Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Алгоритмы исследования системы нейтрофильных гранулоцитов у детей с бронхиальной астмой

На правах рукописи

КЕРАШЕВА Светлана Нурбиевна

АЛГОРИТМЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СИСТЕМЫ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

14.00.36-Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону - 2003

Работа выполнена в Кубанской государственной медицинской академии, ГУЗ Адыгейской Республиканской детской клинической больнице и Учебно-научном центре Медицинского центра Управления делами Президента РФ.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Нестерова Ирина Вадимовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Колесникова Наталья Владиславовна, доктор биологических наук, с.н.с. Беловолова Розалия Александровна

Ведущая организация: Институт клинической иммунологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук.

Защита состоится 14 ноября 2003 г. в И30 часов на заседании диссертационного совета КР 208.082.24 при Ростовском государственном медицинском университете (344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахиче-ванский, 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан « ¿1 » Л О_2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Кузина Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Исследования последних лет обогатили понимание механизма развития аллергических реакций, главным образом, за счет изучения спектра клеток, вовлекаемых в аллергический процесс. Прежде всего это - эозинофилы, моноциты, тромбоциты и нейтро-фильные гранулоциты (Гущин И.С., 1994). Участие НГ в специфической и неспецифической формах иммунного реагирования позволяет отводить им особое место в системе иммунитета (Ма-янский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Бережная Н.М, 1988; Нестерова И.В., 1992; 2000; Колесникова Н.В., 2001). Известны данные об активном участии НГ в инфекционно-аллергических воспалительных реакциях (Венглинская Е.А., 1994). При этом функциональные возможности НГ проявляются на фоне различных стимулирующих воздействий в виде усиления своих основных функций (миграционной, адгезивной, фагоцитарной, рецепторной, секреторной) (ЛомтатидзеЛ.В, 1999; Колесникова Н.В., 1999).

Особое значение в развитии аллергических заболеваний НГ приобретают в связи с тем, что они осуществляют первую линию защиты организма от аллергенов различной природы. От полноценности их хемостаксиса и фагоцитоза во Многом зависит судьба аллергена в организме. НГ участвуют во всех звеньях и формах аллергического воспаления, что неотделимо от их функционального состояния. Кроме того, НГ содержат фермент гистаминазу -основной фактор дезактивации главного медиатора аллергической реакции воспаления - гистамина (Бережная Н.М., 1988).

Межклеточные взаимодействия в ходе аллергии не могут быть рассмотрены как линейный процесс, а состоят во взаимном влиянии друг на друга клеток иммунологической и эффекторной фазы аллергической реакции. Такова способность активированных НГ секретировать особые биологически-активные вещества, вовлекающие клетки-мишени в реакции аллергического воспаления.

Учитывая тот факт, что в последние годы в мире резко возросло число детей, больных бронхиальной астмой и «помолодел» возраст детей с БА (Низаметдинов И.Н., Цой С.П., Ахметов М., 2000; Дьячкова С.Я., Вдовенко 0.и.,2001. Кирдей-fkR н ooqd

РОС. национальная БИБЛИОТЕКА СПетерОург - -ОЭ ЗОО^кт^Д

Г

2003), особую значимость приобретает своевременная и адекватная иммунодиагностика БА, разработка дифференциально-диагностических критериев вариантов ее течения и стадий развития заболевания. Поскольку система НГ находится в тесном взаимодействии с лимфоцитами и подчиняется комплексу цито-киновых сигналов (Нестерова И.В., Колесникова Н.В., 1999), интерес представляет углубленное изучение функционирования системы НГ при атопической бронхиальной астме в период ее ремиссии и клинического обострения, что позволит расширить наши представления о роли данной популяции клеток в этиопа-тогенезе заболевания и определить характер нарушений фагоцитов крови не только на фоне классического варианта течения атопической БА, но и атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и JIOP-органов. В свою очередь, это позволит разработать алгоритм диагностики дефектов в системе НГ для выявления наиболее диагностически и прогностически значимых критериев заболевания.

Цель работы

На основании сравнительного изучения функционального состояния системы нейтрофильных гранулоцитов у детей с атопической бронхиальной астмой разработать алгоритмы диагностики нарушений в системе нейтрофильных гранулоцитов.

Задачи исследования

1. Провести сравнительное изучение уровня функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов у детей с атопической БА и атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов, в стадии обострения и ремиссии заболевания.

1.1. Исследовать особенности лейкограммы при Б А у детей (в период ремиссии и обострения) и на их основе разработать новые интегральные диагностические критерии.

1.2. Оценить состояние рецепторного аппарата системы нейтрофильных гранулоцитов у детей с БА (в период обострения и ремиссии заболевания) по детекции поверхностных мембранных CD1 lb-, CD 16-, С095-антигенов.

1.3. Исследовать особенности состояния кислородзависимых микробицидных систем нейтрофильных гранулоцитов у детей с БА в периоды ремиссии и обострения.

1.4. Установить закономерности фагоцитарной активности и переваривающей способности нейтрофильных гранулоцитов у детей с БА (в период клинической ремиссии и обострения заболевания).

2. Дать комплексную характеристику нарушений в системе нейтрофильных гранулоцитов в период обострения и ремиссии Б А у детей.

3. Разработать алгоритм диагностики нарушений в системе НГ при атопической БА у детей.

Новизна исследования

1. Впервые установлено, что различные стадии развития атопической бронхиальной астмы и атопической бронхиальной астмы, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов, у детей характеризуются достоверными изменениями основных функций нейтрофильных гранулоцитов, параметры которых могут быть использованы для создания алгоритма диагностики нарушений в системе НГ при БА и обоснования необходимости их коррекции.

2. Впервые разработаны новые диагностические интегральные показатели функционирования системы НГ у детей с атопической бронхиальной астмой, представляющие собой нейтро-фильно-эозинофильное отношение, нейтрофильно-эозинофильно-лимфоцитарное отношение и нейтрофильно-эозинофильный индекс, и продемонстрирована их значимость для диагностики как самого заболевания, так и его стадий развития.

3. Впервые оценен субпопуляционный состав НГ (адгезивно-активные, цитотоксические и проапоптические клетки) при атопической БА у детей в период клинической ремиссии и обострения.

4. На основе систематизированных данных о нарушениях функциональной активности системы НГ (рецепторная функция, фагоцитарная активность, переваривающая способность, кисло-родзависимая микробицидность, количественные соотношения отдельных видов лейкоцитов) впервые разработан алгоритм диагностики нарушений в системе НГ при БА у детей.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Анализ функционирования системы НГ при атопической БА у детей как в период ремиссии, так и при обострении заболевания позволил выявить разнообразный комбинированный характер внутрисистемных количественных и функциональных изменений клеток. Отличительные особенности функционирования системы НГ при различных стадиях развития БА позволяют систематизировать их для использования в целях диагностики нарушений в системе НГ при данном заболевании.

