Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Аутоиммунный компонент при краевых патологиях ЦНС(вилюйском энцефаломиелите и наследственной мозжечковой атаксии) у коренных жителей Якутии

На правах рукописи

РГБ ОД

ШАТУНОВ АЛЕКСЕЙ ЮРЬЕВИЧ О» 17'

АУТОИММУННЫЙ КОМПОНЕНТ ПРИ КРАЕВЫХ ПАТОЛОГИЯХ ЦНС (ВИЛЮЙСКОМ ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТЕ И НАСЛЕДСТВЕННОЙ МОЗЖЕЧКОВОЙ АТАКСИИ) У КОРЕННЫХ ЖИТЕЛЕЙ ЯКУТИИ

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Иркутск -1999

Диссертация выполнена в Институте здоровья Академии наук Республики Саха (Якутия).

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор А.И. Аутеншлюс;

доктор медицинских наук, профессор В.П. Алексеев

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Л.И. Корытов; доктор медицинских наук, ст.н.с. Г.М. Бодиенкова

Ведущее учреждение:

НИИ ПСИХИЧЕСКОГО ЗДОРОВЬЯ ТОМСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА СО РАМН г.Томск

Защита диссертации состоится "24" декабря 1999 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д.001.41.01 при ГУ "ВосточноСибирский научный центр Сибирского отделения РАМН" (664003, г.Иркутск, ул. Тимирязева, 16)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГУ "Восточно-Сибирский научный центр Сибирского отделения РАМН" (664003, г.Иркутск, ул. Тимирязева, 16)

Автореферат разослан "_"_1999 г.

'Р £ Х.1 0 , П

I ^ / • с/ ' ^ ^

г с

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Шолохов Л.Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В республике Саха (Якутия) среди прочих патологий центральной нервной системы существуют две краевые патологии, причина которых длительное время не была установлена. Эти заболевания известны под названием вилюйский энцефаломиелит (ВЭ) ("бохоорор" - по-якутски) и мозжечковая атаксия Пьера-Мари (НМА). И если последняя была идентифицирована в работах Л.Г.Гольдфарба с соавторами (Со№агЬ 1~С. е1 а1., 1995, Со№агЬ 1_.С. е1 а1., 1996) как наследственная спиноцеребеллярная атаксия I типа, то этиология ВЭ до сих пор остается загадкой среди нейродегенеративных заболеваний. Неблагоприятный исход заболевания, тенденция к расширению ареала его распространения и омоложению контингента подчеркивают актуальность данной проблемы, необходимость дальнейшего ее изучения с использованием современных методов (Бочаров Е.Ф. и др. 1990, А1ехееу \/.Р. е{ а1., 1993). ВЭ до настоящего времени относят по ряду клинических признаков к медленным вирусным инфекциям центральной нервной системы (Катала Ф., 1973, Петров П.А., 1987, Са]йи5ек О.С., 1996). Однако ни одна из гипотез, предполагающих инфекционный генез этой патологии, не подтвердилась, несмотря на значительное количество работ, посвященных поиску вирусно-бактериальных агентов, вызывающих данное заболевание. В тоже время, есть ряд немногочисленных исследований (Зубри Г.Л., Уманский К.Г., 1977), авторы которых считают ВЭ нейродегенеративным заболеванием с наследственной предрасположенностью и предполагают возможность развития аутоиммунной патологии. Вместе с тем, сведений, подтверждающих развитие аутоиммунных реакций при ВЭ очень мало. Имеется лишь несколько работ Р.С.Тазловой, в которых автор обнаружила антитела к мозговому экстракту в спинномозговой жидкости у больных ВЭ (Тазлова Р.С., 1982). Работы по изучению иммунных реакций к белкам мозга при наследственной мозжечковой атаксии в Якутии вообще не проводились.

Цель работы. Целью настоящей работы явилось изучение показателей аутоиммунного компонента у больных с ВЭ и НМА.

Задачи исследования:

1. Изучить уровень антител к нативной и денатурированной ДНК в крови больных с ВЭ, НМА и у здоровых лиц;

2. Изучить уровень антител к мозгоспецифическим белкам в крови больных с ВЭ, НМА и у здоровых лиц;

3. Определить содержание мозгоспецифическмх белков и их фрагментов в крови больных с ВЭ, НМА и у здоровых лиц;

4. Определить величину корреляции между уровнями мозгоспецифических белков в крови и уровнями антител к

1

мозгоспецифическим белкам у больных с ВЭ, НМА;

5. Определить величину корреляции между уровнями мозгоспецифических антигенов и уровнями антител к мозгоспецифическим белкам и продолжительностью болезни у больных с ВЭ, НМА;

6. Определить величину корреляции между уровнями мозговых антигенов в крови пациентов и некоторыми функциональными особенностями болезни у больных ВЭ и НМА;

7. Определить диагностические критерии показателей гуморального иммунного ответа у больных ВЭ и НМА.

