Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Изучение биофармацевтической растворимости лекарственных средств из перечня жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов (ЖНВЛП)

005531194

На правах рукописи

ЯРУШОК Татьяна Александровна

ИЗУЧЕНИЕ БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ РАСТВОРИМОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ИЗ ПЕРЕЧНЯ ЖИЗНЕННО НЕОБХОДИМЫХ И ВАЖНЕЙШИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

(ЖНВЛП)

14.04.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Москва-2013

005531194

Работа выполнена в ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России Научный руководитель: доктор фармацевтических наук,

Официальные оппоненты:

Пятин Борис Михайлович доктор фармацевтических наук, профессор, руководитель опытно-технологического отдела ФГБУ «НИИ фармакологии им. В.В. Закусова» РАМН

Белобородое Владимир Леонидович доктор фармацевтических наук, профессор, заведующий кафедрой органической химии фармацевтического факультета ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России Ведущая организация: ГБОУ ВПО Казанский государственный медицинский университет Минздрава России

Защита состоится: «18» сентября 2013 г. в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, д. 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной медицинской библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д. 49. Автореферат разослан «Д^?» 2013 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор фармацевтических наук, „ ¿>

профессор

Раменская Галина Владиславовна

профессор

Демина Наталья Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Развитие методологической и доказательной базы для изучения и регистрации воспроизведенных лекарственных средств направлено на снижение стоимости и сокращение сроков выхода препарата на рынок. При этом должна сохраниться уверенность в их эффективности и безопасности, то есть эквивалентности инновационному/зарегистрированному на территории РФ лекарственному средству (JIC).

Наряду с этим, важным аспектом развития методологии исследования лекарственных средств является возможность замены исследований биоэквивалентности с участием людей исследованиями in vitro, проводимыми исключительно в лабораторных условиях.

В дополнение к исследованиям биоэквивалентности наибольшее значение имеют исследования эквивалентности in vitro преимущественно для лекарственных средств, характеризующихся «высокой» растворимостью, относящиеся к 1 и 3 классам биофармацевтической классификационной системы, значительное число которых входит в перечень ЖНВЛП. Исследования эквивалентности in vitro включают в себя три этапа: 1) определение биофармацевтической растворимости активного фармацевтического ингредиента (субстанции); 2) определение проницаемости активного фармацевтического ингредиента (субстанции); 3) проведение теста сравнительной кинетики растворения твердой дозированной лекарственной формы. В связи с вышесказанным актуальной задачей является разработка простой и надежной методики определения биофармацевтической растворимости субстанций JIC из Перечня ЖНВЛП.

Цель исследования - изучить биофармацевтическую растворимость субстанций лекарственных средств из Перечня жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов.

Задачи исследования:

• провести научно-обоснованный выбор объектов исследования среди субстанций воспроизведенных лекарственных средств, входящих в Перечень ЖНВЛП;

•оптимизировать методику определения биофармацевтической растворимости

на примере модельной субстанции; •определить биофармацевтическую растворимость исследуемых субстанций; •провести валидацию методик количественного определения

биофармацевтической растворимости исследуемых субстанций; •на основании экспериментальных данных классифицировать исследуемые ЛС согласно БКС по биофармацевтической растворимости.

Научная новизна. Оптимизирована методика определения равновесной биофармацевтической растворимости с использованием термостатируемого шейкера на примере модельной субстанции - субстанции арипипразола. Субстанция арипипразола выбрана в качестве модельной в связи с «низкой» растворимостью во всех трех средах: 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты (0,1 М НС1), буферном растворе рН 4,5 и буферном растворе рН 6,8.

В соответствии с новой методикой определена биофармацевтическая растворимость исследуемых субстанций в микрообъемах сред растворения. Растворимость темозоломида, ондансетрона гидрохлорида, оланзапина, соталола, моксифлоксацина гидрохлорида моногидрата, линезолида, зидовудина, была классифицирована как «высокая» согласно БКС; невирапина и ритонавира - «высокая» в среде растворения 0,1 М НС1 и «низкая» во всех остальных средах; флутамида и арипипразола - как «низкая» во всех трех средах.

Разработанные методики количественного определения были

валидированы по основным валидационным характеристикам. Коэффициент

корреляции линейной зависимости (г2) во всех случаях составил около 0,99.

Результаты определения правильности и прецизионности соответствовали

нормам, поскольку для всех уровней концентраций величины относительного

4

стандартного отклонения (RSD, %) и относительной погрешности (с, %) не превышали 5 и 2 %, соответственно. Полученные результаты позволяют применять данные методики для оценки биофармацевтической растворимости исследованных субстанций.

Практическая значимость результатов исследования. Методика определения равновесной биофармацевтической растворимости субстанций внедрена в работу филиала «Клиническая фармакология» Научного Центра Биомедицинских Технологий РАМН и ООО «Технология лекарств» и успешно используется для установления эквивалентности in vitro лекарственных средств в процессе разработки при проведении предрегистрационных исследований. Новая методика изучения равновесной растворимости может быть использована в лабораториях, занимающихся исследованиями эквивалентности лекарственных средств in vitro. Оптимизированная методика позволит снизить расходы и сократить сроки выхода лекарственных средств на рынок, сохранив уверенность в их эффективности и безопасности.

