Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Биологические активные вещества как факторы агрессии и защиты при язве желудка

На правах рукописи

ТРУБИЦЫНА ИРИНА ЕВГЕНЬЕВНА

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА КАК ФАКТОРЫ

АГРЕССИИ И ЗАЩИТЫ ПРИ ЯЗВЕ ЖЕЛУДКА. (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-КЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.16 - патологическая физиология, 14 00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 2005

Работа выполнена в лаборатории патофизиологии Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии Департамента здравоохранения г. Москвы

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ:

доктор медицинских наук ЦАРЕГОРОДЦЕВА Тамара Михайловна

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор член - корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

ШЕВЕЛЕВ О. А.

ГУЩИН И. С. РАПОПОРТ С.И.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова (факультет фундаментальной медицины).

Защита состоится «_»_2005 г. в_часов

на заседании диссертационного совета Д 212.203.06 при Российском Университете дружбы народов (117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, дом 6).

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского Университета дружбы народов по адресу: 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, дом 6.

Автореферат диссертации разослан «_»_2005 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 212.203.06 доктор медицинских наук, профессор

Г.А. ДРОЗДОВА

07-6 S

Актуальность. Язвенная болезнь - многофакторное заболевание гастродуоденальной зоны с рецидивирующим клиническим течением, чередованием периодов обострения и ремиссии, характеризующееся формированием локального язвенного дефекта в слизистой оболочке Среди взрослого населения развитых стран распространенность ее составляет от 2 до 10%, нередки осложнения в виде кровотечения, прободения, стеноза (Новицкий В А. и соавт, 1998)

Этиологии и патогенезу язвенной болезни посвящено огромное количество исследований, однако, эта проблема далека от окончательного решения. В соответствии с современными представлениями в развитии язвы значительную роль играет нарушение равновесия между агрессивными и защитными механизмами Резкое усиление «агрессивных» (кислотно-пептических) свойств желудочного сока или ослабление защитных свойств слизистой оболочки, способствует формированию язвенного дефекта (Аруин Л И, 1998, Циммерман Я.С и др., 1998).

Предполагается, что образование язвы происходит вследствие деструкции слизистой оболочки, обусловленной высокой активностью пепсинов и повышенной концентрацией соляной кислоты в условиях сниженной активности ингибиторов желудочной секреции и защитных механизмов на уровне клеточных мембран и внутриклеточного метаболизма

Защитные и повреждающие факторы контролируются нервной системой, регулирующей функциональное состояние желудка (Бабкин Б.П.,1927, Арбузова В.Г, 2002, Фирсова ЛД, 2003). Ряд факторов агрессии и защиты генетически детерминированы, а равновесие между ними поддерживается согласованным действием нейроэндркринной системы желудочно-кишечного тракта, APUD-системы гастродуоденальной зоны. Клетки APUD-системы (amine precursor uptake and decarboxylation (APUD) cells) - гормонально-активные нейроэндокринные клетки, которые обладают универсальными свойствами поглощать предшественники аминов, декарбоксилировать их и синтезировать амины (гистамин, серотонин), необходимые для построения и функционирования регуляторных пептидов, стимулируя или ингибируя продукцию и выброс гормонов пищеварительного тракта При действии различных повреждающих агентов (инфекционных, механических, термических и т д.) в организме развивается интегративная реакция, реализуемая 1 клеточными и нейрогормональными факторами включает в себя все фазы развита?

|iT>api>i)ipfiDaiiiio яовонирго дефекта ия и может

кивлие С! 00

быть представлено в виде определенной последовательности' альтерация, экссудация и пролиферация. В реализации этих этапов задействованы различные системы - нервная, иммунная, эндокринная, сосудистая, крови, энергообеспечения жизнедеятельности клетки и др. Недостаточно выявлены взаимосвязи вегетативной нервной системы и биогенных аминов диффузной нейроэндокринной системы слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, которые могут оказывать влияние на развитие воспаления. Нейромедиаторы способны провоцировать дегрануляцию тучных клеток и запускать ряд компонентов взаимодействия секреторных клеток слизистой оболочки желудка через специальные рецепторы к гистамину, серотонину, ацетилхолину (Успенский ЮП с соавт., 1997, Чернин В.В., 2000, Калинин А.В , 2002) Полной ясности в вопросе о роли серотонина, его взаимоотношениях с другими биологически активными веществами в генезе язвообразования нет. Кровоток, а также содержание в ткани и в крови таких биологически активных веществ как серотонин, гнетами н, цитокины, нуклеиновые кислоты, протеол итические ферменты в значительной степени контролируется ацетилхолином, уровень, которого регулируется активностью холинэстеразы.

Протеолитические ферменты слизистой оболочки желудка играют значительную роль в патогенезе язвенной болезни. (Амиров Н.Ш. с соавт., 1992). Однако вопрос о причине агрессивности продуцируемых ферментов по отношению к «собственной» слизистой остается открытым.

Нет однозначного представления о взаимоотношении активных протеолитических ферментов, потенциально являющихся агрессивным фактором, и их ингибиторами, предупреждающими аутолиз тканей В норме естественной защитной системой в желудке является слой слизи, покрывающий его слизистую оболочку и препятствующий проникновению патогенных агентов, в частности, Helicobacter pylori (HP) к поверхности слизистой оболочке желудка, образованию очага

воспаления в месте скопления HP. Слизь предупреждает обратный ток Н* и превращение профермента, до поступления его в полость, в активный протеолитический фермент, который может способствовать протеолизу слизистой оболочки желудка

Вопросы, касающиеся содержания и соотношения, различных биологически активных веществ, взаимоотношения между уровнем протеолитической активности, ингибиторной способности слоя слизи и ткани по отношению к протеолитическим ферментам активным в кислой и слабокислой среде в зависимости от сроков формирования язвенного дефекта слизистой оболочки желудка и продолжительности воздействия повпежпакниегй. (EäirföSa 32jftKHt5T решения и нуждаются в исследовании

•** S» «:<

Все изложенное явилось основанием для проведения настоящего исследования, определило его цель

Цель и задачи работы

Цель исследования. Изучение механизмов повреждения и защиты, обусловленных биологически активными веществами, в слизистой оболочке желудка и периферической крови, их соотношение при язве желудка в эксперименте и клинике на разных этапах патологического процесса.

Задачи исследования.

1. Определение содержания серотонина, гистамина и ацетилхолина в сыворотке крови, крае язвы и зоне перифокального воспаления у больных при язвенной болезни желудка в зависимости от стадии заболевания и фазы патологического процесса.

2 Изучение содержания цитокинов с различными функциональными свойствами в сыворотке крови при язвенной болезни желудка

3 Определение активности протеолитических ферментов (пепсинов) и ингибиторной способности слизи в период обострения язвенной болезни желудка

4 Изучение содержания в слизистой оболочке желудка биогенных аминов (серотонина, гистамина и ацетилхолина) в разные сроки формирования экспериментальной язвы желудка у крыс

5 Изучение динамики содержания нуклеиновых кислот (основных метаболитов пуринов) в разные фазы формирования и заживления экспериментальной язвы желудка

6 Изучение динамики уровня протеолитической активности при разных значениях рН и ингибиторной способности слизистой оболочки, экссудата, сыворотки крови при экспериментальной язве желудка у крыс.

7. Изучение нарушений микроциркуляции в слизистой оболочке желудка крыс в динамике язвообразования

8 Изучение сроков заживления экспериментальной язвы желудка у крыс, вызванной уксусной кислотой, в зависимости от интенсивности и продолжительности экспозиции

9. Изучение влияния ингибиторов протеолитической активности (гордокса, контрикала) на формирование язвы слизистой оболочки желудка в эксперименте

10 Изучение соотношения факторов повреждения и защиты при язвообразовании в эксперименте и клинике.

