Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Анализ и стандартизация лечебно-профилактических препаратов стоматологического назначения, содержащих мексидол

005001646

На правах рукштси

МАТЮШИН Алексей Аркадьевич

АНАЛИЗ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ СТОМАТОЛОГИЧЕСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИХ МЕКСИДОЛ У ^

14.04.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

1 О ноя 2011

Москва-2011

, V 1-'

005001646

Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский Государственный М дицинский Университет имени И.М.Сеченова Минздравсоцразвития РФ

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, доктор педагогических наук,

академик РАО, профессор Попков Владимир Андреев

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Берлянд Александр Семенов!

доктор фармацевтических наук,

профессор Казьмина Эма Максимовна

Ведущая организация:

ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Ми здравсоцразвития РФ

Защита состоится « 2011 г. в 4Ч1 часов на заседании Диссе

тационного Совета Д.208.040.09 при Первом МГМУ им. И.М.Сеченова по адрес 119019, Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной медицинской би лиотеке Первого МГМУ им. И.М.Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нах мовский проспект, 49. Автореферат разослан «

» 0к.т&8(1512011 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета, доктор фармацевтических наук, профессор

Наталья Петровна Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Воспалительные заболевания пародонта представляют одну из наиболее актуальных проблем стоматологии, имеющую социальную значимость, что обусловлено их высокой распространенностью, тяжелыми изменениями в тканях пародонта и организма больного в целом, а так же поражениями лиц молодого возраста.

В настоящее время лечение заболеваний тканей пародонта направлено, преимущественно, на устранение основного фактора патогенеза, микробного зубного налета, посредством антимикробных компонентов, таких как триклозан и хлоргексидин [Gaffar A. et al, 1995; Johnson В.Т., 1995]. Однако более перспективным и патогенетически обоснованным подходом к лечению и профилактике пародонтита является применение антиоксидантов [Дмитриева J1.A. с соавт., 2003; Cadenas Е„ 1997].

Одним из наиболее эффективных антиоксидантов, входящих в состав средств гигиены полости рта, является мексидол. Данное лекарственное вещество обладает широким спектром биологической активности, является ингибитором свободнорадикальных процессов, оказывая при этом выраженное антигипоксиче-ское действие. Стоматологические препараты, содержащие данное соединение, на российском фармацевтическом рынке представлены зубными пастами и ополаскивателем для полости рта серии «MEXIDOL® dent» (ЗАО «ФАРМАСОФТ», Россия).

Существующая на настоящий момент нормативная документация, регламентирующая контроль качества лечебно-профилактических стоматологических препаратов (СанПин 1.2.676-97, ГОСТ Р 51391-99, ГОСТ 7983-99) не предусматривает определение в них лекарственных веществ (J1B). Однако для подобных композиций стоматологического назначения целесообразно осуществлять процедуру стандартизации, аналогичную той, которой подвергаются лекарственные средства. Это может быть обосновано, в первую очередь, соображениями эффективности и безопасности, поскольку при отклонении фактического содержания

3

ЛВ в стоматологическом препарате от заявленного может наблюдаться снижен терапевтического эффекта или развитие нежелательных побочных реакций.

Исходя из вышеизложенного следует, что стандарты для производства с временных стоматологических препаратов не в полной мере соответствуют тр бованиям определения качества подобной продукции. Контроль качества своди ся к оценке безопасности по стандартам косметических и гигиенических издели Однако, в отличие от производителей продукции гигиенического назначения, производителям лекарственных средств предъявляются гораздо более высок требования. Поэтому разработка методов, позволяющих идентифицировать и к личественно определять конкретные JIB в многокомпонентных стоматологич ских композициях для оценки их качества, представляется актуальной задачей.

Цель исследования.

Разработать методы контроля качества и стандартизации стоматологич ских композиций, содержащих мексидол (зубные пасты и ополаскиватель д полости рта серии «MEXIDOL® dent»).

Задачи исследования.

1. Подобрать оптимальные условия изолирования мексидола из зубных па (четыре различные композиции).

2. Разработать методики качественного и количественного анализа мексидо в зубных пастах (четыре различные композиции) и ополаскивателе для п лости рта методом высокоэффективной жидкостной хроматограф (ВЭЖХ).

3. Провести валидацию разработанных методик.

4. С помощью разработанных методик оценить качество исследуемых стом тологических композиций.

5. Изучить стабильность мексидола в зубных пастах (четыре различные кок позиции) при их хранении в рекомендованных производителем условиях.

Научная новизна.

В работе впервые разработана методика экстракции мексидола из комплексных матриц стоматологических композиций.

Впервые разработана и валидирована методика определения мексидола в составе зубных паст (четыре различные композиции) с применением ВЭЖХ, обеспечивающая селективность его определения в присутствии вспомогательных веществ.

Положения, выносимые на защиту.

1. Экспериментальные данные по разработке и валидации методики хромато-графического анализа (пробоподготовка, оптимальные условия хромато-графирования, идентификации и количественного определения мексидола).

2. Результаты оценки качества стоматологических композиций, содержащих мексидол.

3. Результаты изучения стабильности паст (четыре различные композиции), содержащих мексидол.

Внедрение результатов в практику.