Научная новизна.

1. Впервые дана оценка аутоиммунного компонента у больных ВЭ и НМА.

2. Установлено, что у больных ВЭ и НМА встречаемость повышенных уровней АТ к ДНК в два раза чаще, чем у здоровых лиц, причем если для больных НМА этот показатель связан с основной патологией, то у больных ВЭ АТ к ДНК чаще выявлялись при развитии сопутствующего соматического заболевания.

3. Впервые проведено определение мозгоспецифических белков и их фрагментов в крови больных ВЭ и НМА, что позволило установить деструктивный характер обеих патологий и показать развитие гуморального звена аутоиммунного компонента (учитывая, что мозг не является иммунологически толерантным), что подтверждается повышенными уровнями АТ кэнцефалитогенному белку.

4. Впервые показана значительная гетерогенность по уровням мозгоспецифических белков и их фрагментов у больных ВЭ по сравнению с больными НМА. Кластерный анализ позволил выделить внутри группы больных ВЭ две подгруппы: первая характеризуется высоким уровнем мозгоспецифических белков и их фрагментов (определенным по всем шести МАТ) и высоким уровнем АТ к МСБ, низким уровнем АТ к ДНК и коротким периодом болезни; вторая -низким уровнем мозгоспецифических антигенов, но высоким уровнем АТ к МСБ и ДНК и более длительным периодом заболевания.

5. Изучена зависимость изменения уровней мозгоспецифических белков и антител к МСБ и ДНК у больных НМА от показателей неврологического статуса, что позволило выделить ряд особенностей в течении патологического процесса при данном заболевании.

6; Установлено, что при ВЭ более высокая встречаемость повышенных уровней АТ к ДНК связана с торпидным течением процесса (2 кластер) и с сопутствующими заболеваниями, а при НМА -характерна основному заболеванию.

Практическая значимость работы. Выявленные на основе изучения показателей аутоиммунного компонента критерии остроты течения нейропатологического процесса позволяют дать оценку развития деструктивных процессов в ЦНС при ВЭ и НМА, и определить находится ли болезнь в стадии обострения (сочетание повышенных уровней АТ и мозгоспецифических антигенов), или заболевание находится в торпидной стадии, без обострений (низкие уровни мозгоспецифических белков при повышенных уровнях АТ к энцефалитогенному белку). Это в свою очередь может определять соответствующую терапию в каждом конкретном случае.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Повышенные уровни АТ к ДНК у больных ВЭ и НМА выявляляются в два раза чаще, чем у здоровых лиц. Для больных ВЭ этот показатель возрастает при наличии сопутствующей соматической патологии и торпидного течения основного заболевания.

2. Наличие мозгоспецифических белков в крови больных ВЭ и НМА позволяет установить деструктивный характер этих патологий и показать развитие гуморального звена аутоиммунного компонента, что подтверждается повышенными уровнями АТ к энцефалитогенному белку.

3. У больных ВЭ выявлена значительная гетерогенность по уровням мозгоспецифических белков и их фрагментов. В результате проведения кластерного анализа в группе больных ВЭ выделено две подгруппы: для первой характерны высокие уровни мозгоспецифических белков в сочетании с высоким уровнем АТ к МСБ, низкие уровни АТ к ДНК и короткий период болезни; для второй - низкие уровни мозгоспецифических белков в комплексе с высоким уровнем АТ к МСБ и ДНК, продолжительным периодом болезни и сопутствующей соматической патологией.

4. Установлена положительная связь в группе больных НМА между некоторыми неврологическими показателями и повышением уровней мозгоспецифических АГ (кроме 2Р-С9 к белку БЮО и 5Р5-В6 к белку синаптосом), а также между неврологическими показателями и повышением антител к МСБ и ДНК. Это подтверждает множественный регрессионный анализ, проведенный для данной группы пациентов.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

1. Семинарах НПЦ "Вилюйский энцефаломиелит" в 1993-1995 г.г.

2. Расширенном Ученом совете Института здоровья в 1996 г.

3. Первой Международной научно-практической конференции "Вилюйский энцефаломиелит", 3-4 октября 1996 г. в г. Якутске.

