Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Активация клеток иммунной системы и оценка ее функциональной полноценности. Новый принцип иммунокоррекции

1.10 3 9Т

Академия медицинских наук СССР НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВАКЦИН И СЫВОРОТОК имени И.Н.МЕЧНИКОВА

На правах рукописи

СТЕНИНА МАРИНА АЛЕКСАНДРОВНА

АКТИВАЦИЯ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ И ОЦЕНКА ЕЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ПОЛНОЦЕННОСТИ. НОВЫЙ ПРИНЦИП ИМНУКОКОРРЕКЦИИ.

14.00.36-аллергология и иммунология

Автореферат диссертации иа соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 1991

Работа выполнена во 2-ом Московском ордена Ленина государственном медицинском институте км.Н.И.Пирогова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,профессор А.А.ЯРИЛИН доктор медицинских наук,профессор Петрова И.В. доктор медицинских наук, Василейский С.С.

Ведущая организация - институт клинической иммунологии сибирского отделения АМН СССР

Защита диссертации состоится < > ............1991 г. в.....часов

на заседании специализированного совета Д 074.22.01 при научно-исследовательском институте вакцин и сывороток имени И.И.Нечникова АМН СССР по адресу:103064,Москва,пер.Мечникова,д. 5а

с диссертацией можно ознакомиться в библиотекеке научно-исследовательского института вакцин и сывороток имени И.И.Мечникова АМН СССР

Автореферат разослан < >................1991 г.

Ученый секретарь пециализированного Ученого совета доктор медицинских наук

Н.Г.Кудрявцева

' '! К

I, .; I'

!::;:51 обшая характеристика работы.

г.

■ Актуальность исследования.

Клиническая иммунология-самостоятельный раздел науки об иммунитете,имеющий объектом исследования иммунную систему человека и потому тесно соприкасающийся с потреб-юстями практического здравоохранения.Разработка принципов оценки состояния иммунной :истет конкретного индивида,т.е. готовности ее развернуть соответствующий антнген-юй нагрузке иммунный ответ.обеспечивая т.о.генетический гомеостаз - проблема,выз->анная к жизни такими потребностями. '

В начале"70-ых годов,сразу же после возникновения клинической иммунологиии как ►тдельной научной дисциплины,упомянутая выше проблема была сформулирована отечест-:енными исследователями как вопрос об оценке иммунного статуса человека (Петров и оавт. , 1975,1984,Лебедев и соавт., 1976,1977 .Чередеев и соавт., 1980,Ковальчук и Чере-¡еев,1984). Особенность проблемы состоит в том,что,формулируя вопрос о состоянии им-унной системы,исследователь,не указьшая (не зная) тот антиген, при встрече с кото-ым последняя может оказаться некомпетентной, пытается по сути дела получить некую нтегральную характеристику ее функционирования.

Могло перечислить ряд конкретных ситуаций,требующих вмешательства клинического ммунолога и высвечивающих актуальность подобной постановки вопроса и сегодня.Напри-ер,необходимость обоснованного ■заключения о функциональной полноценности иммунной истемы очевидна в таких Группах пациентов,как часто болеющие дети,пациентов,у кото-и можно ожидать развития вторичного иммунодефицита вследствие возрастных изменений 4мунной системы,воздействия на нее больших доз гормонов,интенсивной химиотера-ш,ионизирующей радиации,при исследовании работающих на вредных производствах,насе-

;ния экологически неблагополучных районов и пр.Сегодня особую значимость вопрос о

\

генке иммунного статуса приобрел в связи с Чернобыльской катострофой и угрозой эпи-;мии СПИДа.

Одним из теоретических обобщений,существующих в клинической иммунологии,является >едставление о сложной сети взаимодействующих в процессе иммунного ответа клеток -лперов,супрессоров,эффекторов и пр.Можно утверждать,что нитями,связывающими отельные узлы этой пепи,являются сигналы,посылаемые клетками друг другу в виде раз-[чных цитокинов.

В рамках подобных представлений понятен тезис о том,что у конкретного индивид, характер реакции иммунной системы на антигенную нагрузку в определенной степен формируется как результат взаимодействия таких популяции,и зависш так* от ряда других воздействий на клетки иммунной системы,например,от воздействий гормо нов.

Мысль о том,что степень реализованное™ клеточных взаимодействий в сети валимо действующих клеток лимитирует иммунный ответ,можно проиллюстрировать на примере ак тивации лимфоцитов к пролиферации.Сами по себе .эти сведения но т-сут ниьин ш (форма ции,однако,именно в этом маленьком фрагменте событий,имеющих место при нмм>нном <>т вете,клеточные взаимодействия.происходяшге при участии растворимых медиа горов (сиг налов), верифицированы наиболее полно.

Так известно,что акцессорные клетки.посылая Т-ллмфоцитам сигнал в виде интерлей хина 1,переводят их в присутствии сигнала к целетпо (ашшена) и поаор функш^онялъ ное состояние.В этом состоянии Т-клетки способны еннтезировагь гитнал для перехода 5 фазу (интерлейкин 2) и способны воспринять его с помошыо кнокь :>ксир^«ч -прикати,; высокоаффинных рецепторов для интерлейкина 2.

Аналогичные сведения имеются и по поводу активации В-лимфчцптоь.Сигнал,а! р<-тир>* щий нммуноглобулиновые молекулы мембраны и сигнал от Т-лимфоцитов в кил.'1 цнг^рлойкн на 4 (ВБП) .переводят лимфоцит в новое состояние,в котором его в.н.шчидгГк-твие рестриктированными по 1а-области,специфичными для антигена Т-клетками облечет» ич-< индуцированной сигналами гиперэкспрессия 1а-антигенов.а пояео^нно репетиров факторов роста и дифференцировки делает клетку чувствительной к этим сигналам.

Т.е. процессе активации лимфоцитов к делению обязательно сопряжен с помином I меньшей мере двух типов клеток (лимфоцитов и акцессорных клеток) различными лимфом новыми сигналами,с помощью которых они как бы "разговаривают" лруг с другом,и.<м«-н> в соответствии с этим свой функциональный статус.В силу неполноты наших срголняшж знаний такие взаимодействия в приведенной последовательности событий щрлнич»*! только хорошо известными лимфокинами,а другие важные сигналил,такие,на пример, к сигналы от супрессорных клеток,от входящих в микроокружение лимфоцитом клеток ноли-фоидного ряда,не включены в нее из-за недостаточной изученности.

И■наконец,на примеое активации лимфоцитов к пролиферации,можно .прсшллюстрир

>ать,что прерывание (искажение) нормальных процессов обмена сигналами в сети взаимо гействуюпмх •клеток искажает и конечный результат таких взаимодействий.Так,напри «ер>отсутствие В5Р1 в комплексе сигналов.которые должен получить лимфоцит в процессе герехода от покоящейся клетки к делящейся,приводит к возникновению состояния,извест-юго под названием "частичная активация": гиперэкспрессия 1а антигенов свидетельст-1уёт о готовности В-лимфоцитов взаимодействовать' с Т-клетками, однако, отсутствие соответствующих рецепторов не дает возможности воспринять посылаете им сигналы для вступления в Б фазу. - ■ "

Сегодня мы разрешаем задачу оценки иммунного статуса человека , акцентируя внима-ше преимущественно лишь на одном из факторов,от которых зависит иммунный ответ: с о ли чественной сохранности и функциональной активности большего или меньшего числа

10пуляций клеток, участвующих в иммунном

> т в е т е : хелперов,супрессоров.киллеров,антителопродупентов и пр.На этом пути юстинуты определенные успехи,к которым можно отнести в частности детально разработанный комплекс методов анализа иммунного статуса и особенности использования такого комплекса при различных заболеваниях человека (Ковальчук И Чередеев,1984,Петров и :оавт.,1984 ). Возьмем на себя смелость утверждать,. что не решенный »спект проблемы оценки иммунного статуса заключается в том,что на сегодняшний день клинические иммунологи, умеющие достаточно хорошо оценивать каждую из популяций клеток - участниц иммунного ответа в отдельности, не умеют оценивать как реализуются их взаимодействия друг с другом и с сигналами,поступающими в иммунную систему извне.

Цель и задачи исследования.

Если принять точку зрения.согласно которой характер реакции иммунной системы т воздействия на нее (нормальный,ослабленный,усиленный замедленный,направленный тротнв собственных антигенов я пр.) в значительной степени определяется в ходе взаимодействия иммунокомпетентных клеток друг с другом,закономерно возникают важный воп-рос-какие процессы (механизмы) .протекающие в иммунокомпетентных клетках,обеспечивают реализацию поступившей с сигн.щом информации в изменения функциональной активное-

ти.'экспрессии новых антигенов.ясчезновении с мембраны определенных молекул,усилен! ила ослаблении синтеза каких-либо лимфокиков,открытии ионных каналов и пр. 1 в' лит( ратуре такие процессы обозначают как "ассоциированные с активацией".

Достаточно полный ответ на поставленный вопрос можно получить на основаниианат за литературных данных.. Мы правели такой анализ и высказали тезис,что сложнейлп комплекс сопровождающих реакцию клетки на сигнал сдвигов ее биохимических и биофиз! ческих параметров можно произвольно ограничить,вкцелив последовательность взанмоев: занных,обеспечивающих активацию процессов,совокупность которых удовлетворяет понят! - механизм трансмембранной передачи регулирующих функциональную активность сигнал< (рас.1).Этот механизм,функционирующий по универсальному принципу образования мол* кул-посредников между поступившим на рецептор сигналом и протеинкиназами.влияюиао

рис.1.Гипотетический мЕханизм трансмЕмбранной ПЕРЕЭачы регулирующих Функциональную актибность сигналов

рецепторняя савгЕднниця

Т.З (другие антигЕны?) _2

ЭЛЕМЕНТ,0&ЕСПЕЧибаЮЩий СПЕЦИФИЧНОСТЬ боспрыять сигнала

ферменты.обрй зуощие с рецептором стабильный мякро молекулярный комплекс_ 3

БЕЛКИ

ферменты,обеспечивающие накопление вторичных нес-сенджеров 4

протемнкиназы

1

оспрматмя

ЭЛЕМЕНТ.КОНТРОЛИРУЮ-•V Цкй ПОяблЕНИЕ бтО — ^ричных мессен8жеРо6 2

элемент, усиливаю— ■Ции провевЕНЫЕ сигнала

элементТоУеспечи— Бающий накоплЕ— ние вторичных

МЕССЕНЭжЕРоб

элемент.изменяющий функциональную актибность __5

на активность основных ферментных систем клетки,транскрипцию генов,ионную проница мость и ар. способен:а)специфически распознавать сигналы; б)"включаться" при посту ленив сигнала; в)"настраиваться".изменяя сродство к сигналу воспринимающего элемен

цепторл) на неограниченно долгое его проведение; г)"прерывать" сигнал как за счет их внутренних качеств (гомологичная модуляция воспринимающего элемента,работа елков),так и за счет реакции на сигналы извне (гетерологичная модуляция воспринн-щего элемента); в)"усиливать" сигнал,изменяя фосфолипидный матрикс мембраны.В та-виде последовательность обеспечивающих активацию событий может явиться объектом чения клинического иммунолога.Следует также отметить,что в рассматриваемом "меха-ме" белковая природа элемента,распознающего сигнал,гарантирует такое разнообразие форм,которое обеспечит клетке возможность воспринимать бесконечное множество налов.С другой стороны утверждение о универсальности "механизма" подразумевает е> наличие определенного числа элементов (рецепторы,G-белки,молекулы-посредники и ).Принадлежность многих из них к классу белков допускает чрезвычайное разнообра-характера ("режима") проведения сигнала,зависящее как от сигнала,так и от самой гки. -

I е л ь ю своей работы мы поставили обоснование нового принципа оценки функцио->ной полноценности иммунной системы человека и новых методов иммунокоррекции,распивающих состояние процессов.ассоциированных с активацией лимфоцитов,как осо-влжнум ее характеристику.Эта цель подразумевала разрешение двух основных проба) является ли состояние внутриклеточных процессов (механизмов)ассоциированных гтив.згшен лимфоцитов,тем фактором, который,лимитируя взаимодействие клеток иммун-

системы, формирует т.о. специфический характер ее ответа у данного индивида на iHiie воздействия ? б) могут ли нарушения процессов (механизмов),ассоциированных с вашей лимфоцитов,припусти к возникновению определенных форм нарушений иммуните-челпвека ?