Апробация работы проведена на кафедре фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета Первого МГМУ имени И.М. Сеченова (26.03.2013).

Основные результаты работы доложены и обсуждены на научно-практической итоговой научной студенческой конференции с международным участием «Татьянин день» (Москва, 2012); Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2012), научно-практической конференции «Аспирантские и докторантские чтения - дерзания нового времени» (Москва, 2012), Конкурсе научных инновационных работ Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (Москва, 2012), научном совете НИИ Фармации (Москва, 2013).

Личный вклад автора. Лично автором проведен научно-обоснованный выбор объектов исследования среди лекарственных субстанций воспроизведенных JIC, включенных в Перечень ЖНВЛП, утвержденный Правительством РФ от 7 декабря 2011 г. № 2199-р, Перечни ЖНВЛП.

5

Лично автором проведены все экспериментальные исследования по установлению биофармацевтической растворимости лекарственных веществ (темозоломид, ондансетрона гидрохлорид, оланзапин, флутамид, соталол, невирапин, моксифлоксацина гидрохлорид моногидрат, арипипразол, ритонавир, линезолид, зидовудин), разработка методик количественного определения с последующей валидацией, статистическая обработка результатов исследования.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 2 и 3 паспорта фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 3 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Связь темы исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармацевтической и токсикологической химии ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова «Совершенствование образовательных технологий додипломного и последипломного медицинского и фармацевтического образования». Номер государственной регистрации: 01201168237. Положения, выносимые на защиту

• Методика определения равновесной биофармацевтической растворимости субстанций.

• Экспериментальные результаты оценки равновесной биофармацевтической растворимости субстанций темозоломида, ондасетрона гидрохлорида, оланзапина, флутамида, соталола, невирапина, моксифлоксацина гидрохлорида моногидрата, арипипразола, ритонавира, линезолида, зидовудина.

• Валидация методик количественного определения субстанций.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на

141 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы

6

(глава 1), материалов и методов (глава 2), экспериментальной части (глава 3), общих выводов и списка литературы. Диссертация включает 59 таблиц и 33 рисунка. Библиографический список содержит 104 источника, из них 72 на иностранном языке.

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты исследования, приборы и реактивы

Объекты исследования:

Перед разработкой методики определения равновесной биофармацевтической растворимости был проанализирован Перечень ЖНВЛП, утвержденный Распоряжением Правительства Российской Федерации от 7 декабря 2011 г. № 2199-р, а также Территориальные Перечни жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов и изделий медицинского назначения. Перечень ЖНВЛП содержит 567 наименований лекарственных препаратов, из которых 93 наименования (16,4 %) производятся только отечественными производителями, 207 наименований (36,5 %) производятся только зарубежными производителями, а производство 267 наименований (47,1 %) лекарственных препаратов осуществляется как российскими, так и иностранными фармацевтическими предприятиями. В качестве объектов исследования были выбраны субстанции лекарственных средств (Таблица 1), производимых в твердых дозированных лекарственных формах для внутреннего применения системного действия (т.е. основных объектов исследования in vitro). Выбранные ЛС производятся российскими производителями с целью импортозамещения в рамках реализации Стратегии «Фарма-2020». Темозоломид, Соталол, Невирапин и Ритонавир, кроме того, входят в список стратегически значимых лекарств, утвержденный Правительством Российской Федерации - распоряжение №1141 от 06.07.2010 г. «Об утверждении перечня стратегически значимых лекарственных средств, производство которых должно быть обеспечено на территории Российской Федерации для лечения наиболее распространенных заболеваний». Государство

ставит задачу, чтобы к 2015 году все эти лекарственные средства производились только на территории страны.

Таблица 1

Объекты исследования

Субстанция Количественное содержание

1. Темозоломид (Россия) 99,86 %

2. Ондансетрона гидрохлорид (Россия) 100,04 %

3. Оланзапин (Россия) 99,4 %

4. Флутамид (Россия) 100,77%

5. Соталол (Россия) 100,5 %

6. Невирапин (Россия) 100,76%

7. Моксифлоксацина гидрохлорид 93,5 %, вода 3,9 %

моногидрат (Россия)

8. Арипипразол (Россия) 100,45%

9. Ритонавир (Китай) 101,1 %

10. Линезолид (Индия) 99,8 %

11. Зидовудин (Китай) 100,8%

На все субстанции и стандартные образцы имелись сертификаты анализа.

Оборудование и реактивы

Изучение биофармацевтической растворимости субстанций проводилось на термошейкере TS-100 (Biosan, Латвия), тип перемешивания - орбитальный, а также в термовиалах вместимостью 3 мл для испарителя под током азота Thermo Scientific, Reacti - Therm (США) с перемешивающим устройством -магнитная мешалка. Количественное определение проводили на спектрофотометре Cintra 101 (GBC, Австралия), оснащенном программным обеспечением (Cintrai, версия 2.0), спектрофотометре Сагу 60 UV-Vis (Agilent Technologies, США) и жидкостном хроматографе Waters Alliance 2695 с диодноматричным детектором 2998, оснащенном программным обеспечением (Empower, версия 2.0). В качестве вспомогательного оборудования использовали: весы лабораторные AL 204 (Mettler Toledo, Швейцария), рН-метр FE-20 FiveEasy (Mettler Toledo, Швейцария), аппарат для фильтрации и дегазации растворов Solvent Clarification Kit (Waters, США), автоматические

дозаторы Ленпипет (Thermo Scientific (ранее - Ленпипет), Россия), центрифугу SL-16R (Thermo Scientific, США), вортекс-шейкер Reax Top (Heidolph, Германия).

