Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Функциональное состояние нейтрофилов у детей, больных бронхиальной астмой, при горноклиматическом лечении

_ /ч о

^ На правах рукописи

со ^

о.

МУСУКОВА НАЗИЛЯ ТАМУКОВНА

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛОВ У ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ, ПРИ ГОРНОКЛИМАТИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ

14.00.0!) - Педиатрия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

СТАВРОПОЛЬ-1997г.

Работа выполнена в Кабардино - Балкарском государственном университете

Научный руководитель - доктор медицинских наук,

профессор М.Н.Якушенко

Официальные оппоненты - доктор медицинских наук,

профессор Б.С.Нагоев кандидат медицинских наук, доцент Ю.А.Филимонов

Ведущая организация - научно-исследовательский институт

педиатрии РАМН

Защита состоится " " 1997г. в 10.00 часов на

заседании диссертациошшго совета К-084.61.01 в Ставропольской государственной медицинской академии (355014, г. Ставрополь, ул. Мира, 310).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан "50 " 1997г.

Ученый секретарь диссертационного совета К-084.61.01, кандидат медицинских наук, доцент

В.Д.Перхурова

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Изучение бронхиальной астмы является одной из актуальных проблем современной педиатрии в связи с ростом распространенности этого заболевания среди детского населения и увеличением числа больных с тяжелым его течением (С.Ю.Каганов, 1989, И.И. Балаболкин, 1992, М. Н. Якушенко, 1994, van Schayck Р, 1991, J. О. Warner, 1992, К. Н. Carlsen, 1994, W. Lenney, 1994).

В сенсибилизированном организме больного бронхиальной астмой ребенка нейтрофилы вступают в контакт с комплексом аллерген-антитело с целью инактивации его путем поглощения и переваривания. Наряду с этим, функциональная активность нейтро-филов страдает тем сильнее, чем более выражен аллергический процесс. Фагоцитарная функция нейтрофилов отражает не только состояние общей реактивности, но и выраженность аллергических изменений в организме (Н.М.Бережная, 1983, А.Н.Маянский, 19.93, Fujisawa Т, 1993). '

В настоящее время различные немедикаментозные методы лечения бронхиальной астмы у детей используются довольно часто, нередко они приносят выраженный терапевтический эффект (Н.Н.Бримкулов, 1990, Л.И.Мотыга, 1992, О.К.Москвичев, 1993, Н.А.Геппе, 1994, Е.А.Камышова, 1996).

С этой точки зрения определенный интерес представляет горноклиматическое лечение (М.Н.Якушенко, 1985). Горный климат, обладая комплексом физиологически активных свойств, оказывает разностороннее действие на организм человека и вызывает повышение его резистентности к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Горноклиматическое лечение детей, больных бронхиальной астмой, является эффективным и широко используемым методом ( М.И.Балкаров, 1973, М.М.Миррахимов, 1975, 1983, 1995, М.Н.Якушенко, 1982, 1989, 1990, А.Т. Коков, 1994, Е.А. Камы-шова, 1996, K.H.Carlsen, 1991, A. Zapletal, 1992, Peroni D.G., 19.94, Matsuda S., 1995). Однако механизмы его терайевтического воздействия до настоящего времени полностью не раскрыты. Роль нейтрофилов в формировании терапевтического эффекта и адаптации больных детей к горной гипоксии практически не изучены.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Целыо работы является клинико - патогенетическая оценка функционально - метаболической активности нейтрофилов у детей, больных бронхиальной астмой, при горноклиматическом лечении.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи".

1. Определить функциональное состояние гранулоцитарного резерва костного мозга при горноклиматическом лечении детей, больных бронхиальной астмой.

2. Выявить особенности функции микробицидной системы ней-трофилов у детей, страдающих бронхиальной астмой.

3. Определить содержание нейтральных липидов и фосфолипи-дов в нейтрофилах у детей, больных бронхиальной астмой.

4. Оценить способность к ореолообразованию и резервные возможности нейтрофилов у детей, больных бронхиальной астмой.

5. Изучить функциональное состояние нейтрофилов у здоровых детей при адаптации к горному климату.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые проведено комплексное исследование функциональной и метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов у детей, больных бронхиальной астмой в процессе горноклиматического лечения. Выявлена стадийность изменения гранулопоэза в процессе адаптации к горной гипоксии с выраженным увеличением гранулоцитарного резерва костного мозга в конце периода ранней адаптации. В процессе горноклиматического лечения нарастает содержание в нейтрофилах активности миелопероксидазы и уровня катионных белков, что свидетельствует об усилении обезвреживания и разрушения бактерий и аллергенов. При адаптации к горной гипоксии в нейтрофилах больных детей изменяется содержание энергетического и пластического резерва клетки, возникает функциональная неоднородность популяции нейтрофилов, характерная для различных периодов адаптации к горной гипоксии.

