Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Технологические и биофармацевтические исследования лекарственных форм с рибоксином

од

На правах рукописи

ОРДЖОНИКИДЗЕ

МАНАНА КВАЧИЕВНА

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ С РИБОКСИНОМ.

Специальность 15.00.01 - технология лекарств и организация

фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ

на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1995

Работа выполнена в Научис-исследовательском институте фармации Министерства здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:"

кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник Л.В.Соллогуб

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

- доктор фармацевтических наук, профессор М.А.Балабудкин

- доктор фармацевтических наук, профессор С.А.Валевко ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Московская медицинская академия

васедании Диссертационного Совета Л 074.28.01 при Научно-исследовательском институте фармации ( г.Москва, ул.Красикова, 34).

С диссертацией мояио ознакомиться б библиотеке Научно-исследовательского института фармации.

им.й.М. Сеченова

Защита состоится

и

часов Не

Автореферат разослан

и

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д 074.23.01 кандидат фармацевтических наук,

старший научный сотрудник

Л.М.Боброва

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. К препаратам метаболической терапии относится пуриновый нуклеозид-инозин, который в странах СНГ известен под названием рибоксин, а за рубежом инозие-Р . Он повышает активность ферментов цикла Кребса и тем самым активизирует процессы жизнедеятельности в организме.

Рибоксин применяется главным образом для лечения врожденных и приобретенных сердечно-сосудистых заболеваний,при различных патологиях печени.

Встранах СНГ выпускаются таблетки рибоксина по 0,2 г покрытые оболочкой и 2Ж раствор для инъекций по 5 мл.

Указанные лекарственные формы предназначены для взрослых Запросы детских клиник России, в том числе Института педиатрии РАМН, Института педиатрии Ш Грузии, НИИ фармакохимии АН Грузии свидетельствуют о широком применении рибоксина и в детской практике. Однако; основной трудностью применения его в педиатрии в связи с отсутствием детских лекарственных форм,является болезненность инъекции,что вызывает чувство страха у детей.Кроме того, деление таблетки,предназначенной для взрослых на части связано с неточностью дозирования,нарушение целостности оболочки может привести к изменению биофармацевтических и клинических характеристик препарата.

В связи с этим у педиатров возникла необходимость в создании детских лекарственных форм с рибоксином (инозие-Р)*- ректальных суппозиториев, которые обладая рядом положительных свойств, могут применяться как в педиатрии,так в гериатрии,а также пероральных. - таблеток, предназначенных для детей до 12 лет.

ЦЕЛЬЮ ИССЛЕДОВАНИЯ является обоснование состава и разработка технологии лекарственных форм рибоксина для детей и взрослых:суппозиториев и таблеток эффективных и стабильных в условиях длительного хранения на основе комплексных технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований.

Для этого необходимо было решить следующие задачи:

- экспериментально обосновать выбор суппозиторных основ, обеспечивающих оптимальную технологию ректальных суппозиториев для детей и взрослых;

- изучить физико-химические и технологичские характеристики субстанции рибоксина и инозие-F;

- апробировать имеющиеся методики оценки основных показателей качества лекарственных форм рибоксина и при необходимости разработать новые или модифицировать существующие;

- определить взаимосвязь физико-химических и технологических свойств субстанций рибоксина и инозие-F с составом и технологией суппозиториев;

- исследовать физико-химические и структурно-механические показатели и стабильность разработанных суппозиториев с рибоксином и инозие-F в процессе хранения при различных температурных режимах;

- определить влияние суппозиторных основ на процессы высвобождения и всасывания рибоксина и инозие-F в опытах in vitro и в эксперименте на животных;

- изучить токсическое и местно-раздраздраающее действие суппозиториев с рибоксином;

- оценить качество и биодоступность таблеток рибоксина, выпускаемых промышленностью, экспериментально подобрать рациональный состав -табло ток . ■ рибоксину xjjJ/

- определить влияние вида лекарственной формы на фармако-кинетику и терапевтическую эффективность рибоксина;

-разработать НТД на суппозитории и детские таблетки рибоксина, и представить их в Фармакологический комитет Минздрав-медпрома РФ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЙ.На основании комплексных технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований разработаны научные основы создания рецептуры и технологии изготовления суппозиториев с рибоксином для детей и взрослых и таблетки для детей без оболочки, заключающиеся в изучении физико-химических и структурно-механических показателей суппозиториев с рибоксином 0,02 г и 0,2 г и определении влияния рибоксина на основные характеристики качества суппозиториях основ; выявлении зависимости состава и технологии суппозиториев от физико-технологических свойств двух модификаций субстанции рибоксина и инозие-F; обосновании влияния размера частиц, обеспечивающих максимальное высвобождение действующего вещества из основы /20 мкм/.

