Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка методик анализа и норм качества новых лекарственных препаратов на основе "бишофита энтерального"

На правах рукописи

ГЮЛЬБЯКОВА ХРИСТИНА НИКОЛАЕВНА

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК АНАЛИЗА И НОРМ КАЧЕСТВА НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

НА ОСНОВЕ "БИШОФИТА ЭНТЕРАЛЬНОГО"

15.00.02 — фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЯТИГОРСК 2002

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА В ПЯТИГОРСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ АКАДЕМИИ

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор фармацевтических

наук,профессор Е.В. Компан-цева

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор химических наук,

Защита состоится "/£■' г в^часов

на заседании диссертационного совета Д 084.45.01 по защитам диссертаций при

Пятигорской государственной фармацевтической академии (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской государственной фармацевтической академии (г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

Автореферат разослан "¿-6" -¿¿/¿'¿¿¿£-2002 г Ученый секретарь

профессор М.Ф. Маршалкин кандидат фармацевтических наук, С.А. Рожнова

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Московская медицинская

академия им. И.М. Сеченова

диссертационного совета, доктор фармацевтических наук, профессор

Э.Ф. Степанова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В последние 20 лет отмечается значительный интерес зарубежных и отечественных исследователей в области медицины и биологии к химическому элементу магний. Возросший интерес к элементу магнию определяется достижением фундаментальных наук в выявлении его роли в физиологической регуляции различных органов и систем организма. Большую значимость ионов магния в регуляции различных функций организма определяет его кофакторная роль в активности ферментных систем - в первую очередь энергетического обмена, синтеза биологически активных веществ, ионотранспортных систем, синтеза белка, регуляции сократительных белков, иммунной системы и т. д. Наиболее значимо физиологическая и патофизиологическая роль ионов магния проявляется при системном или локальном дефиците, возникающем при недостаточном его поступлении в организм, повышенном потреблении или усилением выделения. Как следствие достижения этих фундаментальных знаний в практике здравоохранения нашей страны и за рубежом активно используют с профилактической и лечебной целью несколько десятков препаратов магния. С этой целью применяют, как правило, сульфат магния или органические соли магния, используемые в виде биологически активных добавок к пище или энтеральных лекарственных форм. При выраженном недостатке магния в организме используются инъекционные формы. Однако, существенным недостатком используемых солей магния (сульфата и органических) является способность вызывать гипохлоремический алкалоз и снижение содержания калия в тканях. Это послужило серьезным основанием для разработки и внедрения в клиническую практику хлорида магния в виде препаратов для местного, энтерального и парентерального введения.

Согласно данным фармакологических исследований, одним из перспективных средств для лечения и профилактики дефицита магния в организме является бишофит. По химическому составу бишо-фит на 70% состоит из шестиводного хлорида магния с включением макро- и микроэлементов. Бишофит в виде компрессов и ванн и препараты на его основе - пасты бишолин и бишаль, бишофитный пластырь, поликатан, применяются в комплексной терапии деформирующего артроза, ревматоидного артрита, люмбалгии и других хронических воспалительных и дистрофических заболеваниях опорно-двигательного аппарата, а также при воспалительных заболеваниях полости рта, носоглотки и верхних дыхательных путей. Таким образом, бишофит нашел применение £ бальнеологии и в создании

лекарственных средств для местного применения. Однако для создания лекарственных средств для энтерального и парентерального введения бишофит и другие природные минералы магния не используются. Это связано с тем, что в природе соединения магния сопровождаются примесями минералов других щелочноземельных элементов, железа и солей тяжелых металлов.

В настоящее время в НИИ фармакологии Волгоградской медицинской академии разработана технология очистки бишофита ("Бишофит энтеральный") и ведется активная работа по созданию перо-ральных лекарственных форм очищенного бишофита с целью их применения при гипомагнезиемиях, в частности, предложены растворы "Бишоф В6" на основе бишофита и пиридоксина гидрохлорида и "Бишоф Плюс" с бишофитом и солями железа, цинка и меди.

Однако для внедрения данных лекарственных препаратов в медицинскую практику необходимо провести комплекс исследований с целью получения разрешения Фармакологического государственного комитета МЗ РФ на передачу лекарственных препаратов на клинические испытания.

Цель и задачи исследования. Цель диссертационной работы -осуществить выбор оптимальных условий анализа для стандартизации и изучения стабильности "Бишофита энтерального", растворов "Бишоф В6" и "Бишоф Плюс".

