Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Роль эндотелиальной нитроксидсинтазы и магний-кальциевого баланса в формировании экспериментальных язв желудка у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс

На правах рукописи

/Г

ПОВЕТКИНА ВИКТОРИЯ НИКОЛАЕВНА

РОЛЬ ЭНДОТЕЛИАЛЫЮЙ НИТРОКСИДСИНТАЗЫ И МАГНИЙ-КАЛЬЦИЕВОГО БАЛАНСА В ФОРМИРОВАНИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЯЗВ ЖЕЛУДКА У СТ РЕСС У СТОЙ ЧИВЫХ И СТРЕССНЕУСТО Й Ч ИВЫХ КРЫС

14.03.03 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

5 ДЕК 2013

Саратов 2013

005542819

005542819

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Рогова Людмила Николаевна.

Официальные оппоненты:

Моррисон Виталий Викторович, заслуженный работник высшей школы РФ, доктор медицинских наук, профессор; ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России; кафедра патологической физиологии; профессор.

Болотских Владимир Иванович, доктор медицинских наук, профессор; ГБОУ ВПО Воронежская ГМА им. H.H. Бурденко Минздрава России; кафедра патологической физиологии; заведующий кафедрой.

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится «18» декабря 2013 года в _ 1асов на заседании

диссертационного совета Д 208.094.03 при ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России по адресу: 410012, Саратов, ГСП ул. Большая Казачья, 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В. И. Разумовского Минздрава России.

Автореферат разослан « 7D » ноября 2013 г.

Учёный секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Язвенная болезнь желудка является широко распространенным хроническим рецидивирующим заболеванием, которое встречается у человека и практически у всех видов животных и опасно развитием осложнений, угрожающих жизни больного (Антюнян В.В., 2008; Бредихина Н.А., 2008; Казимирова А.А. с соавт., 2010). По статистическим данным, распространенность язвенной болезни среди взрослого населения составляет в разных странах от 5 до 15% (в среднем - 7-10%) (Ивашкин В.Т.с соавт., 2004). В России зарегистрировано более 1,5 миллионов пациентов с язвенной болезнью (Ивашкин В.Т., 2006; Бредихина Н.А., 2008).

Общеизвестно, что язвенный дефект в слизистой оболочке развивается при нарушении равновесия между факторами кислотно-пептической агрессии желудочного содержимого и защитными свойствами слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки; при этом Helicobacter pylori является ведущим этиологическим фактором (Ивашкин В.Т., 2006; Циммерман Я.С., 2013; Couturier М. R.et al., 2006). Помимо Helicobacter pylori в современной концепции патогенеза язвенной болезни желудка важное значение отводится состоянию регионарного кровотока, определяющего в значительной мере течение репаративных процессов (Маев И.В. с соавт., 2007).

В последние годы получено множество убедительных данных, доказывающих участие оксида азота (N0) в гастропротекции через улучшение кровоснабжения тканей желудка, так как к первому, реально установленному общему эффекту N0 на функции органов относится релаксация кровеносных сосудов (Ивашкин В. Т., 2011). Образование NO регулируется через изменение экспрессии, либо активности фермента эндотелиальной нитроксидсинтазы (eNOS) (Кравченко Н.А. с соавт., 2008).

Таким образом, способность тканей желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) экспрессировать эндотелиальную нитроксидсинтазу как регулятора местного кровотока должна определять локальную резистентность тканей гастродуоденальной зоны и влиять на интенсивность и эффективность течения обменных и репаративных процессов в них. Однако eNOS может играть двоякую роль. С одной стороны, являясь источником NO как

вазодилятатора и фактора резистентности, эндотелиальная нитроксидсинтаза при чрезмерной ее активации может становиться источником свободнорадикального повреждения тканей ЖКТ (Чеснокова Н.П. с соавт., 2006; Pacher P.A. et al., 2007).

Согласно современным представлениям eNOS обеспечивает постоянное образование оксида азота (Манухина Е.Б.с соавт., 2003; Жлоба A.A., 2006; Ивашкин В. Т.с соавт., 2011). Анализ литературных данных показывает, что до настоящего времени активно изучаются механизмы активации и инактивации эндотелиальной нитроксидсинтазы (Манухина Е.Б. с соавт., 2003; Кравченко H.A. с соавт., 2008; Davis М.Е. et al., 2003; Cattaruzza М. et al., 2004). В современной литературе достаточно широко представлена информация об активности оксида азота и его влиянии на сосудистый тонус (Манухина Е.Б. с соавт., 2003; Ивашкин В. Т. с соавт., 2011; Motavkin P.A., 2004; Vallance Р. et al., 2004), однако локальные механизмы экспрессии eNOS в тканях зоны повреждения при формировании различных язвенных дефектов изучены явно недостаточно.

Известно, что eNOS является Са2+-зависимым ферментом, при этом роль магния как функционального антагониста кальция, с одной стороны, и активатора более чем 300 ферментов, создающего более оптимальные условия для активации изучаемого фермента, с другой стороны, все еще не достаточно изучены (Громова O.A. с соавт., 2010; Hadjistavri L.S. et al., 2010; Rayssiguier Y. et al., 2010; Shechter M., 2010).

Цель исследования — установить закономерности нарушения экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы в тканях желудка, магний-кальциевого баланса и их роль в механизмах формирования экспериментальных язв желудка, разработать способы коррекции развившихся нарушений у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс.

Задачи исследования 1.Определить удельное число и интенсивность экспрессии eNOS-позитивных клеток в тканях зоны изъязвления на фоне завершения формирования экспериментальной стрессовой и ацетатной язв желудка у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс. Оценить корреляционные связи между удельным числом eNOS-позитивных клеток и интенсивностью ее экспрессии в тканях желудка и площадью язвенного дефекта.

2. Выявить особенности экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы в тканях желудка и магниевого баланса у животных с ацетатной язвой, формирующейся на фоне острого стресса.

3. Выявить уровень магния и кальция в биологических средах на фоне сформировавшихся экспериментальной стрессовой, ацетатной язв желудка у стрессустойчивых и стресснеустойчивых животных.

4. Оценить влияние магнийсодержащей лекарственной композиции на удельное число е>Ю8-позитивных клеток и интенсивность ее экспрессии в тканях эрозивно-язвенного дефекта разного генеза, морфологические показатели в зоне эрозивно-язвенного дефекта, содержание магния и кальция в крови, лимфе и моче у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс.

Научная новизна

Впервые определено удельное число еМОБ-позитивных клеток и интенсивность экспрессии еШБ в тканях зоны эрозивно-язвенного дефекта при различных экспериментальных моделях язвы желудка.

Показаны особенности экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс.