На основе изучения хроматографических свойств рибоксина и его метаболита гипоксантина методом ВЗЖХ с применением сорбента сепарон-С-18 выявлены оптимальные условия их разделения /скорость потока 50 мкл/мин> элюент-ацетонитрил и 0,03% раствор фосфорной кислоты /1:1/,которая положена в основу высокочувствительной методики количественного определения в плазме крови животных,с применением которой в опытах ir. vivo определена сравнительная биодоступность из различных лекарственных форм.Установлено, что степень биодоступности рибоксина в таблетках без оболочки на 88%, в суппозиториях на 62% выше

по сравнению с таблетками с оболочкой. Методом цитохимического анализа определена терапевтическая эффективность таблеток рибоксина и суппозиториев.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. По результатам проведенных исследований разработаны и внедрены:

-стабильные и эффективные суппозитории с рибоксином на липофильных основах по 0,02 г для детей и 0,2 г для взрослых , соответствующие требованиям ГФ XI (проекты ВФС на суппозитории, письмо N18 ОТ 29.03.95 г);

- состав, технология, методы анализа, технологическая схема производства (лабораторный регламент "На производство суппозиториев с рибоксином 0,02 г для детей", апробированный в АОЗТ "Биофармас"; акты наработки опытных партий суппозиториев с рибоксином 0,02 г и 0,2 г от 17.02.1994 г) .

-состав таблеток рибоксина 0,1 г без облочки для детей, (проект ВФС на таблетки рибоксина 0,1 г без оболочки согласовано с АО "Октябрь", акт наработки опытных партий таблеток рибоксина 0,1 г без оболочки от 5.03.1993 г).

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ:

- состав и технология лекарственных форм с рибоксином (инозие-Р) : суппозиториев и таблеток без оболочки;

- результаты исследования свойств двух модификаций субстанций рибоксина и инозие-Р.

-методики количественного анализа рибоксина в лекарственных формах и биожидкостиях.

- результаты изучения влияния рибоксина (инозие-Р) на физико-химические, структурно-механические показатели суппози-торных основ и кинетику высвобождения из суппозиториев;

- показатели оценки стабильности предлагаемых лекарствен-

ных форм рибоксина (иноэие-F);

- показатели бисдоступности и эффективности суппозиториев и таблеток с рибоксином (инозие-F) для детей и взрослых.

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 3 статьи и 1 тезисы.

АПГОБАЩЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийском симпозиуме: " Человек и витамины" (Москва.1993 г).«и II Всероссийском национальном конгрессе: "Человек и лекарство" (Москва, "l'3S5 г).

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Диссертационная работа выполнена в научно-исследовательском институте фармации МЗМП РФ в соответствии с планом научно-исследовательских работ (номер гос. регистрации 0192.0 017265! и Межведомственным советом по Фармации N 47 АМН РФ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ . Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав экспериментальных исследований, выводов, списка использованной литературы включающей 15G источников, у.ъ которых G4 иностранных авторов. Работа содержит 22 таблиц и 3 рисунков.Б приложении приведены материалы по внедрению.

Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, показана научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе( обзор литературы) представлены современны? данные о фармакологических свойствах рибоксина (инозиб-F), его фармакокинетике и существующих лекарственных формах,показаны преимущества использования ректальных лекарственных форм

б педиатрии.

Во второй главе дана характеристика объектов исследования (рибоксина и вспомогательных веществ).методов и приборов используемых в работе.Изложены результаты экспериментальной разработки методик количественного определения рибоксина (ино-зие-F) в лекарственных формах и средах растворения.

Третья глава содержит экспериментальные данные по физико-химическим и технологичеким исследованиям двух модификаций субстанций рибоксина (инозие-F),а также суппозиторных основ, по разработке научных основ состава и технологии суппозиториев с рибоксином для детей и взрослых,методом выливания на липо-фильных основах.Приведены результаты определения качества суппозиториев с рибоксином,оценена биодоступность в опытах in vitro.Установлены сроки и условия хранения предлагаемых суппозиториев для детей и взрослых.

Четвертая глава посвящена исследованию выпускаемых промышленностью таблеток для взрослых, разработке состава и технологии таблеток рибоксина для детей. Приведены результаты физико-химического и биофармацевтического анализа полученных таблеток, установлены сроки их годности.

Пятая глава включает исследования биодоступности в опытах in vivo и терапевтической эффективности различных лекарственных форм рибоксина : суппозитории, таблетки без оболочки и таблетки, покрытые оболочкой.

Приложение включает следующие материалы: проекты BIC на суппозитории с рибоксином по 0,02 г для детей и 0,2 г для взрослых, лабораторный регламент на суппозитории с рибоксином 0,02 г для детей, акты внедрения состава, технологии и наработки опытных партий суппозиториев, проект ВФС на таблетки ри-

боксина 0,1 г для детей,акты наработки опытных партий таблеток с рибоксином 0,1 г для детей без оболочки.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

1.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. В качестве объектов исследования использовались промышленные серии субстанций рибоксина (ФС 42-2069-83), производства Пензенского завода "Биосинтез" и инозие-F Японской фирмы "Морисита Фармацевтикал",которая соответствует показателям качества НТД на рибоксин. Рибоксин и инозие-F равноценны по фармакологическим свойствам.