2. Разработанный алгоритм диагностики нарушений в системе нейтрофильных гранулоцитов заключается в оценке ряда новых расчетных показателей (НЭЛ, НЭИ, НЭО), показателей уровня экспрессии ряда антигенов НГ (С011Ь,С016,СБ95), а также микробицидной, фагоцитарной и переваривающей способности клеток.

Практическая значимость работы

Полученные в исследовании систематизированные сведения о сравнительной оценке функционирования системы нейтрофильных гранулоцитов в условиях обострения и ремиссии атопической бронхиальной астмы у детей позволяют значительно расширить представления о роли НГ в генезе и развитии аллергической патологии. Предлагаемый алгоритм диагностики системы НГ может быть использован для углубленного тестирования основных функций нейтрофильных гранулоцитов при дифференциальной диагностике атопической бронхиальной астмы у детей. Данные проведенного исследования могут быть использованы также в научно-исследовательском и учебном процессах.

Внедрение результатов в практику

Материалы по диагностике функционирования системы НГ при различных формах и стадиях развития бронхиальной астмы у дегей внедрены в практику работы Адыгейской Республиканской детской клинической больницы (г. Майкоп), кафедры клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагно-

стики ФПК ППС и Центральной научно-исследовательской лаборатории Кубанской государственной медицинской академии (г. Краснодар).

Структура и объем работы

Диссертация представлена на 140 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, представленных в 4 главах, заключения, выводов и списка литературы, включающего 185 источников, в том числе 85 зарубежных. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 16 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Для решения поставленных задач в работе были использованы данные исследования 145 детей в возрасте от 6 до 14 лет, находящихся на лечении по поводу БА в ГУЗ Адыгейской Республиканской детской клинической больнице (г.Майкоп). Все дети имели диагноз атопической БА средней степени тяжести, являлись хроническими больными, находящимися на диспансерном учете. В ходе исследования возникла необходимость выделения отдельной группы детей, у которых наряду с атопической БА имели место хронические очаги инфекции респираторного тракта и JIOP-органов в виде хронического тонзилита и хронического фарингита бактериальной этиологии (вызываемых Streptococcus viridans, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermis). В связи с этим, в работе были использованы две группы исследуемых: 1 группа - дети с атопической БА средней степени тяжести (80 детей), 2 группа - дети с атопической БА средней степени тяжести, имеющие сопутствующие очаги хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов бактериальной этиологии (65 детей). Кроме того, в соответствии с данными клинического анамнеза, в каждой группе выделяли подгруппы детей с клиническими признаками обострения (1а, 2а) и ремиссии (16, 26) БА (табл. 1).

8 Характеристика исследуемых групп Таблица 1

Группа Количество детей в фуппе

1а - атопическая БА (обострение) 50

16 - атопическая БА (ремиссия) 30

2а - атопическая БА, протекающая на фоне хронических очагов инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов (обострение) 35

26 - атопическая БА, протекающая на фоне хронических очагов инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов (ремиссия) 30

3 - группа сравнения (практически здоровые дети) 50

Контрольной группой сравнения служили практически здоровые дети тех же возрастных групп, относящиеся к первой группе здоровья (50 человек).

В работе был использован комплекс методов, тестирующих состояние системы НГ, рекомендованный Нестеровой И.В., Колесниковой Н.В., Чудиловой Г.А.(1996) и включающий оценку рецепторного аппарата НГ в непрямом иммунофлюоресцентном тесте (Филатов A.B., Бачурин П.С. и соавт., 1990) с использованием моноклональных антител LT IIb, LNK16, LT95 и козьих антител к IgG мыши, меченных ФИТЦ (МП «Сорбент», г.Москва) с учетом результатов с помощью люминесцентного микроскопа. Оценивали фагоцитарную активность и переваривающую способность НГ и активность микробицидных оксидазных систем с помощью спонтанного и стимулированного NBT-теста, а также активность миелопероксидазы цитохимическим методом.

С целью подтверждения атопии у детей с БА определение общего IgE у детей с БА и практически здоровых детей проводили методом ИФА с применением тест-системы производства ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).

Статистическую обработку результатов исследования проводили общепринятым методом с использованием Т-критерия Стьюдента. Кроме того полученные результаты подвергали корреляционному анализу с определением коэффициента корреляции Я с учетом 6 степеней корреляционной связи (3-отрицательных и 3 положительных).

Результаты исследования и их обсуждение

Несмотря на то, что ведущим патогенетическим фактором атопической БА (наиболее распространенной среди детей) являются ^Е-опосредованные аллергические реакции, зачастую она характеризуется выраженными процессами хронического воспаления в бронхо-легочной системе и осложнениями инфекционной природы. Исходя из сказанного, становится вполне очевидной теоретическая и практическая значимость оценки состояния системы нейтрофильных гранулоцитов при атопической БА (1 группа) и атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов (2 группа) и поиска адекватных маркеров не только вариантов течения атопической БА, но и ее клинической стадии (обострение, ремиссия).

А поскольку патогенез атопических заболеваний у детей характеризуется изменениями уровня ^Е-антителогенеза, интерес представляет его сравнительная оценка при атопической БА у детей 1 и 2 групп в период обострения и ремиссии заболевания.

Установлено (рис. 1), что в максимальный уровень общего ^Е отмечается при обострении атопической БА у детей 1 группы (242,50+23,10 против 48,50±5,67 в контроле), тогда как при атопической БА у детей 2 группы эта стимуляция составляет всего 151% от контроля. В период ремиссии заболевания выявляются тенденции к нормализации показателей ^Е-синтеза: снижается до нормальных величин практически здоровых детей уровень ^Е у детей 2 группы, а уровень ^Е у детей с атопической БА (16 группа) уменьшается на 50% от максимума в период обострения заболевания.

500 450 400 350 300 250 200 150 10050 0

Рис. 1. Изменение LgE-антителогенеза при атопической бронхиальной

астме у детей в период обострения и ремиссии: АтБА 1 (о), АтБА1(р) - обострение и ремиссия атопической БА у детей; АтБА2(о), АтБА2(р) - обострение и ремиссия атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов

Для оценки системы НГ в работе впервые использованы расчетные интегральные показатели лейкограммы, предложенные нами для наиболее полной характеристики функционирования НГ при атопиях. В частности, использованы относительные величины НГ, эозинофилов и лимфоцитов для расчета нейтро-фильно-эозинофильного индекса по формуле:

НГ(%) - Э(%) 100

нейтрофильно-эозинофильно-лимфоцитарного индекса по

формуле:

/7Г(%) - Э(%) Лф(%)

нейтрофильно-эозинофильного отношения по формуле:

Э(%)

■АтБА1(о) ® АтБА1 (р) ШАтБА2(о) □АтБА(р) □ Контроль

Установлено, что при обострении атопической БА у детей I группы имелось достоверное снижение %НГ, тогда как при обострении атопической БА у детей 2 группы уровень содержания НГ не отличался от контроля (рис. 2). При этом относительное содержание лимфоцитов при обострении Б А в обеих сравниваемых опытных группах было достоверно снижено. Процентное содержание эозинофилов было увеличено как при обострении атопической БА (530%), а так и при атопической БА у детей 2 группы (331 %). Расчет величин НЭО, НЭЛ и НЭП показал, что при обострении атопической БА у детей 1а группы имеет место выраженное снижение НЭО (1,70±0,25 против 6,20±0,70 в контроле), тогда как у детей 2а группы НЭО снижается в 2,3 раза. Оценка НЭЛ показала его значительное увеличение по сравнению с контролем при обострении БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов (1,26+0,32 против 0,60±0,07 в контроле).