Для реализации постановленной цели необходимо решать следующие задачи:

1. Изучить элементный состав "Бишофита энтерального" и разработать на этой основе методики идентификации, количественного определения и определения посторонних примесей.

2. Исследовать возможность использования химических и физико-химических методов для идентификации компонентов препаратов "Бишоф В6" и "Бишоф Плюс".

3. Разработать методики количественного определения препарата "Бишоф Плюс", позволяющие определять элементы при их совместном присутствии.

4. Изучить УФ-спектры поглощения пиридоксина гидрохлорида в различных растворителях и разработать методику количественного определения пиридоксина гидрохлорида в лекарственной форме "Бишоф Вб".

5. Исследовать возможность применения ВЭЖХ для определения посторонних примесей в препарате "Бишоф В6".

6. Изучить процесс взаимодействия пиридоксина гидрохлорида с ионами магния.

7. Изучить стабильность "Бишофита энтерального", "Бишофа Вб" и "Бишофа Плюс" и установить их сроки годности с помощью метода "ускоренного старения".

Научная новизна. Изучен элементный состав "Бишофита энтерального" и разработаны методики идентификации, количественного определения и определения посторонних примесей. На основании изучения различных серий "Бишофита энтерального", полученных из разных скважин в разное время года проведена его стандартизация и установлен срок годности в один год.

На основании изучения спектральных характеристик пиридокси-на гидрохлорида, бишофита и вспомогательных веществ, входящих в состав препарата "Бишоф Вб", обосновано использование производной спектрофотометрии для количественного определения пири-доксина гидрохлорида. Установлено, что производная спектрофото-метрия, в отличие от непосредственной дает возможность более надежно определять пиридоксина гидрохлорид в присутствии вспомогательных веществ.

На основании изучения хроматографической подвижности пиридоксина гидрохлорида в растворах спирта метилового и ацетонитри-ла различной концентрации, определены условия анализа и разработана методика определения посторонних примесей пиридоксина в лекарственном препарате "Бишоф В6".

Методом ВЭЖХ исследован процесс взаимодействия пиридоксина гидрохлорида с ионами магния. Установлено, что в результате взаимодействия образуется малоустойчивое комплексное соединение, константа устойчивости - 3013,78 моль"1. Показано, что образование комплекса не мешает количественному определению пиридоксина гидрохлорида в лекарственном препарате методом ВЭЖХ.

Разработаны методики анализа препарата "Бишоф Плюс", позволяющие определять ионы магния, цинка, меди (II) и железа (II) при совместном присутствии. Проведена стандартизация лекарственного препарата "Бишоф Плюс".

Исследована стабильность лекарственных препаратов "Бишоф В6" и "Бишоф Плюс" и установлен срок годности в два года.

Практическая значимость результатов исследования. В результате исследования разработаны методики идентификации, определения посторонних примесей и количественного определения компонентов лекарственных препаратов "Бишофит энтеральный", "Бишоф Вб" и "Бишоф Плюс" химическими и физико-химическими методами. Методики характеризуются простотой выполнения, экс-прессностыо, высокой чувствительностью и позволяют достоверно

оценивать качество исследуемых препаратов.

Разработаны нормы качества и проведена стандартизация препаратов "Бишофит энтеральный", "Бишоф В6" и "Бишоф Плюс".

Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке нормативной документации на данные лекарственные препараты.

Степень внедрения. Работа выполнялась по договору №1 от 01.02.2001 г. с НИИ фармакологии Волгоградской медицинской академии: "Разработка фармакопейной статьи предприятия и лабораторного регламента на препараты "Бишоф Плюс", "Бишоф Вб" и "Раствор бишофита фармакопейный для энтерального приема" и регламента на них". По результатам исследований разработаны проекты фармакопейных статей предприятия и пояснительные записки на лекарственные препараты "Бишофит энтеральный", "Бишоф Плюс" и "Бишоф В6". Материалы переданы заказчику и после проведения комплекса доклинических испытаний будут направлены для рассмотрения в Департамент по контролю качества лекарственных средств и медицинской техники МЗ РФ. Положения, выдвигаемые на защиту:

- результаты изучения элементного состава "Бишофита энтерального";

- результаты стандартизации "Бишофита энтерального";

- выбор оптимальных условий УФ-спектрофотометрического и хроматографического определения пиридоксина гидрохлорида в лекарственном препарате "Бишоф В6";

- результаты изучения стабильности пиридоксина гидрохлорида в лекарственном препарате "Бишоф Вб" в присутствии различных стабилизаторов с целью обоснования состава;

- результаты стандартизации лекарственного препарата "Бишоф Вб", обоснование сроков его годности;

- результаты изучения взаимодействия пиридоксина гидрохлорида с ионами магния методом ВЭЖХ;

- методики количественного определения ионов магния, железа, меди и цинка в лекарственном препарате "Бишоф Плюс";

- результаты стандартизации лекарственного препарата "Бишоф Плюс", обоснование сроков его годности.

