Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Разработка состава и технологические исследования наружных лекарственных форм с димебоном

На правах рукописи

КОРЯНОВА КСЕНИЯ НИКОЛАЕВНА

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НАРУЖНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ С ДИМЕБОНОМ

14.04.01 — технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

18 ИЮЛ №

005531547

Пятигорск — 2013

005531547

Работа выполнена в Пятигорском медико-фармацевтическом институте -филиале государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: Степанова Элеонора Фёдоровна

доктор фармацевтических наук, профессор,

Официальные оппоненты: Панкрушева Татьяна Александровна

доктор фармацевтических наук, профессор, ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Минздрава России, заведующая кафедрой фармацевтической технологии

Сысуев Борис Борисович

кандидат фармацевтических наук, доцент, ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России, директор учебно-производственной аптеки

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России

Защита состоится 11 июля 2013 г. в 10.00 часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.09 при ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России по адресу: 357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

Автореферат разослан £ июня 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного / Компанцева

совета Д 208.008.09 /^у7 Евгения Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Лечение и профилактика клинических проявлений аллергии является одним из актуальных вопросов современной медицины, которые имеют определенное социальное значение. По данным ВОЗ, аллергические заболевания сегодня занимают одно из лидирующих мест в структуре заболеваемости, при этом число больных увеличивается.

К группе аллергодерматозов относятся крапивница, атопический дерматит, отек Квинке, встречающиеся, в среднем, у 20 процентов больных аллергическими заболеваниями. Наиболее распространенными в общей структуре аллергических болезней кожи является атопический дерматит и хроническая крапивница.

Для лечения аллергических реакций, как правило, используют комбинированную терапию, заключающуюся в приеме пероральных и наружных лекарственных средств антиаллергического действия. К ним относятся Нг антигистаминные, антисеротониновые и антибрадикининовые соединения, антихолинергические препараты, однако терапевтический эффект этих средств нередко отсутствует даже при использовании их в полном объеме, и это вызвано в том числе недостаточной комплексностью лечения, и прежде всего отсутствием необходимых наружных лекарственных форм. Применение же при лечении глюкокортикоидных гормонов не всегда оправдано, так как достижение желаемого результата сопровождается возможностью осложнений.

Ассортимент наружных лекарственных форм противоаллергического действия составляют, в основном лекарственный средства, которые чаще всего производятся за рубежом. Поэтому разработка новых дерматологических лекарственных форм отечественного производства является актуальной задачей.

Одним из отечественных лекарственных средств антиаллергического действия является димебон, который в настоящее время представлен на фармацевтическом рынке России лишь одной лекарственной формой -таблетками. Создание же наружных лекарственных форм димебона обеспечит возможность их выбора и расширит фармакологический спектр данного

лекарственного средства отечественного производства, что несомненно важно для лечения и профилактики различных аллергических проявлений.

Степень разработанности темы. Димебон является отечественным лекарственным средством, основное направление действия которого заключается в блокировании воспалительных процессов аллергической этиологии. Так как димебон существует пока только в таблетированной форме, предстояло разработать структуру и дизайн исследований для создания наружных лекарственных форм с димебоном. Перспективность разработки наружных лекарственных форм с димебоном обусловлена возможностью их использования как в симптоматической, также и в комбинированной терапии аллергических проявлений кожи, а также расширением фармацевтического рынка антигистаминных лекарственных средств для наружного применения.

Уровень разработки данной темы потребовал дополнительной её конкретизации в виде создания оригинальных лекарственных форм для наружного применения - геля с димебоном и геля с димебоном микрокапсулированным, что и было осуществлено в настоящей диссертационной работе.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилась разработка состава наружных лекарственных форм димебона - геля и геля, содержащего димебон в микрокапсулах, оценка их качества и фармакологические исследования.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

- провести технологические и биофармацевтические исследования in vitro по выбору оптимальных вспомогательных веществ для наружных лекарственных форм димебона;

- разработать состав и технологию геля с димебоном и геля димебона с микрокапсулами;

- осуществить стандартизацию разработанного лекарственного препарата и установить его сроки годности;

— провести предварительные фармакологические исследования разработанных гелей;

— разработать нормативную документацию на гель с димебоном.