онкретные задачи работы можно сформулировать следующим образом; .анализ данных исследования иммунного статуса пациентов с разнообразными типа я пений иммунной системы с точки зрения поиска феноменов,подтверждающих тезис о ходимости изучения взаимосвязи состояния иммунной систем« и процессов, ассоцииро-мх с активацией иммунокомпетентных клеток ¡проведение с аналогичной целью анализа их по изучению популяций лимфоидных клеток,отвечающих in vitro на такие сигна-1К лцмфокины, цитокины,иммунотропные пептиды; 2.разработка простой эксг.'римен-кой молель,позволяющей при использовании в качестве объекта исследования лимфо-

цитов человека>тестировать вызываемые сигналом изменения Функциональной активносп мишеней (трансляцию сигнала) одновременно с характеристиками процессов,ассоциированных с их активацией (восприятием сигнала мишенью); 3.непосредственное изучение н данной модели вопроса о существовании -взаимосвязи между характером трансляции снгна ла и особенностями его восприятия при использовании в качестве "зондов" набора пре Паратов,эквивалентных реально циркулирующим в иммунной системе сигналам; 4.сравненн закономерностей,описывающих процессы реагирования лимфоцитов на сигналы,регулирующи их Функциональную активность■в норме и при состояниях»при которых лабораторные тест опенки иммунного статуса указызают на "дисбаланс" в иммунной системе,т.е. на наруше ние способности лимфоцитов реализовать (транслировать) такие сигналы; З.апробаци при лечении больных с различными клиническими формами красной волчанки принципе коррекции нарушений иммунной системы.учитывающих состояние процессов.ассоциированнь с активацией лимфоцитов,как фактора.формирующего иммунный статус и,следовательно,х< рактер ответа иммунной системы на оказываемые на нее воздействия.

Положения,выносимые на защиту.

1.Способность иммунной системы реагировать соответствующим антигенной ,нагру31 сочетанным изменением характеристик образующих ее разнообразных клеточных популяц - особое свойство последней.Такая способность лимитирована состоянием проце сов,обеспечивающих активацию клеток иммунной системы сигналами в ней циркулирующим

2.При отождествлении иммунной системы с подвижной многозвенной структурой,измен ющен при воздействии хотя бы на одно звено свою конфигурацию (мобилем),состоян процессов,обеспечивающих активацию лимфошшых популяций (звеньев мобиля).равноцен такой характеристики мобиля,как его подвижность,

3.Состояние процессов,ассоциированных с активацией лимфоцитов человека,можно те тировать с использованием набора иммунотропньк пептидов (такгь&ина.миелопида, р-\ терферона,циклоспорина А) на модели цАМФ-зависимой регуляции -уровня экспресс Рс-рецептора в популяции активированных Т-лимфоцитов.

4.При заболеваниях человека изменения в иммунной системе,затрагивающие прош сы,обеспечивающие активацию иммунокомпетентных клетоу,приводят к появлению у дани обследуемого аномальных конфигураций мобиля,где сочетаются различным образом и-1; ценные показатели,использованные для оценки иммунного статуса.

5.Для успешной коррекции нарушений иммунной системы иммуномодулируюшими средства-и неоходнмо учитывать состояние процессов.обеспечивающих активацию лимфоцитов,как актор,определяющий характер ее реакции на сигнал,т.е. саму возможность перемещения

данного больного составляющих мобиль субпопуляций и достижения >гм "нормальной" онфигурашти. .

Научная новизна.

Сформулировано новое научное направление, заключающееся в исследовании проиес-ов,обеспечивающих активацию клеток иммунной системы человека и способов воздействия а такие процессы, как на особую характеристику функциональной полноценности иммун-чй системы.

Предложена экспериментальная модель цАМФ-зависимой регуляции уровня зкспреесин 1-рец^птор.1 в субпопу1.яшш Т-лимфошпов,позволяющая, используя набор иммунотропных 'ппшсв (тактнвин.мпелопид.^-интерферон,циклоспорин Л) в качестве аналогов присутс-зуюших в иммхинои системе активаторов лимфоцитов, контролировать состояние таких :>')не( сои >' человека

На основании \г тан.>вленном взаимосязи между состоянием обеспечивающих активацию х-иессов и характером трансляции лимфоцитами сигналов.регулирующих функциональную с: ипмость. предложен ноши принцип коррекции нарушений иммунной системы,предполагаю-|й дьч'хэтапнос1Ь воздействий на н^е: предварительная формакологическая нормализация л)ирсс '»в,лес оиипровлнних с активацией лимфоцитов на первом чале,;! затем назначение м> номолулирушдих ередс тв.

Получены данные о возможности использования метилхч.знтинов и гактивина в иммуно->рригнр>ютей терапии различных клинических форм красной волчанки.

' Практическая значимость.

Предложено решение проблемы,связанной с методическими сложностями исследования в лоннях лаборатории клинической иммунологии состояния процессов,ассоциированных с тиваиией лимфоцитов у человека.Разработанный метод тестирования Л1Гмфоцитов с не-льчпвлнием в клчостре "зинппУ набора нз нескольких кммуипт ропных пептидов позво-рт в частности ограничиваться при анализе небольшими объемами крови (10-15 мл).

Характеристики предлагаемой модели.описывающей существующую для популяции нор-льных Т—ли'чф 1Ш1 Г''» ;з.Ч!Чо.-в,< • м.-я?л> -.идунированными сигналом изменениями внутркк-

леточного содержания цАМФ и уровня экспрессии Fc-рецептора (t.h,Л),могут быть использованы как эталонные при диагностике состояния процессов, ассоциированных с активацией, в патологии.

Разработана конкретная схема применения тактивина и метилксантинов в терашш красной волчанки,основывающаяся на представлениях об иммуномодуляторе как сигнале, способном придать мобилю нужную конфигурацию только при определенных условиях,зависящих от свойств самого мобнля в момент воздействия.

Внедрение в практику.

Результаты работы внедрены в практику кафедры иммунологии 2 МОЛГМИ им.Н.И.Пирого-ва,кафедры кожных болезней ММА им. И.М.Сеченова,института проктологии АМН СССР.лаборатории иммунологии киргизского НИИ кардиологии.

Разработаны и защищены авторскими свидетельствами два устройства.предназначенных для оценки опосредованными растворимыми сигналами взаимодействий клеток иммунной системы друг с другом и с нелимфоидными клетками (N 1498463 .положительное решение S 4265803/18 от 29.11.88),а также способ оценки действия иммуномоц}ляторпн (положительное решение N 4266232/14 от 28.06.88),способ изучения нммунирегуляторноП активности лимфоцитов (положительное решение N 4289279/14 от 12.12.88).способ количественной оценки нарушений интенсивности пролиферации лимфоцитов (положительное решение N 22714 от 27.6.88),способ дифференциальной диагностики неспеиифическпго л^веннип колита и бактериальной дизентерии (положительное решение N 1168206 <>т 25. 12 8г>).

Работа выполнена в рамках Государственной программы 06907 "Разработать п внедрить в практику методы и средства диагностики и коррекции нарушений внутренней среды организма".

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы иммунологии", Алма-Ата, 1981, на научной конференции "Современные методы иммунотерапии" .Ташкент, 1984, на Всесоюзной конференции "Профилактика,диагностика и лечение ау тоиммунйых заболеваний и вторичных иммунодефнцитов".Новосибирск.1983,на IY и Y Всероссийских школах специалистов-иммунологов,Пермь,1986,Ростов на Дону,1988,на e*ei од них "Научных чтениях" во 2 МОЛГМИ им.Н.И.Пирогова.Москва, 1988,на заседаниях секшп "Клиническая иммунология" Всесоюзного научного общества иммунологов.Москва.1988,198'

Публикации

По теме диссертации опубликовано 32 работы.получено 6 авторских свидетельств на изобретения.

Объем и структура диссертации.

Диссертация состоит из вредения.З глав.заключения, выводов и изложена на 331 странице машинописи.Работа иллюстрирована 46 таблицами и 60 рисунками.Библиографи-<есхий указатель включает 462 источника.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Объектами исследования служили лейкоциты , мононуклеарные клетки крови,популяция '-лимфоцитов,выделяемая позитивной селекцией розеткообразутощей фракции,субпопуляция ктивированных Т-лимфоцитов,образующих термостабильные розетки, лимфоциты слизистой болочки кишечника.

Получения субпопуляции активированных,образующих термостабильные розетки Т-лимфо-итов осуществляли в два этапа. На первом 20 млн мононуклеарных клеток, помещенных в ластиковый флакон с 20 мл среды 199 с эмбриональной телячьей сывороткой (5%), куль-ивировали часов с конканавали«ом А (2 мкг/мл)Л.е. на этом э-апе лимфоцитам

5г«спечивали возможность полноценной дктиваиии в присутствии на копящихся среди моно-^клеаров крови акиессоркдх клегок. На втором :>тап^< методом позитивной селекции вы-?ляли термостабильные рочетки из популяции активированных Т-лимфоцитов. В норме вы-т субфракшш активированных* образующих термоотабилъные розетки Т-лимфоцитов сос-1впл + 10% от всех активированных Т-клеток, а ее чистота - 87 + 12%.

Клеточную взвесь из биоптатов кишечника получали по собственной методике,обраба-тая кусочки ткани 30 мин 0,25% раствором трипсина и размельчая ее сшшконированны-г шприцами с иглами разного диаметра.

Методы иммунологического исследования.

Стлндчргнып комплекс методов исследования иммунной системы был направлен на изу-ние количества и фенотипа лимфоцитов.их способности продуцировать иммуноглобулины растворимые медиаторы,оценку активности 1Гммунорегуляторных и эффекторных субпопу-цич,опенку пролиферативной активности и самого процесса активации к пролифера-и.Он включал:а) непрямую иммунофлуоресценцик» с использованием моноклональных анти-

-ХОтел против антигенов поверхности лимфоцитов и реакцию розеткообразования с эритроцитами барана и эритроцитами»сенсибилизированными кроличьим » б) иммуноферментньп анализ количества и 1ёМ в супернатантах 96-часовых культур интактных и стимулированных PWM (2мкг/мл) лимфоцитов; в) прямой и непрямой капиллярный тест угнетенш миграции лейкоцитов; в последнем случае заполненные исследуемыми лейкоцитами капилляры помешали в камеры,в которые в качестве источника фактора,угнетающего миграшд лейкоцитов (ФУМЛ) вносили надосадочные жидкости,полученные при культивировании в те чение 18 часов 3-4 млн стимулированных ФГА (2 мкг/мл) лимфоцитов; г) тест угнетени. индуцированной ФГА (10 мкг/мл) пролиферашш лимфоцитов- мишеней иммунорегуляторным клетками.появление которых вызывали обработкой исследуемой популяции конканавалино: А (30 мкг/мл,72 часа); д)тест на определение естественной киллерной активности моно нуклеаров крови в отношении меченой изотопом уридина суспензионной культуры миело«" ластов человека (Рыкова и др.,1981) и антителозависимой цитотоксичности для покрыты IgG эритроцитов барана (Зимин и соавт..1983);реакцию бластной трансформации стимули рованных ФГА.конканавалином а,ру*М лимфоцитов,оцениваемую по величине"включения мече ного предшественника синтеза ЛНК(тимидина) в культуры сгимулиронянных клеток.