600 500 400 300200 100

■ НГ% ЕЗЛф% □ Эоз% 1

■ НЭО □ НЭЛ

внэи

I

АтБА1 (о) АтБА1(р) АтБА2(о) АтБА2(р) Контроль

Рис. 2. Сравнительная оценка расчетных показателей лейкограммы при

атопической БА у детей: АтБА1(о), АтБА1(р) - обострение и ремиссия атопической Б А у детей; АтБА2(о), АтБА2(р) - обострение и ремиссия атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов

Возможно, что преобладание атопического компонента в БА приводит к большей депрессии НЭО, тогда как присутствие инфекционного компонента вызывает увеличение НЭЛ. Величина НЭИ была достоверно снижена лишь при обострении атопиче-ской БА у детей 1 группы (0,36+0,04 против 0,50±0,02 в контроле) и в период ремиссии полностью восстанавливалась до уровня практически здоровых детей.

Исследование рецепторного аппарата НГ в период обострения и ремиссии атопической Б А у детей показало (рис. 3), что относительное содержание количества С011Ь(+)-НГ, было наиболее высоким в 1 группе детей с обострением атопической БА (22,60±6,30 против 10,80±3,40 в контроле), тогда как абсолютное значение показателя было более высоким у детей 2а группы (986,30±29,40 против 230,10±20,70 в контроле). В период ремиссии заболевания отмечалась тенденция к снижению уровня СЭ11 Ь(+)-НГ, наиболее выраженная у детей 2 группы. Оценка количества С016(+)-НГ в период обострения БА выявила сходный характер изменений: наибольшие значения клеток, несущих СО!6-антиген были у детей с атопической БА 2 группы, причем наиболее высокие - в абсолютном выражении показателя (343 %) (рис. 3). В период ремиссии БА уровень СЭ16(+)-НГ у детей 1 и 2 опытных групп не только не снижался, но и имел тенденцию к дальнейшему возрастанию, причем, в наибольшей степени - у детей 1 группы (250 %). Проапоптическая активность НГ была высокой как при обострении атопической БА в 1 группе (835,00±71,30 против 243,20+17,30 в контроле), так и во 2 исследуемой группе (850,00±51,40). В период ремиссии заболевания отмечалась лишь тенденция к нормализации количества С095(+)-НГ.

Анализ изменений показателей фагоцитарной активности и переваривающей способности НГ детей с атопической БА в целом показал их общий характер при различных вариантах течения атопической БА. В частности было выявлено значительное увеличение %ФАН и ФАНабс при обострении заболевания (от 115 % до 143 % ), но еще большее возрастание показателей наблюдалось в период ремиссии атопической БА обеих групп (от 135 % до 165 % относительно контроля) (рис. 4.).

Рис. 3. Изменение рецепторного аппарата НГ при атопической Б А у детей: АтБА1(о), АтБА1(р) - обострение и ремиссия атопической БА у детей; АтБА2(о), АтБА2(р) - обострение и ремиссия атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов

Оценка фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса показала их существенное увеличение (в 2-3 раза) в период ремиссии и обострения атопической БА, тогда как у детей 2а группы стимуляция поглотительной способности была меньшей (в 2-2,5 раза), чем в период ремиссии данного варианта БА (272-387 % от контроля). Однако переваривающая способность фагоцитов, оцениваемая по проценту и индексу переваривания, была, закономерно избыточному поглощению, достоверно снижена в обеих исследуемых группах. В период ремиссии БА у детей отмечалась тенденция к восстановлению переваривающей способности нейтрофильных гранулоцитов, более выраженная у детей 2 группы (рис. 4). При менее выраженной депрессии функции переваривания (1а группа) восстановительная тенденция была минимальной.

400

350 300 250 200 150 100 50 0

%ФАН ФЧ ФИ %П ИП

Рис. 4. Динамика изменения показателей фагоцитарной активности и

переваривающей способности НГ при атопической БА у детей: АтБА1(о), АтБА1(р) - обострение и ремиссия атопической БА у детей АтБА2(о), АтБА2(р) - обострение и ремиссия атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и JlOP-органов

Сравнительная оценка количества формазан-позитивных клеток в спонтанном NBT-тесте показала (рис. 5), что при обострении атопической БА у детей 1 и 2 группы наблюдалось значительное их возрастание (в 2,85 раза выше, чем в группе практически здоровых детей). Стимуляция %ФПК при этом была достаточно стойкой и не снижалась даже в период ремиссии атопической БА у детей 2 группы, в то время как у детей 1 группы %ФПК даже превышал границы стимуляции, отмеченной при обострении заболевания на 10 % (23,00±0,07 против 22,30±0,01 при обострении БА). Выявленное значительное возрастание %ФПК при дополнительной антигенной нагрузке in vitro привело к истощению микробицидной кислородзависимой системы НГ. Так, у детей 1а группы %ФПК в стимулированном NBT-тесте соответствовал таковому у детей контрольной группы: от 99 % (I группа) до 112% (2 группа) относительно контроля.

■АтБА1(о) РАтБАЦр) □АтБА2(о) □АтБА2(р) □ Контроль

■ИВАтБА1(о) ~1АтБА1(р) ИИАтБА2(о) АтБА2(р) й контроль

%<ИЖсп %ФПКст КМ

МП

Рис. 5. Изменение показателей микробицидной кислород-зависимой системы НГ при атонической БА у детей:

АтБА1 (о), АтБА1 (р) — обострение и рем иссия атопической БА у детей; АтБА2(о), АтБА2(р) — обострение и ремиссия атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов

Дефект оксидазной биоцидности НГ был еще более глубоким в период ремиссии БА, так как при этом %ФПК еще более снижался, особенно у детей 26 группы (20,30+0,80 против 29,00+1,40 при обострении Б А). Кроме того, наряду с равнозначной ( в среднем на 73 %) депрессией коэффициента мобилизации (%ФПКстим. / %ФПКспонт.) при обострении атопической БА в обеих группах детей, максимальная депрессия КМ (0,97±0,04 против 3,18±0,03 в контроле) имела место при ремиссии атопической БА у детей 2 группы. В 1 группе детей с атопической БА КМ имел лишь тенденцию к восстановле-

нию и составил 49 % против 34 % в период обострения атопи-ческой БА.