Выявлены особенности формирования ацетатной язвы после воздействия острого стресса.

Установлена зависимость между удельным числом клеток, экспрессирующих еЖ)Б, площадью язвенного дефекта и уровнем внутриэритроцитарного магния. У стрессустойчивых животных со стрессовой и ацетатной язвой, сформировавшейся после воздействия острого стресса, выявлены положительные корреляционные связи между площадью язв и удельным числом клеток, позитивных к эндотелиальной нитроксидсинтазе в слизистой оболочке желудка (СОЖ). При этом удельное число еЫОЗ-позитивных клеток в слизистой оболочке желудка зависит от концентрации внутриклеточного магния при всех моделях экспериментальных язвенных дефектов.

В подгруппе стресснеустойчивых крыс определены положительные корреляционные отношения между удельным числом еЫОБ-позитивных клеток в слизистой оболочке желудка и площадью ацетатной и стрессовой язв. При этом удельное число клеток, позитивных к еЫОБ, зависит от уровня внутриэритроцитарного магния при всех экспериментальных моделях язв.

Магнийсодержащая лекарственная композиция (МСЛК) вызывает увеличение числа и интенсивности экспрессии еИОЗ в слизистой оболочке желудка у стрессустойчивых истресснеустойчивых крыс и в под слизистой основе у стрессустойчивых животных при ацетатной язве желудка.

Практическая значимость

Получены новые сведения о роли эндотелиальной нитроксидсинтазы в механизмах формирования экспериментального язвенного дефекта разного генеза у стрессустойчивых и стресснеустойчивых индивидуумов.

Показана целесообразность применения магнийсодержащей лекарственной композиции для коррекции механизмов формирования язвенных дефектов желудка: применение МСЛК вызывает значительное уменьшение площади язвы на фоне увеличения числа еКЮ8-позитивных клеток и интенсивности экспрессии еМОБ в слизистой оболочке поврежденных тканей желудка, а у стрессустойчивых крыс - и в подслизистой основе.

Положения, выносимые на защиту

При стрессовой и ацетатной язве, сформировавшейся после воздействия острого стресса, у стрессустойчивых животных размер язвенного дефекта коррелирует с удельным числом еЖЭБ-позитивных клеток в слизистой оболочке желудка, которое, в свою очередь, зависит от уровня вйутриэритроцитарного магния при всех видах экспериментальных язв.

У стресснеустойчивых крыс при ацетатной язве и стрессовом эрозивно-язвенном дефекте удельное число еМОБ-позитивных клеток в слизистой оболочке желудка коррелирует с площадью язвы и содержанием внутриклеточного магния.

При воздействии стресса в тканях желудка у стрессустойчивых крыс снижается удельное число клеток, экспрессирующих еЫОБ в слизистой оболочке желудка, но возрастает их число в подслизистой основе. У стресснеустойчивых животных под влиянием острого стресса наблюдаются снижение удельного числа еЖ)8-позитивных клеток в слизистой оболочке желудка и тенденция к снижению в подслизистой основе.

При ацетатной язве и ацетатной язве, сформировавшейся после воздействия острого стресса, у стрессустойчивых крыс возрастает удельное число еКОБ-позитивных клеток в слизистой оболочке желудка; при этом в

подслизистой основе их число остается неизменным или сниженным. У стресснеустойчивых животных в этих же экспериментальных сериях удельное число eNOS-позитивных клеток СОЖ остается неизменным либо отмечается тенденция к их снижению и в подслизистой основе - уменьшение числа клеток, позитивных к eNOS до следовых величин.

На фоне применения MCJIK у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс отмечается уменьшение площади язвенного дефекта, сочетающееся с увеличением активности изучаемого фермента в слизистой оболочке желудка в обеих группах животных, а у стрессустойчивых животных - также и в подслизистой основе.

Апробация работы

Материалы работы представлены на IX Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2009); открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Волгоград, 2009, 2010, 2011, 2012); региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2009); региональной научно-практической конференции профессорско-преподавательского коллектива Волгоградского

государственного медицинского университета (Волгоград, 2009); межгородской конференции молодых ученых (Санкт-Петербург, 2010, 2011); научно-практической конференции, посвященной памяти члена-корреспондента РАМН, заслуженного деятеля науки РФ, доктора медицинских наук, профессора В.Б.Писарева (Волгоград, 2010); материалах 7-й Научной сессии Института гастроэнтерологии и клинической фармакологии СПбГМА им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2010); XI съезде хирургов Российской Федерации (Волгоград, 2011); XVIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2011); VI международной Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2011); в материалах Международного СлавяноБалтийского научного форума «Санкт-Петербург - Гастро-2011»и «Санкт-Петербург - Гастро-2012»; в материалах международной медико-практической конференции «Modem vymozenosti Vedy -2013» и «Efektivn

Nástroje Moderních Vcd-2013» (Прага, 2013); XXII съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Волгоград, 2013).

Публикации

По материалам диссертационного исследования опубликовано 24 работы, в том числе 3 в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Внедрение результатов исследования Внедрены результаты научного исследования «Роль эндотелиальной нитроксидсинтазы и магний-кальциевого баланса в формировании экспериментальных язв желудка у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс» в лекционный и практический курсы по дисциплине «Патологическая физиология» кафедры патологической физиологии ГБОУ ВПО Волгоградский ГМУ Минздрава России; в лекционный и практический курсы по дисциплине «Пропедевтика внутренних болезней» кафедры пропедевтики внутренних болезней ГБОУ ВПО Волгоградский ГМУ Минздрава России; в лекционный и практический курсы по дисциплине «Физиология человека» кафедры анатомии и физиологии ФГБОУ ВПО Волгоградская ГАФК.

Структура и объём диссертации Диссертация изложена на 151 страницах машинописного текста, иллюстрирована 23 таблицами и 43 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов, библиографического указателя, включающего в себя 213 источников литературы, в том числе 127 отечественных и 86 зарубежных.

Материалы и методы Работа носила экспериментальный характер. Эксперименты были выполнены на 177 половозрелых белых крысах обоего пола линии Вистар массой 243±11 г. Животные содержались в обычных условиях вивария на стандартной диете. Все эксперименты проводились в утренние часы натощак под нембуталовым наркозом (30-40 мг на 1 кг массы животного) с соблюдением стандартов.

Экспериментальные исследования выполнялись в три этапа по 7 серий в двух группах животных, предварительно разделенных методом «открытого поля» на стрессустойчивых и стресснеустойчивых (Буреш Я. с соавт., 1991; Коплик Е.В., 2002; Hall C.S., 1936). Перед включением животных в

экспериментальные группы проводили рандомизацию животных по исходным показателям с целью формирования репрезентативных выборок.