Методика ВЭЖХ-анализа мексидола в зубных пастах и ополаскивателе для полости рта серии «MEXIDOL® Dent» внедрена в работу ОТК ЗАО «Фармасофт» (акт внедрения от 20.12.2010), осуществляющего промышленный выпуск этой продукции.

Апробация работы.

Апробация работы проведена на научной конференции кафедры общей химии стоматологического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (Москва, 10.06.2011 г.).

Основные положения диссертационной работы доложены на Итоговой научной конференции молодых исследователей с международным участием «Тать-

янин День» (Москва, 2009), Итоговой Всероссийской научной конференции мо-

5

лодых исследователей с международным участием «Татьянин День» (Москв< 2010), XVII и XVIII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство (2010-2011 гг.).

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе н правления исследования, анализе и обобщении полученных экспериментальны результатов. В работах, выполненных в соавторстве, автором лично проведе мониторинг основных параметров, аналитическая и статистическая обработка р зультатов, их научное обоснование и обобщение. Вклад автора является опред ляющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследов ния: от постановки задач, их экспериментально-теоретической реализации до о суждения результатов в научных публикациях, докладах и внедрения в практику

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научны положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 - «фа мацевтическая химия, фармакогнозия». Результаты проведённого исследовани соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и паспорта фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Связь задач исследования с проблемным планом.

Диссертационная работа выполнена в рамках отраслевой научн исследовательской программы Первого МГМУ им. И.М. Сеченова «Разработк современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологически исследований» (№ государственной регистрации 01220606352). Тема включена план научных исследований кафедры общей химии с курсом стоматологическог материаловедения «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификаци биологически активных соединений синтетического и природного происхожд ния, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологически аспекты)» (01.200.118796).

Публикации.

По результатам диссертационного исследования опубликовано 8 печатных работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (первая глава), экспериментальной части (вторая, третья и четвертая главы), общих выводов, списка литературы из 183 источника (58 из которых зарубежные) и приложений. Работа иллюстрирована 14 рисунками и 12 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для проведения исследования использовались зубные пасты серии «МЕХ-IDOL® dent», а также ополаскиватель для полости рта «MEXIDOL® dent». Исследуемые образцы зубных паст, а также зубных паст «плацебо», содержащие все компоненты кроме мексидола, были предоставлены фирмой производителем ЗАО «Фармасофт».

В работе использовались следующие реактивы: муравьиная кислота, триф-торуксусная кислота, аммония ацетат, калия гидрофосфат, этанол 96 %, вода би-дистиллированная и ацетонитрил. Используемые реактивы имели степень чистоты «ЧДА» и/или «для ВЭЖХ».

Количественное определение мексидола в исследуемых стоматологических препаратах проводили на жидкостном хроматографе Agilent 1100 (Agilent Technologies, США), оснащенным дегазатором, градиентным насосом, обеспечивающим одновременную подачу четырех растворителей, термостатом колонок, авто-самплером и диодно-матричным детектором. Разделение проводили на хромато-графической колонке Luna С 18(2) 4,6*150 мм, 5 мкм (Phenomenex, США).

Управление системой и обработку полученных хроматограмм осуществляли пр помощи программного пакета «Chemstation B.03.01-SR1» (Agilent Technologie США).

Взятие навесок осуществляли при помощи аналитических весов «RV214 (Ohaus, США). pH растворов определяли на рН-метре «RV214» (Ohaus, США Для пробоподготовки применялась центрифуга MiniSpin (Eppendorf, США).

В качестве стандартного раствора использовался 5% раствор мексидола дл инъекций (ООО МЦ «Эллара», серия 021108).

Качество стоматологических композиций оценивали путем определени содержания мексидола и расчета сходимости на образцах паст одной и нескол ких серий. Стабильность зубных паст, содержащих мексидол, изучали путем or ределения его содержания в пастах с различным сроком хранения в условиях, р комендованных производителем.

Статистическую обработку результатов и построение графиков проводил с помощью программного пакета SigmaPIot 10 (США).

Валидацию методики количественного определения мексидола в стома' логических препаратах проводили согласно Руководству FDA по валидации ан литических методик.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1.1 Разработка методики изолирования мексидола из стоматологич ских композиций.

Известно, что мексидол обладает хорошей растворимостью в подкисле ных водных растворах и в спирте. Расчет, произведенный при помощи riporpa.v мы ACDlabs/SoIubility DB, показал, что в нейтральной среде при pH 7,0 раств римость в воде составляет 20,5 г/л; в 0,1% растворе муравьиной кислоты (р 2,72), а также в этаноле 96 % величина растворимости мексидола находится диапазоне 15-25 г/мл. Изначально не представлялось возможным предсказат какой из растворителей будет лучше десорбировать мексидол с поверхност твердых частиц, входящих в состав зубных паст, поэтому было решено провеет

сравнительное испытание двух методов экстракции.

8

Точную навеску пасты (200 мг) помещали в мерную колбу вместимостью 10 мл, прибавляли 5 мл 0,1% раствора муравьиной кислоты или этанола 96 %, тщательно перемешивали и доводили объем до метки тем же растворителем, затем центрифугировали аликвоту (1 мл) при 13400 об/мин в течение 30 мин. Надо-садочную жидкость переносили в виалу для хроматографического анализа и проводили хроматографирование аликвоты (1 мкл) полученного раствора. Для получения статистически достоверных данных проводили шестикратное испытание.