Сравнительная оценка активности миелопероксидазы НГ (рис. 5) показала, что в наибольшей степени она была подавлена как при обострении (0,64+0,02 против 0,95±0,07 в контроле), так и в период клинической ремиссии (0,62±0,03) атопической БА у детей (I группа).

У детей-с атопической БА 2 группы снижение активности МП было менее выражено, и в период клинической ремиссии наблюдалась отчетливая тенденция к восстановлению данной функции.

Таким образом, в исследовании выявлены наиболее выраженные дефекты кислород-зависимой микробицидности НГ у детей с атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и JIOP-органов, оцениваемой по показателям NBT-теста, а по активности миелопероксидазы - при атопической БА у детей 1 группы.

Учитывая, что НГ в норме при активации способны секрети-ровать нейтрофилокины, усиливающие фагоцитоз и микроби-цидную активность неактивных НГ и моноцитов крови, а при заболеваниях легкой степени тяжести чаще отмечается либо неизмененная иммуностимулирующая активность, либо ее усиление (Долгушин И.И., Зурочка A.B., 1995,1997), дефекты микробицидности НГ при атопической БА позволяют оценить данное заболевание, как тяжелое, протекающее на фоне сформировавшегося вторичного ИДС.

В целом исследованиями показано, что течение атопической БА в двух исследуемых вариантах характеризуется нарушениями функционирования системы НГ в периоды обострения и клинической ремиссии.

Полученные данные позволяют включить их в алгоритм исследования системы НГ при атопической бронхиальной астме у детей 1 и 2 групп (рис. 6, 7).

Обострение атопической БА

Нейтропения С095(+)-НГ - увеличение в 3,5 раза

НЭО -снижение в 7 раз ФЧ,ФИ - увеличение в 2,5-3 раза

НЭЛ - увеличение в 1,5 раза %П,ИП - снижение в 2-3 раза

НЭИ - снижение в 2 раза КМ - снижение в 3 раза

СО 11 Ь(+)-НГ - увеличение в 2 раза МП - снижение в 3 раза

В 5 раз выше нормы

'.'. ]П}юдукЦия ^Е [ ■ ' ■'

В 2,5 раза выше нормы

%НГ - норма НЭО - снижение в 3 раза НЭЛ - увеличение в 2,5 раза С011Ь(+)-НГ-увеличение в 2 раза СО 16(+)-НГ- увеличение в 1,5 раза НЭИ - норма

С095(+)-НГ -увеличение в 2,5 раза ФЧ,ФИ — увеличение в 2,3-3 раза %П,ИП - снижение в 2-3 раза КМ - снижение в 2 раза МП - снижение в 1,5 раза

Ремиссия атопической БА

Рис. 6. Алгоритм диагностики системы НГ при атопической БА

Обосгрение атонической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов

НГ%- норма НЭО - снижение в 3 раза НЭЛ - увеличение в 2 раза МЭИ - норма

СП 11 Ь(+)-НГ- увеличение в 4,3 раза СБ 16(+)-НГ-увеличение в 3,4 раза

С095(+)-11Г - увеличение в 3,5 раза ФЧ.ФИ - увеличение в 2-2,5 раза %П,ИП - снижение в 2 раза КМ - снижение в 1,5 раза

МП - снижение в 1,5 раза

Тенденция к увеличению

■. • Продукция-!^-. •

В 1,5 раза выше нормы

%НГ - норма

НЭО - снижение в 3 раза

НЭЛ - увеличение в 2,5 раза

СЭ11Ь(+)-НГ-увеличение в 2 раза

С016(+)-НГ-увеличение в 1,5 раза

НЭИ - норма

С095(+)-НГ - увеличение в 2,5 раза ФЧ,ФИ - увеличение в 2,3-3 раза %П,ИП - снижение в 2-3 раза КМ - снижение в 2 раза МП — снижение в 1,5 раза

Ремиссия аюнической БА, протекающей на фойе очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов

Рис. 7. Алгоритм исследования системы НГ при атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов

Выводы

1. Атопическая бронхиальная астма у детей характеризуется особенностями функциональной активности в системе нейтро-фильных гранулоцитов, заключающимися в дефектах их основных функций различного характера и степени выраженности.

2. Составляющими алгоритма диагностики системы нейтро-фильных гранулоцитов являются расчетные индексы лейко-граммы (НЭО, НЭЛ, НЭИ), экспрессия CDllb-,CD16- и CD95-рецепторов, показатели фагоцитарной активности, переваривающей способности и кислород-зависимой микробицидности нейтрофилов и уровень продукции общего IgE.

3. Тестирование системы НГ по предлагаемому алгоритму позволяет выявить достоверные отличия в уровне функционирования системы НГ при атопической Б А у детей и атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов с учетом периодов обострения и клинической ремиссии заболевания, а также обосновать направленную иммунокоррекцию в системе НГ, особенно при атопической БА с инфекционным компонентом.

4. Для обострения атопической БА у детей наиболее характерны: гиперпродукция IgE, нейтропения, резкая депрессия НЭИ и НЭО, резкое увеличение количества CD95(+)-HT, гиперактивация поглотительной способности фагоцитов и нарушение адекватного ответа микробицидных кислород-зависимых систем на бактериальный антиген in vitro в сочетании с депрессией активности миелопероксидазы. В период ремиссии отмечается восстановление до нормальных значений величины НЭИ, тогда как остальные исследуемые параметры сохраняют уровень дефектности функций, либо проявляют лишь тенденцию к нормализации.

5. Для обострения атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов наиболее характерно: резкое увеличение НЭЛ, а также количества CD] 1 b(+)- и CD16(+)-Hr наряду с выраженной депрессией переваривающей способности фагоцитов и ответа на антигенную нагрузку in vitro кислород-зависимых микробицидных систем. В период ремиссии данного варианта атопической БА отмечается дальней-

шее усугубление обнаруживаемых при обострении заболевания дефектов (депрессии НЭИ, НЭО, CD16(+)-HT, гиперактивации поглотительной способности фагоцитов, микробицидной окси-дазной активности НГ при антигенной нагрузке in vitro).

6. При обострении и в период ремиссии атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов, уровень CD16(+)-Hr значительно превышает таковой в контроле и сравниваемой опытной группе (атопи-ческая БА), что позволяет считать данный показатель маркером атопической БА с инфекционным компонентом, тогда как наиболее достоверным диагностическим маркером атопической БА у детей является резкое увеличение величины НЭИ.

Практические рекомендации

1. Для атопической бронхиальной астмы у детей, а также для атопической бронхиальной астмы у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и JTOP-органов, характерны достоверные изменения в системе нейтрофиль-ных гранулоцитов, тестирование которых необходимо включать в общий комплекс иммунодиагностики для выяснения степени дефектов функций фагоцитов и оценки степени тяжести заболевания.

