е.В.Кижаев и соавт., 1986; Магиуша, Овайте, 1987; Т\Х-ЫН, 1989).

Установлено (рис. 3), что мексидол (25 мг/кг/сутки) и эмоксипин (15 мг/кг/сутки) при подкожном введении в течение 3-х дней в условиях нормальной артерио-веноЗной проходимости вызывают статистически достоверное снижение (на 77,4 и 42,5% соответственно) площади некроза КЛ, а-токоферол (30 мг/кг/сутки) в принятых условиях эксперимента не проявлял существенного дерматопротекторного действия.

При недостаточности артериального кровоснабжения, индуцированной перевязкой од-

ABBA ABBA ABBA ABBA ABBA ABBA ABBA

Рис. 3. Влияние мексидола (М), эмоксипина (Э) и а-токоферола (а-Т) (25, 15 и 30 мг/кг/сутки подкожно в течение 3-х дней) на выживаемость КЛ при недостаточности артериального кровоснабжения и венозном стазе у крыс.

* р< 0,05, ** р < 0,01 и *** р< 0,001 относительно контроля (фда раствор).

А и В - артерия и вена, питающие КЛ, с различными вариантами их лигирования (перевязанные сосуды обозначены подчеркиванием).

ной артерии, все три препарата - мексидол, эмоксипин и а- токоферол - вызывали статистически значимое повышение (на 60,4, 40,3 и 23,1% соответственно) выживаемости К Л, а при окклюзии обеих артерий достоверное увеличение (на 13,7 и 11,2% соответственно) дерматопротекторного эффекта отмечено только в случае использования первых двух веществ.

В условиях венозного стаза, вызванного лигированием как одной, так и обеих вен, только мексидол статистически значимо снижал (на 45,6 и 17,1% соответственно) площадь некроза.

При артерио-венозной недостаточности, индуцированной перевязкой артерии и вены с одной стороны, отмечалось достоверное повышение (на 35,4%) выживаемости КЛ в случаях использования одного мексидола. Подобная ситуация наблюдалась и в условиях окклюзии артерии с одной стороны и вены - с другой, при этом мексидол также статистически значимо увеличивал (на 30,7%) жизнеспособность КЛ. Эмоксипин и а-токоферол не проявляли существенного дерматопротекторного эффекта.

Влияние на выживаемость КЛ в условиях сочетанного воздействия ЭСД и ЭГХ у крыс. При создании ЭСД в сочетании с ЭГХ установлено, что в сыворотке крови опытных крыс (по сравнению с интактными животными) уровень глюкозы (с 5,36 до 9,48 мМ/л, р < 0,001), общего холестерина (с 1,62 до 3,12 мМ/л, р < 0,001), Р-липопротеидов (с 5,81 до 11,62 мМ/л,/> < 0,001) и триглицеридов (с 0,54 до 3,14 мМ/л, р < 0,001) резко увеличивается, а холестерина ЛПВП (с 2,26 до 0,58 мШп,р < 0,001) - снижается.

Применение мексидола (25 мг/кг/сутки подкожно в течение 14-ти дней) на фоне ЭСД и ЭГХ показало, что препарат оказывает нормализующее влияние на углеводный и липидный обмены. Так, показатели содержания глюкозы, общего холестерина и Р-липопротеидов (5,52, 1,79 и 6,53 мМ/л против 5,36, 1,62 и 5,81 мМ/л, р> 0,05 во всех случаях) у подопытных крыс практически не отличались от таковых у интактных животных и на 58,2, 57,4 и 56,2% были ниже соответствующих показателей контрольных крыс.

Что же касается показателей содержания холестерина ЛПВП и триглицеридов, то первый из них под влиянием мексидола по сравнению с таковым интактных крыс снижался (1,82 мМ/л против 2,26 мМ/л, р < 0,001), а по сравнению с показателем контрольных животных - повышался (1,82 мМ/л против 0,58 мМ/л). Второй показатель был близок к таковому интактных крыс (0,68 мМ/л против 0,54 мМ/л, р < 0,001), однако оставался статистически достоверно повышенным, а по сравнению с показателем контрольных животных существенно понижался, составляя 21,7%.

Следовательно, в экспериментах на крысах в условиях ЭСД и ЭГХ мексидол оказывает значительное корригирующее влияние на углеводный и липидный обмены, вплоть до их полного восстановления, что согласуется с данными, полученными Н.А.Волковой (2003).

Влияние на выживаемость КЛ на питающей ножке При исследовании дерматопро-текторных свойств мексидола (25 мг/кг/сутки подкожно в течение 14-ти дней) на фоне ЭСД и ЭГХ установлено (рис. 4), что в контрольных опытах (физиологический раствор на фоне ЭСД и ЭГХ) жизнеспособность КЛ по сравнению с данными, полученными на интактных животных, статистически достоверно (р < 0,001) снижается (на 28,8%).

К - ЭСД + ЭГХ

М

М - ЭСД + ЭГХ

Рис. 4. Соотношение некротизированной и выжившей части КЛ в области спины при подкожном введении физиологического раствора (контроль, К), физиологического раствора на фоне ЭСД и ЭГХ (К - эсд + эгх), мексидола (М, 25 мг/кг) и мексидола на фоне ЭСД и ЭГХ (М - эсд + эгх, 25 мг/кг) в течение 14-ти дней в опытах на крысах.