Был построен калибровочный график зависимости площади пика мексидо-ла от его концентрации в рабочих стандартных растворах (рисунок 1).

Концентрация, г/л

Рисунок 1. График зависимости площади пика от концентрации мексидола в диапазоне 0,07-2,6 г/л.

Содержание мексидола в образце рассчитывали по формуле С(%)=100*8/(К*У*т), где 8 - пощадь пика мексидола при длине волны 298 нм, К (1361415 л/г*мкл) - коэффициент калибровочной прямой, V (1 мкл) - объем аликвоты анализируемого образца, ш (200 мг для исследуемой зубной пасты или 1000 мг для ополаскивателя для полости рта) - масса навески исследуемого образца.

Данные, полученные при сравнении двух методов экстракции мексидола, приведены в таблице 1.

Таблица

Результаты сравнительного испытания двух методов экстрации

Наименование пасты Экстрагент

0,1 % раствор муравьиной кислоты Этанол 96 %

X(Sx¡/6) RSD,% X(Ix¡/6) RSD,%

Active 0,4527 1,26 0,4150 4,80

Sensitive 0,4639 1,24 0,4258 2,55

Complex 0,4940 1,06 0,4994 3,04

Fito 0,4644 1,76 0,4702 2,55

Таким образом, предпочтительной является пробоподготовка, включающа в себя экстракцию мексидола из зубных паст 0,1% раствором муравьиной кисло ты, поскольку, при равной (пасты Complex и Fito) или большей (пасты Aktive Sensitive) степени извлечения, величина относительного стандартного отклон ния в данном случае ниже.

1.2 Разработка методики качественного и количественного определ ние мексидола в стоматологических композициях.

Оптимизация pH подвижной фазы

Анализ структурной формулы мексидола показал, что данное соединени обладает амфотерными свойствами, благодаря наличию в молекуле гетероцикли ческого атома азота (основные свойства) и фенольного гидроксила (кислотны свойства). Расчет констант кислотности с помощью программы pKa/ACDLab показал, что значение рКа[ составляет 5,35, рКа2 - 10,59. Расчет равновесны, концентраций трех возможных форм мексидола с помощью программ Solubility/ACDLabs показал, что при pH < 4 вещество будет преимущественн находиться в форме катионов, при pH 6,5 - 9,5 - в неионизированной форме, пр pH > 13 - в форме анионов.

Для достижения требуемой селективности хроматографического метода учетом теоретических выводов нами было проведено хроматографировани

стандарта мексидола, образцов зубных паст и ополаскивателя для полости рта при следующих условиях:

• температура колонки: 25 °С;

• скорость потока подвижной фазы: 1,5 мл/мин;

• градиент концентрации ацетонитрила: от 0% со скоростью 8,64%/мин.

К подвижной фазе прибавляли буферные растворы с различными значениями рН: рН 2,36 (0,05% раствор трифторуксусной кислоты, градиент до 95% ацетонитрила за 11 мин), рН 7,0 (0,005 М раствор аммония ацетата, градиент до 80% ацетонитрила за 9,26 мин), рН 9,36 (0,005 М раствор калия гидрофосфата, градиент до 50% ацетонитрила за 5,79 мин).

120

100

и 80

о ■ сс

60

40

20

рН 2,36

И_

рН 7,0

рН 9,15

JL_A_

I I I I I \ I I I I [ 1 I I I | Ы I I | М I 1 | 1 М I | I I I I I I I I I | I I I I 1 I I I I | I I I I I I I I I | I I I I I

0 2 4 6 8 10 12

Retention Time (min)

Рисунок 2. Хроматограммы образца зубной пасты Complex при длине волны 272 нм и различных значениях рН буферных растворов, прибавленных к подвижной фазе.

Полученные хроматограммы для образца зубной пасты Complex приведены на рисунке 2.

Времена удерживания мексидола при рН 7,0 и 9,15 между собой различаются незначительно и имеют величину, приблизительно равную 4,2 мин; время удерживания мексидола при рН 2,36 было значительно меньше и составило око-

ло 3,5 мин. При хроматографировании образцов зубных паст Aktiv, Sensitiv Complex и Fito, а также ополаскивателя для полости рта нами было установлено что необходимая селективность метода достигается при использовании каждог из трех буферных растворов. В то же время, эффективность, рассчитанная по пи ку мексидола, снижается при увеличении pH буферного раствора. Таким обра зом, оптимальным вариантом является использование подвижной фазы, содер жащей 0,05% трифторуксусной кислоты, то есть со значением pH 2,36. Выбор оптимальной длины волны детектирования

Для выбора оптимальной волны детектирования нами были изучены спек тральные характеристики мексидола при различных значениях pH (рисунок 3).

Wavelength (nm)

Рисунок 3. УФ-спектры мексидола при рН 2,36 (1), рН 7,0 (2) и рН 9,15 (3).