Особыми характеристиками процесса активашш лимфошггов к пролиферашш с ну жили ш показателя -т.н. "скорость выхода лимфоцитов в пролиферашш " (&) , п "интенсивнее! пролиферации" (р). Показатель Л , оценивающий,как сильно изменился уровень иро/шф* ращщ в культуре со 2 на 3 сутки после митогенной стимуляции, определяли как угс наклона (в градусах) к оси абсцисс кривой "время активации-.эффект" на ее \частхе<•< ответствукмцем увеличению времени активации «»т ¿8 до 72 часов.Показатель ^ ипред^л* ли как угол наклона (в градусах) к оси абсииес участка к рил он ''до «а млтиген<»-эффек-между двумя соседними дозами стимулятора.Мы предложили использовать для измерения три интервала доз конканавалина А,включающие суомнтогенные,промежуточные и миюг ей ные его концентрации (авт.свидетельство N 47919Г»0/14 ог 27. 4. 88) . Величина оцени г-.. ет прирост пролиферашш на единицу дозы митогена.По нашим данным характер из-н-п ния ^ с увеличением силы стимула к пролиферашш (крииая "прирост дозы мпто! ..'на-пр росту}) может резко отклоняться от нормального при заболеваниях, при которые актив ция лимфоцитов нарушена.

Концентрации сывороточных ¡яму но глобулин оь измеряли .методом радиальной иммун-' пи

Фузии в агаре с использованием моноспепифических антисывороток,выпускаемых НИИЭиМ (г.Горький).

Выделение из крови сывороточного тимического фактора осуществляли по методу Бах и соавт. (Bach et.al. ,1976).тестируя затем исследуемые образны по их способности восстанавливать чувствительность розеткообразукюшх клеток селезенки мышей к ингибируюше-му действию азатиаприна.

Для опенки опосредованных растворимыми факторами клеточных взаимодействии нами было предложено защищенное двумя авторскими свидетельствами устройство,представляющее собой тефлоновую камеру для культивирования клеток. Взаимодействующие клеточные чоп>ляпин'помещают на полупроницаемы«? мембраны камеры одну над другой так,что их разделяет только тонкий слой питательной среды. По окончании срока культивирования троизводят регистрацию roil или иной функциональной активности лимфоидных популя-шй. растущих на каждой из мембран.

Модель для исследования процессов восприятия и трансляции регулирующих сигналов лимфоцитами человека.

Предлагаемая модель основывается на утверждении,чго в более или менее гомогенной легочной т»пуляшш возникновение индуцируемых сигналом сдвигов во внутриклеточном ^держании цАЧФ отражает функционирование одного из звеньев (представленного семейс-вом молекул-посредников) механизма трансмембранной передачи активирующих сигналов [■не.!) и маркирует т.о. этап его восприятия клетками.Регистрация же отклонения от •м>лного уровня любой доетаючно легко измеряемой характеристики функциональной ак-jbhocth популяции маркирует релли зашдо ("трансляцию) сигнала.

В качестве воспринимающих и транслирующих сигнал клеток были использованы две по-•ляпин - покоящиеся Т-лимфоциты и образующая т^рмостабильные розетки субфракция актированных митогеном Т-лимфоцитон.

Покоящиеся Г-лимфотшты (300 тыс. в 0.5 мл (?реды 199) прогревали в водяной бане •Г?7 ^.10 мин).л затем добавляли к him минимальный объем какого-либо препарата (сиг-л) или буфера.Мереч 5 мин ннк'чмиин при +"i7 С из опытных и контрольных проб . отбили 0,02 мл ктоiочн<>й рчр^си.необходимой для определения числа Т^-клеток.Оставшиеся еткн погружлли г* жидким азот.а затем размораживали , кипятили 5 мин в водяной бане гол овили !!{'• >би для рлдноичмун< логичгч кого определения годержания цАМФ с помбщыо

наборов фирмы Amersham (Англия)

Активированные Т-лимфощпы делили на порции 1,2,3.Клетки порции 1 сразу же метили ЗН—гимидином для определения уровня пролиферации,свойственного исследуемой папуляцга на 2 после активации сутки.К порции 2 добавляли препарат (буфер),культивировали еще 24 часа и регистрировали уровень пролиферации,достигаемый получившими и не получившими сигнал клетками к третьим после активации суткам.К 3-ей порции клеток (50С тыс.в пробе) добавляли препарат (буфер) и отбирали пробы для определения числ;

клеток и внутриклеточного содержания цАМФ-через 30 мин и через 24 часа после добавления сигнала (буфера).Г.е. параметры восприятия сигнала и его трансляции,прояв ляицейся в изменении числа Т-клеток и уровня индуцированной митогеном пролифера ции,Mi регистрировали в динамике - через -30 мин и через 24 часа после поступлени сигнала в субпопуляции активированных Т-клеток.

Очевидно,что расцениваемый нами как свидетельство реакции клетки на сигнал сдви величины какого-либо показателя,определяемый по разности его уровней без воздействи стимула и в его присутствии,может возникать и из-за "ошибки измерения" самого пока зателя.Каждый показатель,которым 'мы,оперировали в;работе,представлял собой средне из трех параллельных измерений.Полагая.что среднее значенне эквивалентно "истинном) уровню данного показателя в пробе,мы рассчитывали свойственную нашим эксперименте "ошибку измерения" (J>) пролиферации,экспрессии,содержания циклических нуклеотицов г

формуле:

X—х —

—1D0 (формула 1),где X - средний из трех измерений "истинный" уровень m

казателя

х - уровень ^показателя в одном из трех паралле: - , ных измерений

"Зондами" для исследования обеспечивающих активацию лимфоцитов процессов служи, вещества,имеющие аналогов среди реально существующих в иммунной системе сигнальк молекул: синтетический аналог гормонов мозгового слоя надпочечников изопротер нолiпредставитель семейства биологически активных низкомолекулярных факторов тиму тактивин,костномозговой медиатор миелопид (Михайлова и др.,1971,Петров др.,1984),продуцируемой фибробластами интерферон»циклоспорин А, первоначально ог гатпмй как грибковый метаболит с активностью антибиотика.Последние четыре препара

чожно объединить в группу иммунотропных пептидов.Молекулярная масса выделяемого из гимуса телят тактивина 1,5-6 кДа (Арион,1982,1983).Миелопнд.получаемой из суперна-гантов 20-часовых культур костного мозга свиней,имеет молекулярную массу 1-3 кДа. у0-интерферон, поставляемый японской фирмой Торей под названием "Ферон",представляет ;обой гликопротеин из 166 аминокислот с молекулярной массой 22 кДа , выделенный из 1адосадочных жидкостей монослойных культур нормальных фибробластов человека,стимулированных индукторами интерферона.Молекулярная масса циклоспорина,нейтрального цикли-1еского пептида из 11 аминокислот,равна 1,2 кДа.

Характеристика групп обследованных. Основные группы образовали: 1)120 здоровых лиц (иммунологическая норма);2) 63 Зольных системной красной волчанкой (СКВ),у которых обнаруживается сложный комплекс разнообразных отклонений от нормы показателей,оценивающих иммунный статус; 3) 105 зольных с неспецифическими воспалительными заболеваниями кишечника НВЗКЬвключаюпш-т неспецифический язвенный колит (НЯК) и болезнь Крона(БК). Патологический процесс г них захватывает большую или меньшую часть одного из периферических звеньев иммун-той системы - лимфондную ткань,ассоциированную с кишечником.При иммунологическом анализе крови обнаруживается ряд отклонений от нормы;4) 81 больной с - хроническим энтеритом, сопровождавшимся у 58 человек развитием синдрома малабсорбции.Тяжелая эндогенная белковая недостаточность - фактор риска развития иммунодефицита;5) 18 больных >строй пневмонией и 8 больных дизентерией.Факторы риска развития иммунодефицита-ги-юксия,интоксикация и.возможно,появление молекул,поступающих в кровь из-за нарушений шмфоэпителиалъного барьера легких и кишечника. Прочие группы образовали больные дис-

J

:о1щной красной волчанкой,псориазом,лучевой болезнью,ишемической болезнью серд-1а.пациенты с острыми деструктивными процессами в брюшной полости,с опухолями яични-:а,а также дети в возрасте от 1,5 до 10 лет с диагнозом тймомегалии и дети в возрас-■е от 5 до 13 лет с первичным иммунодефицитом - синдромом Луи Бар. '

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУННОГО СТАТУСА БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ И НЕСПЕЦИФИЧЕСКИМИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ КИШЕЧНИКА I АНАЛИЗ С ТОЧКИ ЗРЕНИЯ КОНЦЕШЩИ "МОБИЛЕЙ".

Стандартный комплекс методов исследования иммунного статуса обнаруживает ряд ха-

рактерных для больных СКВ черт,проявляющихся при анализе по средним тенденциям: 1)нарушение процессов активации лимфоцитов к пролиферации,при котором достижение нормальной амплитуда пролиферативного ответа возможно только при использовании для стимуляции лимфоцитов сигналов определенной силы (30 мкг/мл конканавалина А и 10 мкг/мл ФГА) ,в то время как ответ на более слабые стимулы (2,5,10 мкг/мл конканавали-на) не достигает нормальных показателей; 2)гиперсупресеорная активность лимфоцитов по отношению к пролиферации нормальных лимфоцитов. (рис. 2 ). При использовании как объект иммунорегуляции пролиферируюпшх лимфоцитов больных иммунорегулятирные клетки пациентов с волчанкой,также как и нормальные лимфоциты,сменяли характер оказываемого ими эффекта и оказывали преимущественно активирующее пролиферацию действие;3) снижение титров сывороточного тимического фактора,обнаруживаемое в 77% случаев; 4) вариа-

рис.2 ИммУноРЕгуляторная активность лимФоЦытоб больных СКВ 6 отношении пролифЕРиРуюЩих нормальных лимфоцитов (а> и лимфоцитов больных СКВ <6).

инЭЕКс СУПРЕССии

% 1

ю -

инЗекс

СУПРЕССии

% -

10 -10

инЭекс актибаЦыи

т

в

-б-

-4-

Чг

А В С

нормальные лимфоциты +

иММУНОРСГУЛЧТОРНЫЕ

клетки больных СКВ

иММУНОРЕГ'УЛЯТОРНЫС клетки оЗоробых

иммунорсгуляторнис клеткы больных ДКВ

лимфоциты больных СКВ +

Б

иММУНОРЕПУЛЯТОрНЫГ КЛЕТКи больных СКВ

иММУНОРЕГУЛЯТОРНЫЕ клетки здоробых

бельность показателей,использованных для оценки иммунного статуса (число лимфоцитов ,Т,Т^,. ЕАС-клеток,содержание в сыворотке 1£А,1еМ,1цС, иммунных комплексов) ,с'п>пь широкую,что размах их внутригрупповых колебантш превышал Интерпол нормальных знлчг-

тай,т.е. внутри группы могли обнаруживаться как пациенты "нормальные" по данному тризнаку.так н те,у которых он был снижен или повывен.

