Анализ цереброваскулярных и нейропротекторных эффектов афобазола

Силкина, Ирина Владимировна

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Анализ цереброваскулярных и нейропротекторных эффектов афобазола

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Силкина, Ирина Владимировна Москва 2005 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.00.25

Автореферат диссертации по медицине на тему Анализ цереброваскулярных и нейропротекторных эффектов афобазола

На правах рукописи

СИЛКИНА ИРИНА ВЛАДИМИРОВНА

АНАЛИЗ ЦЕРЕБРОВАСКУЛЯРНЫХ И НЕЙРОПРОТЕКТОРНЫХ ЭФФЕКТОВ АФОБАЗОЛА

14.00.25 -фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2005

Работа выполнена в лаборатории фармакологии цереброваскулярных расстройств ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН.

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор P.C. Мирзоян

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор С.Б. Середенин

доктор медицинских наук, профессор В.А.Макаров

доктор биологических наук, И.Б.Цорин

Ведущая организация:

Московский государственный

медико-стоматологический

университет

Защита диссертации состоится «_»

2005 года в «_» час на

заседании диссертационного совета Д-001.024.01 при ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН по адресу: 125315, г. Москва, ул. Балтийская, д.8.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН по адресу: 125315, г. Москва, ул. Балтийская, д.8.

Автореферат разослан «_»

2005 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Е.А. Вальдман

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Цереброваскулярные расстройства в большинстве развитых стран занимают одно из ведущих мест среди основных причин смертности и инвалидизации населения. В Российской Федерации регистрируется более 450 ООО инсультов ежегодно, в мире более б млн. В стране по данным Национального регистра инсульта, заболеваемость инсультом в последние годы составляет 336 на 100000 населения в год и отмечается увеличение его распространенности среди людей трудоспособного возраста. Поэтому инсульт является проблемой чрезвычайной медицинской значимости. Согласно международным эпидемиологическим исследованиям, соотношение ишемического и геморрагического инсультов составляет 85% к 15% (Н.В.Верещагин и соавт. 2003; Е.И.Гусев и соавт. 2003; В.И.Скворцова 2004). Ишемический инсульт определяется выраженным и длительным снижением уровня мозгового кровотока. Область мозга с наиболее выраженным снижением кровотока (ниже 10 мл/100г/мии) повреждается в течение 6-8 минут и называется «ядерной» зоной инфаркта. Этот участок мозга окружен ишемизнрованной, но живой зоной «ишемической полутени» или «пенумбры», где в целом еще сохранен энергетический метаболизм и имеют место лишь функциональные, но не структурные изменения. Указанная область мозга и подлежит фармакологической коррекции, целью которой является восстановление кровоснабжения, метаболизма и функционального состояния поврежденной зоны.

структурного поражения нервной ткани. Выявлена взаимосвязь между нейротоксичностью глутамата и транспортом ионов кальция в нервной ткани. Обнаружено нарушение баланса между возбуждающими и тормозными процессами, протекающими в центральной нервной системе в условиях ишемического поражения мозга (A.R. Green et al., 2000; R.D, Schwartz-Bloom, 2001; Н.Д. Сорокина и соавт., 2002). При этом усиливается влияние возбуждающих систем, которое вызвано значительным высвобождением глутамата. Исследования, направленные на поиск антагонистов глутаматных рецепторов, обладающих нейропротекторной активностью, к сожалению, пока еще не увенчались успехом. Так, при клиническом изучении неконкурентного антагониста NMDA-рецепторов МК-801 (дизоцилпина), который в эксперименте оказывал защитное влияние при ишемии мозга, обнаружились существенные побочные эффекты.

Однако, необходимо отметить, что на протяжении многих лет в нашей стране, а в последние годы и за рубежом, успешно разрабатывается другое направление фармакотерапии ишемических поражений мозга, которое связано со стимуляцией системы ГАМК в стенке мозговых сосудов и в ЦНС и восстановления нарушенного ишемией баланса между возбуждающими и тормозными процессами. Так, была выявлена способность ГАМК понижать тонус сосудов мозга и обнаружены в сосудах мозга ГАМКд - рецепторы, а также ферменты, синтезирующие и метаболизирующие ГАМК (С.А. Мирзоян и В.П. Акопян, 1967; С.А. Мирзоян и соавт., 1970,1974; D.N. Krause, 1980). Созданный в соответствии с этим в лаборатории фармакологии цереброваскулярных расстройств нашего Института ГАМК-ергический препарат - пикамилон в настоящее время успешно применяется при цереброваскулярных расстройствах в неврологической практике. (Р.С. Мирзоян, Т.С. Ганьшина, 1989; Р.С. Мирзоян, 1995).

На протяжении последних лет в ГУ НИИ фармакологии им. В.В.Закусова РАМН разрабатывается оригинальный селективный анксиолитик афобазол (5-

этокси-2-[2-(морфолино)-зтил-тио]бензимидазола дигидрохлорид), обладающий мембранотропной активностью (С.Б. Середенин, А.Д. Дурнев, 1992). Согласно данным М.Г. Баласанян (2003) афобазол в условиях локального ишемического поражения, вызванного перевязкой средней мозговой артерии, обладает нейропротекторным эффектом. Он ограничивает зону ишемического поражения и способствует нормализации патоморфологических изменений мозговой ткани. Защитный эффект афобазола был показан также и на культуре нейронов гиппокампа в условиях оксидативного стресса, вызванного перекисью водорода, и воздействием глутамата (Т.А. Zenina'et al., 2005).

Таким образом, полученные в опытах in vivo и in vitro данные убедительно свидетельствуют о наличии у афобазола нейропротекторных свойств. Однако, многие стороны механизма нейропротекторного действия препарата продолжают оставаться невыясненными. В частности, неизвестно какую роль при этом играет мозговое кровообращение, тогда как цереброваскулярный компонент играет существенную роль в нейропротекции. Следует провести анализ нейромедиаторного механизма действия афобазола. Важно также исследовать влияние афобазола на устойчивость мембранных структур коры и стриатума к свободнорадикальным процессам и на активность фермента антиоксидантной защиты - катал азы в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга.

Цель исследования.

Провести анализ цереброваскулярных, нейропротекторных и нейромедиаторных эффектов селективного анксиолитика афобазола.

Задачи исследования.

1. Изучение влияния афобазола и препаратов сравнения - пикамилона и нимодипина на регионарный мозговой кровоток и состояние микроциркуляции в коре головного мозга.

2. Исследование цереброваскулярных эффектов афобазола и пикамилона в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга.

3. Определение выживаемости животных под влиянием афобазола в условиях ишемии, вызванной перевязкой общих сонных артерий.

4. Изучение ГАМК-ергичесхого механизма цереброваскулярного действия афобазола.

5. Изучение ГАМК-ергического механизма цереброваскулярного эффекта пикамилона.

6. Исследование влияния афобазола на устойчивость мембранных структур коры и стриатума к свободнорадикальным процессам при глобальной преходящей ишемии.

7. Изучение влияния афобазола на активность катал азы - фермента антиоксидантной защиты в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга.

Научная новизна работы.

Впервые проведено изучение влияния селективного анксиолитика афобазола на регионарное мозговое кровообращение и состояние микроциркуляции в коре головного мозга у интаггных и ишемизированных животных. Выявлена способность афобазола в значительно большей степени, чем у интактных крыс усиливать кровоснабжение мозга в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга. Афобазол существенно повышает выживаемость животных в условиях ишемии, вызванной перевязкой общих сонных артерий. Вместе с тем, препарат сравнения пикамилон увеличивает кровообращение интактного и ишемизированного мозга в одинаковой степени.

проявляет цереброваскулярную активность на фоне действия бикукуллина и не оказывает сосудорасширяющего эффекта после введения пикротоксина.

Новыми являются данные о способности афобазола повышать устойчивость мембранных структур коры и стриатума к свободнорадикальным процессам в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга. В этих условиях афобазол увеличивает в коре активность фермента антиоксидантной защиты - катал азы.

Научно - практическая значимость работы.

Выявленная в диссертационной работе способность афобазола усиливать кровоснабжение ишемизированного мозга и повышать выживаемость животных в условиях ишемии, вызванной перевязкой общих сонных артерий, указывает на выраженную дереброваскулярную и нейропротекторную активность препарата.

Обнаруженные в исследовании цереброваскулярные и нейропротекторные эффекты афобазола, наряду со способностью препарата повышать устойчивость мембранных структур ткани мозга и "усиливать ее антиоксидантную защиту в условиях ишемии, свидетельствуют о целесообразности рекомендовать клиническое изучение препарата в качестве средства для лечения больных с ишемическими поражениями головного мозга.

Основные сведения об апробации работы.

Материалы диссертации доложены на II съезде Российского Научного Общества фармакологов, Москва (апрель, 2003 г.), на международной конференции, посвященной 100-летию присуждения Нобелевской премии академику И.П. Павлову «Проблемы интеграции функции в физиологии и медицине», Минск (июнь, 2004 г.), на §-ой Европейской коллегии по нейропсихофармакологии, Москва (апрель, 2005 г.), на межлабораторной конференции ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН (апрель, 2005 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 2 статьи в центральных журналах, 2 статьи в сборнике работ и 2 тезисов.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 138 страницах компьютерного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, 4 главы результатов собственных исследований и их обсуждений, заключение, выводы, список литературы, включающий 73 отечественных и 163 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 21 таблицей и 21 рисунком.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование выполнено на 198 белых беспородных крысах - самцах массой 250-300 г под общей анастезией (хлоралгидрат 400 мг/кг, внутрибрюшинно) и 5 кошках массой 3-4 кг под общей анастезией (уретан 500 мг/кг и хлоралоза 50 мг/кг, внутривенно).

Состояние мозгового кровообращения и влияние лекарственных препаратов у животных оценивали с помощью комплекса современных количественных методов исследования. Для оценки микроциркуляции в коре головного мозга крыс применяли метод лазерной допплеровской флоуметрии. Региональный мозговой кровоток у крыс и кошек регистрировали методом ультразвуковой флоуметрии. Одновременно регистрировали изменения артериального давления.

Метод лазерной допплеровской флоуметрии позволяет оценить состояние кровотока на капиллярном уровне. (E.H. Рябцева, 1998). Метод был использован нами для регистрации состояния микроциркуляции в теменной области коры головного мозга крыс с использованием лазерного допплеровского флоуметра ALF-21 фирмы "Transonic System Inc." (США). Для этой цели игольчатый датчик флоуметра диаметром 0,8 мм устанавливали на теменной области коры большого

мозга с помощью микроманипулятора и коромысла.

Для регистрации притока крови в мозг применяли метод ультразвуковой флоуметрии. (E.H. Рябцева, 1998). Исследование проводили на кошках в условиях искусственной вентиляции легких и на крысах. Приток крови в мозг регистрировали ультразвуковым флоуметром Т106 фирмы "Transonic System Inc.", датчик которого диаметром 1 и 2 мм устанавливали на общей сонной артерии. При этом перевязывали все артерии, питающие кровью экстракраниальные ткани головы. Для регистрации артериального давления полиэтиленовый катетер вставляли в бедренную артерию и соединяли с электроманометром BPR-01 Experimetria.

Исследовали также состояние мембранных структур нервной ткани и активность фермента антиоксидантной защиты - катал азы в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга и под влиянием афобаэола. В соответствии с тем, что широко используемая характеристика состояния мембранных структур клетки по исходному уровню продуктов свободнорадикального окисления не всегда отражает истинную картину патологических изменений (М. Janssen et а]., 1993; Р. Cogrel et al., 1993, F. Sabeh et al., 1995), исследовалась скорость накопления продуктов свободнорадикального окисления при его индукции in vitro аскорбиновой кислотой (Т.Г. Сазонтова, 1998). У крыс под общей анестезией выделяли кору головного мозга и стриатум, затем замораживали и хранили в жидком азоте. Концентрацию продуктов окисления, индуцированного активными формами кислорода, оценивали по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (ТБК) спектрофотометрическим способом (Н. Okhawa et al., 1979) в модификации (К. Kikugawa, 1992) при длине волны Х=532 нм.

Активность катал азы определяли спектрофотометрически при длине волны 240 нм при 37°С, регистрируя скорость уменьшения концентрации добавленной перекиси водорода (Н202) (D.J. Luck, 1963). Активность каталазы выражали в мкмоль Н202 , разлагаемой в минуту на 1 мг белка, используя коэффициент

молярной экстинкции для перекиси водорода, равный 39,4 М*'см''. Количественное определение белка в гомогенате определяли по методу Лоури (1951).

Результаты исследования обрабатывали методом вариационной статистики с помощью ^критерия Стьюдента с использованием программы «ВюбМ».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование было начато с изучения влияния афобазола на регионарный мозговой кровоток и состояние микроциркуляции в коре головного мозга. Цереброваскулярную активность афобазола сопоставляли с известными препаратами, которые получили широкое применение в неврологической практике - пикамилоном и блокатором кальциевых каналов - нимодипином. В первой серии опытов исследовали влияние афобазола в дозах 1, 5 и 10 мг/кг на приток крови в головной мозг крыс по внутренней сонной артерии. В указанных дозах афобазол вызывал увеличение мозгового кровотока (МК) в среднем на 1011%. Наиболее стабильные результаты были получены при использовании препарата в дозе 5 мг/кг, которая была выбрана для дальнейших исследований.

