Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Технология инъекционных растворов дезоксиперанина гидрохлорида и аллапинина

ВСЕСОЮЗНОЕ ОБЪВДЙНЕШЕ "СОЮЗФАРМАВДЯ" ПРИ МИНИСТЕРСТВЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЬЩОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСЗИТУТ ФАРМАЦИИ

На правах рукописи

САДИКОВА ШОЙРА АРИПОВНА

ТЕХНОЛОГИЯ ИННЕКЦИОННЫХ РАСТЮРОВ ДЕЗОКСИПЕГАШНА ' 1ОДРОХЛОРИДА И АЛЛАПИШНА '

Специальность 15.00.01 - "Технология лекарств и организация фармацевтического дела"

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени . кандидата фармацевтических наук

Москва - 1991

Работа выполнена в ордена Трудового Красного Знамени Институте химии растительных веществ АН Узбекской ССР.

Научный руководитель:

доктор Фармацевтических наук,

'старший научный сотрудник Г.Л.ГЕНКИНА

Официальные оппонента:

доктор фармацевтических наук, профессор

кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник

Ведущее учреждение: Московская Медицинская Академия им. И.М.Сеченова.

Зацдата состоится " ^ " ¿7<сУ¿¿¿^£.1991 г. в /4^ час. на заседании Специализированного совета № Д 074.28.01 при Всесоюзном научно-исследовательском институте фармация (117418, • Москва, ул. Красикова, 34).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всесоюзного научно-исследовательского института фармации.

Автореферат разослан " $ " (финкой1991 г.

Н.С.ЕВТУШЕНКО Л.Ф.СОКОЛОВА

Ученый серктарь Специализированного совета Д 074.28.01, кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник Л.М.БОБРОВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Обеспечение здравоохранения эффективными лекарственными средствами невозможно без разработки рациональной лекарственной формы и пути ее введения в организм-

Особое место в терапии различных заболеваний занимают растворы для инъекций лекарственных веществ в силу быстрого достижения лечебного эффекта.

Из-за специфичности введения инъекционных лекарственных форм препаратов, предъявляются высокие требования к их качеству я стабильности, а следовательно, к технологии,

В Институте химии растительных веществ АН УзССР, в котором проводится целенаправленный поиск лекарственных средств из флоры Средней Азии, были получены препараты дезоксипзгаиина гидрохлорид (ДОН г/х) из травы гармалы обыкновенной (могильник), обладающий антахолинэстеразной активностью и аллапинин (бромистоводородная соль алкалоида лаппаконитина) из травы борца белоуотого (аконит) о антиаритмическим действием.

Исследования, проведенные в институте, показали необходимость создания растворов для инъекций данных препаратов.

Получение промышленных серий I% инъекционного раствора ДОП г/х (ФС 42-2418-86) показало, что _препарат не стабилен по значению рН, что грозило снятию данного препарата с производства.

Широта терапевтического действия, малые побочные эффекты и большая потребность в препарате вызвали необходимость изучения причины неустойчивости инъекционного раствора ДОП г/х и усовершенствование его технологии, а также отсутствие инъекционной формы аллалинина определило актуальность настоящего исследования.

Цель исследования - разработка технологии растворов для инъекций препаратов ДОП г/х и аллалинина.

Выполнение намеченной цели потребовало решения следующих задач:

- выяснить причину неустойчивости Т% инъекционного раствора ДОП г/х;

- разработать научно-обоснованную технологию растворов для инъекций ДОП г/х и аллалинина;

- изучить стабильности разработанной лекарственной формы в процессе хранения;

- разработать аналитический контроль технологии, а также методы стандартизации готовой лекарственной формы ДОП г/х и ал-лаштна;

- разработать нормативно-техническую и технологическую документацию для обеспечения промышленного выпуска инъекционной формы ДОП г/х и аллапинина.

Научная новизна. В результате проведенной работы усовершенствована технология раствора дезоксипеганина гидрохлорида 1% для инъекции. Методами ВЭКС и масс-спектрометрии выявлена причина нестабильности раствора, обусловленная наличием примеси дезоксивазицинона гидрохлорида. Для стабилизации раствора ДОП г/х, исключающей его переход в ДОВ г/х, необходимо вводить 10 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной на I л раствора (рН от 2,6 до 4,0).

Научно обоснован состав и технология раствора аллапшшна 0,5$ для инъекций. Для получения раствора аллапинина исследовали зависимость растворения препарата от температуры среды, дис- . персности субстанции и солюбилизатора. Установлено, что температура воды должна быть 70°С +Ю°С, так как в этих условиях дисперсность субстанции не влияет на растворение препарата и содю-билизатор не требуется. Так как при хранении этого раствора имеет место гидролиз препарата, что приводит к снижению рН на 2 единицы, то для стабилизации раствора аллапинина необходимо вводить 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты до рН 3,5-3.7.