Для иммунного статуса больных с НВЗК характерны« (по даниьм исследования крови) iBiurocb следующее: 1)нарушеиие активации лимфоцитов к пролиферации,проявляющееся только при достижении активирующего сигнала определенной ста».Так достоверное снижете "скорости выхода в пролиферацию" (см. матер.в метода) и амплитуды пролифератив-юго ответа зарегистрировано при использовании конканавалина А в дозе 10 мкг/мл и не >бнаруживалось при меньших дочах.Отклонение от норш "интенсивности пролиферации"' акже проявлялось при изменении дозы лектина от 5 до 10 мкг/мл,от 2 до 5 мкг/мл и ■тсутствовало в интервале 0-2 мкг/мл; 2) снижение активности естественных киллеров, тчетливо видное на участке цитотоксической кривой,где на 10 тыс. мишеней ..рнходнтся т 62,5 до 500 тыс. эффекторов и несколько нивелирующееся при дальнейшем увеличении того соотношения.Обнаруженный дефект не носит специфический характер,т.к. сравнение результатами,полученными при дезентерин и хроническом колите,убеждают,что заболе-аниям с поражением толстой кишки свойственен широкий спектр разнообразных изменений ктиности эффекторных субпопуляций; 3) отсутствие резких отличий от нормы по ряду редних показателей при наличии широкой вариабельности их значений внутри группы.Те редние Характеристики,которые достоверно отличались от средней нормь: (количество ямфоцитов.Т и ЕАС-клеток,концентрация IgGJ.ne выходили тем не менее за границы ин-грвала.образованного верхней и нижней границей норм*.

Воспользовавшись существованием градаций у такого признака,как относительное со-»ржание лимфоиитов.ш выделили подгруппу больных НЯК (17S обследованных),у которых о величина была снижена и не превышала 20%.Лишь эта подгруппа-проявила отчетливую шомальность" иммунного статуса,поскольку в ней лимфопения (1159+279 лим.в мм^) со-■тапась с высоким содержанием IgA (2,97+0,5 г/л) и дефицитом Т-клеток (534+97 в

Изменения на уровне ллмфоидной ткани,ассоциированной с кижкой,проявлялись при ;ЗК в накоплении лимфопитов на всем ее протяжении: в пораженном участке в большей епени (245+12 лим. на ед.плоц.),в визуально "нормальном" участке в меньшей степени 8+1 лпм. на ед.площ.).Накопление лимфоцитов не сопровождалось изменением по срав-нию с кровью соотношения Т и ЕАС-субпопуляций и не сказывалось супественшм обра-

зом на величине циркулирующего пула лимфоцитов.

Попытка применения математического аппарата дискриминантного анализа с целью пс) лучения диагностического правила для различения на основании иммунологического ана лиза крови больных НВЗК степени лкмфоцитарной инфильтрации их кишечника и тяжест клинического течения заболевания,оказалась неэффективной.В анализ были включены еле дуэдие ■измеряемое в крова показатели:абсолютное содержание лейкоцитов,лимфоцитов,мо ноцитов,нулевых клеток,относительные уровни лимфоцитов,Т и ЕАС-клеток, концентрат 1еА,М,С .

Описывая результаты исследования состояния иммунной системы при СКВ и НВЗК,|» сознательно придерживались подхода к оценке иммунного статуса ,принятого в настояще время и заключающегося в детализации состояния по возможности большего числа попуж ций и субпопуляций клеток иммунной системы .При таком подходе наши экспериментальнь данные,также как г любые другие,-небольшая капля в громадном и,по-видимому, оескс нечном море информации,когда каждое последующее исследование с применением новых м< тодов юга использующее в качестве объекта исследования малоизученную до того клето> ную популяцию и пр. лишь расширит его берега.

Для разрешения проблема оценки иммунного статуса более плодотворным является пол ход,основывающийся на предложенной академиком Р.В. Петровым концепции "мобиле) (Петров и Лебедев,1984).Согласной ей иммунную систему можно отождествить со спосо! ной изменять конфигурацию сложной, многозвенной структурой,в которой подвижные,св

заниые между собой грузы эквивалентны популяциям иммунокомпетентных клеток,взагои

А

регулирующих объем и функциональную активность друг друга.

Обобщая собственные и литературные сведения о состоянии иммунной система при С и НВЗК, №1 получили два весомых подтверждения такому взгляду на иммунную сист му.Первое вытекает из обнаруживаемого в обоих группах факта множественности дефект иммунитета, что равнозначно обнаружению аномального состояния, при котором разноо разные параметры, характеризующие иммунную систему, сдвинуты в ту или другую сторо от свои» нормальных уровней.Причем типичной для клинического иммунолога ситуаци является невозможность сложить обнаруженные у конкретного пациента множественные н руления иммунокомпетентных клеток в единую,свойственную только СКВ или НЯК,или картжну.Можно указать лишь ряд более или менее устойчивых (встречающихся порознь и

совокупности у значительной части больных) признаков.Так при ЮПС такое "отклонение ■ норны",как появление антител к эпителию толстой хишка наблюдается в 60-70Х случа-I (Carlsson е.а.,1977,Н1Ы е.а.,1982,1983).лимфодитотоксины обнаруживаются лишь в 1% случаев (Strickland е.а.,1975).По нашим данным внутри групп обследуемых обнару-ваются пациенты,у которых .какой-либо признак располагается вше или ниже нормаль->й границы,несмотря на го,что характеризующее группу среднее его значение не отли-ется от нормы.Т.е. совокупность параметров,характеризующих имммунную систему боль-го, входящего в ту или иную нозологическую группу, (его "иммунологический про-ль"),может образовывать достаточно причудливую картину,в которой,по крайней мере з использования специальных математических методов,трудно установить специфичность я какого-либо конкретного заболевания.Это индивидуальное сочетание характеризующих

рис. 5 Смена "ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ лрофилеи у больных неспе-цмфыческим яз&енным колитом

норна

(ИМП/МНН) П]

П< -УРоВень пролиферации через 48 часов

п шмпумию Пг -Уровень пролиферации пе шмп/минэ * через 72 часа

т - число т клеток

+1

1-ый анализ

2-ой аналио •J—iiuW

3-й анализ

б-ной Р

Î,

-J—I I. ! Ь. I—I ■*—^ 1

б-ной 1. i,

унную систему признаков нестабильно и меняется в течение заболевания.Схема,приве-ная на рис.3,иллюстрирует сказанное на примере нескольких больных с язвенным ко-ом.у которых "иммунологический профиль",представленный только тремя показателями

состояния яммуннов систеж.резко менялся при повторных исследованиях.проводимых примерно с недельным интервалом.Закономерность смены "иммунологических профилей" носит общий характер и отчетливо проявляется во всех группах пациентов,где возможны и? повторные обследования (рис. 4),8 также по-видимому существует и в норме (Стенина, 1979). С нашей точки зрения эту закономерность можно рассматривать как второе подтверждение правомочности описания иммунной системы как мобиля.Действительно,с точет зрения этой концепции наличие у иммунной системы такого,проявляющегося в смене "иммунологических профилей" свойства,как подвижность, вытекает из возможности быстро{ смены одного индивидуального состояния равновесия другим при воздействии хотя бы н; одного звено мобиля.

Анализируя результаты изучения влияния'тактивина на иммунную систему,мы получил;

еще одно подтверждение ее подвижности. А именно,препарат,первоначально описанный к, сигнал для созревания в дафференцировки Т-клеток,в действительности реализует св< действие на уровне сажх разнообразных звеньев мобиля:в дозе 0,01 мкг/мл ингибиру

интез 1&М покоящимися В-клетками,усиливает синтез и 186 теми клетками,акти-

аяия которых митогеном совпала с моментом введения тактивина, вызывает появление на

\

имфоцитах 4Р2 и ОК антигенов,ингибирует экспрессию на поверхности активированных

леток рецепторов для интерлейкина 2 (рис.5). Сюда можно было бы отнести сведения о

лиянии препарата на фагоцитоз микроорганизмов (Короткова,1989).естественную кил-

ерную активность (Чекнев,1988) и пр.Т.е., в терминах рассматриваемой концепции так-

ивин оказывается достаточно сильным сигналом,чтобы привести мобиль в движение.

МНОГООБРАЗИЕ ОТВЕТОВ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК НА СИГНАЛЫ,ИЗМЕНЯЮЩИЕ

ИХ ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.

а) нормальная лимфоидная популяция.

Мы провели серию эксперименгок.в которых реакцию на сигнал лимфоцитов,входящих в

эпуляцию мононуклеаров крови или в образующую термостабильные розетки субфракцию

ктивированных Т-лимфоцитов ( см. мат. и метод.)»оценивали по величине т.н. коэффи-

ленга влияния (Кв).вычисленного как отношение индуцированного сигналом сдвига ха-

актеристики лимфоидной популяции к ее исходному уровню.

Т{ — А-Бда 1ГДе д _ характеристика популяции в отсутствии сигнала в" а

Б- та же характеристика через определенное время после введения сигнала

Исключив сдвиги,не превышающие по величине "ошибку измерения" данного показателя юрмула 2.мат. и метод.).мы обнаруживаем пшроюш размах колебаний Кв,включающий как 1Ложительные»так и отрииательные значения,Т.е. на один и тот же сигнал лимфоидная »пуляиия может отреагировать как усилением,так и снижением свой функциональной ак-:вноети.На рис.6 и 7 эта закономерность проиллюстрирована для популяции активнро-нных Т-клеток,в которой изменения уровня пролиферации регистрировали через 24 часа еле введения иммунотропных пептидов ги для популяции мононуклеаров,куда тактивин одили одновременно с митогеном,а сдвиг в экспрессии ранних (4Г2,Тас) и поздних

I

Ю антигенов актиации регистрировали через 48 и 72 часа.Превышающие ."ошибку изме-ния" положительные н отрицательные значения Кв обнаруживались и в том случае,когда фок1 Iактнвина,миелопила,интерферона,циклоспорина регистрировали по изменению экс-е1 сии Ре-рецептора через 30 мин и 24 часа после введения в популяцию активирован-\ Т-клеток или при регистрации влияния тактивина на экспрессию 4F2.Tac.DR антиге-

рис.5 Влияние тактивина,вводимого в культуру мононуклеарных клеток крови,на экси рессию ранних и поздних антигенов активации лимфоцитов и на синтез ими Iп IgM.

покоя-1 I ГММ. шмки л,

i

А

4Р2

ОВ

Т«с

ЛДЬЫ! ®ШЗЗ

1,0,1,0,01

А £

X

^-коэффициент влияния на спонтанный синто:! Значения коэффшш^нта.болыци единицы,соответствуют ингибирующему эффекту препарата.

К -коэффициент усиления тактивином индуцированною чнпл сном с-ннгеза Т^.