* р < 0.001

Мексидол в принятых условиях опыта вызывал существенное повышение (на 29,1%) выживаемости КЛ. Примечательно, что дерматопротекторное действие мексидола на фоне ЭСД и ЭГХ (некротизированная часть КЛ равна 51,3%) по сравнению с таковой в опытах на КЛ интактных животных (56,2%) практически сопоставимо, хотя имело место статистически значимое (р < 0,05) отличие в сторону повышения (на 8,7%) его. Важно также отметить, что способность мексидола повышать выживаемость КЛ в условиях ЭСД и ЭГХ была значимо (р < 0,001) меньше (на 25,7%), чем это имело место при использовании его у животных с нормальными показателями углеводного и жирового обменов.

Влияние на выживаемость КЛ в условиях артериальной, венозной и артерио-венозной недостаточности. Установлено, что при артериальной недостаточности в контрольных опытах (физиологический раствор на фоне ЭСД и ЭГХ) выживаемость КЛ по сравнению с результатами, полученными на интактных крысах, статистически достоверно (р < 0,001) снижается (на 38,4%).

Введение животным мексидола (25 мг/кг/сутки в течение 14-ти дней) в условиях арте-

риальной недостаточности (лигирование артерии с одной стороны) на фоне ЭСД и ЭГХ индуцировало существенное повышение (на 49,6%) выживаемости КЛ. Следует отметить, что дерматопротекторный эффект мексидола в принятых условиях опыта (некротизирован-ная часть КЛ составляет 29,6%) по сравнению с выживаемостью КЛ в экспериментах на ин-тактных крысах (42,4%) был статистически достоверно больше (на 43,2%). Кроме того, способность мексидола повышать жизнеспособность КЛ на фоне ЭСД и ЭГХ была значимо меньше (на 43,2%), чем это имело место при использовании его у интактных животных.

При венозной недостаточности (окклюзии вены с одной стороны) КЛ установлено, что в контроле (физиологический раствор на фоне ЭСД и ЭГХ) выживаемость КЛ по сравнению с данными, полученными на интактных крысах, существенно снижается (на 71,9%).

Использование мексидола на фоне ЭСД и ЭГХ вызывало статистически достоверное повышение (на 46,9%) выживаемости КЛ. Примечательно, что дерматопротекторное действие мексидола в принятых условиях эксперимента (площадь некроза КЛ равна 5,2%) по сравнению с выживаемостью КЛ в опытах на интактных крысах (5,7%) было несколько (тенденция) больше (на 8,8%).

Обращает на себя внимание и тот факт, что дерматопротекторный эффект мексидола на фоне ЭСД и ЭГХ по сравнению с результатами, полученными в экспериментах на интактных животных, был значимо ниже (40,4%).

В условиях артерио-венозной недостаточности (лигирование артерии и вены с одной стороны) КЛ выявлено, что в контроле (физиологический раствор на фоне ЭСД и ЭГХ) выживаемость КЛ по сравнению с данными, полученными в опытах на интактных крысах, статистически достоверно снижалась (на 24,5%).

Применение мексидола в условиях ЭСД и ЭГХ индуцировало увеличение (на 31,3%) выживаемости КЛ. Обращает на себя внимание тот факт, что протекторный эффект мексидола (некротизированная часть КЛ равна 31,4%) по сравнению с выживаемостью КЛ в экспериментах на интактных животных (34,5%) был несколько (тенденция) выше (на 9,0%). Следует также отметить, что способность препарата увеличивать жизнеспособность КЛ на фоне ЭСД и ЭГХ была меньше (на 25,8%), чем это имело место при использовании его у котрольных крыс.

Исследование влияния мексидола на приживление пересаженной кожи. Согласно данным В.М.Шолохова (1983, 1986), Х.Х.Бабаниязова (1986), К.С.Васькова (1989), В.И.Го-рового (1991), П.А.Галенко-Ярошевского и соавт. (2001), вещества метаболического типа действия - натрия оксибутират, лития оксибутират, натрия сукцинат и др. - способствуют приживлению АУДТ и АЛДТ, которое связывается с их антигипоксическим и, в частности, иммунодепрессивным (лития оксибутират) свойствами.*

Исходя из этого, представляло интерес исследовать влияние мексидола и взятого для сравнения натрия сукцината на приживление АУДТ и АЛДТ.

Сравнительное исследование влияния мексидола и натрия сукцината на приживление АУДТ в опытах на крысах. Установлено, что мексидол (25 мг/кг/сутки) по сравнению с контролем (физ. раствор) и натрия сукцинатом, взятом в дозе 16,2 мг/кг/сутки, эквивалентной содержанию натрия сукцината в нем и в мексидоле, значимо повышает приживление АУДТ и эпителизацию РД. Так, при использовании мексидола некроз пересаженной кожи на 5, 10, 15 и 20 сутки по отношению к контролю оказался соответственно равным 40,5, 54,5, 52,2 и 43,1%, а при применения натрия сукцината в принятых условиях эксперимента - 67,3, 78,1, 85,6 и 94,1%. Важно отметить, что по срокам приживления АУДТ статистически достоверными (р < 0,001 во всех случаях) для мексидола являются уменьшение площади некроза и РД на 5, 10,15 и 20 сутки, тогда как для натрия сукцината - только на 10 сутки {р < 0,001).

При сопоставлении показателей влияния мексидола и натрия сукцината, взятого в дозе 32,4 мг/кг/сутки (в 2 раза превышает дозу сукцината, содержащуюся в мексидоле), на снижение площади некроза АУДТ и улучшение эпителизации РД выявлено более положительное влияние (р < 0,001 в обоих случаях) на 10 и 15 сутки.