з

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация содержит 122 листа машинописного текста, 12 таблиц и 16 рисунков. Библиография включает 123 источника, из них 75 отечественных и 48 зарубежных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследована сыворотка крови, полученная от 118 лиц якутской национальности, проживающих, преимущественно, в сельских районах.

Больных с различными формами ВЭ было 57 человек; из них со спастико-паретической формой (СПФ) - 30, дементно-паретической формой (ДПФ) - 27. Средний возраст - 52.8 ± 1.6 года. Возраст пациентов к началу развития болезни в среднем составил 32.1 ± 1.4 года. Средняя продолжительность заболевания равнялась 20.9 ± 1.7 года.

Больных НМА обследовано 47 человек. Средний возраст - 42.2 ± 1.7 года. Возраст пациентов к началу проявления клинических признаков составил в среднем 35.8 ± 1.62 года. Средняя продолжительность заболевания - 6.8 ± 0.7 года.

В контрольную группу вошли 14 человек коренной национальности, проживающих в районах распространения данных патологий ЦНС, но не имеющих нейросимптоматики и острых соматических заболеваний на момент обследования.

В сыворотках крови пациентов методом иммуноферментного анализа определяли наличие AT к энцефалитогенному белку (МСБ), нативной и денатурированной ДНК, а также выявляли с помощью моноклональных AT присутствие специфических АГ нервной ткани (АГ энцефалитогенного белка - моноклоны 3G9-D6 и 3F9-E10; АГ белка S100 - моноклоны 2F9-C11 и 5F11-D9; АГ синаптосом - моноклон 5F5-В6, АГ гиппокампа и клеток Пуркинье мозжечка - моноклон 3G7-F8/C11). Энцефалитогенный белок был получен методом водно-солевой экстракции (Caspary Е.А., Field E.J., 1965); AT к ДНК определяли стандартными наборами ("Сибмедприбор", г. Новосибирск); моноклональные AT были получены методом гибридомной технологии (Spitz М. etat., 1988).

Результаты ИФА учитывали фотометрически, используя коэффициент K=D0/D|!, где D0 - величина оптической плотности продукта реакции опытной сыворотки, Dk - величина оптической плотности продукта реакции контрольной серонегативной сыворотки.

Иммуноположительными считали результаты, если коэффициент (К) был не менее 1.20 при определении уровней мозгоспецифических АГ, а также AT к ДНК, и не менее 1.10 при определении уровней AT к

энцефалитогенному белку.

Математическую обработку данных проводили в программе ЭТАНЭЛСА 5.1, используя методы описательной статистики, корреляционного, регрессионного, кластерного и дискриминантного анализов. В качестве критериев сравнения использовали критерии Стьюдента, Фишера, Манна-Уитни, Уилкоксона.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

Частота выявления повышенных уровней АТ у здоровых лиц к нативной ДНК составила 26.6%, к денатурированной ДНК - 33.3% и к МСБ - 33.3%. Для больных ВЭ этот показатель составил соответственно - 47.4%, 47.4% и 64.2%, а для больных НМА получены следующие значения - 46.7% для АТ к ДНК-н, 43.8% для АТ к ДНК-д и 63.0% для АТ к МСБ.

Статистические данные результатов ИФА с указанными. АГ в целом для каждой группы отображены в таблице 1. Значимые различия обнаружены между средними значениями уровней АТ к МСБ в контрольной группе обследованных и соответствующими показателями в группах больных ВЭ и НМА (р = 0.002 и р = 0.003, соответственно). При сравнении усредненных показателей уровней АТ к ДНК-н и ДНК-д между контрольной группой и больными статистически значимых различий не обнаружено (для больных ВЭ р = 0.157 и 0.151; для больных НМА - 0.729 и 0.096, соответственно).

Частота встречаемости повышенных уровней мозгоспецифических АГ в крови здоровых лиц составила: для 2Р9-С9 (белок ЭЮО) - 20% , для 5Р11-09 (белок БЮО) - 7.1%, для Зв7-Р8/С11 (белок гиппокампа) -14.2%, для ЗС9-06 (энцефалитогенный белок) - 8.3%, для ЗР9-Е10 (энцефалитогенный белок) - 21.4%, для 5Р5-В6 (синаптонемальный белок) - 14.3%.

Для больных ВЭ этот показатель составил: для 2Р9-С9 (белок ЭКЮ) - 35.3% , для бЯИ-РЭ (белок БЮО) - 28.3%, для 307-Р8/С11 (белок гиппокампа) - 44.2%, для 309-06 (энцефалитогенный белок) - 26.3%, для ЗР9-Е10 (энцефалитогенный белок) - 26.3%, для 5Р5-В6 (синаптонемальный белок) - 19.3%.