При разработке лекарственных форм рибоксина использовались всмогательные вещества, разрешенные к применению в медицинской практике и отвечающие требованиям соответствующей нормативно-технической документации.

Упаковочный материал для суппозиториев:контурные упаковки из пленки поливинилхлоридной марки ЗП / ГОСТ 25250-82/.

Для исследования физико-химических и структурно-механических свойств субстанции рибоксина и инозие-F, суппозиторных основ, суппозиториев и таблеток с рибоксином (инозие-F) применялись методики ГФ XI изд.

Для идентификации и установления возможного взаимодействия между компонентами лекарственных форм, изучения их стабильности в процессе хранения, определения концентрации лекарственных веществ в диализате и биожидкостях использовали методы хроматографии в тонком слое сорбента (пластинки Силуфол УФ 254), спектрофотометрию на СФ 26 и высоэффективную жидкостную хроматографию (ВЗЖХ) на хроматографе "Миллихром-4".

Еиодоступность и фармакокинетику рибоксина из суппозиториев и таблеток исследовали в опытах in vitro и in vivo. Терапевтическую эффективность оценивали цитохимическим методом .

' Местноразражащее и токсическое действие изучали на кроликах с использованием фармакологических и морфологических методов исследования. Результаты экспериментальных данных подвергнуты статистической обработке по ГФ XI издания.

2. СОЗДАНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ СУППОЗИТОРИЕВ С РИБОКСИНОМ ДЛЯ ДЕТЕЙ И ВЗРОСЛЫХ.

Выбор объекта исследования обусловлен обращением НИИ педиатрии РАМН (письмо от 5.10.89), НИИ фармакохимии АН Грузии (письмо N218 от 30.11.90 г), НИИ педиатрии МЗ Грузии (письмо N475 от 4.12.90 г), о возможности разработки детских суппозиториев с рибоксином,Пензенского комбината медицинских препаратов "Биосентев" (письмо N423 от 13.06.91 г ), где отмечается, что разработка и выпуск новых лекарственных форм на основе рибоксина представляет большой интерес. Дозы рибоксина в детских суппозиториях и таблетках рекомендованы врачами-педиатрами.

Для обоснования состава и разработки технологии суппозиториев изучены физико-химические и технологические свойства 2-х модификаций субстанций рибоксина и инозие-Р.

Порошки рибоксина и инозие-Р отличаются по внешнему виду: инозие-Р - ярко белого цвета, рибоксин - белого с желтоватым оттенком. Рибоксин промышленной серии является полидисперсным препаратом, частицы имеют игольчатую удлиненную и палочкообразную форму, размер от 0,5 до 60 мкм. Инозие-Р также полидисперсный препарат, частицы имеют форму палочек, параллепипедов -и квадратов, размер от 2 до 160 мкм. Фракционный состав порошков, установленный с помощью ситового анализа показал, что рибоксин содержит 50£ крупных частиц, инозие-Р - 45% средних частиц.

Идентичность кристаллических структур порошков рибоксина

- 9 -

и инозие-Р определяли на дифрактометре "Дрон 1, Ш-фильтр.э/гб-сканирование, 10^20<45?щели 1.,1■Д•. мм. При сравнении полученных рентгенограмм видно, что порошки рибоксина и инозие-Р имеют кристаллические структуры, дифракционные картины которых отличаются друг от друга, что связано с различными путями их получения,различием методов выделения и кристаллизации.

При выборе состава суппозиториев изучали возможность использования липофильных суппозиторных основ широко применяемых на практике: масло какао, твердого жира, типа А и витепсола Н-15. Эти основы хорошо зарекомендовали себя в производстве. Для них характерны высокие технологические и фармацевтические показатели, легкость формирования при изготовлении суппозиториев, хорошее высвобождение лекарственных веществ. Они не раздражают прямую кишку, что особенно важно для детских суппозиториев.

Суппозитории готовили по общепринятой схеме выливания в форму с учетом физико-химических свойств препаратов и суппозиторных ог.нов, при строгом соблюдении температурного режима для каждой основы.Лекарственное вещество вводили в расплавленную основу по типу суспензии.При изготовлении суппозиториев с рибоксином и инозие-Р в дозе 0,02 г наблюдали равномерное распределение препаратов во всех выше названных основах, так как количество лекарственного вещества не превышало 5 % от общей массы суппозиториев, коэффициент замещения не учитывали. Суппозиториев с рибоксином и иноэие-Р в дозе 0,2 г готовили с учетом коэффициента замещения. Однако отмечалось неравномерное распределение лекарственного вещества в основе, так как при застывании происходила частичная седиментация рибоксина. С

инозие-Р этого явления не наблюдалось, что объясняется по нашему мнению меньшей объемной /насыпной/ массой порошка рибоксина по сравнению с инозие-Р(насыпная масса порошка рибоксина 0,32 г/см*,инозие-Р -0,73 г/сь?) .Для предотвращения этого процесса в основу твердый жир,тип А вводили эмульгатор N1 в количестве 1,2,5% от общей массы, как наиболее часто используемые композиции. Оптимальную концентрацию ПАВ определяли по однородности распределения лекарственного вещества и стабильности суппозиториев в процессе хранения.