2. При обострении атопической БА у детей, на фоне гиперпродукции иммуноглобулина Е, наиболее значимыми критериями уровня функционирования системы НГ являются: нейтропе-ния, резкое снижение НЭО (в 7 раз), двукратное снижение НЭИ, резкое увеличение количества клеток, экспрессирующих CD95-антиген, и выраженная депрессия активности миелопероксидазы (в 3 раза относительно контроля). Выявленные изменения не восстанавливаются полностью до нормальных значений в период ремиссии заболевания, за исключением НЭИ, что позволяет считать его критерием периода ремиссии атопической БА.

3. При обострении атопической Б А, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов, характерно недостоверное увеличение продукции IgE, отсутствие нейтрофилеза, резкое возрастание количества CDllb(+)-Hr и CD16(+)-Hr. При этом в период ремиссии исследуемые функции НГ не только не восстанавливаются до нор-

мального уровня, но в ряде случаев усугубляется выявляемый их дефект (активность микробицидных кислород-зависимых систем НГ, депрессия переваривающей способности). Следует обращать внимание также на достоверный характер повышения продукции ^Е (в 1,5 раза выше нормы).

4. Выявляемые нарушения функционирования системы НГ при атопической БА у детей обосновывают необходимость включения в традиционную терапию заболевания препаратов, корригирующих функции системы нейтрофильных гранулоцитов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Нестерова И.В., Керашева С.Н. Функционирование системы нейтрофильных гранулоцитов при бронхиальной астме у детей // Сб. «Медико-социальные проблемы здоровья населения Северного Кавказа». - Майкоп, 2000. -С.110-113.

2. Керашева С.Н., Нестерова И.В. Особенности фагоцитарной активности нейтрофильных гранулоцитов при бронхиальной астме у детей // Сб. тр. 4-го Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». -М., 2001.-Т. 2.-С. 472.

3. Нестерова И.В., Керашева С.Н. Диагностическая ценность нейтрофильно-эозинофильного индекса (НЭИ) при различных формах бронхиальной астмы у детей // Сб. тр. 4-го Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». - М., 2001. - Т. 2. - С. 476.

4. Нестерова И.В., Керашева С.Н. Дифференциально-диагностическая ценность нейтрофильно-эозинофильного индекса при различных формах бронхиальной астмы у детей // Сб. тр. 8-го национального Конгресса «Человек и лекарство». - М., апрель 2001. -С.476-477.

5. Керашева С.Н., Нестерова И.В. Состояние различных звеньев иммунной системы у детей в зависимости от формы и стадии развития бронхиальной астмы // Сб. тр. 5 Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». - М., 2002. - Т. 2. - С.553.

6. Керашева С.Н., Нестерова И.В. Сравнительная оценка лейкоцитарных интегральных индексов при различных формах бронхиальной астмы у детей // Сб. тр. 5 Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммуно-фармакологии». - М., 2002. - Т. 2. - С.554.

7. Керашева С.Н.,Нестерова И.В., Каде А.Х. Рецепторный аппарат нейтрофильных гранулоцитов при атопической бронхиальной астме у детей // Сб. тр. Всемирного Конгресса по клинической и иммунной патологии. - Сингапур, 2002.2-6 декабря. - С.261

8. Керашева С.Н.,Нестерова И.В., Каде А.Х. Оксидазная микробицидность нейтрофильных гранулоцитов при атопической бронхиальной астме у детей // Сб. тр. Всемирного Конгресса по клинической и иммунной патологии. - Сингапур, 2002. 2-6 декабря. - С.261 -262.

Список используемых сокращений

БА - бронхиальная астма

^Е - иммуноглобулины класса Е

ФИТЦ - флюоресцеинизотиоционат

ФАН (%, абс) - процентное и абсолютное количество активных фагоцитов

ФЧ - фагоцитарное число

ФИ - фагоцитарный индекс

% П - процент переваривания

ИП - индекс переваривания

ЫВТ-тест - тест с нитросиним тетразолием

КМ - коэффициент мобилизации

% ФПК - процент формазан-позитивных клеток

ИФА - иммуноферментный анализ

НЭЛ - нейтрофильно-эозинофильно-лимфоцитарный индекс НЭИ - нейтрофильно-эозинофильный индекс НЭО - нейтрофильно- эозинофильное отношение Э - эозинофилы Лф - лимфоциты

КЕРАШЕВА Светлана Нурбиевна

АЛГОРИТМЫ ИССЛЕДОВАНИЯ СИСТЕМЫ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

АВТОРЕФЕРАТ

ИД№ 01222 от 14.03.2000 ПД № 10-10008 от 8.11.2000

Подписано в печать 3.10.2003 г. Формат бумаги 60х84'/16. Бумага ксероксная. Печать офисная. Гарнитура Тайме. Усл. печ. л. 1,0. Заказ № 443. Тираж 100 экз.

Издательство МГТИ 385000, г. Майкоп, ул. Первомайская, 191

15 63 9

Актуальность темы: Исследования последних лет обогатили понимание механизма развития аллергических реакций, главным образом, за счет расширения спектра клеток, вовлекаемых в аллергический процесс путем активации их медиаторами тучных клеток и базофилов - мишеней IgE-опосредованных аллергических реакций. При этом показано, что прежде всего - это эозинофилы, моноциты , тромбоциты и нейтрофильные гранулоци-ты (НГ) (Гущин И.С., 1994). Участие НГ в специфической и неспецифической формах иммунного реагирования позволяет отводить им особое место в системе иммунитета (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Бережная Н.М, 1988; Нестерова И.В., 1992; Колесникова Н.В., 1999). В частности, имеются данные об активном участии НГ в инфекционно-аллергических воспалительных реакциях с характерным при этом изменением своей функциональной активности, носящем защитно-приспособительный характер (Венглинская Е.А., 1994). При этом свои функциональные возможности НГ проявляют на фоне различных стимулирующих воздействий в виде усиления основных функций (миграционной, адгезивной, фагоцитарной, рецепторной, секреторной) (Ломтатидзе JI.B, 1999; Колесникова Н.В., 1999).

Особое значение в развитии аллергических заболеваний популяция НГ приобретает в связи с тем, что эти клетки осуществляют первую линию защиты организма от аллергенов различной природы и от их полноценности функционирования (хемостаксис, фагоцитоз) во многом зависит судьба аллергена в организме; нейтрофильг участвуют практически во всех звеньях и формах аллергического воспаления, что также неотделимо от их функционального состояния, а также то, что они содержат фермент гнетам и назу, как основной фактор дезактивации главного медиатора аллергической реакции воспаления - гистамина (Бережная Н.М., 1988).

Известно, что межклеточные взаимодействия в ходе аллергии не могут быть описаны, как линейный процесс, а состоят во взаимном влиянии друг на друга клеток иммунологической и эффекторной фазы аллергической реакции. Такова способность активированных НГ секретировать особые биологически-активные вещества, вовлекающие клетки-мишени аллергических реакций в реакции аллергического воспаления. В то же время обнаружено, что у больных бронхиальной астмой и ринитом резко возрастает в крови уровень различных хемокинов (в частности, интерлейкина-8), значительно усиливающих процессы дегрануляции НГ (Gosset Ph. е.а.,1999).