Таблица 1

Общая характеристика материала исследования по этапам и сериям

Этапы исследования Характеристика серий Количество животных

+ -

Определение морфологических характеристик тканей желудка, удельного числа и интенсивности экспрессии еИОв-позитивных клеток в тканях желудка у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс Исходное состояние 4 4

Контрольная серия 4 4

Ацетатная язва без лечения 4 4

Стрессовая язва 4 4

Ацетатная язва после воздействия острого стресса 4 4

Ацетатная язва с применением МСЛК 4 4

Ацетатная язва после воздействия острого стресса с применением МСЛК 4 4

Определение в эритроцитах и плазме крови в плазме крови из подключичной и портальной вен, лимфе из ОКЛП и суточном объеме мочи Исходное состояние 7 7

Контрольная серия 7 7

Ацетатная язва без лечения 7 7

Стрессовая язва 7 7

Ацетатная язва после воздействия острого стресса 7 7

Ацетатная язва с применением МСЛК 7 7

Ацетатная язва после воздействия острого стресса с применением МСЛК 7 7

Определение Са2+ в плазме крови из подключичной и портальной вен, лимфе из ОКЛП и суточном объеме мочи Исходное состояние 7 7

Контрольная серия 7 7

Ацетатная язва без лечения 7 7

Стрессовая язва 7 7

Ацетатная язва после воздействия острого стресса 7 7

Ацетатная язва с применением МСЛК 7 7

Ацетатная язва после воздействия острого стресса с применением МСЛК 7 7

Примечание: «+» - группа стрессустойчивых крыс; «-» - группа стресснеустойчивых крыс.

На каждом этапе исследования выполнены семь серий экспериментов: в первой серии определяли изучаемые параметры в исходном состоянии; во второй (контрольной серии) выполняли те же манипуляции, что и в опытной (третья серия), но не моделировали язвенное повреждение желудка; в третьей серии моделировали ацетатный язвенный дефект желудка; в четвертой серии моделировали стрессовый эрозивно-язвенный дефект желудка; в пятой серии моделировали острый стресс у животных со смоделированной ацетатной язвой желудка; в шестой серии моделировали

9

ацетатный язвенный дефект желудка с последующем применением МСЛК; в седьмой серии моделировали острый стресс у животных со смоделированной ацетатной язвой желудка и с последующим применением МСЛК.

Первый этап исследования заключался в определении морфологических характеристик тканей желудка, удельного числа eNOS-позитивных клеток в тканях слизистой оболочки желудка, а также уровня магния (Mg2+) в эритроцитах и плазме крови и содержания кальция (Са2+) в плазме крови из подключичной вены (Vs).

На втором этапе исследования проводили определение уровня магния в эритроцитах и плазме крови из подключичной и портальной вен (Vp), лимфе из общего кишечного лимфатического протока (ОКЛП) и суточном объеме мочи в исходном состоянии и через 7 суток с момента моделирования язвы во всех сериях кроме 4-й серии, в которой животных выводили из эксперимента через трое суток от его начала. На третьем этапе исследования проводили определение уровня кальция в плазме крови из подключичной и портальной вен, лимфе из ОКЛП и суточном объеме мочи в исходном состоянии и через 7 суток с момента моделирования язвы во всех сериях, кроме 4-й, в которой животных выводили из эксперимента через трое суток от его начала (табл.1).

Экспериментальную ацетатную язву (ЭАЯ) моделировали по методу S.Okabe (2005) (Okabe S. et al., 2005). Кровь забирали из подключичной и воротной вен, лимфу получали из ОКЛП путем его катетеризации.

Морфологически язвенный дефект оценивали через 7 суток с момента моделирования экспериментальной ацетатной язвы желудка. Исследование экспрессии eNOS было проведено иммуногистохимическим методом по стандартной методике с использованием антител фирмы «Новокастра» Великобритания, Nitric Oxide Synthase-3 (NCL-NOS3, для парафиновых блоков, рабочее разведение 1:60) (Кокосадзе Н.В. с соавт., 2006). В препаратах при использовании окуляра 10 и объектива 5 оценивали удельное число (в %) положительно окрашенных клеток в 5 случайно выбранных полях зрени5£5(Ю клето к). Реакцию окрашивания оценивали как негативную - 0 баллов, слабую - 1 балл, среднюю (умеренную) - 2 балла и выраженную - 3 балла (Коржевский Д.Э., 2005; Полянцев А. А. с соавт., 2011; Pan Jian-wei et al., 2005).

Концентрацию магния в эритроцитах определяли по реакции с титановым жёлтым (Камышников . B.C., 2000). Для определения концентрации магния плазмы, лимфы и мочи использовали набор фирмы «Лахема» (Чехия). Для определения концентрации кальция плазмы крови и лимфы использовали набор фирмы «Ольвекс диагностикум». Для определения концентрации кальция в суточном объеме мочи использовали методику по Альтгаузену (Альгаузен А.Я., 1959).

Для коррекции магниевого баланса применялись суппозитории, содержащие природный полиминерал бишофит; суппозитории вводили per rectum в течение 7 дней в количестве, равном 6,25 мг бишофита (Рогов В.А., 2007).

Для статистической обработки результатов исследования использовали критерий Стьюдента (средние величины выражали, как М±т) и корреляционный анализ Пирсона - при нормальном распределении величин. При распределении, отличном от нормального, использовали критерий Вилкоксона (средние величины выражали как Me [25 и 75 перцентиль]) и корреляцию по Спирмену. Проверку рядов на нормальность распределения проводили методами Колмогорова - Смирнова, Лиллиефорса и Шапиро-Уилки. Нулевые гипотезы отвергались при достигнутом уровне значимости р<0,05 и Q<0,05 соответственно (Лапач С.Н., 2002).

Результаты и обсуждение Известно, что каким бы ни был пусковой фактор, в конечном счете эрозивно-язвенный дефект представляет собой зону язвенно-некротического воспаления (Маев И.В. с соавт., 2010). Анализ результатов исследования показывает, что язвенные дефекты отличались размером, глубиной и клеточным составом.

Сравнительный анализ площади язвы показал, что у стрессустойчивых животных по сравнению со стресснеустойчивыми крысами площадь язвы была меньше во всех экспериментальных сериях (рис.1).

У стрессустойчивых крыс при ЭАЯ желудка число eNOS -позитивных клеток слизистой оболочки желудка достоверно повышалось, но интенсивность экспрессии снижалась по отношению к контрольной серии животных; после воздействия острого стресса число иммунопозитивных клеток, экспрессирующих eNOS, достоверно снизилось в слизистой оболочке

желудка, но интенсивность экспрессии увеличилась от слабо- до умеренно выраженной по отношению к исходному состоянию; у животных со сформировавшейся ацетатной язвой после воздействия острого стресса по отношению к крысам с ЭАЯ желудка были выявлены достоверная сверхэкспрессия и недостоверное увеличение количества еЫОЗ-позитивных клеток в слизистой оболочке (табл. 2).