Проведенные опыты позволили установить, что афобазол в дозе 5мг/кг вызывает усиление мозгового кровотока в среднем на 11,0±2,4% (п=16) (рис.1). В большинстве опытов под влиянием препарата наблюдались двухфазные изменения мозгового кровотока: сразу же после введения препарата у 14 животных регистрировалось резкое кратковременное (1-3 минуты) снижение кровотока, а затем увеличение практически у всех крыс (п=15). У большинства крыс (п= 9) увеличение кровотока наблюдалось в течение 5-15 минут, у остальных животных длительность эффекта составляла 30-60 минут. Сразу же после введения афобазола уровень артериального давления кратковременно снижался в среднем на 33,0 ± 2,6%, что, возможно, определяло первоначальное снижение уровня регионарного мозгового кровотока. Аналогичное увеличение

регионарного мозгового кровотока под влиянием афобазола (5 мг/кг, внутривенно) наблюдалось и у кошек (на 15,0 ±1,1%).

В отдельной серии экспериментов было изучено влияние афобазола на микроциркуляцию (локальный мозговой кровоток) в коре головного мозга крыс (п=20). У большинства крыс (п=16) после введения афобазола наблюдалось увеличение локального мозгового кровотока в среднем на 19,4±2,9% (рис. 1). Длительность цереброваскулярного эффекта составляла 10-15 минут. У 9 крыс наблюдалось повторное повышение уровня кровотока с 30-40 минуты после введения препарата. В конце эксперимента (60-120 минута) у 10 крыс уровень кровотока остался выше контрольного уровня на 21 %. На артериальное давление афобазол оказывал неоднозначное действие. У 10 крыс он вызвал снижение артериального давления на 2Й,6±4,9% , у 6 - после введения афобазола было обнаружено увеличение артериального давления на 37%.

Таким образом, афобазол вызывает увеличение мозгового кровотока у интактных крыс и кошек, которое, по-видимому, не связано с влиянием препарата на артериальное давление, о чем свидетельствует разнонаправленность изменений этих показателей.

В следуюшей серии экспериментов было изучено влияние пикамилона на состояние микроциркуляции в коре головного мозга интактных крыс. Эксперименты показали, что пикамилон (10 мг/кг, внутривенно) вызывает увеличение локального мозгового кровотока у всех крыс (п=16) в среднем на 17±3 % (рис.1). Пикамилон вызвал снижение артериального давления в среднем на 21±4 %.

В отдельной серии опытов изучали влияние нимодипина на приток крови в мозг через внутреннюю сонную артерию у крыс с использованием ультразвукового флоуметра. В этих опытах было показано, что нимодипин увеличивает регионарный мозговой кровоток в среднем на 36±8,5 % (п =9).

Рис. 1. Сравнительное изучение ачияния афобазола и нимодипииа на регионарный мозговой кровоток (МК) (А), а также афобазола и пикамилона на локальный мозговой кровоток (ЛМК) (Б) у интактных крыс (* - Р<0,05).

Цереброваскулярный эффект нимодилина преимущественно развивается сразу же после введения и достигает максимальных значений у 7 крыс на 2-5 минутах и у двух - на 30-40 минутах (рис.1). Нимодипин у большинства крыс (п=7) понижает уровень артериального давления в среднем на 15±4,5 %. Таким образом, проведенные эксперименты позволили установить, что афобазол вызывает увеличение регионарного мозгового кровотока и улучшает состояние микроциркуляции в коре головного мозга. По цереброваскулярной активностью афобазол уступает нимодипину (Р< 0,05) и существенно не отличается от пикамилона (рис. 1 ).

Учитывая возможные различия .цереброваскулярных эффектов препаратов в зависимости от исходного состояния животных, в частности, при ишемическом поражении мозга представлялось важным исследовать влияние афобазола на состояние микроциркуляции в коре головного мозга крыс в условиях глобальной преходящей ишемии. Опыты показали, что афобазол (5мг/кг, внутривенно), введенный через 45 минут после ишемии, в большинстве экспериментов (7 из 10), вызывал значительное увеличение локального мозгового кровотока в среднем на 40±9,3% (рис.2 и 3). Изменения артериального давления под влиянием афобазола в условиях ишемии также не отличались однородностью.

Далее в специальной серии опытов для оценки нейропротекторного эффекта афобазола исследовалось влияние препарата на выживаемость крыс в условиях ишемии, вызванной перевязкой общих сонных артерий. Эксперименты показали, что афобазол, введенный внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг за 30 минут до перевязки общих сонных артерий, повышает выживаемость животных. Если в контроле (п= 10) через 24 часа в результате ишемии мозга погибло 30 % крыс, то под влиянием афобазола (п= 10) выжили все животные.

В следующей серии экспериментов было изучено влияние пикамилона на микроциркуляцию в коре головного мозга крыс в условиях глобальной ишемии, вызванной окклюзией обеих общих сонных артерий (n=l 1 ). Препарат при

ишемическом поражении мозговой ткани вызывает повышение локального мозгового кровотока у всех крыс в среднем на 23±3 % (рис.3). Пикамилон в условиях ишемии оказывает неоднозначное действие на артериальное давление.

Проведенные эксперименты показали, что афобазол вызывает увеличение мозгового кровотока, которое в значительно большей степени выражено у крыс, перенесших глобальную преходящую ишемию мозга. Разница статистически значима при Р<0,01 (рис.3). Что касается пикамилона, то достоверных различий цереброваскулярного эффекта препарата у интактных крыс и животных в условиях ишемии не было выявлено. Нимодипин также в одинаковой степени увеличивает мозговое кровообращение у интактных и ишемизированных животных (В.В. Александрии и соавт., 2002).

30 25

Ц 20 5

Ш 15 10 5 0

Рис.2. Влияние афобазола (5мг/кг, внутривенно) на локальный мозговой кровоток (ЛМК) в усл.ед. крыс, перенесших глобальную преходящую ишемию головного мозга.

Контроль Ишемия Афобазол

М.Г. Баласанян (2003), свидетельствующими о нейропротекторной активности препарата в опытах с локальной ишемией, вызванной окллюзией средней мозговой артерии. Можно полагать, что в реализации нейропротекторного эффекта афобазола цереброваскулярный компонент его действия играет существенную роль.

Известно, что система ГАМК играет важную роль в реализации нейропротекторного и цереброваскулярного эффектов фармакологических средств при ишемическом поражении головного мозга. Поэтому представляло большой интерес выяснить значение ГАМК-ергической системы в реализации цереброваскулярного и нейропротекторного действия афобазола и препарата сравнения - пикамилона. В соответствии с этим, цереброваскулярная активность препаратов исследовалась на фоне действия бикукуллина и пикротоксина, которые являются соответственно _ конкурентным и неконкуретным антагонистами ГАМКа - рецепторов.

В серии опытов было ' изучено влияние бикукуллина на цереброваскулярный эффект афобазола (рис.4). На фоне блокатора ГАМКа -рецепторов препарат в дозе 5 мг/кг вызывал увеличение мозгового кровотока в среднем на 11,4± 2,7%. (в контроле на 20,4± 2,9%, разница статистически значима при Р<0,05).

Далее было изучено влияние афобазола на мозговое кровообращение в условиях блокады хлорного канала ГАМКд- рецептора пикротоксином (рис.4). В этих условиях афобазол вызывал увеличение мозгового кровотока в среднем на 10,6± 2,7% ( в контроле на 22,8± 3,4 %, разница статистически значима при Р<0,05)

Таким образом, цереброваскулярный эффект афобазола значительно ослабляется на фоне действия как бикукуллина, так и пикротоксина, что указывает на важную роль системы ГАМК в механизме действия препарата.

Далее на фоне блокады ГАМКд - рецепторов был изучен цереброваскулярный эффект пикамилона. На фоне блокатора ГАМК-рецепторов - бикукуллина пиками л он вызывал увеличение мозгового кровотока в среднем на 15,9 ± 2,7 % (в контроле на 23,6 ± 7,3 %). Статистически значимых различий между влиянием пикамилона на кровоснабжение мозга интактных крыс и на фоне блокады ГАМК-рецепторов бикукуллином не было выявлено. Имеет место лишь тенденция к ослаблению цереброваскулярного эффекта пикамилона в этих условиях (рис.4).

В следующей серии опытов был исследован цереброваскулярный эффект пикамилона в условиях блокады хлорного канала ГАМКд - рецепторов пикротоксином. На фоне действия анализатора пикамилон увеличил мозговой кровоток лишь на 7,9± 3,5 % (в контроле на 41,4 ± 10,4%, разница статистически значима при Р<0,01) (рис.4).

Таким образом, цереброваскулярный эффект афобазола на фоне действия как бикукуллина так и пикршоксина существенно ослабляется, что свидетельствует о важной роли системы ГАМК в реализации действия препарата. По-видимому, выявленный нами механизм действия афобазола лежит в основе и его нейропротекторной активности. Полученные данные о способности бикукуллина и пикротоксина устранять или существенно ослаблять цереброваскулярное действие афобазола согласуются с результатами опытов ех vivo, указывающих на то, что афобазол предотвращает снижение ГАМК-бензодиазепиновой рецепции у животных с выраженной реакцией страха. (С.Б.Середенин и соавт. 1998). Иная картина наблюдается при изучении ГАМК-ергического компонента в механизме действия пикамилона. Цереброваскулярный эффект пикамилона не претерпевает существенных изменений в условиях блокады ГАМК-рецепторов бикукуллином. Вместе с тем, на фоне действия пикротоксина имеет место блокада или значительное снижение цереброваскулярной активности пикамилона. Следовательно, в реализации

цереброваскулярного эффекта пикамилона важную роль играет его влияние на проводимость хлорного канала ГАМКа- рецептора.

Рис. 3. Влияние афобазола (5 мг/кг, внутривенно) и пикамилона (10 мг/кг, внутривенно) на локальный мозговой кровоток (ЛМК) у крыс, перенесших глобальную преходящую ишемию головного мозга, в % к исходному уровню (* -Р<0,01).

Одним из наиболее важных звеньев в развитии ишемичесин о повреждения ткани мозга является окислительный стресс. Как известно, головной мозг является высокочувствительным к свободиорадикадьному окислению органом, вследствие того, что его мембранные структуры богаты полиненасыщенными жирными кислотами. Они являются прямой мишенью для

свободнорадикального повреждения и в то же время в мозге в сравнении с другими органами и тканями активность антиоксидантной системы ниже. В норме антиоксидантная система уравновешивает действие прооксидантной, в условиях же ишемического повреждения равновесие этих систем нарушается и

ЛМК, % от контроля

Контроль Инкротокскн Бикукуллин Пнкротокенн Ьикукуллии + Афобагол + Афобатол + Пнкамилон + Пикамилон

Рис 4. Сравнительное изучение действия афобачола и пикамилопа на локальный мозговой кровоток (ЛМК) на фоне блокаторов ГАМКЛ рецепторов бикукуллином или пикротоксином по сравнению с интактными крысами (* -Р<0,05, ** - Р<0,01).

смещается в сторону увеличения функции последней. Выявлены различия в чувствительности различных структур головного мозга к ишемическому поражению. Наиболее чувствительными оказались стриатум и гиппокамп. На различных моделях ишемии в стриатуме и гиппокампе, в отличие от коры мозга, обнаружено значительное снижение-активности антноксидантных ферментов (каталазы, супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы) (Р. Са1аЬгез] л а1., 2002; Н. М. Нопм,2002; 8. Ваге е1 а]., 2004).

Исследование проводилось совместно с к.б.н. Т.А. Зениной. Для оценки накопления продуктов свободнорадикального окисления и активности каталазы животных разделили на 3 группы: 1) контроль - «ложнооперированные» крысы; 2) крысы, перенесшие глобальную преходящую ишемию; 3) животные, которым через 30 минут после ишемии вводили афобазол (S мг/кг, внутривенно).

У крыс, перенесших ишемию головного мозга, в коре через 30 и 60 минут после индукции свободнорадикального окисления наблюдалось статистически значимое увеличение концентрации продуктов окисления в 1,8 раза и в 1,4 раза соответственно по сравнению с контрольными животными (рис.5). У животных, которым через 30 минут после ишемии вводили афобазол, наблюдалась тенденция к снижению скорости накопления продуктов свободнорадикального окисления. Следовательно, афобазол, введенный после ишемии, снижает ее повреждающее действие на мембраны нейронов коры головного мозга.

наблюдалась тенденция к его восстановлению. Полученные нами данные о повреждении стриатума и коры после глобальной ишемии соответствуют литературным данным Таким образом, афобазол снижает повреждающее действие ишемии на мембранные структуры данных отделов мозга.

е еС

« *

8 1 ? N

£ т

I и £ •<

4,5

3,5

К 2 5

1 5 1

0,5 0

30 мин

60 мин

Кора

• контроль -ишемия

- и ш см ия+афобазол

30 60 мин мин

время иидукнкн

Стриатум cв060ДЯ0Paя,"í!l•'^^^и0^'0

оки слевнв

Рис. 5. Содержание ТБК-активных продуктов в единицах оптической плотности в коре и стриатуме головного мозга у ложнооперированных животных, животных в условиях ишемии и после введения афобазола (*-Р<0,05).

Опыты показали, что в коре на фоне увеличения интенсивности свободнорадикальных процессов наблюдается увеличение активности и антиоксидантного фермента каталазы на 53% по сравнению с контролем.