Анализ полученных спектров показывает, что различия при рН 7,0 и 9,1 незначительны, но сильно отличаются от УФ-спектра мексидола при рН 2,36 Спектральные характеристик остальных компонентов образцов зубных паст по казывает, что их максимум поглощения не превышает 280 нм, а для большинств компонентов составляет 260 нм. Из этого можно сделать вывод, что длина волнь детектирования 298 нм, являющаяся максимумом поглощения при рН 2,36, по зволяет повысить селективность метода анализа

Анализ хроматограмм всех образцов зубных паст при длине волны 272 нм, которая позволяет оптимально детектировать все компоненты данных стоматологических средств, показал, что качественный и количественный состав вспомогательных веществ зубных паст Aktiv, Sensitive, Complex и Fito, наблюдаемых в виде хроматографических пиков, одинаков; хроматограмма ополаскивателя для полости рта отличается только отсутствием 3-х из 7-ми дополнительных пиков. Это позволяет предположить, что разрабатываемый метод будет пригоден для анализа мексидола во всех образцах, включая ополаскиватель для полости рта. Оптимизация изократического метода хроматографирования мексидола

Для оптимизации изократического метода анализа мексидола нами было проведено хроматографирование зубных паст при содержании ацетонитрила в подвижной фазе 5%, 8% и 12%. Полученные хроматограммы приведены на рисунке 4.

Используя уравнение, описывающее хроматографическую подвижность пиков, был построен график зависимости коэффициента емкости (log к') от содержания ацетонитрила в подвижной фазе (рисунок 5).

На основании анализа полученных данных нами было установлено, что удовлетворительное хроматографическое разрешение, а также времена удерживания мексидола и сопутствующих компонентов наблюдаются при содержании в подвижной фазе 10% ацетонитрила.

Хроматограмма образца зубной пасты Complex, полученная при данных оптимальных условиях, приведена на рисунке 6. Время удерживания мексидола при этом составило около 2 мин. Достигнутое оптимальное разрешение между пиками при максимальной эффективности и минимальном времени анализа позволяет использовать данную методику для определения мексидола в препаратах стоматологического назначения.

"I......I II I ! I I I I I I I I I M I I I I M I ] I I I I I I I I I I I I M I I I I I I I N I I M I I I I I I I I П I. I I I I I I I M I I II....... I I П I I I I I I I I I

01 23456789 10 Retention Time (min)

Рисунок 4. Хроматограмма образца зубной пасты Complex в изократич^ ских условиях при содержании ацетонитрила в подвижной фазе 5% (1), 8% (2 ; 12% (3) в присутствии 0,05% раствора кислоты трифторуксусной (рН 2,36) с де| тектированием при длине волны 272 нм.

MeCN, %

Рисунок 5. Зависимость коэффициента емкости пиков мексидола (1) и il-i3 (2-5) от содержания в подвижной фазе ацетонитрила на примере пасты Aktive.

Большинство компонентов, входящих в состав исследуемых образцов, ш элюируются с колонки в данных условиях, поэтому после каждого анализа необ

14

ходимо регенерировать колонку градиентным элюированием ацетонитрила от 10 до 95% в течение 2 мин с последующим градиентом ацетонитрила от 95 до 10% в течение 1 мин и дальнейшим уравновешиванием колонки подвижной фазой, содержащей 10% ацетонитрила, в течение 3 мин.

I

120

т

' ' 1 I ' М . ........... I

3 4

Retention Time (min)

Рисунок 6. Хроматограмма образца зубной пасты Complex в изократиче-ских условиях при содержании ацетонитрила в подвижной фазе 10% в присутствии 0,05% раствора трифторуксусной кислоты (рН 2,36) с детектированием при длине волны 298 нм. Пик со временем удерживания около 2 мин соответствует мексидолу.

Таким образом, по результатам серии экспериментов было показано, что оптимальными условиями хроматографирования являются: колонка Luna С18(2) 4,6*150 мм, 5 мкм, подвижная фаза 0,05% раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле - 0,05% раствор трифторуксусной кислоты в воде (1:9), изократи-ческий режим элюирования, температура колонки: 25 °С, скорость потока подвижной фазы 1,5 мл/мин, детектирование при длине волны 298 нм, время анализа - около 12 мин.

1.3 Валидация методики хроматографического определения мексидола в стоматологических препаратах

Методика количественного определения лекарственного вещества (мексидола) в стоматологических композиций была валидирована по основным харак-

15

теристикам - специфичность (specificity), линейность (linearity), правильност или истинность (accuracy, или trueness), и прецизионность (precision).

Для приготовления модельных смесей для валидационных испытаний пластиковую пробирку вместимостью 15 мл помещали 200 мг «плацебо» зубно пасты, прибавляли рассчитанное количество 5 % раствора мексидола и тщател но перемешивали. Пробоподготовку проводили по методике, приведенной в рг деле 1.1.

Специфичность методики оценивали путем анализа модельной смес плацебо, не содержащей мексидола. Правильность методики оценивали путе анализа модельных смесей с содержанием мексидола в диапазоне 70% - 130% о его номинального содержания с последующим определением значения коэффг циента R (открываемость). Для каждой смеси было проведено по 5 определени Прецизионность методики оценивали, определяя повторяемость (сходимост методики путем анализа 6 образцов 1 серии препарата с последующим определ нием относительного стандартного отклонения. Линейность методики оценивал путем анализа модельных смесей с содержанием мексидола в диапазоне 70 % 130 % от его номинального содержания и последующего построения калибр вочной кривой зависимости площади пика от содержания мексидола с расчето. коэффициента корреляции г.

