Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Адренергическая регуляция отдельных проявлений функциональной активности больших гранулярных лимфоцитов

РГЬ ОА - 8 ОКТ 1996

ТАНАЕВА НАТАЛИЯ ИВАНОВНА

АДРЕНЕРГИЧЕСКАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ОТДЕЛЬНЫХ ПРОЯВЛЕНИЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ БОЛЬШИХ ГРАНУЛЯРНЫХ ЛИМФОЦИТОВ

14.00.36 - аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 1996

Диссертация выполнена на кафедре микробиологии с вирусологией и иммунологией Самарского медицинского университета.

Научный руководитель - доктор медицинских наук, профессор Балмасова Ирина Петровна.

Научный консультант - доктор медицинских наук Махова Алла Николаевна.

Официальные оппоненты :

доктор медицинских наук, профессор Блинков Юрий Андреевич, кандидат медицинских наук Прокопенко Владимир Дмитриевич.

Ведущая организация - Челябинская Государственная медицинская Академия.

Защита состоится О " г. в_часов на

заседании диссертационного совета KJ384.57.01. в Курском Государственном медицинском университете по адресу: 305033, Курск, ул. Карла Маркса, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Курского Государственного медицинского университета.

Автореферат разослан ——1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доцент

В.В.Новиков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время уже ни у кого не вызываает сомнений, что в условиях стресса или получения пороговых раздражителей и в относительно стабильных условиях существования организм функционирует по-разному. Это находит отражение и на уровне иммунной системы, о чём свидетельствуют многочисленные литературные данные последних лет (Корнева Е.А.,1988, Лозовой В.П., Шергин С.М., 1981, Strom T.B. et al., 1979, Tvede N. et al., 1994). Однако характер иммунологической перестройки при переходе от стабильных условий к стрессовым, механизм воздействия стрессорных факторов на иммунокомпетентные клетки остаются ещё во многом нераскрытыми и представляют собой актуальную научную проблему.

Актуальность данной работы определяется ещё тем обстоятельством, что среди всех клеток иммунной системы, пожалуй, наименее изученными являются большие гранулярные лимфоциты (БГЛ), представление о функциональной гетерогенности которых возникли сравнительно недавно - в 80-х годах нашего столетия (Imamura N. et al., 1988, Saksela E., Timonen Т., 1980). До сих пор остаются неясными многие регуляторные аспекты и формы проявления функциональной активности этих клеток, имеются буквально единичные работы, посвящённые функции этих клеток в условиях эмоциональной и физической нагрузки на организм (Tvede N. et al., 1994). Иными словами, пока ещё даже трудно предположить, какие перспективы для медицины будущего сулит детальное изучение этой лимфоидной популяции, но уже сейчас известно, что БГЛ причастны к таким процессам, входящим в категорию актуальных медицинских проблем, как контроль клеточной дифференцировки, патогенез опухолевых и аутоиммунных заболеваний, механизмы противовирусного иммунитета и т.д. ( Хаитов P.M., 1984 , Buske-Kirschbaum А. et al., 1992, Clement M.V. et al., 1993, Gewirtz A.M. et al.,1987).

Актуальность данного исследования связана и с прикладными аспектами. В работе много внимания уделяется одной из новых методик определения функциональной активности БГЛ по суммарному эффекту депонирования и высвобождения биогенных аминов в нагрузочном тесте (И.П.Балмасор-^.,1990). Эта методика, будучи сравнительно

легко воспроизводимой, пока еще не нашла широко] внедрения в практику, поскольку степень её информативное! нуждается в дополнительном экспериментально подтверждении. Последнее как раз и придаст актуальное! данной работе в методическом плане.

Цель исследования. Целью настоящего исследоваш является определение ведущих проявлений адренсргическо1 воздействия на внутриклеточные процессы в БГЛ в связи с способностью этих клеток к депонированию и высвобождени биогенных аминов.

В соответствии с поставленной целью были определен задачи исследования, а именно:

1. Установить характер влияния "стрессовых "пороговых" и "физиологических" концентраций адреналина тест-системе in vitro на способность БГЛ к депонированию высвобождению биогенных аминов.