Для больных НМА получены следующие значения: 74.3% для 2Р9-С9 (белок 3100), 77.7% для 5Р11-09 (белок 3100), 72.2% для 307-Р8/С11(белок гиппокампа), 57.4% для 309-05 (энцефалитогенный белок), 73.9% для ЗР9-Е10 (энцефалитогенный белок), 50.0% для 5Р5-В6 (синаптонемальный белок) - 19.3%.

Таблица 1

Результаты статистического анализа уровней АТ (Кдт), полученных в ИФА с использованными антигенами.

Гр. Антиген Среднее значение (Кат), М Ошибка средней, ±ш Мин. Макс. Асимметр. Эксцесс

Больн. ВЭ ДНК-н 1.32 0.05 0.78 2.44 1.19 1.20

ДНК-д 1.22 0.04 0.73 2.59 1.70 4.53

МСБ 1.29 0.05 0.78 2.93 1.93 5.80

Больн. НМА ДНК-н 1.22 0.04 0.78 2.46 1.58 3.35

ДНК-д 1.31 0.07 0.70 2.81 1.57 2.62

МСБ 1.51 0.10 0.89 3.99 1.94 4.32

Контр. ДНК-н 1.14 0.05 0.90 1.52 0.68 0.24

ДНК-д 1.09 0.05 0.79 1.34 -0.39 -0.79

МСБ 1.04 0.04 0.67 1.25 -0.78 1.54

Средние значения КАГ, определенные в ИФА с указанными МАТ, отображены в таблице 2. Статистически значимые различия не обнаружены между средними значениями К, полученными в контрольной группе и в группе больных ВЭ (р>0.05). В тоже время, между средними значениями К в контроле и средними значениями К в группе больных НМА разница была статистически значимой (р<0.01) по всем изучаемым моноклонам.

Проведено сравнение средних показателей ИФА среди больных ВЭ, сгруппированных по проявлению основного клинического синдрома (т.е. СПФ и ДПФ) (таблица 3). Достоверных отличий между группами не выявлено ни по одному из изучаемых показателей.

Таблица 2

Результаты статистического анализа значений Кап полученных в ИФА с использованными моноклонами.

Гр. МАТ Среднее значение <К*г), М Ошибка средней, ±т Мин. Макс. Асимметр. Эксцесс

Больные ВЭ 2Р9-С9 1.20 0.04 0.98 2.77 4.07 19.59

5Р11-09 1.16 0.03 0.90 2.56 4.47 26.62

307-Р8.. 1.23 0.06 0.61 2.82 1.77 4.05

ЗвЭ-Рб 1.15 0.05 0.58 2.63 2.00 6.43

ЗР9-Е10 1.10 0.04 0.52 2.25 1.26 3.56

5Р5-В6 1.11 0.03 0.70 2.06 1.85 4.13

Больные НМД 2Р9-С9 1.60 ] 0.09 0.96 3.71 1.86 5.34

5Р11-09 1.53 | 0.07 0.91 2.72 0.84 0.45

307-Р8.. 1.40 I 0.07 0.89 3.06 2.06 6.30

309-06 1.39 0.06 0.72 2.65 1.17 1.17

ЗР9-Е10 1.40 0.06 0.72 2.31 0.67 0.27

5Р5-В6 1.46 0.09 0.74 3.59 1.59 2.55

Контроль 2Р9-С9 1.12 0.03 0.91 1.37 0.00 0.89

5Р11-09 1.06 0.03 0.80 1.28 -0.53 " 1.65

ЗС7-Р8.. 1.01 0.06 0.59 1.25 -0.76 -0.85

ЗйЭ-Об 1.05 0.02 0.85 1.21 -0.17 0.31

ЗР9-Е10 1.08 0.04 0.91 1.40 0.97 0.27

5Р5-В6 1.10 0.02 0.98 1.20 -0.21 -0.94

Таблица 3

Средние значения изучаемых параметров для двух групп больных ВЭ, полученных в результате деления по преобладающему клиническому синдрому.