Полученные результаты согласуются с данными литературы (Т.Г. Сазонтова, 1998; Н. М. Нотш ег а1., 2002). Афобазол увеличивает активность фермента на 73% по сравнению с контролем (разница статистически значима при Р<0,05) (рис. 6) и на 20 % по сравнению с ишемией.

При изучении активности каталачы в стриатуме при ишемии > крыс было обнаружено снижение активности фермента на 30 % Эти данные указывают на значительное поражение данной области головного мозга. После введения афобазола уровень активности каталазы в этой структуре не отличался от ишемизированного мозга (рис. 6).

Рис. 6. Активность каталазы в коре и стриатумс головного мозга у ложнооперированных животных, животных в условиях ишемии и после введения афобазола (* - Р<0,05).

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о способности афобазола повышать устойчивость мембранных структур нейронов коры и стриатума к свободнорадикальным процессам после глобальной преходящей ишемии головного мозга. Афобазол в условиях ишемического поражения вызывает увеличение активности фермента антиоксидантной защиты - каталазы в коре по сравнению с ишемией, что и является одним из механизмов защитного эффекта афобазола при ишемическом повреждении мозга.

Таким образом, результаты проведенного исследования указывают на то, что афобазол увеличивает активность каталазы и устойчивость мембранных структур нейронов коры и стриатума в условиях глобальной преходящей ишемии мозга. Это играет существенную роль в реализации нейропротекторного действия препарата.

ВЫВОДЫ

1. Афобазол увеличивает регионарный мозговой кровоток у интактных животных (крысы, кошки) и улучшает состояние микроциркуляции в коре головного мозга крыс.

2. Цереброваскулярная активность афобазола значительно возрастает в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга.

3. Пикамилон в одинаковой степени усиливает кровоснабжение интактного и ишемизированного головного мозга у крыс.

4 Выявлен ГАМК-ергический механизм цереброваскулярного эффекта афобазола, о чем свидетельствует значительное ослабление сосудистого эффекта препарата на фоне действия бикукуллина и пикротоксина.

5. Цереброваскулярное действие пикамилоиа не проявляется в условиях блокады хлорных каналов ГАМКд- рецептора пикротоксином и не угнетается бикукуллином.

6. Афобазол повышает устойчивость мембранных структур нейронов коры и стриатума к свободнорадикальным процессам, вызванным глобальной преходящей ишемией головного мозга. В этих условиях препарат увеличивает в коре активность каталазы - фермента антиоксидантной защиты.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

]. И.В. Силкина, В.В. Александрии. Цереброваскулярный эффект афобазола у интактных животных и в условиях глобального ишемического поражения мозга.- В сб. «Методология флоуметрии», Москва, 2003 - вып. 7 - стр. 99107.

2. Т.С. Ганьшина, В.В. Александрии, И.В. Силкина. Особенности церсброваскулярного эффекта афобазола в условиях глобального ишемического поражения мозга.// Фундаментальные проблемы фармакологии. Сборник тезисов II съезда Российского Научного Общества фармакологов, Москва, апрель 2003 - ч. 1. - стр. 117.

3. И.В. Силкина, В.В. Александрии, Т.С. Ганьшина. Изучение цереброваскулярного эффекта афобазола в сравнении с пикамилоном.// Проблемы интеграции функции в физиологии и медицине. Материалы международной конференции, Минск, июнь 2004 - стр. 366-368.

4. И.В. Силкина, В.В. Александрии, Т.С. Ганьшина, С.Б. Середенин, P.C. Мирзоян. Усиление кровоснабжения ишемизированного мозга под влиянием афобазола.// Экспериментальная и клиническая фармакология. -2004.-т. 67,-№5-стр. 9-13.

5. И.В. Силкина, Т.С. Ганьшина, С.Б. Середенин, P.C. Мирзоян. ГАМК-ергический механизм цереброваскулярного и нейропротекторного эффектов афобазола и пикамилона.// Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2005. - т. 68. - №1 - стр. 20-24.

6. I.V. Silkina, V.V. Alexandrin, S.B.Seredenin. Analysis of cerebrovascular and neuroprotective effects of Afobazol. Abstracts 8lh European College of Neurupsychopharmacol., April 14-16,2005, Moscow, Russia.

* -8 5 20

РНБ Русский фонд

2006-4 6731

Отпечатано ЗАО «Оперативное тиражирование» ИНН-7710243829

т. 100 экз., заказ № 104/29-1, от 29.04.2005

Оглавление диссертации Силкина, Ирина Владимировна :: 2005 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. ГАМК и ишемическое поражение мозга

1.1.1. Участие системы ГАМК в регуляции мозгового 10 кровообращения.

1.1.2. Влияние ишемического поражения мозга на систему 20 ГАМК

1.1.2.1. Вещества, повышающие синтез и выделение ГАМК

1.1.2.2. Агонисты ГАМКд - рецепторов

1.1.2.3. Производные бензодиазепинов

1.1.2.4. Другие модуляторы ГАМКа рецептора

1.1.2.5. Производные ГАМК и цереброваскулярные 31 расстройства

1.2. Афобазол - селективный анксиолитик с 35 нейропротекторной активностью

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 43 ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Методы исследования мозгового кровообращения

2.1.1. Метод лазерной допплеровской флоуметрии

2.1.2. Метод ультразвуковой флоуметрии

2.2. Моделирование глобальной преходящей ишемии 46 головного мозга

2.3. Метод определения продуктов свободнорадикального 47 окисления в ткани мозга

2.4. Метод определение активности каталазы

ГЛАВА 3. ЦЕРЕБРОВАСКУЛЯРНЫЕ ЭФФЕКТЫ 50 АФОБАЗОЛА, ПИКАМИЛОНА И НИМОДИПИНА

ЗЛ.Афобазол

3.2. Пикамилон

3.3. Нимодипин

ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ АФОБАЗОЛА И

ПИКАМИЛОНА НА СОСТОЯНИЕ

МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ В КОРЕ ГОЛОВНОГО МОЗГА КРЫС В УСЛОВИЯХ ГЛОБАЛЬНОЙ ПРЕХОДЯЩЕЙ ИШЕМИИ И ВЫЖИВАЕМОСТЬ ЖИВОТНЫХ ПРИ ПЕРЕВЯЗКЕ СОННЫХ АРТЕРИЙ

4.1.Афобазол

4.2. Пикамилон

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ГАМК-ЕРГИЧЕСКИХ 77 МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ АФОБАЗОЛА И ПИКАМИЛОНА

5.1.Афобазол

5.2. Пикамилон

ГЛАВА 6. ВЛИЯНИЕ АФОБАЗОЛА НА ПРОЦЕСС 91 СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ И АКТИВНОСТЬ КАТАЛАЗЫ В РАЗЛИЧНЫХ СТРУКТУРАХ МОЗГА В УСЛОВИЯХ ГЛОБАЛЬНОЙ ПРЕХОДЯЩЕЙ ИШЕМИИ

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Силкина, Ирина Владимировна, автореферат

Актуальность темы. Цереброваскулярные расстройства в большинстве развитых стран занимают одно из ведущих мест среди основных причин смертности и инвалидизации населения. В Российской Федерации регистрируется более 450 ООО инсультов ежегодно, в мире более 6 млн. В стране по данным Национального регистра инсульта, заболеваемость инсультом в последние годы составляет 336 на 100000 населения в год и отмечается увеличение его распространенности среди людей трудоспособного возраста. Поэтому инсульт является проблемой чрезвычайной медицинской значимости. Согласно международным эпидемиологическим исследованиям, соотношение ишемического и геморрагического инсультов составляет 85% к 15% (Н.В.Верещагин и соавт. 2003; Е.И.Гусев и соавт. 2003; В.И.Скворцова 2004). Ишемический инсульт определяется выраженным и длительным снижением уровня мозгового кровотока. Область мозга с наиболее выраженным снижением кровотока (ниже 10 мл/100г/мин) повреждается в течение 6-8 минут и называется «ядерной» зоной инфаркта. Этот участок мозга окружен ишемизированной, но живой зоной «ишемической полутени» или «пенумбры», где в целом еще сохранен энергетический метаболизм и имеют место лишь функциональные, но не структурные изменения. Указанная область мозга и подлежит фармакологической коррекции, целью которой является восстановление кровоснабжения, метаболизма и функционального состояния поврежденной зоны.

Существенные успехи достигнуты в понимании патогенеза церебральной ишемии и выявлен сложный каскад нейрохимических процессов в центральной нервной системе. Ишемия головного мозга характеризуется значительным высвобождением глутамата и других возбуждающих нейромедиаторных аминокислот, которые играют ключевую роль в развитии структурного поражения нервной ткани. Выявлена взаимосвязь между нейротоксичностью глутамата и транспортом ионов кальция в нервной ткани. Обнаружено нарушение баланса между возбуждающими и тормозными процессами, протекающими в центральной нервной системе в условиях ишемического поражения мозга (A.R. Green et al, 2000; R.D. Schwartz-Bloom, 2001; Н.Д. Сорокина и соавт., 2002). При этом усиливается влияние возбуждающих систем, которое вызвано значительным высвобождением глутамата. Исследования, направленные на поиск антагонистов глутаматных рецепторов, обладающих нейропротекторной активностью, к сожалению, пока еще не увенчались успехом. Так, при клиническом изучении неконкурентного антагониста NMDA-рецепторов МК-801 (дизоцилпина), который в эксперименте оказывал защитное влияние при ишемии мозга, обнаружились существенные побочные эффекты.

Однако, необходимо отметить, что на протяжении многих лет в нашей стране, а в последние годы и за рубежом, успешно разрабатывается другое направление фармакотерапии ишемических поражений мозга, которое связано со стимуляцией системы ГАМК в стенке мозговых сосудов и в ЦНС и восстановления нарушенного ишемией баланса между возбуждающими и тормозными процессами. Так, была выявлена способность ГАМК понижать тонус сосудов мозга и обнаружены в сосудах мозга ГАМКа - рецепторы, а также ферменты, синтезирующие и метаболизирующие ГАМК (С.А. Мирзоян и В.П. Акопян, 1967; С.А. Мирзоян и соавт., 1970, 1974; D.N. Krause, 1980). Созданный в соответствии с этим в лаборатории фармакологии цереброваскулярных расстройств нашего Института ГАМК-ергический препарат - пикамилон в настоящее время успешно применяется при цереброваскулярных расстройствах в неврологической практике. (Р.С. Мирзоян, Т.С. Ганыиина, 1989; Р.С. Мирзоян, 1995).

На протяжении последних лет в ГУ НИИ фармакологии им. В.В.Закусова РАМН разрабатывается оригинальный селективный анксиолитик афобазол (5-этокси-2-[2-(морфолино)-этилтио]бензимидазола дигидрохлорид), обладающий мембранотропной активностью (С.Б. Середенин, А.Д. Дурнев, 1992). Согласно данным М.Г. Баласанян (2003) афобазол в условиях локального ишемического поражения, вызванного перевязкой средней мозговой артерии, обладает нейропротекторным эффектом. Он ограничивает зону ишемического поражения и способствует нормализации патоморфологических изменений мозговой ткани. Защитный эффект афобазола был показан также и на культуре нейронов гиппокампа в условиях оксидативного стресса, вызванного перекисью водорода, и глутаматной токсичности (Т.А. Zenina et al., 2005).

Таким образом, полученные в опытах in vivo и in vitro данные убедительно свидетельствуют о наличии у афобазола нейропротекторных свойств. Однако, многие стороны механизма нейропротекторного действия препарата продолжают оставаться невыясненными. В частности, неизвестно какую роль при этом играет мозговое кровообращение, тогда как цереброваскулярный компонент играет существенную роль в нейропротекции. Следует провести анализ нейромедиаторного механизма действия афобазола. Важно также исследовать влияние афобазола на устойчивость мембранных структур коры и стриатума к свободнорадикальным процессам и на активность фермента антиоксидантной защиты - каталазу в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга.

Цель исследования. Провести анализ цереброваскулярных, нейропротекторных и нейромедиаторных эффектов селективного анксиолитика афобазола.

Задачи исследования.

1. Изучение влияния афобазола и препаратов сравнения — пикамилона и нимодипина на регионарный мозговой кровоток и состояние микроциркуляции в коре головного мозга.

4. Изучение ГАМК-ергического механизма цереброваскулярного действия афобазола.

5. Изучение ГАМК-ергического механизма цереброваскулярного эффекта пикамилона.

7. Изучение влияния афобазола на активность каталазы - фермента антиоксидантной защиты в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга.

Научная новизна работы. Впервые проведено изучение влияния селективного анксиолитика афобазола на регионарное мозговое кровообращение и состояние микроциркуляции в коре головного мозга у интактных и ишемизированных животных. Выявлена способность афобазола в значительно большей степени, чем у интактных крыс усиливать кровоснабжение мозга в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга. Показано, что афобазол повышает выживаемость животных в условиях ишемии, вызванной перевязкой общих сонных артерий. Вместе с тем, препарат сравнения пикамилон увеличивает кровообращение интактного и ишемизированного мозга в одинаковой степени.

Установлен ГАМК-ергический механизм цереброваскулярного эффекта афобазола. Блокаторы ГАМК-рецепторов - бикукуллин и пикротоксин устраняют или значительно ослабляют влияние афобазола на мозговое кровообращение. Иная картина отмечена при изучении пикамилона, который проявляет цереброваскулярную активность на фоне действия бикукуллина и не оказывает сосудорасширяющего эффекта после введения пикротоксина.