2. Определить наиболее эффективные in viti концентрации адреналина, влияющие на способность БГЛ депонированию и высвобождению биогенных аминов.

3. Установить степень участия системы внутриклеточног цАМФ в процессах депонирования и высвобождения биогенны аминов большими гранулярными лимфоцитами в условия адренершческих воздействий in vitro.

4. Установить возможность и дозозависимост адренергических воздействий in vitro на интенсивност метаболизма в БГЛ в связи со способностью последних депонированию и высвобождению биогенных аминов.

5. Установить возможность и дозозависимост адренергических воздействий in vitro на общи морфологические показатели БГЛ в связи со способность! последних к депонированию и высвобождению биогенны аминов.

6. Установить возможность и дозозависимост адренергических воздействий in vitro на ультраструктуру БГЛ связи со способностью последних к депонированию высвобождению биогенных аминов.

7. Подтвердить информативность нагрузочного теста биогенными аминами как способа характеристики функ ционального состояния БГЛ по суммарному эффекту депо нирования и высвобождения биогенных аминов.

Научная новизна. Проведенные исследования позволили получить новые сведения об особенностях

адренорегуляторного влияния на большие гранулярные лимфоциты в связи с их способностью к депонированию и высвобождению биогенных аминов. Так, в частности, впервые установлено, что:

"стрессовые", "пороговые" и "физиологические" концентрации адреналина в тест-системе in vitro по разному влияют на способность БГЛ к депонированию и высвобождению биогенных аминов;

- процессы депонирования и высвобождения биогенных аминов большими гранулярными лимфоцитами в условиях адренергической регуляции in vitro являются цАМФ-независимыми;

"стрессовые", "пороговые" и "физиологические" концентрации адреналина по разному влияют на интенсивность метаболизма в БГЛ, что, в свою очередь, показывает разную степень корреляции с процессами депонирования и высвобождения биогенных аминов этими клетками;

"стрессовые", "пороговые" и "физиологические" концентрации адреналина по разному влияют на морфометрические и ультраструктурные показатели БГЛ при разной степени корреляции с процессами депонирования и высвобождения биогенных аминов этими клетками.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы связана с получением новых фактов об особенностях функционирования больших гранулярных лимфоцитов в условиях адренергической регуляции in vitro. Эти исследования открывают широкие возможности для изучения этих процессов in vivo. Кроме того, полученные сведения расширяют наши представления о физиологии БГЛ и создают основу для дальнейшего изучения пока малоизвестной способности этих клеток к депонированию и высвобождению биогенных аминов.

Практическое значение работы вытекает из подтверждения информативности данных получаемых при испытании БГЛ в нагрузочном тесте с моноаминами, что значительно расширяет методические возможности работы с этой лимфоидной популяцией.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на XXVI итоговой научной конференции профессор-

ско-преподавательского состава военно-мсдицинского

факультета при Самарском медицинском институте Им.Д.Й.Ульянова (Самара, 1993); на ХП Российской научной конференции (Челябинск, 1995); на итоговой конференции ЦНИЛ Самарского государственного медицинского университета (Самара, 1995).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 6 работ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1."Стрессовые", "пороговые" и "физиологические" концентрации адреналина оказывают разное регуляторное воздействие в отношении способности БГЛ к депонированию и высвобождению биогенных аминов.

2. Способность БГЛ к депонированию и высвобождению биогенных аминов в условиях адренергической регуляции сочетается с интенсивностью метаболизма в этих клетках.

3. Способность БГЛ к депонированию и высвобождению биогейных аминов в условиях адренергической регуляции сочетается с определённой ультраструктурной и морфологической перестройкой этих клеток.