С целью установления срока годности (3 года) инъекционного раствора препаратов разработаны методы ТСХ, ВЗЕХ, масс-спектрометрии и УФ-спектрофотометрни качественной и количественной оценки ДОП г/х и аллапинина.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработано и внедрено:

- усовершенствованная технология 1% раствора ДОП г/х для инъекций (рассмотрен и одобрен фармакологически!.: коште том МЗ СССР, Протокол № 4 от 28 февраля 1990 г.);

- состав, методики качественного и количественного определения Г,» раствора ДОП г/х для инъекций (проект фармакопейной статьи на I% раствор ДОП г/х для инъекций);

- состав, методики качественного и количественного определения 0,5£ раствора аллагпшша для ¡шъекцнГ; (::<>С 42-1РПГ-РР,

утвержденной 30 июня 1989 г.);

- опытно-промышленный регламент на производство 0,5$ раствора аллапинина для инъекций (Акт ПО "УзХИМФАРМ" 0 внедрении препарата от 8 ноября 1989 г.). 0,5/2 раствор аллапинина разрешен МЗ СССР в качестве антиаритмического средства (Приказ № 535 от 22 сентября 1989 г.).

Положения выдвигаемые на защиту:

- результаты исследования неустойчивости инъекционных растворов ДОП г/х и аллапинина и пути их стабилизации;

- технологическая схема получения инъекционных растворов ДОП г/х и аллапинина, методы постадийного контроля технологического процесса и готовой продукции.

Апробация работы. Фрагменты исследований до -кладывались на научной конференции ИХРВ АН УзССР (Ташкент,1986 г.), на Всесоюзной конференции "Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации" (Ленинград, 1989 г.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом ГКНТ 069.01 "Разработать и внедрить эффективные методы и средства профилактики, диагностики и лечения основных заболеваний сердечно-сосудистой системы", в рамках общесоюзной проблемы Научного Совета !& 4В "Фармация" и частной проблемы 48.02 "Технология и биофармавдя", а также согласно научному алану Института химии растительных веществ АН УзССР, являясь составной частью проблемы 2.29.6 "Химическое изучение природного сырья растительного и синтетического происхождения для изыскания биологически активных веществ", включая раздел: "Разработка технологии готовых лекарственных форм новых лекарственных препаратов".

Работа направлена на реализацию постановлений ГКНТ СМ СССР й 424 от 24 ноября 1976 г. "Разработать опытно-промышленный регламент дезонсипегаюша гидрохлорица" и № 254 от 7 июня 1979 г. "Разработать метод получения антиаритмического препарата лаппа-конитина на основе дитерпеновых алкалоидов и передать на клиническое изучение" (номер гос.регистрации 79069910).

Внедрение аллапинина в медицинскую практику записано в Постановлении Совета Министров СССР № 236 от Г8 февраля 1988 г.

"О мерах по увеличению производотва лекарственных препаратов и полному обеспечению ими лечебно-профилактических учреждений, населения и народного хозяйства в 1988-1995 гг.".

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в которых отражено ее основное содержание.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, S глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 125 страницах машинописного текста,, включая 9 рисунков, 4 схемы и 23 таблицы. Список литературы включает 217 источников из них 89 на иностранном языке.

Во введении сформулированы актуальность, научная новизна и практическая значимость работы, определены цель и задачи исследования.

Первая глава содержит обзор литературы, в котором приведены общие сведения о современных антихолинэстеразных и антиаритмических препаратах природного происхождения, их роли в медицине, отражены современные химические и физические методы стабилизации инъекционных форм алкалоидов, методы аналитического контроля лекарственных форм алкалоидов.

Вторая глава посвящена характеристике объектов и методов исследования. Приведены методы анализа субстанции и инъекционных растворов ДОП г/х и аллапинина.

Третья глава посвящена выяснению с помощью масй-спектро- . метрии и ВЭ1Х методов причины неустойчивости инъекционного раствора ДОП г/х, подбору стабилизатора, разработке, усовершенствованной технологии 1% инъекционного раствора ДОП г/х и исследованию его стабильности с целью установления срока годности.

В четвертой главе представлены данные по стабилизации 0,Ь% инъекционного раствора аллапинина. Приведена технологическая схема получения 0,5? раствора аллапинина и исследована стабильность препарата в .процессе хранения.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования.

В качестве объектов исследования изучены растворы для инъекций ДОП г/х и аялапинина. Выбор этих объектов исследования основан на их значимости для медицины. Оба препарата относятся к классу алкалоидов.

ДОП г/х представляет собой хлористоводородную соль алкалоида де зоксйпегашна (1,2,3,9-те трагидропирроло/2,1-Ь/хиназолшга гидрохлорида.йсточкиком получения препарата является трава гарма-лы обыкновенной (могильник) Рвеапцт Ьагта1а I. семейства Ге^апаоеав.

Препарат ДОП г/х применяется в медицинской практике в качестве антихолипэстеразного средства в виде 1% раствора для инъекций и таблетках 0,05 г.

Аллагикин - бромистоводородная соль алкалоида лаппаконити-на (1л, 14Л-, 1бр-Триметокси-4-( М-ацетил-антраноилокси)-8,9-ди-окси-N-этил-18 нораконан). Препарат получают из травы борца (аконит) белоустого ЛсопИпга 1еисоз1;отит ь. семейства

Напипси1ао вае.