Научная новизна

1. Впервые установлено при язве желудка, как в клинике, так и в эксперименте, значительное повышение содержания биологически активных веществ в крае язвы и зоне перифокального воспаления, отражающее фазы патологического процесса. Изменения концентрации серотонина, гистамина и ацепгилхолина при обострении имеют четко выраженную временную последовательность и взаимосвязь. При переходе в ремиссию отмечается позитивная динамика нарушенного соотношения биологически активных веществ, однако сохраняется, повышение содержания серотонина и гистамина на фоне нижней границы контрольного уровня ацетилхолина.

2. Проведено комплексное исследование содержания цитокинов в сыворотке крови в зависимости от стадии язвенной болезни желудка и сроков обострения, что позволило оценить их информативность в динамике патологического процесса, прогнозе заболевания.

3 Впервые проведено в эксперименте изучение формирования «ацетатной» язвы в самые ранние сроки, начиная с первой минуты повреждения. Представлена характеристика функциональных и морфологических изменений кровотока, содержания биологически активных веществ, уровня протеолитической активности при кислых значениях рН и ингибиторной активности.

4 При экспериментальной язве и язвенной болезни желудка каждая фаза патологического процесса характеризуется морфо-функциональными нарушениями В развитии, которых значительная роль принадлежит изменениям содержания и соотношения биологически активных веществ в сыворотке крови и ткани

5. Выявленные изменения в содержании биологически активных веществ имеют патогенетическое значение, т.к их повышение или уменьшение способствует увеличению зоны повреждения либо усилению защитных регенераторно-восстановительных процессов при экспериментальной язве желудка

Теоретическая и практическая значимость

1 Проведено сопоставление морфологических и функциональных

нарушений в слизистой оболочке желудка Содержание

биологически активных веществ в периферической крови и ткани

определяется фазой патологического процесса, отражает динамику пато - и саногенеза в эксперименте и клинике

2. Определена роль биологически активных веществ в патогенезе язвенной болезни желудка у больных Их участие в развитии повреждения и формировании регенераторно-восстановительных процессов при экспериментальной язве желудка у крыс.

3. Разработана экспериментальная модель язвы желудка, воспроизводящая сходные морфо-функционалные нарушения с язвенной болезнью желудка человека. Применение данной модели позволяет изучать механизмы патогенеза и саногенеза язвенной болезни желудка.

4. Предложено использование экспериментальной модели для изучения действия лекарственных препаратов, агрессивных и защитных факторов на развитие, течение и заживление язвенного дефекта.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Язвенная болезнь желудка сопровождается изменением содержания и соотношения биогенных аминов серотонина, гистамина, нейромедиатора ацетилхолина в сыворотке крови, крае язвы и в зоне перифокального воспаления, сочетаясь с нарушением кровотока, повышением содержания цитокинов, снижением защитных свойств слизи и ткани в зависимости от стадии заболевания и фазы патологического процесса

2 Предложенная модель экспериментальной язвы желудка у животных имеет общие с язвенной болезни желудка человека морфологические и функциональные нарушения слизистой оболочки желудка.

3. При язве желудка в эксперименте и клинике выявлено изменение содержания и соотношения биологически активных веществ, которые могут выполнять как защитные, так и агрессивные функции в зависимости от фазы патологического процесса и проводимой терапии. Значительное повышение серотонина и гистамина в первые часы язвообразования вызывает нарушение микроциркуляции, способствует развитию воспалительной реакции на повреждение. В зоне перифокального воспаления снижение содержания серотонина и гистамина и повышение ацетилхолина предупреждает сосудистые нарушения, ограничивает зону поражения ,

4 Каждый период язвообразования в эксперименте у животных характеризуется определенным изменением содержания и соотношения биологически активных веществ, синтеза белка Сопоставление полученных данных в эксперименте и клинике,

позволило выявить прогностически неблагоприятные изменения соотношений биологически активных веществ.

Апробация диссертации. Материалы диссертации доложены на ХХП-ХХХ ежегодных научных сессиях Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии (Москва, 1995-2004 г.г.), 4-7 Славяно-Балтийском научном форуме «Санкт-Петербург -Гастро-2002-2005», 1-1П Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 1996-2004), XIX Съезде физиологического общества им. И П. Павлова (Екатеринбург, 2004), 19 Всероссийской научной конференции «Физиология и патология пищеварения», 30-32 Конференции гастроэнтерологов (Смоленск, 2002-2004), I Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2004), Ученом совете Центрального научно-исследовательского института гастроэнтерологии (Москва, 2003), VIII, IX Всероссийском научном Форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», 2004-2005 г.г.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, изложения материала и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 210 источников, из которых 120 отечественных Диссертация изложена на 235 страницах, содержит 57 таблиц и 63 рисунка

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Клинико-экспериментальное исследование выполнено с использованием периферической крови и биопсийного материала слизистой оболочки желудка больных, а также экспериментального материала - слизистой оболочки желудка лабораторных животных (белых крыс).

Обследовано 102 больных язвенной болезнью с локализацией процесса в теле и кардиальном отделе желудка. Среди них 67 мужчин (средний возраст 45±6,5 лет), 35 женщин, (средний возраст 46±7,8 лет). Продолжительность болезни от 1 до 8 лет (средняя продолжительность заболевания 4,5±2 лет). Контрольную группу составляли 22 практически здоровых, в возрасте от 30 до 60 лет (средний возраст 45±6,5 лет).

Диагноз язвенной болезни подтвержден данными клинико-лабораторного обследования, ЭГДС с прицельной биопсией из края язвы и на расстоянии 6-8 см от края язвенного дефекта Содержание цитокинов, серотонина, гистамина, ацетилхолина и активность холинэстеразы, исследовали в периферической крови и биоптатах

слизистой оболочки желудка - серотонина, гистамина и ацетилхолина. Уровень протеолитической активности и ингибиторной способности слизи по отношению к пепсину определяли в слизи, взятой с края язвенного дефекта (таблица 1).

Таблица 1

Методы определения биологически активных веществ.

серотонин, гнетами н метод Sadovanqvivad

ацетилхолии метод Hestrin

уровень протеолитической активности, ингибиторной способности по отношению к кислым протеазам (пепсину) метод Anson

определение цитокинов Иммуноферментный метод с использованием тест-систем «протеиновый контур» (С -Петербург), Diamed (Швейцария)

пуриновые соединения методом высокоэффективной жидкостной хроматографией

Экспериментальные исследования были выполнены на 845 белых крысах обоего пола, весом 180-220 гр. с соблюдением требований приказа Министра Здравоохранения СССР от 1977 г № 755 «О проведении экспериментальных работ на животных и о гуманном отношении к экспериментальным животным». При постановке эксперимента под эфирным наркозом наносили травму аппликацией 0,03 мл 100% уксусной кислоты на серозную оболочку передней стенки желудка, для формирования «ацетатной» язвы (Okabe В.,1972). В отдельной серии у животных вызывали повреждение слизистой оболочки желудка введением в подслизистую 0,5 мл растворов - 0,1N HCL; 0,IN HCL+пепсин; 0,1N HCL+контрикал. При «ацетатной» язве желудка определяли язвенный индекс, оценивая площадь повреждения в

см2. При введении вышеуказанных растворов в подслизистый слой рассчитывали индекс повреждений слизистой оболочки желудка, который определяли по балльной системе' гиперемия- 1 балл; отек-2; кровоизлияние - 3; слитые кровоизлияния - 4; эрозия - 5; язва - 6 Баллы суммировали и делили на количество животных.

У животных в экстрактах слизистой оболочки желудка определяли содержание серотонина, гистамина, ацетилхолина, пуриновых соединений, уровень протеолитической активности при кислых и

слабокислых значениях рН, ингибиторную способность по отношению к кислым протеазам.

Влияние серотонина, гистамина и ацетилхолина на архитектонику микроциркуляторного русла изучали путем прижизненной биомикроскопии.