120,0%

100,0% 80,0% 60,0% 40,0% 20,0% 0,0% -20,0% -40,0% -60,0%

77,4%*

68,7 мм2

75,4%* 15,08 мм2

94,1%*

75,7 мм2

38,72 л

8,6

39 мм

-43,6%

Ацетатная язва

-43,0%

Стрессовая язва

-48,5% Ацетатная язва + острый

стресс

Стресснеустойчивые крысы

□ Стрессустойчивые крысы Рис. 1. Площадь язвы у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс при ЭАЯ. Примечание: * - достоверность различий между показателями Р<0,05.

У стресснеустойчивых животных на фоне ЭАЯ при сравнении с контрольной серией отмечали снижение интенсивности окрашивания еМОУ-позитивных клеток в слизистой оболочке поврежденных тканей ЖКТ и отсутствие иммуногистохимической реакции в подслизистой основе (С)<0,05); на фоне острого стресса уменьшалось число клеток, экспрессирующих еИОЗ в слизистой оболочке желудка, с увеличением интенсивности экспрессии от умеренно позитивной реакции до сверхэкспрессии; острое стрессирование крыс с уже сформировавшейся ацетатной язвой по сравнению с животными с ЭАЯ желудка приводило к увеличению интенсивности иммуногистохимической реакции на фоне некоторого снижения удельного числа еМОБ-позитивных клеток в слизистой оболочке и отсутствию реакции в подслизистой основе (табл. 2).

Такая интенсивность иммуногистохимической реакции на фоне минимального числа клеток, экспрессирующих е1\Ю8, в сочетании с максимально большой площадью язвенного дефекта может быть следствием свободнорадикального повреждения тканей ЖКТ. По литературным данным,

чрезмерная экспрессия eNOS сопровождается неадекватным образованием N0, который становится источником активации свободнорадикального повреждения тканей, что приводит к преобразованию адаптации в повреждение (Чеснокова Н.П. с соавт., 2006; Реутов В.П., 2000; Pacher P.A. et al., 2007).

Эндотелиальная NOS демонстрирует свою активность только в присутствии кальция и кальмодулина. Увеличение продукции NO происходит пропорционально поступлению в цитоплазму кальция либо извне, либо из эндоплазматического ретикулума (Ивашкин В. Т. с соавт., 2011). У стрессустойчивых крыс с ЭАЯ по отношению к контрольной группе содержание Са2+ в кишечной лимфе, оттекающей от поврежденных тканей ЖКТ, было выше на 33,3% (Р<0,05) на фоне снижения его потерь с мочой на 26,5% (Р<0,05). У крыс, подвергавшихся воздействию острого стресса, по отношению к исходным данным было выявлено уменьшение уровня Са2+ плазме крови из Vp - на 10,5% (Р<0,05), в лимфе из ОКЛП - на 29,1% (Р<0,01) и в суточном объеме мочи - на 24,2% (Р<0,05). У животных со сформировавшейся ацетатной язвой под влиянием острого стресса по отношению к животным со стандартным повреждением слизистой оболочки желудка уксусной кислотой выявлено повышение уровня Са2+ на 30,7% в лимфе из ОКЛП (Р<0,001) на фоне снижения его содержания - на 39,8% (Р<0,01) в суточном объеме мочи (табл. 2).

У стресснеустойчивых крыс экспериментальное моделирование ацетатной язвы по отношению к контрольной серии сопровождалось снижением в плазме крови из Vs концентрации Са2+ на 28,6% (Р<0,001) и в Vp на 25% (Р<0,01) на фоне отсутствия статистически значимых изменений в кишечной лимфе и суточном объеме мочи; у животных, подвергавшихся острому стрессу по отношению к показателям в исходном состоянии было выявлено увеличение на 101,9% (Р<0,01) потерь Са2+ с мочой; острое стрессирование крыс со сформировавшейся ЭАЯ приводило к снижению концентрации Са2+ на 30,1% (Р<0,05) в суточном объеме мочи (табл. 2).

Функциональным антагонистом кальция является магний, который известен как вазодилятатор, активатор ферментов-участников энергообразования и энергопотребления, ресинтеза белков, усиления пролиферации и выполнения клеткой заложенной в ней генетической

программы (Громова О.А., 2006; Шилов A.M. с соавт., 2008; Юлиш Е. И., 2008; Каладзе Н.Н. с соавт., 2009). Одним из обязательных условий, необходимых для активации пролиферативных процессов, является вхождение Mg2+ в клетку, которому предшествует формирование ионных каналов TRPM-6/7 (Wang Z. et al., 2006). У стрессустойчивых животных моделирование ЭАЯ сопровождалось снижением уровня Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs и Vp на 31,1% (Р<0,001) и 21,9% (Р<0,05) соответственно. Потеря Mg2+ с мочой уменьшалась на 61,5% (Р<0,001) по отношению к контрольным животным; у крыс, подвергавшихся воздействию острого стресса по отношению к исходным данным, было выявлено увеличение уровня Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs на 49,9% (Р<0,05) и из Vp на 20% (Р>0,1) на фоне незначительного снижения его концентрации в плазме крови из портальной вены на 6,1% (Р<0,01) и моче на 53,3% (Р<0,05); у животных со сформировавшейся ацетатной язвой под влиянием острого стресса по отношению к животным с ЭАЯ выявлено повышение в содержании Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs на 57,3 % (Р<0,001). Магнийурез увеличивался на 18,5% (Р<0,001) (табл.2)

У стресснеустойчивых крыс моделирование ацетатной язвы сопровождалось снижением концентрации Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs на 31,1 % (Р<0,05); у животных, подвергавшихся острому стрессу по отношению к исходному состоянию, было выявлено снижение уровня Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs и Vp на 36,1 % (Р<0,001) и 19,3% (Р<0,05) соответственно на фоне резкого повышения его потерь с мочой на 299,9 % (Р<0,01); острое стрессирование животных со сформировавшейся ацетатной язвой приводило к выраженному увеличению концентрации Mg2+ в эритроцитарной массе крови из Vs и Vp на 42,5 % (Р<0,05) и 24,8 % (Р<0,05) соответственно по отношению к показателям животных с ЭАЯ. При этом потеря Mg2+ с мочой имела тенденцию к увеличению на 20,7 % (табл. 2).