Учитывая тот факт, что в последние годы в мире резко возросло число детей, больных бронхиальной астмой (БА), выросла не только заболеваемость БА у детей, но и «помолодел» возраст детей с БА (Низаметдинов И.Н., Цой С.П., Ахметов М.,2000; Дьячкова С.Я., Вдовенко С).И.,2001;Кирдей Е.Г. и соавт.,2003)особую значимость приобретает ее своевременная и адекватная диагностика, разработка дифференциально-диагностических критериев форм и стадий развития заболевания. Установлено, что при бронхиальной астме значительно нарушаются регуляторные функции лимфоцитов: снижается активность супрессорной популяции и ряда других популяций лимфоидных клеток (Салмаси Э.М., 1998). Показаны особенности продукции отдельных цитокинов (интерлейкина-5, интерферона-у) при бронхиальной астме и ато-пическом дерматите (Kimura М. е.а.,1999). Так как НГ находятся во взаимодействии с регуляторными лимфоцитами и подчиняются цитокиновым сигналам (Нестерова И.В., Колесникова Н.В., 1999), интерес представляет углубленное изучение функционирования системы НГ при атопической БА у детей в период ее ремиссии и клинического обострения, что позволит расширить наши представления о роли данной популяции клеток в этиопатогенезе бронхиальной астмы, позволит определить реестр наиболее диагностически и прогностически значимых критериев заболевания.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ Цель исследования: На основании изучения функционального состояния системы нейтрофильных гранулоцитов у детей с атопической бронхиальной астмой разработать алгоритмы диагностики нарушений в системе НГ.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительное изучение уровня функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов у детей с атопической БА и атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов в стадии обострения и ремиссии заболевания.

1.1 Исследовать особенности лейкограммы при БА у детей (в период ремис сии и обострения) и на их основе разработать новые интегральные диагностические критерии.

1.2 Оценить состояние рецепторного аппарата системы нейтрофильных гранулоцитов у детей с БА (в период обострения и ремиссии заболевания) по детекции поверхностных мембранных CD1 lb-,CD16, СБ95-антигенов.

1.3 Исследовать особенности состояния кислородзависимых микробицидных систем нейтрофильных гранулоцитов у детей с БА в периоды ремиссии и обострения

1.4 Установить закономерности фагоцитарной активности и переваривающей способности нейтрофильных гранулоцитов у детей с БА (в период клинической ремиссии и обострения заболевания).

2. Систематизировать нарушения в системе нейтрофильных гранулоцитов в период обострения и ремиссии Б А у детей.

3. Разработать алгоритм диагностики нарушений в системе НГ при атопической БА у детей.

НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Впервые установлено, что различные стадии развития атопической бронхиальной астмы и атопической бронхиальной астмы, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов у детей характеризуются достоверными изменениями основных функций нейтрофильных гранулоцитов, параметры которых могут быть использованы для создания алгоритма диагностики нарушений в системе НГ при БА и обоснования необходимости их коррекции.

2. Впервые разработаны новые диагностические интегральные показатели функционирования системы НГ у детей с атопической бронхиальной астмой, представляющие собой нейтрофильно-эозинофильное соотношение (НЭО), нейтрофильно-эозинофильно-лимфоцитарное отношение (НЭЛ) и нейтрофильно-эозинофильный индекс (НЭИ), и продемонстрирована их значимость для диагностики как самого заболевания, так и его стадий развития.

3. Впервые оценен субпопуляционный состав НГ (адгезивно-активные, ци-тотоксические и проапоптические клетки) при атопической БА у детей в период клинической ремиссии и обострения.

4. На основе систематизированных данных о нарушениях функциональной активности системы НГ (рецепторная функция, фагоцитарная активность, переваривающая способность, кислородзависимая микробицидность, количественные соотношения отдельных видов лейкоцитов) впервые разработан алгоритм диагностики нарушений в системе НГ при БА у детей.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Анализ функционирования системы НГ при атопической БА у детей как в период ремиссии, так и при обострении заболевания, позволил выявить разнообразный комбинированный характер внутрисистемных количественных и функциональных изменений клеток. Отличительные особенности функционирования системы НГ при различных стадиях развития БА позволяют систематизировать их для использования в целях диагностики нарушений в системе НГ при данном заболевании.

2. Разработанный алгоритм диагностики нарушений в системе нейтро-фильных гранулоцитов заключается в оценке ряда новых рассчетных показателей (НЭЛ,НЭИ,НЭО), показателей уровня экспрессии ряда антигенов НГ (CD1 ld-,CD16,CD95), а также микробицидной, фагоцитарной и переваривающей способности клеток.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Полученные в исследовании систематизированные сведения о сравнительной оценке функционирования системы нейтрофильных гранулоцитов в условиях обострения и ремиссии атопической бронхиальной астмы у детей позволяют значительно расширить представления о роли НГ в генезе и развитии аллергической патологии.редлагаемый алгоритм диагностики системы НГ может быть использован для углубленного тестирования основных функций нейтрофильных гранулоцитов при дифференциальной диагностике атопической бронхиальной астмы у детей. Данные проведенного исследования могут быть использованы также в научно-исследовательском и учебном процессах.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ

Материалы по диагностике функционирования системы НГ при бронхиальной астме у детей внедрены в практику работы Республиканской адыгейской детской клинической больницы (г.Майкоп), Центральной научно-исследовательской лаборатории Кубанской государственной медицинской академии (г.Краснодар).

Результаты проведенных исследований опубликованы в центральной печати и доложены на 3 научных конгрессах, симпозиумах, конференциях (всего - 6 научных печатных работ).

Работа выполнена на базе ГУЗ Адыгейская Республиканская детская клиническая больница (г.Майкоп), а также Учебно-научного центра Медицинского центра Управления делами Президента РФ (г.Москва).

выводы

1. Атопическая бронхиальная астма у детей характеризуется особенностями функциональной активности в системе нейтрофильных гранулоцитов, заключающимися в дефектах их основных функций различного характера и степени выраженности.

2. Составляющими алгоритма диагностики системы нейтрофильных гранулоцитов являются расчетные индексы лейкограммы (НЭО, НЭЛ,НЭИ), экспрессия нейтрофилами CD1 lb-,CD 16- и С095-рецепторов, показатели фагоцитарной активности, переваривающей способности и кислород-зависимой микробицидности нейтрофилов.

3. Тестирование системы НГ по предлагаемому алгоритму позволяет выявить достоверные отличия в уровне функционирования системы НГ при атопической БА у детей и атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов с учетом периодов обострения и клинической ремиссии заболевания а также обосновать направленную иммунокоррекцию в системе НГ, особенно, при атопической Б А с инфекционным компонентом.