Изучаемые показатели Среднее значение параметра, М ± т Величина различий м-у группами р, (по Манна-Уитни)

СПФ ДПФ

Возраст пациентов 52.5 ±13.9 53.9 + 10.2 0.716

Возраст в начале заболевания 32.0 ±11.7 31.8 ± 9.6 0.844

Продолж. болезни 21.7 ±13.3 22.0 ± 9.3 0.672

2Р9-С9 1.24 ±0.35 1.17 ±0.23 0.139

5Р11-09 1.15 ±0.14 1.17 ±0.30 0.661

ЗС7-РВ/С11 1.29 ±0.47 1.19 ± 0.42 0.297

309-06 1.13 ±0.32 1.18 ±0.38 0.876

ЗР9-Е10 1.13 ±0.32 1.06 ±0.28 0.065

5Р5-В6 1.11 ±0.25 1.11 ±0.29 0.609

ДНК-н 1.29 ±0.35 1.34 ±0.39 0.702

ДНК-д 1.18 ±0.24 1.27 ±0.42 0.763

МСБ 1.35 ±0.45 1.23 ±0.32 0.369

На данном этапе исследований в группе пациентов, больных ВЭ, проведен кластерный анализ с целью выделения групп с характерными показателями ИФА. Разбивка на группы выполнена методом к-средних.

Кластерный анализ проводили по всем изучаемым показателям иммуноферментного анализа (уровни антител к ДНК и МСБ и уровни мозговых антигенов). Наиболее оптимальное количество кластеров для данной группы пациентов равняется двум. Графическое изображение результата разбивки выборки на кластеры представлено на рисунке 1. Количество пациентов в первом кластере - 16 человек, во втором - 41.

5Г5-В6Ч

'МСБ

ДНК-н

ДНК-д

Рис.1 Графическое отображение результата разбивки выборки больных ВЭ на кластеры.

В ходе анализа обнаружено, что больные, сгруппированные таким образом, имеют различный возраст и продолжительность заболевания (р<0.05). Возраст и продолжительность заболевания пациентов первой группы составили 47.0 и 15.6 года, соответственно; для лиц второй группы - 54.9 и 23.3 года, соответственно. Возраст начала проявления

клинических признаков для больных обеих групп был примерно одинаков (для первой группы 31.0 год, для второй - 32.5).

Необходимо отметить, что для кластера 1 характерна высокая степень выявления повышенных значений Км-. отражающих концентрацию мозговых антигенов в крови больных (от 50.0 до 81.3%) при низкой частоте КАТ, отражающей повышенные уровни АТ к ДНК (012.5%) и высокой частоте выявления повышенных уровней АТ к МСБ (50.0%). Для кластера 2 наблюдается противоположная картина: высокая частота выявления повышенных концентраций АТ как к ДНК, так и к МСБ (57.5-68.3%) при достаточно низкой частоте обнаружения повышенных уровней мозговых АГ, выявляемых указанными выше моноклонами (7.3-25.0%). Средние значения (К) результатов ИФА для каждого кластера представлены в таблице 4.

Таблица 4

Средние значения К для двух групп больных ВЭ, полученных в результате кластерного анализа.

ИФА тест ЗНАЧЕНИЕ (К), М ± гл Величина различий м-у кластерами р, (по Маниа-Уитни)

КЛАСТЕР 1 КЛАСТЕР 2

2Я9-С9 1.28±0.17* 1.17+0.03 0.2496

5Р11-й9 1.30±0.12* 1.09+0.01 0.0005

ЗС7-Р8/С11 1.61 ±0.27* 1.08±0.04 0.0000

339-06 1.29±0.18* 1.09Ю.09 0.0345

ЗЯ9-Е10 1.37Ю.12* 0.9910.03 0.0000

5Р5-В6 1.3510.11* 1.0240.03 0.0000

ДНК-н 1.04±0.02 1.4210.14* 0.0000

ДНК-д 1.02±0.02 1.30±0.12* 0.0071

МСБ 1.15±0.04 1.3410.17* 0.0897

Примечание:

(*) - отмечены результаты, достоверно отличающиеся (р<0.05, р<0.01) от соответствующих показателей в контрольной группе по 11-критерию Уилкоксоиа (Манна-Уитни).

Внутри каждого кластера изучали изменения концентрации мозгоспецифических белков и уровней АТ к МСБ в крови в зависимости от продолжительности заболевания (рис. 2-5).

Рис.2 Изменение уровня мозговых АГ в крови больных ВЭ в зависимости от продолжительности болезни (кластер 1).

Рис.3 Изменение уровней мозговых АГ в сыворотке

крови больных ВЭ в зависимости от продолжительности болезни

(кластер 2).

п

í

i --------- ------------

-...........- 1

о \ О .....