Таблица 2

Удельное число и интенсивность экспрессии eNOS -позитивных клеток (Ме[25 и 75 перцентили]), содержание кальция и магния в биологических средах из разных регионов (М±т) у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс при экспериментальных язвах желудка

Характеристика eNOS Исходное состояние Контроль Ацетатная язва Стрессовая язва

Стрессу стойчивость + - + - + - + -

О м U Ä ИЭ i[i;i] 2[2;2]* 3[3;3]# 3[3;3]# 2[2;2]¥ 1[1;1]*¥ 2[2;2]# 3[3;3]*#

УЧ 65[50;82,5] 17,5[10;25]* 7,5[4;11,25]# 12,5[8,75;15] 22,5[20;27,5]¥ 12,5[10;15]* 30[28,75;31,25]# 5[4,5;5]*#

О С ИЭ 0[0;0,75] 1[0,75;1] 1[1;1] 1[0;2,25] 2[1,5;2] 0[0;0,25] 2[1,5;2,25] 2[1,5;2]

УЧ 0[0;12,5] 10[7,5;10] 5[5;6,25] 5[0;10] 3[1;2] 0[0;1,25] 7,5[3,75;10] 5[3,75;6,25]

Са2 в плазме крови из V,, ммоль/л 1,62*0,036 1,64*0,037 1,62±0,064 2,08±0,086 *** т 1,54*0,071 1,46*0,084 ¥¥¥ 1,55*0,075 1,78*0,093

Са2т в плазме крови из V™ ммоль/л 1,94*0,075 1,93±0,071 1,59*0,115 ### 1,96±0,055 * 1,69*0,079 1,53*0,088 ¥¥ 1,70*0,03 # 1,81*0,068

Са" в лимфе из ОКЛП, ммоль/л 1,27*0,057 0,95*0,084 * 0,56*0,032 ### 0,74*0,040 **# 0,75*0,029 ¥ 0,85*0,034 ♦ 0,91*0,062 ## 0,84*0,089

Са2+ в суточной моче, мкм оль/л 52,06*4,83 16,23*2,73 44,09*3,4 17,71*1,41 *** 32,40*2,1 ¥ 18,59*1,03 *** 39,5*2,9 # 32,7*3,33 ##

М^* в плазме крови из V,, ммоль/л 0,83*0,022 0,88±0,012 * 0,93±0,019 да 0,88*0,012 * 0,91*0,006 0,90*0,019 0,85*0,013 0,88*0,009

в эр. массе крови из V,, ммоль/л 1,42*0,101 1,91*0,074 *** 1,75*0,094 # 2,15*0,184 1,21*0,012 ¥¥¥ 1,48*0,175 * ¥ 2,12*0,268 # 1,22*0,035 №#**

MgI"f в плазме крови из Уп, ммоль/л 0,89*0,006 0,87*0,009 0,92±0,024 0,87*0,010 0,89*0,031 0,84*0,015 0,83*0,015 т 0,85*0,010

Mg2,' в эр. массе крови из V™ ммоль/л 1,56*0,098 1,57*0,098 1,85*0,034 # 2,02*0,139 # 1,45*0,14 ¥ 1,91*0,199 1,87*0,233 1,26*0,055 #*

в лимфе из ОКЛП, ммоль/л 0,93±0,021 0,95*0,018 0,95*0,011 0,96*0,007 0,98*0,005 0,96*0,01 0,92*0,005 0,93*0,010

Мв^ в суточной моче, мкмоль/л 27,00*4,50 8,43*1,998 *** 18,59*0,416 12,81*0,527 ff*** 7,15*0,19 Ш 15,11*2,522** 12,64*2,314 # 33,71*6,136 т*

Примечание: «+».- группа стрессустойчивых крыс; «-»- группа стресснеустойчивых крыс;

- достоверность внутригрупповых различий по отношению к показателям в исходном состоянии - # - О<0,05; # - Р<0,05; ## - Р<0,01; ### - Р<0,001;

- достоверность внутригрупповьк различий по отношению к показателям в контрольной серии - ¥ - <3<0,05; ¥ - Р<0,05; Ш - Р<0,05; ¥¥¥ - Р<0,05;

- достоверность различий по отношению к показателям в предыдущей колонке * - (}<(),05;

- достоверность различий по отношению к показателям в предыдущей колонке * - Р<0,05; * * - Р<0,01; * * * - Р<0,001.

Вышеизложенные данные позволяют сделать заключение, что у стрессустойчивых индивидуумов за счет быстрой мобилизации и перераспределения кальция и магния адаптационного генеза, организм эффективнее приспосабливается к повреждению, но длительный или чрезмерно интенсивный стресс, скорее всего, приведет к истощению этих механизмов и развитию патологии.

В связи с высокой биологической ролью магния в ряде механизмов резистентности слизистых ЖКТ была проведена коррекция экспериментальных язвенных дефектов магнийсодержащей лекарственной композицией.

Установлено что после применения МСЛК в обеих подгруппах животных площадь язвенного дефекта уменьшалась, но в большей степени у стрессустойчивых крыс (рис. 2). При этом у стрессустойчивых животных морфологически выявлялись признаки созревающей грануляционной ткани,, включающей в клеточном компоненте значительное число эозинофилов и лимфоцитов. Как известно, эозинофильно-лимфоцитарная эмиграция в зону воспаления является показателем завершения воспалительной реакции и знаменует собой максимальную активацию пролиферации в воспалительном фокусе (Сологуб Т.В. с соавт., 2008). В то же время у стресснеустойчивых крыс в зоне язвенного дефекта выявлялись признаки пролиферативно-деструктивных процессов: в клеточном компоненте наблюдалось значительное число нейтрофилов.

Применение МСЛК у стрессустойчивых крыс с ЭАЯ желудка сопровождалось достоверным ((5<0,05) увеличением числа еМОБ -позитивных клеток в подслизистой основе желудка по сравнению с животными с ацетатной язвой, не получавших МСЛК. Применение МСЛК в этой лее группе животных с ацетатной язвой желудка, формирующейся на фоне острого стресса по отношению к крысам с ЭАЯ желудка, формирующейся на фоне острого стресса без коррекции МСЛК, сопровождалось одинаковой интенсивностью экспрессии еЖ)8 в СОЖ и подслизистой основе (ПО) и тенденцией к снижению удельного числа клеток, экспрессирующих еИ08 в слизистой оболочке желудка (табл. 3).

120,0096 100,00% 80,00% 60,00% 40,00% 20,00% 0,00% -20,00% -40,00% -60,00%

52,50% 41,18 ММ2

27 мм2

-34,40% Ацетатная язва+МСЛК

103,10%

47,4 мм2

23,34 мм2

-50,80%

Ацетатная язва+острый стресс+МСЛК

□ Стрессустойчивые крысы Стресснеустойчивые крысы

Рис. 2. Площадь язвы у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс при экспериментальных язвах желудка на фоне применения МСЛК. Примечание: достоверность различий между показателями * - Р<0,05.