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на региональных научно-практических конференциях по фармакологии, фармации и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2001-2002 гг и на конкурсе молодых ученых, в рамках IX национального конгресса "Человек и

лекарство" (Москва, 2002 г.). По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических паук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских наук ПятГФА (номер государственной регистрации 01.9.800086..) в рамках проблемы "Фармация" секции №38 Ученого совета МЗ РФ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 154 страницах машинописного текста, содержит 47 таблиц, 22 рисунка, состоит из "Введения", "Обзора литературы", 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 156 источников, в том числе 67 иностранных, и приложения.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ АНАЛИЗА И НОРМ КАЧЕСТВА "БИШОФИТА ЭНТЕРАЛЬНОГО"

Для объективного подхода к обоснованию норм качества "Бишо-фита энтерального" использовались образцы бишофита, полученные из различных скважин Волгоградской области в разное время. Для стандартизации "Бишофита энтерального" согласно ОСТ 91500.65.001-00 были выбраны следующие параметры: описание, подлинность, плотность, показатель преломления, рН, посторонние примеси, микробиологическая чистота и количественное определение (табл. 1).

Согласно НД и литературным данным в бишофите могут присутствовать соли таких элементов, как кальция, натрия, калия, мышьяка, железа, марганца и тяжелых металлов. С целью подтверждения их содержания и для сравнительной оценки степени очистки был определен качественный и количественный элементный состав как самого бишофита, так и бишофита, полученного после очистки методами масс-спектрального, атомно-эмиссионного и титриметриче-ского анализа.

Исходя из полученных данных, устанавливали нормы содержания данных элементов в "Бишофите энтеральном".

Поскольку железо, мышьяк, марганец и тяжелые металлы находятся в бишофите в небольших количествах, согласно требованиям фармацевтического анализа анализировали их как примесные соединения.

Таблица 1

Показатели, нормы качества и методы анализа лекарственного препарата "Бишофит энтеральный"

Показатели качества Нормы качества Методы анализа х±дх 8*%

Описание Бесцветная прозрачная жидкость ГФ XI, вып. 1, с. 194

РН 5,0-7,0 потенциометриче-ский, ГФХ1, вып. 1, с. ИЗ

Плотность 1,290-1,335 ГФ XI, вып. 1, с. 21

Показатель преломления 1,4225-1,4270 рефрактометрический, ГФХ1, вып. 1, с. 29

Подлинность 1. положительная реакция на магний 2. положительная реакция на хлориды белый осадок белый осадок химическая реакция химическая реакция

Микробиологическая чистота должен соответствовать категории ЗВ ГФ XI, вып. 2, с. 193

Посторонние примеси 1. железо (не более 0,002%) 2. тяжелые металлы (не более 0,0005%) 3. мышьяк (не более 0,0002%) 4. марганец (не более 0,004%) 5. сульфаты (не более 0,4%) 6. бромиды (не более 0,21%) 7. иодиды (не более 0,0002%) 8. кальций (не более 0,7%) 9. натрий (не более 0,17%) 10. калий (не более 0,1%) ГФХ1, вып. 1, с. 169 ГФХ1, вып. 1,с. 171 ГФ XI, вып. 1,с. 173 ГФ X, ст. 383 гравиметрический аргентомегрический иодометрический комплексонометри-ческий пламенно-фотометрический пламенно-фотометрический 0,219±0,009 0,201±0,00175 0,000163± ±0,0047x10-3 0,359±0,079 0,359±0,079 0,0425±0,00123 ±4,11% ±0,87 % ±2,91% ±2,2% ±2,8% ±2,89%

Количественное определение магний (7,6 - 9,2%) комплексонометри-ческий 8,65±0,0279 ±0,32%

Испытания на примеси железа, мышьяка и тяжелых металлов проводили по общим фармакопейным методикам, позволяющим с помощью эталонов нормировать содержание данных примесей в препарате.

Для нормирования примеси ионов марганца в исследуемом препарате использовали методику, описанную в ФС на препарат магния сульфат.