Впервые проведено исследование ореолообразующей активности нейтрофилов и резервных возможностей лейкоцитов у детей, проживающих в экологически чистых районах и показано, что феномен ореолообразования нейтрофилами зависит от функционального состояния клеток.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Выявленные особенности функции нейтрофилов у детей больных бронхиальной астмой при горноклиматическом лечении способствуют процессам инактивации аллергенов и микробов в организме больного ребенка, что оказывает благоприятное влияние на течение бронхиальной астмы. Это является подтверждением показанности лечения бронхиальной астмы у детей горным климатом. Использованные в работе цитохимические методы исследования нейтрофильных грануло-цитов можно рекомендовать для практического применения в качестве дополнительных критериев в оценке функционального состояния клеток и эффективности горноклиматического лечения бронхиальной астмы у детей.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ. Результаты диссертационного исследования внедрены в практику Республиканской детской клинической больницы, г. Нальчик. Полученные данные используются в учебном процессе кафедры детских болезней, акушерства и гинекологии Кабардино-Балкарского госуниверситета.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ. В процессе горноклиматического лечения детей, больных бронхиальной астмой, происходит изменение функционально - метаболической активности нейтрофилов периферической крови, проявляющееся повышением активности миелопероксидазы, содержания катионного белка и нейтральных липидов, что является показателем адаптационной перестройки организма больного ребенка к среднегорному климату и свидетельствует о благотворном влиянии горноклиматического лечения. Функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов зависит от фазы заболевания и периода адаптации к горной гипоксии и отличен у здоровых детей и детей, страдающих бронхиальной астмой. В процессе адаптации к горному климату происходит активация гранулоцитарного резерва костного мозга с выбросом в кровь нейтрофилов с богатым секреторным потенциалом. Пребывание в горах приводит к повышению резервных возможностей лейкоцитов.

ПУБЛИКАЦИИ И АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, отражающих ее основное содержание.

Результаты диссертационного исследования доложены на:

- Научной конференции молодых ученых "Достижения медицинской науки - практическому здравоохранению" (30-31 марта 1995 года, г. Нальчик;

- Научно - практической конференции Республиканской детской клинической больницы, г. Нальчик, 1997.

- диссертация апробирована на межкафедральной конференции кафедры детских болезней, акушерства и гинекологии и инфекционных болезней Кабардино-Балкарского госуниверситета, 1997.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 116 листах машинописного текста и состоит из введения, 3 глав, заключения, выводов, практических рекомендации, указателя литературы, приложения. Работа иллюстрирована 17 таблицами, 10 рисунками. Список литературы включает 192 источника, из них 140 отечественных и 52 иностранных. Работа является частью общекафедральной темы "Патология женщин и здоровье детей: влияние национальных особенностей и факторов внешней среды на формирование преморбидных состояний; прогнозирование и ранняя профилактика болезней матери и ребенка (аллергические заболевания и болезни почек)".

Номер государственной регистрации 01.91.0044704.

Диссертация выполнена на кафедре детских болезней, акушерства и гинекологии (заведующий - доктор медицинских наук, профессор М.Н.Якушенко) Кабардино-Балкарского государственного университета (ректор - доктор технических наук, профессор Б.С.Карамурзов) на базе Республиканской детской клинической больницы МЗ КБР (главный врач - М.М.Эльчепаров) и Эльбрусской участковой больницы (главный врач - А.Х.Курданов).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Под нашим наблюдением находилось 130 детей, больных бронхиальной астмой -98(75,3%) мальчиков и 32(24,7%) девочки, в возрасте от 3 до 14 лет. Среди наблюдаемых больных тяжелая бронхиальная астма имела место у 10 детей(7,7%>), среднетяжелая - у 102 де-тей(78,5%), легкая- у 18(13,8%) детей.

Продолжительность заболевания до начала горноклиматиче-скоголечения была различной: менее 1 года болели 17 детей(13,1%), от 1 до 3 лет - 79(60,8%), от 3 до 5 лет - 30 (23,1%), более 5 лет - 4 детей (3,0%). У большинства больных возникновение приступов удушья носило сезонный характер (61,5%).При этом в 75,0% случаев приступный период возникал в весенне-осенний период. У части детей (20,0%) к развитию приступа приводили острые респираторные вирусные заболевания.