Научная новизна заключается в том, что на основании биофармацевтических исследований обоснован состав и технология наружных лекарственных форм димебона, предназначенных для лечения аллергических поражений кожи. Проведенные реологические исследования полученного геля показали его технологичность при производстве, возможность использования для него в качестве упаковки тубы, а также легкость нанесения на кожу. На основании проведенных исследований были разработаны технологические схемы гелей, включающие ряд особенностей: условия приготовления основы-носителя, а также режим микрокапсулирования и сушки; установлены валидационные характеристики для основных технологических этапов производства гелей. Обоснованы показатели и нормы качества разработанных гелей, установлен срок годности традиционного геля с димебоном. Методики количественного определения димебона в предложенном геле адаптированы к данному объекту и валидированы. Проведены фармакологические исследования разработанных гелей, показавшие противовоспалительную и регенерирующую активность лекарственных препаратов, изучено их токсическое и раздражающее действие.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработаны наружные гели с димебоном для лечения и профилактики аллергических поражений кожи, что позволяет облегчить течение болезни и улучшить качество жизни людей, страдающих этим заболеванием. Впервые разработанные гели противоаллергического действия, содержащие димебон в виде микрокапсул, подтверждают возможность использования таких эффективных носителей как микрокапсулы в наружных лекарственных формах для обеспечения их пролонгированности. Практическая значимость:

1. На предложенный гель разработаны и апробированы ФСП (ОАО «Ирбитский химико-фармацевтический завод», г. Ирбит, 19.10.2011 г.) и

лабораторный регламент (ФГУП «Научно-исследовательский институт технологии медицинских препаратов», г. Екатеринбург, 02.11.2011).

2. Получены акты внедрения в производственный процесс результатов исследований, отражённых в ФСП и лабораторном регламенте (ОАО «Тюменский химико-фармацевтический завод», г.Тюмень, 28.11.2011 г.). Методология и методы исследований. В работе использованы физико-химические (спектрофотометрия, тонкослойная хроматография, определение рН), технологические (реологические исследования), биофармацевтические, микробиологические, биологические методы исследований. Дизайн исследования в соответствующих алгоритмах учитывает весь диапазон, как технологический, так и фармакологический, и аналитический.

Методологической базой исследований являются биофармацевтические и технологические теоретические положения, трактовка и использование которых позволила разработать общие методические подходы для последующего создания технологической схемы и проекта регламента. Положения, выносимые на защиту:

- обоснование выбора вспомогательных веществ для дерматологических гелей, на основании результатов биофармацевтических исследований;

- технологическая схема геля с димебоном;

- результаты разработки норм качества и сроков годности геля.

- особенности технологии и технологическая схема получения геля димебона с микрокапсулами;

- результаты фармакологических исследований полученных лекарственных форм и возможности их применения.

Степень достоверности и апробация результатов. Наличие значительного количества таблиц, графиков, рисунков, подтверждающих объёмность экспериментальных исследований, а также достоверность разработанных и усовершенствованных методик подчёркивается их валидационными характеристиками. В работе использованы статистические методы обработки результатов (компьютерная программа MS Excel)

Основные положения работы доложены на: 65-ой, 66-ой и 67-ой межрегиональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2010, 2011, 2012 гг.), Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием «Современные вопросы научной и практической косметологии» (Запорожье, 24-25 марта 2011 г.), 40-й конференции Европейского гистаминного исследовательского общества (XL European Histamine Research Society, Сочи, 11-14 мая 2011 г.).

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 127 страницах машинописного текста, содержит 26 таблиц, 20 рисунков, состоит из «введения», обзора литературы (1 глава), 1 главы, посвященной материалам и методам исследований, 3 глав собственных исследований, заключения, списка литературы и приложений. Список литературы включает 158 источников, в том числе — 13 иностранных.

Объектом исследования является субстанция димебона, отечественное лекарственное средство.