В работе использовалась мерная лабораторная посуда классов «А» (мерные колбы вместимостью 10, 20, 25, 50, 100, 200 и 250 мл), «AS» (аналитические пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл) и «В» (мерные цилиндры вместимостью 20 мл, 50 мл, 500 мл и 1000 мл).

В работе использовались следующие реактивы: вода деионизированная, хлористоводородная кислота концентрированная (Сигма Тек, Россия, «х.ч.»), уксусная кислота ледяная (Рапгеас, Испания, «х.ч.»), натрия ацетат тригидрат (Рапгеас, Испания, «х. ч.»), калия фосфат однозамещенный (Рапгеас, Испания, «ч.д.а.»), натрия фосфат двузамещенный двенадцативодный (Рапгеас, Испания, «ч.д.а.»), ортофосфорная кислота 85 % (Рапгеас, Испания, «х.ч.»), натрия хлорид (Рапгеас, Испания, «ч.д.а.»), натрия гидроксид (Рапгеас, Испания, «х.ч.»), этанол 96 %, порошок для приготовления биорелевантных сред FaSSIF и FeSSIF - Phares SIF powder (запатентованный комплекс таурохолата и лецитина в соотношении 4:1.

Результаты и их обсуждение

В литературе были освещены несколько методик изучения равновесной биофармацевтической растворимости. Все они представляют собой трудоемкие процедуры, требующие больших количеств субстанций или стандарных образцов, а также реактивов для приготовления сред растворения. Главная цель данного исследования - разработка экспрессной методики определения равновесной биофармацевтической растворимости с использованием микрообъемов сред растворения и маленьких навесок субстанций.

Критические параметры, которые могли бы повлиять на точное определение равновесной биофармацевтической растворимости субстанции, приведены ниже:

1) число оборотов шейкера (тип перемешивания - орбитальный);

2) временная точка отбора проб;

3) метод разделения твердой фазы от раствора (седиментация или центрифугирование);

4) избыток субстанции;

5) стабильность стандартного раствора.

Число оборотов шейкера и временная точка отбора

На первом этапе испытания в микропробирки Eppendorf помещали по 100 мг субстанции арипипразола и прибавляли 1 мл 0,1 М HCl. Встряхивали при числе оборотов термошейкера 1400 об/мин (максимальное значение) и 600 об/мин. (минимальное значение) в течение 1, 2, 4, 8, 24 и 48 часов в трех повторностях для каждой временной точки при температуре 37 °С. Конечные пробы центрифугировали в термостатируемой центрифуге в течение 5 минут при 15200 об/мин и разводили в 6 раз (500 мкл до 3 мл средой растворения). Количественное определение проводили на спектрофотометре Cintra GBC 101 (Австралия) в максимуме поглощения при длине волны 249 нм. Результаты определения представлены на Рисунке 1.

Из Рисунка 1 видно, что равновесие в системе «твердая фаза-раствор» для субстанции арипипразола устанавливается только на 24 - 48 часах проведения испытания при 1400 оборотов в минуту термошейкера. Следует отметить, что при 600 об/мин равновесие так и не было достигнуто в течение 48 часов. Кроме того, на ранних часах проведения испытания существует большая вероятность образования пересыщенного раствора, что может привести к завышению результатов, если делать тест в течение 1 - 2 ч. Однако после проведения статистической обработки полученных результатов (двухвыборочный F-тест для дисперсии и t-тест для независимых выборок с использованием критерия Стьюдента) с целью оценки значимости различий между значениями равновесной растворимости на каждой временной точке пришли к выводу о незначимости различий между выборками (Таблицы 2 - 4). Тем не менее, опираясь на традиционный метод встряхивания в термостатируемой колбе была выбрана временная точка «24 часа».

Таблица 2

Значения биофармацевтической растворимости арипипразола при 600 об/мин

Временная точка, час Измерение 1, растворимость, мг/мл Измерение 2, растворимость, мг/мл Измерение 3, растворимость, мг/мл Среднее значение растворимости, мг/мл RSD, %

1 0,084 0,087 0,078 0,083 5,87

2 0,076 0,091 0,085 0,084 8,66

4 0,066 0,068 0,060 0,065 6,32

8 0,073 0,067 0,059 0,066 10,81

24 0,078 0,068 0,064 0,070 10,41

48 0,071 0,073 0,060 0,068 10,60

Таблица 3

Значения биофармацевтической растворимости арипипразола при 1400 об/мин

Временная точка, час Измерение 1, растворимост ь, мг/мл Измерение 2, растворимость, мг/мл Измерение 3, растворимость, мг/мл Среднее значение растворимости, мг/мл RSD, %

1 0,061 0,072 0,057 0,063 11,92

2 0,070 0,067 0,066 0,068 3,01

4 0,068 0,061 0,063 0,064 5,31

8 0,069 0,070 0,078 0,072 7,37

24 0,084 0,074 0,077 0,078 6,54

48 0,077 0,079 0,081 0,079 3,03

На всех временных точках, за исключением двух первых, Гкрит < Г1Л,„ и находится в зоне незначимости.