Отягощенная аллергическая наследственность выявлена у 98 (75,4%) детей; у 78 детей (60,0%) в раннем возрасте отмечался экс-судативно-катаральный диатез; у 51ребенка (39,2%) выявлена сенсибилизация к домашней пыли, к пыльце растений, у 47(37,7%) детей определена лекарственная и пищевая аллергия. У 31 ребенка наблюдались сопутствующие аллергические заболевания: атопиче-ский дерматит (6,9%), отек Квинке (3,1%), крапивница (9,2%), аллергический конъюнктивит (5,4%).

Все исследованные дети поступали в клинику в приступком периоде заболевания. У больных с тяжелой бронхиальной астмой приступы удушья развивались 2-3 раза в неделю, были тяжелыми, часто ночными, возникали до 5-10 раз в сутки и характеризовались выраженной экспираторной одышкой, шумным, свистящим дыханием с участием вспомогательной мускулатуры. Отмечался приступообразный кашель с трудноотделяемой мокротой. Б период ремиссии заболевания у всех детей с тяжелой формой бронхиальной астмы сохранялись в той или иной степени выраженности признаки болезни.

У больных со среднетяжелой бронхиальной астмой приступы удушья возникали 3-4 раза в месяц, протекали легче. Продолжительность приступного периода была от 3 до 9 дней. Период ремис-

сии продолжался от, до 3 месяцев. У больных легкой бронхиальной астмой приступы были редкими - не чаще 1 раза в месяц, нетяжелые, эпизодические, легко купировались обычными медикаментами. Продолжительность приступного периода была 3-7 дней. В период ремиссии признаки заболевания отсутствовали.

Горноклиматическое лечение было включено в комплекс этапного лечения 82 больным. Все дети поступали в горный стационар в период ремиссии. Горная климатотерапия проводилась в участковой больнице поселка Эльбрус, расположенной в верховьях Баксанского ущелья Кабардино-Балкарской республики (Приэльбрусье), на высоте 1850 метров над уровнем моря. Климат Приэльбрусья характеризуется сниженным атмосферным давлением и парциальным давлением кислорода, повышенным уровнем солнечной радиации, высокой чистотой воздуха, низкой относительной влажностью, минимальным содержанием аллергенов в воздухе. Климатотерапия заключалась в постоянном пребывании больных детей на свежем воздухе в сочетании с активным двигательным режимом и лечебной физкультурой. Продолжительность лечения составила от 30 до 40 дней.

Все наблюдаемые дети поступали в горы в периоде ремиссии заболевания. Большинство из них хорошо перенесли перемену климата. К концу периода ранней адаптации (10-14 дней) у всех детей отмечена нормализация сна, повышение аппетита, значительная эмоциональная активность, исчезли имеющиеся признаки заболевания. К концу горноклиматического лечения самочувствие всех детей было хорошим, отмечались благоприятные непосредственные результаты лечения. После выписки из горного стационара наблюдение за детьми велось в течение года. Стойкая ремиссия заболевания в течение 8-12 месяцев отмечена у 67 детей (81,7%), у 2 детей (2,4%) - через 7 месяцев, у 2 детей (2,4%) - через 6 месяцев и у 5 детей (6,1%) приступы возобновлялись через 3 месяца,. Среди 34 детей, получавших 2 курса горноклиматического лечения стойкая ремиссия в течение года и более отмечена у 31 ребенка (92,8%).

Состояние функции нейтрофилов выявлялось изучением гра-нулоцитарного резерва костного мозга, определением в нейтрофи-лах активности миелопероксидазы, содержания катионного белка, нейтральных липидов, фосфолипидов и способности нейтрофилов к ореолообразованию.

Состояние гранулоцитарного резерва костного мозга изучалось при курсовом лечении бронхиальной астмы пирогеналом (Л.А.Савельева, 1983) с подсчетом общего количества лейкоцитов и определением лейкоцитарной формулы через 2, 4, 6 и 24 часа после введения препарата.

Для характеристики функционального состояния нейтрофилов нами использовались цитохимические методы исследования. Актив-

ность миелопероксидазы определялась по методике Грэхема-Кнолля ¡содержание лизосомальных катионных белков- по М.Г.Шубичу; содержание нейтральных липидов выявлялось по методике Гольдма-на; фосфолипидов- при окраске Суданом черным. Цитохимический показатель содержания исследуемого вещества в клетке определялся по Astaldi и Verga (1957). Тест ореолообразования нейтрофилов изучался по методу предложенному М.В. Головановым (1982) с использованием способа оценки резервных возможностей лейкоцитов ( И.П.Терещенко с соавт., 1993).