3,6-Дішетил-9-[2-2 '-метилпиридш-5 ')этш]-1,2,3,4-тетрагидро-у-карболина

дигидрохлорид

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ДИМЕЕОН

,сн3

Разработка состава, технологии и разработка норм качества геля с

димебоном

Проводили исследования по выбору оптимальной композиции вспомогательных веществ с помощью биофармацевтических исследований in vitro. Для выбора оптимальной основы-носителя для наружных лекарственных форм с димебоном были приготовлены 5 модельных вариантов гелей различного состава (таблица 1).

Таблица 1 - Составы гелей с димебоном

Наименование компонента Количество компонента в различных составах, г

1 2 3 4 5

Димебон 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0

Хитозан 10,0

Карбопол 940 1.0

МЦ 10,0

Коллаген 10,0

ПЭГ 400 50,0

ПЭГ 4000 50,0

Глицерин 0,5 0,5

Флокар 0,01 0,01

ЫаОНОДМ 0,05

Вода очищенная до 100,0 до 100,0 до 100,0 до 100,0

Процесс высвобождения димебона из гелевых композиций изучали методом диализа через целлофановую полупроницаемую мембрану - пленку «Купрофан» (ГОСТ 7730-89), используя в качестве растворителей 0,01 М раствор хлористоводородной кислоты и 0,01 М раствор натрия гидроксида. Поэтому 1-ый цикл биофармацевтических исследований был посвящен выбору оптимальной диализной среды для более подробного биофармацевтического анализа. Наиболее полное высвобождение димебона в процессе биофармацевтических исследованиях in vitro достигалось при использовании в качестве диализной среды 0,01 М раствора хлористоводородной кислоты.

На базе этого биофармацевтического комплекса мы установили, что оптимальной основой для гелей с димебоном является хитозан (рисунок 1).

20 40 50 70 90

время, мин

1 .хитозан к 2.карбопол и З.МЦ в 4.коллаген к! 5.ПЭГ

Рисунок 1 ■■ Динамика высвобождения димебона из образцов гелей в растворе 0,01 М хлористоводородной кислоты

! Затем нами были проведены биофармацевтические исследования по выбору

оптимального пенетратора, с целью достижения более полного растворения и высвобождения димебона из выбранной основы. Были получены гелевые композиции с использованием в качестве пенетраторов таких вспомогательных веществ, как пропиленгликоль в концентрации 5 %, полиэтиленгликоль 400 - 0,5 %, глицирам — 1 %. В качестве диализной среды использовали 0,01 М раствор , хлористоводородной кислоты (рисунок 2).

время, мин

а Пропиленгликоль з ПЭГ-400 ш Глицирам

Рисунок 2 — Динамика высвобождения димебона из основы с хитозаном с различными пенетраторами

Высвобождение димебона из гелевой основы с полиэтиленгликолем 400 более полное и равномерное, в отличие от других пенетраторов, он же и был выбран нами для последующих исследований.

Дальнейшие исследования были посвящены выбору оптимального консерванта. Нами были сделаны три образца гелей (основа с хитозаном, пенетратор - полиэтиленгликоль 400) со следующими консервантами: хлоригексидина биглюконат в концентрации 0,01%, бензалкония хлорид - 0,01% и нипагин 0,02% + нипазол 0,05%. Параллельно были проведены и микробиологические исследования на агаре, при этом роста микроорганизмов не наблюдалось. В дальнейшем проводилось испытание образцов на степень бактерицидного действия. Для этих целей были использованы эталонные культуры микроорганизмов (таблица 2).

Таблица 2 - Задержка роста микроорганизмов при использовании

консервантов

Зона задержки роста (мм)

Эталонная культура Образец №1 (хлоргексидина биглюконат) Образец №2 (бензалкония хлорид) Образец №3 (нипагин и нипазол)

Staphylococcus aureus 10,0 16,0 10,0

Escherichia coli 0 12,0 0

Pseudomonas aeruginosa 0 0 0

Candida albicans 15,0 10,0 16,0

В итоге данного исследования, мы можем сделать вывод, что наиболее подходящим консервантом для наружной лекарственной формы с димебоном является бензалкония хлорид.

Для изучения структурно-механических свойств геля с димебоном были проведены реологические исследования. Определялись такие характеристические показатели как напряжение сдвига (т, Па) и скорость сдвига (Б, с"1). По полученным данным была построена кривая течения (рисунок 3).