Таблица 4

Значения, полученные при проведении статистической обработки с использованием двухвыборочного Б-теста для дисперсии и Ьтеста (критерий Стьюдента)

Временная точка, час F 1 крит F3M„ 'am

1 19 2,4 2,78 (для Р<0,05), 4,6 (для Р<0,01) 3,84

2 0,053 0,079 2,78 (для Р<0,05), 4,6 (для Р<0,01) 3,53

4 0,053 0,69 2,78 (для Р<0,05), 4,6 (для Р<0,01) 0,314

8 0,053 0,55 2,78 (для Р<0,05), 4,6 (для Р<0,01) 1,21

24 0,053 0,50 2,78 (для Р<0,05), 4,6 (для Р<0,01) 1,56

48 0,053 0,11 2,78 (для Р<0,05), 4,6 (для Р<0,01) 2,62

Метод разделения и количество субстанции После выбора временной точки и числа оборотов в микропробирки Eppendorf помещали по 100 мг и 20 мг субстанции арипипразола и также встряхивали в течение 24 часов на термошейкере при 1400 об/мин и 37°С. Испытание проводилось в 0,1 М HCl в объеме, равном 1 мл в 6 повторностях для каждой навески вещества. Спустя 24 часа по 3 пробы из каждой серии (100 мг или 20 мг) центрифугировались в течение 5 минут при 15200 об/мин и 37 °С, а оставшиеся пробы выдерживались в термошейкере при нагревании без встряхивания до полного осаждения. 500 мкл пробы (для навески 100 мг) и 600 мкл (для навески 20 мг) помещали в центрифужные пробирки вместимостью 5 мл, прибавляли 2,5 и 2,4 мл среды растворения, соответственно, и встряхивали на вортексе в течение 20 секунд. Определяли оптическую плотность растворов на спектрофотометре при длине волны 249 нм. Результаты представлены в Таблице 5.

Таким образом, величины растворимости для большого и небольшого избытка в количестве субстанции и методе разделения значительно не

различались, за исключением того, что при большом избытке невозможно достичь разделения твердой фазы и раствора за счет обычного осаждения.

0.09 0.08 ч 0.0" 0.06

Л

А 0.05 и

2 0.04 <

В. о.оз

с

I- 0.02 ^

п

~ 0.01 0.00

Рисунок 1. Сравнительное определение равновесной биофармацевтической растворимости субстанции арипипразола

Таблица 5

Средние значения растворимости субстанции арипипразола при разделении методами центрифугирования и седиментации, мг/мл

Масса навески, мг Центрифугирование Седиментация

100 0,0994 мг/мл не удалось достичь разделения

20 0,1191 мг/мл 0,1082 мг/мл

Стабильность стандартного раствора

Для приготовления стандартного раствора около 50 мг (точная навеска) арипипразола помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл и прибавляли 30 мл этилового спирта 96%, перемешивали до полного растворения и доводили до метки тем же растворителем. 1 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили до метки 0,1 М НС1 и перемешивали. Концентрация полученного раствора приблизительно равна 0,02 мг/мл. Встряхивали полученный стандартный раствор в течение 24 часов на термошейкере при 1400 об/мин при нагревании до 37°С. Значение

13

-С- *

--■

—»—1400 об/мин -•-600 об мин

!

0 10 20 30 40 50

время, час

относительного стандартного отклонения между оптическими плотностями стандартного раствора до и после встряхивания различались менее, чем на 1 %, что свидетельствует о стабильности стандартного раствора.

Таким образом, в качестве условий исследования равновесной биофармацевтической растворимости были выбраны следующие условия: температура 37 "С, 24 часа, число оборотов термошейкера 1400 об/мин.

Кроме того, для субстанции арипипразола проводили испытание с помощью методики в термостатируемой колбе (согласно руководствам ННБ-РБА). Различия в значениях биофармацевтической растворимости арипипразола во всех трех средах не отличались более, чем на 1 % от соответствующих значений, полученных при встряхивании в термошейкере.

Методика с использованием термостатируемой колбы (согласно руководствам ННБ-РОА):

Около 100 мг (точная навеска, что соответствует максимальной дозировке таблеток арипипразола) субстанции арипипразола помещали в мерную колбу вместимостью 250 мл, прибавляли среду растворения и доводили средой растворения до метки. Испытание проводили в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты, ацетатном буферном растворе рН 4,5 и фосфатном буферном растворе рН 6,8. Колбы помещали на водяную баню при постоянной температуре 37 °С, перемешивание происходило в течение 24 часов.

В подобных условиях была определена биофармацевтическая растворимость 11 объектов исследования. Масса навески бралась с заведомым избытком, в качестве метода разделения использовали термостатируемую центрифугу.

Значения биофармацевтической растворимости субстанций рассчитывали по формуле:

Р1 ■ сЛ -У -Р Б^-с^-У-Р

Б =- или -, где

-100 % -100

5 - биофармацевтическая растворимость, мг/мл;

D, - оптическая плотность испытуемого раствора; Dsl - оптическая плотность стандартного раствора; V - разведение испытуемого раствора;

Р - содержание исследуемой субстанции в стандартном образце, %; Si - площадь пика вещества на хроматограмме испытуемого раствора; Sst - площадь пика вещества на хроматограмме стандартного раствора.