3

1,2,3 - тактивин использован в дозах 1, 0.1, 0,01 мь.г/мл

5,6,7 - тактивин использован в дозах 3, 0,1, 0,01 мкг/чл нмсс I е с м]пог1'Н<"\1 лл.-с са

4 - для стимуляции лимфоцитов использован только лдконог

рис 6 Коэффициент влиянии на пролиферацию активированных Т-клеток тактибина (• ).миЕлопиЭа < о ), у8—ин — ТЕРФерона < о ),Циклоспорина Й < * )

юоо_:

50 -

-50 -100

-1000 -2000*

о* о

о***

Лм-ЛЛ-

ТСЗУ^Н-С-ОС,

* оо • ип* '

* о0**. °о

О и о" о а

. п _ • л _

* **

зона.соответствующая 'ошибке измЕРения" пролиферации

рис.7 ВлияниЕ тактиВина на экспрессию аитигЕНоб актнва-1 Ции на линТоЦигах.стимулированных митогЕНОМ ла — коноса ( о*® ) или ФГЯ ( °»в )

» »

нов на покоящихся лимфоцитах.

Многообразие ответов лимфоцитов на сигнал наиболее отчетливо подтверждается прп анализе в общей форме,путем построения линий регрессии,описывающих зависимость достигаемой после введения сигнала амплитуды характеризующего популяцию показателя (У) от его исходной величины (Х).В случае,если характеристикой популяции активировании} Т-клеток служит обозначенный нами как "пролиферативный потенциал" уровень пролиферации, достигаемой ею к 24 часу культивирования (Х),а У определяли как пролиферативныт ответ в той же популяции, получившей сигнал от какого-либо из иммунотропных пептидов, зависимость У от X можно было описать полиномом 1-ой степени (рис.8).Статистический анализ близости линий регрессии не обнаруживает различия линий, описывающт реакцию нормальных Т-лимфоцитов на тактивин и мнелоппц.В то же время обнаруживают^

Рис.8 Зависимость уробня пролифЕРаЦии Т-лимфоЦитоб,обработанных препаратом (У).от уробня пролиферации интактных клеток (x)

ЧеРнымы полосами обозначены области значЕний Х.г9е Зан-ный пРЕпарат оказыбаЕТ усилибаюЩЕЕ пРолифЕРаЦию Эе"ст-биЕ

достоверные различия реакций нормальных лимфоцитов на тактнвнн и от реакши

на интерферон (р?О,005;р*0,05) и на циклоспорин (р40,05;р«0,001).

Из представленных графиков следует,что в определенном интервале значений X (от

до некого критического х) эта величина всегда меньше соответствующего ей значения У,что равнозначно стимулирующему действию сигнала на клетки с данной величиной про-лиферативного потенциала.При дальнейшем увеличении X сигнал меняет стимулирующее действие на ингибируюшее»поскольку X всегда меньше У.Другими словами, исследованные иммунотропные пептиды стимулируют пролиферацию клеток с низким пролнферагнв1{ым потенциалом и ингибируют пролиферацию клеток,у которых он высок.Значения X.около которых эффект препарата меняет знак,мы назвали кригичеекгп-лг (\'кр).Для тактиыша и мие-лошща Хкр составляет 766 и 819 имп/мин,для интерферона и циклоспорина -2187 и 21 ¿»А

ИМП /МИН.

Закономерность,согласно которой один и тот же сигнал по-разному транслировался клетками с различными характеристиками,прослежена и при опенке его влияния но изменению экспрессии Iс-р^пепторл и антигенов активации,й нллоч полеченные результаты даю г основание для утверждения о неизбежности наличия у самою сигнала иммуиомодули-рущец активноеги.Подразумевающей.что.в зависимости <>г отвечающих клеток.проявится его активирующее или ингибируюшее деист вне .Только с тим} ли рун инее или югько нш ибиру-кщее слияния являются частными случаями иммуномолулнруюше! и.когда свойства мишеней таковы,что п г гнал транслируется мишенями исключительно как акгиклгор пли как нш ион-гор .

На рис.9 анализируются зависимости величины Кв 01 пропиферлшвного потенциала мо-нонуклеарных клеток.В данной сертт экспериментов гидрокортизон.циклоспорин вводили в культуры жновременно с мнтогеном.интерленкин 2 через 24 часа после обработки активированных клеток пикло.-ппрмном, £ак торы. пр<>луиируе\о,;е траж'формированными мышиными фибробла^ тами и еингецными. обработанными пнклоспориноч шгмфоцитами.поступали к мишеням череч полупроницаемые мембраны камеры лля культивирования клеток (см. мат. и метод.). Для препаратов г однонаправленным влиянием на пролиферацию.таких,как ингибиру-юшие ее гидрокортизон (10 М). циклоспорин и активирующий интерлейкин 2 .многообразие вариантов трансляшш сигнала проявлялось в том, что сача выраженность -»ффехга не была

иопоянной.а таыкела от такой характеристики отвечающих клеток,как и\ пролпфератип-

«

»и>1Й потенциал.

Изучая гран- линию сигналов нормальными лимфоцитами, мы использовали в качестве мишенгй две* г леюсние нопул-ишп :нефрампюнированные мононуклеарные клетки крови и

{•ис.'З Зависимость ветчины коэффициент«! влияния (Кв) .оказываемого различными препаратами на пролиферацию монон>клеарных клчток крови.от пролиферативного потеншмлд последних (Пп)

чаленькую субфракшпо активированных Т-лимфоцитов. Мы полагаем,что некоторой неоднородностью .возможно присушен им и обусловленной в случае мононуклеаров небольшой примесью моноцитов 4а в случае активированных Т-клеток их различием по фазе клеточного цикла,можно пренебречь и перенести результат.полученный на относительно гомогенной гшмфоидной популяции на единичную клетку.В т-аком случае признание за популяцией (или единичной клеткой) способности варьировать характер огрета на сигнал равнозначно >м-верждению.что в норме реакция звеньев мобиля на воздействия на них неоднозначна.а зависит ст их состояния в момент воздействия.

б)лимфоидные популяции больных СКВ и НВЗК,дизентерией.

Мы сравнили закономерности трансляции в норме н при нескольких заболеваниях с той ял и иной степенью нарушений иммунной системы, оценивая степень близости линии ре!-рессни,описывающих свойственный данной группе обследуемых характер связи между выбранным параметром лимфоиднои популяции (X) и амплитудой ее ответа на сигнал (У). Используя как «)б2»ект исследования активированные Т-клетки*мы обнаружили изменение таких закономерностей в патологии (рис 3 0»11).Наличие достоверных различий линий регрессии между собой позволяет утверждать, например.чго Л1гмф<»шпы больных с НВЗК не так как нормальные клетки транслируют действие тактивина,миелопцда,интерферона,циклоспорина .изменяя лролиферапгвную активность популяшш (рис 10) и не так.как нормаль-¡{ые лимфоциты реализуют действие Пелопида в изменении экспрессии Рс-рецепгор.* (рис.И).Различия в характере трансляции того или иного сигнала существуют и между сами группа пациентов с волчанкой,язвенным колитом,дизегерией.

Различия реагирования лимфоцигоп на регулирующие сигналы в норме» и патологии отчетливо проявляются и смешением критических величин X.разделяющих диапазон возможных значении какой-либо характеристики популяции на два интервала - тот,еде сигнал проявит активирующее действие и гог.гле <">н выступит как ншибигор той же характеристики.В норме критические уровни экспрессии Рс-рецептора для тактивина,мнелогщда,интерферона, циклоспорина составляли 10%,9.8% ,5%.А,4%.При НВЗК Хкр изменялись до ">. 4%. - ? , Г>% ♦ 5 ,8%, 5 ,1%, при СКВ до ]. 9%, 1. 7%, 2 ,7%, 3 ,5%,при дазен гег им до ^.2.5%,-5,АХ,0.2%.Приближение Хкр к нулю и переход в область отрицательных значены"! означает,что лимфоидные популяции больных транслируют действие данных сигналов (миелопида при НР.ЗК»интерферона и циклоспорина при дизентерии) исключительно как нн-

рис.10 Зависимость пРолифЕРаЦии лимфоцитов,обработанных препаратом <Ч> от уровня пролиферации тех же клеток 6 его отсутствии (X) у зЭоровых Зоноров С..... ),

больных НЕСПЕЦифимЕскими воспалительными заболеваниями кишЕЧНика <~~~-— )„систЕмной красной волчанкой <"-----).ЗиЗЕНТЕРиЕЫ {---)

У 1

тактивин

ИНТЕРФЕРОН

Циклоспорин в

звездочками указана 9осто5ерность отличия линии регрессии от нормальной: *р £ 0,05," р<С©,01, "* pN<0,001

Рис.11 Зависимость числа ту — клеток,обнаруживаемых 6 культуре активированных лимфоцитов через 24 часа после введения тактывина,миЕлопиЗа. у9-интерферона,Циклоспорина <Ч),от их числа,обнаРУживаЕмого в той же культуре в отсутствии препарата <Х>

тактивин

Ч" "ib ""if Циклоспорин я

__ норма__НВЗК,--СКВ, ЗизЕНТЕРия

эвезЭочками обозначена ЗостоЬеРность отличия Ээннэи линин рег-

рессии от нормальной:

Р * 0,05

0.01

***

р ё- О ОСИ

■ибиторов экспрессии.Аналогичным образом в группе больных НВЗК миелопнц и интерферон транслировались лимфоцитами только как ингибиторы пролиферации.

Подтверждения тезису о возникновении аномальных реакций клеток иммунной системы ■а регулирующие сигналы обнаруживается и при анализе собственного большого фактичес-:ого материала по исследованию иммунного статуса пациентов с разнообразными ее нару-*ениямн стандартным комплексом методов. Мы показали (рис.2), что лимфоциты больных ГКВ,не отличающиеся по уровню пролиферативной активности ог нормальных лимфоци-ов,воспринимают действие "нормальных" супрессоров аномальным образом,не снижая,а силивая пролиферацию.Сами иммунорегуляторные клетки больных на нормальные пролифе-юрующие лимфоциты оказывают гиперсупрессорное действие. Полученный результат можно объяснить, допустив, что неспособность лимфоцитов больных СКВ должным образом реагиро-1<11 ь на сигналы от собственных нммунорегуляторных клеток обуславливает возникновение иперактивности последних,проявляющейся в том случае.когда мишенями служат нормаль-ые лимфоциты.

Второй феномен,обнаруживаемый при энтероцитарной малабсорбцпи,заключается в нару-гении опосредованного лимфокинами взаимодействия лимфоцитов с гранулоцитами.

Табл.1 Угнетение миграции лейкоцитов больных с энтероцитарной малабсорбцией в 'епрямом тесте при различных сочетаниях источника ФУМЛ и клеток-мишеней

! И С ТОЧНИК ФУМ Л

лимфоциты больных

МИШЕНИ .* группы А ! группы В ! группы С

! ИМ=56,0+3,0 1 ИМ=75,6+3,7 ! ИМ=101,0+1,8

Лейкоциты б-ных группы 1 ! 92,0+4,0 ' — ! 107,0+5,0

(ИМ = 101,0 + 2,0) ! ;

Лейкоциты б-ных группы 2 ! 75,2+8,1 ! 80,6+14,3- ! 89,6+14,0

(ИМ = 74,2 + 3.0) ! !

Лейкоциты б-ных группы 3 1 64,3+5,7 ! 67,8+5,8 ! 65,4+4,0

(ИМ - 58,4 + 3,0) ! ; г

здоровых доноров величина индекса торможения миграции лейкоцитов (ИМ) колеба-ась от 50 до 65%

Твбл.1 содержит результаты экспериментов.в которых сочетали прямой и непрямой тест угнетения миграции лейкоцитов,комбинируя содержащие угнетающий миграцию фактор (#УМЛ) культуральные среды и мишени,полученные от пациентов,степень нарушения миграции у которых предварительно оценили в прямом тесте.