Влияние мексидола на гистологическую структуру АУДТ. Установлено, что по истечении 5-и суток после пересадки кожи на гистопрепаратах АУДТ, окрашенных гематоксилин-эозином, контрольных крыс, получавших физиологический раствор (подкожно), эпителиальный покров (ЭП) был истончен, высота его по данным морфометрического исследования составила 0,18 ± 0,06 мкм. В большинстве случаев слои ЭП плохо контурированы. В ростковом слое клеточная инфильтрация отсутствовала. Волокнистые структуры и мышечные волокна дермы были размытыми.

АУДТ животных, получавших мексидол (25 мг/кг/сутки подкожно), на 5-е сутки исследования визуально выглядели, по сравнению с контролем, более жизнеспособными. На гистопрепаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, в ЭП четко выявлялись все слои, за исключением рогового, который был истончен. Высота ЭП равнялась 0,37 ± 0,05 мкм, что существенно отличалось (р < 0,01) от контроля. В ростковом слое наблюдались явления пролиферации клеток. В собственно коже отмечались признаки клеточной инфильтрации; волокнистые и мышечные компоненты сохраняли обычное строение.

На гистопрепаратах АУДТ, окрашенных азур П-эозином, опытной группы животных, в отличие от контроля, редко выявлялись тканевые базофилы. Отмечалось расширение кровеносных сосудов, при этом признаки тромбоза отсутствовали. Наблюдались явления круг-локлеточной инфильтрации и разрыхления соединительнотканных элементов, а также пролиферации эндотелиальных клеток в ложе АУДТ. Обращало на себя внимание наличие выраженной фибробластической реакции.

Влияние мексидола на энергетический обмен в А УДТ. Установлено, что мексидол (25 мг/кг/сутки подкожно) на 5-е сутки после пересадки кожи способен выражено повышать в АУДТ активность ЛДГ, СДГ, АТФазы и ЩФ. Характерным было распределение ЩФ. Так, высокая активность ее наблюдалась как в стенках сосудов сосочкового и сетчатого слоев дермы, так и в стенках образующихся сосудов ложа АУДТ.

Исходя из того, что ЩФ играет важную роль в транспортных процессах, выявленная нами высокая ее активность в стенках сосудов позволила характеризовать эти сосуды как функционально активные. Учитывая то, что проведенная реакция на ЩФ хорошо контрастировала капилляры, нами, с целью объективизации результатов исследования и получения количественных показателей, длина выявленных функционально активных капилляров была подвергнута морфометрии. Установлено, что длина капилляров в 1 мм3 в принятых условиях эксперимента равна 104,6 ± 1,85 мм/мм3 против 61,8 ± 1,20 мм/мм3 (р < 0,01) в контроле.

Влияние на приживление АЛДТ в опытах на крысах. Установлено, что мексидол в экспериментах на крысах при подкожном введении (25 мг/кг/сутки за 10 дней до пересадки кожи и в течение 20 дней в послеоперационном периоде) снижает площадь некроза АЛДТ только на 5 сутки исследования, которая составляла в среднем 52,8% по отношению к контролю (физ. раствор), а в последующие периоды исследования (на 10, 15 и 20 сутки) сколько-нибудь значимых изменений площади некроза не выявлено.

Исследование некоторых сторон механизма дерматопротекторного действия мексидола.

Изучение влияния мексидола на состояние микроциркуляции в ишемизирован-ной коже и состояние системной гемодинамики у крыс.

Влияние на микроциркуляцию в ишемизированной коже. В результате проведенных

экспериментов установлено, что в области кожной складки у животных происходило статистически достоверное уменьшение кожного кровотока. Как внутривенное, так и подкожное введение мексидола в дозе 25 мг/кг приводило к статистистически достоверному увеличению кожного кровотока. В случае внутривенного введения этот эффект развивался непосредственно после введения препарата и сохранялся на протяжении всего периода наблюдения, причем достоверные различия по уровню кровотока между ишемизированной и не-ишемизированной кожей исчезали. При подкожном введении препарата эффект развивался в течение 15 - 20 мин после введения и продолжался не более 20 мин.

Влияние на состояние системной гемодинамики у крыс Изменения среднего АД, развивающиеся после введения мексидола, были аналогичными изменениям кожного кровотока. Внутривенное введение препарата вызывало немедленное статистически достоверное снижение среднего АД, которое наблюдалось на протяжении всего периода исследования. При подкожном введении мексидола также наблюдалось некоторое снижение среднего АД, однако оно было статистически недостоверным относительно исходного уровня.

Внутривенное введение мексидола также вызывало непродолжительное статистически достоверное снижение пульсового давления, продолжавшееся не более 25 мин. Подкожное введение мексидола на пульсовое давление не влияло.

ЧСС при внутривенном введении мексидола статистически достоверно снижалась, причем этот эффект развивался через 15 мин после введения препарата и продолжался не более 25 мин. Подкожное введение мексидола оказывало менее продолжительное действие (статистически достоверные различия по ЧСС продолжались в течение не более 15 мин после развития эффекта).

Статистически достоверного изменения ОПСС под действием мексидола выявлено не было.

Полученные результаты исследования изменений кожного кровотока хорошо согласуются с имеющимися в литературе данными о влиянии мексидола на сердце и системную гемодинамику и свидетельствуют о том, что препарат оказывает положительное действие на микроциркуляцию в ишемизированных зонах кожи.

По всей видимости, это действие мексидола связано с его прямым сосудорасширяющим эффектом, а не воздействием на системную гемодинамику (увеличение кровотока сопровождалось снижением функциональной активности сердца и падением АД).