Научно-практическая значимость работы. Выявленная в диссертационной работе способность афобазола усиливать кровоснабжение ишемизированного мозга и повышать выживаемость животных в условиях ишемии, вызванной перевязкой общих сонных артерий, указывает на выраженную цереброваскулярную и нейропротекторную активность препарата.

Обнаруженные в исследовании цереброваскулярные и нейропротекторные эффекты афобазола свидетельствуют о целесообразности рекомендовать клиническое изучение препарата в качестве средства для лечения больных с ишемическими поражениями головного мозга.

Заключение диссертационного исследования на тему "Анализ цереброваскулярных и нейропротекторных эффектов афобазола"

выводы

4. Выявлен ГАМК-ергический механизм цереброваскулярного эффекта афобазола, о чем свидетельствует значительное ослабление сосудистого эффекта препарата на фоне действия бикукуллина и пикротоксина.

5. Цереброваскулярное действие пикамилона не проявляется в условиях блокады хлорных каналов ГАМКд- рецептора пикротоксином и не угнетается бикукуллином.

6. Афобазол повышает устойчивость мембранных структур нейронов коры и стриатума к свободнорадикальным процессам, вызванным глобальной преходящей ишемией головного мозга. В этих условиях препарат увеличивает в коре активность каталазы — фермента антиоксидантной защиты.

Ill

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В большинстве стран ведущее место среди основных причин смертности и инвалидизации населения занимают нарушения мозгового кровообращения. В Российской Федерации ежегодно регистрируется более 450 ООО инсультов, в мире более 6 млн. В соответствии с этим, инсульт является чрезвычайно важной медицинской и социальной проблемой. В структуре цереброваскулярных расстройств соотношение ишемического и геморрагического инсультов составляет 85% к 15%. Однако, высокоэффективными лекарственными средствами для лечения больных с ишемическими поражения головного мозга клиницисты, к сожалению, не располагают. Поэтому продолжается интенсивный поиск новых фармакологических препаратов с нейропротекторной активностью.

В последние годы в ГУ НИИ фармакологии им. В.В.Закусова РАМН разрабатывается селективный анксиолитик афобазол, обладающий мембранотропной активностью, который согласно данным М.Г. Баласанян (2003) оказывает нейропротекторное действие при локальном ишемическом поражении, вызванном перевязкой средней мозговой артерии. На культуре нейронов гиппокампа в условиях оксидативного стресса, вызванного перекисью водорода, и воздействием глутамата также показан защитный эффект афобазола (Т.А. Zenina et al., 2005).

Вышеизложенное явилось основанием для систематического изучения нейропротекторных свойств афобазола, так как многие стороны механизма действия препарата продолжают оставаться невыясненными. В частности, отсутствуют сведения о влиянии препарата на мозговое кровообращение, тогда как цереброваскулярный компонент играет существенную роль в нейропротекции.

Исследование было начато с изучения влияния афобазола на регионарный мозговой кровоток и состояние микроциркуляции в коре головного мозга. Активность афобазола сопоставляли с известными цереброваскулярными препаратами, которые получили широкое применение в неврологической практике — пикамилоном и нимодипином.

В первой серии опытов исследовали влияние афобазола в дозах 1, 5 и 10 мг/кг на приток крови в головной мозг крыс по внутренней сонной артерии. В указанных дозах афобазол вызывал увеличение мозгового кровотока (МК) в среднем на 10-11%. Наиболее стабильные результаты были получены при использовании препарата в дозе 5 мг/кг, которая была выбрана для дальнейших исследований. Эксперименты позволили установить, что афобазол в дозе 5 мг/кг вызывает усиление мозгового кровотока в среднем на 11,0+2,4% (п=16). В большинстве опытов под влиянием препарата наблюдалось двухфазное изменение мозгового кровотока: сразу же после введения препарата у 14 животных регистрировалось резкое кратковременное (1- 3 минуты) снижение кровотока, а затем увеличение практически у всех крыс (п=15). Длительность эффекта у большинства крыс (п= 9) составило 5-15 минут, а у остальных животных - 30-60 минут. Сразу же после введения афобазола уровень артериального давления кратковременно снижался в среднем на 33,0 ± 2,6%, что, возможно, определяло первоначальное снижение уровня регионарного мозгового кровотока. Аналогичное увеличение регионарного мозгового кровотока под влиянием афобазола (5 мг/кг, внутривенно) наблюдалось и у кошек (на 15,0 ± 1,1%).

В отдельной серии опытов было изучено влияние афобазола на микроциркуляцию (локальный мозговой кровоток) в коре головного мозга крыс (п=20). У большинства крыс (п=16) после введения препарата наблюдалось увеличение локального мозгового кровотока в среднем на 19,4±2,9%. Длительность цереброваскулярного эффекта составляла 10-15 минут. У 9 крыс наблюдалось повторное повышение уровня кровотока с 30-40 минуты после введения препарата. На артериальное давление афобазол оказывал неодинаковое действие, снижая (на 21%), либо повышая (на 37%) его уровень.

Следовательно, афобазол вызывает увеличение мозгового кровотока у интактных крыс и кошек, которое, по-видимому, не связано с влиянием препарата на артериальное давление, о чем свидетельствует разнонаправленность изменений этих показателей.

Исследования по изучению влияния препаратов сравнения на состояние микроциркуляции в коре головного мозга интактных крыс позволили установить следующее. Пикамилон, который исследовали в дозе 10 мг/кг, вызывает увеличение локального мозгового кровотока у всех крыс (п=16) в среднем на 17±3 % (рис.1). Одновременно под влиянием препарата наблюдается снижение артериального давления в среднем на 21 ±4 %. Изучали также влияние нимодипина на приток крови в мозг через внутреннюю сонную артерию у крыс с использованием ультразвукового флоуметра. В этих опытах было показано, что нимодипин увеличивает регионарный мозговой кровоток в среднем на 36±8,5 % (п =9). Цереброваскулярный эффект нимодипина преимущественно развивается сразу же после введения и достигает максимальных значений на 2-5 минутах. У большинства крыс нимодипин понижает уровень артериального давления в среднем на 15±4,5 %.

Проведенные опыты позволили установить, что афобазол вызывает увеличение регионарного мозгового кровотока и улучшает состояние микроциркуляции в коре головного мозга. По цереброваскулярной активности афобазол не отличается от пикамилона, но существенно уступает нимодипину.

Учитывая возможные различия цереброваскулярных эффектов препаратов в зависимости от исходного состояния животных, в частности, от ишемического поражения мозга представлялось важным исследовать влияние афобазола на состояние микроциркуляции в коре головного мозга крыс в условиях глобальной преходящей ишемии. Опыты показали, что афобазол (5мг/кг, внутривенно), введенный через 45 минут после ишемии, в большинстве экспериментов вызывал значительное увеличение локального мозгового кровотока в среднем на 40±9,3%. Изменения артериального давления под влиянием афобазола в условиях ишемии также не отличались однородностью.

В этих же условиях исследовался препарат сравнения пикамилон. Он при ишемическом поражении мозговой ткани вызывает повышение локального мозгового кровотока у всех крыс в среднем на 23±3 %. В условиях ишемии пикамилон оказывает неодинаковое влияние на артериальное давление.

Таким образом, проведенные эксперименты показали, что афобазол вызывает увеличение мозгового кровотока, которое в значительно большей степени выражено у крыс, перенесших глобальную преходящую ишемию мозга. Разница статистически значима при Р<0,01. Что касается пикамилона, то достоверных различий цереброваскулярного эффекта препарата у интактных крыс и животных в условиях ишемии не было выявлено. Нимодипин также в одинаковой степени увеличивает мозговое кровообращение у интактных и ишемизированных животных (В.В. Александрии и соавт., 2002).

Далее в специальной серии опытов для оценки нейро протекторного эффекта афобазола было изучено влияние препарата на выживаемость крыс в условиях ишемии, вызванной перевязкой общих сонных артерий. Эксперименты показали, что афобазол, введенный внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг за 30 минут до перевязки общих сонных артерий, повышает выживаемость животных. Если в контроле (п= 10) через 24 часа в результате ишемии мозга погибло 30 % крыс, то под влиянием афобазола (п= 10) выжили все животные. Аналогичные результаты были получены и в опытах с пикамилоном.

Полученные данные о более выраженной цереброваскулярной активности афобазола у ишемизированных животных и способности препарата повышать выживаемость животных при ишемии, согласуются с результатами исследований М.Г. Баласанян (2003), свидетельствующими о нейропротекторной активности препарата в опытах с локальной ишемией, вызванной окллюзией средней мозговой артерии, а также с данными о защитном эффекте афобазола на культуре нейронов гиппокампа в условиях оксидативного стресса, вызванного перекисью водорода, и глутаматной токсичности (Т.А. Zenina et al., 2005). Можно полагать, что в реализации нейропротекторного эффекта афобазола цереброваскулярный компонент его действия играет существенную роль.

Следующим этапом исследований явилось изучение нейромедиаторного механизма действия афобазола. В первую очередь наше внимание привлекла система ГАМК, потому что афобазол в опытах ex vivo предотвращает снижение бензодиазепиновой рецепции, восстанавливая чувствительность мембран к ГАМК и ионам хлора. Вместе с тем, известно, что система ГАМК играет важную роль в реализации нейропротекторного и цереброваскулярного эффектов фармакологических средств при ишемическом поражении головного мозга. Поэтому было проведено исследование, направленное на выяснение роли ГАМК-ергической системы в реализации цереброваскулярного и нейропротекторного действия афобазола и препарата сравнения - пикамилона. В соответствии с этим, цереброваскулярная активность препаратов исследовалась на фоне действия бикукуллина и пикротоксина, которые являются соответственно конкурентным и неконкуретным антагонистами ГАМКд — рецепторов.

В серии опытов было изучено влияние бикукуллина на цереброваскулярный эффект афобазола. На фоне блокатора ГАМКд -рецепторов препарат в дозе 5 мг/кг вызывал увеличение мозгового кровотока в среднем на 11,4± 2,7%. (в контроле на 20,4+ 2,9%, разница статистически значима при Р<0,05).

Далее было изучено влияние афобазола на мозговое кровообращение в условиях блокады хлорного канала ГАМКд-рецептора пикротоксином. В этих условиях афобазол вызывал увеличение мозгового кровотока в среднем на 10,6±2,7% ( в контроле на 22,8±3,4 %, разница статистически значима при Р<0,05)

Далее на фоне блокады ГАМКд - рецепторов был изучен цереброваскулярный эффект пикамилона. На фоне блокатора ГАМК-рецепторов - бикукуллина пикамилон вызывал увеличение мозгового кровотока в среднем на 15,9 ± 2,7 % (в контроле на 23,6 ± 7,3 %). Статистически значимых различий между влиянием пикамилона на кровоснабжение мозга интактных крыс и на фоне блокады ГАМК-рецепторов бикукуллином выявлено не было. Имеет место лишь тенденция к ослаблению цереброваскулярного эффекта пикамилона в этих условиях.

Иная картина наблюдалась в следующей серии опытов, когда цереброваскулярный эффект пикамилона был исследован в условиях блокады хлорного канала ГАМКд - рецепторов пикротоксином. Оказалось, что на фоне действия анализатора пикамилон увеличил мозговой кровоток лишь на 7,9± 3,5 % (в контроле на 41,4 ± 10,4%, разница статистически значима при Р<0,01).

Таким образом, цереброваскулярный эффект афобазола на фоне действия бикукуллина или пикротоксина существенно ослабляется, что свидетельствует о важной роли системы ГАМК в реализации действия препарата. По-видимому, выявленный нами механизм действия афобазола лежит в основе и его нейропротекторной активности. Полученные данные о способности бикукуллина и пикротоксина устранять или существенно ослаблять цереброваскулярное действие афобазола согласуются с результатами опытов ex vivo, указывающих на то, что афобазол предотвращает снижение ГАМК-бензодиазепиновой рецепции у животных с выраженной реакцией страха. (С.Б.Середенин и соавт. 1998). Эксперименты с пикамилоном позволили выявить следующее. Цереброваскулярный эффект препарата не претерпевает существенных изменений в условиях блокады ГАМК-рецепторов бикукуллином. Вместе с тем, на фоне действия пикротоксина имеет место блокада или значительное снижение цереброваскулярной активности пикамилона. Следовательно, в реализации цереброваскулярного эффекта пикамилона важную роль играет его влияние на проводимость хлорного канала ГАМКд- рецептора.

Известно, что одним из наиболее важных звеньев в развитии ишемического повреждения ткани мозга является окислительный стресс, так как головной мозг является высокочувствительным к свободнорадикальному окислению органом, вследствие того, что его мембранные структуры богаты полиненасыщенными жирными кислотами. Они являются прямой мишенью для свободнорадикального повреждения и в то же время в мозге в сравнении с другими органами и тканями активность антиоксидантной системы ниже. В норме антиоксидантная система уравновешивает действие прооксидантной, в условиях же ишемического повреждения равновесие этих систем нарушается и смещается в сторону увеличения функции последней. Выявлены различия в чувствительности различных структур головного мозга к ишемическому поражению. Наиболее чувствительными оказались стриатум и гиппокамп. На различных моделях ишемии в стриатуме и гиппокампе, в отличие от коры мозга, обнаружено значительное снижение активности антиоксидантных ферментов (каталазы, супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы) (P. Calabresi et al., 2002; Н. М. Homi, 2002; S. Bare et al., 2004).