50 70 90 110 130 150 170 190 210 230 250

Напряжение сдвига

Рисунок 3 — Зависимость скорости сдвпга (О, с"1) от напряжения сдвига (т, Па)

Характер кривой (наличие области псевдопластичного течения)

свидетельствует о существовании в исследуемом геле прочной структурной сетки, образованной гелеобразователем (хитозаном) и молекулами растворителя. Наличие петли гестерезиса свидетельствует о наличии в исследуемом геле коагуляционно-кристаллизационных (тиксотропнообратимых) структур, способных восстанавливаться после снятия внешней нагрузки. Таким образом, гель представляет собой тиксотропную систему, достаточно стабильную и пластичную, способную намазываться на кожу, выдавливаться из туб и обеспечивать необходимую стабильность системы в процессе технологических операций.

В результате проведенных исследований нами была разработан следующий состав геля с димебоном (таблица 3).

Таблица 3 — Состав геля с димебоном

Наименование компонента Массовая доля, %

Активное вещество:

Димебон 1,0

Вспомогательные вещества:

Хитозан 10,0

Полиэтиленгликоль-400 0,5

Глицерин 0,5

Бензалкония хлорид в пересчете на

безводный 0,01

Флокар ЕТ58 0,01

Вода очищенная до 100 г

Для данного состава нами была разработана технологическая схема (рисунок 4).

Рисунок 4 - Технологическая схема производства геля с димебоном

Технологические подходы в предложенной схеме традиционны, т.к. она содержит основные этапы, характерные для технологии гелей. Для проведения валидации технологических процессов были определены критические стадии процесса производства геля (таблица 4).

Таблица 4 - Перечень критических стадий и параметров процесса

производства геля с димсиоиом

Наименование критической технологической стадии (операции) Наименование критического параметра Примечание

6.1 Смешивание основы геля с концентратом Число оборотов мешалки, время перемешивания Нарушение показателя может привести к нарушению структуры геля

6.2 Добавление пенетратора Число оборотов мешалки, время перемешивания Может привести к неоднородности геля в отношении действующих компонентов

б.З.Введение водного раствора консерванта Число оборотов мешалки, время перемешивания Может привести к неоднородности геля в отношении действующих компонентов

Для разработки методик качественного и количественного анализа димебона в геле, нами были проведены исследования по выбору оптимального растворителя. Для этого изучали зависимость оптической плотности димебона от концентрации растворителя, на примере 0,01 М, 0,1 Ми 1 М растворов хлористоводородной кислоты. Установлено, что концентрация растворителя не влияет на оптическую плотность растворов димебона.

Установлено, что гелевая основа имеет оптическую плотность при растворении в 0,01 М растворе хлористоводородной кислоты, которая может оказать влияние на результаты количественного определения. В тоже время, при растворении в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты оптическая плотность основы геля составила 0,0097 (рисунок 5).

Ультрафиолетовые спектр раствора геля димебона в 0,1 М кислоте хлористоводородной в области от 250 до 350 нм имеет максимум поглощения при 270 ± 2 нм и плечо от 285 до 286 нм, соответствующий раствору стандартного образца димебона.

и (S)

СФ-ЙООО-DI

Рисунок 5 - Спектры поглощения гелевой основы и димебона в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты

Таким образом, оптимальным растворителем для качественного и количественного определения геля димебона был выбран 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты.

Валидационная оценка методики проводилась по таким параметрам, как специфичность, линейность, прецизионность, правильность на модельных | образцах геля с димебоном (таблица 5). 1

Таблица 5 - Результаты валидационной оценки определения

димебона методом спектрофотометрии

Показатель Норматив Результат

Специфичность Максимум поглощения при 270 ± 2 нм и плечо от 285 до 286 нм в 0,1 M растворе хлористоводородной кислоты Максимум поглощения при 270 ± 2 нм и плечо от 285 до 286 нм в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты

Линейность 0,0005 - 0,0050 мг/мл

Уравнение регрессии у=200,7х+0,047

Коэффициент корреляции г < 1 0,9974

Прецизионность (относительное стандартное отклонение ЯХБ) < 2,7 % 1180=2,46%

Правильность(относительное стандартное отклонение ИЗО) <3% 1«0=2,65%

Таким образом, предложенная методика количественного определения димебона в геле является точной и воспроизводимой, и может быть включена в нормативную документацию на гель.