-------- о <

° ! о ^ 1

1 о 1

1 о О

15 25

ПР. КУ\ЕЗНИ (лат)

Рнс.4 Изменение уровня AT к МСБвхрови больных

ВЭI зависимости от продолжительности болезни (кластер 1).

О

О о о о о Т о ; О

О о а.

< > о О о ......

80 Ô

2.6

g 2.2 «в

S

« 1.8 <

1.4

15 2S

ПР. БОЛЕЗНИ (лет)

Рис.5 Ни шшииоконцантроиж AT к MCS в крови больных БЭ в эсяисимосм от промлиитяльноспч болезни [клостер 21.

5

Для группы больных НМА также проведен регрессионный анализ значений К, с целью выяснения характера изменений концентрации мозгоспецифических белков и антител к МСБ в крови пациентов в зависимости от продолжительности заболевания (рис. 6, 7).

Удачно разработанная карта неврологического осмотра для больных НМА (Гольдфарб Л. Г., 1995, Платонов Ф.А., 1996), предоставляющая возможность компьютерной обработки данных, позволила провести исследования по выявлению взаимосвязи между уровнями антител к мозгоспецифическим белкам и ДНК, а также уровнями мозговых антигенов в крови больных, выявленных в иммуноферментном анализе и результатами неврологического осмотра.

Результаты множественного регрессионного анализа по вышеперечисленным параметрам представлены в таблице 5. В качестве изучаемых показателей неврологического статуса были взяты следующие:

- атаксия (АТК)

- черепные нервы (ЧН)

- периферическая НС (ПНС)

- мышечная сила (МС)

- походка (П)

- тандемная походка (ТП)

- проба Ромберга (РМБ)

- папьце-носовая проба (ПНП)

- коленно-пяточная проба (КПП)

- адиадохокинез (АК)

- телеграф (пальце-пальцевая проба) (ТЛГ)

- постуральный тремор (ПТ).

Для моноклонов, коэффициенты множественной корреляции которых были значимы, построены уравнения, описывающие зависимость изменения концентрации в крови белков, ими определяемых, от соответствующих показателей неврологического статуса:

1. 5Я11-09 = 0.67-0.1 ЗЧН +0.40ПНП +0.81ТП -0.36П -0.43РМБ

2. ЗС7-Р8/С11 = 1.30 +0.04ПНС -0.15ЧН +0.10АТК -0.54П -0.49ПНП

3. 309-06 = 0.73 +0.16ПТР -0.90КПП +0.71 ПНП -0.09МС

4. ЗР9-Е10 = 0.48 +0.40РМБ -0.17МС +0.08ПЕР +0.06ЧН

Рис.6 Изменение уровня мозговых АГ в крови больных НМА в зависимости от продолжительности болезни.

6 10

ПР. БСУЙНИ (лет)

Рис.7 Изменение уровня АТ к МСБ в кро«и больных НМА I зависимости от продолжительности болеэ*«.

Таблица 5

Результаты множественного регрессионного анализа, показывающие величину связи некоторых показателей неврологического статуса больных НМА со значениями (К), выявленными в ИФА.

ПОКАЗАТЕЛИ ИФА КОЭФФИЦИЕНТ МНОЖЕСТВЕНН. КОРРЕЛЯЦИИ, (R) КОЭФФИЦИЕНТ ДЕТЕРМИНАЦИИ (Я2) F- критерий Р

2F9-C9 0.53 0.28 4.344 0.061

5F11-D9 0.98 0.95 14.199 0.005

3G7-F8/C11 0.87 0.76 4.432 0.004

3G9-D6 0.91 0.83 6.789 0.013

3F9-E10 0.85 0.71 4.984 0.026

5F5-B6 0.35 0.12 1.484 0.248

ДНК-« 0.99 0.99 25.173 0.011

ДНК-д 0.70 0.49 4.733 0.036

МСБ 0.98 0.96 16.080 0.002

Анализируя полученные результаты, можно с большой уверенностью предполагать, что нейродегенеративные процессы при

данных нозологиях (ВЭ и НМА) имеют аутоиммунный характер, о чем свидетельствует высокая частота выявления повышенных уровней АТ к белкам мозга в обеих группах больных по сравнению с контролем.

Мозгоспецифические АГ, обнаруженные в крови пациентов обеих нозологий, свидетельствуют не только об интенсивности дегенеративных процессов в тканях мозга, но также являются индикаторами нарушений проницаемости гематоэнцефалического барьера.