Полученные данные подвергнуты математической обработке методом вариационной статистики и вычислением коэффициента корреляции, и построением гистограмм. Достоверность различия средних величин оценивалась по критерию Стыодента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Общее количество лейкоцитов при горноклиматическом лечении детей, больных бронхиальной астмой, постепенно уменьшалось: в г. Нальчике оно составляло 7,38+0,28х109/л, при поступлении в горы - 7,62+0,17х109/л, через 10 дней - 6,40+0,22х109/л, к концу горноклиматического лечения - 5,11±0,23х109/л.

На равнине реакция на пирогенал характеризовалась постепенным нарастанием количества лейкоцитов, максимальное его увеличение отмечено через 6 часов (10.08±1.20х109 /л). К этому сроку также значительно увеличилось количество палочкоядерных и сег-ментоядерных нейтрофилов как в относительных (5,1 ±1,7% и 64,2±1,8%), так и в абсолютных (0,55±0,001х109/л и 6,9±0,12х109/л) цифрах. Через сутки после начала пробы количество лейкоцитов и нейтрофилов пришло к исходному уровню. Количество палочкоядерных нейтрофилов в периферической крови при исследовании через 4 и 6 часов увеличилось более чем в 6 раз, а сегментоядерных - в 1,5 раза. Соотношение количества палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов до введения пирогенала было 1:45, через 4 часа-1:13, через 6 часов-1:12. Содержание общего количества лейкоцитов на пике реакции увеличилось почти в 1,5 раза, число нейтрофилов при этом возросло на 3329 клеток.

У больных бронхиальной астмой детей реакция на пирогенал при поступлении в горы по силе и характеру мало отличалась от таковой на равнине. При обследовании больных детей в конце периода ранней адаптации к горному климату реакция на пирогенал имела специфический характер: через 2 часа после введения препарата нарастание общего количества лейкоцитов и нейтрофилов было аналогично данным предыдущих обследований, однако максимальная реакция на пирогенал наступала раньше (через 4 часа пос-

ле его введения), по выраженности она была наиболее значительной. Количество лейкоцитов составляло 14.4±0.38х109/л, палочкоядерных нейтрофилов - - 9,6±2,4% (1,38±0,03х109/л), сегментоядерных ней-трофилов - 66,4±2,9% (9,56±0,28х109/л). Абсолютное содержание палочкоядерных нейтрофилов к 4 часам возрастало в 8 раз, а сегментоядерных- в 3 раза. Соотношение количества палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов до введения пирогенала было 1:19, через 4 часа - 1:7.

Через 6 часов после введения пирогенала интенсивность выброса нейтрофилов в периферическое русло была несколько меньше, чем через 4 часа, но прирост изучаемых показателей был выше, чем при предыдущих исследованиях. Общее количество лейкоцитов составляло 11,7±0,05х109/л, палочкоядерных нейтрофилов 5,9±1Д% (0,69±0,008х109/л), сегментоядерных - 62,7±2,3% (7,3± 0,17х109/л). Абсолютное содержание палочкоядерных нейтрофилов к 6 часам возрастало в 4 раза, а сегментоядерных - в 2 раза, при этом их соотношение составляло 1:10. Реакция на введение пирогенала через 20 дней от начала горноклиматического лечения была такой же, как и в первые дни пребывания в горах.

В процессе лечения детей, больных бронхиальной астмой в горах, происходит изменение реакции организма на пирогенал - наиболее выраженной она была к концу периода ранней адаптации к горной гипоксии. Можно полагать, что в эта сроки усиливается гранулопоэз, происходит насыщение гранулоцитарного резерва костного мозга, так как существует прямая зависимость величины максимального выброса нейтрофилов из гранулоцитарного резерва костного мозга от его уровня ( Ю.И.Лорие,1968). Усиление гранулопоэза в периоде ранней адаптации происходит параллельно активации эритропоэза (М.Н.Якущенко,1985), что свидетельствует об активации функции костного мозга при смене фаз адаптации к горной гипоксии.

Под влиянием горного климата повышается чувствительность организма к различным медикаментам, в частности, к адреномиме-тикам (М.Н.Якушенко,1994) и глюкокортикоидным препаратам (Е.А.Камышова, 1996); наряду с этим выявлена также повышенная чувствительность костного мозга к стимулирующему воздействию пирогенала. Вероятно, временная активация гранулопоэза на второй неделе адаптации организма больного ребенка к горной гипоксии является отражением стадийности адаптационного процесса и свидетельствует о переходе на клеточный уровень адаптации с образованием популяции нейтрофилов, способных оптимально выполнять свою функцию в гипоксической среде.

