Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Анализ иммуномодулирующих эффектов адренергических соединений в системах in vivo и in vitro

На правах рукописи

¿>0 /Уту.^

Гейн Сергей Владимирович

АНАЛИЗ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ЭФФЕКТОВ АДРЕНЕРГИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ В СИСТЕМАХ IN VIVO И IN VITRO

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕ PAT диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Пермь 1999

Работа выполнена в Институте экологии и генетики микрооргани змов Уральского отделения РАН

Научные руководители:

академик РАН, доктор медицинских наук, профессор В.А. Черешнев кандидат медицинских наук, доцент Ю.И. Шилов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор С.В. Ширшев доктор медицинских наук Е.Ю. Гусев

Ведущая организация - Институт экспериментальной медицины РАМН

Зашита состоится "2.2." 1999 г., в часов

на заседании диссертационного совета К200.46.01 Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, г. Пермь, ул. Го-лева, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН.

Автореферат разослан "¿2 " 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, у] / „

старший научный сотрудник </ И.Б. Ившина

Р £ Г 2 .

• ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Адренергические соединения являются важней-лими факторами нейроэндокринной регуляции функций иммунной системы п юрме и при различных патологических состояниях [Ю.И. Зимин, 1980; II.Л Горизонтов с соавт., 1983; Е.А. Корнева, Э.К. Шхинек, 1988; В.В. Абрамов, Т.Я. Абрамова, 1996; Т.А. Славянская с соавт., 1996; K.S. Madden, D.L. Feiten, 1995; R.H. Straub et al., 1998]. Их участие в нейроэндокринной регуляции иммунных реакций определяется наличием на иммунокомпетентных, эффекторных и вспомогательных клетках адренорецепторов [Н.М. Бережная, С.А. Котова, 1990; М. Plaut, 1987; P. Barnes, 1993; P. Barnes, 1995; М. Schedlowski el al., 1996; R H Straub et al., 1998]. При таких процессах как стресс и сопрлженные с ним состояния (травма, шок, психоэмоциональное напряжение) адренергические механизмы могут играть ключевую роль в изменениях функций иммунной системы [Ю.И. Зимин, 1980; П.Д. Горизонтов с соавт., 1983; М. Irvin, 1994]. Нарушения адренергической регуляции функций иммунокомпетентных клеток, связанные с изменениями экспрессии ß-адренергических рецепторов [Т.А. Славянская с соавт., 1996], играют важную роль в патогенезе аллергических заболеваний. Естественные и синтетические адренергические соединения в настоящее время широко используются в терапии различных заболеваний. Поэтому изучение механизмов иммуномодулируюшего действия данной группы соединений чрезвычайно актуально для многих областей медицины и биологии. В то же время многие аспекты данной проблемы остаются нерешенными до настоящего времени. В частности, недостаточно изучена возможность действия данной группы соединений через а-адренорецепторы. Хотя в классических исследованиях [Ю.И. Зимин, 1979; 1980; 1983; П.Д. Горизонтов с соавт., 1983; И.А. Хлусов с соавт., 1993] доказана роль ß-адренергических механизмов в регуляции при стрессе миграции Т-лимфоцитов в костный мозг [Ю.И. Зимин, 1979; 1980; 1983; П.Д. Горизонтов с соавт., 1983; И.А. Хлусов с соавт., 1993], практически нет данных по участию адренергических механизмов в изменениях функций иммунокомпетентных и фагоцитирующих клеток при стрессе.

Цель работы - в экспериментальных системах in vivo и in vitro изучить им-муномодулирующие эффекты адренергических соединений, их опосредоваи-ность через а- и ß-адренергические рецепторы, оценить участие ß-адренергических механизмов в изменениях функций иммунокомпетентных и фагоцитирующих клеток при стрессе. ;

Основные задачи.

1. Оценить влияние блокады ß-адренорецепторов при стрессе на реакции гуморального и клеточиоопосредованного иммунитета в условиях развития локальной формы иммунного ответа.

2. Изучить вклад ß-адренорецепторов в изменения фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови, клеток лимфатических узлов, селезенки

и костного мозга при стрессе, оцешпъ связь иммунологических параметров с количественным составом клеток периферической крови и органов лимфомие-лоидного комплекса.

3. Исследовать влияние адреналина и агониста Р-адренорецепторов тербу-талина сульфата на пролиферативный ответ лимфоцитов здоровых людей в культурах с Т-клеточными мшогенами.

4. Изучить влияние адреналина в условиях блокады Р-адренорецепторов пропранололом ■ гидрохлоридом, арадренорецепторов празозином и а2-адренорецепторов йохимбином, а также эффекты вышеперечисленных адренер-гических антагонистов и некоторых модуляторов сигнальных путей (ингибитора фосфодиэстеразы теофиллина, блокатора кальциевых каналов ве-рапамила) на пролиферативный ответ лимфоцитов.

Научная новизна. Впервые изучено значение Р-адренергических механизмов в изменениях антителообразования, реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови и клеток лимфатических узлов, селезенки, костного мозга при остром стрессе у крыс в условиях локального иммунного ответа. Показано, что блокада 0-адренорецепторов снижала стрессорную депрессию реакции ГЗТ, но не отменяла ее. В условиях блокады р-адренорецегггоров выявлена отмена супрессивного эффекта стресса на повышение уровня антител. На высоте иммунного ответа фагоцитарная активность макрофагов регионарного лимфатического узла в сравнении с отдаленным повышалась, стресс нивелировал эти различия, а блокада Р-адренорецепгоров пропранололом отменяла данный эффект стресса. При исследовании изменений, вызванных стрессом на фоне блокады р-адренорецепторов, показана независимость развития лимфопении от р-адренергических механизмов. Установлено, что показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в абсолютном выражении в ранний период развития общего адаптационного синдрома активировались. Это в большей степени зависело от процессов выхода нейтрофилов из костного мозга и их перераспределения, чем от непосредственного увеличения поглотительной активности нейтрофилов. Блокада Р-адренорецепторов приводила к развитию нешрофильного лейкоцитоза без ядерных сдвигов. Нейтрофипьный лейкоцитоз в условиях стресса характеризовался развитием выраженного регенеративного сдвига влево. В условиях блокады Р-адренорецепторов на фоне стресса нейтрофипьный лейкоцитоз сопровождался развитием промежуточного ядерного сдвига.

В модели пролиферативного ответа лимфоцитов периферической крови здоровых людей с фитогемагглкшшином (ФГА) и конканавалином А (Кон А) впервые изучена зависимость действия адреналина и адренергических соединений как от концентрации митогена, так и от концентрации препарата. Установлено, что эффект адренергических соединений прямо связан с концентрацией

митогена. Адреналин, действующий через все типы адренорецепторов. оказывал в сравнении с другими адренергическими соединениями более выраженный супрессивный эффект на бласттрансформацию лимфоцитов. Пропранолол не отменял депрессивный эффект адреналина, что может прямо указывать на вовлеченность а-адренорецепторов в супрессивное действие адреналина. Частичная отмена супрессивного эффекта адреналина выявлена при блокаде адренорецепторов.