Структура и объем работы. Работа изложена на 106 страницах и состоит из введения, 5 глав, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций. Диссертация иллюстрирована 17 таблицами, 23 рисунками. Библиографический указатель включает 225 источников, из которых 68 работ отечественных и 157 - зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Для решения поставленных задач в содержание работы вошли экспериментальные исследования, проведенные на мышах линии С/57В1/6. Для исследования использовалась лимфоидно-макрофагальная взвесь из селезёнок мышей, при этом проводилось три серии экспериментов. Во всех сериях изучалось содержание биогенных аминов в гранулах БГЛ под воздействием различных концентраций адреналина в тест-системе in vitro с использованием гистохимическиго метода. Кроме того, в первой серии исследований параллельно определялся уровень внутриклеточного цАМФ радионммунным методом. Во второй серии изучение содержания биогенных

аминов п БГЛ под влиянием эффективных концентраций адреналина сочеталось с изучением способности этих клеток к включению меченого ЗН-уридпна методом авторадиографни. В третьей серии параллельные исследования включали

морфометрию в процессе световой и электронной микроскопии.

Статистическая обработка полученных результатов производилась с помощью персонального компьютера IBM -286 по программе "АРМ-статистика". При этом

использовались приемы первичном обработки материала с определением средних величин и их срсднеквадратических отклонении, разнообразные приемы статистического сравнения данных в соответствии с их распределением, корреляционный анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Оценивая данные литературы, можно констатировать, что клетки, находящиеся в периферической крови, в обычных физиологических условиях контактируют с адреналином в дозах, примерно соответствующих 10/-9М - 10/-11М (С.П.Голышенков, 1984). Ориентируясь на эти данные, мы использовали в наших исследованиях in vitro адреналин в концентрациях 10/-9М -10/-ИМ, считая последние "физиологическими" дозами. С.П.Голышенков (1984), характеризуя биологические эффекты адреналина, оценивал дозы адреналина, соответствующие 10/-6М - 10/-8М как умеренные. В наших исследованиях эти концентрации адреналина мы условно обозначали "пороговыми". Этот же автор описывает влияние больших доз названного гормона на некоторые ткани организма животных, считая таковыми концентрацию экзогенного адреналина 10/-ЗМ. В работах И.П.Балмасовой (1990) показано, что в опытах in vitro среди больших концентрации адреналина более эффективной была 10/-4М. Именно с этой концентрацией мы работали, оценивая её как "стрессовую". Данные литературы подтверждают (Benschop R.J., Jabaaij L.Oet al 1993), что при стрессе концентрация адреналина в крови действительно примерно соответствует использованной дозе.

Из разнообразных проявлений функциональной активности БГЛ детально анализировалась их способность к депонированию и высвобождению биогенных аминов.

Изучение действия различных концентраций адреналина

на количество БГЛ, содержащих и гранулах адреналин, серотонин, гистамин, в тест-системе in vitro (табл.1) показало, что достоверное изменение числа БГЛ с различными биогенными аминами в гранулах наблюдается при трёх концентрациях адреналина в тест-системе - 10/-4М, 10/-6М, 10/-11М, которые мы условно назвали "эффективными".

Таблица 1

Влияние различных концентраций адреналина в тест-ситеме in vitro на содержание БГЛ, несущих в гранулах различные биогенные амины, среди лимфоидно-макрофагальных клеток селезёнки

Условия инкубирования Относительное количество БГЛ

лимфоидно-макрофа галыюй взвеси общее адреналин содержащих серотонин-содержащих гистамин-содержащих

Интактные клетки 7,3+0,5 5,3+0,5 5,7+1,0 1,0±0

В присутствии 10/-4 м адреналина 7,0+0 7,0+0* 3,3+0,8 2,7+0,9

В присутствии Ю/-6 м адреналина 9,7+0,5* 7,3+0,5* 4,7+0,9 4,7±0,9*

В присутствии 10/-8 м адреналина 9,7+0,5* 6,7+0,8 6,0+0,9 2,7+0,5*

В присутствии Ш/-9 М адреналина 7,7+0,9 6,7+0,9 5,3±0,9 2,0+0*

В присутствии 10/-10 м адреналина 7,3+0,5 5,3+0,5 4,7+0,5 1,7+0,5

В присутствии 10/-11 м адреналина 6,3+0,5 4,7+0,5 4,0+0,9 2,3+0,5*

Примечание: * - различие статистически значимо (Р<0,05).