Однородность распределения препарата на основе твердый жир, тип А наблюдалась при введении эмульгатора N1 в количестве 1%.

Критерием оценки стабильности изучаемых суппозиториев явились: внешний вид, температура плавления и затвердевания, гремя полной деформации (ВПД), кислотное, перекисное и йодное числа.

С целью исследования этих параметров в процессе длительного хранения (2 года - срок наблюдения) на каждой основе были приготовлены четыре серии суппозиториев с рибоксином (ино-зие-Р) в двух дозах: 0,02 г и 0,2 г. Одну партию каждой серии суппозиториев упаковывали в картонные коробки, предварительно завернув суппозитории в парафинированную бумагу, другую - в пленку поливинилхлоридную (ПВХ). Каждая партия в свою очередь подразделялась на две группы: одна из которых хранилась в условиях комнатной температуры +20+2°С (Т2), другая в холодильнике при температуре +3-5 (Т1).

Результаты исследований суппозиториев с рибоксином в дозах 0,02 г и 0,2 г представлены в табл.1. При визуальном наблюдении внешний вид, запах не менялись за наблюдаемый период.

Таблица 1.

Физико-химические и структурно-механические показатели суппозиториев

"плацебо" и суппозиториев с рибоксином в процессе хранения (п=5).

Показатели

Суппозиторная основа

Масло какао

Начальные показатели

плацебо"

Через Т1 I

года 12

с рибоксином 0,02 г и 0,2 г

Твердый жир, тип А

Начальные показатели

"плацебо"

Через 2 года Т1 I Т2

с рибоксином 0,02 г и 0,2 г

Твердый жир тип.А с IX эмульгатора N1 Начальные показатели

"плацебо"

Через 2 года Т1 I Т2

с рибоксином 0,02 г и 0,2г

Витепсол Н-15

Начальные показатели

"плацебо"

Через 2 года И I Т2

с рибоксином 0,02 г и 0,2 г

Т затвердевания, С

Т плавления, °С.

Твердость г/суп.

ВПД, мин.

Кислотное число

Йодное число

Перекис-ное число

24,5 24,7 24,9 25,3 30,0 30,1 30,6 31,9 30.2 29,5 30,5 31,1 30,0 30,0 30,1 32,3 31,1 31.4 32,1 32,3 34,8 34,8 35,0 35,6 34,9 34,4 35,0 35,7 35,0 35,0 35,0 35,4

3500 3300 3700 3600 2100 2500 3100 2700 2400 2500 2800 2700 4800 4800 4900 5400

4-5 4-5 5-6 6-7 5-6 5-6 7-8 7-8 4-5 6-7 7-8 8-9 6-7 6-7 11-12 11-12 1,71 1,71 1,73 1,78 0,28 0,28 0,37 0,39 0,94 0,94 0,95 0,99 0,106 0,106 0,108 0,110

29,07 29,07 29,03 29,00 12,01 12,01 11,98 11,87 22,67 22,64 22,64 22,63 2,5 2,5 2,5 2,3

0,007В 0,0061 0,0061 0,006 0,0045 0,0045 0,0037 0,0033 0,0065 0,0064 0,0056 0,0048 0,0015 0,0015

В процессе хранения при различных условиях температура затвердевания, плавления, твердость, кислотное и йодное числа практически не изменялись на всех основах. ВХЩ у суппозиториев на основе Витепсол Н-15 через 2 года возрастало в 2 раза при обоих режимах хранения. Перекисное число уменьшалось к концу второго года хранения при комнатной температуре.

Одновременно были проведены исследования по изучению влияния условий и сроков хранения на количественное содержание рибоксина в суппозиториях, приготовленных на различных основах. Количественное определение проводили спектрофотометричес-ким методом. Результаты определения представлены в табл.2.

Таблица 2.

Количественное содержание рибоксина в суппозиториях в процессе хранения.

Объект исследования Срок наблюдения . Содержание рибоксина

доза в 1 0,2 г зуппозитории 0,02 г

Т1 Т2 Т1 Т2

Суппозитории на масле* какао

Начальные

Через 2 года

Суппозитории Начальные на твердом

жире, типе А Через 2 года

Суппозитории на твердом жире, типе А с 1% эмульгатором N1 Суппозитории на витепсоле Н-15

Начальные

Через 2 года

Начальные

П ПППС | ГУ ппмп.