Разработку норм качества полученного геля проводили в соответствии с требованиями ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». Соответствующие нормы качества для традиционного геля с димебоном представлены в таблице 6.

Таблица 6 - Нормы качества геля с димебоном

Наименование показателя Норма качества

Описание Однородная масса без посторонних примесей белого с кремовым оттенком цвета с характерным для хитозана запахом

Водородный показатель рН 6,5-7,5

Подлинность Раствор геля в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты имеет максимум поглощения при 270±2 нм и плечо от 285 до 286 нм

Посторонние примеси ТСХ, пятно посторонней примеси на хроматограмме препарата по совокупности величины и интенсивности окраски не должно превышать пятно на хроматограмме свидетеля

Количественное определение 0,95- 1,05 %

Микробиологическая чистота ГФ XII ст. ОФС 42-0067-07, категория 2.

Стабильность образцов геля оценивали на 6 сериях в условиях естественного хранения по показателям и нормам качества, представленным в таблице 6. Исследования на стабильность показали, что указанные серии образцов гелей стабильны на протяжении 12 месяцев хранения.

Разработка состава и технологии геля с микрокапсулами димебона

Учитывая хорошую растворимость димебона в воде, для разработки геля с микрокапсулами димебона в качестве водорастворимого полупроницаемого пленкообразователя использовался желатин. Предполагается, что желатиновые микрокапсулы с димебоном, при попадании на кожу в составе геля, будут

высвобождать димебон, обеспечивая пролонгированный эффект. Хитозан и желатин при нанесении на кожу будут образовывать защитную пленку на поверхности кожи, подверженной аллергическому воспалению.

Выбор вспомогательных веществ для гелеобразователя осуществляли на основе проведенных ранее биофармацевтических и микробиологических исследований для основы-носителя, пенетратора и консерванта для традиционного геля с димебоном. В итоге был разработан состав геля с микрокапсулами димебона (таблица 7).

Таблица 7 — Состав геля с микрокапсулами димебона

Наименование компонента Массовая доля, %

Активное вещество:

Димебон 1,0

Пленкообразователь

Желатин 5,0

Глицерин 0,5

Вода очищенная 12,5

Гелевая основа

Хитозан 10,0

Полиэтиленгликоль-400 1,0

Глицерин

Бензалкония хлорид в пересчете на 0,5

безводный 0,01

Флокар ЕТ58 0,01

Вода очищенная до 100 г

Для предложенного состава разработана технологическая схема производства геля с микрокапсулами димебона, включающая традиционные стадии получения гелей, а также стадии получения микрокапсул димебона методом диспергирования в несмешивающихся жидкостях (рисунок 6).

Критические стадии процесса производства геля с микрокапсулами димебона приведены в таблице 8.

ВР 1.1. Санитарная обработка помещений и оборудования

ВР 1.2. Подготовка персонала

ВР 1.3. Подготовка воды очищенной

ВР 2.1. Мойка

ВР 2.2. Сушка

ВР 3.1. Отвешивание ингредиентов

ВР 3.2. Отмеривание воды очищенной

ТП 4.1. Получение раствора пленкообразователя

ТП 4.2.Получение суспензии димебона в пленкообразователе

ТП 4.3. Формирование микрокапсу л

ТП 4.4. Отмывка микрокапсул

ТП 4.5. Сушка

ТП 4.6. Фракционирование

ТП 5.1. Получение геля хитозана

ТП 5.2. Нагревание геля хитозана до 60°С

ТП 5.3. Охлаждение хнтозанового геля

ТП 5.4. Добавление флокара

ТП 6.1. Смешивание основы геля с микро капсулами

ТП 6.2. Введение пенетратора

ТП 6.3. Введение водного раствора консерванта

ТП 6.4. Гомогенизация

УМО 7.1. Фасовка

ВР 1. Санитарная подготовка производства

X

ВР 2. Подготовка тары

Отходы

ВР 3. Подготовка ингредиентов

ТП 4. Получение микрокапсул димебона

ТП 5. Получение основы геля

ТП 6.