Теоретическое и практическое значение работы. В теоретическом плане работа расширяет существующие представления о роли адренергнческих механизмов в развитии стрессорных изменений в иммунной системе. Доказано, что важную роль в повышении резистентности организма при стрессе играет активация функций фагоцитирующих клеток. Депрессивное действие стресса на реакции ГЗТ реализуется и при участии р-адренергических механизмов. На основании проведенных исследований можно считать, что различные типы адренергнческих рецепторов могут принимать участие в регуляции функций иммуно-компетентных клеток.

В практическом плане полученные данные по механизмам иммуномодули-рующего действия адренергнческих соединений следует учитывать при использовании препаратов этих групп в терапии экстремальных состояний (травма, шок, кровопотеря, инфаркт миокарда, сепсис и др.), аллергических заболеваний и реакций, других заболеваний. Работа открывает перспективы для использования адренергнческих соединений как мягко действующих иммуномодуляторов в терапии иммунопатологических состояний.

Результаты работы внедрены в учебный процесс на кафедре микробиологии и иммунологии Пермского государственного университета (никл большого практикума для студентов биологического факультета "Оценка функций фагоцитирующих клеток", общий лекционный курс "Иммунология", специальные лекционные курсы "Экспериментальная иммунопатология и иммунотерапия", "Молекулярные механизмы межклеточной коммуникации, активации, пролиферации и дифференцировки иммунокомпетентных клеток"). Разработанные в ходе выполнения работы микромодификации методов оценки фагоцитарной активности клеток лимфатических узлов, селезенки, костного мозга внедрены в лаборатории экологической иммунологии Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН.

Основные положения, выносимые на защиту. I . Стресс приводит к выраженному угнетению реакций клеточноопосредован-ного и, в меньшей степени, гуморального иммунитета в условиях развития локальной формы иммунного ответа. Блокада р-адренорецепторов пропранололом отменяет эти депрессивные эффекты стресса, что указывает на вовлеченность (3-адренергических механизмов в развитие угнетения антителообразования и реакции ГЗТ. Показатели нейтрофильного фагоцитоза на фоне стресса активиру-

ются. Стрессорные изменения функций фагоцитирующих клеток зависят от ад-ренергических механизмов.

2. Адреналин и агонист p-адренорецепторов тербуталина сульфат оказывают депрессивный эффект на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови здоровых людей в культурах с Т-клеточными митогенами.

3. Выявлено участие всех типов адренорецспторов в регуляции пролифератив-ного ответа лимфоцитов.

Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены на научной сессии Пермской государственной медицинской академии (Пермь, 1998), на международной конференции «Проблемы загрязнения окружающей среды-98» (Москва, 1998), на конференции молодых ученых «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии» (Пермь, 1999). По материалам диссертации опубликовано 13 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 стр. машинописи, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов (2 главы), обсуждения, выводов. В диссертации рисунков и таблиц. Прилагаемый список литературы включает 286 наименований (139 отечественных и 147 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Объектом исследования в опытах in vitro служила периферическая венозная кровь, полученная от здоровых людей-добровольцев в возрасте 16-43 лет. Эксперименты в системе in vivo выполнены на белых крысах-самцах популяции Wistar.

Для экспериментального моделирования стресса использовали классическую модель 6-часового иммобилизационного стресса [П.Д. Горизонтов с со-авт., 1983; Н. Selye, 1937]. Участие p-адренергических рецепторов в стрессор-ных изменениях показателей клеточного и гуморального иммунитета, функций фагоцитирующих клеток исследовали в условиях их блокады пропранололом гидрохлоридом. Животные были разбиты на 4 группы: 1-я - контрольная, 2-я -6-часовой иммобилизационный стресс, 3-я - 6-часовой иммобилизационный стресс на фоне блокады p-адренергических рецепторов пропранололом, 4-я -введение по той же схеме одного пропранолола. Пропранолола гидрохлорид вводили животным по схеме, предложенной П.Д. Горизонтовым с соавт. [1983], подкожно двукратно с интервалом 3 часа в разовой дозе 5 мг/кг массы тела (первая инъекция за 30 минут до начала иммобилизации). Образцы крови для оценки показателей фагоцитоза, гематологических параметров и титра антител в объеме 0,5 мл получали из сосудов хвоста до начала эксперимента (исходный фон), через 390 мин, на 5-е сутки после него во всех группах, а у животных 3-й и 4-й группы- дополнительно через 30 мин и 3 часа после первой инъекции про-

пранолола. На 390 минуте эксперимента всех животных иммунизировали >ри I -роцитами барана (108 в 0,05 мл среды 199 под кожу правой стопы). Разрешающую дозу эритроцитов барана (10'' клеток в 0,1 мл среды в опытную стопу: в контрольную стопу - 0,1 мл среды 199) вводили на 4-е сутки. На 5-е сутки эксперимента оценивали выраженность гуморального и клеточноопосредованного иммунитета, фагоцитарную активность клеток лимфатических узлов, селезенки, костного мозга и крови, изменения клеточности и/или массы органов лим-фомиелоидного комплекса, гематологические показатели.

Интенсивность гуморального ответа на эритроциты барана оценивали по числу антителообразующих клеток (АОК) методом локального гемолиза в геле агарозы [Ы.К..1ете, А.А.ЫогсНп, 1963] и титру антител в периферической крови с помощью реакции активной гемагглютинации [Э. Зигль, 1979].

Выраженность иммунного воспаления при ГЗТ оценивали через 24 часа после разрешающей инъекции антигена путём регистрации толщины и массы опытной и контрольной стопы [У. 01шпс1п сI а!.. 1976; Я. А1ат с/ а!., 1994: .1.М. Ое\гегу е1 а1„ 1994].

Для оценки фагоцитарной активности лейкоцитов периферической кропи использовали модифицированный метод В.Н. Каплина с сотр. [1992: 1996]. В отличие от исходного варианта метода, в связи с малым объемом компонентов и угрозой изменения рН использовалась забуференная НЕРЕБ культуральная среда (среда 199 с добавлением 2 мМ А-глутамина и 10 мМ НЕРЕБ). Смешивали 25 мкл крови, 12,5 мкл формалинизированных эритроцитов барана (200* 106/мл) и 12,5 мкл питательной среды. Результаты учитывали после 20-минутной инкубации при 37°С микроскопически на мазках, окрашенных по Романовскому. Помимо традиционных показателей (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, процент фагоцитоза), учитывали ряд дополнительных параметров в абсолютном и относительном выражении дифференцированно для ней-трофилов, эозинофилов и моноцитов [10.И. Шилов с соавт., 1998]. Для оценки фагоцитоза в клеточных суспензиях правого и левого подколенных лимфатических узлов, селезенки, костного мозга смешивали 25 мкл соответствующих клеток (5*10" клеток/мл), 12,5 мкл формалинизированных эритроцитов барана (200*IО'Умл) и 12,5 мкл аутоплазмы. Результаты учитывали после 20-минутной инкубации при 37"С.