В соответствии с вышеизложенным, а также на основании полученных нами данных о выраженной цереброваскулярной и нейропротекторной активности афобазола, представляло большой интерес изучить его влияние на состояние свободнорадикального окисления и активность антиоксидантного фермента — каталазы в коре головного мозга и стриатуме в условиях глобальной преходящей ишемии. В соответствии с тем, что широко используемая характеристика состояния мембранных структур клетки по исходному уровню продуктов свободнорадикального окисления не всегда отражает истинную картину патологических изменений (М. Janssen et al., 1993; P. Cogrel et al., 1993, F. Sabeh et al., 1995), исследовалась скорость накопления продуктов свободнорадикального окисления при его индукции in vitro аскорбиновой кислотой (Т.Г. Сазонтова, 1998).

Для оценки накопления продуктов свободнорадикального окисления и активности каталазы животных разделили на 3 группы: 1) контроль - «ложнооперированные» крысы; 2) крысы, перенесшие глобальную преходящую ишемию; 3) животные, которым через 30 минут после ишемии вводили афобазол (5 мг/кг, внутривенно).

У крыс, перенесших ишемию головного мозга, в коре через 30 и 60 минут после индукции свободнорадикального окисления наблюдалось статистически значимое увеличение концентрации продуктов окисления в 1,8 раза и в 1,4 раза соответственно по сравнению с контрольными животными. У животных, которым через 30 минут после ишемии вводили афобазол, наблюдалась тенденция к снижению скорости накопления продуктов свободнорадикального окисления. Следовательно, афобазол, введенный после ишемии, снижает ее повреждающее действие.

В стриатуме ситуация отличается от коры. Так, после индукции наблюдалось снижение в 1,3 раза по сравнению с контролем интенсивности свободнорадикального окисления у животных, перенесших ишемию. Этот факт свидетельствует о сильном повреждении мембран нейронов этой структуры мозга. Мембранные структуры стриатума богаты полиненасыщенными жирными кислотами, которые являются субстратом окисления для свободных радикалов и легко взаимодействуют с ними. Нами показано, что в данной ситуации неповрежденных полиненасыщенных жирных кислот мало, в связи с чем уровень окисления при его индукции in vitro при ишемии ниже, чем в контроле. У крыс, которым был введен афобазол, этот параметр был также снижен, однако, наблюдалась тенденция к его восстановлению. Полученные данные о повреждении стриатума и коры после глобальной ишемии соответствуют литературным данным (S. Islekel et al., 1999; Н. М. Homi et al., 2002; F. Bare, 2004). Таким образом, афобазол снижает повреждающее действие ишемии на мембранные структуры нейронов данных отделов мозга.

В следующей серии опытов исследовалось влияние афобазола (5 мг/кг, внутривенно) на активность антиоксидантного фермента -каталазы в коре головного мозга и стриатуме в условиях глобальной преходящей ишемии. Опыты показали, что в коре на фоне увеличения интенсивности свободнорадикальных процессов наблюдается увеличение активности и антиоксидантного фермента каталазы на 53% по сравнению с контролем. Полученные результаты согласуются с данными литературы (Т.Г. Сазонтова, 1998; Н. М. Homi et al., 2002). Афобазол увеличивает активность фермента на 73% по сравнению с контролем (разница статистически значима при Р<0,05).

При изучении активности каталазы в стриатуме при ишемии у крыс было обнаружено снижение активности фермента на 30 %. Эти данные указывают на значительное поражение данной области головного мозга. После введения афобазола уровень активности каталазы в этой структуре не отличался от ишемизированного мозга.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о способности афобазола повышать устойчивость мембранных структур нейронов коры и стриатума к свободнорадикальным процессам после глобальной преходящей ишемии головного мозга. Афобазол в условиях ишемического поражения вызывает дальнейшее увеличение активности фермента антиоксидантной защиты - каталазы в коре по сравнению с ишемией, что является одним из механизмов защитного эффекта афобазола при ишемическом повреждении мозга.

Следовательно, афобазол в условиях глобальной преходящей ишемии мозга влияет на мембранные структуры и активность каталазы нейронов коры и стриатума. Повышение под влиянием афобазола устойчивости ткани мозга к свободнорадикальным процессам играет существенную роль в реализации нейропротекторного действия препарата.

Таким образом, афобазол вызывает повышение мозгового кровообращения, которое выражено в значительно большей степени в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга. Препарат существенно повышает выживаемость крыс при ишемии, вызванной перевязкой сонных артерий, что подтверждает ранее полученные данные о нейропротекторных свойствах афобазола. Нейромедиаторный анализ позволил установить ГАМК-ергический механизм в реализации цереброваскулярного эффекта афобазола. Обнаружена способность афобазола повышать устойчивость мембранных структур коры и стриатума к свободнорадикальным процессам и увеличивать активность каталазы - фермента антиоксидантной защиты в условиях глобальной преходящей ишемии головного мозга.

Полученные в работе данные позволяют рекомендовать клиническое изучение препарата в качестве средства лечения больных с ишемическими поражениями головного мозга.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Силкина, Ирина Владимировна

1. Аведисова А.С. Особенности психофармакогерапии больных с пограничными психическими расстройствами (клинико-фармакологическое изучение действия антидепрессантов, ноотропов, гипнотиков). // Дис. докт. мед. наук. М. - 1999. - 313 с.

2. Акопян В.П. Нейроактивные аминокислоты и мозговое кровообращение. // Автореферат дисс. докт. мед. наук. Казань. -1977.

3. Акопян В. П. Участие системы ГАМК в адаптационной перестройке мозгового кровообращения в условиях гипокинезии. // Эксперим. и клин, фармакол. 2003. - Т. 66. - №3. - С. 4-9.

4. Акопян В.П., Бадалян JI.C. О некоторых механизмах действия пирацетама на мозговое кровообращение. // Фармакол и токсикол. — 1987-№ 1.-С. 38-41.

5. Акопян В. П., Мелконян К. В., Тадевосян Ю. В., Батикян Т. Б. Влияние ГАМК на фофоинозитидный цикл и модификации мембранных липидов синаптосом мозга крыс в условиях гипокинезии. // Эксперим. и клин, фармакол. 2003. - Т. 66. - №5. — С. 6-10.

6. Александровский Ю.А. // Клиническая фармакология транквилизаторов. М. - Медицина. - 1973.

7. Александровский Ю.А., Покровский М.В., Незнамов Г.Г. // Неврозы и перекисное окисление липидов. М. — Наука.- 1991. - 141с.

8. Александровский Ю.А., Барденштейн JI.M., Аведисова А.С. // Психофармакотерапия пограничных психических расстройств. М. - 2000. -249 с.

9. Ю.Бадыштов Б.А., Косенков Е.И., Середенин С.Б. // Бюлл. экспер. биол. 1988.-№3.-С. 289-291.

10. Баласанян М.Г. Тезисы докладов 2-го съезда Российского научного общества фармакологов, «Фундаментальные проблемы фармакологии». 2003. - Т. 1. - С. 57.

11. Баласанян М.Г. Изучение роли оксида азота в механизмах нейропротекторного и анксиолитического действия афобазола в сравнительном аспекте. // Дис. д-ра фарм. наук. — Ереван. 2003.

12. Бендиков Э.А., Шмуйлович Л.М., Копелевич В.М. О влиянии □-аминомасляной кислоты, никотиноил П-аминомасляной кислоты и ее этилового эфира на центральные процессы формирования сосудо-двигательных рефлексов. // Бюлл. экспер. биол. - 1972. - №1. - С. 6569.

13. М.Бендиков Э.А., Копелевич В.М., Шмуйлович JI.M. Пикамилон -новый цереброваскулярный и ноотропный препарат. Результаты эксперим. и клинич. изучения. // Тез. Всес. конф. г. Уфа. ВНИИСЭИТИ. М. - 1989.- С. 31-37.

14. Буров Ю.В., Жуков В.Н. Пикамилон новый цереброваскулярный и ноотропный препарат. Результаты эксперим. и клинич. изучения. // Тез. Всес. конф. Уфа. ВНИИСЭИТИ. - М. - 1989. - С. 69-74.

15. Вальдман А.В., Александровский Ю.А. // Психофармакотерапия невротических расстройств. М. - Медицина.- 1987. - 288 с.

16. Вальдман А.В., Козловская М.М., Медведев Д.С. // Фармакологическая регуляция эмоционального стресса. М. -Медицина. - 1979.- 359 с.

17. Вальдман А.В., Мартынихин А.В. Исследование действия психотропных средств на психофизические характеристики операторской деятельности в условиях эмоционального напряжения. // В кн.: Фармакологическая коррекция процессов утомления. М. -1982. - С.83-97.

18. Верещагин Н.В., Суслина З.А., Гераскина JI.A., Фонякин Ф.В. Антигипертензивная терапия при сосудистой патологии мозга: успехи, спорные и нерешенные вопросы. // Кремлевская медицина Клинический вестник —2003. -№2.-С. 7-10.

19. Виглинская, С. Б. Середенин, JI. Г. Колик. Исследование потребления этанола и антиалкогольных эффектов афобазола у MR и MNRA крыс. // Эксперим. и клин, фармакол. 2000. - Т. 63. - № 3. - С. 52-55.

20. Виноградова О.С. Нейронаука конца второго тысячелетия: смена парадигм. // Журн. высш. нервн. деят. 2000. - Т.50. - №.5. - С. 743774.

21. Вихляев Ю.И., Клигул Т.А. Ж. // Невропат, и психиатр. 1966, - Т. 66.- С. 123-129.

22. Воронина Т.А., Неробкова JI.H., Маркина Н.В. и др. Возможные механизмы действия мембраноактивных веществ с антиоксидантными свойствами в экстремальных ситуациях.// В сб.: Клеточные механизмы реализации фармакологического эффекта. М.- 1990 С. 54-77.

23. Ганьшина Т.С. ГАМК-ергические механизмы цереброваскулярных эффектов феназепама и диазепама. // Бюлл. экспер. биол. и мед. -1980.- №10.-С. 439-442.

24. Гусев Е.И., Скворцова В.И. // Ишемия головного мозга. М. -Медицина. - 2001.

25. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Мартынов М.Ю., Камчатнов П.Р. Острый мозговой инсульт. // Кремлевская медицина Клинический вестник — 2003. №2. -стр.10-15.

26. Дунаев В.В., Башкин И.Н., Тишкин B.C. и др. Пикамилон новый цереброваскулярный и ноотропный препарат. Результаты эксперим. и клинич. изучения. // Тез. Всес. конф. г. Уфа. ВНИИСЭНТИ. - М. -1989.- С. 51-59.

27. Дунаев В.В., Башкин И.Н., Тихоновский А.В. Пикамилон в современной неврологичесюй и психиатрической практике. // Материалы Российской конф. М. - 1994. - С. 31-33.

28. Жанатаев А. К., Дурнев А. Д., Середенин С. Б. Изучение антимутагенной активности афобазола in vivo. // Эксперим. и клин, фармакол. 2000. - Т. 63. - № 2. - С. 57-60.

29. Жанатаев А.К., Дурнев А.Д., Кулакова А.В. Тезисы докладов 3-ей Межд. конф. «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам». 15-18 мая 2001, Суздаль, стр.57.

30. Кожечкин С.Н. Сравнительная электроэнцефалографическая оценка анксиолитиков афобазола и диазепама на имбредных крысах линий MR и MNRA с разным уровнем тревожности. // Эксперим. и клин, фармакол. 2003. - Т. 66. - № 3. - С. 38-41.

31. Косицина А.Ф. Изучение действия ГАМК и ее производных на мозговое кровообращение. // В книге «Фармакология и клиника гамма- аминомаслянной кислоты и ее аналогов» под ред. Ковалева Г.В. -Волгоград. 1979. - С. 99-105.

32. Кругликова-Львова Р.П., Колер М.А., Мирзоян Р.С. Пикамилон — новый вазоактивный ноотропный препарат. // Хим. фарм. ж. 1989. -№2. - С. 252-255.

33. Луньшина Е.В., Ганьшина Т.С., Мирзоян Р.С. Цереброваскулярные эффекты композиции, содержащей пироглутаминовую кислоту и пирролидон. // В сб. «Методология флоуметрии». М. - 2001 - вып. 5. -С. 143-151.

34. Луньшина Е.В., Ганьшина Т.С., Мирзоян Р.С. Влияние лекарственной композиции, содержащей пироглутаминовую кислоту и пирролидон, на мозговое кровообращение. // Эксперим. и клин, фармакол. 2002. - Т. 65. - №3 - С. 3-5.

35. Манукян А.А. Участие системы ГАМК в адаптационной перестройке мозгового кровообращения в условиях гипокинезии. // В сб. науч. тр., поев. 70-летию Ереванского гос. мед. универс. Ереван. - 2000. - С. 480-482.

36. Машковский М.Д., Плешаков М.Г., Альшулер Р.А., Скачилова С.Я. Новый нейротропный препарат аминалон. // Хим.- фарм. ж. 1975. -Т.9. - №9. - С. 21-25.