Приготовление геля

Потери

УМО 7. Фасовка и упаковка готовой продукции

X

УМО 7.2. Упаковка

Готовая На

продукция склад

Рисунок 6 — Технологическая схема производства геля с мнкрокапсулами димебона

Таблица 8 - Перечень критических стадий и параметров процесса

производства геля с микрокапсулами димебона

Наименование критической технологической стадии (операции) Наименование критического параметра Примечание

4.3.Формирование микрокапсул Время и скорость диспергирования Отклонения от этих параметров может привести к неравномерному распределению действующего вещества и несоответствию по показателю «количественное содержание» в микрокапсулах

Прилипание желатинового раствора к стенкам реактора и как следствие нарушение толщины оболочки Может привести к неоднородности Интенсификация процесса перемешивания за счет введения дополнительных мешалок и скребков

6.1.Смешивание основы геля с микрокапсулами Число оборотов мешалки, время перемешивания Нарушение показателя может привести к неоднородности геля в отношении микрокапсул

6.2.Введение пенетратора Число оборотов мешалки, время перемешивания Может привести к неоднородности геля в отношении действующих компонентов

б.З.Введение водного раствора консерванта Число оборотов мешалки, время перемешивания Может привести к неоднородности геля в отношении действующих компонентов

Для изучения высвобождения лекарственного вещества из гелевой

композиции с микрокапсулами димебона использовали биофармацевтический метод диализа через целлофановую полупроницаемую мембрану - пленку «Купрофан», в качестве диализной среды использовали 0,01 М раствор хлористоводородной кислоты (рисунок 7).

Рисунок 7 - Динамика высвобождения димебона из геля с микрокапсулами

18

Высвобождение димебона из геля с микрокапсулами происходит равномерно и длительно - в течение 180 минут высвобождается 52,1% действующего вещества.

Данное исследование доказывает перспективу использования геля с микрокапсулами димебона как пролонгированного лекарственного препарата.

Основываясь на особенностях гелевой основы, используемой при приготовлении традиционного геля и геля с микрокапсулами, разработанных ранее методик определения димебона в наружных лекарственных формах, а также, принимая во внимание использование микрокапсулированного действующего вещества, были выбраны критерии оценки качества геля с микрокапсулами димебона (таблица 9).

Таблица 9 — Нормы качества геля с микрокапсулами димебона

Наименование показателя Норма качества

Внешний вид Однородная масса без посторонних примесей с мелкими включениями микрокапсул, белого с кремовым оттенком цвета с запахом, характерным для хитозана

Водородный показатель рН 6,5-7,5

Подлинность Раствор геля в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты имеет максимум поглощения при 270±2 нм

Посторонние примеси ТСХ, пятно посторонней примеси на хроматограмме препарата по совокупности величины и интенсивности окраски не должно превышать пятно на хроматограмме свидетеля

Количественное определение 0,95 - 1,05 %

Микробиологическая чистота ГФ XII ст. ОФС 42-0067-07, категория 2

Фармакологическое изучение свойств геля с днмебоном и геля с микрокапсулами димебона

Далее проведены исследования по изучения безопасности применения и специфической активности гелей с димебоном.

Острую токсичность определяли по оценке выживаемости мышей и по рассчитанной среднесмертельной дозе. Летальная доза, обеспечившая гибель всех экспериментальных животных при данном способе введения не установлена. По

классификации Сидорова К.К. образцы гелей при накожном способе введения соответствует FV классу - малоопасное средство. Изучение раздражающего действия гелевых композиций с димебоном проведено в 2 этапа: in situ и in vivo. ХЕТ-КАМ тест на хорион-аллантоисной оболочке куриного эмбриона показал, что наличие незначительного раздражающего действия обусловлено свойствами гелевой основы. Экспериментальные данные опытов in vivo позволили сделать вывод о том, что традиционный гель с димебоном и гелевая основа при применении на слизистую оболочку обладают слабым раздражающим действием. Гель с микрокапсулами димебона обладает умеренным раздражающим действием, что можно объяснить механическим раздражением конъюнктивы глаза присутствующими в нем микрокапсулами.