Валидационные характеристики методики (на примере зубной пасты Akti приведены в Таблице 2. На Рисунке 7 приведены хроматограммы зубной паст Aktiv и соответствующей модельной смеси-плацебо. Хроматограммы модельны. смесей, содержащих 0,35 %, 0,5 % и 0,65 % мексидола (что соответствует 70 °/ 100 % и 130 % от номинального содержания) приведены на Рисунке 8. На Рисун ке 9 приведена калибровочная кривая зависимости площади пика мексидола о его содержания в модельной смеси в аналитическом диапазоне концентраци 0,35 % - 0,65 %. Коэффициент корреляции г калибровочной кривой превышав-0,99, что свидетельствует о линейности методики.

Аналогичные результаты были установлены для зубных паст Sensitive Complex и Fito.

Таблица 2

Валидационные характеристики методики определения мексидола в зубной пасте

Aktiv

Валидацион-ная характеристика Критерий приемлемости Результаты Соответствие критерию приемлемости

Специфичность На хромато грамме модельной смеси-плацебо должны отсутствовать пики, по времени удерживания совпадающие с мек-сидолом (около 2 мин) На хроматограмме модельной смеси-плацебо отсутствуют пики, по времени удерживания совпадающие с мекси-долом соответствует

Правильность (истинность) Д±ДЛ (открывае-мость) должен принадлежать интервалу 98% -102% % R-AR R + &R соответствует

70 101,13 101,94

85 98,06 99,07

100 98,57 99,46

115 98,80 99,12

130 99,11 99,88

Прецизионность - повторяемость /<Ж < 2 % (п=6) № пробы % соответствует

1 0,4518

2 0,4433

3 0,4504

4 0,4539

5 0,4591

6 0,4578

RSD, % 1,26

Линейность 1. Линейная зависимость площади пика от концентрации мексидола в образце; 2. Коэффициент корреляции г> 0,99. 1. Наблюдается линейная зависимость площади пика от концентрации мексидола (рис 2); 2./- = 0,999 соответствует

Рисунок 7. Хроматограммы зубной Рисунок 8. Хроматограммы мо пасты Aktiv (1) и плацебо (2). дельной смеси зубной пасты Aktiv

концентрацией мексидола 0,35% 0,5%, 0,65%.

Рисунок 9. Калибровочная кривая зависимости площади пика мексидола о его содержания в зубной пасте в аналитическом диапазоне концентраций 0,35 % 0,65 %.

1.4. Оценка качества стоматологических композиций, содержащих мексидо

Нами было проведено количественное определение мексидола в зубны пастах Aktiv, Sensitive, Complex и Fito на 5 образцах одной серии. Результа анализа приведены в Таблице 3.

Таблица 3

Результаты количественного определения содержания мексидола в зубных пастах одной серии

Препарат X(Sx¡/5) % от нормы RSD, % АХ

Aktiv 0,4439 88,78 1,65 0,0081

Complex 0,4395 87,90 0,92 0,0050

Sensitive 0,4579 91,58 2,98 0,0169

Fito 0,4566 91,32 1,23 0,0070

Для каждой из изученных зубных паст одной серии (Таблица 3) были получены сходящиеся результаты процентного содержания мексидола (относительное стандартное отклонение не превышает 3 %) что свидетельствует о высокой однородности продукта внутри одной серии по содержанию лекарственного вещества. Это позволяет использовать содержание мексидола как основной показатель качества для всех изученных зубных паст (Aktiv, Complex, Sensitive, Fito) при их стандартизации.

1.5. Оценка стабильности стоматологических композиций, содержащих мек-сидол

Результаты проведенного нами количественного определения мексидола в зубных пастах Aktiv, Sensitive, Complex и Fito на образцах 4 серий в пределах срока годности приведены в Таблице 4.

Таблица 4

Результаты количественного определения содержания мексидола в зубных пастах 4 серий в пределах срока годности

Препарат X(Lx,/4) % от нормы RSD, % AX

Aktiv 0.4694 93.88 5.10 0.0341

Complex 0.4749 94.97 6.86 0.0464

Sensitive 0.5004 100.08 6.87 0.0489

Fito 0.4701 94.01 3.54 0.0237

При определении мексидола на образцах разных серий в пределах срок годности для каждой из зубных паст были получены близкие средние значени его содержания (0,46 % - 0,50 %) при более значительном стандартном отклон нии (3,5 % - 6,9 %). На основании этого было сделано предположение о том, что процессе хранения в течение срока годности происходит разложение мексидол в связи с чем оценка стабильности мексидола является важной задачей при ста дартизации испытуемых зубных паст. Для установления динамики изменения с держания мексидола было проанализировано несколько серий зубных паст Akti\ Complex, Sensitive и Fito, в диапазоне срока хранения 3-51 мес., что позволяе достоверно описать кривую разложения в зависимости от времени. Результат определения количественного содержания мексидола в зависимости от срок хранения зубной пасты приведены в Таблице 5 и на Рисунке 10.

Таблица

Результаты количественного определения содержания мексидола в зависимости от срока хранения зубной пасты

Срок % содержания от нормы

хране- Aktiv Complex Sensitive Fito

ния, мес

3 99,08 101,37 107,12 96,82

7 96,64 99,56 103,89 96,96

12 91,02 91,06 97,75 90,96

16 90,54 87,91 91,54 91,33

19 85,37 - 89,63 -

39 82,68 79,38 - 80,67

48 79,00 - - -

51 - - 72,17 -

Таким образом, наибольшая скорость падения содержания действующег вещества наблюдается в пасте Sensitive; наибольшей стабильностью обладав паста Aktiv. Пониженная стабильность мексидола в составе пасты Sensitive объ ясняет максимальную величину относительного стандартного отклонения для серий в пределах срока годности данной пасты.