В каждом образце кроии определяли число эритроцитов, концентрацию гемоглобина (с помощью стандартного гемиглобинцианидного метода), количество лейкоцитов, показатели лейкоформулы.

Влияние адренергическнх соединений на пролиферативный ответ лимфоцитов ¡п \ч/го оценивали в реакции бласттрансформации лимфоцитов с Т-клеточными митогенами. Лейкоциты периферической крови здоровых людей-добровольцев в возрасте от 18 до 43 лет культивировали в течение 72 часов с

различными концентрациями фитогемагглютинина (ФГА) и конканавалина А (Кон А) в 96-луночных круглодонных планшетах в среде 199 с добавлением 2 мМ /,-глутамина, 100 мкг/мл гентамицина, 10% аутоплазмы и 10 мМ HEPES (количество клеток на лунку 2*10^; общий объем культуры 0,2 мл). Выраженность пролиферации определяли по включению ^Н-тимидина. Использовали следующие адренергические соединения: агонист всех типов адреноредепторов адреналина гвдрохлорид (Московский эндокринный завод, диапазон концентраций от 1,0 до 0,0001 мкг/мл или 4,55*10"6 - 4,55*Ю"10М); ß-адренергический агонист с преимущественным действием через р2-адрснорецепторы тербуталииа сульфат ("бриканил", ASTRA, Венгрия, диапазон концентраций от 104 до 10 '' М); антагонист ß-адренорецепторов пропранолола гидрохлорид ("обзидан", GERMED, Германия, диапазон концентраций 0,25*10° - 0,25*10"'' М); антагонист ai-адрснорецепторов йохимбина гидрохлорид (Sigma, США, в концентрации 10"6 М); антагонист ai-адреноредепторов празозина гидрохлорид (Sigma, США, в концентрации 10"6 M), а так же модуляторы систем, отвечающих за трансдукцию гормональных сигналов: теофиллин - ингибитор фосфодиэстеразы (Sigma, США, в концентрации 3 мМ), верапамила гидрохлорид - блокатор кальциевых каналов ("изоптин", Knoll, AG, Германия, в концентрации 0.025 мг/мл). Все исследуемые соединения вносили в культуры одномоментно с митогсном. Выбор концентраций соединений основывался на ранее проведенных исследованиях [АА. Ярилин, 1985; C.B. Ширшев, 1996; A. Shore et al., 1978; R.N. Spengler et al., 1994; K.S. Madden, D.L. Feiten, 1995, и др.].

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием непарного и парного /-критерия Стьюдента, W-критерия Вилкоксона суммы рангов, парного знакового Т-критерия Вилкоксона, а также методов корреляционного, регрессионного и дисперсионного анализа [Ю.Н. Тюрин, A.A. Макаров, 1995] на IBM-совместимых компьютерах. Результаты в таблицах и на рисунках (помимо случаев, где это специально оговорено) представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки

Работа выполнена на базе лаборатории экологической иммунологии и лаборатории радиоизотопных исследований ИЭГМ УрО РАН.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Изменения показателей гиперчувствнтельности замедленного типа, гуморального иммунного ответа, функциональной активности фагоцитирующих клеток при иммобилизационном стрессе на фоне блокады ß-адренерги-ческих рецепторов

Выраженность гуморального иммунного ответа оценивали по титру антител в плазме крови и числу антителообразующих клеток в регионарном и кон-тралатеральном лимфатических узлах, селезенке и костном мозге (табл. 1 и рис.

1). При анализе результатов контрольной группы обращает на себя внимание небольшое увеличение числа АОК в селезенке, фоновый уровень АОК в кон-тралатерапьном лимфатическом узле и костном мозге и значительное увеличение количества АОК в правом лимфатическом узле (превышает число АОК в левом более, чем в 1000 раз). Среднее число АОК в селезенке составило 427,44, то есть было намного меньше, чем при системном иммунном ответе. Так, по данным H.H. Кеворкова с соавт. [1993], при внутрибрюшинной иммунизации крыс оптимальной дозой эритроцитов барана среднее количество АОК в селезенке составляет 276500. Таким образом, при выбранной схеме иммунизации развивается преимущественно локальная форма гуморального иммунного ответа. Статистически достоверных различий между группами по влиянию стресса, пропранолола или их комбинации на количество АОК в перерасчете на орган не выявлено.

Как видно из рис.1, даже при локальном иммунном ответе имело место статистически значимое повышение титра антител п крови на 5-е сугки в 1-й группе. Последний хотя и статистически значимо выше, чем у неиммунизиро-ванных животных, тем не менее ниже уровня антител, регистрируемого при системном иммунном ответе, и близок к титру естественных антител. Поэтому. несмотря на увеличение уровня антител в эти сроки в контрольной группе, можно считать, что системный гуморальный иммунный ответ был очень слабым. Во второй группе увеличения титра антител на 5-е сутки не наблюдалось, что связано с иммунодепрессивным действием стресса на гуморальный иммунный ответ. Однако в 3-й группе (стресс на фоне блокады ß-адренорецегпоров) отмечено статистически значимое в сравнении с показателями до иммунизации увеличение титра антител, что, в свою очередь, можно связать с отменой имм\-нодепрессивного эффекта стресса на фоне введения пропранолола. В 4-й группе на 5-е сутки также имело место статистически значимое увеличение титра антител. Таким образом, блокада [З-адренореценторов приводит к отмене депрессивного эффекта стресса на антительный ответ.

Уровень реакции ГЗТ оценивали в классической модели по выраженности иммунного воспаления стопы (табл. 2). В сравнении с контрольной группой у животных, подвергнутых стрессу (2-я группа), выраженность реакции ГЗТ статистически достоверно снижена как по индексу массы, так и по индексу размера стопы. Блокада ß-адренергических рецепторов пропранололом на фоне стресса (3-я группа) снижала степень стрессорного угнетения ГЗТ. Показатели выраженности иммунного воспаления статистически значимо отличались от контроля только по показателям размера, но не массы стопы. Сама по себе блокада ß-адренергических рецепторов не влияла на развитие ГЗТ.

Развитие локального иммунного ответа сопровождалось статистически значимым увеличением клеточности регионарных лимфатических узлов в срав-

нении с отдаленными во всех группах (р<0,05 по /-критерию Стьюдента, V/-критерию Вилкоксона и парному Т-критерию Вилкоксона). Однако статистически значимых различий по отношению к показателям контрольной группы не выявлено (табл. 1).