Противоотечное действие гелей оценивали по динамике развития моделированного отека конечности крыс, вызванным введением 0,1% раствора гистамина гидрохлорида. Выраженность экссудативного воспаления оценивали онкометрически (таблица 10).

Таблица 10 - Динамика воспалительного отека, полученная по объему вытесненной воды в относительных единицах (%) _

Группы животных Объем лапки исходный Прирост объема лапки на пике % и Р к контролю Прирост объема лапки через 3 часа % и Р к контролю

Нелеченные животные, п=6 100 +121,5% +20,4%

Животные, получившие гель димебона, п=6 100 +33,9% 27,9 р<0,05 +2,6% 2,14 р<0,05

Животные, получившие гель с микрокапсулами димебона п=6 100 +36,9% 30,4 р<0,05 +8,7% 7,16 р>0,05

Животные, получившие гелевую основу п=6 100 +112,5% 92,6 р<0,001 +22,9% 18,8 р<0,001

Животные, получившие гель «Фенистил» п=6 100 +31,6% 26,0 р<0,01 +5,1% 4,2 р<0,05

Р — показатель достоверности отличий к объему лапок на исходном уровне к группе нелеченных животных (контроль); % - к показаниям нелеченных животных/ Р геля [(121,5-27,9)/121,5] * 100%=77,04% Р геля с микрокапсулами [(121,5-36,9)/121,5] * 100%=69,63% Р гелевой основы [(121,5-92,6)/121,5] * 100%= 23,79% Р геля «Фенистил» [(121,5-26,0)/121,5] * 100%= 78,6%

Регенеративную активность изучали по изменению площади ожоговой

поверхности кожи. После нанесения ожога, ежедневно, до полного заживления,

измерялась площадь раневой поверхности, и производилось ежедневное лечение.

О формировании капиллярной сети судили по времени отхождения ожогового

струпа. Величину регенерации эпителиальной ткани рассчитывали по проценту

заживления. Этот показатель определял степень формирования нормальной ткани

на месте поврежденной (таблица 11).

Таблица 11 — Оценка регенеративной активності! гелей с димебоном

Группы животных Время отхождения струпа, сутки Площадь ожога мм2 % заживления и Р к контролю

7 сутки 14 сутки 7 сутки 14 сутки

нелеченные, п=4 10 сутки 84,25+4,35 69,5±3,79 15,75 30,5

получившие гель димебона, п=4 4 сутки 48,5+4,43 13,25±1,5 51,5 86,75

получившие гель с микрокапсулами димебона, п=4 6 сутки 64,25±2,63 35,25+2,51 35,75 64,75

получившие гелевую основу,п=4 8 сутки 68,5±4,12 51,0+1,15 31,5 49,0

получившие гель « Фенистил» ,п=4 6 сутки 61,75+4,25 31,75±3,65 38,25 68.25 р<0,01

Формирование капилляров в группе животных, получивших традиционный гель димебона (4 сутки) и в группе, получившей гель с микрокапсулами димебона (6 сутки) доказывает регенеративную активность разработанных наружных лекарственных форм.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, впервые для отечественного антиаллергического лекарственного средства, димебон, создана наружная лекарственная форма - гель на природной основе — хитозан.

- В результате комплексных биофармацевтических исследований in vitro осуществлен выбор оптимального состава гелевой основы для разработанных лекарственных форм: 10% гель хитозана, с добавлением в качестве эмульгатора флокара (0,01%), а в качестве пенетратора - ПЭГ 400 (0,5%). На основании микробиологических исследований определен антимикробный компонент геля — бензалкония хлорид (0,01%).

- Установлено, что гель с димебоном представляет собой структурированную систему, обладающую выраженными тиксотропными свойствами, а также достаточной технологичностью.

- Разработаны технологии получения традиционного геля и геля с микрокапсулами в производственных условиях. Составлены технологические схемы получения разработанных лекарственных форм, позволяющие достичь необходимого качества; установлены основные валидационные характеристики данного технологического процесса.