Влияние на показатели питолитических процессов, энергетического обеспечения и антиоксидантной системы в ишемизированной коже крыс. В результате проведенных экспериментов установлено, что на 3-й сутки после моделирования ишемии кожи в плазме крови контрольной группы животных активность АлАТ и АсАТ увеличивается на 50 и 36% соответственно, а уровень КФК - более чем в 3 раза. В коже активность ЛДГ повышалась I 1,5 раза. 'Полученные данные указывают на персистирование некротических процессов на 3-й сутки после воспроизведения ишемии. Общее антигипоксическое и антинекротическое курсовое воздействие мексидола в дозе 25 мг/кг, начиная со 2-го ч после воспроизведения ишемии, заключалось в снижении содержания АсАТ и КФК на 3-й сутки в 1,3 и 1,7 раза, а индекса цитолиза - в 1,3 раза.

Содержание цитохрома с в дыхательной цепи митохондрий при ишемии кожи существенно не изменялось. Содержание НАД уменьшалось (на 24%) при неизменном уровне НАДН. В результате отношение НАД/НАДН уменьшалось в 1,4 раза. Снижение редокс-потенциала в системе энергетического обеспечения, очевидно, явилось пусковым механизмом нарушений синтеза адениловых нуклеотидов (содержание АТФ снижалось на 26%, а содержание продуктов его деградации АДФ и АМФ повышалось на 14 и 15% соответственно) Происходил сдвиг соотношения АТФ/АДФ и АДФ/АМФ в сторону продуктов их де-

градации. Падало и содержание пула КФ (на 15%), существенно снижалась (на 11%) глико-литическая активность. Несмотря на повышение (на 23%) уровня лактата, содержание пи-рувата также увеличивалось. В результате соотношение лактат/пируват изменялось. По-видимому, в принятых условиях ишемии кожи отмечается стадия компенсаторной реакции и активации аэробного гликолиза.

Под воздействием курсового введения мексидола в дозе 25 мг/кг содержание НАД достоверно возрастало (на 14,3% относительно наблюдаемого при ишемии), однако не достигало уровня нормы. Повышение уровня окисленной формы НАД под воздействием мексидола не сопровождалось возрастанием содержания восстановленной его формы, что вело к нормализации редокс-потенциапа системы энергетического обеспечения, НАД/НАДН. Возрастание редокс-потенциала вызывало сдвиг в системе энергетического обеспечения в сторону синтеза АТФ (уровень ее повышался на 32%) и КФ (возрастал на 8,3%, но не достигал нормального уровня). До нормального уровня возрастала гликолитическая активность, а активность СДГ под воздействием мексидола превышала норму на 7,5%. На фоне введения мексидола существенно увеличивалось, хотя и не достигало нормального уровня, содержание коэнзима <3ю, резкое сниженное (в 1,5 раза) при ишемии кожи. Снижение содержания убихинона влечет за собой падение активности сукцинат-убихинон-редуктазной системы в митохондриях кожи на 32% в отсутствие добавления экзогенного убихинона, а при насыщении убихиноном - на 27%. Под воздействием мексидола активность сукцинат-убихинон-редуктазной системы полностью восстанавливается, а при введении экзогенного убихинона превосходит нормальную в 1,7 раза (рис. 5 а, б). Можно предположить, что сукцинат-убихинон-редуктазная система является мишенью действия мексидола, а повышение ее ак-

Рис. 5. Ферментативная активность сукцинат-убихинон-редуктазной (а, б) и НАДН-убихинон-редуктазной (в, г) систем митохондрий ишемизированной кожи крыс под воздействием мексидола.

Обозначения' 1 - норма, 2 - ишемия кожи, 3 - ишемия кожи + мексидол (25 мг/кг) Светлые столбики -без добавления экзогенного убихинона, заштрихованные - после добавления

а, в - процент дефицита экзогенного убихинона, б, г - коэффициент активации систем в митохондриях после добавления убихинона in vitro

тивности - ключевым патогенетическим компенсаторным механизмом активации системы энергетического обеспечения кожи под воздействием мексидола.

В качестве мишени действия мексидола также можно рассматривать НАДН-убихинон-редуктазную систему (рис. 5 в, г). В этом случае воздействие мексидола приводит к полному восстановлению ее активности даже без добавления экзогенного убихинона, а после его внесения активность превышает характерную для интактных животных.

Под воздействием мексидола на 3-й сутки активность СОД в зоне ишемии кожи повышалась до контрольных величин. При этом активность каталазы превосходила (на 13%) уровень активности СОД. Возрастала (на 19 и 50% в контрольной и основной группах соответственно) и активность глутатионпероксидазы. Сдвиги в системе антиоксидантной защиты кожи под воздействием 3-дневного курса мексидола свидетельствуют о восстановлении баланса не только в системе энергетического обеспечения, но и в системе антиоксидантной защиты. Можно предположить, что под влиянием мексидола образуемые в ишемизирован-ной коже активные формы кислорода (02, Н202, ОН") и активные формы азота (N0, Ж)2". ОЫОО), обладающие высокой реакционной способностью (вызывают, в частности, окислительную модификацию биополимеров - белков, липидов, углеводов, нуклеиновых кислот, что в итоге приводит к нарушению тканевого дыхания во внутренней мембране митохондрий и процессов гидроксилирования в микросомах) нейтрализуются и их вторичное повреждающее воздействие купируется. Приведенные данные а также отсутствие повышения содержания МДА, по-видимому, свидетельствуют в пользу значительно меньшего нарушения проницаемости мембран, деструктивных процессов переокисления в коже и интенсивности цитолиза.