При определении уровня внутриклеточного цАМФ в БГЛ, подвергнутых действию различных концентраций адреналина в тест-системе in vitro, наиболее значительные изменения выявлены при концентрациях адреналина близких к физиологическим - 10/-9 М, 10/-10 М, 10/-11 М. В этих случаях отмечено достоверное снижение уровня циклического

аденозинмонофосфата примерно в 3,8-4,5 раза по сравнению со средним содержанием его в интактных клетках.

Особого внимания, с нашей точки зрения, заслуживал раздельный анализ данных при низких и высоких исходных значениях цАМФ. Как видно на рис. 1, динамика изменения цАМФ не зависела от исходного уровня: во всех случаях низких исходных значений колебания уровня цАМФ соответствовали

Рис.1. Д^намиэ изменения уровня внутриклеточного цДМФ в соответствии с его исходоыдо значениями для БГЛ, находящихся в интактной тест-систвме и в присутствии различных концентраь^й адреналина.

таковым при высоких исходных значениях, хотя и показывали более низкие величины.

Взаимосвязь между уровнем цАМФ и способностью БГЛ к депонированию и высвобождению биогенных аминов изучалась путем определения корреляционной зависимости между количеством БГЛ,несущих в гранулах адреналин, серотонин, гистамин, и уровнем внутриклеточного цАМФ под действием экзогенного адреналина в различных концентрациях.

Корреляционная связь между количеством БГЛ, несущих адреналин, до инкубации и после инкубации была выявлена при всех испытуемых концентрациях адреналина, кроме 10/-4 М. Корреляция носила прямой характер, поскольку значения коэффициентов корреляции в этих случаях были только положительными. Что же касается уровня цАМФ в БГЛ, то результаты получились неоднозначными и во многом неожиданными. Если принимать во внимание общее число БГЛ, то высокая степень корреляционной связи отмечена только при концентрации адреналина 10/-9 М (рис.2),причем характер корреляции был отрицательным. Чтобы уточнить, какие клетки играют здесь ведущую роль,рассматривались корреляционные зависимости для больших гранулярных лимфоцитов, несущих отдельные амины. При такой постановке задачи

адреналинсодержащие БГЛ показывали обратную корреляцию с уровнем внутриклеточного цАМФ при концентрациях адреналина 10/-4 М и 10/-9 М. В случаях высокого содержания адреналина в тест-системе адреналинсодержащие БГЛ вели себя неоднозначно: при исходно высоком значении цАМФ рост их числа совпадал с падением уровня цАМФ, а при низких исходных значениях цАМФ наблюдалась обратная тенденция. Низкие концентрации адреналина во всех случаях приводили к росту числа БГЛ на фоне резкого падения уровня внутриклеточного цАМФ. Иными словами, при концентрации адреналина 10/-4 М процессы депонирования этого вещества очень часто являются пассивными и не сопровождаются ростом внутриклеточного цАМФ. При содержании адреналина в тест-системе в концентрации 10/-9 М депонирования этого вещества не происходит (табл.1), а уровень цАМФ падает.

Серотонинпозитивные БГЛ ведут себя в условиях эксперимента несколько иначе. Их количество в присутствии высоких концентраций адреналина уменьшалось, не изменяясь в остальных случаях, и показало очень высокую корреляцию с

уровнем цАМФ при всех концентрациях, кроме 10/-6 М и 10/-11М (табл. 1)

Гистаминпозитивные БГЛ проявляли высокую корреляционную зависимость от уровня цАМФ, изменяющегося под влиянием адреналина, практически при тех же концентрациях, что и серотонинсодержащие клетки (10/-4М, 10/-9М, 10/-ЮМ). Что же касается характера корреляционных связей, то он волнообразно изменяется по мерс роста концентрации (рис.2).

Значения коэффициентов корреляции

Вот 0 до 0,4

сгг 0,4 до 0,6 от 0,6 до 0,8 от 0,8 до 1,0

Рис.2 Матрица значений коэффициентов корреляции для БГЛ

в целом и БГД несущих различные биогенные амины, с уровнем внутриклеточного цАМФ в этих клетках при различных концентрациях адреналина в тест-системе in vitro.