О2200S

Тт' Т'1 |ТТ'1 ' Т"1 Т*"*1' I " 1' I''1' I'' " 11''' I " 1111''111''1..........11 n 1111 п 11

О 0.5 1.0 1.9 2.0 2.S 3.0 3.S

Retention Time (min)

Рисунок II. Примеры хроматограмм образцов пасты Sensitive непосредственно после изготовления (серия 022009) и спустя 48 месяцев (серия 022005) после выпуска.

Однако на хроматограммах даже этой пасты не наблюдается продуктов разложения мексидола (рисунок П). Можно предположить, что они не имеют поглощения при длине волны 298 нм.

По результатам количественного определения мексидола в зубных в пастах нескольких серий в зависимости от срока хранения и величине полученного относительного стандартного отклонения можно рекомендовать следующие нормы количественного содержания мексидола:

1. На момент выпуска: от 110,0 % до 95,0 % от заявленного содержания для зубных паст Aktiv, Complex, Sensitive и Fito.

2. В течение срока годности: Aktiv - не менее 84,0 % от заявленного содержания, Complex - не менее 79,0 % от заявленного содержания, Sensitive - не менее 75,0 % от заявленного содержания, Fito - не менее 85,0 % от заявленного содержания.

Поскольку показатель «содержание мексидола» является не только показателем качества, но и стабильности продукта, рекомендуется ввести в проект нормативной документации два показателя норм - на момент выпуска и в течение срока годности.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработана оптимальная методика изолирования мексидола из зубны паст (четыре различные композиции). В качестве экстрагента рекомендуе ся использовать 1 % раствор муравьиной кислоты.

2. Разработана методика качественного и количественного анализа мексидо в зубных пастах (четыре различные композиции) и ополаскивателе для п лости рта методом ВЭЖХ. Условия хроматографирования: колонка Lu С18(2) 4,6*150 мм, 5 мкм, подвижная фаза 0,05% раствор трифторуксу ной кислоты в ацетонитриле - 0,05% раствор трифторуксусной кислоты воде (1:9), изократический режим элюирования, температура колонки: 7 "С, скорость потока подвижной фазы 1,5 мл/мин, детектирование при дл не волны 298 нм, время анализа - около 12 мин. Время удерживания ме сидола по данной методике составляет около 2 мин.

3. Проведена валидация разработанной методики по следующим характер стикам: специфичность, линейность, правильность и прецизионност Сходные валидационные характеристики для каждой из исследуемых ст матологических композиций свидетельствуют о применимости одной м тодики для всех зубных паст (Aktiv, Sensitive, Complex и Fito), содержащ мексидол.

4. Проведена оценка качества испытуемых стоматологических композиций содержанию мексидола. По результатам количественного определен мексидола в зубных пастах Aktiv, Complex, Sensitive и Fito одной сери были получены сходящиеся результаты (относительное стандартное о клонение не превышало 3 %), что свидетельствует о высокой однородност продукта внутри одной серии по содержанию лекарственного веществ Это позволяет использовать содержание мексидола как основной показ тель качества для всех изученных зубных паст при их стандартизации ( 110,0 % до 95,0 % от заявленного содержания для зубных паст Aktiv, Со plex, Sensitive и Fito).

5. Проведена оценка стабильности мексидола в зубных пастах (четыре р

личные композиции) при их хранении в условиях, рекомендованных пр

22

изводителем. Наибольшее изменение содержания мексидола при хранении в течении 24 месяцев наблюдается в пасте Sensitive; наибольшей стабильностью обладает паста Aktiv. Скорость снижения содержания мексидола (%/мес) для паст Aktiv, Complex, Sensitive, Fito составляет 0,406; 0,601; 0,710 и 0,461 соответственно. По результатам исследования рекомендованы следующие нормы количественного определения для содержания мексидола в течение срока годности: Aktiv - не менее 84,0 % от заявленного содержания, Complex - не менее 79,0 % от заявленного содержания, Sensitive - не менее 75,0 % от заявленного содержания, Fito - не менее 85,0 % от заявленного содержания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Матюшин A.A. Определение мексидола в стоматологических препаратах. // Фармация. - 2010. - № 4. - С. 10 - 12

2. Матюшин A.A., Попков В.А. Разработка методики анализа мексидола в зубных пастах методов ВЭЖХ // Тезисы докладов XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - 2010. - С. 676.

3. Матюшин A.A., Попков В.А. Исследование стабильности зубных паст, содержащих мексидол. // Тезисы докладов XVIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - 2011. - С. 616

4. Матюшин A.A., Попков В.А. Разработка методики определения мексидола в лечебно-профилактических препаратах стоматологического назначения // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. Трудов. - Пятигорск: Пятигорская ГФА. - 2010. - Вып. 65. -С. 347-352.

5. Матюшин A.A. Исследование стабильности стоматологических препаратов, содержащих мексидол. // Тезисы Итоговой Всероссийской научной конференции молодых исследователей с международным участием «Тать-янин день». - Москва, 2011. - С. 87-88.