и , ¿ЧУН-и I и , си I ит

0,0009" 0,0009

0,2018+ 0,2062+

0,0011" 0,0011

0,2009+ 0,2001+

0,0008" 0,0009

0,2007+ 0,2004+

0,0009" 0,0008

0,1986+ 0,1996+

0,0005" 0,0002"

0,1977+ 0,1990+ 0,0010" 0,0002"

0,1990+ 0,2040+

0,0011" 0,0001"

0,0200+ 0,и1УУ+ 0,0001" 0,0002"

0,0195+ 0,0191+ 0,0002" 0,0004" 0,0195+ 0,0204+ 0,0001" 0,0002"

0,0191+ 0,0204+ 0,0002" 0,0004" 0,0216+ 0,0201+ 0,0001" 0,0004"

0,0210+ 0,0201+ 0,0005 0,0001 0,0197+ 0,0196+ 0,0001" 0,0002"

- 13 -

Как видно из данных табл.2 количественное содержание рибоксина в суппозиториях находилось в пределах допустимых норм в течение двухлетнего хранения при различных условиях. Подобные результаты получены и для суппозиториев с инозие-Р 0,2 г и 0,02 г.

Для обнаружения возможного процесса деструкции рибоксина в суппозиториях после 2-х лет хранения был применен метод хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках "Силуфол-УФ 254". Подвижная фаза: спирт изопропиловый .раствор аммиака концентрированный и вода (7:1:2).

На пластинки наносили стандартные растворы рибоксина, гу-анозина и гипоксантина. Наличие двух последних свидетелей объясняется тем, что они в количестве до 0,7% присутствуют в субстанции (ФС 42-2069-83).

На хроматограммах водных извлечений из суппозитории с рибоксином наблюдались две зоны рибоксина с НГ =0,58-0,60 и гипоксантина с 1^=0,74-0,76. При этом величина зоны гипоксантина не превышала допустимую,а зона гуанозина не наблюдалась.Следовательно,можно сделать заключение о стабильности лекарственных форм при хранении.

Одним из факторов определяющих биодоступность суппозиториев является интенсивность высвобождения из них лекарственных веществ, которая является также одним из критериев выбора оптимального состава суппозиториев.

Кинетику высвобождения рибоксина из суппозиториев изучали

методом равновесного диализа по Крувчинскому через полупрони-

2

цаемуга мембрану толщинои 50 мкм, площадью 8 мм при температуре +37 °С.

- 14 -

В предварительных опытах было показано, что рибоксин, как и инозие-Р, наиболее полно высвобождается в очищенной воде. Поэтому оптимальной средой высвобождения была выбрана вода очищенная.

Пробы ДЛЯ анализа отбирали 0,5; 1; 2; 3; 4; 5 и В часов. Содержание препарата в диализате определяли спектрофотометри-чески на спектрофотометре СФ-26.Результаты исследования приведены в табл.3.

Таблица 3.

Кинетика высвобождения рибоксина из суппозиториев в зависимости от вида основы и от концентрации ПАВ

Суппозиторная основа

Концентрация препарата в диализате в % за время, час.

0,5

Доза 0,02 г

Масло какао 13,0 22,0 39,0 48,0 61,0 78,0 99, 0

Витепсол Н-15 22,0 36,0 65,0 73,0 76,0 78,0 79, 0

Твердый жир тип А

(чистый) 20,0 39,0 66,0 77,0 81,0 85,0 101, 0

Доза 0,2 Г

с 1% эмульгатором N1 20,0 40,0 68,0 79,0 85,0 92,0 100, 0

с 2% 18,0 39,0 65,0 72,0 79,0 88,0 97, 0

с 5% 15.0 29.0 43.0 ВВ.О fifi.fl 71 п 74 п

масло какао 16,0 38,0 62;о 7о;о 8б|6 89^6 эз; 0

Витепсол Н-15 15,0 32,0 54,0 66,0 74,0 88,0 91, 0

,Из полученных данных следует, что на скорость высвобождения рибоксина из суппозиториев влияние оказывает природа основы. Более полное и интенсивное высвобождение препарата наблюдается из суппозиториев, содержащих 0,02 г, приготовленных на основах твердый жир тип А и масло какао из суппозиториев , содержащих 0,2 г рибоксина - из основ твердый жир, тип А с 1% эмульгатора N1 и масло какао.

Скорость и полнота высвобождения рибоксина зависят также от степени дисперсности порошка субстанций.

Изучение влияния дисперсности порошков рибоксина и ино-зие-F на биодоступность в опытах in vitro было проведено на суппозиториях, содержащих промышленные серии субстанции, а также из фракций с размерами частиц 50, 40, 30 и 20 мкм, полученных после ситового анализа. Условия диализа были идентичны вышеизложенным. Результаты эксперимента приведены в табл.4.

Таблица 4.

Кинетика высвобождения рибоксина и инозие-F из суппозиториев.

Суппозитории с размерами частиц препара -та, мкм. Концентрация препарата в диализате в X за время, час.