Таким образом, этот раздел исследований позволил утверждать, что адренергимеская цАМФ-зависимая регуляция распространяется на процессы депонирования и высвобождения

не столько адреналина, сколько серотонина и гистамина, что заставило нас параллельно проанализировать влияние последних на количество БГЛ и уровень цАМФ в названных клетках. Установлено, что наличие в тест-системе in vitro серотонина и гистамина не сопровождалось развитием корреляционной зависимости между уровнем внутриклеточного цАМФ и количеством БГЛ.

Характеристика суммарного эффекта БГЛ по депонированию и высвобождению биогенных аминов проводилась с помощью коэффициента СКА (суммарный коэффициент содержания биогенных аминов), который определяется по формуле:

СКА - KM + КСЕР + Кшст ,

где К - коэффициент, характеризующий количественное соотношение БГЛ для каждого способа инкубирования в присутствии тестируемого биогенного амина. В свою очередь,

к = Аи*Си+Си*ги+Аи*Ги

АК*СК+СК*ГК +АК*ГК -

где А - % БГЛ, несущих гранулы адреналина, С - % БГЛ, несущих гранулы серотонина, Г - % БГЛ, несущих гранулы гистамина; в числителе (с индексом "и") - результаты определения для лимфоцитов, инкубированных с моноамином, для которого рассчитывается коэффициент; в знаменателе (с индексом "к") - показатели для интактных лимфоцитов (контроль).

Динамика изменения значений СКА при воздействии различных концентраций адреналина в тест-системе in vitro представлена в таблице 2.

Состояние процессов депонирования и высвобождения биогенных аминов большими гранулярными лимфоцитами, выраженное величиной СКА, изменялось при уменьшении концентрации адреналина в тест-системе. При концентрации 10/-4М оно могло быть как равновесным по суммарному эффекту, так и смещенным в сторону преобладания депонирова-

1ия. При концентрации 10/-6М оно всегда характеризовалось феобладанием депонирующих механизмов, равно как и при юнцентрации 10/-11 М. При остальных концентрациях остояние процессов депонирования и высвобождения аминов зГЛ, определяемое величиной СКА, вариировало.

Таблица 2

Условия инкубирования лимфоидно-макрофагальной взвеси Средние значения СКА при низких исходных величинах Средние значения СКА при высоких исходных величинах

1 присутствии 0/-4 М адреналина 2,5 + 0,8 5,5 + 1,0

! присутствии 0/-6 М адреналина 6,2 ± 1,2 4,0 ± 1.0

1 присутствии 0/-8 М адреналина 4,8 ± 0,9 3,4 + 0,7

: присутствии 0/-9 М адреналина 4,2 ± 0,9 3,8 ± 0,9

присутствии 0/-10 М адреналина 3,3 ± 0,6 3,6 ± 0,8

присутствии 3/-11 М адреналина 4,8 ± 1,0 4,2 ± 0,9

СКА как показатель функциональной активности БГЛ по уммарной способности к депонированию и высвобождению иогенных аминов проявлял высокую степень корреляции с ровнем внутриклеточного цАМФ.

Оценка интенсивности метаболизма, в частности, белкового интеза, особенно важна, когда речь идет о больших ранулярных лимфоцитах. С этим проявлением метаболизма вязано образование белковых соединений, определяющих итотоксические свойства БГЛ (Abbas A.K.et al.,1994; Uchida A., Jein H., 1988; Young J.D.-E. et al., 1986). Уровень метаболической, том числе белоксинтезирующей, активности БГЛ в наших сследованиях оценивался по интенсивности включения [еченного уридина этими клетками.