Таблица 1

Изменения количества АОК и клеточности селезенки, правого и левого

Селезенка Правый лимфатический узел Левый лимфатический узел Костный мозг

Число lOgio Число Индекс lOgio Число logio Число logm

Группа ЯСК на АОК на ЯСК на измене- АОК на ЯСК АОК ЯСК на АОК

орган* орган орган ния орган на на орган на

ЯСК орган орган орган

1-я 836,66± 2,63± 35,77+ 275,991 3,781 10.48+ 0,68+ 183,08± 1,07 +

(п=9) 100,78 0,22 9,68 91,54 0,41 2,28 0,15 31,25 0,28

(427,44)** (6064,32) (4,8) (11,85)

2-я 821,80+ 2,46± 26,20+ 217,93 + 3,76+ 11,44; 1,05; 159,66+ 0,96+

(п=10) 0,10 0,56 6,18 62,32 0,26 2,68 0,33 21,55 0,18

(291,85) (5788,88) (11.4) (9,2)

3-я 628,20± 2,80± 26,20± 610,63 + 3,66+ 6,52+ 0,98+ 150,58+ 0,58 +

(п=10) 103,66 0,19 7,52 237,18 0,34 1,89 0,29 18,36 0,27

(638,88) (4651,73) (9,47) (3,81)

4-я 675,46± 2,64± 25,11 ± 827,171 3,29+ 8.08± 1,01; 148,77+ 0,84;

(п=9) 203,12 0,15 4,58 429,81 0,43 3,45 0,29 28,11 0,17

(443,89) (1973,15) (10,38) (6,94)

* - ЯСК - ядросодержащие клетки; а клп.

** - в скобках указана средняя геометрическая (антилогарифм из средней арифметической числа АОК) числа АОК.

Во всех таблицах и на рисунках надстрочными индексами указаны достоверные различия с контролем: ш> н - р<0,05 по парному или непарному ^критерию,х - р<0.05 по ^'-критерию суммы рангов Вилкоксона, - /><0,05 по Т-критерию знаковому Вилкоксона по отношению к контролю.

Объединенный исходный фон

контрольная группа, 5-е сутки

стресс,5-е сутки

стресс+пропранолол,5-е сутки пропранолол,5-е сутки

О

1

3

4

Рис. I. Изменения титра антител к нативным эритроцитам барана.

По оси абсцисс: титра антител.

По оси ординат: группа и время забора крови.

Индексами обозначены статистически достоверные отличия по отношению к объединенному исходному фону; остальные обозначения те же, что и в табл. 1.

5

На высоте иммунного ответа проведено исследование фагоцитарной активности макрофагов органов лимфомиелоидного комплекса. Статистически значимых различий показателей фагоцитарной активности клеток костного чо*-га и селезенки на 5-й день иммунного ответа не выявлено. Как видно из табл. 3. развитие иммунного ответа приводило в контрольной группе к статистически достоверной стимуляции фагоцитарной активности макрофагов регионарною (правого подколенного) лимфатического узла в сравнении с отдаленным ( левым подколенным) лимфатическим узлом по интегральным абсолютным показателям - абсолютному числу захваченных объектов и абсолютному количеству участвующих в фагоцитозе клеток. Эти изменения, по-видимому, определялись развитием реакции гиперчувствительности замедленного типа, так как корреляционный и регрессионный анализ показал отсутствие их связи с титром антител против формалинизированных эритроцитов барана. Угнетение развития ГЗТ на фоне иммобилизационного стресса во 2-й группе сопровождаюсь нивелированием указанных различий суммарной фагоцитарной активности макрофагов регионарного и отдаленного лимфатических узлов. Блокада Р-адренорецепгоров полностью отменяла стрессорное угнетение аккумуляции макрофагов в регионарном лимфатическом узле. У животных 3-й группы (стресс на фоне блокады [i-адренорецепторов пропранололом) наблюдалась статистически достоверная активация интегральных абсолютных показателей фагоцитарной активности клеток правого подколенного лимфатического узла по отношению к левому по тем же показателям, что и в 1-й группе. Таким образом, развитие иммунного ответа приводило к увеличению суммарной фагоцитарной активности макрофагов регионарного лимфатического \чла в сравнении с отдаленным. На фоне стресса данный эффект нивилировался. Блокада p-адренорецепторов пропранололом отменяла депрессивный эффект стресса.

Таблица 2

Изменения выраженности иммунного воспаления при реакции ГЗТ*

Название

Интенсивность иммунного воспаления

группы по толщине стопы по массе стопы

Разница (мм) Индекс реакции (%) Разница (мг) Индекс реакции (°о)

1-я 1,53 + 0,23 34.87-5.4 5 334.77-54.32 24,14:4,69

(п=9) 2-я 0.62+0,18u,vv 13,29±3,77l"w 126,60:32.2 lmW 8.78 •:2.301",Л

(iv-10) 3-я 0,80±0. !2"'W 18.83:3.20"'^ 237.10:38.32 17.50-2.83

(п=10) 4-я 1,02±0,22 23.88+5.27 263.61 162.01 20.67:5.05

(п~9)

* - Надстрочными индексами обозначены статистически достоверные отличия по отношению к 1-й группе: остальные обозначения те же, что и в табл. 1

В целом, представленные выше результаты свидетельствуют о важной роли стимуляции р-адренергических рецепторов повышенными при стрессе концентрациями катехоламинов в развитии стрессорной иммунодепрессин. Кате-холамины при стрессе могут выступать как синергисты по отношению к другим гормонам и, прежде всего, по отношению к наиболее изученным в этом плане глюкокортикоидам в развитии стрессорной иммунодепрессин. Известно [Дж. Тепперман, X. Тепперман, 1989], что глюкокортикоиды повышают экспрессию Р-адренорецепторов.

Таблица 3

Сравнительная оценка фагоцитарной активности клеток правого (опытного) и

Название группы, Абсолютное чис- Абсолютное число

подколенный лимфатический узел ло захваченных фагоцитирующих

объектов на орган'' клеток на орган1"

1-я группа, левый 4,37±1,90 2,91 + 1,02

правый 17,55±7,14Л| 12,76±5,32и'

2-я группа, левый 5,95±2,39 4,04±1,47

правый 11,88±4,44 7,97±2.74'

3-я группа, левый 2,99±1,20 1,99±0,78

правый 17,9817,22'"^1 11,68+4,38ши'

4-я группа, левый 5,83±2,93 3,82±1,76

правый 12,81+3,99' 8,55±2,48'

* - Надстрочными индексами обозначены статистически достоверные отличия по отношению к показателям левого (контрольного) подколенного лимфатического узла; остатьные обозначения те же, что и в табл. 1. в или.

Объединенный исходный фон контрольная группа, 5-е сутки

стресс.390 мин стресс ,5-е сутки

стресс+пролранолол.390 мин стресс*лропранолол.5-е сутки

пропранолол.ЗО мин пропранолол.ЗЭО мин пропранолоп,5-е сутки

1ЕН —I

У/

ът

4 6 8 10 12 "1000/ммЗ

Рис. 2. Изменения общего количества нейтрофилов.

По оси абсцисс: абсолютное количество клеток в 1 мм"1 крови. По пси ороинат: группа и время забора крови.

Индексами обозначены статистически достоверные отличия по отношению к объединенному исходному фону; остальные обозначения те же. что и в табл. I.

Объединенный исходный фон контрольная группа, 5-е сутки стресс,390 мин стресс, 5-е сутки

стресс+пропранолол.390 мин стресс+пропрэнолол,5-е сутки

пропранолол.ЗО мин пропранолол.390 мин пропранолол 5-е сутки

О 2 4 6 8 10 12 *1000/ммЗ

Рис. 3. Изменения абсолютного количества объектов, захваченных нейтрофила-ми.