Морфологические методы исследования. У животных желудок через пищевод наполняли 1 % нейтральным формалином, перевязывали с обоих концов и погружали на 5 мин. в 1% формалин, затем вскрывали по большой кривизне, изучали макроскопическую картину слизистой оболочки Желудок растягивали на тонкой пластинке пенопласта и погружали в 10% забуференный формалин или в жидкость Карнуа У больных для исследований использовали биопсионный материал Серии срезов окрашивали гематоксилинэозином, по Ван-Гизону, эластические волокна выявляли по Вейгерту и орсеином, ретикулиновые волокна импрегнировали серебром по Футу, фибрин выявляли по Шуенинову, мукоид-кармином Беста, нейтральные мукополисахариды - Шик-реакцией, кислые - алъциановым синим и толуидиновым синим, РНК -по Браше.

Статистическая обработка данных При обработке результатов использовали компьютерную программу "Statistic 5 5. А" Достоверность различий средних величин сравниваемых показателей оценивали по критерию t Стьюдента, различия считались значимыми при уровне вероятности р< 0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ

Содержание биологически активных веществ в экстрактах слизистой оболочки желудка, приготовленных из биоптатов больных язвенной болезнью желудка.

Формирование язвенного дефекта сопровождается гибелью эпителиальных клеток, полнокровием сосудов, гиперемией, отеком, клеточной инфильтрацией слизистой оболочки Все выше перечисленные изменения индуцируются медиаторами воспаления -серотонином, гнетам ином и цитокинами

Проведено комплексное сравнительное изучение содержания биогенных аминов - серотонина, гистамина, нейромедиатора -ацетилхолина, в слизистой оболочке желудка у больных язвенной болезнью желудка в разные стадии обострения Результаты выполненных исследований позволили выявить локальные нарушения в месте повреждения (край язвенного дефекта и в зоне перифокального воспаления - 6-8 см от края язвенного дефекта). В качестве контроля использовали биоптаты взятые из области тела желудка у практически

здоровых лиц (добровольцы). Полученные данные представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Содержание серотонина, гистамина и ацетилхолнна в слизистой оболочке края язвенного дефекта и в зоне пернфокального воспаления больных язвенной болезнью желудка.

Биологически активные вещества Контроль Здоровые люди край язвы ранние сроки обострения 6-8 см от края язвы ранние сроки обострения Край язвы период рубцевания

Серотонин мкг/г ткани 2,4±0,4 4,1± 0,4 р<0,01 1,8± ОД р>0,05 3,4±0,5 р<0,05

Гистамин мкг/г ткани 1$,0±3 19,0±2,7 р>0,05 18,5+2,5 р>0,05 25,0±3 р<0,05

Ацетилхолин мкг/мг ткани 0,95 ±0,25 М±0Д р>0,05 1,8±0,1 р<0,05 1,05±0,15 р>0,05

Анализ полученных результатов показал, что наиболее высокий уровень серотонина отмечен в крае язвенного дефекта у больных на пике обострения - 4,1± 0,4 мкг/г ткани. При рубцевании язвы концентрация серотонина уменьшается - 3,4±0,5 мкг/г ткани, однако остается выше контрольного значения - 2,4±0,4 мкг/г ткани. В зоне пернфокального воспаления концентрация серотонина несколько снижена по сравнению с контролем - 1,8±0,2 мкг/г ткани В разгар деструктивных процессов изменений в содержании гистамина в крае язвенного дефекта и зоне пернфокального воспаления не выявлено - 19,0±2,7 мкг/г ткани, у здоровых лиц 18,0±3 мкг/г ткани. В период рубцевания уровень гистамина, достоверно повышен 25,0±3 мкг/г ткани (р<0,05) Концентрация ацетилхолина в ткани у больных в период острых явлений имела тенденцию к повышению в крае язвенного дефекта - 1,4±0,2

мкг/мг, и достоверно выше в зоне пернфокального воспаления - 1,8±0,1 мкг/мг (р<0,05), в контроле - 0,95±0,25 мкг/мг. В период рубцевания в

ткани рубца сохраняется незначительное увеличение содержания ацетилхолина- 1,05±0,15 мкг/мг.

Содержание биологически активных веществ в сыворотке крови у больных при обострении язвенной болезни желудка.

При определении содержания биологически активных веществ -цитокинов, серотонина, гистамина, ацетилхолина и уровня активности холинэстеразы в сыворотке крови при обострении язвенной болезни желудка полученные следующие данные.

В сыворотке крови существенных изменений в содержании серотонина и гистамина в динамике патологического процесса у больных язвенной болезнью желудка не выявлено, однако, отмечена определенная тенденция к повышению их концентрации в период острых явлений с 0,14 до 0,19 мкмоль/л и до 0,17 мкмоль/л в период рубцевания, в контроле 0,14 мкмоль/л. В период обострения язвенной болезни желудка наблюдается также тенденция к увеличению уровня гистамина - 21±3 мкмоль/л (р>0,05).

Уровень содержания ацетилхолина в сыворотке крови у больных с язвенной болезнью желудка был низким - 0,46- 1,0 ммоль/л, (в 69%) и умеренным (в 31%) - 1,02-1,5 ммоль/л. Высокий уровень ацетилхолина (свыше 1,5 ммоль/л) у больных язвенной болезнью желудка не отмечен. Одной из возможных причин невысокой концентрации ацетилхолина может служить увеличение холинестеразной активности с 0,4 до 1,4 ммоль/л.30 мин, которая имела место в 54% случаев. Однако и при низкой холинестеразной активности (от 0,05 до 0,3 ммоль/л- 30 мин), наблюдаемой в 46% случаев, выраженного повышения концентрации ацетилхолина не отмечено Повышение или снижение активности холинэстеразы отражает наличие или отсутствие воспалительной реакции. В период острых явлений уровень ацетилхолина в среднем составил 0,65±0,1 ммоль/л, в период рубцевания повышался до 0,9±0,1 ммоль/л (в контроле - 0,85±0,1). Уровень холинестеразной активности соответственно снижался с 1,1±0,2 ммоль/л- 30 мин. до 0,60±0,1 ммоль/л- 30 мин (в контроле - 0,5±0,09 ммоль/л- 30 мин)

При язвенной болезни желудка концентрация цитокинов в периферической крови определяется сроками обострения, отражая динамику патологического процесса при язвенной болезни На самых ранних сроках, пике обострения преобладает увеличение содержания 1ЫР (180±32 пг/мл), 1Ь-2 (300±48 пг/мл), 1Ь-8 (110±16 пг/мл), 1Ь-6 (130±22 пг/мл), в контроле 40±16 пг/мл. Концентрация № у (465±72пг/мл) и ТОТ-а (374±62 пг/мл) достигала своего максимума в разгар заболевания, в то время как содержание маркеров острой фазы в этот период приближалось к нормальным величинам На пике обострения уровень ТОТ-а достоверно превышал содержание 1Ь-4 в сыворотке

крови, после чего начинал постепенно уменьшаться. По мере стихания острых явлений, усиления процессов репарации возрастало увеличение концентрации 1Ь-4 (370±60 пг/мл).

Таким образом, при нарастании процессов эпителизации, рубцевания язвенного дефекта, у большинства больных содержание 1Ь-4 в периферической крови превышает уровень ТОТ-а (р<0,05)

Сопоставление содержания серогонина, гистамина, ацетклхолина при язвенной болезни желудка в крови и ткани показало, что повышение в крови цитокинов «острой фазы» - 1Ь-1; 1Ь-2; 1Ь-6; ТЬ-8; ТОТ-а имеет прямую корреляционную связь с накоплением в ткани серотонина и ацетклхолина - г =0,831868 и г =0,863357 соответственно. В период рубцевания увеличение концентрации гистамина коррелирует с высокой концентрацией ГЬ-4 в периферической крови - г = 0,994721

В развитии повреждений слизистой оболочки желудка существенную роль играют нарушения местной регуляции секреторной функции желудка, которая обеспечивается энтеральной нервной и диффузной эндокринной системами, вызывая изменения желудочной секреции (соляной кислоты, пепсина, бикарбонатов, слизи), кровоснабжения слизистой оболочки, снижение защитных свойств слизистого барьера.