ВЫВОДЫ

1. Мексидол при однократном подкожном (мышам) и внутривенном (крысам) введениях на фоне нормогликемии способен дозозависимо повышать выживаемость кожного лоскута на питающей ножке (в области спины). По дерматопротекторной активности мексидол превосходит (на мышах) или сопоставим (на крысах) с пентоксифиллином, уступает (на мышах) галидору и, в большей мере, актовегину; по широте терапевтического действия более значим, чем препараты сравнения. Эмоксипин и а-токоферол в принятых условиях опыта не проявляют существенного действия.

При многократном (в течение 3-х и 14-ти дней) подкожном введении (крысам) мексидол, а также эмоксипин и а-токоферол повышают выживаемость кожного лоскута. По дерматопротекторной активности первый значительно превосходит второй и третий, а по широте терапевтического действия более значим, чем эмоксипин, и уступает а-токоферолу.

2. Мексидол в условиях нормальной артерио-венозной проходимости и, в меньшей мере, при "раздельной" и "смешанной" артериальной и венозной недостаточности кожного лоскута передней брюшной стенки (у крыс) повышает его выживаемость.

Эмоксипин при нормальной артерио-венозной проходимости и, в меньшей мере, в условиях недостаточности артериального кровоснабжения кожного лоскута увеличивает его жизнеспособность, уступая в этом отношении мексидолу. При венозном стазе и артерио-венозной недостаточности кожного лоскута не проявляет существенного дерматопротек-торного действия.

а-токоферол в условиях недостаточности артериального кровоснабжения кожного лоскута (в случаях окклюзии одной из двух артерий) повышает его выживаемость, уступая в этом отношении как мексидолу, так и эмоксипину. На фоне нормальной артерио-венозной проходимости, "раздельной" и "смешанной" артериальной и венозной недостаточности кожного лоскута не вызывает значимого дерматопротекторного эффекта.

3. Мексидол при многократном (в течение 14-ти дней) подкожном введении на фоне сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхоле-стеринемии (у крыс) оказывает нормализующее влияние на показатели углеводного (глюкоза) и липидного (общий холестерин, холестерин липопротеидов высокой плотности, р-липопротеиды, триглицериды) обменов, значительно повышает выживаемость кожных лоскутов на питающей ножке (в области спины) и кожных лоскутов (в области передней брюшной стенки), находящихся в условиях "раздельной" и "смешанной" артериальной и венозной недостаточности.

4. Мексидол при многократном (в течение 20-ти дней) подкожном введении на фоне нормального содержания сахара в крови (у крыс) обладает способностью повышать приживление свободного аутодермотрансплантата (в области спины) и улучшать эпителизацию раневого дефекта. В отличие от натрия сукцината, взятого в эквивалентной дозе (по содержанию янтарной кислоты), мексидол обладает более выраженным дерматопротекторным действием; при увеличении дозы натрия сукцината в 2 раза мексидол по активности уступает ему. Мексидол способен повышать приживление аллодермотрансплантата только в первые 5 дней наблюдения, а в последующие сроки исследования не оказывает существенного влияния на его жизнеспособность.

5. Механизм дерматопротекторного действия (включающего приживление аутодер-мотрансплантатов) мексидола может быть обусловлен способностью его активизировать микроциркуляцию и энергетические процессы в коже, нормализовать (в условиях сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестерине-мии) углеводный и липидный обмены, проявлять антиоксидантные и антигипоксические свойства.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Мексидол (3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат) рекомендуется для дальнейшего доклинического изучения с целью практического использования его в качестве дерматопротекторного средства в условиях сахарного диабета, осложненного ангиопатиями (поражением как мелких, так и крупных сосудов), а также при кожно-пластических операциях.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сравнительное исследование влияния мексидола, эмоксипина, а-токоферола, пен-токсифиллина, актовегина и галидора на выживаемость кожи в условиях редуцированного кровообращения. (В.П.Галенко-Ярошевский, И.А.Фильчукова, В.Л.Попков, А.Ю.Сидельни-ков) //Наука Кубани, 2003. - № 3. - С. 184 - 190.

2. Влияние мексидола на выживаемость кожи в условиях редуцированного кровообращения на фоне сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии. (В.П.Галенко-Ярошевский, И.А.Фильчукова, В.Л.Попков, А.Ю. Сидельников) //Наука Кубани, 2003. - № 3. - С. 191 - 196.

3. Влияние мексидола на микроциркуляцию в ишемизированных участках кожи и системную гемодинамику (В.П.Галенко-Ярошевский, О.С.Медведев, И.А.Фильчукова, В.Л. Попков, А.Ю.Сидельников, О.В.Поварова, Д.А.Шашурин) //Наука Кубани, 2003. - № 3. - С. 196-201.

4. Влияние мексидола на приживление ауто- и аллодермотрансплантатов (Г.М.Мо-

»

1 гильная, В.П.Галенко-Ярошевский, В.Л.Попков) //Наука Кубани, 2003. - № 3. - С. 201 - 207.