Статистическую обработку результатов эксперимента осуществляли с использованием пакета Microsoft Office Excel 2007 путем расчета среднего значения количества растворившейся субстанции и относительного стандартного отклонения (RSD, %).

По полученным величинам биофармацевтической растворимости был проведен расчет отношения дозы к растворимости D/S. Величины отношений отношения дозы к растворимости для исследуемых субстанций в каждой из трех сред сведены в общую Таблицу 7.

Для каждой исследуемой субстанции в каждой из трех сред растворения биофармацевтическая растворимость была классифицирована на основании расчета величины D/S по максимальной дозировке, зарегистрированной к медицинскому применению (критерий приемлемости: D/S < 250 мл).

Растворимость темозоломида, ондансетрона гидрохлорида, оланзапина, соталола, моксифлоксацина гидрохлорида моногидрата, линезолида, зидовудина, была классифицирована как «высокая» согласно БКС; невирапина и ритонавира - «высокая» в среде растворения с рН 1,2 и «низкая» во всех остальных средах; флутамида и арипипразола — как «низкая» во всех трех средах.

Валидацию методики проводили по следующим валидационным характеристикам: специфичность, линейность, правильность, прецизионность (сходимость и воспроизводимость), аналитический диапазон.

Данные по основным валидационным характеристикам сведены в общую Таблицу 6

Таблица 6

Основные валидационные характеристики для методик количественного определения исследованных субстанций

Субстан ция Среда раствор ения Линейность Правильность RME, % (концентрация, %) Прецизионность RSD, % (концентрация, %) Аналитический диапазон

Валидационные растворы Уравнение прямой Коэффициент корреляции (г2)

Темозо-ломид 0,1 М HCI 85 %, 100 %, 108 %, 123 %, 138%, 154% у = 0,99х + 2,24 0,999 1,89 (85 %); 0,84(100 %), 0,45 (123 %) 0,41 (85 %); 0,50 (100 %), 0,46 (123 %) 0,0056-0,01 мг/мл

рН 4,5 85 %, 100 %, 108 %, 123 %, 138 %,154 % у = 0,99х + 1,93 0,999 2,49 (85 %); 0,13(100 %), 0,34 (123 %) 0,17(85%); 0,16(100 %), 0,12 (123 %) 0,0056-0,01 мг/мл

рН 6,8 85 %, 100 %, 108 %, 123 %, 138 %,154 % у = 0,98х + 2,82 0,999 1,49 (85 %); 1,57(100 %), 0,42 (123 %) 0,23 (85 %); 0,37 (100 %), 0,09 (123 %) 0,0056-0,01 мг/мл

Ондан-сетрона гидрохлорид 0,1 М НС1 72 %, 82 %, 91 %, 100 %, 109%, 118% у = 0,98х + 2,44 0,999 2,35 (82 %); 1,72(100 %), 1,18(118%) 1,50 (82%); 0,40(100 %), 0,77 (118%) 0,0082-0,013 мг/мл

РН 4,5 72 %, 82 %, 91 %, 100 %, 109%, 118% у = 0,96х + 4,50 0,999 1,09 (82%); 0,89(100 %), 0,16(118%) 0,63 (82 %); 0,41 (100 %), 0,94 (118 %) 0,0082-0,013 мг/мл

рН 6,8 56 %, 67 %, 78 %, 83 %, 100%, 111 % у = 0,97х + 3,50 0,999 1,38 (78 %); 0,98(100 %), 0,35 (111 %) 0,90 (78%); 0,50(100 %), 0,46 (111 %) 0,01-0,02 мг/мл

Оланза-пии 0,1 М НС1 60 %, 71 %, 83 %, 100 %, 107 %,119 % у = 0,97х+ 3,04 0,999 1,86 (83 %); 0,31 (100 %), 0,60 (119 %) 0,78 (83 %); 0,07 (100 %), 0,08 (119 %) 0,005-0,01 мг/мл

рН 4,5 54 %, 71 %, 100 %, 107 %, 125 %,143 % у = 0,99х+ 1,69 0,999 0,49 (71 %); 0,53 (100 %), 0,72 (125 %) 0,61 (71 %); 0,13(100 %), 0,43 (125 %) 0,003 - 0,008 мг/мл

рН 6,8 86 %, 100 %, 114 %, 129 %,143 %, 171 % у = 0,95х+ 6,71 0,999 3,57 (86 %); 2,47(100 %), 1,17(114%) 0,81 (86%); 0,57(100 %), 0,28 (114 %) 0,0031 -0,006 мг/мл

Флута-мид ОД М НС1 65 %, 75 %, 85 %, 100 %, 110%, 125 % у = 0,99х - 0,99 0,999 0,36 (65 %); 1,99 (85 %), 0,54 (125 %) 0,85 (65 %); 1,30 (85 %), 0,96 (125 %) 0,012-0,023 мг/мл

рН 4,5 65 %, 75 %, 85 %, 100 %, 110 %,125 % у = 0,99х - 1,25 0,999 1,03 (65 %); 0,32 (85 %), 3,91 (125 %) 0,79 (65 %); 0,62 (85 %), 0,40 (125 %) 0,012-0,023 мг/мл