Слизистая оболочка желудка в месте изменения функционального состояния становится уязвимой в результате нарушения продукции качественного слизистого геля, ее покрывающего, снижения ингибиторных свойств слизи. В норме в слизи содержится пепсиноген, который активируется только в полости желудка при рН менее 6,0 У больных при язвенной болезни желудка рН слизи снижается до 3,5-4,0 и в ней появляются активные протеолитические ферменты, отсутствующие в норме. Максимум протеолитической активности данных ферментов при рН=1,5-2,0, что указывает на принадлежность их к пепсинам. Пепсиноген активируется в толще слизи, вместо того, чтобы активироваться в полости желудка В слизи появляется активный фермент - пепсин, отсутствующий у здоровых лиц, уровень протеолитической активности у них равен - 0,04±0,005 Е280 У больных язвенной болезнью желудка «свободная» протеолитическая активность в слизи составила - 0,25±0,04 Е280 (р<0,05). Одновременно на 60-80% снижается ингибиторная способность слизи по отношению к кислым протеолитическим ферментам. В контроле у здоровых лиц «остаточная» протеолитическая активность составила 0,25±0,03 Е280, у больных язвенной болезнью желудка 1,1±0,1 Е280 (р<0,05), т е чем выше уровень протеолитической активности, тем ниже ингибиторная способность слизи (рис. 1, 2). Приведенные данные свидетельствуют о том, что при язвенной болезни происходит изменение свойств слизи - снижение ее ингибиторной способности, появление активных протеолитических

ферментов. Ослабление изоляции покровного эпителия от агрессивных компонентов желудочного сока (соляной кислоты, пепсина, инфекции Helicobacter pylori), может способствовать образованию и поддержанию повреждений слизистой оболочки желудка.

0,3 025 0,2 0,15 0,1 0,05 О

Егм

язва

p<0fiS

Рис.1 Уровень протеолитической активности (Е280) в слизи при рН=3,5-4,0, (рН слизи в крае язвы). К - контроль.

ЕнЗЕ 280 -•—%

Рис. 2 Ингибиторная способность слизи у больных язвенной болезнью желудка. Уровень протеолитической активности в ед. оптической плотности (Е2**); ингибиторная способность слизи в %

Таким образом, у больных язвенной болезнью желудка выявлены факторы повреждения, включающие нарушения содержания и соотношения между биологически активными веществами в ткани и периферической крови, снижение защитных свойств слизистого геля в месте повреждения.

Необходимо принимать во внимание, что в большинстве случаев при болезнях органов пищеварения можно только с большей или меньшей долей вероятности предполагать, откуда и как проник в организм повреждающий агент, каковы механизмы его действия. В этой связи экспериментальные исследования значительно расширяют возможности изучения повреждающего и защитного действия разных факторов, в частности и биологически активных веществ, на разных сроках, в том числе самых ранних, формирования язвенного дефекта и его заживления С этой целью и были проведены исследования на крысах с воспроизведением экспериментальной язвы желудка, вызванной аппликацией уксусной кислоты на серозую оболочку желудка.

Содержание биогенных аминов в слизистой оболочке при «ацетатной» язве желудка у крыс.

Используемая экспериментальная модель язвы желудка («ацетатная» модель), достаточно проста в исполнении. Язва воспроизводится аппликацией 0,03 мл 100 % уксусной кислоты на серозную оболочку в определенном месте (на передней стенке тела желудка), с повреждение всех слоев стенки желудка Экспериментальная язва позволяет наблюдать и изучать процессы язвообразования, начиная с первых минут повреждения слизистой оболочки желудка в отличие от больных, которые попадают в поле зрения врача уже со сформировавшимся язвенным дефектом.

Повреждение после воздействия уксусной кислоты вовлекает в процесс воспаления все слои слизистой оболочки желудка, особенно в ранние сроки после воспроизведения экспериментальной язвы. Полученные результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3

Содержание серотонина, гистамина и ацетилхолнна в слизистой оболочке желудка крыс в норме и при экспериментальной язве желудка.

Бшш-ческн акпшные вещества Контроль (в = 16) Экспериментальная шел желудка

1-я мян (в-8) 1 час (■-7) 3 часа (■ = 7) 24 часа (в = 8) 5 суток начало эиителн-иции (в-10) 10 суток рубцевание язвенного дефекта (в -10)

Серотоиии мкг/г ткан* М±0,2 4,5*0,4 321% 2д±о а 164% 2,8*0,2 200% 0,95*0,01 68% 4,1*0,3 293% 4,1*0,5 293%

Р <0,001 <0,05 <0,01 <0,05 <0,001 <0,001

Гжтамяи мкг/г ткани 18,0*2,0 31,6*2,8 178% 43,2*3,5 239% 13»% 10,0*2,0 56% 19,5*2,0 108% 111%

Р <0,005 <0^005 <0,05 <0^05 >0,05 >0,05

Алетилхолии мкг/мг ткали 0,4240,06 0,48*0,05 114% 0,64*0,09 152% 1,05*0,13 250% 1,7*0,1 405% 0,53*0,09 126% 0,35*0,07 83%

Р >0,05 >0,05 <0,05 оде >0,05 >0,05

Динамическое наблюдение изменений содержания биологически активных веществ в экстрактах слизистой оболочки желудка при экспериментальной язве выявило определенную закономерность в развитии патологических процессов. Повышение содержания серотонина в экстрактах слизистой оболочки желудка в первую минуту воздействия уксусной кислотой на серозную оболочку желудка достигает 4,5±0,4 мкг/г ткани, в контроле 1,4+0,2 мкг/г ткани (р<0,001) В последующем через 1; 3; 24 часа после воздействия кислотой, концентрация серотонина снижается 2,3±0,2; 2,8±0,2; 0,95±0,01 мкг/г ткани (р<0,005) по сравнению с содержанием в первую минуту, но остается выше контрольных значений (р<0,05). В период рубцевания язвенного дефекта (5, 10 сутки) в окружающей ткани увеличено число тучных клеток, и уровень серотонина вновь повышается до 4,1±0,5мкг/г ткани (р<0,001)

Содержание гистамина достоверно возрастает с первой минуты воздействия до 31,6±2,8 мкг/г ткани, (р<0,001) и остается высоким в первые три часа образования язвы слизистой оболочки желудка' 43,2±3,5, (р<0,001); 25,0±2,1мкг/г ткани, (р<0,05), в контроле - 18,0±2 мкг/г ткани. В период рубцевания содержание гистамина снижается и не отличается от контрольного значения.

Содержание ацетилхолина повышается через 1 час после воздействия уксусной кислоты на серозную оболочку желудка: контроль - 0,42±0,06 мкг/мг ткани; 1 час - 0,64±0,09 мкг/мг, (р>0,05), 3 часа - 1,05±0,13 мкг/мг, 24 часа — 1,7±0,1 мкг/мг (р<0,05). В период рубцевания концентрация

-О-С -ЙРГ -О-Аж -С—ЯИ

Рис 3. Экспериментальная язва желудка у крыс. Динамика изменения соотношений биологически активных веществ и площади повреждения (определяемой по ЯИ) в %.

ацетилхолина в поврежденной ткани постепенно снижалась до контрольных значений: на 5 сутки - 0,53±0,09 мкг/мг, на 10 сутки -0,35±0,07 мкг/мг (р>0,05).