5. Антигипоксическое и антинекротическое действие мексидола при ишемии кожи (В.П.Галенко-Ярошевский, И.А.Фильчукова, А.Ю.Сидельников, В.Л.Попков) //Бюлп. экс-перим. биол. и медицины. - 2005. - Т. 139, № 2. - С. 170 - 174.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АД - артериальное давление

АДФ - аденозиндифосфорная кислота

АлАТ - аланинаминотрансфераза

( АЛДТ - аллодермотрансплантат

АМФ - аденозинмонофосфорная кислота

« АсАТ - аспартатаминотрансфераза

АТФ - аденозинтрифосфорная кислота

( } АУДТ - аутодермотрансплантат

КЛ - кожный лоскут

КФ - креатинфосфат

КФК - креатинфосфокиназа

лд50 - летальная доза, вызывающая гибель 50% животных

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

лпвп - липопротеиды высокой плотности

МДА - малоновый диальдегид

НАД - никотинамидадениндинуклеотид окисленный

НАДН - никотинамидадениндинуклеотид восстановленный

ОПСС - общее периферическое сопротивление сосудов

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РД - раневой дефект

СД - сахарный диабет

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

1 сод - супероксиддисмутаза

чсс - частота сердечных сокращений

штд - широта терапевтического действия

ЩФ - щелочная фосфатаза

эгх - экзогенная гиперхолестеринемия

щ' ЭД,6 - доза, вызывающая эффект, равный 16%

ЭД30 - доза, вызывающая эффект, равный 30%

1 эп - эпителиальный покров *** »** *

- эсд - экспериментальный сахарный диабет

ДЛЯ ЗАМЕТОК

БАГМЕТОВА Елизавета Николаевна

Дерматопротекторные свойства мексидола в условиях редуцированного кровообращения на фоне нормогликемии и сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гнперхолестеринемии

Автореферат

Подписано в печать 21.03.05 г.. Формат бумаги 60 х 84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. лист - 1. Заказ №11. Тираж -100 экз.

Краснодарское краевое региональное отделение Общероссийской общественной организации "Лига здоровья нации". Подразделение оперативной полиграфии. 350013, г. Краснодар, ул. Постовая, 18.

РНБ Русский фонд

2005-4 46298

2476

2 2 ДП^ ?005

Актуальность темы. Общепризнано, что проблема сахарного диабета (СД) имеет важное медико-социальное значение в связи с его высокой распространенностью, тенденцией к увеличению частоты и тяжести осложнений и, как следствие, высокой инвалидизацией и смертностью больных. По данным экспертов ВОЗ, в настоящее время в мире насчитывается более 175 млн. больных СД, к 2010 г. их количество увеличится до 240 млн., а к 2025 г. достигнет 300 млн. В последние годы в Российской Федерации наблюдается прирост заболеваемости СД на 6 -10%, т. е. общее количество больных СД достигает 2 - 4% от всего населения (М.И.Балаболкин, 2000; И.И.Дедов, 2000; Б.Б.Салтыков, 2001; М.В. Шестакова, 2002; В.В.Трусов и соавт., 2004).

Известно, что СД влечет за собой развитие таких грозных осложнений, как микро- и макроангиопатии. При этом изменения в мелких сосудах носят специфический для СД характер, а поражения сосудов среднего и крупного калибра расцениваются как проявления раннего и распространенного склероза (М.И.Балаболкин и соавт., 2000; Л.Е.Бобырева и соавт., 2000; Б.Б.Салтыков, 2001; П.В.Ковалева, 2002; Kazuhirt, Michel, 1997; Turner, 1999). Наиболее частой локализацией микроангио-патий являются нижние конечности (преимущественно кожа стоп), глаза, почки, тогда как макроангиопатий - коронарные, церебральные и периферические сосуды (Л.А.Чугунова и соавт., 1999; М.И.Балаболкин, 2000; Н.Д.Тронько и соавт., 2002; С.В.Моисеев, В.В.Фомин, 2004; Rayaz, 2000; Fuhlendorff et al., 2000; Viraly, 2000).

В связи с этим важнейшими задачами современных фармакологии и диабетологии являются поиск, создание и внедрение в практическое здравоохранение высокоактивных лекарственных средств, способных специфически воздействовать на основные патогенетические звенья СД и обеспечить возможность профилактики и коррекции его сосудистых осложнений (М.Д.Машковский, 2002; И.И.Дедов, 1998; И.И.Дедов и со-авт., 2002).

В патогенезе СД важная роль принадлежит активации процессов свободно-радикального окисления (В.И.Корчин, 2000; И.А.Бондарь и соавт., 2001; Н.И.Фадеева и соавт., 2001). Это послужило основанием для использования препаратов антиоксидантного типа действия (нико-тинамида, а-токоферола, а-липоевой кислоты и др.) в комплексном лечении больных СД (В.А.Горелышева и соавт., 1996; И.А.Строков и соавт., 1999; М.И.Балаболкин и соавт., 2000; И.А.Бондарь и соавт., 2001; А.С.Аметов, С.А.Казиханова, 2003; Pozzilli et al., 1997, 1999; Palmer et al., 1998; Bursell et al., 1999; Emmert et al., 1999).

В последние годы внимание фармакологов и клиницистов привлекают антиоксиданты, относящиеся к производным 3-оксипиридина, в частности мексидол и эмоксипин, способные воздействовать сразу на несколько звеньев патогенеза СД. Следует отметить, что мексидол, в отличие от эмоксипина, содержит в своей структуре янтарную кислоту (сукцинат), которая, монополизируя дыхательную цепь (А.Ленинджер, 1976), помимо быстрого создания высокого уровня богатых энергией соединений, обладает свойством больше других субстратов цикла Креб-са повышать содержание восстановленных митохондральных НАД и стимулировать протекание в клетке восстановительных процессов (Е.Б.Окон и соавт., 1976; П.А.Галенко-Ярошевский и соавт., 2001). Показано, что производные 3-оксипиридина, наряду с антиоксидантными и антигипоксическими свойствами, способны проявлять гипогликемиче-ское, гиполипидемическое, антикоагулянтное, антитромбогенное, анти-агрегантное, мембранопротекторное и иммуномодулирующее действие

Л.Д.Смирнов, 1998; Л.Н.Сернов, 1996, 1998; В.И.Инчина и соавт., 1996, 2000; Л.Д.Лукьянова, 1999, 2000, 2002; П.А.Галенко-Ярошевский и соавт., 2001; Н.А.Волкова, 2003; Т.В.Тарасова, 2004 и др.).