0,5 1 о 3 ю 6

С рибоксином 50 40 30 20

С инозие-F 50 40 30 20

8,0 11,0 15,0

19,0 11.0 23,0

32,0 40,0 42,0

26,0 пп п со, и

22,0

48,0

45,0 50,0 63,0 68,0

47,0 54,0 53,0 74,0

65,0 65,0 78,0 83,0

70.0 68,0 87,0 92,0

84,0 86,0 86,0 88,0 97,0 100,0 98,0 100,0

66,0 75,0 87,0 100.0 72,0 87,0 96,0 100,0 74,0 88,0 96,0 100,0 91,0 101,0 101,0 100,0

Данные табл.4 показывают,что интенсивность высвобождения рибоксина возрастает по мере увеличения степени дисперсности, достигая максимума при 20 мкм.Поэтому целесообразно при приготовлении суппозиториев с рибоксином применять порошок с размерами частиц 20 мкм.

Суппозиторные основы и суппозитории с рибоксином были испытаны на микробиологическую чистоту как после приготовления,так и в процессе хранения.Исследования показали отсутствие роста микроорганизмов при различных температурных режимах.

- 16 -

Гистологические изучение местно-раздражающего действия приготовленных суппозиториев показало,что во всех применяемых дозах не обнаружены какие-либо отклонения в слизистой, подслизистой и мышечной ткани прямой кишки кроликов.

Изучение острой и хронической токсичности суппозиториев показало отсутствие отклонения в общем состояние животных, получавших суппозитории, а также в гистологической картине внутренних органов по сравнению с контролем.

Проведенные технологические, биофармацевтические, микробиологические и морфологические исследования свидетельствуют о возможности создания суппозиториев с рибосином (инозие-Р) для детей и взрослых. Рекомендованы следующие составы суппозиториев: для детей

Рибоксина (инозие-Р) - 0,02 г

Твердый зшр, тип А - достаточное количество

или для получения суппозито-

масло какао риев массой 1,33-1,40 г.

для взрослых Рибоксина (инозкэ-Р) - 0,2 г Твердый жир, тип А - достаточное количество с 1% эмульгатора N1 для получения суппозито-или масло какао риев массой 1,42-1,45 г.

3. СОЗДАНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ ТАБЛЕТОК РИБОКСИНА ДЛЯ ДЕТЕЙ.

Выпускаемые в настоящее время медицинской промышленностью таблетки рибоксина по 0,2 г покрытые оболочкой применяются для взрослых и по дозировке охватывают возрастную группу больных детей с 12 лет. В связи с этим,возникла необходимость в создании таблеток для детей до 12 лет.

проведена оценка технологических и биофармацевтичес-

ких показателей таблеток рибоксина 0,2 г покрытых оболочкой, производимых АО "Октябрь". По таким качественным показателям как количественное содержание препарата в таблетке, средняя масса, время распадаемости, исследуемые образцы таблеток удовлетворяли требованиям ФС 42-2269-83. Однако, они не соответствовали требованиям ГФ XI по "Растворению". На приборах "вра-щаюшдяся корзинка" и "Сарториус" не удается получить стабильные удовлетворительные результаты по растворению. Оказалось, что для разрушения оболочки, которая разбухает и придает таблетке сферическую форму не хватает механического воздействия. Увеличение скорости вращения корзинки до 200 об/мин. и применение различных сред: очищенная вода, 0,1 н раствор хлористоводородной кислоты, 0,1 н раствор уксусксй кислоты, 3% раствор гидрокарбоната натрия рН 8,0, фосфорный буферный раствор рН 7,6; а также 0,1 н раствор хлористоводородной кислоты + 3% раствор гидрокарбоната натрия не дали положительных результатов.

Учитывая полученные результаты, а также физико-химические свойства рибоксина : стабильность, устойчивость в кислой среде желудка, отсутствие вкуса и запаха, низкая токсичность, при разработке состава и технологии таблеток для детей мы решили остановиться на следующем составе таблеток рибоксина:

Рибоксина (100 %) - 0,1 г. Крахмал картофельный - 0,02705 г.

Сахар

Метилцеллюлоза

- 0,00500 г.

- 0,0016 г.

Кислота стеариновая - 0,00135 г.

- 18 -

Данный состав аналогичен с ядром таблеток промышленного производства.Табдетки рибоксина (инозие-Р) в дозе 0,1 г без оболочки были приготовлены на РТМ-12 и имели плоскоцилиндрическую форму с диаметром 7 мм, средняя масса 0,135 г.Таблеточная масса легко пресовалась, приготовленные таблетки имели внешний вид.отвечающей требованиям ГФ XI изд.

Для сравнения были приготовлены таблетки,содержащие 0,1 г рибоксина (инозие-Р), покрытые пленочной оболочкой следующего состава: метилцеллюлозы,твин-80,титана двуокиси и пигментной, воска пчелиного,пиразолонового желтого.Этот же состав оболочки имеют и промышленные таблетки рибоксина 0,2 г.