Таким образом, сначала, через 1 мин после воздействия, на 321% повышается содержание серотонина, через 1 час на 239% - гистамина, и позднее через 24 часа на 405% - ацетилхолина (Рис 3)

Соотношение содержания биологически активных веществ в ткани слизистой оболочки желудка крыс в процессе язвообразования приближается к соотношению биологически активных веществ выявленных в крае язвы и в зоне перифокального воспаления у больных язвенной болезнью желудка. В период деструктивных изменений у животных значительно повышен уровень серотонина и гистамина. У стационарных больных не выявлено повышения гистамина Вероятно, повышение его происходит в более ранний, догоспитальный период Срок три часа от начала формирования язвенного дефекта у животных предшествует максимальным деструктивным процессам, в этот период в поврежденной ткани одновременно умеренно повышено содержание

серотонина, гистамина и значительно ацетилхолина. У больных в ранний период обострения повышен серотонии и ацетилхолин. В период сформированного язвенного дефекта (24 часа после воздействия кислотой), когда зона повреждения ограничена воспалительным валом и дальнейшего ее расширения не происходит, соотношение биологически активных веществ идентично тому, что выявлено в зоне перифокального воспаления у больных язвенной болезнью желудка Снижена концентрация серотонина и гистамина и повышена ацетилхолина, способствуя ограничению расширения зоны поражения, т к. дальнейшего увеличения площади повреждения не происходит (Рис. 3)

Изучение микроциркуляторного русла слизистой оболочки желудка крыс методом прижизненной биомикроскопии выявило, что одновременное кратковременное повышение биогенных аминов в 1-ую минуту после воздействия (серотонин на 321%, гистамин на 178%), вызывает нарушения микроциркуляции, повышение проницаемости стенки сосудов, стаз, обратный ток крови, застой в оттекающей части при одновременном снижении кровотока в притекающей части микроциркуляторного pycrta, способствуя развитию гипоксии ткани. Вместе с тем, повышение уровня серотонина предупреждает кровотечение, вызывая спазм артерий и артериол, образование тромбов.

Длительное нарушение кровотока в месте повреждения и окружающих тканях, вызывает гипоксию, гиповолемию, апоптоз и прогрессирующую энергетическую недостаточность, приводящую к снижению синтетических процессов. Подтверждением этому могут служить результаты определения содержания метаболитов пуриновых соединений, которые позволяют выявить степень нарушений обменных процессов в зоне повреждения и окружающих тканях. Основные метаболиты пуриновых соединений включают гипоксантин (Hyp), ксантин (Хап), мочевую кислоту (UA) - конечные продукты катаболизма пуриновых соединений, отображающие процессы распада, а также нуклеозиды: аденозинмонофосфат (AMP) и аденозин (Ado), гуанозинмонофосфат (GMP) и гуанозин (Guo), инозинмонофосфат (IMP) и инозин (Ino), отображающие процессы анаболизма Их содержание определяли в крае язвы и в отдалении (1,5 - 2 см от края язвы) в разные сроки язвообразования (1 ч, 24 ч, 10 суток) у крыс с экспериментальной «ацетатной» язвой желудка, вызванной аппликацией уксусной кислоты на серозную оболочку желудка. Как видно из таблицы 4, через 1 час после воспроизведения экспериментальной язвы повышено содержание продуктов катаболизма пуринов в отдалении от края язвы (р<0,05), при одновременном увеличении процессов анаболизма. В крае язвенного дефекта изменения содержания пуриновых метаболитов сходны, но менее выражены. Через сутки после воздействия кислотой, в крае язвы и в зоне перифокального воспаления возрастали

синтетические процессы при сохранении процессов распада (таблица 5) На 10 сутки в крае язвы и в отдалении процессы анаболизма и катаболизма идут параллельно, а в прилежащих отделах слизистой тела желудка преобладают синтетические процессы (Таблица 6)

Для активизации репарации в краях язвы и перифокальной зоне, где наблюдаются дистрофические изменения, способствующие образованию и усугублению язвенного поражения слизистой оболочки желудка, целесообразна ранняя метаболическая коррекция при помощи препаратов, являющихся источниками энергообеспечения и активаторами регенераторно-восстановительных процессов Для этой цели крысам с экспериментальной язвой желудка, вводили в подслизистый слой 5% раствор глюкозы с аскорбиновой кислоты (в объеме 10-20 мл), через 5 минут после воздействия ацетатной кислотой, что способствовало ускорению заживления язвенного дефекта Язвенный индекс (ЯИ, площадь повреждения) к 10 суткам без введения препаратов составляла 0,13±0,02 при обкалывании раствором глюкозы с аскорбиновой кислотой - ЯИ = 0,08±0,008 см* (р<0,05)

Таблица 4

Содержание пуриновых соединений в слизистой оболочке желудка крыс через 1 час после воспроизведения экспериментальной язве желудка

соединение Тело зона

нмоль/мг желудка перифокального край язвы

контроль воспаления

АМР 23.9±1.6 40.1±9.8* 18.6±1.8*

дао 2.9±0.5 5.3±1.0* 2.6±0.3

вМР 2.7±0.5 3.7±0.2* 3.0±0.03

Сио 0.4±0.1 9.0±0.1« 4.8±0.6*

1МР 2.9±0.3 5.2±0.3* 2.6±0.5

1по 2.5±0.5 2.4±0.2 1.0*0.01*

Нур 2.2±0.2 4.0±0.02* 2.8±0.28*

Хал 0.8±0.1 1.0±0.1 0.7±0.2

ил <0.05 2.7±0.2* 0.6±0.2

*р<0,05, корреляционная связь между содержанием пуриновых соединений в крае язвы и в зоне перифокального воспаления: г = 0,999769

Таблица 5

Содержание пуриновых соединений в слизистой оболочке желудка крыс через 24 часа после воспроизведения экспериментальной язве желудка.

Соединение нмоль/мг Тело желудка контроль юна перифокального воспаления край язвы

АМР 23.9*1.6 29.2*0.08 28.3*7.9

дао 2.9*0.5 4.3*1.4" 1.4*0.1*

СМР 2.7*0.5 4.3*1.3" 1.3*0.1

вио 0.4*0.1 4.2*0.5* 2.0*0.5*

1МР 2.9*0.29 4.6*1.2 6.5*2.5*

1по 2.5*0.5 4.2*0.05* 6.5*2.0*

Нур 2.2*0.2 53*0.03* 3.6*0.7

Хап 0.8*0.1 0.7*0.05 0.5*0.08

ид <0.05 1.1*0.2* 1.3*0.05*

*р<0,05, корреляционная связь между содержанием пуриновых соединений в крае язвы и в зоне перифокального воспаления: г = 0,999514

Таблица 6

Содержание пуриновых соединений в слизистой оболочке желудка крыс через 10 суток после воспроизведения экспериментальной язве желудка

Соединение нмоль/мг Тело желудка контроль зона перифокального воспаления край язвы

АМР 23.9*1.6 25.5*2.4 38.7*4.5*

дао 2.9*0.5 2.5*0.3 6.7*0.7*

СМР 2.7*0.5 2.7*0.4 9.2*0.8*

Сио 0.4*0.1 4.2*0.5* 4.8*0.6*

1МР 2.9*0.29 8.4*0.6* 2.5*0.3

1по 2.5*0.5 2.9*0.4 22.6*3.9*

Нур 2.2*0.2 4.6*0.3* 9.5*0.7*

Хап 0.8*0.1 0.7*0.1 1.7*0.2*

ил <0.05 0.3*0.1 3.1*0.4*

*р<0,05, корреляционная связь между содержанием пуриновых соединений в крае язвы и в зоне перифокального воспаления: г = 0,981113

Содержание биологически активных веществ в слизистой оболочке желудка претерпевает существенные изменения в динамике патологического процесса Значительное повышение содержания