37. Мирзоян Р.С. Пути фармакологической регуляции мозгового кровообращения // Эксперим. и клин, фармкол. 1995. - Т. 58. - №4. -С. 3-7.

38. Мирзоян Г.И., Азарян Д.Т., Нагапетян И.О. К вопросу влияния ГАМК принарушениях мозгового кровообращения. // Ж. экспер. и клин. мед. 1970. - Т. 10.-№5.-С. 45-51.

39. Мирзоян Р.С., Ганьшина Т.С., Косарев И.В., Бендиков Э.А. Влияние диазепама и феназепама на нервную регуляцию мозгового кровобращения. // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1980. - №9. - С. SOS-SOS.

40. Мирзоян Р.С., Ганьшина Т.С. Пикамилон новый цереброваскулярный и ноотропный препарат. Результаты зксперим. и клинич. изучения // Тез. Всес. конф. г. Уфа. ВНИИСЭНТИ. - М. -1989. - С. 21-25.

41. Мирзоян Р.С., Ганьшина Т.С. Цереброваскулярные эффекты пирацетама, дигидроэрготоксина и пикамилона. // В сб. трудов НИИ фармакологии АМН СССР «Фармакология ноотропов». М. - 1989. -С. 75-83.

42. Мирзоян Р.С., Ганьшина Т.С., Косой М.Ю., Александров П.А., Александрии В.В. Влияние пикамилона на кровоснабжение коры и микроциркуляцию в системе пиальных артериол. // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1989.- №5. . С. 581-582.

43. Мирзоян Р.С., Ганьшина Т.С., Романычева Н.А. Пикамилон в современной неврологической и психиатрической практике. // Материалы Российской конф. М.- 1994. - С. 23-26.

44. Мирзоян С.А., Акопян В.П. Эффекты у-аминомаслянной кислоты и ее производных на мозговое кровообращение. // В сб.: Фармакология и химия. 1965.- С. 210-211.

45. Мирзоян С.А., Акопян В.П. Влияние ГАМК на мозговое кровообращение. // Доклады АН Арм. ССР. 1966.- Т. 42. - №2. - С. 53-60.

46. Мирзоян С.А., Акопян В.П. Влияние у-аминомаслянной кислоты на мозговое кровообращение и кислородное напряжение в мозге. // Фармакол. и токсикол. 1967.- №5. - С. 572-574.

47. Мирзоян С.А., Казарян Б.А., Акопян В.П. Декарбоксилазная активность глутаминовой кислоты в сосудах мозга. // Доклады АН СССР- 1970.-Т. 190.-№5.-стр. 1241-1243.

48. Мирзоян С.А., Акопян В.П., Топчан А.В. О роли ГАМК и ее превращений в регуляции мозгового кровообращения. // В кн. «Вопросы биохимии мозга». Ереван. — 1979. - С. 279-293.

49. Мирзоян С.А., Казарян Б.А., Акопян В.П. Содержание и некоторые превращения аминокислот в тканях стенок артерий мозга. // Доклады АН СССР 1974. - Т. 214. - № 2. - С. 465-468.

50. Морозов И.С. Жирнов Е.Н., Епишкин Т.К. // Функциональное состояние человека и методы его исследования. М. - 1992. — С. 3-8.

51. Незнамов Г.Г., Сюняков С.А., Чумаков Д.В., Бочкарев В.К., Середенин С.Б. Результаты клинического изучения селективного анксиолитика афобазола. // Эксперим. и клин, фармакол. — 2001. -Т.64. №2.-С. 15-19.

52. Петелин Л.С., Гольденберг Л.И. Опыт внутривеннного введения препарата гаммалон в остром периоде нарушения мозгового кровообращения. // В сб.: Диагностика, лечение и профилактика нарушений мозгового кровообращения. М. - 1971. - С. 212-213.

53. Петелин JI.C., Пигарев В.А. Применение препарата гаммалон при нарушениях мозгового кровообращения. // В сб.: Диагностика, лечение и профилактика нарушений мозгового кровообращения. М. - 1971.-С. 213-215.

54. Рожнова С.А., Гаевый М.Д., Ковалев Г.В. Пикамилон новый цереброваскулярный и ноотропный препарат. Результаты эксперич. и клинич.изучения. // Тез. Всес. конф. г. Уфа. ВНИИСЭИТИ. - М. -1989. -С. 43-50.

55. Рябцева Е.Н. Флоуметры фирмы «Transonic System Inc.» // В сб. «Методология флоуметрии.», Москва. 1998. - С.7-19.

56. Сазонтова Т.Г. Мембранная адаптация при развитии резистентности к факторам внешней среды. // Автореф. Дис. Докт. биол. наук. — М. — 1998.-48 с.

57. Семьянов А.В. ГАМК-эргическое торможение в ЦНС: типы ГАМК-рецепторов и механизмы тонического ГАМК опосредованного тормозного действия. // Нейрофизиология. - 2002. - Т.34. - №.1. - С. 82-92.

58. Семьянов А. В. Диффузная внесинаптическая нейропередача посредством глутамата и ГАМК // Журн. высш. нервн. деят. 2004. -Т. 54. -№1.-С. 68-84.

59. Середенин С.Б. Генетические аспекты изучения эффектов феназепама. // В кн.: Феназепам под редакцией А.В. Богатского. К. -Наукова думка.- 1982.

60. Середенин С.Б., Бадыштов Б.А. // Бюлл. экспер. биол. 1985. - №11. -С. 586-588.

61. Середенин С.Б., Бадыштов Б.А., Егоров Д.Ю. Исследование содержания продуктов перекисного окисления липидов у инбредных мышей с различным типом эмоционально-стрессовой реакции. //

62. Бюллютень экспериментальной биологии и медицины 1989. - N7. -С.46-48.

63. Середенин С.Б., Ведерников А.А. Влияние психотропных препаратов на поведение инбредных мышей в условиях эмоционального стресса. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 1979. - N6.-С. 76-89.

64. Середенин С.Б., Воронина Т.А., Незнамов Г.Г. Фармакогенетическая концепция анксиоселективного эффекта. // Вестник РАМН. 1998. -№11.- С.3-9.

65. Середенин С.Б., Дурнев А.Д. // Фармакологическая защита генома. -М.-1992. 160 с.

66. Скворцова В.И. Медицинская и социальная значимость проблемы инсульта. // Качество жизни. Медицина. 2004. - Т.7. - №4. - С. 1012.

67. Сорокина Н.Д., Селицкий Г.В., Косицын Н.С., Свинов М.М. Нейробиологические аспекты ишемии мозга и постинсультной эпилепсии. // Журн. высш. нервн. деят. 2002 - Т.52. - №6. — С. 656664.

68. Рябцева Е.Н. Флоуметры фирмы «Transonic System Inc.» // В сб.: Методология флоуметрии. М. - 1998. - С.7-19.

69. Топчян А.В. Фармакологическая коррекция кровоснабжения и функционального состояния мозга при его локальном ишемическом поражении. // Автореф. дис. д-ра мед. наук. М. - 1998. - 47 с.

70. Цырлин В.А. Бульбарный вазомоторный центр — морфофункциональная и нейрохимическая организация. // Артериальная гипертензия. 2003. -Т. 9. - № 3. - С. 3-10.

71. Abel M.S., McCandless D.W. Elevated gamma-aminobutyricacid levels attenuate the metabolic response to bilateral ischemia. // J. Neurochem. -1992. V.58.-P. 740-744.

72. Akininci M.K., Schofield P.R. Widespread expression of GABAa receptor subunits in peripheral tissues. // Neurosci. Res. 1999. - V. 35 - P. 145153.

73. Alicke В., Schwarth-Bloom R.D. Rapid down-regulation of GABAa receptors in gerbils hippocampus following cerebral ischemia. // J. Neurochem. 1995. - V. 65. - P. 2808-2811.

74. Allen A.M. Inhibition of the hypothalamic paraventricular nucleus in spontaneously hypertensive rats dramatically reduces sympathetic vasomotor tone. // Hypertension. 2002 - V.39. - P. 275-280.

75. Antonaccio M.J., Halley J. Inhibition of centrally-evoked pressor responses by diazepam: evidence for an exclusively supramedullary action. // Neuropharmacol. 1975 - V. 14. - № 9 - P. 649-657.

76. Antonaccio M.J., Taylor D.G. Involvement of cenrtral GABA receptors in the regulation of blood pressure and heart rate of anesthetized cats. // Europ. J. of Pharmacol. 1977. - V. 46. - P. 283-287.

77. Bare S., Ingrand S.S., Fauconneau В., Page G., Piriou A.,.Barrier L. Effect of ischemia on TBARS and lactate production in several cerebral regions of anaesthetised and awake rats. // Life Sci. -2004. V. 74. - № 25.-P. 3103-3113.

78. Bickler P.E., Warner D.S., Stratmann G., Schuyler J.A. y-Aminobutyric Acid-A Receptors Contribute to Isoflurane Neuroprotection in Organotypic Hippocampal Cultures. // Anesth. Analg. 2003. - V. 97. - P. 564-571.

79. Buyukuysal R.L. Ischemia and reoxygenation of induced amino acid release and tissue damage in slices of rat corpus striatum. // Amino acids. 2004. - V.27. - № 1. - P. 57-67.

80. Bormann J., Feigenspan A. GAB Ac receptors. // Trends Neurosci. 1995. -V. 18.-P. 515-519.

81. Bormann J. The "ABC" of GABA receptors. // Trends Pharmacol. Sci.-2000.- V. 21. № 1 - P. 16-19.

82. Buresova O., J. Bures. Piracetam-induced facilitation of interhemispheric transfer of visual information in rats. // Psychopharmacol. 1976. - V.46. -№1. - P. 93-102.

83. Burt D.K., Kamatchi G.L. GABA a receptor subtypes: from pharmacology to molecular biology. // FASEB. J. 1991 - V.5 - P. 2916-2923.

84. Calabresi P., Saulle E., Centonze D., Pisani A., Marfia G. A., Bernardi G. Post-ischaemic long-term synaptic potentiation in the striatum: a putative mechanism for cell type-specific vulnerability. // Brain. 2002. - V. 125. -№4.-P. 844-860.

85. Chai C.Y., Wang S.C. Cardiovascular action of diazepam in the cat. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1978. - V. 154 - P. 271-280.

86. Choi D. W. Calcium: still center-stage in hypoxic-ischemic neuronal death. // Trends Neurosci. 1995. - V.18. - P. 58-60.

87. Choi D.W. Glutamate receptors and the induction of excitotoxic neuronal deth. // Prog.Brain Res. 1994. - V. 100. - P. 47-51.

88. Conti F., Minelli A., Melone M. GABA transporters in the mammalian cerebral cortex: localization, development and pathological implications. // Brain Res Rev. 2004. - V. 45. - № 3. - P. 196-212.

89. Costa C., Leone G., Saulle E., Pisani F., Bernardi G., Calabresi P. Coactivation of GABA (A) and GABA (B) receptors result in neuroprotection during in vitro ischemia. // Stroke. 2004. - V. 35. - № 2. -P. 596-600.

90. Cross A.J., Jones J.A., Baldwin H.A., Green A.R. Neuroprotective activity of chlormethiazole following transient forebrain ischaemia in the gerbil. // Br. J. of Pharmacol. 1991. - V. 104. - P. 406-411.

91. Cross A.J., Snape M.F., Green A.R. Chlormetethiazole antagonises seizures induced by N-methyl- DL-aspartate without interacting with the NMDA receptor complex. // Psychopharmacol. 1993. - V.112. - P. 403406.

92. Cross A.J., Stirling, J.M., Robinson, T.N., Bowen, D.M., Francis, P.T., Green, A.R. The modulation by chlormethiazole of the GABAA-receptor complex in rat brain. // Br. J. of Pharmacol. 1989. - V. 98. - P. 284-290.

93. De Deyn P.P., De Reuck J., Deberdt W., Vlietinck R., Orgogozo J.M. Treatment of the acute ischemic stroke with piracetam. // Stroke. 1997. -V. 28. - P. 2347-2352.

94. Devuyst G., Bogouslavsky J. Recent progress in drug treatment for acute stroke. // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1999. - V. 67. - P. 420 -425.

95. Dowden J., Reid C., Dooley P., Corbett D. Diazepam-induced neuroprotection: dissociating the effects of hypothermia following global ischemia. //Brain Res. 1999. - V. 829. - P. 1-6.

96. Edvinsson L., Krause D.N. Pharmacological characterization of GABA receptors mediating vasodilation of cerebral arteries in vitro. // Brain Res. -1979.-V. 173.-P. 89-97.

97. Eghbali M., Gage P.W., Birnir B. Pentobarbital modulates gamma-aminobutyric acid activated single-channel conductance in rat cultured hippocampal neurons. // Mol. Pharmacol. - 2000 - V. 58 - №3 - P. 463469.

98. Fergus A., Jin Y., Thai Q.A., Kassell N.F., Lee K.S. Vasodilatory actions of calcitonin gene-related peptide and nitric oxide in parenchymal microvessels of the rat hippocampus. // Brain Res. 1995. - V. 694. - P. 78-84.

99. Fergus A., Jin Y., Thai Q.A., Kassell N.F., Lee K.S. Tonic PKC-mediated vasoconstriction is unmasked when NOS is inhibited in cerebral microvessels.//Neuroscience. 1996. - V. 74. - P. 927-934.