Определение количественного содержания сульфат-ионов проводили гравиметрически по методике, основанной на образовании в кислой среде практически нерастворимого сульфата бария. Количественное определение бромид-ионов проводили методом аргенто-метрического титрования по Фаянсу. Содержание иодид-ионов определяли по методике иодометрического титрования, основанной на окислении иодид — ионов молекулярным бромом до иодат-ионов с последующим иодометрическим определением. Для определения содержания ионов кальция использовали метод комплексонометри-ческого титрования с индикатором мурексидом.

Для определения и нормирования содержания ионов натрия и калия в бишофите энтеральном был использован метод пламенной фотометрии. Измерения проводили на пламенном фотометре в пламени природного газа - воздуха (Рв=0,6 атм, Рг=70 мм) при длинах волн 770 нм (калий) и 589 нм (натрий).

При установлении норм содержания данных элементов в "Бишофите энтеральном" исходили из фактического содержания в препарате с учетом ошибок определения предлагаемых методик анализа (табл. 1).

Ионы магния определяли методом комплексонометрического титрования, установив их нормы содержания в пределах 7,6 - 9,2%.

Изучение стабильности "Бишофита энтерального" показало, что он соответствует разработанным нормам качества в течение 1 года хранения.

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ АНАЛИЗА И НОРМ КАЧЕСТВА, ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА "БИШОФВб"

Разработанный препарат "Бишофит энтеральный" послужил основой для создания лекарственного препарата "Бишоф Вб", являющегося аналогом зарубежного препарата "Магне Вб". Основными компонентами данного препарата являются "Бишофит энтеральный" и пиридоксина гидрохлорид. В качестве корригентов в состав препарата введены ванилин и сахарин.

Одним из этапов исследований по разработке методик стандартизации было изучение возможности использования УФ-спектрофотометрии для качественного и количественного определе-

ния пиридоксина гидрохлорида в исследуемом препарате. При изучении спектров поглощения пиридоксина гидрохлорида в 0,1 моль/л растворе кислоты хлористоводородной, воде, фосфатном буферном растворе (рН=7) и 0,01 моль/л растворе натрия гидроксида оказалось, что различная степень ионизации приводит к появлению различных спектров поглощения (рис. 1).

Спектры поглощения 0,002% раствора пиридоксина гидрохлорида

X, нм

1 - вода; 2 - фосфатный буферный раствор рН 7,0; 3-0,1 моль/л раствор кислоты хлористоводородной; 4 - 0,01 моль/л раствор натрия гидроксида рис. 1

В кислой среде пиридоксина гидрохлорид имеет одну полосу светопоглощения с максимумом при 291 нм; при увеличении рН наблюдается появление второго максимума в длинноволновой области, при этом интенсивность светопоглощения в коротковолновой области уменьшается.

Выбор оптимального значения рН среды для спектрофотометри-ческого определения пиридоксина гидрохлорида проводили с учетом его константы ионизации.

Методом потенциометрического титрования установлено, что пиридоксина гидрохлорид имеет две константы ионизации: рК|=4,9; рК2=9,5. На основании полученных значений констант ионизации было рассчитано процентное содержание ионизированной и молекулярной форм пиридоксина гидрохлорида в зависимости от рН среды (рис. 2).

Кривые зависимости содержания различных форм пиридоксина гидрохлорида от рН среды

% 100 -

80

60

40

20

0

о

7

рн

14

рис. 2

Пиридоксина гидрохлорид на 99,9% в виде нейтральной молекулы в растворах существует только при рН=7, а в виде сопряженной кислоты в растворах с рН<2.

Исследования показали, что раствор бишофита в кислой среде имеет полосу светопоглощения в УФ-области, тогда как в фосфатном буферном растворе с рН=7 светопоглощение бишофита отсутствует. Поэтому для спёктрофотометрического определения пиридоксина гидрохлорида в лекарственном препарате "Бишоф Вб" был выбран фосфатный буферный раствор с рН=7.

Кроме пиридоксина гидрохлорида и бишофита в состав препарата "Бишоф Вб" входят сахарин и ванилин, имеющие полосы поглощения в УФ-области, однако в аналитической области пиридоксина наблюдается только линейное поглощение ванилина с величиной оптической плотности 0,025 - 0,10.

Поэтому количественное определение пиридоксина гидрохлорида в препарате "Бишоф Вб" методом непосредственной спектрофо-тометрии затруднено. Однако максимумы пиридоксина гидрохлорида в присутствии ванилина не сдвигаются, поэтому возможно использование УФ-спектрофотометрии для идентификации пиридоксина гидрохлорида.