Препарат ачлашщин применяется в медицинской практике в виде таблеток 0,025 г "и 0,5% раствора для инъекций.

Исследование инъекционной формы препаратов проводили в соответствии о требованиями Г® изд. и ГФ XI изд. СССР.

Получение высококачественных инъекционных форм препаратов

не возможно без надежных аналитических методов контроля техноло- • гических процессов и готовой продукции.

Методы анализа ДОП г/х. Для постадийного контроля технологии 1% инъекционного раствора ДОП г/х наш применялся УФ-спектрофотометрический метод, основанный на измерении поглощения испытуемого препарата при 278 нм и рН-метрия (потен-циометрический метод).

При спектрофотометрическом' определении 10 мг ДОП г/х в I мл раствора для инъекций при шести повторностях и доверительной вероятности (р = 0,95) было найдено 9,8; 9,9; 10,1: 9,7; 10,0 и 10,2 мг препарата (х = 10,00 мг, 5 = 1,95 • 10 , £ (&-/*) = 2,57, х = +5,01 - Ю-2, Е = ¿5,06). При 3 определениях - Ед = +2,89^. Метод не содержит систематической ошибки, значение расчетного коэффициента Стьюдекта 1,25 меньше табличного значения - 2,57.

1

Так как неустойчивость 15? инъекционного раствора ДОП г/х, как было установлено, связана с присутствием в препарате дезокси-ваэицинона, поэтому нами разработан ВЭН метод, который позволяет проводить компонентный анализ препарата.

С помощью этого метода были проанализированы промышленные серии субстанции ДОП г/х и инъекционного раствора. Анализ осуществляли на отечественном хроматографе Шлткром при применении обращенно-фазовой системы в изократическом режиме. Условия хроматографирования: колонка Силасорб С^ (80 х 2 км), диаметр частиц - 6 мкм, элюент метанол - вода - хлорная кислота 70:30:0,02;-скорость элюирования - 0,05 мл/мин, детектор УФ-

спектрофотометричсский с длиной волны 316 нм.

Ошибка метода 1,9% предел обнаружения ДОП г/х - I нг, де-зоксивазивднона гидрохлорида - 20 мкг при чувствительности прибора 0,40.

Методы анализа а л л а п и н и н а. Действующим веществом препарата аллапинин является брошстоводородная соль алк.члоица лаппакогатша с примесью сопутстл/ющих всщссто.

Существующая нормативно-техническая документация В$С 42 -1667-86 на субстанцию аллапинина не дает объективной оценки по разделам "посторонние примеси" и "количественное определение", что осложняло и постадийный контроль технологической схемы получения инъекционного раствора аллапинина.

Для качественной оценки субстанции и раствора аллапинина был разработан унифицированный метод ТСХ на пластинках Сялуфол УФ-254, который показал, что в препарате аллапинин наряду с бромиотоводо-родной солью лаппаконитина содержится -дезацетиллаппакойитина ( Ы- ДАЛ), два соединения неустановленного строения и соединение (светящееся пятно) неизвестного класса.

Хроматографирование проводили на пластинках Силуфол УФ-254 восходящим методом в системе хлороформ - бензол диэтилаМн (10 : 40:3). Обнаруживают -пятна Соединений при просматривании пластинки в УФ-свете при длине волны 254 ям.

Данная методика легла в основу контроля качества инъекционного раствора аллапинина. При нанесении на пластинку 0,01 мл 0,5$ раствора аллапинина (50 мкг) было установлено, что на всех стадиях технологического процесса получения раствора аллапинина, количество сопутствующих лаппаконитину соединений соответствует их содержанию в исходной субстанции и не появляются пятна других веществ.

Для количественной оценки аллапинина в субстанции предлагался (ВФС 42-1667-86) титриметрический метод (масса навески 0,2 г, сумма алкалоидов не менее 96$) не позволяющий судить о компонентном составе препарата.

Нами для количественной оценки субстанции аллапинина и'его инъекционного раствора был разработан метод ВЭЖХ со спектральным окончанием, позволяющий проводить компонентный количественный анализ препарата.

Алкалоиды лаппаконитина, входящие в состав препарата отличаются близкими спектральными свойствами, молярный коэффициент экс'Гйнкции лаппаконитина бромгидрата невысок ( тах ^.О 298 нм,

- 3,6), поэтому нами для контроля чистоты препарата аллапинина предлагается метод ВЭЖХ, отличающийся высокой чувствительностью, селективность» и позволяющий быстро в течете 40 мин в на-тавном 'Виде определять все компоненты смеси из одной навески.

-Условия хроматограф ронания:

'Колонка 11-Х фирмы " 1'егк1л Б1швг длиной 250 мм, диаметром >2.,С мм, заполненная обращенной фазой Лихросорб ~СХА '

Подвижная фаза - смеоь двух растворов А и Б в соотношении 35:65. Раствором А служила смеоь, состоящая из 95/2 спирта, воды и фосфорной кислоты в соотношении (20:79:1). В качестве раствора Б использовали те же ингредиенты в соотношении (2:97:1). Скорость элшрования I мл/мин, температура колонки 40°С. Время анализа -40 мин.