Сравнивая результаты ИФА, полученные в целом для обеих групп больных, необходимо отметить, что для лиц с ВЭ значения К по большинству изучаемых параметров ниже, чем для больных НМА, что, вероятно, отражает более медленное протекание патологического процесса. Это предположение подтверждается при клиническом наблюдении более продолжительным развитием болезни до терминальной стадии у больных ВЭ, чем у больных НМА.

При сравнении некоторых усредненных значений изучаемых параметров у лиц с ВЭ, сгруппированных по преобладающему клиническому синдрому, не удалось выявить статистически значимых отличий (таблица 3). Вместе с тем, достаточно высокие значения асимметрии и эксцесса (таблица 2) и большой размах между минимальными и максимальными значениями показателей свидетельствуют о гетерогенном характере протекания патологического процесса в группе больных ВЭ. Проведенный кластерный анализ позволил выделить две достоверно различающиеся по показателям ИФА группы. Эти данные могут свидетельствовать о том, что мы имеем дело с двумя разными стадиями болезни, или, что менее вероятно, с двумя различными заболеваниями.

В первую группу попали пациенты, в крови которых выявлены высокие уровни мозгоспецифических белков, что свидетельствует об интенсивных дегенеративных процессах в нервных тканях. Обращает на себя внимание характерное повышение уровней мозговых АГ и АТ к МСБ с увеличением продолжительности болезни с пиком в 15 лет (рис.2), что свидетельствует о прогрессировании патологического процесса в нервных тканях в первые годы развития болезни. Во второй стадии болезни (второй кластер) в кровяном русле мозговых белков становится меньше, однако при этом уровни противомозговых АТ сохраняются в крови достаточно высокими на протяжении всего периода заболевания, вплоть до 45 лет. Высокая частота выявления и высокие уровни АТ к ДНК во втором кластере больных ВЭ, вероятно, связаны с сочетанной патологией (более чем у 50% пациентов), развивающейся на фоне основного заболевания.

Отсутствие резких колебаний уровней мозгоспецифических белков и противомозговых АТ в крови больных из второго кластера объясняется тем, что практически у всех обследованных пациентов заболевание протекало в этот период стабильно, без обострения.

Не было обнаружено соответствий между клиническими формами

(СПФ, ДПФ) и иммунологическими показателями - внутри каждого кластера присутствовало примерно одинаковое количество больных, как со спастико-паретической, так и с дементно-паретической формами. Также в ходе исследований не было выявлено характерного для данной нозологии белкового маркера, позволяющего однозначно диагностировать данное заболевание, лишь антиген, выявляемый моноклоном 3G7-F8/C11 (к белкам гиппокампа и клеткам Пуркинье мозжечка), несколько чаще других регистрировали в крови больных (44.2%).

Неспецифичность функционирования иммунной системы и отсутствие эффектов терапии, делают процесс протекания данного заболевания схожим с аутоиммунными нейродегенеративными заболеваниями, имеющими в своей основе вероятную генетическую компоненту: рассеянным склерозом, болезнью Апьцгеймера (Чекнев С.Б., 1994, Encinas J.A. et al., 1996).

Для больных НМА отмечены, в целом, более высокие уровни как мозгоспецифических белков, так и аугоантител, что вполне согласуется с более интенсивным характером нейродегенеративных процессов при этом заболевании, чем при ВЭ. Частота выявления положительных результатов в ИФА как для аугоантител, так и для антигенов, также была выше, чем у больных ВЭ.

Изучение зависимости изменения концентрации мозгоспецифических белков в крови больных НМА от некоторых показателей неврологического статуса позволило выявить ряд закономерностей в протекании патологического процесса при данной нозологии.

Достаточно высокие коэффициенты множественной корреляции и детерминации между показателями неврологического статуса и уровнями мозгоспецифических антигенов, выявленных в ИФА большинством моноклонов (исключение составляют моноклоны 2F9-C9 - к антигенным детерминантам белка S100 и 5F5-B6 - к антигенным детерминантам синаптонемального белка, где коэффициенты не были статистически значимыми), свидетельствуют о том, что практически при любом нарушении функционирования нервной системы в крови больных обнаруживаются мозговые белки или их фрагменты. Вместе с тем, более детальное изучение этих взаимозависимостей показывает, что можно выделить отдельные неврологические показатели (характеристики), которые сочетаются с повышением концентрации того или иного мрзгоспецифического белка в кровяном русле.