Для количественного определения пиридоксина гидрохлорида в препарате "Бишоф B¿" был предложен метод производной спектро-фотометрии. Для анализа использовали вторую производную. Рас-

чет проводили по методу "наименьших квадратов" с помощью полиномов Чебышева, используя "технику подвижной полосы". Шаг дифференцирования составил 4 нм.

Расчет количественного содержания пиридоксина гидрохлорида проводили по раствору рабочего стандартного образца (табл. 2). Относительная ошибка определения не превышает 0,9%, что позволяет сделать заключение о возможности использования метода производной спектрофотометрии в анализе препарата "Бишоф Вб".

Таблица 2

Результаты количественного определения пиридоксина гидрохлорида в лекарственном препарате "Бишоф В6"

Метод производной спектрофотометрии Метод ВЭЖХ

Х=0,205% Х=0,206%

Б2 = 310"7 Б2 = 47,5810'7

5Х=0,000707 8Х=0,002819

ДХ=0,002% ЛХ-0,007%

£„=±0,89% е0=±3,51%

Изучение стабильности пиридоксина гидрохлорида и определение содержания его продуктов деструкции в исследуемом препарате проводили методом ВЭЖХ.

При хроматографировании раствора рабочего стандартного образца пиридоксина гидрохлорид в условиях эксперимента выходил одним симметричным пиком со временем удерживания 12 минут (рис. 3).

При хроматографировании раствора препарата пик пиридоксина гидрохлорида (IV) претерпевал изменения, а, именно, наблюдалось его расщепление на два перекрывающихся пика (рис. 4).

Данные литературы, свидетельствующие о том, что пиридоксина гидрохлорид может вступать в реакцию взаимодействия с катионами двухвалентных металлов позволили предположить, что между ионами магния и пиридоксином происходит взаимодействие с образованием продукта, который фиксируется на хроматограмме в виде пика (V) со временем удерживания 14,3 минуты. Для нас представляло интерес изучить процесс взаимодействия пиридоксина гидрохлорида с ионами магния с помощью метода ВЭЖХ.

Экспериментально было установлено, что максимальное увеличение площади второго пика происходит при рН=5,0.

X рсмагогромма 0,001 М расшсзрагц5ипскама гифскггригю

X рсмпограмма грегерага "БииарВб"

О г

б

5 10 15

Время, мм

рис. 3

рис. 4

Методом переменной концентрации определили, что в зависимости от концентрации ионов магния площадь пика пиридоксина гидрохлорида уменьшалась, а площадь пика продукта взаимодействия увеличивалась (рис. 5). Точка насыщения на кривой отмечает отношение концентраций магний/пиридоксина гидрохлорид 1:1.

К риваа насыщения

М§/Руг

рис. 5

Анализ изменений площадей пиков, наблюдаемых при добавлении ионов магния к раствору пиридоксина позволил вычислить константу устойчивости продукта взаимодействия.

Предположив, что в результате взаимодействия пиридоксина с ионами магния образуется комплекс состава: Mg + Руг —> MgPyr; константу устойчивости данного соединения можно выразить уравнением:

к = [MgPyr]

[Pyr]-[Mg]'

Поскольку площадь пика является функцией концентрации S = f(C), путем последовательных преобразований уравнение для расчета константы устойчивости можно записать следующим образом:

S max - Si

К = S max

0.001

Cpyr -^LZSL. o.OOl ViCmg -SmaX"Si • 0.001 V

Smax } v Smax }

где: Smax - площадь пика 0,001 M раствора пиридоксина гидрохлорида, мм2;

S; - площадь пика непрореагировавшего пиридоксина гидрохлорида, мм2;

Сруг и Cmg - исходные концентрации пиридоксина гидрохлорида и ионов магния, моль/л. Подставляя в уравнение значения площадей пиков и исходных концентраций пиридоксина гидрохлорида и ионов магния рассчитали константу устойчивости комплекса. Она составила 3013,78 моль" Таким образом, установлено, что в лекарственном препарате "Би-шоф Вб" возможно существование пиридоксина гидрохлорида в виде малостабильного комплексного соединения с ионами магния.

Ввиду того, что НД на лекарственный препарат "Магне В6" рекомендует метод ВЭЖХ для количественного определения пиридоксина гидрохлорида, была изучена возможность использования метода ВЭЖХ в условиях образования комплексного соединения магния с пиридоксином.