4. Для обострения атопической БА у детей наиболее характерны: гиперпродукция IgE, нейтропения, резкая депрессия НЭИ и НЭО, резкое увеличение количества CD95(+)-HT, гиперактивация поглотительной способности фагоцитов и нарушение адекватного ответа микробицидных кислород-зависимых систем на бактериальный антиген in vitro в сочетании с депрессией активности миелопероксидазы. В период ремиссии отмечается восстановление до нормальных значений величины НЭИ, тогда как остальные исследуемые параметры сохраняют уровень дефектности функций, либо проявляют лишь тенденцию к нормализации.

5. Для обострения атопической БА, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов наиболее характерно: резкое увеличение НЭЛ, а также количества CD11Ь(+)- и CD16(+)-HT наряду с выраженной депрессией переваривающей способности фагоцитов и ответа на антигенную нагрузку in vitro кислород-зависимых микро-бицидных систем. В период ремиссии данного варианта атопической БА ц отмечается дальнейшее усугубление обнаруживаемых при обострении заболевания дефектов (депрессии НЭИ, НЭО, CD16(+)-HT, гиперактивации поглотительной способности фагоцитов, микробицидной оксидазной активности НГ при антигенной нагрузке in vitro).

6. При обострении и в период ремиссии атопической Б А, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов, уровень CD16(+)-HT значительно превышает таковой в контроле и сравниваемой опытной группе (атопическая БА), что позволяет считать данный показатель маркером атопической БА с инфекционным компонентом, тогда как наиболее достоверным иагностическим маркером атопической БА у детей резкое увеличение величины НЭИ.

6.3АКЛЮЧЕНИЕ

Исследование различных звеньев иммунитета при различных вариантах течения атопической бронхиальной астмы у детей, имеет большое диагностическое, прогностическое и патогенетическое значение. Несмотря на то, что ведущим патогенетическим фактором классической атопической БА (наиболее распространенной среди детей) являются IgE-опосредованные аллергические реакции, зачастую она характеризуется выраженными процессами хронического воспаления в бронхо-легочной системе и осложнениями инфекционной природы. Исходя из сказанного становится вполне очевидной теоретическая и практическая значимость поиска адекватных маркеров не только изолированной атопической бронхиальной астмы, но и ее варианта течения на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и JIOP-органов в стадии обострения и ремиссии.

Функциональный потенциал НГ и пути его реализации имеют огромное значение для многих патологических процессов, однако эта популяция клеток приобретает особую значимость в развитии аллергических заболеваний (Бережная Н.М., 1988; Нестерова И.В., Сидельникова Н.В., 1986; Нестерова И.В. и соавт., 1998; Нестерова И.В., Колесникова Н.В., 1999). Это связано с тем, что НГ осуществляют первую линию защиты от аллергенов различной природы, участвуют в регуляции клеток-мишеней аллергической реакции первого порядка (тканевые базофилы и базофилы крови).

Наряду с этим известно, что перечень клеток, которые можно рассматривать в качестве клеток-мишеней аллергии, значительно расширен за счет нейтрофилов, а также эозинофилов, моноцитов, тромбоцитов и лимфоцитов, вовлекаемых в аллергическую реакцию медиаторами клеток-мишеней первого порядка (Гущин И.С., 1997). О роли нейтрофильных гранулоцитов в аллергическом воспалении свидетельствует также факт гистаминвысвобож-дающего действия интерлейкина-8 (ИЛ-8) в присутствии гранулоцитарномакрофагального колониестимулирующего фактора (Witte,1990). Между тем продукция ИЛ-8 осуществляется непосредственно НГ (Willems J. e.a.,1994; Бутаков А.А. и соавт., 1996) для модуляции взамодействия их с клетками эндотелия (Hechtman D. e.a., 1991) и активации их микробицидной оксидазной системы (Бутаков и соавт., 1996).

Анализ полученных данных свидетельствует об особенностях состояния системы НГ у детей с атопической БА (1 группа), проявляющихся на фоне значительной стимуляции уровня общих IgE-антител.

Углубленное тестирование системы НГ показало, что при атопической БА у детей прослеживаются достоверные изменения в количестве отдельных видов лейкоцитов, в наибольшей степени касающиеся уровня содержания лимфоцитов (снижение как в период ремиссии, так и при обострении) и эо-зинофилов (резкое возрастание в период обострения заболевания и более умеренное — при ремиссии атопической БА. При этом определенную диагностическую значимость имеют рассчитанные с помощью указанных параметров индексы НЭО (резкое снижение при обострении и более умеренное - в период ремиссии), НЭЛ ( умеренное возрастание при обострении и более резкое - в период ремиссии) и НЭИ (снижение при обострении и восстановление в период ремиссии заболевания).

Сопоставительный анализ данных о рецепторном аппарате НГ позволил заключить, что при обострении атопической БА у детей среди популяции циркулирующих НГ резко возрастает количество клеток способных к адгезии (CDllb(+)-HT), иммунному фагоцитозу, и цитотоксичности (CD16(+)-HT) , однако при этом срок жизни клеток значительно сокращается ввиду резкого возрастания количества нейтрофилов, экспрессирующих рецептор запрограммированной клеточной гибели (CD95-airrareH). При этом нами впервые получены данные, свидетельствующие о разнонаправленном характере изменений в готовности к апоптозу у взрослых лиц и детей, поскольку согласно данным Kovalchuk L.e.a (2001) у взрослых лиц в возрасте от 23 до 43 лет, страдающих тяжелой бронхиальной астмой, наблюдалось снижение количества клеток с рецепторами апоптоза. По-видимому, участие этих клеток в течении патологического процесса у детей и взрослых имеет различную природу, что крайне важно как с теоретической, так и с практической стороны.

Характеризуя фагоцитарную функцию нейтрофилов следует отметить, что как в период обострения атопической БА, так и в период ремиссии наблюдается гиперактивация фагоцитарной и поглотительной способности клеток, что не может не отразиться на полноценной завершенности фагоцитарного акта. Такой дефект в системе нейтрофильных гранулоцитов встречается довольно часто (Нестерова И.В., 1992), к тому же в наших исследованиях значительное возрастание количества активных фагоцитов в период обострения атопической БА отчетливо коррелирует с данными экспериментальных исследований, говорящих о сходном возрастании активно-фагоцитирующих клеток на пике продукции IgE (Ломтатидзе Л.В., 1999).

При оценке микробицидности НГ были вновь получены данные, свидетельствующие о разнонаправленности характера изменений функциональной активности НГ при атопической БА у детей и взрослых. То есть, если у взрослых отмечалась сниженная продукция активных форм кислорода (Kovalchuk L.V. е.а.,2001), то у детей в спонтанном тесте была явная гиперактивация оксидазных систем НГ, а при антигенной нагрузке in vitro - дефектность их реагирования на дополнительный стимул. Действительно, для ато-пии характерна повышенная способность не только тучных клеток, но и НГ, освобождать медиаторы на неспецифические стимулы такой силы, на которые клетки здоровых не отвечают (Пыцкий В.И., 2001). Однако в данном случае дефект микробицидности НГ заключается в повышенной продукции кислород-зависимых ферментных систем вне дополнительного стимула, тогда как при действии такового ответ оксидазных систем оказывается неадекватно низким.