Адлашшш, соответствующий официальной документации В$С 42 -1667-86, в количестве 5 мг растворяли в 5 мл 20% метанола. 20 мкл (20 мкг) полученного раствора вводили в колонку с помощью петлевого инъектора.

Для определения площади пика основного вещества препарат хроматогра$ировали при чувствительности детектора 1,0. Площади пиков примесей определяли повторным хроматогра|ированием того же образца при чувствительности цетектора 0,1,

На хроматограмме кроме основных пиков лаппаконитина и N -дезацетиллаппаконитина были получены еще три пика, соответствующие неидензисЕицированшм соединениям. Данные компонентного анализа аллапинина методом ВЭНХ представлены в табл. I.

Таблица I Компонентный анализ промышленных серий аллапинина методом ВЭЖХ, %

Серии ! Лаппакода-

М-ДАЛ

Неидентифицированные вещества

препарата ; ган (2) : (1) 3 4 ' 5

211086 88,35 8,9.7 0,44 " 1,68 0,56

20287 89,60 8,93 0,19 1,09 0,19

30287 91,88 6,17 0,56 1,21 0,18

80388 90,25 7,80 0,36 1,13 0,46

100488 91,20 7,02 0,43 1,23 0,12

Из анализа фактических данных видно, что содержание лаппаконитина в препарате аллапинин колеблется от 88 до 92%, N -ДАЛ не более -10$, а на все остальные примеси приходится не более 3$.

Метрологическая характеристика метода показала, что относительная ошибка определения не превышает +2$. Порог обнаружения аллапинина 30 нг.

Предложенный метод на 2 порядка чувствительнее метода ТСХ, "

на 3 порядка чувствительнее УФ-спентройотоыетрического метода и нов

воляет наряду с. качественным анализом проводить и количественную оценку препарата.

Анализ методом Ю1Х инъекционной формы вышеуказанных серий аллапинина показал, что они идентичны субстанции препарата как по качественному так и по количественному содержанию.

Для контроля инъекционного раствора аллапинина нами была разработана ВФС 42-I90I-89 - раствор аллапинина 0,5% для инъекций, включающая разделы: описание, подлинность, рН, определение номинального объема, механические включения, испытание на стерильность, количественное определение, упаковка, маркировка, транспортирование, хранение и т.д.

Для количественной оценки содержания аллапинина в инъекционном растворе нами был разработан УФ-спектрофотометрическпи метод»

Измерение поглощения инъекционного раствора аллапинина проводят при длине волны 298 нм относительно раствора рабочего стандартного образца аллапинина. Закон Ламберта-Бера соблюдается в пределах 0,03-0,22 мг/мл. При определении 0,005 г аллапинина в I мл раствора при 6 повторностях и доверительной вероятности Р = 0,95 было найдено 0,0050; 0,0049; 0,0051; 0,0049; 0,0051; 0,0049 г аллапишна. Ошибка определения составляет + 5,08$. Значение расчетного коэффициента Стьюдента 0,5 меньше табличного 2,57, что свидетельствует об отсутствия систематической ошибки.

Данную методику применяли для постадийного контроля 0,5$ инъекционного раствора аллапишна для инъекций.

Усовершенствование состава и технологии 1% инъекционного раствора ДОП г/х

В последние годы было замечено, что при промышленном производстве 1% инъекционного раствора ДОП г/х (ФС 42-2418-86) наблюдаются колебания в значении рН. При этом субстанция ДОП г/х отвечала требованиям ФС 42-2267-84.

Исследование влияния таких факторов, как облучение солнечным светом, режима стерилизации, кислорода воздуха, показало, что оия не влияют на изменение рН раствора.

В связи с вышеизложенным, мы предположили, что изменение рН раствора ДОП г/х связано с наличием примеси в субстанции препарата.

Известно, что хиназолиновые алкалоиды постепенно окисляются в хиназолоновые. Этот процесс имеет место в щелочпой и нейтральной средах, как под воздействием химических агентов, так и под влиянием солнечного света и УФ-облучения.

В основном, вышеизложенное относится к хинаэолиновым осно-

ваниям, что касается хлоргидратов, то известно, что перевод оснований в оош, способствует стабилизации растворов.

Относительно дезоксиреганина известно, что при хранении в щелочной и нейтральных средах он превращается в дезоксивазицинон.

Фармакопейные методы анализа субстанции ДОП г/х (неводное титрование, тонкослойная хроматография не позволяют обнаруживать дезоксивазицинона гидрохлорида (ДОВ г/х) в ДОП г/х.

Для определения количества ДОВ г/х в ДОП г/х нами были использованы масе-снектрометрия и высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой.