У стресснеустойчивых животных с ЭАЯ желудка применение МСЛК вызывало достоверное увеличение интенсивности и числа клеток слизистой оболочки желудка, позитивных к ЫО-синтазе. Применение МСЛК в группе стресснеустойчивых животных с ацетатной язвой желудка, формирующейся на фоне острого стресса, по отношению к крысам с ацетатной язвой желудка, сформировавшейся после воздействия острого стресса без применения МСЛК, не сопровождалось достоверными изменениями интенсивности и числа еЫОБ-позитивных клеток в стенке желудка (табл. 3).

Исследование концентрации Са2+ в биологических жидкостях стрессустойчивых крыс с ЭАЯ на фоне введения магнийсодержащей композиции показало, что его содержание в плазме крови из Уб и лимфе из ОКЛП повышалось на 18,8% (Р<0,01) и 85,3% (Р<0,001) соответственно, а в суточной моче снижалось на 19,7% (Р<0,05); применение МСЛК в этой же группе крыс с ЭАЯ, сформировавшейся на фоне острого стресса, сопровождалось увеличением содержания Са2+ в кишечной лимфе на 31,6% (Р<0,001) на фоне тенденции к повышению его концентрации в плазме крови из Уэ и Ур и суточном объеме мочи (табл. 3).

На фоне применения МСЖ у стресснеустойчивых животных с ЭАЯ также отмечали повышение уровня Са2+ в плазме крови из Уэ и Ур на 37,7% (Р<0,001) и 34,6% (Р<0,001) соответственно, а в суточном объеме мочи он снижался на 36,4% (Р<0,01); у крыс с ЭАЯ, сформировавшейся на фоне острого стресса и проводимой коррекции МСЛК, выявлено повышение его концентрации практически во всех биологических жидкостях: в плазме крови из Уб - на 24% (Р<0,05), в плазме крови из Ур - на 28% (Р<0,01), в лимфе из ОКЛП - на 38,6% (Р<0,05) (табл. 3).

Исследование содержания М§2+ в биологических средах стрессустойчивых экспериментальных животных с ЭАЯ на фоне введения МСЛК показало, что его концентрация в плазме крови из Уэ и Ур, кишечной лимфе и суточном объеме мочи снижалась на 11% (Р<0,001), 10,1% (Р<0,05), 10,2% (Р<0,001) и 24,2% (Р<0,001) соответственно. При этом уровень М§2+ в эритроцитарной массе крови из этих же регионов повышался на 52,1% (Р<0,001) и 55,9% (Р<0,001) соответственно; применение МСЖ в этой же группе крыс с ЭАЯ желудка, сформировавшейся на фоне острого стресса по отношению к животным с ацетатной язвой, формирующейся на фоне острого стресса, сопровождалось снижением концентрации Мз2+ в плазме крови из Уб на 13,8% (Р<0,001), Ур - на 5,8% (Р>0,1) и суточной моче - на 15,7% (Р<0,001). Содержание Mg2+ в эритроцитарной массе крови в Уз и Ур увеличивалось на 36,3% (Р<0,01) и 42,9% (Р<0,001) соответственно (табл. 3).

При применении МСЛК у стресснеустойчивых животных с ЭАЯ уровень М§2+ уменьшался в плазме крови из Уб на 6,7% (Р<0,05), в лимфе из ОКЛП - на 8,3% (Р<0,01), в суточной моче - на 46,6% (Р<0,05) на фоне наметившейся тенденции к некоторому приросту его содержания в эритроцитарной массе крови; у животных с ацетатной язвой желудка, сформировавшейся на фоне острого стресса и проводимой коррекции МСЛК было выявлено незначительное снижение уровня магния в плазме крови из Ув и Ур на 5,6% (Р<0,05) и 5,7% (Р<0,05) соответственно, в суточном объеме мочи - на 68,8% (Р<0,001) (табл. 3).

Таблица 3

Удельное число и интенсивность экспрессии eNOS -позитивных клеток (Ме[25 и 75 перцентили]), содержание Са2+ и Mg2+ в биологических средах (М±ш) у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс при экспериментальных язвах желудка на фоне применения МСЛК

Характеристика eNOS Ацетатная язва +МСЛК Ацетатная язва + острый стресс Ацетатная язва +острый стресс +МСЖ

Устойчивость к стрессу + - + - + -

СОЖ ИЭ 3[2,75;3,125] 2,75[2,375;3,125]# 3[3;3]0 3[2,75;3] О 3[2,75;3] 3[3;3]

УЧ 50[42,5;50] 55[45;63,75]# 32,5[12,5;55] 7,5[4;15] 22,5[17,5;26,25] 10[8,75;13,75]

ПО ИЭ 2[1,75;2] 2[1,5;2] 2[2;2] 0[0;0,5] 2[1,5;2,25] 0[0;0]

УЧ 35[25;40]# 45[30;55] 5[5;6,25] 0[0;3,75] 12,5[7,5;15] 0[0;0]

Са2+ в плазме крови из У„ ммоль/л 1,83±0,057## 2,01±0,052### * 1,53*0,071 1,46*0,095 1,71±0,056 1,81*0,078¥

Са2+ в плазме крови из Ур, ммоль/л 1,78±0,065 2,06±0,035Ш ** 1,55*0,087 1,50±0,085 1,69±0,111 1,92*0,057¥¥

Са2* в лимфе из ОКЛП, ммоль/л 1,39±0,062### 1,41±0,079 0,98*0,035000 0,83±0,12 l,29*0,044¥!i¥ 1,15*0,061¥

Са2* в суточной моче, мкмоль/л 26,03*1,6 11,83±1,64##*** 19,5*2,400 13,00*2,000* 24,80*3,33 16,68±3,12

Mg2t в плазме крови из У„ ммоль/л 0,81*0,017### 0,84*0,011# 0,94*0,012 0,90*0,020 0,81±0,007ВД 0,85*0,006¥ **

Мэ2+ в эр. массе крови из V,, ммоль/л 1,84±0,03### 1,60*0,027"* 1,90±0,143000 2,11*0,1680 2,59*0,093¥¥ 2,19*0,09**

Мз2* в плазме крови из Ур, ммоль/л 0,80±0,012# 0,81±0,022 0,87*0,029 0,88*0,020 0,82*0,013 0,83*0,014¥

в эр. массе крови из Ур, ммоль/л 2,26±0,05 т# 2,02*0,094* 1,54±0,035 2,39*0,1310*** 2,20*0,094¥¥¥ 2,22*0,05

Mg2+ в лимфе из ОКЛП, ммоль/л 0,88*0,015 ### 0,88*0,017## 0,86*0,065 0,96*0,019 0,87±0,008 0,90*0,009¥¥ *