По оси абсцисс: абсолютное количество захваченных объектов на 1 мм' крови, П/> оси ороииат: группа н время забора крови.

Индексами обозначены статистически достоверные отличия по отношению к объединенному исходному фону; остальные обозначения те же, что и в табл. 1.

При стрессе выявлены выраженные изменения количественного состава лейкоцитов периферической крови и их фагоцитарной активности Как видно на рис. 2-3, показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в абсолютном выражении на фоне стресса активировались. В большей степени это зависело от процессов клеточной миграции и выхода нейтрофилов из костного мозга, чем от непосредственного увеличения поглотительной активности нейтрофилов. Статистически значимых изменений интегральных относительных показателей нейтрофильного фагоцитоза (процент фагоцитоза, фагоцитарное число и индекс) не выявлено, за исключением статистически значимого увеличения фагоцитарного индекса в 3-й и 4-й группах на 5-е сутки эксперимента по отношению к показателям объединенного исходного фона.

Выявлено участие р-адренергнческих рецепторов в развитии стрессорпой эозинопении и ее связь с фагоцитарной активностью эозинофилов. Как видно из рис.4-5, у животных, подвергшихся только стрессу, эозинопения и угнетение эозинофилыюго фагоцитоза развивается на фоне угнетения интегральных показателей эозинофильного фагоцитоза. Падает абсолютное число реально фагоцитирующих эозинофилов (рис. 5) и абсолютное число захваченных ими объектов. Анализ распределения числа эозинофилов с разной активностью (данные на рис. не приведены) показывает, что эозинопения в этой группе развиваося преимущественно за счет уменьшения содержания в кровотоке эозинофилов. обладающих слабой и умеренно выраженной фагоцитарной активностью При блокаде Р-адренорецепторов на фоне стресса эозинопения на 390 мин эксперимента развивается без изменений интегральных абсолютных показателей эози-

Объединенный исходный фон контрольная группа 5-е сутки

стресс.ЗЭО мин стресс, 5-е сутки

стресс+пропранолол.390 мин стресс+пропранолол,5-е сутки

пропранолол.ЗО мин пропранолол.390 мин лропранолол,5-е сутки

у/ w

Ч w ы

200 400 600 800 1000 1200

Рис. 4. Изменения общего числа эозинофилов.

По оси абсцисс: абсолютное количество клеток в 1 мм' крови. По оси орошшт: группа и время забора крови.

Индексами обозначены статистически достоверные отличия по отношению к объединенному исходному фону; остальные обозначения те же, что и в таол. 1.

Объединенный исходный фон контрольная группа.

5 е сутки стресс 350 пин стресс,5-е сутки

стресс+лролранолол,390 мин {7. стресс+лропранолол 5-е сутки Г.^*

пропранолол.ЗО миь ; пролрзнолол.390 мин 5 пропранрлол,5-е сутки I

0 20 40 60 80 100 120 140 160

Рис. 5. Изменения абсолютного числа эозинофилов, участвующих в фагоцитозе. По оси абсцисс: абсолютное число клеток в I мм' крови. По оси ороииат: |рупна и время забора крови.

Индексами обозначены статистически достоверные отличия по отношению к обьеди-ненному исходному фону: остальные обозначения те же. что и в табл. I.

нофильного фагоцитоза (рис. 5) преимущественно за счет уменьшения в кровотоке содержания нефагоцитирующих эозинофилов (данные на рис. не приведены). Таким образом, выявлено участие Р-адренергических механизмов в изменениях функций нейтрофилов и эозинофилов при стрессе.

Важно отметить, что, несмотря на неоднократное взятие крови из сосудов хвоста для исследования в ходе эксперимента, анемии у животных ни в одной из групп не развивалось.

В целом, полученные результаты указывают на важную роль 15-адренергических механизмов в регуляции функций клеток иммунной системы при стрессе.

Влияние адреиергических соединений на пролиферативный ответ лимфоцитов здоровых людей, индуцированный Т-клеточными митогенамн

Поскольку было установлено, что адренергические механизмы играют важную роль в угнетении реакций клеточноопосредованного иммунитета при стрессе, следущим разделом работы явилось исследование влияния адреиергических соединений на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови здоровых людей в культурах с Т-клеточными митогенамн. Данная система является удобной моделью иммунного ответа in vitro в клинической иммунологии, где воспроизведение и оценка антигенспецифического ответа сопряжены со значительными трудностями.

Данные по влиянию адреналина на пролиферативный ответ лимфоцитов в культурах с ФГА и Кон А представлены на табл. 4. Эффект адреналина на блэ-стгрансформацию лимфоцитов зависел от концентрации митогена. Во всех исследуемых концентрациях (0,0001-1 мкг/мл) гормон статистически значимо угнетал пролиферативный ответ лимфоцитов в культурах с оптимальными (25 и 50 мкг/мл) и гипероптимальными концентрациями ФГА (200 и 100 мкг/мл). В культурах с субоптимальной концентрацией ФГА (12,5 мкг/мл) адреналин оказывал выраженный эффект только в высокой концентрации (1 мкг/мл). Адреналин оказывал выраженный супрессивный эффект на пролиферацию лимфоцитов в культурах с Кон А.

Как видно из табл. 5, p-адренергический агонист тербуталина сульфат также статистически значимо угнетал реакцию бласттрансформации лимфоцитов преимущественно в культурах с гипероптимальными (200 и 100 мкг/мл) и оптимальными (50 и 25 мкг/мл) концентрациями ФГА. В культурах с субоптимальной концентрацией (12,5 мкг/мл) ФГА, также как и в большинстве культур с Кон А, статистически значимого угнетения не наблюдалось. В целом, при сравнении эффекта данного агониста с адреналином обращает на себя внимание более выраженное действие адреналина в близком диапазоне концентраций (0,0001 -1,0 мкг/мл или соответственно 4,55*l0"m-4,55*10"f' М, табл. 4). Хотя, учитывая более высокое сродство тербуталина к p-адренорецепторам и данные литературы о преимущественной опосредованности через последние иммуно-супрессивного действия адреналина, можно было бы ожидать более выраженный эффект этого препарата. Несмотря на то, что более распространена точка зрения о преимущественной реализации иммуномодулирующих эффектов адреиергических соединений через p-адренорецепторы и повышение уровня цАМФ, полученные в настоящей работе данные указывают и на возможность их действия через более широкий набор адренорецепторов.

Как видно из рис. 6, неселективный Р-адренергический антагонист иро-пранолола гидрохлорид оказывал самостоятельное угнетающее действие на бласттрансформацию лимфоцитов. В комбинации с адреналином блокада р-адренорецепторов пропранололом не отменяла супрессивного действия адреналина на пролиферативный ответ, что прямо указывает на возможность реализации угнетения пролиферации лимфоцитов в культуре не только через Р-, но и через а-адренорецепторы.