Полуколичественным маос-спектрометрическим методом интегрирования ионного тока (ИИТ) были проанализированы образцы инъекционного раствора ДОП г/х (табл. 2). При этом в некоторых образцах препарата наряду с ДОВ г/х был также найден дигидроцезокси-вазицинона гидрохлорид (ДиДОВ г/х),

Таблица 2 Результаты анализа промышленных серий 1% инъекционного раот-вора цезоксипегагоша гицрохлорица методом ИИТ на содержание примесей

Серия : рН раствора от 5,5 до 7,0 ; Найдено,

препарата

лосле стери- ¡Раствор после ПьТйлтП^Т"

лияяттяи - Я-х лет тгя- г Д0В Г/х : ДиД0В г/х

лизации : 3-х лет хра

; нения

30378 6,5. 5,8 0,2 -

40987 4,8 4,0 0,7

50987 4,5 .4,0 1,4 0,6

20488 5,3 4,3 0,6 0,8

Для исследования влияния ДОВ г/х на ДОП г/х использовали также метод ВЭЕХ. Были приготовлены модельные смеси ДОП г/х с содержанием 0; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0; 1,5 и 2,0% ДОВ г/х и по промышленной технологии из них приготовлены I% инъекционные растворы, в которых определяли содержание компонентов смеси в свежеприготовленном растворе, после стерилизации и по истечении 3-х лет хранения (табл. 3).

Результаты анализа модельной смеси ДОП г/х и ДОВ г/х показывают, что количество ДОВ г/х в процессе изготовления раствора и хранения увеличивается. Розкое увеличение наблюдается на третьем году хранения. Причем, чем больше ДОВ г/х в исхо/щой смеси, тем резче происходит его увеличение л процессе хранения.

Таблица 3.

Результаты анализа I % инъекционного раствора дезоксипеганина гидрохлорида содержащего дезоксивазицинона гидрохлорид,.методом ВЗЕХ.

введено Соде р 5 а н я е ком понентов в растворе,??

ДОЗ г/'х, Исходный раствор После стерилизации I год хранения . 2 года хранения 3 года хранения

С.' » ■ ДОП ' ДОВ доп дов доп. дов ДОП дов доп дов .

Г 'X ■ Гбс г-'х Г 'Х г/х гух г'х г'х г 'X 'г 'х

99,71 Л,29 99,59 _ 0,41 99,42 0..58 99,39 0,61 99., 30 м м 0,70 •

ОД 99,55'' 0,45 99,42 ■ 0,58 99,33 0,67 99,24 0,76 99,02 0,98

0,2 99,52 0,48 99,29 . 0,71 99,11 0,89 99,04 0,96 98,87 1,13

0,5 99,22 0,78 99,09 0,91 98,95 1,05 98,90 1,10 98,64 1,36

1,0 98.90 1,10 ■98,54 Г,46 98,40 1.60 98,25 1.75 98,05 1,95

.Г, 5 98,26 1,74 98 ДО 1,90 97,97 2,03 97,86 2,14 97,51 2,49

2,0 98,06 1,94 97,76 2,24 97,32 2,68 96,90. 3,10 96,79 3,21

Наряду о компонентным анализом смеси исследовали и рН раствора (табл. 4).

Таблица 4 Значение рН раствора модельной смеси дезоксивазицинона гидрохлорида и дезокоипегаюша гидрохлорида

Введено ;_ Значение рН раствора

ДОВ г/х ; Исходный ; После сте- Год хранения

• раствор : рилизации I : 2 3

- 5,58 6,00 5,80 . 5,75 5,60

0,1 5,92 6,15 5,80 5,70 ■ 5,50

0,2 5,90 5,95 5,70 5,60 5,40

0,5 5,65 5,80 4,90 4,50 4,00

1.0 4,95 5,00 4,75 4,61 4,15

1,5 4,07 4,00 3,90 3,70 3,50

2,0 3,88 3,76 3,70 3,58 3,40

Из табл. 4 видно, что с увеличением содержания в исходной смеси ДОВ г/х, рН раствора уменьшается. Это согласуется с тем, что 1% раствор ДОЯ г/х имеет рН 5,5-7,0, а 1% раствор ДОВ г/х рН 3,7-4,2. В процессе хранения рН раствора изменяется незначительно.

С помощью метода ВЭЖХ были проанализированы промышленные образцы инъекционного раствора и субстанции ДОП г/х (табл. 5).

Как следует из приведенных экспериментов, данные масс-спект-рометрии ВЭЖХ анализа не противоречат друг другу и подтверждают, что наличие ДОВ г/х в исследуемых сериях инъекционного раствора ДОП г/х в определенных концентрациях, ведет к сдвигу рН в кислую область. Это явление имеет место тогда, когда содержание ДОВ г/х в пределах от 0,2 до 3,05». Содержание ДОВ г/х в образцах более 3,0$ наш не'обнаружено. Вероятно,' в таких растворах устанавливается равновесие между ДОП г/х и ДОВ г/х. При содержании ДОВ г/х менее 0,25? рН раствора остается в пределах нормы, указанной в фармакопейной статье.

Таким образом, причина неустойчивости раствора ДОП г/х по значению рН, в наличии в субстанции препарата ДОВ г/х.

Из литературы известно, что в кислой среде дезоксипегэнин не окисляется в дезоксивазицинон, поэтому в качестве стабилизатора 1,1! инъекционного раствора препарата была использована хлористоводородная кислота.