При проведении предварительных исследований было установлено, что растворы рабочего стандартного образца пиридоксина гидрохлорида содержат примесь I (рис. 3), а в растворе "Бишоф В6" кроме пика пиридоксина гидрохлорида, наблюдалось наличие пика примеси I и еще двух дополнительных пиков, которые были идентифицированы нами как сахарин II и ванилин III (рис. 4). Дальней-

шая работа заключалась в поиске оптимальных условий хромато-графического разделения пиридоксина, примеси I, сахарина II и ванилина III. В качестве критериев оптимизации были выбраны время удерживания и коэффициент разделения пиков. В результате проведенных исследований были найдены условия для максимального разделения пиков.

Расчет содержания пиридоксина гидрохлорида проводили по раствору PCO. Относительная ошибка определения составила 3,5%. (табл. 2).

Сравнительная оценка двух методов анализа пиридоксина гидрохлорида: производной спектрофотометрии и ВЭЖХ по воспроизводимости показала, что вычисленное значение критерия Фишера больше, найденного по таблице:

р _ 0.00004758 97

0.000003

поэтому можно сделать вывод о том, что по воспроизводимости метод производной спектрофотометрии превосходит метод ВЭЖХ. В связи с этим было рекомендовано проводить количественное определение пиридоксина гидрохлорида в препарате "Бишоф Вб" методом производной спектрофотометрии. Однако метод ВЭЖХ позволяет более достоверно оценивать качество препарата в процессе хранения, он был включен в проект НД на лекарственный препарат "Бишоф В6" для определения содержания посторонней примеси.

Результаты количественного определения примеси пиридоксина гидрохлорида показали, что как в субстанции пиридоксина гидрохлорида, так и в лекарственном препарате "Бишоф Вб" содержание примеси составляет 0,4%. Относительная ошибка определения составила 3,6%.

Следующим этапом наших исследований явилось изучение стабильности препарата "Бишоф В6". Исследования стабильности препарата проводили методом "ускоренного старения" при температуре 60°С. Параллельно изучали стабильность 0,2% раствора пиридоксина гидрохлорида и образцов препарата, приготовленных без добавления бишофита. Поскольку бишофит содержит ионы, способные катализировать процессы окисления, препарат "Бишоф Вб" подвергался деструкции раньше раствора пиридоксина гидрохлорида и образцов препарата, не содержащих бишофит. В связи с этим были проведены исследования по выбору наиболее эффективного стабилизатора для препарата "Бишоф В6". При изучении влияния стабилизаторов использовали различные вещества, способные предотвращать процессы окисления: метабисульфит натрия, сульфит натрия,

аскорбиновую, лимонную, янтарную, глютаминовую кислоты, глицин, метионин, трилон Б, мочевину и их различные композиции. Приготовленные образцы термостатировали при температуре 60° С. Оценкой устойчивости препарата служило изменение окраски раствора, а также увеличение площади пика продукта деструкции и уменьшение площади пика основного вещества.

Результаты исследований показали, что наиболее эффективным стабилизатором является лимонная кислота. Для выбора оптимальной концентрации лимонной кислоты для стабилизации пиридокси-на гидрохлорида в лекарственном препарате "Бишоф В6" готовили растворы препарата с добавлением лимонной кислоты в интервале концентраций от 0,1-0,5%. Лучший стабилизирующий эффект достигался добавлением 0,3% лимонной кислоты. Срок годности препарата "Бишоф В6" составил 2 года.

ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА, РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ АНАЛИЗА И НОРМ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА "БИШОФ ПЛЮС"

Третьим этапом исследований явилась разработка методов стандартизации нового лекарственного препарата "Бишоф Плюс", который является аналогом зарубежного препарата "Береш Плюс".

Поскольку в медицинской практике используются препараты железа (II), раствор "Бишоф Плюс" готовили на основе сульфата железа (II). Однако железо (II) в растворах неустойчиво и легко окисляется до железа (III), поэтому препараты железа (II), в частности капли "Береш Плюс", рекомендуется применять в сочетании с аскорбиновой кислотой. Вводить аскорбиновую кислоту в состав препарата в качестве стабилизатора нецелесообразно, так как в водном растворе она легко разрушается.

В связи с этим были проведены исследования in vitro влияния аскорбиновой кислоты на процесс восстановления железа (III) до железа (И) в желудочном соке, в результате которых было установлено, что аскорбиновая кислота практически сразу восстанавливает железо (III) до железа (И) и поддерживает его в двухвалентном состоянии в течение двух часов, то есть времени необходимого для всасывания препарата в желудке. Проведенные исследования позволили рекомендовать включить в инструкцию по применению обязательное использование аскорбиновой кислоты при приеме лекарственного препарата "Бишоф Плюс".