рН 6,8 65 %, 75 %, 85 %, 100 %, 110%, 125% у = 0,99х - 1,46 0,999 0,54 (65 %); 3,03 (85 %), 4,63 (125%) 0,58 (65 %); 1,26 (85 %), 1,00 (125 %) 0,012-0,023 мг/мл

Соталол 0,1 М НС1 26 %, 53 %, 79 %, 100 %, 105%, 131 % у = 0,97х+ 4,44 0,999 3,04 (79%); 1,25(100 %), 0,10(131 %) 0,61 (79 %); 0,13 (100 %), 0,71 (131 %) 0,001 -0,498 мг/мл

рН 4,5 29 %, 58 %, 86 %, 100 %, 115 %,144 % у = 0,96х+ 4,20 0,999 1,32 (86%); 1,37(100 %), 0,55 (115 %) 1,15 (86%); 0,03 (100 %), 0,50(115%) 0,109-0,494 мг/мл

рН 6,8 52 %, 65 %, 78 %, 91 %, 100%, 110%, 117% у = 0,93х+ 6,12 0,998 0,90 (78 %); 1,23 (100 %), 1,40(117%) 0,65 (78 %); 0,15(100 %), 0,44 (117 %) 0,0043 - 0,0089 мг/мл

Невира-пин 0,1 М НС1 60 %, 80 %, 100 %, 120 %, 140 % у = 2,5х+ 1,2 0,999 1,05 (80 %); 2,05 (100 %), 0,79 (120 %) 0,46 (80%); 0,25(100 %), 0,98 (120 %) 0,0102-0,5 мг/мл

рН 4,5 60 %, 80 %, 100 %, 120 %, 140% у= 1,2х+3,46 0,999 4,37 (80 %); 3,01 (100 %), 0,66 (120 %) 0,66 (80 %); 0,25 (100 %), 0,87 (120 %) 0,0020-0,20 мг/мл

рН 6,8 60 %, 80 %, 100 %, 120 %, 140% у = 2,8х+ 4,2 0,998 2,37 (80%); 1,8(100%), 2,9 (120 %) 0,4 (80 %); 5,9 (100 %), 1,29(120%) 0,020 - 0,5 мг/мл

Мокси-флокса-цина гидрохлорид моногидрат 0,1 М НС1 71 %, 82 %, 94 %, 100 %, 106%, 118% у = 0,92х+ 8,55 0,999 2,89 (82 %); 1,13 (100 %), 0,45 (118 %) 0,60 (82 %); 0,25 (100 %), 0,77(118%) 0,0063 -0,01 мг/мл

рН 4,5 77 %, 90 %, 100 %, 103 %, 115 %, 118 % у = 0,96х+ 5,23 0,999 4,07 (77%); 0,32 (100 %), 1,30(118%) 0,07 (77 %); 0,19(100 %), 0,43(118%) 0,0062 - 0,0093 мг/мл

рН 6,8 71 %, 82 %, 92 %, 100 %, 102 %,122 % у = 0,97х+ 1,67 0,998 2,36(82%); 0,43 (100 %), 2,90 (122 %) 0,69 (82 %); 0,98 (100 %), 1,04 (122 %) 0,0069-0,0117 мг/мл

Арипип-разол 0,1 М НС1 46 %, 55 %, 64 %, 73 %, 82 %, 91 %, 109 %, 136 %, 182% у = 0,95х + 3,54 0,999 4,16(46%); 0,18(64%), 0,69 (109%) 0,88 (46%); 0,16(64 %), 0,22 (109 %) 0,005-0,019 мг/мл

рН 4,5 60 %, 71 %, 83 %, 95 %, 112,5%, 119%, 143%, 179%, 238 % у = 29,01х -0,04 0,999 3,19(95%); 4,00(112,5 %), 1,91 (143 %) 0,25 (95 %); 0,57(112,5 %), 1,87 (143 %) 0,004 - 0,022 мг/мл

рН 6,8 60 %, 71 %, 83 %, 95 %, 112,5%, 119%, 143 %, 179%, 238 % у = 28,Зх-1,17 0,999 2,36 (95 %); 4,18(112,5 %), 2,97 (143 %) 1,23 (95 %); 2,66(112,5 %), 3,19 (143 %) 0,004 - 0,022 мг/мл

Ритона-вир 0,1 М НС1 60 %, 80 %, 100 %, 120 %, 140 % у= 1,47х+ 1,2 0,999 5,68 (80%); 1,25 (100 %), 3,45 (120 %) 1,87 (80 %); 5,65(100 %), 1,86(120%) 0,010-0,49 мг/мл

рН 4,5 60 %, 80 %, 100 %, 120 %, 140% у = 2,36х+ 3,46 0,999 3,29 (80%); 2,19(100 %), 1,49 (120 %) 1,28 (80%); 0,79(100 %), 0,88 (120 %) 0,0020 - 0,20 мг/мл

рН 6,8 60 %, 80 %, 100 %, 120 %,140 % у= 1,24х+4,2 0,998 2,55 (80%); 1,86(100 %), 2,46 (120 %) 0,46 (80 %); 1,28 (100 %), 1,35 (120 %) 0,0020 - 0,20 мг/мл