6. Матюшин A.A. Разработка методики анализа мексидола в препаратах с матологического назначения методом ВЭЖХ. // Тезисы Итоговой Всеро сийской научной конференции молодых исследователей с международны участием «Татьянин день». - Москва, 2010. - С. 111-112.

7. Матющин A.A., Попков В.А. Исследование стабильности стоматолог ческих средств, содержащих мексидол. // Разработка, исследование маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. Трудов. - П тигорск: Пятигорская ГФА.-2011.-Вып. 66.-С. 423-424.

8. Матюшин A.A., Попков В.А. Оценка стабильности стоматологии ских композиций, содержащих мексидол. // Естественные и технич ские науки. - 2011. - №3. - С. 236 - 241.

Подписано в печать: 17.10.11

Объем: 1,5усл.п.л. Тираж: 100 экз. Заказ Л» 477 Отпечатано в типографии «Реглет» 119526, г. Москва, Страстной бульвар, 6/1 (495) 623-93-06; www.reg1et.ru

Актуальность темы

Воспалительные заболевания пародонта занимают особое место в современной стоматологии. Из различных литературных источников известно, что данные патологии широко распространены, характеризуются различной тяжестью их течения, преждевременной потерей зубов и возможным появлением в организме очагов хронической инфекции, поэтому поиск средств для их профилактики и лечения является актуальным [7, 74, 82].

На сегодняшний день профилактика и лечение воспалительных заболеваний тканей пародонта направлены, преимущественно, на устранение основного причинного фактора - микробного зубного налёта, а так же контроля за его образованием при помощи антимикробных, местных и общих противовоспалительных средств. В тяжелых случаях применяются хирургические методы устранения инфекционно-деструктивного очага в пародонте [10, 74].

Более перспективным и патогенетически обоснованным подходом к лечению и профилактике воспалительных заболеваний тканей пародонта представляется использование антиоксидантов. Данные соединения способны уменьшать концентрацию активных форм кислорода (АФК) в тканях, ингибировать процессы перикисного окисления липидов (ПОЛ), некоторые обладают противовоспалительными, антитоксическими и антигипоксическими свойствами. Отдельные представители стимулируют репаративные процессы, положительно воздействуя на биосинтез белков и нуклеиновых кислот.

Вышеуказанным характеристикам в полной мере соответствуют лечебно-профилактические зубные пасты "MEXIDOL® dent" (Aktiv,

Sensitive, Complex, Fito), а также ополаскиватель для полости рта "MEXEDOL® dent", отечественного производства (ООО «ФАРМАСОФТ»), содержащие в своем составе лекарственное вещество мексидол (3-гидрокси-6-метил-2-этилпиридин сукцинат).

Разработанный российскими специалистами синтетический препарат мексидол обладает антиоксид антным, антигипоксическим и мембранопротекторным действием. Антиоксидантное действие мексидола проявляется в повышении активности супероксиддисмутазы (СОД), каталазы, ферментов системы глутатиона и ингибировании ПОЛ. Антигипоксическое действие реализуется за счёт прямого энергизирующего действия, эффект которого связан с влиянием на эндогенное дыхание митохондрий с активацией их энергосинтезирующих функций. Кроме того, мексидол значительно улучшает процессы микроциркуляции в тканях и реологические свойства крови.

Высокая эффективность применения препарата мексидол в комплексном лечении пародонтита, а также других воспалительных заболеваний тканей пародонта, послужила поводом к созданию серии лечебно-профилактических зубных паст и ополаскивателя для полости рта "Mexidol dent", которые в настоящее время пользуются большим спросом у населения. Эффективность этих средств подтверждена клиническими испытаниями.

Существующая на настоящий момент нормативная документация, регламентирующая контроль качества лечебно-профилактических стоматологических препаратов (к ней относятся сертификат соответствия требованиям СанПин 1.2.676-97. "Гигиенические требования к производству, качеству и безопасности средств гигиены полости рта", ГОСТ Р 51391-99 "Изделия парфюмерно-косметические. Информация для потребителя. Общие требования", ГОСТ 7983-99 "Пасты зубные. Общие технические условия", а также, санитарно эпидемиологическое заключение, содержащее гигиеническую характеристику продукции) не предусматривает определение в них лекарственных веществ (JIB). Однако, это вряд ли является правомерным для композиций, содержащих лекарственные вещества, примером которых являются зубные пасты и полоскания, содержащие мексидол. Для таких средств стоматологического назначения целесообразно осуществлять процедуру стандартизации, аналогичную той, которой подвергаются лекарственные средства. Это можно обосновать в первую очередь соображениями эффективности и безопасности, поскольку при отклонении фактического содержания JIB в стоматологических препаратах от заявленного может наблюдаться снижение терапевтического эффекта или развитие нежелательных побочных реакций.

Исходя из вышеизложенного следует, что стандарты для производства современных стоматологических препаратов не в полной мере соответствуют требованиям определения качества подобной продукции. Контроль качества сводится к оценке безопасности по стандартам косметических и гигиенических изделий. Однако, в отличие от производителей продукции гигиенического назначения, к производителям лекарственных средств предъявляются гораздо более высокие требования. Поэтому разработка методов, позволяющих идентифицировать и количественно определять конкретные JIB в многокомпонентных стоматологических композициях для оценки их качества, представляется актуальной задачей.