Так увеличение концентрации белка в крови, выявляемого моноклоном 5F11-D9 (к антигенным детерминантам белка S100), сочетается с ухудшением выполнения таких неврологических тестов, как коленно-пяточная проба и тандемная походка. Белок, выявляемый моноклоном 3G7-F8/C11 (к антигенным детерминантам гиппокампа и клеток Пуркинье мозжечка), обнаруживали в крови в повышенных

17

концентрациях при ухудшении функционирования периферической нервной системы и с нарастанием атактического состояния у больного. Увеличение силы постурального тремора и ухудшение показателей выполнения пальце-носовой пробы отмечались при повышении концентрации в крови энцефапитогенного белка, выявляемого в ИФА моноклоном ЗС9-6б, а усиление расстройств в периферической нервной системе и ухудшение показателей выполнения пробы Ромберга - при повышении концентрации энцефалитогенного белка, выявляемого моноклоном ЗР9-Е10.

ВЫВОДЫ

1. При вилюйском энцефаломиелите встречаемость повышенных уровней антител к ДНК отмечена у больных с торпидным течением процесса (2 кластер) и связана с сопутствующими заболеваниями, а при наследственной мозжечковой атаксии -характерна основному заболеванию.

2. При вилюйском энцефаломиелите у больных с прогрессирующим течением патологического процесса (1 кластер) в крови выявлены высокие уровни мозгоспецифических белков и их фрагментов, высокие уровни антител к мозгоспецифическим белкам и низкие уровни антител к ДНК, причем это касается больных с более коротким периодом болезни. При стабильном течении заболевания (2 кластер) выявлен более низкий уровень мозгоспецифических антигенов, высокий уровень антител к мозгоспецифическим белкам и ДНК, для этих больных отмечен более длительный период болезни.

3. Диагностическими критериями прогрессирования вилюйского энцефаломиелита являются одновременное повышение в крови уровней мозгоспецифических белков и их фрагментов и антител к мозгоспецифическим белкам, а сопутствующей соматической патологии - повышение уровня антител к ДНК.

А. При наследственной мозжечковой атаксии у больных не зависимо от длительности заболевания выявлены высокие уровни мозгоспецифических белков и их фрагментов, а также антител к мозгоспецифическим белкам и ДНК.

5. Повышение у больных наследственной мозжечковой атаксией тех или иных уровней мозгоспецифических антигенов, выявленных с помощью моноклональных антител - 5Р11-06 (к белку БЮО), 367-Р8/С11 (к клеткам Пуркинье и гиппокампа), 369-06 и ЗР9-Е10 (к энцефалитогенному белку), связано с ухудшением показателей неврологического статуса.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Шатунов А.Ю., Алексеев В.П., Аутеншлюс А.И. Аутоиммунный компонент у коренного населения Якутии, проживающего в очагах распространения патологии ЦНС. // Актуальные вопросы здоровья населения Республики Саха (Якутия). - Якутск, -1994. - С. 140-144.

2. Аутеншлюс А.И., Иванова О.В., Алексеев В.П., Шатунов А.Ю. и др. Аутоиммунный компонент при патологии центральной нервной системы у коренного населения Якутии. - Моноклональные антитела в нейробиологии: Под ред. М.Б.Штарка, М.В.Старостиной. - Новосибирск: "Офсет",- 1995.-С. 211-218.

3. Кононова С.К., Шатунов А.Ю., Брахфогель И.Ф., Афанасьева Е.С. и др. Некоторые аспекты иммунологии и биохимии больных вилюйским энцефаломиелитом и наследственной мозжечковой атаксией. If "Вилюйский энцефаломиелит": Материалы Первой Международной научно-практической конференции. - Якутск, 1996. - С. 111-114.

4. Шатунов А.Ю., Брахфогель И.Ф. Аутоиммунитет, мозгоспецифические антигены при патологии центральной нервной системы у коренных жителей Якутии. // "Вилюйский энцефаломиелит": Материалы Первой Международной научно-практической конференции. -Якутск, 1996.-С. 114-120.

5. Аутеншлюс А.И., Иванова О.В., Шатунов А.Ю., Старостина М.В. Антитела к энцефалитогенному белку, мозгоспецифические белки и их фрагменты в крови больных с патологией центральной нервной системы. // "Вилюйский энцефаломиелит": Материалы Первой Международной научно-практической конференции. - Якутск, 1996. - С. 120-121.

6. Autenschlus A., Ivanova О., Bocharov Е., Starostina М., Pankova Т., Elrucova S., Schatunov A., Alexeev V. Autoimmunity and CNS patology in native residents of Sakha (Yakutia). // IX International Congress on Circumpolar Helath, june 20-25,1993. - Reykjavik, -1993. - D42.