Ядра таблеток с рибоксином в дозе 0,1 г имели двояковыпуклую форму диаметр 7 мм и средняя масса 0,135 г. Пленочное покрытие ядер проводили в кипящем слое на лабораторной установке "Глатт" из водного раствора метилцеллюлозы, масса таблетки с оболочкой составлял 0,145 г.

Полученные образцы таблеток были исследованы в соответствию! с требованиями ГФ XI изд. Результаты исследования представлены б табл.5.Установлено, что все исследуемые образцы имели удовлетворительные технологические характеристики.

Проведено исследование кинетики растворения /высвобождения/ обоих видов таблеток.Установлено,что рибоксин из таблеток без оболочки полностью высвобождался за 15 минут, а из таблеток покрытых оболочкой впервые 25 минут интенсивность высвобождения довольно низка, что объясняется наличием оболочки, через 30 минут концентрация препарата в растворе резко возрастает, достигая однако только 65% череь «5 минут, что не соответствует статье растворения ГФ XI. Аналогичные результаты получены на приборе "сариториус",коэффициент корреляции между

данными этих приборов равен 0,99.На рис.1, представлены кривые кинентики растворения рибоксина из таблеток без оболочки и покрытых оболочкой.

Кинетика растворения рибоксина из таблеток

100-1 „ ' ^-----

X. 0

90 -| // 2

//

5 10 15 20 25 30 35 40 45 t мин.

1-таблетки без оболочки (вращающаяся корзинка);

2-таблетки без оболочки (сарториус);

3-таблетки покрытые оболочкой (вращающийся корзинка);

4-таблетки покрытые оболочкой (сарториус).

Рис.1.

Изучение влияния сроков хранения на качество таблеток рибоксина (инозие-F) нового состава в условиях естественного хранения показало, что таблетки остаются стабильными по основным показателям качества и биодоступности в опытах in vitro (табл.5).

Полученные результаты позволяют рекомендовать для внедрения таблеток рибоксина (инозие-F) 0,1 г для детей без пленочного покрытия, что даст в свою очередь и большой экономический эффект.

Таблица 5.

Показатели качества рибоксина и инозие-Р 0,1 г без оболочки покрытые оболочкой в пэоцессе хранения в естественных условиях (п=10)

Таблетки

Найдено рибоксина,

Средняя { Прочность. Распадаемость | Истираемость) Растворение

! I X + гг., г. масса,г 1 ! 1 н- ! мин. 1 «V ; * !

рибоксина Начальные Таблетки 0,1006+0,0005 без оболочки 0,134+0,0008 28,58 5-3 0, 36 за 15 мин 99,10

Через 2 года 0,1000+0.0007 0,125^0,0005 29,60 5-8 0, 36 99,70

инозие-Р Начальные 0,1034+0.0002 0,135+0,0006 23,95 3-5 0, Л Г1 ЧГ.- 99,98

Через 2 года 0,1017+0,0006 0,135+0,0009 24,76 3-7 0, 40 100,01

с рибоксином Начальные Таблетки 0,1006+0,0005 покрытые оболочкой 0,143+0,0003 9-14 за 45 мин 61

с инозие-Р

Начальные 0,1034+0,0002 0,145+0,0006 -- 8-12 — 65

- 21 -

4.ОЦЕНКА БИОДОСТУПНОСТИ В ОПЫТАХ IN VIVO И ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ РИБОКСИНА.

Для оценки биодоступности рибоксина из различных лекарственных форм: суппозитории, таблетки без оболочки и таблетки покрытые оболочкой проведены фармакокинетические исследования на трех группах кроликов-самцов породы шиншилла массой 2,5-3,0 кг.

После ректального и перорального введения рибоксина в дозе 20 мгУмл через определенные промежутки времени отбирали пробы крови, в которых по разработанной нами методике методом ВЗЖХ (чувствительность определения 0,1 мкг/мл) определяли концентрацию рибоксина и его метаболита гипоксантина. Фармакокинетические показатели - максимальная концентрация препарата в плазме крови (С max), время достижения Сгпах - (tmax), площадь под кривой концентрация время (AUC) и степень биодоступности (F) представлены в табл.6.

Таблица 6.

Фармакокинетические показатели суммы рибоксина и гипоксантина для различных лекарственных форм(п=5).

Лекарственная форма Сшах. мкг/мл (Х±ш) tnax, мин. AUC, мкг/мл.ч F %

Таблетки

покрытые обо- 53,2+3,4 45 87,6 100

лочкой

Таблетки без 132,3+6,8 15 164,8 183

оболочки

Суппозитории 100,2+7,1 ^ с 141,7 161

Из данных табл.6 следует, что перспективными лекарственными формами с рибоксином являются ч-сиЗлетки без оболочки и суппозитории, так как их биодоступность составляет 188% и 161% соответственно, по сравнению с биодоступностью таблеток покры-

тых оболочкой, принятый за 100%.