Культуральные среды,полученные от активированных лимфоцитов больных с выраженными по данным прямого теста нарушениями миграции (группы В и С),отчетливо ингибировали »«грацию,"нормальных" лейкоцитов больных из группы 3,у которых таких нарушений миграции не было.Амплитуда эффекта•оцененная по средней величине ИМ,не отличалась от обнаруживаемой при воздействии на те же самые мишени "нормальных" культуральных жидкостей от лимфоцитов больных с выраженным торможением миграции в прямом тесте (группа. А) .Т.е.можно говорить о неизмененной способности лимфоцитов-больных с энтеритом продуцировать ФУМЛ.

Лейкоциты больных группы 1 с тяжелыми по данным прямого теста нарушениями миграции не реагировали ее торможением на действие надосадочных жидкостей лимфоцитов больных группы А.На миграцию лейкоцитов больных группы 2 такие жидкости оказывали действие ,не отличимое по величине от действия их собственного ФУМЛ в прямом тесте. Т. е. мишени от больных с "сильным" и "умеренным" нарушением миграции в прямом тесте как бы не отвечают на заведомо активный лимфокин.Как и феномен гиперсупрессии лимфоцитов,описанный при СКВ, неспособность лейкоцитов воспринять медиатор,посьшае-шй лимфоцитами при энтероцитарной малабсорбции ,может быть рассмотрена как пример аномальных реакций клеток иммунной системы на регулирующие сигналы.Отсюда логически вытекает необходимость следующего фрагмента работы,в котором мы попытались рассмотреть состояние обеспечивающих активацию процессов,как фактора,лимитирующего характер реакции клеток иммунной системы на поступающие к ним сигналы.Выше для описания таких процессов был предложен■термин "механизм" трансмембранной передачи регулирующих сигналов (рис.1).

СОСТОЯНИЕ "МЕХАНИЗМА",ОБЕСПЕЧИВАЮЩЕГО ПЕРЕДАЧУ СИГНАЛОВ ЧЕРЕЗ МЕМБРАНУ, КАК ФАКТОР,ЛИМИТИРУЮЩИЙ ХАРАКТЕР ИХ ТРАНСЛЯЦИИ ЛИМФОЦИТАМИ, а) индуцированные сигналами колебания в содержании цАМФ как отражение функционирования "механизма" передачи сигнала.

На модели активированных Т-клеток,стимулированных им^сунотропными пептидами,обна-

рутавается закономерность в изменении содержания в клетке одного из членов семейства вторичных мессенджеров (цАМФ).Она проявляется в том,что при проведении сигнала от четырех,различных по структуре пептидов,содержание цАМФ начинает колебаться,отклоняясь в различные сроки в различном направлении от т.н. базального уровня,свойственного интактной клетке.По средним цифрам (рис.12) содержание цАМФ увеличивается относительно базального уровня через 30 мин после поступления сигнала и снижается через 2* часа.Непараметрические критерии статистики подтвердили справедливость следующих гипотез: а) базальное количество цАМФ ниже,чем через 30 мин после введения миелопида (р ¿0,01).интерферона (р^О,05) и вьете,чем через 24 часа после введения миелопида (р^ 0,05) и циклоспорина (р<0,05); б) миелопид,интерферон,циклоспорин вызывают снижение внутриклеточного содержания дАМ-Ф через 24 часа после воздействия по сравнению с по-

Рис. 12 Влияние тактибина ( 1 >,миЕлопиЭа ( 2 )• ^3-ын ТЕРФЕРона ( з Циклоспорина Я < 4 > на бнутриклеточ-ное соЭЕРжание цАМФ в активированных Т—лимфоцитах зЭоРовых доноров

цАМФ ч

(пмкомоль/Ю пА

казателем,обнаруживаемым через 30 мин (р«0,05,р£0,05,р<0,05).

Для анализа обнаруженной закономерности №1 ввели три новые характеристики (рис.12): 1) отрезок времени ((),соответствующий моменту пересечения кривых,описыиа-

пцих изменение базального содержания цАМФ и содержания цАМФ в тех же клетках,активированных сигналом; 2) уровень цАМФ (h) в момент,когда кривые изменения содержания

цАМФ в интактной и активированной клетке пересекаются; 3) отклонение (й) внутртсле-

30

точного содержания цАМФ от базального уровня через 30 мин (Л) и 24 часа после воз-2*

действия (А).

Мы показали следушпее: а)амплитуда смещения содержания цАМФ через 30 мин и через 24 часа после воздействия взаимосвязаны (г=-0,71,р 0,005).Чем больше абсолютная величина смешения от базального уровня через 30 мин,тем больше направленное в другую сторону отклонение от него через 24 часа (г=0,41,р 0,05); 6) величина индуцируемого сигналом отклонения содержания пАМФ от базального уровня зависит от величины h,Коэф-фициент корреляции h с Д ,а также со средним за сутки отклонением ( ^ ) был равен 0,8 (ptO,0005),0,638 (р^0,0025),06675 (рб 0,0005).Аналогичный феномен наличия сильной .связи (г=-0,547,р <х0,0005) отклонения содержания цАМФ от базального,регистрируемого через 5 мин после воздействия уровня (А) и величины базального содержания ЦАМФ (L) обнаружен и для покоящихся Т-лимфоцитов. В этом случае зависимость от L можно описать полиномом 1-ой степени:

5

Д = 1161 - 0,465 1

Анализ графика этой зависимости указывает на существование критических значений L: сигнал увеличивает содержание цАМФ в клетках,где базальное содержание иА№ меньше критического и снижает в клетка* с высокими значениями L.

Мы обобщили фактические данные о вызываемом сигналом колебании содержания г,AM* в лимфоцитах,использовав аналогию с неравноплечими весами (рис.13).Высота опоры у ню соответствует h и лимитирует размах колебания корошсла (А),а соотношение длин плеч зависит от величины t. Содержание цАМФ до поступления сигнала определяется положение.1* корошсла весов.Выход весов из состояния равновесия проявляется отклонением коромысла в ту или иную сторону от положения,свойственного интактной клетке.То,в какую сторону качнется коромлсло,зависит от его исходного положения:если коро»1сло указывает, что количество цАМФ в клетке ниже критического,клетка отреагирует на сигнал увеличением этого показателя,если выше - снижением.Очевидно,что существует такие положения коромысла,в котором сигнал не выводит весы из равновесия.

Еыво обнаружено, что смешение корошсла весов, оцененное с помощью вычисленное

-'31 -

лиф Рс '

рнведенным ниже способом показателя V , коррелирует с величиной V, оценивающей про-

?ходящие в той же популяции изменения уровня экспрессии Рс-рецептора (р40,05). ■ А -В

У=——.где А п В -уровни измеряемых показателей через 30 мин п -24 часа после воздействия

(рис. 13 Гипотетическая схема регуляции колкчЕСтба Т^ лим— ФоЦытоб 6 культурах актибиробамных Т-клсток через коле— баниЕ содержания 6 них цЯМФ

цЛМФ 6

(пикомоль/Ю С1>

I

I

Следует отметить свойственный нормальной популяции Т-клеток широкий размах коле-пш обоих показателей.захватывающий как область огрилательных так и положительных тений н указывающий на неодназначность эффекта самого сигнала.

Из факта наличия взаимосвязанных колебаний уровня экспрессии Гс-рецептора и внут-слеточного содержаний цАМФ следует.что схему на рис.13' можно дополнить жестко >епленной с коромыслом стрелкой.Колебания стрелки, зависимые от размаха колебаний >омьюла (от интенсивности вызванных сигналом изменений в содержашш цАМФ),опреде-|Г интенсивность сдвигов в экспрессии Гс-рецептора,т.е. характер трансляции сигна-

0 - ' . 24

^ шкала измерения скорости

ИЗМЕНЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ

о) сравнение нормы с патологией гформулированные представления о цАНФ-зависимой регуляции экспрессии Гс-репептора

мы использовали для сравнения с нормой состояние обеспечивающих трансляцию сигналов процессов при СКВ,НВЗК,дизентерией,пневмонией.Был выявлен ряд нарушений .проявляющихся в рамках нашей модели (табл.2),как :а) смещение точки опоры весов (изменение t).достоверное при СКВ; б) изменение высоты опоры весов.прявляющееся увеличением h при НВЗК а пневмонии и снижением при СКВ; в)нарушение способности весов колебать« (снижение Л ), отчетливо выраженное при СКВ и дизентерии; г)изменение характера связг

между процессом колебания содержания цАМФ и интенсивностью изменения экспрессии.Та(

ЛИР ГС

прг. СКВ коэффициент корреляция V и V' достоверно отличался от нормального (j О,01),а сама корреляция была отрицательной.Т.е.при увеличении размаха колебания ко-робела весов скорость изменения экспрессии не возрастала,а .в отличии от нормы,падала. При НВЗК и дизентерии достоверной корреляции этих-показателей вообще не обнаруживалось. В рамках предлагаемой модели это означает,что дефект одного из звеньев "механизма" проведения сигнала приводит к возникновению аномалий его трансляции.

табл.2 Состояния "механизма",обеспечивающего трансляцию сигнала,в лимфоцита: больных с различными расстройствами иммунной системы.

ГРУППА ! t 1 h ! 30 Д l 2<ь Д ! зо гч д + А 2 V

! (час) 1 (пшсомоль/10 лимф. ) ,

НОРМА ! 21,0+4,3 ! 12,0+2,5 ! 15,6+8,6 1 9,7+5,9 ! 10,7+5,4

НВЗК 1 16,6+9,6 ! 19,5+3,8*** I 9,1+2,1 1 10,0+5,3 ! 9,1+3,0

СКВ ! 6,8+10,0** ! 10,8+1,4 ! 3,6+0,7** ! 3,2+0,5* ! 3,0+0,4*

Дизентерия! 11,9+17,0 ! 8,1+1,2*** I 3,2+0,8*** ! 3,7+0,4 ! 3,2+0,6**"*

Пневмония ! И, <.+22 ! 33,6+7,0*** ! 11,4+4,0 ! ! -

В таблице указана достоверность отличия от нормы:* - р*0,05,** - р40>01,*** -0,001

Убедительное доказательство связи между возникновением аномалий трансляции сигн, лов и нарушением процессов,ее обеспечпваиаих,получено при сравнении реагирования I

активин покоящихся Т-лимфоцитов больных волчанкой со сниженным (1-я подгруппа) и ормальным (2-я подгруппа) титром сывороточного тимического фактора (СТФ).Реакция на игнал лимфоцитов больных 1-ой подгруппы,проявляющаяся в увеличении содержания цАМФ снижении уровня экспрессии в популяции Гс-рецептора (рис.14),была диаметрально ■ротивоположна той,которую дают лимфоциты больных 2-ой подгруппы и здоровых доноров.