Mg2t в суточной моче, мкмоль/л 5,42±0,205Ш 8,07±0,33#*** 8,47*0,1270 00 18,24*1,93*** 7,14*0,13¥¥¥ 5,70*1,00ВД

Примечание:«+»- группа стрессустойчивых крыс;«-» - группа стресснеустойчивых крыс;

- достоверность внутригрупповых различий между ацетатной язвой на фоне лечения МСЛК и ацетатной язвой без коррекции МСЛК #- (}<0,05;

-достоверность внутригрупповых различий между ацетатной язвой на фоне лечения МСЛК и ацетатной язвой без коррекции МСЛК #- Р<0,05; ##- Р<0,01; ###- Р<0,001;

- достоверность внутригрупповых различий между ацетатной язвой, формирующейся после воздействия острого стресса на фоне лечения МСЛК и ацетатной язвой, формирующейся после воздействия острого стресса ¥- Р<0,05; Ш- Р<0,01; Р<0,001;

- достоверность внутригрупповых различий между показателями при ацетатной язве, сформировавшейся на фоне острого стресса, по отношению к показателям при ацетатной язве желудка - О - (2<0,05; О - Р<0,05; 00 - Р<0,05; ООО - Р<0,05.

- достоверность различий по отношению к показателям в предыдущей колонке * - Р<0,05; ** - Р<0,01; **" - Р<0,001.

Все вышеизложенное позволяет сделать заключение о значимой роли эндотелиальной нитроксидсинтазы и баланса макроэлементов в механизмах формирования и репарации экспериментальных эрозивно-язвенных дефектов.

Выводы

1. Одним из ведущих локальных механизмов резистентности тканей желудка при развитии экспериментальных язвенных дефектов является их способность экспрессировать эндотелиальную нитроксидсинтазу. У стрессустойчивых крыс с экспериментальными язвами по отношению к неустойчивым животным в слизистой оболочке и подслизистой основе желудка выявляется большее удельное число еИОв-позитивных клеток, коррелирующее с меньшей площадью язвенного дефекта.

2. У стрессустойчивых крыс при стрессовой язве в слизистой оболочке желудка уменьшается число е>Ю8-позитивных клеток, но увеличивается интенсивность ее экспрессии, в то время как при ацетатной язве возрастает удельное число клеток, позитивных к эндотелиальной нитроксидсинтазе, со сниженной интенсивностью экспрессии изучаемого фермента; одновременно в подслизистой основе при изучаемых моделях язвенного дефекта отмечаются минимальное число и средняя интенсивность экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы.

3. У стресснеустойчивых крыс в слизистой оболочке желудка при стрессовом воздействии уменьшается число клеток, позитивных к эндотелиальной нитроксидсинтазе с максимальным увеличением интенсивности ее экспрессии; при ацетатной язве в слизистой оболочке желудка на фоне неизменного удельного числа еМ08-позитивных клеток интенсивность ее экспрессии снижается до минимума; одновременно в подслизистой основе уменьшаются число и интенсивность экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы, а при ацетатной язве - до следовых величин.

4. При ацетатной язве, формирующейся при воздействии острого стресса, у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс выявляются максимальное увеличение интенсивности экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы в слизистой оболочке поврежденных тканей желудка, возрастание содержания магния в эритроцитарной массе крови и суточном объеме мочи на фоне уменьшения в ней концентрации кальция. У стрессустойчивых крыс увеличивается также содержание кальция в лимфе из общего кишечного

лимфатического протока, сочетающееся с меньшей площадью язвенного дефекта.

5. У стресснеустойчивых крыс с ацетатной и стрессовой язвами и у стрессустойчивых животных с ацетатной язвой желудка снижается уровень магния в эритроцитарной массе крови; одновременно в моче у стрессустойчивых крыс снижается интенсивность магнийуреза и кальцийуреза, а у стресснеустойчивых - увеличиваются потери как магния, так и кальция; при этом меньшая площадь язвы ассоциирует со значительным снижением магнийурии.

6. Под влиянием магнийсодержащей лекарственной композиции у животных с экспериментальными язвенными дефектами уменьшается площадь язвы, в слизистой оболочке желудка у стресснеустойчивых крыс с ацетатной язвой увеличиваются число еЫОЗ-позитивных клеток и интенсивность ее экспрессии; у стрессустойчивых животных значимо увеличивается удельное число клеток, позитивных к эндотелиальной нитроксидсинтазе в подслизистой основе с некоторым увеличением данного показателя в слизистой оболочке желудка.

7. Применение магнийсодержащей лекарственной композиции вызывает у стрессустойчивых крыс увеличение внутриэритроцитарного магния на фоне снижения магнийуреза в сочетании с повышенным содержанием кальция в плазме крови, в лимфе и уменьшение его уровня в суточном объеме мочи. У стресснеустойчивых животных содержание магния в плазме крови, кишечной лимфе и моче снижается на фоне повышения содержания кальция в плазме крови.

Практические рекомендации

1. С целью выявления группы риска по изъязвлению тканей ЖКТ на фоне стресса рекомендуется разделение экспериментальных животных на стрессустойчивых и стресснеустойчивых методом «открытого поля».

2. Для оптимизирования условий пролиферации эрозивно-язвенного дефекта целесообразно использовать магнийсодержащую лекарственную композицию на основе природного полиминерала «бишофит» в виде суппозиториев.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. М§2+-Са2+ баланс в тканях желудка крыс при экспериментальной стрессовой и ацетатной язве // Фундаментальные исследования в биологии и медицине. Выпуск 5. Ставрополь, 2008. С. 43-47.

2. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Содержание М§2+и Са2+ в изъязвленных тканях желудка у крыс при стрессовой и ацетатной язве // Вестник Российской военно-мединской академии: Сб. трудов IX Всерос. науч.-практич. конф. «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении». Приложение (часть II). 1(25). СПб., 2009. С.530-531.

3. Поветкина В.Н. Содержание Mg2+ в крови портальной вены и лимфе кишечного протока у стрессустойчивых крыс со сформировавшейся ацетатной язвой // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Сб. трудов 67-й науч.-практич. конф. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2009. С. 12.

4. Поветкина В.Н. Влияние острого стресса на содержание М§2+ и Са2+ в биологических жидкостях при формировании ацетатной язвы у стрессустойчивых крыс // XIV региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области: Сб. трудов науч.-практич. конф. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2009. С. 34-37.

5. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Содержание М§2+ в биологических жидкостях и эритроцитарной массе у стресснеустойчивых крыс с ацетатной язвой желудка, сформировавшейся на фоне острого стресса // Инновационные достижения фундаментальных и прикладных медицинских исследований в развитии здравоохранения Волгоградской области: Сб. трудов 56-й науч.-практич. конф. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2009. С. 69-72.