Изучение адренергической регуляции белоксинтезирующей ктивности БГЛ, а также взаимосвязи метаболической ктивности БГЛ с уровнем внутриклеточного цАМФ и уммарным эффектом депонирования и высвобождения иогенных аминов этими клетками при эффективных онцентрациях адреналина в тест-системе in vitro показало, что ри концентрации адреналина в тест-системе 10/-4 М пособность БГЛ к включению уридина сранительно слабо ыражена и показывает такую же высокую степень корреляции с

уровнем внутриклеточного цАМФ, как и у интактных клето При концентрации адреналина в тест-системе 10/-6 способность БГЛ к включению уридина выражена в наивыеше степени и имеет отрицательную корреляцию с уровне внутриклеточного цАМФ. При концентрации адреналина в тес системе 10/-11 М способность БГЛ к включению уридш зависит от общего количества БГЛ в тест-системе, в то время к; содержание отдельных биогенных аминов на этот процесс I влияет.

СКА как показатель функциональной активности БГ проявляет высокую степень корреляционной зависимости < интенсивности включения в эти клетки ЗН-уридина, п{ исходно низких значениях СКА эта зависимость являет« положительной, а при исходно высоких величинах СКА отрицательной.

Как ясно из предыдущих результатов, адреналин п{ определенных концентрациях способствует переходу БГЛ в ин< функциональное состояние. При концентрации адреналш 10/-6 М это новое функциональное качество является цАМ<3 независимым и характеризуется резким повышение способности клеток к включению ЗН-уридина. Для выяснен! вопроса, как отражается эта способность,характеризующ; высокую интенсивность метаболических процессов, I морфологии и ультраструктуре БГЛ, были использован световая и электронная микроскопии.

По данным литературы (Углова М.В., Углов Б./ 1982,1987; Хрущёв Н.Г. и др., 1988), к числу информативш морфометрических критериев перехода лимфоидных клеток иное функциональное состояние относятся увеличение ю уменьшение размеров клетки, увеличение или уменьшен] размеров клеточных ядер, возможное изменен] цитоплазменно-ядерных отношений. В этой связи нар> определялись диаметры БГЛ и их ядер, вычислялись площал этих клеток и их ядер, объёмы клеток и ядер, а таю цитоплазменно-ядерные отношения по площадям и объёмам .

Установлено, что все перечисленные морфометрическ показатели состояния БГЛ, за исключением велич! цитоплазменно-ядерных отношений, в присутствии эффективш концентраций адреналина достоверно отличаются от показател' для интактных клеток.

В условиях адренергической регуляции БГЛ значительно увеличивают как общий размер клетки, так и размеры ядра. Этот £акт может косвенно характеризовать как высокую метаболическую активность клетки , так и её переход в :остояние пролиферации. Чтобы подтвердить это допущение, чеобходимо было изучить характер ультраструктурных изменений БГЛ в условиях адренергической регуляции (табл.3).

Данные, представленные в табл. 3, показывают, что воздействие адреналина in vitro в эффективных концентрациях зызывает изменение и ультраструктурных характеристик БГЛ.

В присутствии 10/-4 М адреналина ультраструктурные вменения в БГЛ проявлялись гипертрофией митохондрий, етерохроматизацией ядра, увеличением объемной плотности шзосом и гранул. Структура гранул вариировала. У части слеток гранулы были крупными, заполненными содержимым. У фугой категории БГЛ крупные размеры гранул не сочетались с IX заполнением электронноплотным содержимым.

Таблица 3

Объемная плотность ультраструктурных компонентов БГЛ, интактных и инкубированных in vitro с адреналином

Условия субирования 1МфОИДНО- рофагальной взвеси Объемная плотность в %

гетерохро-матина ядра митохои -дрий эндоплазма-тической сети комплекса Голыши лизосом гранул

1нтактные клетки 85,5+ ±3,5 4,2+ ±0,7 4,0+ ±1Д 2,2+ ±0,2 5,3+ ±1,1 2,4+ ±0,5

присутствии 10/-4 М дреналина 95,0± ±5,8* 5,9± ±0,5 3,9+ ±1,2 2,3± ±0,5 10,2+ ±1,0 3,9± ±0,6

присутствии 10/-6 М дреналина 66,5± ±7,9* 3,8+ ±0,7 6,6+ ±0,3* 3,8+ ±0,1* 7,5+ ±0,5 6,3+ ±0,8