Терапевтическую эффективность разработанных лекарственных форм оценивали цитохимическим методом по изменению активности ферментов, катализирующих обменные процессы в цикле Кребса -сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и <^-глицерофосфатдегидрогеназы - (=»■--ГФДГ) на 3-х группах добровольцев по 5 человек в каждой группе, которым вводили суппозитории с рибоксином по 0,2 г на твердом жире типа А с 1% эмульгатора N1 и по 2 таблетки по 0,1 г без оболочки и покрытые оболочкой. Для сравнения исследовали мазки крови контрольной группы (3 человека) не получавших препарат. Наблюдение проводили в течение 10 дней. Наибольшее увеличение активности СДГ и сА-гфдг было на 5-й день при применении таблеток без оболочки и суппозириев.

Таким образом, на основании биофармацевтичеоких и цитохимических исследований подтверждена эффективность суппозиториев и таблеток без оболочки с рибоксином.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны состав и технология суппозиториев с рибоксином для детей к взрослых с учетом физики-химических и технологических свойств суппозиторных основ и лекарственного вещества.

2. Изучена стабильность суппозиториев с рибоксином по 0,02 г и 0,2 г приготовленных на основах масло какао,твердый жир тип А чистый и с добавлением 1 % эмульгатора N1, и витеп-сола -Н 15 , в процессе хранения при разных температурных режимах. Установлен срок годности 2 года на основах масло какао и твердый жир тип А чистый и с добавлением 1 % эмульгатора Ш,при температуре +3 -5°С.На основе витепсолН-15 время полной деформации и твердость возрастали в 1,5 - 2 раза.

3. Методом равновесного диализа определена кинетика высвобождения лекарственного вещества из суппозиториев.Показано, что наиболее полное и интенсивное высвобождение препарата наблюдалось из основ твердый жир тип А чистый и с добавлением 1% эмульгатора N1. За 2 часа высвободилось 66%, а за 6 часов 95-100% лекарственного вещества.Изучено влияние дисперсности порошка рибоксина (инозие-Р) на интенсивность высвобождения. Показано,что с уменьшением размера частиц препарата до 20 мкм интенсивность высвобождения возрастает.

4.Гистологическое изучение внутренних органов показало отсутствие токсического и местнораздражающего действия суппозиториев с рибоксином на липофилышх основах.

5. На основании экспериментальных и теоретических исследований предложен научно-обоснованный состав таблеток рибоксина (инозие-Р) по 0,1 г для детей. Изучены физико-химические, технологические характеристики и стабильность приготовленных таблеток. По всем показателям качества таблетки рибоксина 0,1 г. без оболочки соответствуют требованиям НТД и ГФ XI изд .

6. Разработана методика ВЗЖХ- анализа гипоксантина и рибоксина в плазме крови животных с чувствительностью определения 0,1 мкг/мл.На основе предложенной методики анализа проведено изучение биологической доступности рибоксина из различных лекарственных форм. Установлено, что суммарные максимальные концентрации рибоксина и гипоксантина из таблеток без оболочки и суппозиториев практически одинаковы (132 мкг/мл и 100 мкг/мл соответственно) и достигаются через 15 минут после введения. Относительная биодоступность их составляет соответственно 188% и 161% по сравнению с биодоступностью таблеток покрытых оболочкой, принятой за 100%.

7.Составлена и направлена в Фармакологический комитет Минздравмедпрома РФ проект ВФС на суппозитории с рибоксином 0,02 г для детей и 0,2 г для взрослых.Разработан лабораторный регламент, на производство детских суппозиториев, утвержденный АОЗТ "Биофармас",где наработаны опытные партии суппозиториев.

Технология и состав таблеток рибоксина 0,1 г переданы на АО "Октябрь", где наработаны опытно-промышленные серии.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Курков. В., АлшинМ.Т., Соллогуб Л. В., Орджоникидзе М.К..Абрамович Р.А.Анализ индивидуальной рецептуры суппозиториев и выявление прописей для внутриаптечной заготовки.// Фармация, N5,1993 Г, С.43-45

2.0рджоникижае М.К., Соллогуб Л.В., Киселева Г.С., Алюшин М.Т..Цагарейшвили Г.В. Создание и исследование в опытах in vitro суппозиториев с рибоксином для детей и взрослых.//Фармация ,N 2, 1994 Г, С.25-27.

З.Орджпникижае М.К., Соллогуб Л.В..Дементьева М.Н.,Можайский A.M. Экспериментальное изучение биологической доступности рибоксина из различных лекарственных форм.//Научные труды НЖФ, том XXXII, Актуалные проблемы фармацевтической технологии, М. 1994, С.82-85.

4.Киселева Г.С.,Соллогуб Л.В., Шиценко В.М., Орджоникидзе М.К..Усманов У.X.Фармацевтические,биофармацевтические и клинические аспекты детских лекарственных форм препавратов метаболического действия //I всероссийский национальный конгрес "Человек и лекарство" (тезисы),Москва,1995 г.

гил мпс 3.325 т.80 - 05 г.