серотонина в первую минуту происходит, в основном, за счет высвобождения серотонина из клеток-депо, расположенных на постганглионарных окончаниях симпатической нервной системы, способствуя высвобождению гистамина из ЕСЬ-клеток и повышению ацетилхолина в пораженной ткани (Овсяников В.И., 2003 г) Через 3 часа происходит одновременное кратковременное увеличение содержания серотонина, гистамина и ацетилхолина, предшествуя некротическим изменениям слизистой оболочки желудка Через 24 часа после воздействия уксусной кислотой снижен уровень серотонина и гистамина, увеличен - ацетилхолина, а в более поздние сроки концентрация серотонина остается высокой и сохраняется длительное время за счет дегрануляции увеличенного количества тучных клеток в месте повреждения Биологически активные вещества играют важную роль в развитии воспалительных процессов в месте повреждения, приводя к микроциркуляторным нарушениям, изменениям уровня протеолитической активности экстрактах слизистой желудка и ингибиторной способности ткани в месте повреждения

Воздействие уксусной кислоты вызывает повышение уровня протеолитической активности при рН=6,5-7,0, которая выявляется только в период от 60 до 120 минут Выявленное увеличение протеолитической активности, при данном значении рН, обусловлено активностью лизосомных ферментов (катепсина О), тк пепсины активны при рН=1,5 до 5,0. Затем идет снижение протеолитической активности при рН=6,5-7,0, но сохраняется протеолитическая активность при рН - 4,5- 5,0 обусловленная активностью секретируемых слизистой оболочкой желудка протеолитических ферментов (пепсиногенов)

В месте повреждения расширены венулы, артериолы и капилляры, замедлен кровоток, нарушена проницаемость стенок сосудов, возникает отек, происходит выход форменных элементов крови и скопление их в месте повреждения Затем развивается стаз и образование тромбов, капиллярная сеть в месте повреждения разрушается и практически отсутствует Отек способствует увеличению межклеточного пространства, нарушается связь между клетками (рис 4) Вследствие значительного отека, механически сдавливаются сосуды, усиливается гипоксия и повреждение окружающих тканей Постепенно происходит снижение внутритканевой активации пепсиногена личосомными ферментами Это защитная реакция организма на внутритканевую активацию пепсиногена и выход лизосомных ферментов в межклеточное пространство Из кровотока в место повреждения дополнительно поступают ингибиторы протеолитических ферментов

Рис. 4 Полнокровие и стаз сосудов, отек слизистого и подслизистого слоев желудка (язва 1 час). Окраска гематоксилином и эозином х160.

Одновременное определение ингибиторной способности сыворотки крови и экстрактов слизистой желудка показало, что в сыворотке крови ингибирующая способность по отношению к протеолитическим ферментам активным при рН=2,0-3,0 снижена, и повышена в поврежденной ткани Наиболее высокая ингибирующая способность была выявлена в отечной жидкости

В слизистой оболочке ингибирующая способность возрастает в период от 1 до 60 минут после воздействия уксусной кислотой В более поздние сроки она снижается, уровень протеолитической активности, и содержание биогенных аминов повышается, способствуя усугублению повреждения слизистой оболочки желудка (рис 5,6, 7)

Рис. 5 Соотношение биологически активных веществ через 1 мнн после воздействия кислотой. □ - язва; ^ - контроль

Рис. 6 Соотношение биологически активных веществ через 1 час после воздействия кислотой. □ - язва; тшт - контроль

Рис. 7 Соотношение биологически активных веществ через 3 часа после воздействия кислотой. □ - язва; - контроль

В отдельной серии исследований были сопоставлены изменения биологически активных веществ, ограничиваясь часовым сроком образования повреждений слизистой оболочки желудка, но меняя время аппликации уксусной кислоты на серозную оболочку - 5, 10; 15; 30; 60 сек Площадь, и глубина повреждения слизистой оболочки желудка через час после воспроизведении экспериментальной язвы желудка имеет прямую зависимость от времени аппликации уксусной кислоты (г =0,908978), положительную корреляционную связь с уровнем протеолитической активности (г =0,996784), отрицательную с ингибиторной способностью ткани (г = -0,978653)

Совокупность полученных данных позволила предположить, что в период формирования язвенного дефекта протеолитические ферменты (пепсины, лизосомные) являются патогенным фактором, а ингибирующая способность ткани - защитным Крысам вводили в подслизистый слой желудка соляную кислоту без пепсина и с пепсином Предварительное введение ингибитора протеолитических ферментов (контрикала) способствовало уменьшению площади повреждения Следовательно, в экспериментальных условиях можно достигнуть состояния равновесия между "агрессивными" и

"защитными" факторами, и даже преобладание последних, препятствующих развитию повреждения слизистой оболочки желудка При «ацетатной» экспериментальной язве желудка повреждающим агентом является уксусная кислота, интенсивность воздействия которой зависит от времени аппликации на серозную оболочку желудка При коротком сроке (5-10 сек) язвенное поражение не развивается; по мере увеличения продолжительности до 15 сек -умеренное; 30-60 сек - резко выраженное повреждение При язвенной болезни желудка у человека имеет место суммирование повреждающих факторов - соляной кислоты, пепсинов, изменения содержания биологически активных веществ в ткани и сыворотке крови, инфицирования НР и др В результате заболевание проявляется в виде язвенного поражения слизистой оболочки желудка, на которые реагируют разные системы организма - крови, иммунной, нервной

Процесс язвообразования при экспериментальных исследованиях можно разделить на несколько этапов Первый: 0-60 минут -характеризуется резким нарушением микроциркуляторного русла, отеком, венозным и капиллярным стазом, снижением протеолитической активности при кислых и слабокислых значениях рН, хотя главные клетки не повреждены и полны зимогенных гранул Высокая ингибиторная способность по отношению к кислым протеолитическим ферментам более выражена в отечной жидкости за счет сывороточных ингибиторов В ткани резко повышено содержание серотонина и гистамина

На втором этапе - от 1 до 18 часов - возрастает внутритканевая протеолитическая активность при слабокислых значениях рН, обусловленная лизосомными ферментами и внутритканевой активацией пепсиногена, с одновременным повышением содержания серотонина, гистамина и ацетилхолина, сосудистыми нарушениями, отеком, некрозом эпителия И в крае язвы и окружающей ткани нарушен метаболизм нуклеиновых кислот, преобладают процессы катаболизма

Третий этап более 18 часов после воздействия кислоты - выражен некроз, снижен уровень протеолитической активности при всех значениях рН, содержания серотонина, гистамина и ацетилхолина На четвертом этапе - через 2-3 суток - отмечены сосудистые нарушения, повышенная кровоточивость и травматизация ткани, обусловленная повышенным содержанием серотонина, снижен уровень ацетилхолина В крае язвенного дефекта большое число тучных клеток, значительная лимфоцитарная инфильтрация, повышен уровень нуклеиновых кислот, обеспечивая процессы синтеза С краев начинается заживление де(}>екта слизистой оболочки желудка

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты клинических и экспериментальных исследований показали, что местный патогенез язвы желудка сводится к следующему при действии агрессивных факторов происходит повышение содержания биологически активных веществ, нарушая секреторную функцию желудка - секрецию соляной кислоты, слизи, синтез протеолитических ферментов, соляной кислоты, способствует ослаблению слизистого барьера, который, теряя свои защитные свойства, становится, легко проницаем для ионов водорода; снижается рН слизи, появляются активные протеолитические ферменты, потенцируя процесс локального воспаления, что ведет к дополнительному высвобождению из тучных клеток гистамина и серотонина Одновременно нарушаются протективные свойства слизистой оболочки желудка Она становится уязвимой для воздействия «агрессивных» факторов, таких как кислотно-пептический, инфекционный, аутоиммунный, сосудистый.