Грис.14 Восприятие и трансляция сигнала от тактибина Т— I лимфоцитами больных волчанкой.Различающихся по уровню 1 соЭЕРжаЩЕгося 6 крови сывороточного тимического фактоРа 6

пикомо|1ь/ш ,1 -

I

10-

ЫЗМЕНЕНиЕ > X

' Больные с нормальным < □ ) и сниженным < О ) соЭер— жаниЕМ СТФ .зЭоробыЕ доноры ( □ )

КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ С УЧЕТОМ СОСТОЯНИЯ ПРОЦЕССОВ, ОБЕСПЕЧИВАЮЩИХ ЕЕ ПОДВИЖНОСТЬ. Результаты предыдущего раздела работы подводят экспериментальный фундамент под сновной ее тезис, утверждаюшт! роль "механизма",от которого зависит,как лимфоцит от-етит на поступивший сигнал.как фактора,определяющего то индивидуальное (тля доно-а.пля группы обследуемых) соотношение показателей состояния иммунной системы,изме-яемое в данный момент.В терминах концепции мобилен "механизм" реализации клетками чмуннои системы циркулирующих между ними сигналов определяет характер возникающего мобнле равновесия.С этих позиций обнаруживается новое решение проблем иммуноКор-

цйМФ ¿1

-НЛЕТКи

10-

РЕЯКЦИЯ.НЯ тяктивин: Г» —клеток

1 50:

а

о изменение ЦЯМФ

X

- 34 . 1 _

рекшш : воздействия иммуномодуляторов на иммунную систему будут приводить к возник новешпо нормальных состояний равновесия .только в том случае,если иммунная систем подвижна.т.е. сами звенья мобиля ( лцмфоидшые популяции) способны реагировать н воздействия нормальным-образом,В противном случае необходима предварительная медика ментозная коррекция такой способности с помощью препаратов,способных вмешиваться работу изображенного на рис.1 'механизма". ' "

При волчанке аномальные реакции Т-Лимфоинтов на такой имчуномодулятор как гакти вшг обнаруживались на фо^е сниженною содержания в Т-клетках иАМФ (рие.14).а их на лпчие было ассоциировано с дефицитом в крови больных СТФ.Т.е, дефект "механизма" пе редачп сигналов мог возникать.как следствие недостаточной зрелости лимфоцитов.Эт обстоятельство явилось одним из аргументов в-пользу применения при волчанке в качестве нормализующих процессы активации средств метилксантинов.Известно,что зтн препа раты оказывают влияние на метаболизм иАМФ и обнаруживают дифференцирующий (модифици руюшш мембрану) эффект (5Ь<?1с1 е.а,1973,1978.Мирошниченко и др., 1980) .оказывают вли яние на уровне воспринимающего элемента "механнзма"перелачи '.-игнала (рис .1) ЛШлюст рацией последнего положения служат данные о способности туофиллнна изменять рецепто

ра для аленозина-(Вт ^азоц е.а7,, 1972,Маияиагс1г е.а,,-1986). '

■ - ' .

По нашим данным теофиллина (10/М). вводимый в лимфоидную популяцию в Фазу инду ции в ней иммунорегуляторной активности митогеном (рис15). отменял свойственный СК феномен гиперсупрессорной активности лимфоцитов по отношению к пролиферации нормаль ных клеток (см.рис. 2). Введение геофиплина после смешения п-чмунорегуляторных клето с лимфоцитами больных изменяло-"аномальный",активирующий пролиферацию эффект и "нормальный" супрессорный ( рис.16 ). Т.о. теофиллик нормализовал при СКВ не фект»связанный,как мы полагаем, с нарушением способности лимфоцитов больных реагпро вать на сигналы, посылаемые имчуноре гуля торными клетками. Сам по себе геофиллин.не меньшей степени чем митоген, индуцировал супрессорн>ю активность в нормальных лим фондных популяциях и пгперсупреесорную активность в..популяциях больных СКВ.

Мы апробировали метилксантины и тактивин при лечении различных клинических Фор красной волчанки. Больные СКВ со 2»-3 степенью активности процесса.у которых в к лини ко-лабораторной картине на первый план выступали аутоиммунные расстройства,требующи для своей компенсации увеличение дозы кортикостероидо^, образовали первую группу па

-5

Рис Влияние ТЕофиллина (10 М>.,ВвоЭимого 6 фазу инЗук-' Ции иммунорегуляторнои активности,на иммуноРЕгу— ляторныс к лет к и здоровых доноров ( □ ) и больных СКВ ( □

ИНЭЕКС СУПРЕССИИ

1и

А

¿1

гЬ

НОрМаЛЬНЫЕ лимфоциты +

иммунорегуляторные клетки.инЭУЦированныЕ

(1) ТЕОфИЛЛИНОМ

(2) конканабалином Я (3> конканабалином Я

С ТЕОфиЛЛИНОМ

МНЭЕКС СУПРЕССИИ

10

индекс актмбаЦии-

¥

лЙ

¥

лимфоциты больных СКВ

ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫЕ клЕТки.инвУЦиробанныЕ

(1) ТЕОфиЛЛИНОМ

(2) конканабалином Я

(3) конканабалином Я

с ТЕОфиЛЛИНОМ 1

г

1

1

1

Рис. Н> Влияние тсофиллина (1СГ^М),66о8имого после смешения мммунорегуляторннх клеток с к ЛЕтками—мишенями, на ПРОЛИфЕРаЦИЮ лимфоцитов зЭоОобых Эонороб ( □ ) и лим-фоцитоб больных волчанкой ( □ )

инЭекс супрессии X

:п -н

инЗекс активации

и

1 6ез тЕофиллина

2 б присутствии тЕофиллина

тентов.Больные этой группы получали на фоне существующей дозы гормона или при максимально возможном ее снижении метилксантины (2,4% эуфшшан-5,0-7,0-10,0-10,0,10, мл,в/в.ежедневно,теофиллин в свечах по по 0,2 10 дней).Результатом такой терапии явилось, достоверное снижение титра антинуклеарного фактора (рис.17),что можно расценить как признак подавления активности аутоиммунного процесса.

В небольшой подгруппе пациентов,леченных метилксантинами, исследование содержания в крови на протяжении лечения ^-клеток показало, что этот показатель возрастал от 9+3%, до 40+15%.

"Puc.17 Динамика лабораторных покаэатЕЛЕЙ больных СКВ 6 процессе лечения мЕтмлксантинамы

: Уп

' * X 1

ао

Т-л X

10

Т-л (тыс/мкл)

0.1

In титра антинукл. 9—Ра

-норма

нижняя

гранима

нормы

нижняя

граница

нормы

в-

больных лечили: мЕтилксантинами 6 сочетании с гормонами ( Д)

только гормонами ( □>

Я — 30 ЛЕЧЕНиЯ В — ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ

r-ir- r-i-|

а в

По средним цифрам относительное и абсолютное содержание Т-клеток в крови .больных не менялось.Однако,при анализе индивидуальных показателей обнаружено,что у части пациентов -снизилось число Т-лимфоцитов.Для нормализации этой компоненты "иммунологического профиля" больные получали тактивин (1,0,п/к,в 1,3,6,12,19 дни iura 5 дне! подряд).Тактивин повышал число Т-клеток,но не влиял на титр антинуклеарного фактора , нормализации которого достигли на предьщущем этапе введением метилхсантинов.

Я

а

в

В клиническом статусе больных,леченных метилксантинами или метшжсантинами в со-гтания с тактивином,отмечено уменьшение отечного синдрома,одышки,эритемы кожи.ар-злгий.

Больные С1СВ с наличием инфекционных осложнений (гнойничковые поражения кожи.абс-?ссы,флегмоны,бронхиты,пневмонии и пр.) образовали вторую группу,В этом случае кар-гна иммунологических сдвигов могла быть однозначно интерпретирована как иммунодефи-[Т (табл. 3) .Поэтому нммунокоррнгируюине мероприятия были направлены в первую оче-дь не на подавление аутоиммунного процесса,а на активацию защиты от инфекции путем |зываемого тактнвином перемещения (активации и ингкбиэдш) различных звеньев мобнля перехода его,как было показано выше в новое состояние равновесия.Эффективность пользования тактивина по таким показаниям убедительно ^оказана на примере лечения ойной хирургической инфекции Табл.3 Иммунный статус больных подгруппы 2 (А) в сравнении с больными без инфек-онннх осложнений. (В)

!Суточ-! ! Т-лимфоциты : Иммуноглобулины !СОЭ : АНФ !

(Тта! ная

лоза { активность !---

!гормо-! ! % !тыс в икл! 1вС 18А ! 1ЕМ !мм/ ;

!на,мг ! ! 1 1 : !час !

I ¡21.4+4! 2-3 !28+4,1*!0,65+0,16!7,1+2,3*!1.3+0,3*!1.7+1 :21+3 ! 1,3+0.1! I ¡22,8+3! 2-3 ¡43+4.3 !0.84+0,13!13,6+2 12,9+0,4 !1,7+0,3¡19+5!1,5+0,2!

В таблице указана достоверность отличий подрулпы А от В:р40,05 Введение тактивнна по той же схеме,что и в предыдущей группе, способствовало ис-новешпо нммунолефицлта. не сказываясь при этом на активности аутоиммунного проса, оцениваемой по титру антпчуклеарногп фактора и величине С0Э, и оказывало кли-еский эффект (рис .18).

Третью группу образовали папненты с яискоидноГг формой красной волчанки и низким гржанием в крови 1-клеток. П^нмон^чпе тактивина в сочетании со стероидными мазями

комленсцров.шо Т-лпмфоиежпо однорременно с регрессией кожных проявлений заоолевз пия.Состояние. ремиссии сохранялось в течение всего срока наблюдения (1 год).Повтори« возникающие аномальные состояния равновесия в иммунной систем.* корригировали новым инъекциями такгпвнна.

рис.18 Динамика лабораторных показателей больных СКВ 6 процессе лечения тактиЛином

Т-лимфоЦиты •л

10-

Т—лимфоциты 3 У.

10

2 норма

•сн

О 3

1 try

i ( f ■;■ ! -i-r-r—f i 114 i itn i im i

l£C (г/Л>

норма

In титра антмнук-ЛЕарного Ф—pa 11

IgA (r/.O

2

1 — Больные СКВ с признаками иммунодефицита Эо начала ЛЕЧЕНиЯ 2 - те ЖЕ боЛЬНЫЕ после лечения 5 — КОНТРОЛЬ

выволы.

1.Анализ по величине и направленности шшуинруемих лнчфоыш.счи.ипгоышами.им-м нотропиыми пеппщами сдвнгор от уровня .еяойе|Е*енного.1ШТ.1К1ным клеткам, некоторых х рактернстик ЛИМфошШЫХ популяций (ХМЛЛИТ >JD.l Пролифератнкного огнег.1. <К< Пресс Fc-рецептора,ранних и поздних антигенов акишншш) даст основание дня [дки^ченп что нормальные лимфоциты .принадлежащие к огнск п/•.■ju-hc гомогсннмм понуля'шяч, н<о на ковы по споей способности реагировать на посгупамцпе ь ним сшилы изменением ф> Кциональнон активности.Существование таких различий объясняет наличие у ироп.ф.ю воздействующих на иммунную систему. 1гммуномояу.Ш1рук>щего действия. милл. t< 1.11ч m11 от свойств отвечающих клеток .препарат оказывав! либо сшмулирумикч'.лноо инги'»ip>uo

ействие.

2.При заболеваниях 1 сопровождающихся расстройствами иммунной системы,характер ре-квдп! лимфоцитов на регулирующие функциональную активность сигналы,может резко пзме-1ться и отклоняться от свойственного лимфоцитам здоровых доноров.Для выработки 5общенных принципов нммунокоррекции большое значение имеют полученные при системной расной волчанке и неспецифическом язвенном колите данные.свидетельствующие о воз-ожности возникновешш аномальных реакций лимфоцитов на сами препараты,используемые 1к иммуномодуляторы.

3.Предложена экспериментальная модель цАМФ-зависимой регуляции экспрессии Гс-ре-?птора в популяции активированных Т-лимфоцитов человека.Модель может быть ислользо-1на для контроля состояния процессов,ассоциированных с активацией лимфоцитов,как араметра .лимитрующего характер реакции последних на тот или иной сигнал.