Таблица 4

Влияние адреналина на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови здоровых людей*

Препарат и его концентрация Митоген и его кониапрашм (мкг/мл)

Зсч ми-тогена ФГА Кон А

12.5 25 50 100 200 0.5 | 5 50

Контроль 3.5715" 4.2297: -1.5346 4.531 Г 4.3508 3.9954 0.0499 0.1063 0.1122 0.0851 0.0906 0.1121) (.3729) (16972) (34244) (33974) (22430) (9894) 3.5420 3.7982 4.1521) 10552 0.1)809 0.1)672 3484) (6284) (141X9 5)

Адреналин 1 мкг/мл 3.4732' 4.1090 4.3006 4.22X1 4.0608' 3.6992' [).0764 0.1255Ш10.11Х5ШТ (и430шГ%. 1.36411''1 %. 121()Ш'№ (2973) (12853) (19981) (16908) (11502) (5003) 3.4378 3.72X1 3.9037 0.0792 0.0967 о.|К1-!,1|ПЧ (2741) (5347) (8011.0)

Адреналин 0.1 мкг/мл 3.5063' 4.1553 4.4187 4.2.389 4.0488" 3.7254 0.0649 0.1302 ,и225'"'" ,,.1499Ш[ 0.12811"П\).12441"га (3208) (14248) (20X30) (17334) (11188) (5314) 3.4799 3.6967 3.9444 0.0609 0.0602 о 1197' (3019) (4974) (8799.1)

Адреналин 0.01 мкг/мл 3.4556' 4.2506 4..3786 4.2449 40178' 3.6115' 0.0695^ 0.1115ШТ О.1452Ш|ио.1347ш1И0.127(11'"и (2855) (17X06) (239091 (17574) (1(1418) (4088) 3.4231' 3.6251 3.9279 11.(161.31 0.0731'"' 0.1221' ^ (2649) (4220) (8470.X)

Адреналин 0.001 мкг/мл 3.3665 4.1924 4.3090 4.1946 3.9649' 3.591Г „.„.„И"'™ 0.1257 о. 12К)'"' 0.13(.11,"'Л,0.143з"Пио.13371"та (2326) (15575) (20369) (15652) (9223) (3900) 3.4278' 3.7059 З.Х422 0.0543' <'-»'7'0 ,и.37Х1"1и 12678) (5081) (6951.5)

Адреналин 0.0001 мкг/мл 3.4640 4.1850 4.4125 4.2% Г 4.0170 3.6428 !и)842' 0.09181"1 0.11211"1 1).|ЗК61,1'|Л'(и»77и,1№ (2911) (15312) (25855) (19773) (10399) (4394) 1.4129 3.6Х1Х 1.929ц 1).04281п1^ 0.0641 (иЦ281« (2588) (4806) (25X7.6)

* - Здесь и в табл.5-8, приведены -значения М-т для значений ]оцк, имп'мин. а в скобках - средние геометрические имп/мин (антилогарифм из М 1оуц, имп-мин). число наблюдений в контроле и в опытных выборках равно 10: надстрочными индексами обозначены статистически достоверные отличия по отношению к контролю.

Как видно из табл. 6, йохимбии и празозии (соответственно антагонисты а.2- и агадренорецепторов), как и пропранолол, оказывали самостоятельное угнетающее действие на бласттрансформаиию лимфоцитов в культурах с оптимальными и гипероптимальными концентрациями ФГА. Наличие самостоятельного депрессивного эффекта антагонистов аг и аг-адренорецепторов может косвенно указывать на различия свойств адренорецепторов лимфоцитов и

Таблица 5

Влияние тербутапина сульфата на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови здоровых людей*__

Препарат и его концентрация Митоген и его концентрация (мкг/мл)

Без мито- гена ФГА Кон А

12,5 25 50 100 200 0,5 5 50

Контроль 3.49251 4.1393± 4.40491 4.4487+ 4.3248+ 3.99671 0.0584 0.1306 0.1581 0.1389 0.1235 0.0919 (3108) (13783) (25406) (28102) (21124) (9924) 3.47161 3.8378г 4.19Л61 0.0607 0.0828 0.0978 (2962) (6884) (15725)

Терб\талин 10"' М 3.44181 4.07851 4.30901 4.3751+ 4.24911 3.8213+ 0.0562 0.1418 0.П78"'Т (].,274ШТ 0.!128(мТ (2766) (11980) (20371) (23722) (17745) (6620) 3.3870+ 3.7788+ 4.152X1 1.0621 0.1158 0.1066 2438) (6009) (142 К.)

Тербчталин 10'" М 3.3701+ 4.1460+ 4.2614+ 4.3855+ 4.29411 3.88461 0.0639* <).1577 0.16341"'1 « 449 ,М,ШТ (2345) (13996) (18254) (24295) (19685) (7667) 3.44541 3.7748+ 4.22451 0.0694 0.0704 0.1002 (2789) (5953) (167701 (п-9)

Тсрбуталин И)"'' М 3,3766± 4.07661 4.28261 4.3453+ 4.1912+ 3.79291 0.0710 0.1538 ()1424Т и<!374'»Т (1.1483 ().()Ш1"Т (2380) (11930) (19170) (22146) (15532) (6209) 3.41501 3.6959+ 4.!515г О-«74'-' 0.()8011П' 0.1198 (2600) (4964) (141751

Тсрбуталин 10'" М 3.4281 г 4.0690! 4.28481 4.35741 4.20071 3.7437+ 0.0702 0.1667 0 ,58,тГ 0.1218,пТ 0.11Т1Ш'Г О-ОЖО1"™ (2680) (11723) (19265) (22772) (15875) (554.3) 3.4158+ 3.6798+ 4.11 ¡5' 0 (>771 г 0.0816 0.1289 (2605) (4784) (12926) (п=9)

Тсрбуталин 10'* М 3.4052+ 4.0918+ 4..3|76± 4.3489+ 4.15.381 3.7963+ 0.0903 (1.1433 0.1339 0.1337ШТ 0.11011 0.08761"'1 (2542) (12353) (20776) (22332) (14249) (6256) 3.37881 3.73111 4.23030.0450Г 01025 ,Ш41 (2392) (5384) (16993) (п=9)

Тсрбуталин 10" М 3.32931 4.0515+ 4.2990+ 4.3620+ 4.19931 3.8420+ 0.1236 0.1664 о.1369Ш"Г- (и:!85 0.09521"1 0.0702шТ (2135) (11259) (19905) (23013) (15825) (6951) 3.4031+ 3.75761 4.13461 0.0703 0.0801 0.1175 (2530) (5723) (13633)

* - Число наблюдений во всех выборках, за исключением 3-х случаев, отмеченных в таблице, равно 10. Остальные обозначения те же, что и в табл. 4.

других клеток, так как при взаимодействии с адренорецепторами лимфоцитов исследованные антагонисты ведут себя как агонисты. Подобные эффекты не характерны для других органов-мишеней катехоламинов. Тем не менее, на уровне лимфоцитов прямые эффекты адренергических антагонистов описаны и в настоящее время дискутируются с позиций открытого недавно синтеза в лимфоцитах катехоламинов, а последние рассматриваются как факторы не только

50 40 30 20 10 0

*1000

Т

Т

а Т

а Т №

Рис. 6. Сравнительная характеристика супрессивного эффекта адреналина, пропранолола или комбинации пропранолола с адреналином на пролиферативный ответ лимфоцитов в культурах с добавлением 50 м кг/мл ФГА.