Ввиду того, что ионы металлов входящие в состав препарата мо-

гут давать реакции с одними и теми же реактивами, были выбраны условия, которые позволяют проводить их идентификацию и количественное определение в присутствии других ионов.

Для идентификации компонентов препарата использовали специфические качественные реакции.

Количественное определение ионов магния в препарате проводили методом комплексонометрического титрования после осаждения ионов цинка, меди и железа двукратным избытком сульфида натрия. Ионы железа анализировали методом спектрофотометрии по цветной реакции с о-фенантролином. Определение ионов меди (II) проводили фотометрически по реакции образования аммиаката меди. Для количественного определения ионов цинка применяли метод экстракционной фотометрии, с использованием в качестве экстра-гента хлороформного раствора дитизона.

Спектр поглощения комплексного соединения железа (П) с о-фенантролином характеризуется максимумом при Л= 512 нм (рис. 6). Спектр поглощения аммиаката меди характеризуется наличием одного максимума при ?ь=610 нм (рис. 6). Измерение спектров поглощения хлороформных растворов дитизоната цинка показало, что раствор дитизоната цинка поглощает с максимумом при А=538 нм, однако в присутствии избытка реагента наблюдается наличие второго максимума при Х=605 нм (рис. 6).

Спектры поглощения комплексных соединений

О

1

3

0,2

0,4

0,6

0,8

400

500

600

700

800

рис. 6

1-железа (II) с о-фенантролином (0,0003%);

2-меди (II) с аммиаком (0,02%);

3- цинка с дитизоном (0,0002%).

Подчинение основному закону светопоглощения фотометри-руемых комплексов металлов с реагентами соблюдалось в следующих интервалах концентраций: 0,001-0,005 мг/мл ионов железа (рис. 7); 0,04 до 0,36 мг/мл ионов меди (рис. 7); 0,006 - 0,036 мг/мл ионов цинка (рис.7). Поэтому для количественного определения в качестве рабочей была выбрана концентрация ионов железа 0,003 мг/мл; ионов меди (II) - 0,2 мг/мл; ионов цинка - 0,015 мг/мл.

Градуировочные графики для определения ионов цинка (А), железа (Б) и меди (В)

и

С, мг/мл Б

0 0.001 0,002 0,003 0.004 0,005

С, мг/мл

в

О 0,06 0,12 0,18 0,24 0,3 0,36

С, мг/мл

рис. 7

Результаты количественного определения ионов металлов в препарате "Бишоф Плюс" показали, что относительные ошибки определения предлагаемых методик анализа находятся в пределах 0,23,3%, что позволяет использовать их для анализа (табл. 3).

Таблица 3

Результаты количественного определения ионов в препарате __"Бишоф Плюс"__

магний железо медь цинк

V, мл Х,% О Х,% О Х,% и Х,%

20,6 5,00 0,718 0,148 0,451 0,0205 0,712 0,155

20,6 5,00 0,726 0,130 0,444 0,0202 0,696 0,148

20,55 4,99 0,722 0,149 0,450 0,0205 0,716 0,157

20,45 4,97 0,734 0,152 0,446 0,0203 0,710 0,150

20,55 4,99 0,714 0,147 0,406 0,0197 0,708 0,153

20,5 4,98 0,725 0,150 0,434 0,0197 , 0,688 0,145

Метрологические характеристики:

Х=4,99 Х=0,149 Х=0,0202 Х=0,151

8Х=0,00118 8Х=0,000730 8Х=0,000129 Бх=0,000184

ДХ=0,01% ДХ=0,002% АХ=0,0003% ДХ=0,005%

8а=0,25% £.,= 1,3% Еа=1,5% £„=3,3%

Исследования стабильности препарата показали, что с течением времени, в частности после двух лет хранения наблюдалось помутнение раствора, что позволило установить срок годности препарата в 2 года.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучен качественный и количественный элементный состав "Бишофита энтерального". Установлены нормы качества "Би-шофита энтерального" по разделу рН (5,0-7,0), плотность (1,2901,335 г/см3), показатель преломления (1,4225-1,4270); содержание примеси железа (не более 0,002%), тяжелых металлов (не более 0,0005%), мышьяка (не более 0,0002%), марганца (не более 0,004%), сульфатов (не более 0,4%), бромидов (не более 0,21%), кальция (не более 0,7%), натрия (не более 0,17%), калия (не более 0,1%) и органические примеси. Количественное определение "Бишофита энтерального" предложено проводить по иону магния (7,6-9,2%).