Подтверждением качественных изменений нейтрофилов могут служить данные цитохимических исследований. В приступном периоде бронхиальной астмы на равнине активность миелопероксидазы была

достоверно ниже, чем у здоровых детей и составляла 1,88±0,08. В период ремиссии наметилась тенденция к повышению активности миело-пероксидазы, однако она не достигла уровня у здоровых детей. Средний цитохимический коэффициент составил 2,06±0,09.

Поступление больных детей на горноклиматическое лечение приводило к резкому повышению активности миелопероксидазы (р < 0,001) до 2,41±0,05 за счет увеличения числа клеток с высокой ее активностью (56,9%). Он превышал уровень данного показателя у здоровых детей на равнине. Аналогичная, но более выраженная реакция на горную гипоксию отмечалась и у здоровых детей, приехавших в горы. К концу периода ранней адаптации наметилась тенденция к снижению активности миелопероксидазы как у больных, так и у здоровых детей. К концу лечения больных детей в горах активность миелопероксидазы превышала данный показатель у больных детей в период ремиссии на равнине (р< 0,001)/

Динамика активности миелопероксидазы у детей, больных бронхиальной астмой, при горноклиматическом лечении свидетельствует об изменении функции нейтрофилов, так как их поглотительная и переваривающая способность связана с содержанием данного фермента( Н.М.Бережная,1983, А.Н.Маянский,1993, Сатиэз! 0,1981), что может отражаться на течении аллергического процесса. Наряду с этим, миелопероксидаза нейтрофилов участвует в инактивации лейкотриенов - веществ, обладающих бронхоспастическими свойствами (Н.Д.Беклемишев, 1985).

Уровень катионного белка в приступном периоде бронхиальной астмы был достоверно ниже, чем у здоровых детей и составлял 0,97±0,09. В период ремиссии заболевания отмечалось дальнейшее снижение уровня катионного белка (0,73±0,06) за счет уменьшения количества протеинположительных нейтрофилов (р< 0,05).

После приезда в горы больных детей наметилась тенденция к некоторому повышению уровня катионного белка (0,81±0,06). Она сохранялась до конца периода ранней адаптации к горной гипоксии. После 30-дневного лечения содержание катионного белка в нейтро-филах достоверно повышалось и достигало уровня его у здоровых детей после пребывания в горах и показателя в периоде ремиссии на равнине (1,12±0,09). Отмечалось уменьшение числа нейтрофилов не содержащих катионный белок (36,0%).

В результате горноклиматического лечения детей, больных бронхиальной астмой, увеличивается содержание в нейтрофилах катионного белка, в то время как переваривающая функция фагоцитов находится в тесной зависимости от его содержания. Изменение содержания катионных белков (миелопероксидазы и неферментных катионных белков) под влиянием горноклиматического лечения детей больных бронхиальной астмой может приводить к уси-

лению бактерицидной функции нейтрофилов. В определенной степени этому способствует также повсеместное повышение активности адренорецепторов, выявляемое у больных детей при горноклиматическом лечении (Е.А.Камышова, 1994). Улучшение функции компонентов фагоцитарной системы сопровождается усилением инактивации аллергенов, попадающих в организм больного ребенка (И.И.Долгушин с соавт., 1986, А.Н.Маянский, А.Н.Галиулин, 1984).

При бронхиальной астме изменяется состояние энергетического и пластического резерва нейтрофила. В приступном периоде заболевания содержание нейтральных липидов в нейтрофилах было достоверно ниже (1,77±0,10), чем у здоровых детей на равнине. Увеличение числа нейтрофилов с умеренным и высоким содержанием нейтральных липидов привело к .некоторому повышению уровня данного компонента в период ремиссии заболевания. Поступление на горноклиматическое лечение не привело к изменению уровня содержания нейтральных липидов у больных детей. Однако, к концу периода ранней адаптации он увеличился (р< 0,001) и соответствовал показателю у здоровых детей на равнине. Величина его сохранялась практически неизменной в течение месячного пребывания больных детей в условиях горной гипоксии. Можно полагать, что в процессе адаптационной перестройки организма ребенка развивается количественный дефицит энергетического и пластического потенциала клеток. У больных детей реакция на горную гипоксию не сопровождалась подобным снижением уровня нейтральных липидов, что возможно, связано с большей приспособленностью клеток больных детей к действию гипоксии, напряженности у них механизмов компенсации.

В приступном периоде заболевания отмечено также умеренное содержание в нейтрофилах фосфолипидов (1,70±0,08). В период ремиссии содержание их несколько возросло и превысило данный показатель у здоровых детей. В процессе горноклиматического лечения содержание фосфолипидов в клетках не претерпевало изменений. Динамика содержания нейтральных липидов и фосфолипидов на горную гипоксию была сходной как у здоровых, так и у больных детей.