Линезо-лид 0,1 M HCl 77 %, 85 %, 92 %, 100 %, 108%, 115 % y= l.Olx- 1,80 0,999 1,02 (85 %); 0,27(100 %), 1,17(115%) 0,12(85%); 0,73 (100 %), 0,42 (115 %) 0,0098-0,015 мг/мл

pH 4,5 80 %, 90 %, 100 %, 110 %, 120%, 130% y = 0,99x - 0,22 0,999 2,33 (80%); 0,30 (100 %), 1,28(120%) 0,48 (80 %); 0,73 (100 %), 0,43 ( 120 %) 0,0039 - 0,0064 мг/мл

pH 6,8 76 %, 87 %, 100 %, 109 %, 122 %,133 % y= l,01x-2,27 0,999 1,89 (76%); 0,18(100 %), 0,63 (122 %) 0,60 (76%); 1,01 (100 %), 0,50 ( 122 %) 0,0034-0,0061 мг/мл

Зидову-ДИН 0,1 M HCl 71 %, 83 %, 95 %, 100 %, 119%, 131 % y = l,02x-2,65 0,999 1,85 (83 %); 0,20(100 %), 1,04 (119 %) 1,85 (83 %); 0,20(100 %), 1,04 (119 %) 0,029-0,055 мг/мл

pH 4,5 77 %, 87 %, 96 %, 100 %, 106 %,115 % y= l,06x-7,39 0,998 1,42 (87 %); 0,23 (100 %), 1,04(115 %) 0,94 (87 %); 0,03 (100 %), 0,49 (115 %) 0,038-0,059 мг/мл

pH 6,8 65 %, 76 %, 87 %, 100 %, 109 %,120 % y= l,01x- 1,48 0,999 0,83 (76%); 0,33 (100 %), 1,31 (120%) 0,33 (76%); 0,36(100 %), 0,13 (120 %) 0,029-0,054 мг/мл

Таблица 7

Значения равновесной биофармацевтичсской растворимости исследуемых субстанций, дозовое число, отношение дозы к

растворимости, классификация по растворимости

Название субстанции Среда растворения Растворимость, мг/мл (среднее значение) Дозовое число О« (среднее значение) D/S, мл (среднее значение) растворимость «высокая/ низкая»

Темозоломид 0,1 МНС1 6,54 6,54 38,25 «высокая»

рН 4,5 6,44 6,44 38,89

рН 6,8 6,62 6,56 38,15

Ондансетрона гидрохлорид 0,1 МНС1 8,72 272,64 0,92 «высокая»

рН 4,5 18,41 575,40 0,43

рН 6,8 14,85 464,11 0,54

Оланзапин 0,1 МНС1 16,80 420,10 0,60 «высокая»

рН 4,5 5,56 138,88 1,80

рН 6,8 5,56 138,88 1,80

Флутамид 0,1 МНС1 0,034 0,034 7410 «низкая»

рН 4,5 0,036 0,036 6989

рН 6,8 0,030 0,030 8301

Соталол 0,1 МНС1 75,49 117,95 2,12 «высокая»

рН 4,5 68,74 107,41 2,33

рН 6,8 30,68 47,94 5,22

Невирапин 0,1 МНС1 0,91 1,13 220,62 «высокая»

рН 4,5 0,18 0,22 1128,73 «низкая»

рН 6,8 0,14 0,18 1426,66

Моксифлоксацина гидрохлорид моногидрат 0,1 МНС1 8,38 5,23 47,77 «высокая»

рН 4,5 38,31 23,95 10,45

рН 6,8 48,64 30,40 8,23

Арипипразол 0,1 МНС1 0,07 0,59 422,96 «низкая»

рН 4,5 0,05 0,38 662,42

рН 6,8 0,02 0,20 1250,32

Ритонавир 0,1 МНС1 1,06 2,64 94,52 «высокая»

рН 4,5 0,11 0,29 874,96 «низкая»

рН 6,8 0,12 0,31 820,19

РаБЭШ 0,07 0,18 1406,56

Ре881Р 0,09 0,22 1135,07

Линезолид 0,1 МНС1 13,71 5,71 43,83 «высокая»

рН 4,5 5,31 2,21 113,08

рН 6,8 4,69 1,95 127,98

Зидовудин 0,1 МНС1 41,69 34,74 7,20 «высокая»

рН 4,5 51,98 43,31 5,77

рН 6,8 46,00 38,33 6,52

выводы

1. Проведен научно-обоснованный выбор объектов исследования среди лекарственных субстанций для лекарственных препаратов, включенных в Перечень ЖНВЛП, утвержденный Правительством РФ от 7 декабря 2011 г. № 2199-р и список стратегически значимых лекарств, утвержденный Правительством Российской Федерации -распоряжение №1141 от 06.07.2010 г. «Об утверждении перечня стратегически значимых лекарственных средств, производство которых должно быть обеспечено на территории Российской Федерации для лечения наиболее распространенных заболеваний». В качестве объектов исследования выбраны: темозоломид, ондансетрона гидрохлорид, оланзапин, флутамид, соталол, невирапин, моксифлоксацина гидрохлорид моногидрат, арипипразол, ритонавир, линезолид, зидовудин. Данные по биофармацевтической растворимости исследованных субстанций в трех средах растворения в физиологическом диапазоне рН отсутствуют в литературе.