4.При системной красной волчанке,неспецифических воспалительных заболеваниях ки-гчника.дизентерии состояние процессов,ассоциированных с активацией лимфоцитов нару-?но.У больных волчанкой дефицит сывороточного тимнческого фактора - одна из возмож-гх причин возникновения таких нарушений.

т.Обобщение данных анализа иммунного статуса здоровых доноров и пациентов с раз-х.бразнымн нарушениями иммунной системы позволяет отождествлять иммунную систему с югозвенной подвижной структурой (мобилен).способной при приложении нагоузки хотя о к одному звену постепенно изменять всю конфигурацию,создавая новое состояние рав-шееггя между ними.Коррекция нарушений иммунного статуса^ должна осуществляться с аетом характера "подвижности" иммунной систсмы данного пациента,г.е. наличия у лимитных популяций больного (звеньев мобиля) самой возможности реагировать на исполь-'рмые иммунотропные препараты способом-, приводящим к возникновению нормального сое— >яния равновесия.

б.Лекарственные препараты,повышающие внутриклеточное содержание цАМФ и способст-тощие дифференцирояке (модификации мембран) лимфоцитов (например.метнлксантины),мо-'Т оыть использованы при системной красной волчанке для пременикации больных с 'лыо нормализации в лимфоцитах процессов.обеспечивающих их активашш и придания мо-!лк> способности адекватно реагировать на последующее введение иммуномодуляторов,в it.rH. cnt п.ктнвпна.Мепшксантины и тактиЕмн обладают эффективное 1ыо при коррекшш

нарушений иммунного статуса у больных с различными клиническими формами красной волчанки.

7.Тактивин оказывает воздействие на самые разнообразные звенья мобиля.В экспериментальной системе он ингибирует спонтанный синтез иммуноглобулинов В-лимфоцита-ми,усиливает синтез иммуноглобулинов теми клетками.активация которых митогеном (антигеном) совпала с моментом его введения,вызывает появление на лимфоцитах 4Р2 и ПК антигенов,ингибирует экспрессию рецепторов для иитерлейкина 2 на активированных лимфоцитах. 1

Список работ по теме диссертации.

1.Комплексный анализ лимфоцитов периферической крови детей с синдромом атак-сии-телеангиоэктазии (в соавт. с 0 .К. Андреевой, В .Я. Арионом, Л. В. Ковальчуком и др.)//Материалы Всесоюзной конференции по общей и прикладной иммунологии.Москва. -1974 . -с. 12 - -

2.Г и В популяции лимфоцитов при врожденных иммунодефицита* (в соавт. с К.А.Лебедевым,Р.В.Петровым,Ю.М.Лопухиным и др.)//Вести.АМН CCCP.-1976.-N 10,с.86

3.Количественная характеристика Т и В-систем иммунитета у здоровых людей различных возрастных групп (в соавт. с К.А.Лебедевым,Р.В.Петровым,Ю.М.Лопухиным и др.)//ЖМЭиН.-1977.И 2 ,с.130 -

4.Некоторые показатели циркулирующих Т и^В-лимфоцитов у больных хроническим .здте-

/

ритом (В соавт. с А.Н.Чередеевым,Т.Р.КрымкиноЙ,0.Н.Григорьян)//Тер.архив.-1980.К 2,с.92 , ' " - '. '

5.Исследование сенсибилизации лимфоцитов к "белку молока" у больных с синдромом непереносимости молока на фоне хронического энтероколита (в соавт. с А.Н.Чередее-вым,Т.Н.Крымкшюй.О.Н.Григорьян)//Иммунология.-19В0.Ы 6,с.66

6.Исследование системы микрофагоцитов у детей с врожденными расстройствами иммунитета (в соавт. с А.Н.Чередеевым,А,З.Цховребовой,Э.К.Емельян**ик)//11ммуноло-

ГИЯ.-1981 .И 4,с.76 • ' ч '--.'../"""..' ,

' - - ' '' ?

7.Нарушение взаимодействия активированных лимфоцитов с гранулоцитами,обнаруживаемое у больных с энтероцитарной малабсорбцией в тесте угнетения миграции лейкоцитов (в соавт. с Т.Н.Крымхиной,X.А.Алихановым,А.Н.Чередеевым,О.Н.Григорьян)//Иммунология. -1981.К 5,с.61

8.Иммунодефицитное состояние при нарушениях питания (в соавт. с О.Н.Григорь-ян,Е.А.Беюл,Т.Н.Крымхиной)//"Иммунодефицитные состояния и методы их коррекции".Сборник научных трудов 2 ЮЛГМИ.-1981,с.67

9.Иммунологические аспекты гиперплазии вилочковой железы (в соавт. с М.И.Мартыно-вой,П.Д.Вагановым Л.В.Ковальчуком и др.)//Материалы конференции "Факторы естественного иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях".Челябинск.-1982,е.73

10.Содержание иммунокомпетентных клеток в крови и слизистой оболочке толстой кишки при неспецифическом язвенном колите (в соавт. с Н.Т.Ларченко.Г.Г.Автандило-вым.А.Н.Чередеевым и др.)//Советская медицина.'-1983.N 9,с.9

11.Влияние диеты с повышенной квотой белка на иммунологический статус при синдроме нарушенного всасывания С в соавт.с Е.А.Бекш.О.Н.Григорьян, Т.Н.Крымкиной)//Вопросы

у

гттан1ш-1983.Я 4,с,25

12.Значение определения уровня циклических нуклеопшов в различных популяциях пимфоцитов (в соавт. с А.Ю.Скрипник, А. В. Бнрюковьм.Ю. В .Хохловой, А.Н.Чередеевьм)//На-гериалы Всесоюзной конференции "Сорбционные методы детоксикации и иммунокоррекшш в шрурпш" .Ташкент .-1984 .с. 213

13.Привлечение математического аппарата днскримннантного анализа ты оценки ре-|ультатов исследования иммунного статуса человека (в соавт. с А.Н.Чередее-ым.Т.Н.Волховой.И.Д.ЛоранскойН/Материалы Всесоюзной конференции "Современные мето-м иммунотерапии".Ташкент.-1984,с.87

14. Нарушение системы циклических нуклеоищов у больных с расстройствами иммуноре-уляторных процессов и возможные подхода к их коррекции (в соавт. с А.В.Бирюко-ым,А.Ю.Скрипник)//Там же.-с.258

15.Новый подход к оценке естественной киллерной активности лимфоцитов человека (в оавт. с М.З. Санповым ,Л.В.Ковальчуком И.Л.Лоранскои)//Лаб.яело.-1984.N 6 ,с.553

16.Диагностика нарушений иммунитета при патологиях,локализованных на уровне перн-грических лнмфондных тканей (в соавт. с Г.А.Волковой,А.Н.Чередеевым.И.Д.Лоранс->й,Н.А.Снисарь)//Иммунология.-1984.К 6,с.48

17.Морфологическая и иммунологическая характеристика различных клинических форм ^специфического язвенного колита (в с оавт. с Г.Г.Автандиловым,Н.Т.Ларченко,И.Д.*Ло-

райской и др.)//Архив патолопш.-1984.N 10.с. 18

18.Роль системы циклических нуклеотидов в иммунорегуляторных процессах и методические подходы к ее изучению при оценке иммунного статуса человека (в соавт. с A.B. Бирюковым. А. Ю. Скрипник, А. Н. Чередеевым) / / Лаб. дело. -1985. N 1, с. 29

19.Изучение клинической эффективности Т-активина в терапии кожных форм красно! волчанки (в соавг. со Скрипкиным Ю.К..Бирюковым A.B..Скрипник А.Ю. i др.)//Вестн.дерматол. венерол.-1985.1$ 5.с.8

20.Молекулярный базис нарушений иммунорегуляшш при системной красной волчанке О соавт. с А.В.Бирюковым,А.Ю.Скрипник,Т.Н.Волковой)// Материалы всесоюзной конференци "Профилактика,диагностика и лечение аутоиммунных заболеваний и вторичных иммунодефи цитов".Новосибирск.-1985,т.1,с.75 • ~

21.Принципы иммунокоррекции больных дискошшой и системной красной волчанкой ( соавт. сЮ.К.Скрнпкиным,А.В.Бирюковым.А.П.Портновой и др.)//Там же.,с.71

22.Способы оценки результатов реакшга'бластной трансформации (в соавт. с А.А.Ш: таловой,А.Н.Чередеевым,Н.В.Мельниковым )//Ла5.дело.-1985.N' 10,с.625

23.Состояние циркулирующих в крови эффекторных субпопуляций лимфоцитов у больн! с поражением слизистой оболочки толстой кишки (в соавт. с М.З.Сащюаым.Н.Д.Лоран' кой,А.Н.^Нередеевым и др.)//Иммунология.-1986.N 2,с.56

24.Сочетание аутоиммунного и иммунодефицитного состояний у больной системн красной волчанкой,осложненной гнойной инфекцией.Клиническая и иммунологическая э фективность терапии тактивином и метилксантинами (в соавт. с A.B.Бирюковым,С.К.г ловьевым.Е.Г.Сажиной и др.)//Тер.архив,-1986.N З.с.105

26.Гиперактивность супрессоров в отношении пролиферации аллогенных лимфоцитов ► проявление дефекта Т-Т клеточных взаимодействий при системной красной волчанке соавт. с A.A.Потаповой,A.B.Бирюковым,А.Ю.Скрипник,А.Н.Чередеевым)//БЭБнМ.-198( 8,с.215

27.Сравнительное изучение дискоияной и системной красной волчанки методом диск/ минантноГо анализа (в соавт. с А.В.Бирюковым,Т.А.Волковой,А.Ю.Скрипннк)/Вестн.д матол.венерол.-1986.S 2,с.30

28.Оценка способности к восприятию и трансляции действия регулирующих сигна как новый подход к изучению иммунного статуса человека (в соавт. с A.B.Бирюковыу

- из -

Ю.Скрипник)//Материалы Всесоюзной конференции "Проблемы создания и совершенствова-:я автоматизированных информационных систем охраны труда.окружающей среды и здо-вья населения".Ангарск.-1986,с.269

29.Молекулярные основы расстройства иммунорегуляцин у человека.Возможное патоге-тичеекое значение систе>ы циклических нуклеотндов. ( в соавт.с А.В.Бирюко-м,А.Ю.Скрипник»A.A.Потаповой и Др.)//Лаб.дело.-1986.N 10,с.607

30.Клиническая эффективность терапии системной красной волчанки препаратами ме-лкснтинового ряда и тактивином (в соавт. с A.B.Бирюковым,Л.П.Ананьевой,А.Н.Череде-UM и др. )//K^m.MemruifHa.-1967.V I.e.107

31.Современные представления о влиянии кортикостероидов на функционирование им-иной системы ( в соавт. с A.A.Зерновым,А.В.Бирюковым)//Тер.архив.-1988.N 2.с.132

32 . Гетерогенжн ть типов роакшш Т-лимфоцитов у больных системой красной волчан-й на гактивин.Гипотеза о возможном механизме его действия на клетки-мишени ( в со-г. с А. Ю. Скршшик, А. В. Бирюковым. Т . А. Волковой) / / Сборник тру лов 2 МОЛГМИ "Механизмы ^унорегуляиии и иммунная биотехнология".Москва.-1989.с.16

Тип. ГКТР. 3u*S77-tC0