Снижение содержания фосфолипидов и нейтральных липидов в приступном периоде бронхиальной астмы, являющихся главным источником энергетического и пластического резерва клетки, выполняющих транспортную роль и представляющих собой основной и главный компонент клеточных мембран, от состояния которых зависит жизнеспособность и функциональная активность клетки (Ю.Е.Вельтищев, 1982, А.Б.Джунелов, 1990) свидетельствует о функциональной недостаточности фагоцитов. Повышение уровня данных клеточных компонентов в результате горноклиматического лечения является показателем его благоприятного влияния на организм ребенка.

Можно полагать, что активация гранулопоэза и увеличение гранулоцитарного резерва костного мозга в конце периода ранней адаптации больных детей к горной гипоксии является способом смены функционирующей на равнине популяции нейтрофилов на принципиально новую, способную выполнять свою функцию в условиях горной гипоксии. Подтверждением тому являются'изменения гистограмм распределения нейтрофилов по величине содержания в них изучаемых нами цитохимических компонентов.

У здоровых детей при всех исследованиях на гистограммах выявлялась в той или иной степени выраженное преобладание клеток с максимальной активностью миелопероксидазы (40-80%). У больных бронхиальной астмой детей на равнине преобладали клетки со средним содержанием этого фермента (37%) и только к концу горноклиматического лечения распределение клеток приблизилось к таковому у здоровых. Несколько иные гистограммы получены при изучении распределения в нейтрофилах катионного белка: у здоровых детей на равнине характерными были гистограммы с преимущественным распространением клеток с малым и средним содержанием катионного белка (40%), а к концу пребывания в горах чаще встречались протеинотрицатель-ные клетки (55%) и нейтрофилы с малым его содержанием (24%). У больных бронхиальной астмой в приступном периоде и периоде ремиссии на равнине, а также в периоде ранней адаптации к горной гипоксии гистограммы характеризовались преимущественным содержанием протеинонегативных клеток (более 40%) и только к концу горноклиматического лечения гистограмма больных детей по форме стала почти такой же, как и у здоровых.

На гистограмме распределения нейтральных липидов в нейтрофилах у здоровых детей преобладали клетки со средним и высоким их содержанием (85%); у больных в приступном периоде отмечались клетки с низким и средним содержанием нейтральных липидов (73%), к концу горноклиматического лечения распределение нейтральных липидов у больных детей не отличалось от их уровня у здоровых.

У здоровых детей гистограмма распределения нейтрофилов по содержанию фосфолипидов характеризовалась накоплением клеток со средним их содержанием (41%); почти такая же форма гистограммы отмечена и в конце их пребывания в горах. У детей, больных бронхиальной астмой, в приступном периоде отмечалось большое количество клеток с низкой степенью содержания фосфолипидов (39%), в конце горноклиматического лечения гистограмма распределения фосфолипидов в нейтрофилах у больных детей по форме была такой же, как и у здоровых к этому сроку.

Следовательно, к концу горноклиматического лечения гистограммы распределения содержания в нейтрофилах миелопероксидазы, катионного белка, нейтральных липидов и фосфолипидов имели специ-

фическую форму. Неоднородность популяции нейтрофилов, характерная для различных периодов адаптации к горному климату, вероятно обеспечивает оптимальную их функцию. Можно полагать, что не все клетки в нейтрофильной популяции несут одинаковую функцию, в связи с чем мы получали различные формы гистограмм, характерные для каждого периода болезни и адаптации.

Подтверждением полиморфности нейтрофилов в процессе течения болезни и адаптации к горному климату могут быть данные корреляционного анализа соотношения изучаемых параметров клетки. В приступном периоде бронхиальной астмы у детей выявлена отрицательная корреляция между активностью миелопероксидазы и содержанием фосфолипидов в нейтрофилах; в периоде ремиссии - высокая положительная корреляция между содержанием катионного белка и нейтральных липидов. В периоде ранней адаптации больных детей к горному климату высокая положительная корреляционная зависимость выявлена между активностью миелопероксидазы и содержанием нейтральных липидов, а также между содержанием катионного белка и фосфолипидов. При выписке из горного стационара выявлена положительная корреляционная связь между активностью миелопероксидазы и содержанием нейтральных липидов и отрицательная - между уровнем катионного белка и фосфолипидов.

Можно полагать, что в результате горноклиматического лечения больных детей происходит восстановление функциональных и структурных связей между изучаемыми компонентами клетки нарушенных в процессе развития болезни. Выявленные особенности количества, степени достоверности, направленности и знаковой принадлежности функциональных взаимосвязей характеризуют их потенциал в системе клеточной защиты.