Учитывая вышеизложенное, представлялось целесообразным исследовать дерматопротекторные свойства мексидола в условиях экспериментального (аллоксанового) СД и экзогенной гиперхолестеринемии.

Диссертационная работа выполнялась в соответствии с государственной научно-технической программой "Борьба с наиболее распространенными болезнями" по теме "Сахарный диабет", Федеральной научно-технической программой "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения", являясь фрагментом комплексной научной темы "Поиск и изучение кардио-, нейро- и дерматотропных веществ среди производных ГАМК, янтарной кислоты и гетероциклических соединений" (№ гос. регистрации 0920016063) лаборатории фармакологии нарушений периферического кровообращения Государственного учреждения Краснодарского края "Краснодарский краевой научно-исследовательский медицинский центр" (ГУ ЮС ККНИМЦ) и кафедры фармакологии Кубанской государственной медицинской академии (КГМА).

Цель работы. Исследовать влияние мексидола на выживаемость кожи в условиях редуцированного кровообращения на фоне нормогли-кемии и сочетанного воздействия экспериментального СД и экзогенной гиперхолестеринемии; сформулировать научно-практические рекомендации.

Основные задачи исследования. Для достижения поставленной цели планировалось решение следующих задач:

1. Исследовать влияние мексидола и взятых для сравнения эмокси-пина и а-токоферола на выживаемость кожных лоскутов (КЛ), сформированных в области спины (у мышей и крыс), и передней брюшной стенки (у крыс), в условиях редуцированного (в том числе артерио-венозной недостаточностью) кровообращения.

2. Провести сравнительное изучение влияния мексидола, пентокси-филлина, актовегина и галидора на жизнеспособность KJI (в области спины) интактных [без экспериментального сахарного диабета (ЭСД) и экзогенной гиперхолестеринемии (ЭГХ)] животных (мышей и крыс).

3. Исследовать влияние мексидола на выживаемость KJ1 (у крыс) в области спины и передней брюшной стенки в условиях артерио-венозной недостаточности на фоне сочетанного воздействия ЭСД и ЭГХ.

4. Провести сравнительное изучение влияния мексидола и натрия сукцината на приживление пересаженной кожи (у крыс) - свободного ауто- (АУДТ) и аллодермотрансплантата (АЛДТ) - и площадь раневого дефекта (РД).

5. Исследовать некоторые стороны механизма дерматопротекторно-го действия мексидола: влияние на микроциркуляцию и метаболические процессы в ишемизированной коже.

Научная новизна. Впервые показано, что мексидол по сравнению с эмоксипином и а-токоферолом более выраженно повышает выживаемость ЮТ в области спины (у мышей и крыс) и передней брюшной стенки (у крыс) в условиях редуцированного (в том числе артерио-венозной недостаточностью) кровообращения.

При сравнительном изучении влияния мексидола, пентоксифилли-на, актовегина и галидора на жизнеспособность KJI (в области спины) интактных животных установлено, что мексидол при подкожном введении (мышам) по дерматопротекторной активности и широте терапевтического действия (ШТД) значительно превосходит пентоксифиллин, однако уступает актовегину и, в большей мере, галидору. В условиях внутривенного инъецирования (крысам) мексидол по активности практически сопоставим с пентоксифиллином, а по ТТТТД уступает ему.

Показано, что мексидол в случаях изучения влияния его на выживаемость KJI (у крыс) на фоне ЭСД и ЭГХ значительно повышает выживаемость КЛ в области как спины, так и передней брюшной стенки (при артерио-венозной недостаточности).

Установлено, что мексидол повышает приживление АУДТ (у крыс) и улучшает эпителизацию РД. Натрия сукцинат, взятый для сравнения в дозе, эквивалентной содержанию сукцината в нем и в мексидоле, проявляет в отмеченном плане менее значимую активность, а при увеличении дозы его в 2 раза - превосходит мексидол.

Показано, что механизм дерматопротекторного действия мексидола может быть обусловлен положительным влиянием его на микроциркуляцию и энергетические процессы в ишемизированной коже.

Научно-практическая ценность работы. Проведенные исследования расширяют представления о фармакологических свойствах мексидола и обосновывают целесообразность углубленных доклинических, исследований его для представления в Фармакологический комитет МЗСР РФ с целью получения разрешения на клинические испытания в качестве средства, повышающего выживаемость кожи при диабетических ангиопатиях и кожно-пластических операциях.

Результаты изучения дерматопротекторной активности мексидола включены в программу обучения студентов на кафедрах фармакологии КГМА, Ростовского и Волгоградского государственных медицинских университетов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Мексидол при одно- и, в большей мере, многократном введениях мышам и крысам) способен повышать выживаемость кожи в условиях редуцированного (в том числе и артерио-венозной недостаточностью) кровообращения, превосходя в этом отношении эмоксипин и а-токоферол.