Биологически активные вещества, играющие в физиологических условиях регуляторную роль и обеспечивающие гомеостаз тканей и их нормальное функционирование, при достижении критической концентрации, приобретают агрессивные свойства, способствуя высвобождению клеточных лизосомных ферментов и внутритканевой активации «собственных» ферментов пепсинов в толще слизистой оболочки и аутолизу окружающей ткани Меняется кровоток и синтетические процессы слизистой оболочки желудка, нарушается цитокиновый баланс, обеспечивающий иммунную защиту поврежденной ткани.

Содержание серотонина, гистамина, ацетилхолина претерпевает существенные изменения в динамике патологического процесса, которое определяется сроками обострения У больных язвенной болезнью желудка в период деструкции в крае язвенного дефекта повышено содержание серотонина и ацетилхолина без изменений уровня гистамина. Период рубцевания у больных язвенной болезнью характеризуется повышением гистамина и серотонина, снижением ацетилхолина Экспериментальные исследованиям позволили выявить значительное повышение гистамина в ранние (часовые) сроки язвообразования. У животных при экспериментальной язве желудка в период рубцевания наблюдается нормальное содержание гистамина и ацетилхолина, повышенное серотонина

Таким образом, язвообразование в слизистой оболочке желудка, как в эксперименте, так и в клинике, сопровождается изменением содержания биологически активных веществ непосредственно в пораженной ткани и

периферической крови В зависимости от сроков обострения, их количественного содержания они могут выполнять роль факторов защиты, так и агрессии

вывбды

1 Экспериментальные исследования позволили выявить особенности морфологических изменений слизистой оболочки желудка -полнокровие, стаз сосудов, кровоизлияния, отек, некроз слизистого и подслизистого слоев и сопоставить их с уровнем содержания биологически активных веществ в ткани и сыворотке крови в динамике процесса новообразования и заживления -серотонин 321 до 293%, гистамин 239 до 111%, ацетилхолин 405 до 83%, соответственно

2 При экспериментальной язве желудка установлено, что в первые (1-3) часы воздействия уксусной кислотой, одновременное повышение содержания серотонина, гистамина оказывает повреждающий эффект, вызывая высвобождение лизосомных ферментов, способствуя внутритканевой активации пепсиногена и аутолизу собственной ткани (г =0,996784) Повышение концентрации серотонина обеспечивает синтетические процессы и заживление язвенного дефекта, посредством увеличенного содержания нуклеиновых кислот (AMP, GMP, IMP)

3. При экспериментальной язве желудка в слизистой оболочке, уже в первые минуты выявлено нарушение микроциркуляции, проницаемости стенок сосудов (стаз, агрегация форменных элементов, тромбообразование), обусловленное увеличением содержания серотонина, гистамина и ацетилхолина в очаге поражения

4. Введение блокаторов серотониновых и М-холиновых рецепторов (суматришан, атропин) непосредственно после воспроизведения экспериментальной язвы желудка предупреждает микроциркуляторные нарушения, ускоряет заживление язвенного дефекта

5 Образование отека и нарушение проницаемости стенок сосудов в первые минуты, выполняя защитную функцию, повышает пепсинишибиторную способность отечной жидкости за счет поступления в нее плазменных ингибиторов, (г = -0,978653)

6. Введение в подслизистый слой желудка крыс, ингибиторов протеолитических ферментов (гордокс, контрикал), оказывает защитное действие, предупреждая образование повреждений слизистой оболочки желудка

ацетилхолина (1,05±0,1 мкг/мг ткани), вызывающее ее повреждение.

8. В период рубцевания содержание определяемых биологически активных веществ в зоне рубца остается повышенным: уровень серотонина снижается, но не достигает контрольного уровня, (3,4±0,5 мкг/г ткани) гистамина и ацетилхолина повышается (25±3 мкг/г ткани и 1,4±0,2 мкг/мг ткани, соответственно).

9. В перифокальной зоне поражения на пике деструкции, содержание серотонина и гистамина существенно не меняется, в то время как уровень ацетилхолина был повышен (1,8±0,1 мкг/мг ткани, р<0,05), ограничивая увеличение зоны повреждения.

Ю.Обострение язвенной болезни желудка наряду с увеличением содержания биогенных аминов сопровождается также повышением уровня цитокинов, отражающим динамику патологического процесса. На ранних сроках, пике обострения, преобладает увеличение концентрации ГИр, ГЬ- 8,1Ь-6, затем № у, 1Ь- 12, ТОТ-а, при нарастании регенераторно-восстановительных процессов - 1Ь-4.

11.При обострении язвенной болезни желудка выявлена высокая корреляционная зависимость (г =0,831868) между увеличением серотонина в ткани и повышение концентрации 1ИР, 1Ь-6, 1Ь-8, ТОТ-а в сыворотке крови, а в период рубцевания язвенного дефекта между уровнем гистамина в ткани и П>-4 (г = 0,994721) в сыворотке крови.

12.При обострении язвенной болезни желудка меняется протеолитическая активность и свойства полостной слизи. В крае язвенного дефекта уменьшен пепсинингибиторный эффект, снижен рН до 3,5, в слизистом геле появляется активный пепсин.

Список основных публикаций по теме диссертации,

в том числе 4 патента.

1. Трубицына И.Е., Чикунова Б.З.,Соколова Г.Н., Дубцова Е.А., Сперанский М.Д. Соотношение БАВ в норме и в период язвообразования // Научная конференция общества гастроэнтерологов: Тез. докл. конференции. - Тверь, 2002. - С. 13-14

2. Трубицына И.Е., Царегородцева Т.М., Соколова Г.Н., Серова Т.Н., Чикунова Б.З. Содержание БАВ при язвенной болезни желудка //Медицинская иммун. - 2002. - Т. 4, №2 . - С. 166-167

3. Трубицына И.Е., Чикунова Б.З., Соколова Г.Н. Возможность сравнения экспериментальных и клинических данных // Человек и лекарство: Тез. докл. Конгресса. - М„ 2002. - С. 461-461.

4. Трубицына И.Е., Чикунова Б.З. Динамика развития экспериментальных язв желудка у крыс: 5-й научный Форум «Санкт-Петербург - Гастро-2003»// Гастробюллегень,- 2003.- № 2-3. -С. 82-82. 5. Рогозина В.А., Царегородцева Т.М., Трубицына И.Е., Серова Т.И. Влияние моноклональных антител к а -ФИО на цитокиновый статус при неспецифическом язвенном колите // Экспер. и клин, гастроэнтерология. -2003.- №5. -С. 156-156.

7. Трубицына И.Е., Лычкова А.Э., Чикунова Б.З. Экспериментальная язва желудка: гастро - и дуоденопротекторное действие серотониноблокаторов // Экспер. и клин, гастроэнтерология. - 2003. -№5. - С. 175-175.

8. Трубицына И.Е., Лычкова А.Э. Серотонинергические системы двенадцатиперстной кишки при экспериментальной язве желудка // Экспер. и клин, гастроэнтерология. - 2003.- №5. - С. 177-177.

9. Трубицына И.Е., Чикунова Б.З., Амиров Н.Ш. Роль биогенных аминов в язвообразовании // Экспер. и клин, гастроэнтерология. - 2003.- №5. -С. 178-178.

10. Тимен Л.Я., Чикунова Б.З., Трубицына И.Е., Шерцингер А.Г. Геморрагический шок. Особенности эндоскопического гемостаза при язвенных гастродуоденальных проявлениях (патоморфологические, экспериментальные и клинические исследования) // Мед. Консультация. - 2003.- №2(39). - С. 3-19.

11. Тимен Л.Я., Трубицына И.Е., Чикунова Б.З., Шерцингер А.Г., Стонгин C.B., Жигалова С.Б. Эндоскопический превентивный метаболический гемо - и гомеостаз в лечении язвенных гастродуоденальных кровотечений, осложненных тяжелой кровопотерей и геморрагическим шоком // Экспер. и клин, гастроэнтерология. - 2003 -№3. - С.81-83.