С ;>то]; целью в состав 15? раствора ДОП г/х вводили различные количества 0,1 Г, раствора кислоты. Критерием оценки устойчивости

Таблица 5 Компонентный анализ промышленных серий ДОН г/х и инъекционного раствора методом КШ

Серия ; Содержание компонен- • Серия Содержание компонентов субстан- : тов в субстанции, % -.раствора; в растворе, %

ции :Д0П : г/х ' дов г/х : дидов : г/х 1 : ДОП : г/х ДОВ г/х : ДиДОВ ; г/х

100486 99,7 0,3 - 60586 99,4 0,6 -

80487 99,2 0,8 - 70687 98,9 1,1 -

100687 98,3 1,7 следы 80787 98,0 2,0 следы

101187 98,7 1,3 следы 90188 98,3 1,7 следи

100288 97,9 2,1 следи 100388 97,0 3,0 следы

раствора служило значение рН среды, которое при оптимальном коли честве стабилизатора, должно быть постоянным или незначительно изменяется в процессе хранения.

На основании фактических данных оптимальное количество кислоты хлористоводородной оказалось 10 мл кислоты на I л раствора, так как изменение рН раствора незначительно в процессе хранения.

Пропись нового состава 1% инъекционного раствора ДОП г/х: де-зоксипеганина гидрохлорид (ФС 42-2267-84) - 10 г; раствора кислоты хлористоводородной 0,1 М (МИ, вып. 2, о. 76) - 10 мл; воды для инъекций (ФС 42-2620-89) - до I литра.

Технологический процесс получения раствора ДОП г/х включал следующие 4 стадии: I)приготовление 1% раствора ДОП г/х; 2) аннулирование ; 3)стерилизация ампул при (121+1)°С в течение 15 мин; 4) упаковка.

Введение в состав инъекционного раствора ДОП г/х кислоты хлористоводородной стабилизировало раствор по показателю рН. При атом показатель рН раствора от 2,6-4,0.

Результаты исследования стабильности I% инъекционного раствора ДОП г/х представлены в табл. 6.

Экспериментальная фармакотоксикологическая проверка- инъекционного раствора ДОП г/х нового и старого составов показала, что острая токсичность (ЛДсд - 56-57 мг/кг) и антихолинзстеразная активность х Ю-' - 6,4-6,7 г/мл) остались без изменения.

Полученный инъекционный раствор не обладает местнораздрпжагацим действием.

Фармакологическим комитетом КЗ СССР реког/епдопацо медицин-

Таблица 6 Результаты анализа 1% инъекционного раствора дезоксипеганина гидрохлорида

Серия ¡Время

Показатели качества

пйтя8"™?^16 1Прозрач-< 'Цвет- jpH раот-Стери

рата рйя .год

йость

• кость рора от У1ьно-2,6 до сть 4,0

Хроматографиче-ская однородность ___

ТСХ ; ВЭЖХ

;кол-во компонентов^

ДОП у/х

: дов : г/х

Содержание ДОП г/х в Г мл препарата, г/мл

I 2 : 3 : 4 : 5 : 6 : 7 : 8 : 9 10

10287, 0 ■I Прозрачен И Бесцветен 3.12 3.13 Стерилен к Одно пятно п 99.40 99.41 0 0 60 59 0,0100 0,0100

-2 3,14 II 99,39 0 61 0,0101

'3 3,14 99,38 0 62 0,0100

8,5 II 3,14 |< 99,39 0 61 0,0101

20287 0 I Прозрачен ■Беоцве- 3,10 3,13 Стерилен _Г1_ Одно пятно 98,20 98,10 I I 80 90 0,0096 0,0098

2 3,14 ,1 _»г_ 98,30 I 70 0,0100

3 _Ч1_ 3,16 98,21 I 79 0,0097

3,5 3, Ï4 и 98,19 I 81 0,0097

30487 0 I Прозра- Бесцветен 3,35 3,30 Стерилен — Одно пятно 98,90 98,96 I I 10 14 0,0102 0,0104

2 — 3,40 _II ^ 98,76 I 24 0,0103

3 3,30 'и 98,85 I 15 0,0104

3,5 _ 11_ 3,45 98,80 I 20 0,0103

40487 0 'I ■ Прозра- Бесцветен _«_ 3,75 •3,70 Стерилен __ Одно пятно —и— 99.53 99.54 0 0 47 56 0,0096 0,0095

2 3,85 н 99,40 0 60 0,0097

3 —и 3,85 _н_ 99,54 0 46 0,0098

3,5 •»» _ 3,95 _1Г 99,52 0 48 0,0097.

50587 0 I прозрачен Бесцве- 2,65 •2,,60 Стери- Одно пятно 98.64 98.65 I I 36 36 0,0099 0,0098

2 '2,70 98,53 I 47 0,0101

3 2,^4 98,50 I 50 0,0100

3,5 2.,83 98,60 I 40 0,0099

ское применение раствора для инъекций ДОП г/х нового состава (протокол № 4 от 28.02.90 г.) с предварительной апробацией в трех клиниках на ограниченном контингенте больных.

Составлена ведомость изменения к опытно-промышленному регла v.enry па производство 1% инъекционного раствора ДОП г/х нового состава в ампулах по 2 мл.