При оценке активности миелопероксидазы в цитоплазме НГ детей с атопической БА установлено достоверное угнетение таковой как при обострении заболевания, так и в период ремиссии. Зная, что существуют два основных пути расходование миелопероксидазы: утилизация в ходе фагоцитоза и усиление внутриклеточного метаболизма (Юдин К.Б., 1992), можно считать первый из них наиболее вероятной причиной депрессии МП при атопической БА.

У детей с атопической бронхиальной астмой, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и JIOP-органов (2 группа) отсутствовали достоверные изменения со стороны общего IgE при обострении завоевания (тенденция к возрастанию титров общего иммуноглобулина Е), а при ремиссии БА наблюдалось вхождение показателя в полуто-расигмальную зону контроля. Обсуждая возможные причины отсутствия достоверной гипериммуноглобулинемии Е, характерной для атопии, в период обострения заболевания, следует учесть присутствие в анамнезе у детей очагов хронической инфекции, вызываемой бактериями вида Staphylococcus, Streptococcus и др., стимулирующих продукцию иммуноглобулинов основных классов (A,M,G). Кроме того известны факты конкурентного переключения В-лимфоцитов с синтеза IgM на IgE и наоборот под влиянием ряда эндогенных и экзогенных факторов (Колесникова Н.В., 1990). Таким образом принимая во внимания вышеизложенное, а также данные литературе о высоком уровне продукции иммуноглобулинов основных классов при инфекци-онно-аллергической БА , можно считать вполне вероятными полученные нами данные об отсутствии гиперпродукции IgE при обострении атопической бронхиальной астмы, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов. Между тем более высокий уровень

IgE при клинической ремиссии атопической БА в данном варианте течения может быть обусловлен купированием очагов хронической инфекции респираторного тракта традиционными приемами терапии, на фоне чего атопиче-ский компонент заболевания мог быть более выраженным и обусловить ряд существенных нарушений функционирования системы НГ.

В частности, при данном варианте атопической БА у детей наблюдаются характерные изменения в лейкограмме, которые более отчетливо проявляются при использовании расчетных индексов НЭО, НЭЛ и НЭИ. При этом для обострения заболевания характерна достоверная депрессия НЭО и увеличение величины НЭЛ без достоверных изменений НЭИ. В период ремиссии БА у детей 2 группы депрессия НЭИ еще более возрастает, обнаруживается достоверное снижение НЭИ в сравнении с контролем, тогда как величина НЭЛ приобретает тенденцию к восстановлению до нормальных значений индекса у практически здоровых детей. Отсутствие достоверных изменений со стороны процентного содержания НГ в период обострения атопической БА у детей 2 группы можно рассматривать как прогностически неблагоприятный фактор.

Показано, что при атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов, как в период ремиссии, так и в период обострения заболевания имеет место сокращение срока жизни нейтрофильных гранулоцитов с выраженной активацией их способности к адгезии, и, особенно, цитотоксичности и иммунному фагоцитозу. Это может быть частично обусловлено длительной персистенцией в организме инфекционных агентов при данной форме БА. Кроме того отмечено резкое увеличение количества нейтрофильных гранулоцитов, обладающих способностью к адгезии посредством CD 1 lb-антигенов, сохраняющаяся и в период ремиссии атопической БА у детей, протекающей на фоне очагов хронической инфекции респираторного тракта и ЛОР-органов.

Оценка фагоцитарной активности и переваривающей способности НГ у детей с атопической БА (2 группа) в период ее ремиссии свидетельствовала о более значительном увеличении процентного и абсолютного числа активных фагоцитов и еще более выраженной их поглотительной способности, чем при обострении заболевания. Однако при этом имела место тенденция к позитивной коррекции функции переваривания: возрастал как процент переваривания, так и его индекс, относительно данных полученных при обострении заболевания.

Установлено также, что при данном варианте течения атопической БА у детей имеет место выраженный дефект оксидазной микробицидности НГ, оцениваемой как по показателям спонтанного и стимулированного NBT-теста, так и по активности миелопероксидазы. Сравнение полученных данных с результатами оценки завершенности фагоцитарного акта при данном заболевании позволяет считать гиперактивацию поглотительной способности фагоцитов в сочетании с дефектностью микробицидных свойств клеток возможными причинами депрессии переваривающей функции нейтрофильных гранулоцитов при атопической бронхиальной астме у детей 2 группы.

Таким образом, проведенный нами сравнительный анализ функционирования системы НГ при различных вариантах течения атопической БА у детей как в период ремиссии, так и при обострении заболевания, позволил выявить разнообразный комбинированный характер внутрисистемных повреждений, сочетающий количественные и функциональные изменения клеток (Табл.6.1.1). При этом важно подчеркнуть, что имеют место как количественные изменения в системе НГ (нейтропении, или тенденции к ним), так и, в основном, их качественные дисфункции, которые свидетельствуют о крайне неблагоприятном в отношении клинической тяжести заболевания сочетании нейтропении с гранулоцитопатией, что наиболее часто ( в 60-80% случаев) встречается в клинике вирусно-бактериальных инфекций респираторного тракта и аллергозаболеваний (Нестерова И.В., 1992; 1995).

Согласно результатам проведенных исследований достоверная нейтропе-ния обнаружена нами при обострении атопической БА у детей в сочетании с гиперактивацией рецепторной функции НГ, поглотительной способности фагоцитов и значительным возрастанием количества формазан-позитивных клеток. При этом имела место достоверная депрессия величины НЭО, переваривания БАГ и микробицидности НГ в стимулированном NBT-тесте и тесте на активность миелопероксидазы. Обсуждая возможные причины склонности к нейтропении при обострении атопической БА у детей, следует учесть, что адгезия НГ к эндотелию является важнейшим условием для осуществления миграционной функции гранулоцитов. Обнаруженное нами увеличение количества нейтрофильных гранулоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии предполагает наличие соответствующей активации миграции НГ в очаг аллергического воспаления и (или) переход их в маргинальный пристеночный пул. Об этом, в частности, свидетельствуют факты больных бронхиальной астмой, чем у практически здоровых лиц (Гущин И.С., 1994). Одной из возможных причин усиления экспрессии рецепторов адгезии на НГ может быть продукция такого провоспалительного цитокина, как ИЛ-1 (Dessein А.е.а.,1986), способность к синтезу которого описана для НГ (Tiku К.е.а.,1986). Действительно, известно, что косвенными признаками развития аллергического воспаления слизистой оболочки дыхательных путей у больных БА детей являются наряду с повышенными концентрациями эозино-фильного катионного белка в периферической крови и лаваже бронхов,