2. Разработаны методики анализа и установлены нормы качества лекарственного препарата "Бишоф В6".

3. Для определения содержания посторонних примесей пиридок-сина гидрохлорида в препарате "Бишоф Вб" и содержания пири-

доксина гидрохлорида разработана методика ВЭЖХ. Относительная ошибка определения методики примеси составила ±3,7%, а определения пиридоксина гидрохлорида - ±3,5%.

4. Методом ВЭЖХ изучено взаимодействие пиридоксина гидрохлорида с ионами магния. Установлено, что в результате взаимодействия образуется малоустойчивое комплексное соединение с константой устойчивости 3013,78 моль"1. Образование комплекса не мешает количественному определению пиридоксина гидрохлорида.

5. Для количественного определения пиридоксина гидрохлорида разработан альтернативный метод производной спектрофото-метрии. Относительная погрешность определения предлагаемой методики составила ±0,9%.

6. Разработаны нормы качества и проведена стандартизация лекарственного препарата "Бишоф Плюс". Для установления подлинности препарата предложены качественные реакции, позволяющие идентифицировать компоненты препарата при совместном присутствии.

7. Для количественного определения ионов магния в препарате "Бишоф Плюс" разработана методика комплексонометрическо-го титрования после предварительного осаждения ионов меди (II), железа (II) и цинка сульфидом натрия. Относительная ошибка метода ± 0,3%.

8. Для количественного определения ионов железа (II), цинка и меди (II) предложены фотометрические методы анализа, позволяющие проводить определение с относительной ошибкой 1,33,3%.

9. Проведены исследования по выбору стабилизаторов и корриген-тов лекарственных препаратов "Бишоф В6" и "Бишоф Плюс". Установлено, что оптимальным стабилизатором изучаемых препаратов является лимонная кислота. В качестве корригентов выбраны ванилин и сахарин.

10. Проведено изучение стабильности препаратов "Бишофит энте-ральный", "Бишоф В6" и "Бишоф Плюс". Установлено, что "Би-

шофит энтеральный" соответствует разработанным нормам качества в течение 1 года в условиях экспериментального хранения, а препараты "Бишоф В6" и "Бишоф Плюс" в течение 2 лет.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ДИССЕРТАЦИИ

1. Стандартизация лекарственного препарата Бишофит энтеральный // Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгресса (9; 2002; Москва) - М., ООФ "Здоровье человека", 2002. - С. 633. (соавт. Компанцева Е.В., Спасов A.A.,Озеров A.A.)

2. Разработка методов анализа бишофита энтеральиого // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы междунар. Съезда (6; 4-6 июля 2002; Санкт-Петербург). - Санкт-Петербург, 2002. - С.520-521 (соавт. Компанцева Е.В)

3. Методы анализа компонентов раствора "Бишоф Плюс"// Хим.-фармац. журн. - 2001. - Т. 35, № 11.- С. 55-56. (соавт. Компанцева Е.В)

4. Стандартизация нового лекарственного препарата "Бишоф Плюс"// Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгресса (8; 2001; Москва) - М., ООФ "Здоровье человека", 2001. - С. 690. (соавт. Компанцева Е.В., Спасов A.A.)

5. Экстракционно-фотометрическое определение ионов цинка в лекарственном препарате "Бишоф Плюс" // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск, 2001. - С. 100. (соавт. Компанцева Е.В.)

6. Спектрофотометрическое определение железа (II) в лекарственном препарате "Бишоф Плюс" // Научно-практ. конф., посвященная 35-летию фарм. фак-та: "Достижения, проблемы, перспективы фарм. науки и практики" (2001; Курск): Материалы... - Курск, 2001. - С. 170-171. (соавт. Компанцева Е.В.)

7. Спектрофотометрическое определение витамина Вб в лекарственном препарате "Бишоф В6" // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): Мате-

риалы ... - Пятигорск, 2001. - С. 94.

8. Исследование взаимодействия пиридоксина гидрохлорида с ионами магния // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2001; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск, 2002.-С. 87.

9. Разработка методов анализа нового комплексного препарата би-шофита с пиридоксина гидрохлоридом // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы междунар. съезда (6; 4 - 6 июля 2002; Санкт-Петербург). - Санкт-Петербург, 2002. - С. 522-523