Разработка и наследование 0,5% инъекционного раствора аллапишша

Аллапинин - бромистоводородная соль оонования лаппаконитина при комнатной температуре медленно и мало растворима в воде для инъекций. Изучение растворимости аллапинина в воде для инъекций было проведено в зависимости от температуры среды, степени диа-персности и природы солгабилизатора. Контроль степени растворения осуществляли спектрофотометрическям методом при % = 298 нм, в кювете с толщиной слоя 10 мм, по отношению к 0,Й раствору рабочего стандартного образца (РСО) аллапшшна.

В качестве солгабилизатора применяли тнин - 80 в концентрации от.1 до.10% и поливинилпирролидон медицинский низкомолекулярный (М.м.12600+2700) до Ъ% в растворе. При этом установили, что 0,5/£ раствор ачлапининэ, независимо от количества твина-80 вначале опалесцирует, а затем аллапинин выпадает в осадок. Поливинилпирролидон первоначально окрашивает раствор в желтый цвет, а затем по истечет™ I ч, аллапинин также выпадает в осадок.

Исследование кинетических кривых растворения аллапишша в зависимости от температуры я дисперсности субстанции показало, что при температуре от 60 до 80°С количество препарата в растворе составляет 95-100$ независимо от дисперсности субстанции. При температуре поды 70°С был получен 0,5$ раствор аллапинина который после фильтрации 'через фильтр "Миллипор" с диаметром пор 0,2.'.; мкм, ампулирования, стерилизации (I2I+I)°C в течение 15 мин был заложен на хранение .Хранили препарат в термостате "ускоренное старение" температура 60°С) и в условиях естественного старения (комнатная температура). Пря этом было установлено, что раствор не стабилен по показателю рН (снижение на 2 единицы).

Аллапинин является солью средней силы основности и сильной кислоты, которая в водной среде способна гидролизоваться. В ходе исследования влияния различных факторов на степень гидролиза аллапинина было установлено, что на свету показатель рН раствора не изменяется в течение 6 ч. Цвет раствора в процессе-хранения

и облучения не меняется, что позволяет предположить,что отсутствует окисление препарата под влиянием кислорода воздуха.

Уменьшение рН раствора аллапинина 5,5-7,0 в процессе хранения, вероятно, происходит за счет частичного гидролиза лаппако-нитина гидробромида до основания лаппаконитина.

При более высоких значениях рН до 9 возможно омыление сложно-эфирной группы лаппаконитина гидробромида с образованием ами-нослирта лаппаконина и ацетмлантраншювой кислоты, что способствует сдвигу рН в кислую область. В литературе описано также превращение лаппаконитина гидробромида в кислой среде (рН 1-2) в N -дезацеташгаппаконитин и уксусную кислоту.

Установление факта неустойчивости 0,5$ раствора аллапинина по показателю рН потребовало разработки условий его стабилизации. Для повышения устойчивости раствора использонали цитратно фосфатный буфер (рН 6,0; 6,4; 6,8 и 7,0) 0,1 М кислоту хлористоводородную в различных количествах.

При этом устойчивый раствор аллапинина был получен при добавлении к 0,5$ раствору препарата 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной до рН 3,5-3,7. Такой раствор стабилен при хранении в течение 3 лет.

0,5$ раствор аллапинина включает следующие ингредиенты: аллапинина в пересчете на 100$ вещество (ВФС 42-1667-86) - 5,0 г; раствора кислоты хлористоводородной 0,1 М до рН 3,5-3,7 (ГФ XI, вып. 2, с. 77) и воды для инъекций (ФС 42-2620-89) до I литра.

Технологическая схема производства 0,5$ раствора аллапинина представлена на рис. I.

Фактические данные до устойчивости 0,5$ раствора аллапинина полученного по данной технологии, представлены в табл. 7.

Фармакологаческие исследования и клинические испытания показали, что введение хлористоводородной кислоты для стабилизации 0,5$ раствора аллапинина не влияет на его антиаритщчесную активность и не оказывает местнораздражающего действия.

На основании проведенных исследований составлена ВФС 42-190169 на 0,5$ раствор аллапинина для инъекций и опытно-промышленный регламент, который внедрен на ПО УзХИМФАРМ. Приказом Ш СССР № 535 от 22.09.89 г. 0,5^ раствор аллапинина для инъекций разрешен для широкого применения в медицине.

Технологическая схема производства инъекционного раствора аллатшина

Подготовка персонала

Приготовление раствора

Фильтрация раствора

Промывка возвратной тары

Резка ампул и на бор ампул в касетн

Могка ампул

Наполнение ампул

Отсасывание раство ра из капилляров

Запаивание кагашгг-ров

Стерилизация ампул, с раствором

Проверка ампул на герметичность и стерильность

Просмотр ампул

Маркировка

Упаковка ампул

Измельчение забпакованных ампул

Регенерзци г раствора

I. Вспомогательные работы

2. Приготовление раствора

3. Ампулирование

4. Стерилизация

5. Упаковка

Подготовка

• пройзводстнаы'н;-помещений

Подготовка сб.; рудования

Остаток расгво|.(| на регенерат".;

Потери Потери

Ампулы с раатио-ром не пол!юсп,г) налитые, непра--вилыю заияпш)'.!'! на регенерации

6. Регенерация раствора

со стадий 2, 3, 5 Раствор [1а стадию :■;.