По оси абсцисс: 1 - контроль, 2 - адреналин I мкг/мл (0,455* КГ1 М), 3 - пропранолол 0,25-10° М, 4 - комбинация пропранолола 0,25-10*' М с адреналином 1 мкг/мл. 5 -лропранолол 0,25-10"6 М. 6 - комбинация пропранолола 0,25•10"'' М с адреналином I мкг/мл. Па оси ироинат: средняя геометрическая имн/мин (антилогарифм из М Iоуз,. имп/мин). Приведены парные средние данные лиц. у которых тесты с адреналином на фоне пропранолола и одним адреналином ставились одномоментно. Число наблюдений в контроле и во всех опытных выборках равно 6. " - р <0.05 по любом) из критериев по отношению к изолированному эффекту пропранолола.

эндокринной, но и аутокринной регуляции [1 Ве^цш5( с! а!., 1998]. Поэтому не исключено, что этот эффект может опосредоваться через модуляцию синтеза катехоламинов.

При совместном внесении адреналина и йохимбина антагонист не влиял на выраженность пролиферативного ответа лимфоцитов, и статистически значимых отличий выраженности действия комбинации препаратов в сравнении с изолированными эффектами этих препаратов выявлено не было. Празозин отменял угнетающий эффект адренатина в культурах с концентрацией ФГА 25 мкг/мл, но не влиял на него в культурах с концентрацией ФГА 50 мкг/мл (табл. 6).

Поскольку в реализации эффектов адреналина на внутриклеточном уровне важную роль играют сигнальные пути с участием в качестве вторичных посредников цАМФ (при стимуляции всех типов р-адренорецепторов) и Са2" (при стимуляции агадренорецепторов), исследовано влияние некоторых модуляторов этих путей.

Теофиллин (ингибитор фосфодиэстеразы, повышающий уровень цАМФ) оказывает сильно выраженный ингибирующий эффект как на спонтанную пролиферацию лимфоцитов в культурах без митогена, так и на пролиферативный ответ в культурах со всеми концентрациями ФГА и Кон А. Поскольку эффекты адреналина через р-адренергические рецепторы связаны именно с повышением уровня цАМФ, представленные в данном разделе результаты дополнительно подтверждают значимость цАМФ-зависимых сигнальных путей в реализации

Таблица 6

Влияние адреналина в комбинации с антагонистами а|- (празозина гидрохлорид) и агадренорецепторов (йохимбина гидрохлорид) на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови здоровых людей*_

Препарат Митоген и его концентрация (мкг/мл)

и его кон- Беч ФГА

центрация митогена 12.5 Г 25 1 50 ] 100 | 200

Коггтроль 3.5864± 0.1338 (3859) 3.7002± 0.2294 (5014) 4.1060+ 0.1543 (12764) 4.1450+ 0,1585 (13965) 3.9181 + 0.1962 (8282) 3.5146; 0.2046 (32"71)

Адреналин 1 мкг/мл 3.4576+ 0.0757 (2868) 3.5314+ 0.1111 (3340) 3.7668+ 0.1053"'™' (5845) 3.89971 0.1781'пТ (7938) 3.63031 0.1631 (4269) 3.5 1981 0.1305 (З.ЗК))

Йохимбин Г.Ч 3.43781 0.1049 (2741) 3.5113± 0.0717 (3246) 3.9906± 0.1069 (9786) .3.8597+ 0.2«991иТ (7240) .3.52870.35591 (3379) .3.69831 0.1458 (4993)

Йохичбин 10"'' М+ алреналин 1 мкг/мл 3.4653+ 0.0726 (2920) .3.5103+ 0.1214 (3238) 3.80151 0.1885"'1 (6331) 3.9532+ 0.1646 Г (8978) .3.66171 0.2057""' (4589) 3.51081 0.1456 (3242)

Празозин 10* м 3.45931 0.0307 (2880) 3.6925+ 0.1081 (4926) 3.8635+ 0.1136й''1 (7303) 3.83651 0.196.31"'1 (6863) 3.6991 + 0.1802""' (5001) 3.50101 0.1622 (3170)

Пра (о шн 10л М+ адреналин 1 мкг/мл 3.43481 0.0644 (2722) 3.5455+ 0.1098 (3512) 3.9671 + 0.1645я (9271) 3.8556± 0.18811"1 (7172) 3.7168+ 0.1862 (5210) .3.5303 + 0.1371 (3391)

* - число наблюдений (п) в контроле и во всех опытных выборках равно 8:

'' - р<0,05 по любому из критериев по отношенню к адреналину I мкг/мл: остальные

обозначения те же. что и в табл. 4.

иммунодепрессивного действия адренергических соединений. Однако депрессивный эффект адренергических соединений на пролиферацию лимфоцитов в сравнении с эффектом теофиллина выражен более мягко.

Таблица 7

Влияние теофиллина на пролиферативный ответ лимфоцитов периферической крови здоровых людей в культурах с ФГА*_

Препарат и его

Митогсн и его концентрация (мкг/мл)

концент- Бет ми- ФГА Кон А

рация

тогенз 12.5 25 50 100 200 0.5 5 50

Контроль 3.57151 0.0499 (3729) 4.22970.1063 (16972) 4.5346' 0.1122 (34244) 4.5311 0.0851 (33974) 4,3508" 0.0906 (22430) 3.9954" 0.1120 (9894) 3.5420' 0.0552 (3484) 3.7982' 0.0809 (6284) 4.1520" 0.0672 (Т418У.5)

Теофиллин 3 тМ 3.4572-TW 0.0753 3.2637: 0.089)'"™ 3.45.32' 0,0926"'™ 3.35810.0699'"™ 3.2692' 0.0591"'™ 3.4112 0.05.381П™ 3.2788' 0.0825Ш™ 3.4206" 0.1057,nlW 3.382'/ 0.0907'"

(2865) (1835) (2839) (2281) (1859) (2578) (1900) (2634) (2415.2)

* - число наблюдений (п) в контроле и во всех опытных выборках равно 10: остальные обозначения те же, чго и в табл. 4.