2. В опытах на К Л интактных животных мексидол при подкожном инъецировании (мышам) по дерматопротекторной активности и ТТТТД более значим, чем пентоксифиллин. В условиях внутривенного введения (крысам) по первому показателю сопоставим с пентоксифиллином, а по второму - уступает ему.

3. Мексидол при многократном подкожном введении животным с ЭСД и ЭГХ (у крыс) значительно повышает выживаемость КЛ в области спины и КЛ передней брюшной стенки, находящихся в условиях артерио-венозной недостаточности.

4. Мексидол повышает приживление АУДТ и улучшает эпителиза-цию РД (у крыс), превосходя в этом отношении натрия сукцинат, взятый для сравнения в эквивалентной дозе (по содержанию сукцината), или уступая ему (при увеличении эквивалентной дозы сукцината в два раза).

5. Дерматопротекторная активность мексидола может быть связана со способностью его оказывать положительное влияние на микроциркуляцию и энергетические процессы в ишемизированной коже.

Апробация работы. Материалы и положения диссертации доложены и обсуждены на расширенных заседаниях (22.05.04 г., 18.10.04 г., 24.12.04 г.) Краснодарского краевого отделения Российского научного общества фармакологов с приглашением представителей лаборатории фармакологии нарушений периферического кровообращения ГУ КК ККНИМЦ, кафедр фармакологии, клинической фармакологии, госпитальной терапии с курсом эндокринологии, отоларингологии, общей хирургии, факультетской хирургии с курсом анестезиологии, хирургии педиатрического и стоматологического факультетов, хирургической стоматологии, военной и экстремальной медицины КГМА и органической химии Кубанского государственного технологического университета.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Объем и структура работы. Материалы диссертации изложены на 165 страницах компьютерного текста. Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, научно-практических рекомендаций, списка литературы и приложений.

Работа иллюстрирована 30 рисунками и 18 таблицами. Библиография включает 361 источник литературы, из которых 231 отечественных и 130 иностранных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Мексидол при однократном подкожном (мышам) и внутривенном (крысам) введениях на фоне нормогликемии способен дозозависи-мо повышать выживаемость кожного лоскута на питающей ножке (в области спины). По дерматопротекторной активности мексидол превосходит (на мышах) или сопоставим (на крысах) с пентоксифиллином, уступает (на мышах) галидору и, в большей мере, актовегину; по широте терапевтического действия более значим, чем препараты сравнения. Эмоксипин и а-токоферол в принятых условиях опыта не проявляют существенного действия.

При многократном (в течение 3 и 14 дней) подкожном введении (крысам) мексидол, а также эмоксипин и а-токоферол повышают выживаемость кожного лоскута. По дерматопротекторной активности первый значительно превосходит второй и третий, а по широте терапевтического действия более значим, чем эмоксипин, и уступает а-токоферолу.

2. Мексидол в условиях нормальной артерио-венозной проходимости и, в меньшей мере, при "раздельной" и "смешанной" артериальной и венозной недостаточности кожного лоскута передней брюшной стенки (у крыс) повышает его выживаемость.

Эмоксипин при нормальной артерио-венозной проходимости и, в меньшей мере, в условиях недостаточности артериального кровоснабжения кожного лоскута увеличивает его жизнеспособность, уступая в этом отношении мексидолу. При венозном стазе и артерио-венозной недостаточности кожного лоскута не проявляет существенного дермато-протекторного действия. а-токоферол в условиях недостаточности артериального кровоснабжения кожного лоскута (в случаях окклюзии одной из двух артерий) повышает его выживаемость, уступая в этом отношении как мексидолу, так и эмоксипину. На фоне нормальной артерио-венозной проходимости, "раздельной" и "смешанной" артериальной и венозной недостаточности кожного лоскута не вызывает значимого дерматопротекторного эффекта.

3. Мексидол при многократном (в течение 14 дней) подкожном введении на фоне сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии (у крыс) оказывает нормализующее влияние на показатели углеводного (глюкоза) и липидного (общий холестерин, холестерин липопротеидов высокой плотности, Р-липопротеиды, триглицериды) обменов, значительно повышает выживаемость кожных лоскутов на питающей ножке (в области спины) и кожных лоскутов (в области передней брюшной стенки), находящихся в условиях "раздельной" и "смешанной" артериальной и венозной недостаточности.

4. Мексидол при многократном (в течение 20 дней) подкожном введении на фоне нормального содержания сахара в крови (у крыс) обладает способностью повышать приживление свободного аутодермотранс-плантата (в области спины) и улучшать эпителизацию раневого дефекта. В отличие от натрия сукцината, взятого в эквивалентной дозе (по содержанию янтарной кислоты), мексидол обладает более выраженным дерматопротекторным действием; при увеличении дозы натрия сукцината в 2 раза мексидол по активности уступает ему. Мексидол способен повышать приживление аллодермотрансплантата только в первые 5 дней наблюдения, а в последующие сроки исследования не оказывает существенного влияния на его жизнеспособность.

5. Механизм дерматопротекторного действия (включающего приживление аутодермотрансплантатов) мексидола может быть обусловлен способностью его активизировать микроциркуляцию и энергетические процессы в коже, нормализовать (в условиях сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестери-немии) углеводный и липидный обмены, проявлять антиоксидантные и антигипоксические свойства.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Мексидол (3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцинат) рекомендуется для дальнейшего доклинического изучения с целью практического использования его в качестве дерматопротекторного средства в условиях сахарного диабета, осложненного ангиопатиями (поражением как мелких, так и крупных сосудов), а также при кожно-пластических операциях.

121