Об изменении функции нейтрофила при бронхиальной астме у детей и в процессе горноклиматического лечения свидетельствует состояние ореолообразующей функции. В приступном периоде заболевания содержание ореолообразующих нейтрофилов в крови больных детей составляло 3.17±0.2%, что достоверно превышало данный показатель у здоровых детей (р<0,001). Резервные возможности лейкоцитов в этот период были ниже, чем у здоровых детей (р<0.01) и составляли 111.5±7,0% . Это свидетельствует об ослаблении функциональной активности изучаемой клеточной системы. В периоде ремиссии заболевания оба показателя существенно не изменялись. При поступлении больных детей в горы показатель орео-лообразования у них сохранялся на прежнем уровне и был достоверно выше, чем у здоровых детей в горах (р<0.001), он составил 3.42±0.2%. Резервные возможности лейкоцитов у детей в горах достоверно превышали этот показатель у больных детей на равнине (р<0.05) и составляли 124.5±13.6% ■ К концу периода ранней адапта-

ции происходит снижение процента ореолообразующих нейтрофи-лов (р<0.05) до 2.75±0.2% с одновременным последовательным ростом резервных возможностей лейкоцитов до 131.5±7.8% .

К концу периода стабилизации сохраняется прежняя динамика исследуемых показателей: отмечается дальнейшее снижение числа ореолообразующих клеток (р<0.001) - 2.01±0.1% и некоторое повышение резервных возможностей лейкоцитов (р>0.05) 150.1±6.9%. После пребывания детей, больных бронхиальной астмой в горах происходит нормализация функционального состояния ней-трофильных гранулоцитов, на что указывает приближение значений показателя ореолообразования и резервных возможностей лейкоцитов к показателям у здоровых детей.

Таким образом, в приступном периоде бронхиальной астмы количество ореолообразующих нейтрофилов достоверно повышается по сравнению со здоровыми детьми и остается повышенным в период ремиссии. У здоровых детей к концу периода ранней адаптации к горной гипоксии происходит увеличение количества ореолообразующих нейтрофилов с сохранением резервных возможностей клеток. У больных детей к концу горноклиматического лечения достоверно снижается количество ореолообразующих клеток и повышаются резервные возможности лейкоцитов, что свидетельствует о благоприятном действии горного климата на организм больного ребенка.

Для оценки функциональных взаимосвязей между исследованными компонентами клетки проведено изучение их взаимной корреляции. Между показателем ореолообразования и резервными возможностями лейкоцитов здоровых детей отмечается умеренная обратная корреляционная связь, которая несколько ослабевает в горах. В приступном периоде бронхиальной астмы между этими показателями практически не выявляется взаимного влияния, что является следствием нарушений клеточного метаболизма в период приступа. Попадание больных в условия горного климата приводит к появлению умеренной обратной взаимозависимости, которая соответствовала уровню здоровых детей и сохранялась до конца горноклиматического лечения.

Наиболее выраженное влияние на показатель ореолообразования у здоровых детей оказывает уровень активности миелопероксидазы. После пребывания в горах происходит усиление этой связи. Между остальными компонентами клетки и показателем ореолообразования заметной корреляционной зависимости не выявлено.

У детей, больных бронхиальной астмой, влияние содержания исследованных компонентов на показатель ореолообразования более выраженное: в приступном периоде и периоде ремиссии выявляется высокая обратная корреляционная связь между активностью миелопероксидазы и частотой выявления ореолообразующих клеток;

при адаптации к горным условиям она несколько ослабевает, но сохраняется. Обнаружено также взаимное влияние между активностью миелопероксидазы и уровнем резервных возможностей лейкоцитов. Заметная связь выявлена между содержанием нейтральных липидов в нейтрофилах и способностью к ореолообразованию: выявлена высокая отрицательная корреляция в приступном периоде заболевания, в периоде ремиссии она стала умеренной положительной; в процессе адаптации к горной гипоксии эта взаимосвязь уменьшается. Корреляционная зависимость между содержанием катионного белка и фосфолипидов во все периоды исследования была незначительной.