12.Трубицына И.Е. Лычкова А.Э. Синергизм ацетилхолина и серотонина в разных секреторных отделах слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки // Бюл.эксперим.биологии и медицины. -2004.- №1. - С. 26-28.

13. Трубицына И.Е. Лычкова А.Э. Механизмы синергичного взаимодействия симпатического и парасимпатического отделов вегетативной нервной системы и серотонинергических нервных волокон (фундальный отдел желудка) // Экспер. и клин, гастроэнтерология . -2004. -№1.-С. 49-49.

14. Трубицына И.Е., Чикунова Б.З., Клишина М.В., Серова Т.И. Система защиты и повреждения в слизистой оболочке желудка // Экспер. и клин, гастроэнтерология . - 2004. №1.-С. 45-45.

15. Царегородцева Т.М., Серова Т.И., Соколова Г.И., Трубицына И Е., Никольская К.А., Клишина М.В. Цитокиновый

статус при рецидивирующих заболеваниях органов пищеварения // Экспер. и клин, гастроэнтерология . -2004. №1.-С. 138-138.

16. Лычкова А.Э., Трубицына И.Е. Протекторное действие серотонинолитиков при ЯБЖ // Экспер. и клин, гастроэнтерология . -2004. №1.-С. 167-167.

17. Соколова Г.Н., Потапова В.Б., Трубицына И.Е., Шляховский И.А. Критерии оценки заживления ЯЖ // Экспер. и клин, гастроэнтерология . -2004. №1.-С. 180-180.

18. Трубицына И.Е., Чикунова Б.З., Соколова Г.Н., Рудь М.В. Соотношение содержания ацетилхолина и холинестеразной активности у больных с патологией гастродуоденальной системы /ЛГруды 32 научной конференции «Роль "ошибок природы" природы, цивилизации и медицины в болезнях органов пищеварения, перспективы гастроэнтерологии». - Смоленск: Изд-во СГМА, 2004. - С. 294-297.

19. Лазебник Л.Б., Царегородцева Т.М., Трубицына И.Е, Серова Т.И., Клишина М.В. Цитокины и цитокиновая терапия при заболеваниях органов пищеварения // Терапевтический архив. - 204.-№ 3. - С. 34-38

20. Лычкова А.Э., Савчук В.И., Смирнов В.М., Трубицына И.Е. Возможные механизмы регуляции пищевой моторики тощей кишки // Экспер. и клин, гастроэнтерология. - 2003. - № 4. - С. 121-122.

21.Трубицына И.Е., Чикунова Б.З., Клишина М.В. Действие биологически активных веществ на слизистую оболочку гастродуоденальной зоны: 6-й научный Форум «Санкт-Петербург -Гастро-2004»// Гастробюллетень, 2004.-№ 2.- С. 204-204

22. Трубицына И.Е., Соколова Г.Н., Губина A.B., Рудь М.В., Т.М. Царегородцева. Ацетилхолин и серотонин у больных язвенной болезнью и при экспериментальной язве желудка: 6-й научный Форум «Санкт-Петербург - Гастро-2004»// Гастробюллетень.- 2004.-№ 2. -С. 34-34.

23. Трубицына И.Е., Царегородцева Т.М., Серова Т.И., Клишина М.В.,Губина A.A. Соотношение содержания биологически активных веществ у больных язвенной болезнью желудка // Тезисы докладов 10-й Гастроэнтерологической недели. - М., 2004. - С. 136.

24. Трубицына И.Е., Чикунова Б.З., Соколова Г.Н. Взаимоотношение факторов агрессии и защиты в слизистой оболочке желудка в процессе язвообразования // Тезисы докладов 111 Российского конгресса по патофизиологии. - М„ 2004. - С. 76

25. И.Е.Трубицына, Б.З.Чикунова. Роль биогенных аминов в регуляции секреторной функции желудка и язвообразовании: XIX съезд физиологического общества им. И.П. Павлова, Екатеринбург // Российский физиологический журнал. - 2004. -Т.90. - № 8. Ч. 2,- С. 354. ПАТЕНТЫ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ:

26. № 2003114816/14(015997) - Способ лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Трубицына И.Е.

27. № 2003133688/15(036381) - Способ прогнозирования течения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, Трубицына И.Е.

28. № 2003123017/14(024834) - Способ прогнозирования течения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Трубицына И.Е.

29. № 2003127761/15(029687) - Способ определения ацетилхолина. Трубицына И.Е.

Список основных использованных сокращений IL - интерлейкин IF у - интерферон у TNF-a - a-фактор некроза опухоли ЯМ - язвенный индекс IMP - инозинмонофосфат Ino - инозин

GMP - гуанозинмонофосфат Guo - гуанозин AMP - аденозинмонофосфат Ado - аденозин

Трубицына Ирина Евгеньевна (Россия).

Биологически активные вещества как факторы агрессии и защиты при язве желудка (экспериментально-клиническое исследование).

В диссертации представлены данные, полученные у больных язвенной болезнью желудка и при воспроизведении экспериментальной язвы желудка у крыс. Определено содержание биологически активных веществ, таких как серотонин, гистамин, ацетилхолин, про- и противовоспалительных цитокинов, основных метаболитов пуринов, холинестеразная активности и протеолитическая активности ферментов обладающих активностью при кислых значениях рН, ингибиторная способность ткани и слизистого геля окружающего язвенный дефект. Все эти вещества прямо или опосредовано способствуют язвообразованию и заживлению язвенного дефекта слизистой оболочки желудка. Выявлена взаимосвязь между изменением концентрации биологически активных веществ микроциркуляторными и морфологическими изменениями слизистой оболочки желудка. Выявлены определенные соотношения содержания биологически активных веществ, которые приводят к образованию, поддержанию или заживлению язвенного дефекта. Предложены методы коррекции каскада нарушений, приводящих к повреждению слизистой оболочки желудка

(серотониноблокаторы, ацетилхолинолитики, ингибиторы

протеолитических ферментов на пике деструкции) и введение энергоемких препаратов в слизистую окружающую язвенный дефект (глюкоза, аскорбиновая кислота). Теоретическое обоснование изученных нами патогенетических механизмов позволяет подойти к решению проблемы предупреждения и лечения повреждений слизистой оболочки желудка.

Trubitsyna Irina Yevgenievna (Russia).

Biologically active substances as factors of aggression and protection in gastric ulcer (experimental-clinical study).

The thesis represents the data received from patients with a stomach ulcer or induced experimental rats stomach ulcer. The content of biologically active substances, such as serotonin, histamine, acetylcholine, pro- and antiinflammatory cytokines, major purine metabolites was determined as well as the cholinestarase and proteolitic activity of enzymes active in acidic media and inhibitory activity of the tissues and mucous gel surrounding ulcer defect was defined.

A11 these substances directly or indirectly promote both peptic ulcer formation and healing. The correlation between change of concentration of biologically active substances and microcirculatory and morphological changes of a mucous membrane of the stomach was defined. The correlations between the comparative abundance of biologically active substances and formation, maintenance or healing of the ulcer defect were determined.

Methods of correction of the cascade of the infringements leading to damage of a mucous membrane of the stomach (serotonin blockers, acetylcholine antagonists, inhibitors of proteolitic enzymes on a pique destruction) and introduction of power-intensive preparations in mucous surrounding ulcer defect (glucose, ascorbic acid) were offered.

The theoretical substantiation of the pathogenetic mechanisms investigated by us allows to approach to the prevention and treatment of mucous membrane of the stomach damages.

*

3

Подписано в печать/&.ЭД°-Гформат 60x84/16. Тираж400 экз. Усл. печ. л. Ху • Заказ

Типография Издательства РУДН 117923, ГОП-1, г. Москва, ул. Орджоникидзе, д. 3

I I

s

*

РНБ Русский фонд

2006-4 10761