- Установлены нормы качества разработанных лекарственных форм: внешний вид, водородный показатель, посторонние примеси, подлинность и микробиологическая чистота. На основании результатов хранения определен срок годности геля с димебоном, составляющий 12 месяцев.

- В опытах in vivo и in situ установлено, что гели димебона малоопасны для млекопитающих: LD50 (при накожном способе введения)>5000мг/кг. В результате исследований in vivo определены выраженные противоотечное и регенеративное действия гелей.

- Разработаны проект ФСП и лабораторный регламент на гель с димебоном.

Результаты данного диссертационного исследования могут быть рекомендованы для использования в фармацевтической практике с целью

расширения ассортимента антиаллергических лекарственных препаратов за счёт отечественных объектов.

Перспективы дальнейшей разработки темы диссертационного исследования заключаются в дальнейшем совершенствовании разработанной технологической схемы, разработке на её основе опытно-промышленного регламента и продолжении внедрения предложенного наружного лекарственного препарата димебона.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Степанова, Э. Ф. Исследования по выбору оптимального пенетратора для наружной лекарственной формы с димебоном / Э. Ф. Степанова, К. Н. Корянова, Е. И. Хартюнова, А. В. Майорова // Фундаментальные исследования. - 2010. - №5. — С.81-84. (журнал рекомендован ВАК РФ).

2. Изучение специфической активности наружных лекарственных форм с димебоном / К. Н. Корянова [и др.] // Вестник последипломного медицинского образования. -2011. -№4.-С.З -6. (журнал рекомендован ВАК РФ).

3. Изучение безопасности применения наружных лекарственных форм с димебоном / К.Н. Корянова [и др.] // Науч. ведомости Бел. ГУ. Серия: Медицина. Фармация. -2011. -№ 22 (117), Вып. 16/2. - С. 28-31. (журнал рекомендован ВАК РФ).

4. Разработка состава и биофармацевтические исследования дерматологического крема, содержащего днмебон / К.Н. Корянова [и др.] // Медицинский академический журнал: Секция 8. Актуальные вопросы фармакологии фармации. — 2010. - Т.10, №5. — С.161.

5. Степанова, Э.Ф. Выбор оптимальной композиции вспомогательных веществ дерматологических лекарственных форм с димебоном: биофармацевтические исследования in vitro / Э. Ф. Степанова, К. Н. Корянова, Е. И. Хартюнова, А. В. Майорова // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. -2010. — №5. - С.41-45.

6. Разработка дерматологических лекарственных форм с димебоном / К. Н. Корянова [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч.тр. / Пятигорск. ГФА. - Пятигорск, 2011. - Вып.66. - С. 276-278.

7. Перспективы использования дерматологических лекарственных форм с димебоном в косметологии / К. Н. Корянова [и др.] // Запорожский медицинский журнал. — 2011. — Т. 13, №3. — С.132-133. (журнал рекомендован ВАК Украины)

8. Elaboratoring and technological investigation of dermatological medicinal form with Dimebon / K. N. Koryanova [at al.] // Inflammation research: XL European Histamine Research Society 11-14 May 2011 y. - Sochi, Russia, 2011. - Vol.60. - Suppl.2. - P.349.

9. Majorova, A. V. Possibilities of use of Dimebon-gel in cosmetology / A. V. Majorova, K. N. Koryanova, E. F. Stepanova, I. A. Savenko // Inflammation research: XL European Histamine Research Society 11-14 May 2011 y. - Sochi, Russia, 2011. - Vol.60. - Suppl.2. -P.349.

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

КОРЯНОВА КСЕНИЯ НИКОЛАЕВНА

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НАРУЖНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ С

ДИМЕБОНОМ

14.04.01 — технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 05.06.2013 г. Формат 60x84 1/16. Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печат. л. 1,39. Тираж 100 экз. Заказ № 2367

Отпечатано в типографии ООО «РИА-КМВ» 357500, г. Пятигорск, ул. Февральская, 54, тел. (8793) 33-36-56, тел./ факс 39-09-03