100. Fox P.T., Raichle M.E. Focal physiological uncoupling of cerebral blood flow and oxidative metabolism during somatosensory stimulation in human subjects. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V. 83. - P. 11401144.

101. Fox P.T., Raichle M., Minutm M.S., Dence C. Nonoxidative glucose consumption during focal physiologic neural activity. // Science. 1988. -V. 241.-P.462-464.

102. Frahm C., Haupt C., Witte O.W. GABA neurons survive focal ischemic injury. // Neuroscience. 2004. - V. 127. - № 2. - P. 341-346

103. Frantseva M. V., Jose L., Velazquez P. and Carlan P. L. Changes in membrane and synaptic properties of thalamocortical circuitary caused by hydrogen peroxide. //J. Neurophysiol. 1998. - V. 80. - P. 1317-1326.

104. Fujiwara M., Muramatsu I. Gamma-Aminobutyric acid receptor on vascular smooth muscle of dog cerebral arteries. // Br. J Pharmacol. -1975.-V. 55.-P. 561-562.

105. Gadea A., Lopez-Colome A.M. Glial transporters for glutamate, glycine, and GAB A: II. GABA transporters // J. Neurosci. Res. 2001. V.63. № 6. P. 461-468.

106. Galeffi F., Sah R., Pond B.B., George A., Schwartz-Bloom R. D. Changes in Intracellular Chloride after Oxygen-Glucose Deprivation of the Adult Hippocampal Slice: Effect of Diazepam. // The J. of Neuroscience. 2004. - V. 24. - № 18. - P. 4478-4488;

107. Galeffi F., Sinnar S. and Schwartz-Bloom R. D. Diazepam promotes ATP recovery and prevents cytochrome с release in hippocampal slices after in vitro ischemia. // J. Neurochem. 2000. - V. 75. - P. 1242-1249.

108. Giusti P., Ducic I., Puia G., Arban R., WalSeries A., Guidotti A., Costa E. Imidazenil: a new partial positive allosteric modulator of y-aminobutyric acid (GABA) action at GABAa receptors. // J. Pharmacol. Exp. Therap. 1993. - V. 266. - P. 1018-1028.

109. Goodchild C.S. GABA receptors and benzodiazepines. // Br. J. Anaesth. -1993. V. 71. - P. 127-133.

110. Gragera R.R., Muciz E., Martinez-Rodriguez R. Electron microscopic immunolocalization of GABA and glutamic acid decarboxylase (GAD) in cerebellar capillaries and their microenvironment. // Cell. Mol. Biol. -1993.- V.39.-P. 809-817.

111. Green A. R. Clomethiazole (Zendra) in acute ischemic stroke: basic pharmacology and biochemistry and clinical efficacy. // Pharmacol. Ther. -1998.-V. 80.-P. 123-147.

112. Green A. R., Cross A. J., Snape M. F., De Souza R. J. The immediate consequences of middle cerebral artery occlusion on GABA synthesis inmouse cortex and cerebellum. // Neurosci. Lett. 1992. - V. 138. - P. 141144.

113. Green A.R., Hainsworth A. H. and Jackson D. M. GABA potentiation: a logical pharmacological approach for the treatment of acute ischaemic stroke. //Neuropharmacol. 2000. - V. 39. - P. 1483-1494.

114. Green A.R., Metz A., Minchin M.C.W., Vincent N.D. Inhibition of the rate of GABA synthesis in regions of rat brain following a convulsion. // Br. Journal of Ptharmacol. 1987. - V. 92. - P. 5-11.

115. Guo L.J., Qu L., Lee T.J. Effects of gamma-aminobutyric acid on isolated dog cerebral arteries. // Yao Xue Xue Bao. 1995. - V. 30. - №8. -P. 573-576.

116. Gupta M., Singal P.K. Time course of structure, function, and metabolic changes due to an exogenous source of oxygen metabolites in rat heart. // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1989. - V. 67. - № 12. - P. 15491559.

117. Gyenes M., Farrant M., Farb D.H. 'Run-down' of y-aminobutyric acidA receptor function during whole-cell recording: a possible role for phosphorylation. // Mol. Pharmacol. 1988. - V. 34. - P. 719-723.

118. Gyenes M., Wang Q., Gibbs T.T., Farb D.H. Phosphorylation factors control neurotransmitter and neuromodulator actions at the y-aminobutyric acid type A receptor. // Mol. Pharmacol. 1994. - V. 46. - P. 542-549.

119. Hall E.D., Fleck T.J., Oostveen J.A. Comparative neuroprotective properties of the benzodiazepine receptor full agonist diazepam and the partial agonist PNU-101017 in the gerbil forebrain ischemia model. // Brain Res. 1998. - V. 798. - P. 325-329.

120. Hagberg H., Lehmann A., Sandberg M., Nystrom В., Jacobson I. and Hamberger A. Ischemia-induced shift of inhibitory and excitatory amino acids from intra- to extracellular compartments. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1985. - V. 5. - P. 413-419.

121. Hamel E., Krause D.N., Roberts E. Specific cerebrovascular localization of glutamate decarboxylase activity. // Brain Res. 1981. - V. 223. P. 199-204.

122. Harata N., Wu J., Ishibashi H., Ono K., Akaike N. Run-down of the GABAa response under experimental ischaemia in acutely dissociated CA1 pyramidal neurones of the rat. //J. Physiol. 1997.- V. 500. - P. 673688.

123. Hendry S.H., Jones E.G., Beinfeld M.C. Cholecystokinin-immunoreactive neurons in rat and monkey cerebral cortex make symmetric synapses and have intimate associations with blood vessels. // Neurobiology. 1983. - V. 80. - P. 2400-2404.

124. Herman J.P., Mueller N.K., Figueiredo H. Role of GABA and glutamate circuitry in hypothalamo-pituitary-adrenocortical stress integration. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2004. - V. 1018. - P.35-45.

125. Homi H. M., Freitas J. S., Curi R., Velasco Т., Bonfim A. S. Changes in superoxide dismutase and catalase activities of rat brain regions during early global transient ischemia/reperfusion. // Neuroscience Letters. -2002. V.333 - P. 37-40.

126. Hui-Lin Pan. Brain angiotensin II and synaptic transmission. // The neurosientist. 2004. - V.10. - №5. - 422-431.

127. Iadecola C., Xu X. Nitro-L-arginine attenuates hypercapnic cerebrovasodilation without affecting cerebral metabolism. // Am. J. Physiol. 1994. - V. 266. - P. 518-525.

128. Inoue M, Oomura Y., Yakushiji Т., Akaike N. Intracellular calcium ions decrease the affinity of the GABA receptor. // Nature. 1986. - V. 324.-P. 156-158.

129. Inglefield J. R., Репу J.H., Schwarts R.D. Postischemic inhibition of GABA reuptake by tiagabine slows neuronal death in the gerbil hippocampus. // Hippocampus. 1995. - V.5. - P. 460-468.

130. Islekel S., Islekel H., Ozdamar N. Alteretion in superoxide dismutase, glutathion peroxidase and catalase activities in experimental cerebral ischemia-reperfusion. // Res. Exp. Med. -1999. — V.3. — P. 167-176.

131. Janssen M., Koster J.F., Bos E., de Jong J.W. Malondialdehyde and glutathione production in isolated perfused human and rat hearts. // Circ. Res 1993. - V. 73. - P. 681 - 688.

132. Johansen F.F., Diemer N.H. Enhancement of GABA neurotransmission after cerebral ischemia in the rat reduces loss of hippocampal CA1 pyramidal cells. // Acta Neurologica Scandinavica. 1991. - V.84. - P. 1-6.

133. Johansson B. Myogenic tone and reactivity: definitions based on muscle physiology. // J. Hypertens. 1989. - V. 7. - P. 5-8.

134. Johnson P.C. The myogenic response. // In: Handbook of Physiology: The Cardiovascular System. American Physiological Society. 1980. - V. 2. - P. 409-442.

135. Johnston G.A. GABAa receptor pharmacology. // Pharmacol. Ther. -1996. V. 69. - №3. - P. 173-198.

136. Kaila K. Ionic basis of GABAa receptor channel function in the nervous system. // Prog. Neurobiol. 1994. - V. 42. - P. 489-537.

137. Kanter E.D., Kapur A., Haberly L.B. A dendritic GABAa mediated IPSP regulates facilitation of NMDA-mediated responses to burst stimulation of afferent fibers in piriform cortex. // J. of Neuroscience. -1996.-V. 16.-P. 307-312.

138. Kanthan R., Shuaib A., Griebel R., Miyashita H. Intracerebral human microdialysis: in vivo study of an acute focal ischemic model of the human brain. // Stroke. 1995. - V. 26. - P. 870-873.

139. Kaye A.D., Hoover J.M., Baber S.R., Ibrahim I.N., Fields A.M. Analysis of gamma-aminobutyric acid-mediated responses in the pulmonary vascular bed of the cat. // Anesth. Analg. 2004. - V. 99. - №3. - P. 758-763.

140. Kelly P.T., Faulkner A.J., Burrow A.P. The effects of the GABA agonist muscimol upon blood flow in different vascular territories of the rat cortex. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1989. - V. 9. - P. 754-758.

141. Kelly P.T., McCulloch J. The effects of the GABAergic agonist muscimol upon the relationship between local cerebral blood flow and glucose utilization. // Brain Res. 1983. - V. 258. - P. 338-342.

142. Kerr D.B., Ong J., GABAB receptors. // Pharmacol. Ther. 1995. - V. 67. -P. 187-246.

143. Kevin S. GABAergic Regulation of Cerebral Microvascular Tone in the Rat., J. Cereb. Blood Flow Metab. 1997. - V. 17. - №9. . p. 992-1003.

144. Kikugawa K., Kojima Т., Yamaki,S., Kosugi H. Interaction of the thiobarbituric acid reactivity of rat liver and brain homogenates in the presence of ferric ion and ethylenediaminetetracetic acid. // Anal. Biolchem. -1992. V. 202. - P. 249-255.

145. Kobayashi M., Lust W.D., Passonneau J.V. Concentrations of energy metabolites and cyclic nucleotides during and after bilateral ischemia in the gerbil cerebral cortex. // J. Neurochem. 1977. - V. 29. - P. 53-59.

146. Krause D.N., Roberts E., Wong E., Degener P., Rogers K. Specific cerebrovascular localization of GABA-related receptors and enzymes. // Brain Res. Bull. 1980a. - V. 5. - P. 173-177.

147. Krause D.N., Wong E., Degener P., Roberts E. GABA receptors in bovine cerebral blood vessels: binding studies with 3H.muscimol. // Brain Res.- 1980b.-V. 185.-P. 51-57.

148. Lenniger-Follert E., Labbers D.W. Behavior of microflow and local P02 of the brain cortex during and after direct electrical stimulation. // Pflugers Arch. 1976. - V. 366. - P. 39-44.

149. Li H., Siegel R.E., Schwartz R.D. Rapid decline of GABAa receptor subunit mRNA expression in hippocampus following transient cerebral ischemia in the gerbil. // Hippocampus. 1993. - V. 3. - P. 527-537.

150. Lipton P. Ischemic cell death in brain neurons. // Physiol. Rev. 1999. -V. 79.-P. 1431-1568.

151. Lou H.C., Edvinsson L., MacKenzie E.T. The concept of coupling blood flow to brain function: revision required. // Ann. Neurol. 1987. - V. 22. - P. 289-297.

152. Luck H. Catalase. Methods of enzymatic analysis: N.-Y.: Verlag-Chemic Academic Press. -1963.- P. 387-395.

153. Lyden P.D. GABA and neuroprotection. // Int. Rev. Neurobiol. 1997. - V. 40. - P. 233-258.

154. Lyden P.D., Lonzo L. Combination therapy protects ischemic brain in rats. A glutamate antagonist plus a gammaaminobutyric acid agonist. // Stroke. 1994. - V. 25. - P. 189-196.

155. Lyden P., Shuaib A,. Ng K., Levin K., Atkinson R.P., Rajput A. Clomethiazole Acute Stroke Study in ischemic stroke (CLASS-I): final results. // Stroke. 2002. - V. 33. - P. 122-128,

156. MacGregor, D.G., Graham, D.I., Stone, T.W. The attenuation of kainate-induced neurotoxicity by chlormethiazole and its enhancement by dizocilpine, muscimol, and adenosine receptor agonists. // Experim. Neurol. 1997. - V. 148. - P. 110-123.

157. Madden K.P. Effect of gamma-aminobutyric acid modulation on neuronal ischemia in rabbits. // Stroke. 1994. - V.25. - 2271-2274.

158. Mainprize Т., Shuaib A., Ijaz S. et al. GABA concentrations in the striatum following repetitive cerebral ischemia. //Neurochem. Res. 1995. -V. 20.-P. 957-961.

159. Martina M., Kilic G. and Cherubini E. The effect of intracellular Ca on GABA-activated currents in cerebellar granule cells in culture. // J. Membr. Biol. 1994. - V. 142. - P. 209-216.

160. Marty A., Llano I. Modulation of inhibitory synapses in the mammalian brain. // Current Opinion in Neurobiology. 1995. - V. 5. - P. 335-341.