Таблица 8

Влияние ингибитора кальциевых каналов верапамила, добавленного в культуры изолированно или совместно с адреналином, на пролиферативный ответ

пимгЪгитытпп прпыгЪрпииррк'ГЧЙ и-пппи тлппииу

Препарат Митогсн и его концентрация (мкг/мл)

и его Без ФГА

концентрация митогена 12.5 25 50 100 20(1

Контроль 3.5864± 1.1338 (3859) 3.7002+ 0.2294 (5014) 4.1060± 0.1543 (12764) 4.145()± 0.1585 (13965) 3.9181 + 0.1962 (8282) 3.5146+ 0.2046 (3271)

Адреналин 1 мкг/мл 3.4576± 0.0757 (2868) 3.5314± 0.1111 (3340) 3.7668± 0.1053,nlW (5845) 3.8997± 0.17811"' (7938) 3.6303± 0.1631 (4269) 3.5198± 0.1305 (.3310)

Верапамил 0.025 мкг/мл 3.0740± 0,1018Ш1а (1186) 2.9643х 0.1069l"Wa (921) 2.9840± 0.0756l"'1W" <%4) 3.0482+ 0.0940U'TW" (1117) 3.1817± 0.1024l"TW" (1520) .3.1388± 0.066(1* (1377)

Верапамил 0.025 мкг/мл+ алреналин 1 мкг/мл 3.2411± W 0.1484 11742) 3.03.31± (U230mWa (1079.) 3.0093+ 0.0350I,Í1W» (1022) 2.80721 0.0734U,'IV,ab (641) 3.1337+ 0.1251,IlWla (1.360) .3.159 !± 0.1097a (1442)

* - число наблюдений (п) в контроле и во всех опытных выборках равно 6; а - р<0,05 по любому из критериев по отношению к адреналину 1 мкг/мл; ь - р<0,05 по любому из критериев по отношению к изолированному внесении: препарата; остальные обозначения те же, что и в табл. 4.

Блокада Са2+-каналов верапамилом (табл.8) практически полностью отменяла развитие пролиферативного ответа лимфоцитов независимо от дозы ми-тогена и присутствия адреналина, что указывает на важную роль кальциевых каналов в регуляции пролиферативного ответа лимфоцитов. Выявлен синергизм действия адреналина и верапамила. В культурах с концентрацией ФГА 50 мкг/мл при сочетанном внесении адреналина с верапамилом уровень пролиферации был статистически значимо более низким, чем в культурах с раздельным внесением этих соединений, что указывает на реализацию эффекта адреналина через другие сигнальные пути.

Таким образом, исследования в системе in vitro указывают на то, что супрессивное действие адренергических соединений на пролиферативный ответ лимфоцитов может реализоваться не только через р-, но и через а-адренорецеп-торы.

В целом, полученные в настоящей работе данные указывают на важную роль адренергических механизмов в регуляции функций клеток иммунной системы.

ВЫВОДЫ

1. В экспериментальных системах in vivo и in vitro доказано участие адренергических механизмов в регуляции функций иммунокомпетентных и фагоцитирующих клеток, процессах их перераспределения в норме и при стрессе.

2. Иммобилизационный стресс в условиях развития локальной формы иммунного ответа приводил к значительному угнетению показателей реакции гиперчувств ителыгости замедленного типа, а так же к менее выраженному подавлению антителообразования. Блокада р-адренорецепторов пропранололом отменяла эти депрессивные эффекты стресса, что указывает на вовлеченность р-адренергических механизмов в подавление иммунитета.

3. Развитие иммунного ответа приводило к увеличению суммарной фагоцитарной активности макрофагов регионарного лимфатического узла. На фоне стресса данный эффект нивелировался. Блокада Р-адренорецепторов пропранололом отменяла депрессивный эффект стресса.

4. Адренергические механизмы играют существенную роль в регуляции перераспределения гранулоцитов крови и их фагоцитарной активности.

5. Адреналин и селективный агонист Р-адренорецепторов тербуталина сульфат в концентрациях, близких к физиологическим, оказывали выраженный депрессивный эффект на пролиферативный ответ лимфоцитов человека в системе in vitro.

6. На основании исследований действия адреналина в условиях блокады Р-, ар и ai-адренорецепторов можно считать, что супрессивное действие адренер-

гических соединений на пролиферативный ответ лимфоцитов может реализоваться не только через ß-, но и через а-адренорецепторы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шшов Ю.И., Геин C.B. Влияние адреналина и теофиллина на пролиферативный ответ лимфоцитов в культурах с Т-клеточными митогенами // Клиническая аллергология и иммунология. Иммунодиагностика и иммунореабилитация: Тр. 2-й Международной конференции и I съезда Белорусской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов (БААКИ). - Минск-Витебск, 1998. - С. 216-218.

2. Shilov Ju.I., Gem S.V.. Chcreshnev V.A. Adrenergic and cAMP-dependent regulation of mitogen-induced lymphocyte proliferative responses 11 J. Allergy and Clin. Immunol. -1998.-Vol. 101,- N 1. - Paît 2. - Suppl. (January). - S. 38-38 (164).

3. Шилов Ю.И., leùii C.B. Влияние блокады бета-адренергических рецепторов и им-мобилизационного стресса на реакция клеточноопосредованного и гуморального иммунитета // Научная сессия Пермской государственной медицинской академии 1998 года: Тез. докл. - Пермь, 1998. - С. 68-68.

4. Геин C.B., Шилов Ю.И. Адренергическая и цАМФ-зависимая регуляция пролифе-ративного ответа лимфоцитов в культурах с митогенами // Научная сессия Пермской государственной медицинской академии 1998 года: Тез. докл. - Пермь, 1998. - С. 6969.

5. I'eùii C.B., Шилов Ю.И. Адренергическая и цАМФ-зависимая модуляция пролифе-ративного ответа лимфоцитов в культурах с митогенами // V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" (Москва 21-25 апреля 1998 г.): Тез. докл. - М.: 1998. - С. 330-330.

6. Шилов Ю.И., Гейп C.B. Модуляция пропранололом стресс-индуцированных изменений иммунных реакций // V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" (Москва 21-25 апреля 1998 г.): Тез. докл. - М.: 1998. - С. 340-340.

7. Гейп C.B., Шилов Ю.И., Черешнсв В.А. Влияние адренергических соединений на пролиферативный ответ лимфоцитов // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии (диагностические системы будушего. аллерговакцины, вакцины нового поколения, иммуномодуляторы и клинические разработки в аллергологии и иммунологии). 2-й Национальный конгресс Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов (РААКИ). 21-24 сентября 1998 года. Москва: Сб. Тр. - М„ 1998. - С. 345-345.

8. Gein S.V., Shilov Ju.I. Influence of stress on expression of immune reactions // Межд. конф. "Проблемы загрязнения окружающей среды-98. Environmental Pollution ICEP'98" Москва, 12-18 сентября 1998 г.: Тез. докл. - М., 1998. - С. 238-238.

9. Шилов Ю.И., Геин C.B. Влияние им мобилизационного стресса и блокады (5-адренергических рецепторов на антителообразование и реакции гиперчувствительности замедленного типа в регионарных лимфатических узлах и селезенке при подкожной иммунизации // Иммунология. - 1998. - N 6. - С. 25-26.

10. Гейп C.B. Роль адренорецепторов в регуляции пролиферативного ответа лимфоцитов// Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии: Тез. докл. Региональной конф. молодых ученых 18-20 января 1999 г. - Пермь, 1999. - С. 126127.

11. leim C.B., Шшов Ю.И. Роль адренорецепторов в регуляции пролиферативного ответа лимфоцитов в культурах с Т-клеточными митогенами // "Актуальные вопросы эндокринологии": Тез. докл. 2-й Всеросийской научно-практической конф. 2-4 февраля 1999 г. - Пермь, 1999. - С. 101-102.