2. Оптимизирована методика определения равновесной биофармацевтической растворимости на примере модельной субстанции -субстанции арипипразола. В качестве модельной субстанции выбран арипипразол в связи с «низкой» растворимостью во всех трех средах. Для изученных субстанций лекарственных средств растворимость, определенная как «высокая» является минимальной, потому что по визуальным характеристикам после центрифугирования вещества были растворены полностью, что не исключает возможности больших значений растворимости при взятии большего избытка субстанций. Однако, следует отметить, что для отнесения вещества к классу биофармацевтической классификационной системы и последующего проведения процедуры «биовейвер» достаточно определения его как вещества с «высокой», либо «низкой» растворимостью.

3. Определена биофармацевтическая растворимость исследуемых субстанций в микрообъемах сред растворения. Растворимость темозоломида,

ондансетрона гидрохлорида, оланзаиииа, соталола, моксифлоксацина гидрохлорида моногидрата, линезолида, зидовудина, была классифицирована как «высокая» согласно БКС; невирапина и ритонавира - «высокая» в среде растворения с рН 1,2 и «низкая» во всех остальных средах; флутамида и арипипразола — как «низкая» во всех трех средах.

4. Разработанные методики количественного определения были валидированы по основным валидационным характеристикам. Коэффициент корреляции линейной зависимости (г2) во всех случаях составил приблизительно 0,99. Результаты определения правильности и прецизионности соответствовали нормам, поскольку для всех уровней концентраций величины относительного стандартного отклонения (ЯЗЭ, %) и относительной погрешности (е, %) не превышали 5 и 2 %, соответственно. Полученные результаты позволяют применять данные методики для оценки биофармацевтической растворимости исследованных субстанций.

5. На основании экспериментальных данных о растворимости темозоломид, ондансетрона гидрохлорид, соталол, моксифлоксацина гидрохлорид моногидрат, линезолид, зидовудин были отнесены к I или III («высокая» растворимость) классу согласно БКС, что позволяет использовать данный подход на стадии разработки лекарственных средств.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шохин И.Е., Раменская Г.В., Ярушок Т.А., Зимакова Е.А., Василенко Г.Ф., Давыдова К.С. Процедура «биовейвер» для витаминных препаратов на примере воспроизведенных лекарственных средств фолиевой кислоты // Вестник Росздравнадзора. 2011.№1. С.64-68.

2. Ярушок Т.А., Раменская Г.В., Шохин И.Е. Качественная оценка биофармацевтической растворимости субстанций // Сборник тезисов I Научно-практической конференции «Технология и анализ косметических средств и фармацевтических препаратов». Москва, 2011. С.20 - 21.

3. Ярушок Т.А., Шохин И.Е., Медведев Ю.В. Определение биофармацевтической растворимости субстанции оланзапина // Тезисы итоговой научной студенческой конференции с международным участием «Татьянин день». — Москва, 2012. - С. 87 - 88.

4. Ярушок Т.А., Шохин И.Е. Биофармацевтическая растворимость жизненно необходимых и важнейших лекарственных средств // Аспирантские и докторантские чтения: дерзания нового времени - поиск инноваций. Сборник тезисов научно-практической конференции. Под. ред. Николенко В.Н. и др. -М.: Изд-во Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, 2012. - С. 213 - 214.

5. Ярушок Т.А., Шохин И.Е., Медведев Ю.В. Определение биофармацевтической растворимости субстанции темозоломида // Материалы сборника тезисов докладов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2012. - С. 604.

6. Ярушок Т.А., Шохин И.Е., Медведев Ю.В. Определение биофармацевтической растворимости субстанции ондансетрона // Материалы сборника тезисов докладов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2012. - С. 604.

7. Ярушок Т.А., Шохин И.Е., Раменская Г.В., Савченко А.Ю. Оценка биофармацевтической растворимости (в условиях, моделирующих

физиологические) лекарственных средств из Перечня ЖНВЛП (обзор) // Биофармацевтический журнал. - Москва, 2012. - т.4. - №2. - С. 25 - 30.

8. Ярушок Т.А., Шохин И.Е., Савченко А.Ю., Картиева Ю.С. Определение равновесной биофармацевтической растворимости субстанции флутамида // Разработка и регистрация лекарственных средств. - Москва, 2012. -№1. - С. 30-35.

9. -Ярушок Т.А., Шохин И.Е., Савченко А.Ю. Разработка методики определения равновесной биофармацевтической растворимости малорастворимого вещества на примере субстанции арипипразола // Разработка и регистрация лекарственных средств. - Москва, 2012. - №1. - С. 14 - 17.

10. Ярушок Т.А., Шохин И.Е., Раменская Г.В. Определение биофармацевтической растворимости субстанции флутамида // Материалы конференции. Первая Всероссийская научная конференция молодых ученых-медиков «Инновационные технологии в медицине XXI века» — Москва, 2012. -С. 204.

11. Ярушок Т.А., Шохин И.Е., Раменская Г.В., Савченко А.Ю. Изучение биофармацевтической растворимости субстанций лекарственных средств, применяемых для лечения ВИЧ // Биофармацевтический журнал. - Москва, 2013.-т.5.-№1.-С. 35 -43.

Подписано в печать 24.06.2013 Формат А4/2 Бумага офсетная. Печать цифровая. Усл. печ. л. 1,5 Тираж 100 Экз. Заказ № 0856 Типография ООО "Ай-клуб" (Печатный салон МДМ) 119146, г. Москва, Комсомольский пр-кт, д.28 Тел. 8-495-782-88-39