Потери

Потери

Ампулы раствора с механическими загрязнения?;!;, неправильно зп-иаяпнпе не полностью налитые

-Потеси

¡'не. Г

Таблица 7 Результаты исследования стабильности раствора аллапиница 0,5$ для инъекций

Показатели качества

препарата : хране : ния, : год " ¿Прозрач- &ве тно- ■рН : Стери-5(ромато- количе-

ность : сть раство-; льно- урафиче- ственное

ра 3,5- -: сть ,-ская од- ¡содержа-

5,0 * нородно- ние пре-

i « 1 сть парата, : г/мл

I : 2 : 3 : 4 5 : 6 : 7 : 8

IOI87 0 Прозрачен Бесцветен 3,70 Стерилен 4 пятна 0,0051

I 3,72 0,0051

2 3,74 — 0,0053

3 _ 11_ 3,86 II 0,0052

3,5 и 3,85 II II 0,0050

20187 0 Прозрачен Бесцветен 4,00 Стери- 4 пятна 0,0050

I _м _ 4,10 лен 0,0051

2 — 3,98 _ 0,0049

3 — 3,96 II 0,0054

3,5 _!(_ 4,10 II н 0,0053

30187 0 Прозрачен Бесцветен 4,30 Стерилен 4 пятна 0,0046

I 4,60 м 0,0048

2 И __ 4,51 0,0047

3 4,85 II 0,0047

3,5 II — 4,76 II __ II 0,0046

40187 0 Прозрачен Бесцветен 3,90 Стерилен 4 пятна 0,0049

I —и— 3,97 «1 0,0049

2 . 3,95 __ п 0,0050

3 II 4,00 0,0049

3,5. 4,12 0,0050

50187 0 'Прозрачен Бесцветен 3,55 Стери- 4 пятна 0,0053

лен

I — 3,60 _ м и_ 0,0051

2 _ и__ 3,60 __ и_ -"-. 0,0052

3 11 __it 3,70 0,0053

3,5 3,70 «_ 0,0053

выводи

1. Исследование 1$ инъекционного раствора ДОП г/х методами масс-спектрометрии и ВЭЖХ показало, что причиной нестабильности раствора по показатели рН, является наличие в субстанции препарата ДОВ г/х.

2. Установлено,' что введение 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной до рН 2,6-4,0 стабилизирует 1$ раствор ДОП г/х в процессе длительного хранения.

3. Исследование 0,5$ раствора аллапинина показало, что в водной среде происходит сдвиг показателя рН в кислую область, что вероятно связано с гидролизом действующего вещества препарата .

4. Установлено, что введение 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной до рП 3,5-3,7 стабилизирует 0,5$ раствор аллапинина.

5. Используя современные методы исследования, научно обоснован состав и технология инъекционных растворов ДОП г/х и аллапинина.

6. Для аналитического контроля препаратов разработаны методики качественного и количественного анализа, включающие тонкослойную хроматографию, ВЭЕХ и спектрофотометрию.

7. Установлен срок годности инъекционных растворов ДОП г/х и аллапинина в естественных условиях равный 3-м годам.

8. Решением Фармакологического Комитета МЗ СССР (Протокол

й 4 от 28 феврали 1990 г.) 1% раствор для. инъекций ДОП г/х нового состава рекомендован к медицинскому применению.

9. Разработана и утверждена Временная фармакопейная статья ВФС 42-1901-89 на раствор аллапинина 0,5$ для инъекций; составлена и находится па утверждении фармакопейная статья на 1$ гэ^т-вор дезоксипегашна гидрохлорида для инъекций.

10. На основании проведенных исследований разработан опитно-промышленный регламент на производство инъекционного раствора аллапинина в 2 мл ампулах. Промышленный Выпуск препарата освоен на П0 УзХИмФАРМ. '

Составлена педомость изменений к опытно-промышленному регламенту на производство 1$ инъекционного раствора дезоксипегаж-на гидрохлорида нового состава.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Лекарственные формы аллапинина //Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации: Тез,докл. Воесоюз. конф., 29 июня - I июля 1989 г. -Л., 1989. - С.141-142. (в соавт.).

2. Аплапинин //ВЗС 42-1901-89. МЗ СССР.

3. Опытно-промышленный регламент на производство раствора аллапинина 0,Ъ% для инъекций по 2 мл. - Ташкент, 1989. - 151 с.

4, Контроль качества препарата аплапинин методом жидкостной хроматографии высокого разрешения //Химия природ, соединений. - 1990. - № I. - С. 129-131 (в соавт.).

5, Технология и исследование огабильнооти 1% инъекционного раствора дезоксипеганина гидрохлорида //Фармация. - 1990. - № 4. - С, 53-55. (в соавт.).

6, Исследование 1% инъекционного раствора дезоксипеганина гидрохлорида // Хим.-фармац. журн. - 1991. - в печати (в соавт.).

Подписано к печати 24.06.91г. Заказ * 191 Тира* 100 экз. Объем 1п/л.

Отпечатано на ротапринте ФБАНУзССР гЛаакент ул.Мумимова 13