Цель и задачи исследования

Целью настоящего исследования явилась разработка методов контроля качества и стандартизации стоматологических композиций, содержащих мексидол (зубные пасты и ополаскиватель для полости рта серии «MEXIDOL® dent»).

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Подобрать оптимальные условия изолирования мексидола из зубных паст (четыре различные композиции).

2. Разработать методики качественного и количественного анализа мексидола в зубных пастах (четыре различные композиции) и ополаскивателе для полости рта методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

3. Провести валидацию разработанных методик.

4. С помощью разработанных методик оценить качество исследуемых стоматологических композиций.

5. Изучить стабильность мексидола в зубных пастах (четыре различные композиции) при их хранении' в рекомендованных производителем' условиях. I

Научная новизна

В', работе впервые разработана методика' экстракции мексидола из комплексных матриц стоматологических композиций.

Впервые разработана и валидирована методика определения мексидола» в составе зубных паст (четыре различные композиции) с применением ВЭЖХ, обеспечивающая селективность его определения- в присутствии вспомогательных веществ:

Практическая значимость

На основании проведенных исследований впервые разработана методика аналитического контроля качества стоматологических препаратов, содержащих мексидол.

Внедрение разработанной методики в практику подтверждено актом внедрения от 20.12.2010 г, выданным ЗАО «Фармасофт».

Апробация работы

Апробация работы проведена на научной конференции кафедры общей химии стоматологического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (Москва, 10.06.2011 г.).

Основные положения диссертационной работы доложены на Итоговой научной конференции молодых исследователей с международным участием «Татьянин День» (Москва, 2009), Итоговой Всероссийской научной конференции молодых исследователей с международным участием «Татьянин День» (Москва, 2010), ХУЛ и XVIII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (2010 - 2011 гг.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в рамках отраслевой научно-исследовательской программы Первого МГМУ им. И.М. Сеченова «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (№ государственной регистрации 01220606352). Тема включена в план научных исследований кафедры общей химии с курсом стоматологического материаловедения «Новые знания и подходы в оценке качества и сертификации биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические аспекты)» (01.200.118796).

Положения, выносимые на защиту

1. Экспериментальные данные по разработке и валидации методики хроматографического анализа (пробоподготовка, оптимальные условия хроматографирования, идентификации и количественного определения мексидола).

2. Результаты оценки качества стоматологических композиций, содержащих мексидол.

3. Результаты изучения стабильности паст (четыре различные композиции), содержащих мексидол.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (первая глава), экспериментальной части (вторая, третья и четвертая главы), общих выводов, списка литературы из 183 источника (58 из которых зарубежные) и приложений. Работа иллюстрирована 14 рисунками и 12 таблицами.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработана оптимальная методика изолирования мексидола из зубных паст (четыре различные композиции). В качестве экстрагента рекомендуется использовать 1 % раствор муравьиной кислоты.

2. Разработана методика качественного и количественного анализа мексидола в зубных пастах (четыре различные композиции) и ополаскивателе для полости рта методом ВЭЖХ. Условия хроматографирования: колонка Luna С 18(2) 4,6*150 мм, 5 мкм, подвижная фаза 0,05% раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле - 0,05% раствор трифторуксусной кислоты в воде (1:9), изократический режим элюирования, температура колонки: 25 оС, скорость потока подвижной фазы 1,5 мл/мин, детектирование при длине волны 298 нм, время анализа — около 12 мин. Время удерживания мексидола по данной методике составляет около 2 мин:

3. Проведена валидация разработанной методики по следующим характеристикам: специфичность, линейность, правильность и прецизионность. Сходные валидационные характеристики для каждой из исследуемых стоматологических композиций свидетельствуют о применимости одной методики для? всех зубных паст (Aktiv, Sensitive, Complex и Fito), содержащих мексидол:

4. Проведена оценка качества испытуемых стоматологических композиций по содержанию мексидола. По результатам количественного определения мексидола в зубных пастах Aktiv, Complex, Sensitive и Fito одной серии были получены сходящиеся результаты (относительное стандартное отклонение не превышало 3 %), что свидетельствует о высокой однородности продукта внутри одной серии по содержанию лекарственного вещества. Это позволяет использовать содержание мексидола как основной показатель качества для всех изученных зубных паст при их стандартизации (от 110,0 % до 95,0 % от заявленного содержания для зубных паст Aktiv, Complex, Sensitive и Fito).

5. Проведена оценка стабильности мексидола в зубных пастах (четыре различные композиции) при их хранении в условиях, рекомендованных производителем. Наибольшее изменение содержания мексидола при хранении в течении 24 месяцев наблюдается в пасте Sensitive; наибольшей стабильностью обладает паста Aktiv. Скорость снижения содержания мексидола (%/мес) для паст Aktiv, Complex, Sensitive, Fito составляет 0,406; 0,601; 0,710 и 0,461 соответственно. По результатам исследования рекомендованы следующие нормы количественного определения для содержания мексидола в течение срока годности: Aktiv - не менее 84,0 % от заявленного содержания, Complex - не менее 79,0 % от заявленного содержания, Sensitive - не менее 75,0 % от заявленного содержания, Fito - не менее 85,0 % от заявленного содержания.