присутствии 10/-6 М дреналина 69,6± ±6,4* 4,7± ±0,6 4,7+ ±1,8 2,0+ ±0,7 6,90+ ±0,6 3,2± ±0,3

Чримечание: * - различие между показателями для интактных слеток и клеток, инкубированных с адреналином, :татистически значимо (Р<0,05)

В присутствии 10/-6 М адреналина изменения морфолог БГЛ были наиболее значительными: увеличивались практичес все морфометрические показатели, кроме цитоплазменг ядерных отношений; наблюдался рост объемной плотное эндоплазматической сети, комплекса Гольджи, гран Имеется электронномикроскопическое подтверждение участ эндоплазматической сети в формировании фан Регистрировались клетки с признаками пролиферации.

В присутствии 10/-И М адреналина БГЛ тоже показа рост морфометрических показателей, но они были мег выражены. Из ультраструкгурных признаков можно отмет! только снижение явлений гетерохроматизации ядра активацию процесса экзоцитоза гранул.

Степень соответствия между морфометрически показателями и метаболической активностью БГЛ присутствии эффективных концентраций адренали определялась изучением корреляционной зависимости ме» морфометрическими показателями и такими признака метаболической активности, как уровень внутриклеточне цАМФ и включение меченого ЗН-уридина.

В процессе воздействий in vitro эффективны концентрациями адреналина уровень внутриклеточного цАМФ БГЛ коррелировал с объемной плотностью комплекса Гольда Способность БГЛ к включению меченого ЗН- уриди положительно коррелировала с размерами клетки (но не ядре объемной плотностью эндоплазматической сети, компле* Гольджи, гранул. Отрицательная корреляция этого призна отмечена с объемной плотностью гетерохроматина митохондрий (рис. 3).

Для выявления степени соответствия между мор4 метрическими показателями и способностью БГЛ депонированию и высвобождению биогенных аминов в присут« вии эффективных концентраций адреналина анализировал} корреляционные взаимосвязи морфомет-рических показателей способности БГЛ изменять содержание биогенных аминов гранулах (рис.4). В процессе воздействий in vi эффективными концентрациями адреналина корреляционн связи общего количества БГЛ, количества адреналг! позитивных и гистаминпозитивных клеток соответст-вова отмеченным для способности БГЛ к включению мсченс уридина. Кроме того, количество гистаминпозитивных клето:

Значение коэффициента коррелямм Морфометрические показатели кур-ню вн.клет. цАМФ к кол-ву БГЛ с уридином

Диаметр БГЛ

Диаметр ядра БГЛ

Площадь клетки

Площадь ядра

Объем клетки

Объем ядра

Цитопл.-ядерное отношение по площадям

Цитопл. -ядерное отношение по объемам

Объемная плотность гетерохроматина Объемная плотность митохондрий

Объемная плотность эндоплазматической сен-

Объемная плотность комплекса Гольджи

Объемная плотность лизосом

Объемная плотность гранул

от 0 до 0,4 от 0,4 до 0,6 от 0,6 до 0,8 от 0,8 до 1,0

'ис.З. Корреляционные взаимосвязи между морфометрическими показате-1ями БГЛ, уровнем их внутриклеточного цАМФ и количеством клеток, не-;ущих меченый уридин в условиях адренергических воздействий In vitro.

(ронвляло высокую стспснь корреляции со всеми юрфометрическимн показателями клетки в целом, не выявляя ависимости от морфомстрип ядра. Количество

еротонинпозитивных БГЛ положительно коррелировало с [орфометрическими показателями и обьемнои плотностью изосом. При корреляционном анализе взаимосвязей величины

Щ|ст0,8 до 1,0

Рис.4. Корреляцюжые взаимоотношения между морфометрическими показат лям1 БГТ1, их o6ufiM количеством, количеством клеток, Hecyujtx различные биогеные аин>1 и СКА в условиях адренертческих воздействий in vitro.