6. Поветкина В.Н. Содержание макроэлементов в биологических жидкостях и эритроцитарной массе у стресснеустойчивых крыс с экспериментальной язвой желудка, сформировавшейся при воздействии острого стресса // Актуальные проблемы патофизиологии: Сб. трудов XVI науч.-практич. конф. СПб.: Изд-во СПбГМУ, 2010. С. 144-145.

7. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Содержание Mg и Са2+ в крови и лимфе у стресснеустойчивых крыс с ацетатной язвой желудка, сформировавшейся на фоне острого стресса // Актуальные проблемы экспериментальной и

клинической медицины: Сб. трудов науч.-практич. конф. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2010. С. 83-87.

8. Поветкина В.Н. Содержание магния в эритроцитарной массе крови из подключичной вены у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс с экспериментальной ацетатной язвой желудка // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Сб. трудов 68-й науч.-практич. конф. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2010. С. 12-13.

9. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н., Шестернина Н.В. Сравнительное исследование содержания внутриэритроцитарного магния в крови из подключичной вены у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс с экспериментальной ацетатной язвой желудка // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга: Мат. 7-й науч. сессии Института гастроэнтерологии и клинической фармакологии СПбГМА им. И.И.Мечникова. СПб.: Изд-во ООО «Аванетик», 2010. № 4. С.М30.

10. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Уровень магния в биологических жидкостях на фоне применения магнийсодержащей композиции у стресснеустойчивых крыс с экспериментальной язвой желудка // Человек и лекарство: Мат. XVIII Российского национального конгресса. М., 2011. С. 470-471.

11. Поветкина В.Н. Влияние магнийсодержащей композиции на язвообразование и магниевый баланс у стрессустойчивых крыс с экспериментальной ацетатной язвой желудка // Вестник Российского государственного медицинского университета: Мат. VI Межд. (XV Всерос.) Пироговской науч. мед. конф. студ. и молодых ученых. Специальный выпуск № 1.М., 2011. С. 296.

12. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Влияние магниуреза на формирование язвенного дефекта у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс в эксперименте // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга: Мат. 13-го Межд. Славяно-Балтийского науч. форума «Санкт-Петербург - Гастро-2011», 2011. № 2-3. С.М75.

13. Поветкина В.Н. Влияние магния на формирование стрессовой язвы желудка у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс // Актуальные проблемы патофизиологии: Сб. трудов науч.-практич. конф. СПб.: Изд-во СПбГМУ, 2011. С. 129-130.

14. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Особенности магниевого баланса у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс и его роль в механизмах формирования ацетатной и стрессовой язвы желудка // Вестник новых медицинских технологий. Тула, 2011. № 2. С. 83-85.

15. Поветкина В.Н. Магниурез при ацетатной экспериментальной язве желудка на фоне лечения магнийсодержащей композицией у стресснеустойчивых крыс // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Сб. трудов 69-й науч.-практич. конф. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2011. С. 6-7.

16. Шестернина Н.В., Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Интенсивность пероксидации и площадь язвенного дефекта до и после применения магнийсодержащей композиции у крыс с ацетатной язвой // Мат. XI съезда хирургов Российской Федерации. Волгоград, 2011. С.405-406.

17. Шестернина Н.В., Рогова Л.Н., Поветкина В.Н. Взаимосвязь интенсивности пероксидации и антиоксидантной защиты в изъязвленных тканях желудка, в крови и лимфе, оттекающих от поврежденных тканей пищеварительного тракта, при экспериментальной ацетатной язве // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга: Мат. 7-й науч. сессии Института гастроэнтерологии и клинической фармакологии СПбГМА им. И.И. Мечникова. СПб.: Издательство ООО «Аванетик», 2010. № 4. С.М50.

18. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Уровень кальция в биологических жидкостях у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс при ацетатной язве желудка // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга: Мат. 14-го межд. Славяно-Балтийского науч. форума «Санкт-Петербург - Гастро-2012», 2012. № 2-3. С.М73-74.

19. Сергеева В. М., Поветкина В.Н. Уровень кальция в плазме крови из разных регионов и суточном объеме мочи при экспериментальной язве желудка у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс П Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Сб. трудов 70-й науч.-практич. конф. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2012. С. 27.

20. Поветкина В.Н., Рогова Л.Н. Са2+ баланс и его роль в формировании экспериментальных язв желудка у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс // Вестник новых медицинских технологий. Тула, 2012. № 2. С. 361-364.

21. Поветкина В.Н., Рогова JI.H. Удельное число клеток и интенсивность экспрессии эндотелиальной нитроксидсинтазы в тканях желудка в зоне изъязвления и уровень внутриэритроцитарного магния у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. 2013. № 1(45). С. 61-64.

22. Рогова Л.Н., Поветкина В.Н., Панкова Г.В. Уровень магния в биологических средах у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс с ацетатной язвой желудка // Modennvymozenosti Vedy -2013: Сб. трудов IX науч.-практич. конф. Praha: Publishing House «Education and Science» s.r.o., 2013. С. 27-30.

23. Рогова Л.Н., Поветкина В.Н., Шепелева Т.И. Содержание магния в биологических средах у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс со стрессовой язвой желудка // Efektivni Nästroje Modernich Vcd-2013: Сб. трудов EX науч.-практич. конф. Praha: Publishing House «Education and Science» s.r.o., 2013. C. 36-38.

24. Особенности экспрессии eNOS-синтазы а тканях желудка при остром стрессе у стрессустойчивых и стресснеустойчивых крыс / Рогова Л.Н., Поветкина В.Н., Фастова И.А. [и др.] // Мат. XXII съезда Физиологического общества имени И. П. Павлова. Волгоград: Изд-во ВолгГМУ, 2013. С. 445446.

Список принятых сокращений

eNOS - эндотелиальная нитроксидсинтаза

Mg2+ - ионы магния

Vp - портальная вена

Vs - подключичная вена

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ИЭ - интенсивность экспрессии eNOS

МСЛК - магнийсодержащая лекарственная композиция

ОКЛП - общий кишечный лимфатический проток

ПО - подслизистая основа

Са2+ - ионы кальция

СОЖ - слизистая оболочка желудка

УЧ - удельное число клеток eNOS-позитивных клеток

ЭАЯ - экспериментальная ацетатная язва

Подписано в печать 12.11.2013 Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Roman. Печать RISO. Объем 1 печ. л. Тираж 100 экз. Заказ 84.

Отпечатано с готового оригинал-макета

Типография ООО «СП-Принт» 410004, г.Саратов, ул.Астраханская, 43 Тел.: (8452) 52-08-62