161. Mehta A.K., Ticku M.K. An update on GABA(A) receptors // Brain Res. Rev. 1999. - V.29. - № 2-3. - P. 196-217.

162. Mellander S. Functional aspects of myogenic vascular control. // J. Hypertens. 1989. - V. 7. - P. 21-30.

163. Mileson В. E., Ehrmann M. L. and Schwartz R. D. Alterations in the GABA-gated chloride channel following transient forebrain ischemia in the gerbil. // J. Neurochem. 1992. - V. 58. - P. 600-607.

164. Milner T.A., Pickel V.M., Morrison S.F., Reis D.J. Adrenergic neurons in the rostral ventrolateral medulla: ultrastructure and synaptic relations with other transmitte identified neurons. // Prog. Brain Res. 1989. - V. 81.-P. 29-47.

165. Mintz I.M., Bean B.P. GABA(B) receptor inhibition of P-type Ca2+ channels in central neurons // Neuron. 1993. - V.10. - № 5. - P. 889-898.

166. Mohler H., Fritschy J.M. and Rudolph U. A New Benzodiazepine Pharmacology. // J. Parmacol. Experiment. Therap. 2002. - V. 300. - № l.-P. 2-8.

167. Monasterolo L.A., Trumper L., Elias M.M. Reversal of benzodiazepine-induced renal vasculature relaxation with flumazenil. // Eur. J. Pharmacol. -2002. V. 2. - 449. - № 1-2. - P. 155-158.

168. Napoleone P., Erdo S., Amenta F. Autoradiographic localization of the GABAA receptor agonist 3H.muscimol in rat cerebral vessels. // Brain Res. 1987. - V. 423. - P. 109-115.

169. Napoleone P., Ferrante F., Amenta F. Evidence against the existence of GABAB receptor sites in rat cerebrovascular tree. // Pharmacol. Res. -1990.-V. 22.-P. 337-342.

170. Nitsch C., Goping, G., Klatzo, I., 1989. Preservation of GABAergic perikarya and boutons after transient ischemia in the gerbil hippocampal CA1 field. // Brain Res. V. 495. - P. 243-252.

171. Ohkuma, S., Chen, S.H., Katsura, M., Chen, D.Z., Kuriyama, K. Muscimol prevents neuronal injury induced by NMDA. Japanese J. of Pharmacol. -1994. V. 64. - P. 125-128.

172. Okhawa H., Ohishi N., Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. //Anal. Biochem. 1979. - V. 95. -№2.-P. 351-358.

173. Olney J.W., Labruyere J., Price M.T. Pathological changes induced in cerebrocortical neurons by phencyclidine and related drugs. // Science. -1989.-V. 244.-P. 1360-1362.

174. Ono N. Microcirculation in the brain: viewpoint of autoregulation. // Nippon Yakurigaku Zasshi. 1999. - V. 113. - № 4. P. 203-210.

175. Onodera H., Sata G. and Kogure K. GABA and benzodiazepin receptors in the gerbil brain after transient ischemia: demonstration by quantitative receptor autoradiography. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1987.-V. 7.-P. 82-88.

176. Payne J.A. Functional characterization of the neuronal-specific K-Cl cotranporter: implications for K+.0 regulation. // Am. J. Physiol. V. 42. -P. 1516-1525.

177. Pellmar Т. C. Use of brain slices in the study of free-radical actions. // J. Neurosci. Meth. 1995. - V. 59. - P. 93-98.

178. Phillis J. W. CI-966, a GABA uptake inhibitor, antagonizes ischemia-induced neuronal degeneration in the gerbil. // Gen. Pharmacol. 1995. -V. 26.-P. 1061-1064.

179. Phillis J.W., O'Regan M.H. The role of phospholipases, cyclooxygenases and lipoxygenases in cerebral ischemic/ traumatic injuries. // Crit. Rev. Neurobiol. 2003. - V. 15. - №1. - P. 61-90.

180. Phillis J.W., Smith-Barbour M., Perkins L.M., O'Regan M.H. Characterization of glutamate, aspartate, and GABA release from ischemic rat cerebral cortex. // Brain Res. Bull. 1994. - V. 34. - P. 457-466.

181. Pitler T.A., Alger B.E. Postsynaptic spike firing reduces synaptic GABAa responses in hippocampal pyramidal cells. // J. Neurosci. 1992. -V. 12.-P. 4122-4132.

182. Riveros, N., Orrego, F. N-methylasparate-activated calcium channels in rat brain cortex slices. Effects of calcium channel blockers and ofinhibitory and depressant substances. // Neuroscience. 1999. - V. 17. - P. 541-546.

183. Roberts E. The establishment of GABA as a neurotransmitter. // GABA and Benzodiazepine Receptors. 1988. - V. 1. - P. 1-21.

184. Sabeh F., Baxter C.R., Norton S.J. Skin burn injury and oxidative stress in liver and lung tissues of rabbit models. // Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1995. V. 33. - №6. - P. 323-328.

185. Sah R., Ahrens R., Galeffi F., Jordan G., Schwartz-Bloom R.D. Modulation of the GABAA-gated chloride channel by reactive oxygen species. // Soc. Neurosci. 2001 - V. 28. - P. 1073.

186. Sah R., Schwartz-Bloom R. D. Optical imaging reveals elevated intracellular chloride in hippocampal pyramidal neurons after oxidative stress. // J. Neurosci. 1999. - V. 19. - P. 9209-9217.

187. Samochocki M., Strosznajder J. Modulatory action of arachidonic acid on GABAA/chloride channel receptor function in adult and aged brain cortex membranes. // Neurochem. Int. 1993. - V. 23. - P. 261-267.

188. Scotti de Carolis A., Lipparini F., Longo V.G. Neuropharmacological investigations on muscimol, a psychotropic drug extracted from Amanita muscaria. // Psychopharmacol. 1969. - V. 15. - №3. - P. 186-195.

189. Schlotter F., Collins J.L., Fergus A., Okonkwo D., Kassell N.F., Lee K.S. Structural interactions between NOS-positive neurons and blood vessels in the hippocampus. //Neuroreport. 1996. - V. 7. - P. 966-968.

190. Schonrock В., Bormann J. Functional heterogeneity of hippocampal GABAa receptors. // Eur. J. Neurosci.- 1993. V. 5. - №8. - P. 1042-1049.

191. Schwartz R. D., Yu X. Inhibition of GABA-gated chloride channel function by arachidonic acid. // Brain Res. 1992. - V. 585. - P. 405-410.

192. Schwartz R. D., Skolnick P., Paul S. M. Regulation of 7-aminobutyric acid/barbiturate receptor-gated chloride ion flux in brain vesicles byphospholipase A2: possible role of oxygen radicals. // J. Neurochem. -1988.-V. 50-P. 565-571.

193. Schwartz R. D., Huff R. A., Yu X., Carter M., Bishop M. Post-ischemic diazepam is neuroprotective in the gerbil hippocampus. // Brain Res. -1994.-V. 647.-P. 153-160.

194. Schwartz R. D., Yu X., Katzman M. R., Hayden-Hixson D. M., Perry J. M. Diazepam, given post-ischemia, protects selectively vulnerable neurons in rat striatum and hippocampus. // J. Neurosci. 1995. - V. 15. - P. 529539.

195. Schwartz-Bloom R.D., Cook T.A. and Yu X. Inhibition of GABA-gated chloride channels in brain by the arachidonic acid metabolite, thromboxane A2. //Neuropharmacol. 1996. - V. 35. - P. 1347-1353.

196. Schwartz-Bloom R.D., McDonough K.J., Chase P.D.Long-term protection by benzodiazepine full vs partial agonists following transient cerebral ischemia in the gerbil. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1998. -V. 18. - P. 548-558.

197. Schwartz-Bloom R.D., Miller K.A., Evenson D.A., Crain B.J., Nadler J.V. Benzodiazepines protect hippocampal neurons from degeneration after transient cerebral ischemia: an ultrastructural study. // Neuroscience. 2000. - V. 98.-P. 471-483.

198. Schwartz-Bloom R.D., Sah R. Gamma-aminobutyric acid (A) neurotransmission and cerebral ischemia // J. Neurochem. 2001. - V.77. -№2.- P. 353-371.

199. Seredenin S.B., I.V. Viglinskaya, and O.P. Kashevskaya. // Biological basis of individual sensetivity to psychotropic drugs, S.B. Seredenin (ed.), V. Longo, G. Gaviraghi (ed.). Graffham Press Ltd. - York. - 1994. - P. 47-57.

200. Shuaib A., Ijaz S., Hasan S., Kalra J. Gamma-vinyl GABA prevents hippocampal and substantia nigra reticulata damage in repetitive transient forebrain ischemia. // Brain Res. 1992. - V. 590. - P. 13-17.

201. Shuaib A., Ijaz S., Miyashita H., Mainprize Т., Kanthan R. Progressive decrease in extracellular GABA concentrations in the post-ischemic period in the striatum: a microdialysis study. // Brain Res. 1994. - V. 666. - P. 99-103.

202. Shuaib A., Murabit M.A., Kanthan R., Howlett W., Wishart T. The neuroprotective effects of gamma-vinyl GABA in transient global ischemia: a morphological study with early and delayed evaluations. // Neuroscience Letters. 1996a. - V. 204. - P. 1-4.

203. Sieghart W. Structure and pharmacology of gamma-aminobutyriс acid A receptor subtypes. // Pharmacol. Rev. 1995 - V.47- P. 181-234.

204. Stelzer A., Kay A. R., Wong R. K. S. GABAa receptor function in hippocampal cells is maintained by phosphorylation factors. // Science -1988.-V. 241.-P. 339-341.

205. Sternau L.L., Lust W.D., Ricci, A.J., Ratcheson R. Role for gamma-aminobutyric acid in selective vulnerability in gerbils. // Stroke. 1989. -V. 20.-P. 281-287.

206. Stockmans F., Deberdt W., Nystrom A., Nystrom E., Stassen J.M., Vermylen J., Deckmyn H. Inhibitory effect of piracetam on platelet-rich thrombus formation in an animal model. // Thromb. Haemost. 1998. - V. 79.-№1.-P. 222-227.

207. Swanson L.W., and Sawchenko P.E. Hypothalamic integration: organization of the paraventricular and supraoptic nuclei. // Acta Rev. Neurosci.- 1983.-V. 6. P. 269-324.

208. Takahashi H., Tiba M., Yamazaki Т., Noguchi F. On the site of action of gamma-aminobutyric acid on blood pressure. // Jap. J. Physiol. 1958 -V.8 - P. 378-390.

209. Takahashi H., Tiba M., Sumi M., Matsuzaki H. Differences in the action of y-aminobutyric acid on blood pressure between some animal species. // Jap. J. Physiol. 1959 - V.9 - P. 464-475.

210. Takayasu T. Mechanism of the fall of blood pressure induced with y-aminobutyric acid. // J. Physiol. Soc. Jap. 1956 - V.18 - № 6 - P. 325336.

211. Takemoto Y. Possible contribution of central gamma-aminobutyric acid receptors to resting vascular tone in freely moving rats. // Exp. Physiol. 2000. - V. 85. - №5. - P. 479-485.

212. Tang A.H., Franclin S.R., Sethy V.H., Needham L.M., Jacobsen E.J., Von Voigtlander P.F. Anxiolytic effect of U-101017, partial agonist at the benzodiazepine receptor. // Psychpopharmacol. 1997. - V. 131. - P. 255263.

213. Tecoma E.S., Choi, D.W. GABAergic neocortical neurons are resistant to NMDA receptor-mediated injury. // Neurology. 1989. - V. 39. - P. 676-682.

214. Verheul H.B., de Leeuw F.E., Scholten G. GABAa receptor function in the early period after transient forebrain ischaemia in the rat. // Eur. J. Neurosci. 1993. - V. 5. - P. 955-960.

215. Verkuyl J.M., Hemby S.E., Joels M. Chronic stress attenuates GABAergic inhibition and alters gene expression of parvocellular neurons in rat hypothalamus. // Eur. J. Neurosci. 2004. - V. 20. - №6. - P. 16651673.

216. Voll C.L., Auer R.N. Postischemic seizures and necrotizing ischemic brain damage: neuroprotective effect of postischemic diazepam and insulin. //Neurology. 1991b. - V.41. - P. 423-429.

217. Wagner P.G., Dekin M.S. cAMP modulates an S-type K+ channel coupled to GABAb receptors in mammalian respiratory neurons. // Neuroreport. 1997. - V. 8. - P. 1667-1670.

218. Wardener H. E. The Hypothalamus and Hypertension. // Physiol. Reviews. 2001. - V. 81. - №4. - P. 1599-1658.

219. Welsh F.A., Marcy V.R., Sims R.E. NADH fluorescence and regional energy metabolites during focal ischemia and reperfusion of rat brain. // J. Cereb. Blood Metab. 1991. - V. 11. - P. 459-465.

220. Woodson W., Nitecks L., Ben-Ari Y. Organization of the GABAergic system in the rat hippocampal formation: a quantitative immunocytochemical study. // J. Сотр. Neurol. 1989. - V. 280. - P. 254271.

221. Zenina T.A., Gawrish I.V., Melkumyan D.S., Seredenina T.S. Afobazol protects neurons against oxidative stress and glutamat toxitity in vitro.// -2005.-P. 246.

222. Zhang D., Pan Z.H., Awobuluyi M. Structure and function of GABA (C) receptors: a comparison of native versus recombinant receptors. // Trends Pharmacol. Sci. 2001. - V. 22. - № 3 - P. 121-132.