СКА мы, учитывая полученные ранее данные, соч; целесообразным провести раздельно сравнения для исход! низких и исходно высоких значений коэффициента (рис.4). П{ исходно низких значениях СКА проявлял положительну корреляцию с объемной плотностью эндоплазматической сети гранул, а отрицательную - с гетерохроматином ядра. При исход

но высоких значениях СКА отмечалась позитивная корреляция с объемной плотностью лнзосом.

ВЫВОДЫ

1. Адренергическая регуляция функционального юстояния БГЛ является дозозависимой. Наиболее эффективными концентрациями адреналина в тест-системе И1 /Иго в отношении БГЛ являются 10/-4М, 10/-6М, 10/-ИМ.

2. Адренергическая регуляция функционального юстояния БГЛпри концентрации гормона в тест-системе 10/-4М 1вляется цАМФ-зависимой и сопровождается сравнительно шзкими показателями включения ЗН-уриднна в клетки и ^льтраструктурными признаками дегенерации последних.

3. Адренергическая регуляция способности БГЛ к 1епонированню и высвобождению биогенных аминов выявляет 1ва типа реакции со стороны этих клеток при концентрации ормона в тест-системе 10/-4М. Первый тип характеризуется шзкими значениями СКА, уменьшением числа гистаминпози-ивных клеток. При втором типе высокие значения СКА связаны : ростом числа гистаминпозитивных клеток. '

4. Адренергическая регуляция функционального •остояния БГЛпри концентрации гормона в тест-системе 10/-6М >еализуется в форме резкого повышения способности клеток к ¡ключению ЗН-уридина, появления морфометрических и гльтраструктурных признаков активности метаболизма и пособности к пролиферации.

5. Адренергическая регуляция способности БГЛ к [епонированню и высвобождению биогенных аминов при :онцентрации гормона в тест-снстсмс 10/-6М приводит к теличению объемной плотности гранул и росту числа всех минопозитивных клеток.

6. Адренергическая регуляция функционального остояния БГЛ при концентрации гормона в тсст-систсме 10/-1М стимулирует клетки к включению ЗН-уридина, вызывает ,остоверное падение уровня внутриклеточного цАМФ и величение числа гистаминпозитивных клеток, коррелирующее

объёмной плотностью гранул.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При патологических процессах, в патогенезе котор] определённая роль принадлежит клеткам, относящимся к БГ наряду с естественно киллерной активностью и способностью антителозависимой цитотоксичности следует характеризова свойства БГЛ депонировать и высвобождать биогенные амины.

2. В качестве количественного показателя способное БГЛ к депонированию и высвобождению биогенных амин следует использовать коэффициент СКА, дающий не толь прямую информацию об обозначенной способности, но косвенное представление о состоянии внутриклеточн! процессов в БГЛ.

3. При проведении нагрузочного теста с биогенныг аминами для характеристики способности БГЛ депонированию и высвобождению этих веществ следу Использовать концентрацию адреналина 10/-4М.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Диагностическое значение содержания биогенных аминов в Б. // Материалы ХХУ1 итоговой научной конференции профессорск преподавательского состава военно-медицинского факуль mema п Самарском медицинском институте им.Д. И. Ульянова. Сборник научи работ.Выпуск XXI. - 1993 - С.24-25.

2. Large granular lymphocytes in dioxin ecopatholc // International journal of immunorehabilitation. -1994. -P.46

3. Some results of clinical and immunological examinations of i patients with dioxin ecopathology // Dioxin'94. -Japan. Kyoto. -1994. - Vol. 21 P. 167-168.

4. К вопросу об адренергической регуляции функции болыи гранулярных лимфоцитов // Факторы клеточного и гумора/Ш/с иммунитета при различных физиологических и патологических состоянш Тезисы докладов ХП Российской научной конференции. - Челябинск. 1995 С. 14.

5. К вопросу об адренергической регуляции функции болыи гранулярных лимфоцитов // Иммунологические и гуморальные аспекп клинической патологии. Сборник научных работ. - Самара. - 1995.-С.З 42.

6.Влияние адреналина in vitro на метаболическую активное/ больших гранулярных лимфоцитов /тезисы доклада/ // íntemation journal of immunorehabilitation. -1996. -N 2. -P. 196.