Таким образом, на основании комплексного изучения функциональной и метаболической активности нейтрофильных гранулоцитов нами были установлены существенные изменения неспецифической резистентности организма у детей, больных бронхиальной астмой в разные периоды заболевания. Полученная положительная клиническая динамика течения заболевания, стимуляция костномозгового кроветворения с выходом в кровь молодых и функционально активных клеток, повышение секреторного потенциала нейтрофилов в результате воздействия гипоксии свидетельствует о благотворном влиянии горноклиматического лечения на организм ребенка. Повышение резервных сил нейтрофилов, возрастание активности микробицидной системы и энергетического потенциала нейтрофила служат подтверждением произошедшей перестройки организма на клеточном уровне. Полученные результаты отражают один из механизмов терапевтического воздействия горного климата и дают нам возможность рекомендовать горноклиматическое лечение детей, больных бронхиальной астмой в периоде ремиссии заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Гранулопоэз и гранулоцитарный резерв костного мозга у детей,- больных бронхиальной астмой в периоде ремиссии, при поступлении в горы и в периоде стабилизации клинико-функциональ-ных показателей не изменялись; в конце периода ранней адаптации выявлена активация гранулопоэза, сопровождающаяся более выраженным и длительным выбросом в периферическую кровь гранулоцитов в ответ на введение пирогенала.

2. В приступном периоде бронхиальной астмы у детей наблюдалось угнетение бактерицидной системы нейтрофила - резко уменьшалась активность миелопероксидазы и содержание лизосомального катионного белка; в период ремиссии заболевания величина данных показателей не достигала уровня у здоровых детей.

3. В периоде ранней адаптации к горной гипоксии детей, больных бронхиальной астмой, отмечалось повышение активности миелопе-роксидазы нейтрофилов и увеличение содержания катионного белка. К концу горноклиматического лечения содержание компонентов бактерицидной системы клетки стало достоверно выше, чем у детей в периоде ремиссии заболевания на равнине.

4. В приступном периоде бронхиальной астмы у детей изменялось состояние энергетического и пластического резерва нейтрофи-ла - в клетках снижалось содержание нейтральных липидов и фос-фолипидов. В периоде ремиссии заболевания их содержание соответствовало уровню у здоровых детей.

5. В периоде ранней адаптации к горной гипоксии детей, больных бронхиальной астмой, содержание нейтральных липидов в нейтро-филах увеличивалось и сохранялось на этом уровне в течение всего периода горноклиматического лечения. Содержание фосфолипидов в процессе адаптации к горному климату не менялось.

6. У детей, больных бронхиальной астмой, в приступном периоде была резко повышена ореолообразукяцая функция нейтрофилов и снижены резервные возможности лейкоцитов. В периоде ремиссии заболевания уровень данных показателей не изменился. В процессе горноклиматического лечения показатель ореолообразования и резервные возможности лейкоцитов у больных детей соответствовали их величине у здоровых детей на равнине.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Цитохимические исследования нейтрофилов (активность миелопероксидазы, содержание катионного белка, нейтральных липидов и фосфолипидов) являются информативными показателями функционального состояния клеток и могут быть использованы при определении периодов обострения и ремиссии бронхиальной астмы у детей и характеристики периодов адаптации при горноклиматическом лечении.

2. Пирогеналовая проба достоверно характеризует состояние гранулоцитарного резерва костного мозга и гранулопоэз, данная методика может бьггь использована при оценке эффективности горноклиматического лечения и и является информативным признаком перехода периода ранней адаптации при горноклиматическом лечении в период стабилизации клинико - функциональных показателей.

3. Тест ореолообразования нейтрофилов и метод выявления резервных возможностей лейкоцитов являются технически простыми и доступными; они могут быть использованы для оценки функционального состояния нейтрофилов периферической крови у больных детей в разные периоды заболевания и адаптации к горной гипоксии.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Активность миелопероксидазы у детей, больных бронхиальной астмой, при горноклиматическом лечении // Материалы конференции молодых ученых "Достижения медицинской науки -практическому здравоохранению". - Нальчик, 1995.-С.24-25.

2. Функциональное состояние нейтрофилов у детей, больных бронхиальной астмой, при горноклиматическом лечении // Пульмонология. -Приложение, VI Национальный конгресс по болезням органов дыхания. - Новосибирск, 1-4 июля 1996.-1<Г. 315 (Соавт. М.Н.Якушенко).

3. Содержание лизосомальных катионных белков и активность миелопероксидазы нейтрофилов у здоровых детей // Тезисы докладов юбилейной конференции, посвященной 30-летию медицинского факультета " Вопросы теоретической и клинической медицины". - Нальчик, 1996.-С.29-30.

4. Содержание нейтральных липидов и фосфолипидов в нейтрофилах здоровых детей // Тезисы докладов юбилейной конференции, посвященной 30-летию медицинского факультета " Вопросы теоретической и клинической медицины". - Нальчик, 1996.-С.30-31 (Соавт. Л.Х.Бичоева).

о. Цитохимические показатели нейтрофилов у здоровых детей г. Нальчика //Сборник научных трудов "Актуальные вопросы педиатрии" под редакцией проф. М.Н.Якушенко,- Нальчик, 19.97,-с.28-31.