Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка состава и технологии спрея на основе фитокомпозиции противогрибковго действия.

00340062Э

На правах рукописи

Морозова Елизавета Владимировна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ СПРЕЯ НА ОСНОВЕ ФИТОКОМПОЗИЦИИ ПРОТИВОГРИБКОВОГО ДЕЙСТВИЯ

15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

2 2 0КТ 2009

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Курск - 2009

003480629

Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Степанова Элеонора Федоровна

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Панкрушева Татьяна Александровна доктор фармацевтических наук, профессор Лиходед Виталий Алексеевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится <(12> » и^Шф^-2009 года в «-^У"мдасов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан » 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Пашин Е.Н

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Грибковые заболевания являются одной из старейших патологий, которой страдает человечество, и количественно эти болезни пока не уменьшаются. В то же время арсенал отечественных антамикотических препаратов практически ограничен антифунгальными антибиотиками и препаратами на основе синтетических соединений. Но использование данных лекарственных препаратов сопровождается проявлением целого ряда побочных действий, что зачастую ограничивает частоту их применения. При этом, как правило, в качестве основных побочных эффектов наблюдаются: различные аллергические реакции, снижение иммунитета, нарушение функционирования пищеварительной системы. В связи с этим, поиск новых антамикотических средств, особенно из сырья растительного происхождения - задача вполне актуальная. Тем более, что лекарственные препараты из растительного сырья на сегодняшний день занимают значительное место в номенклатуре лекарственных средств. Многокомпонентность лекарственных фитопрепаратов не только расширяет диапазон терапевтической активности, но и обеспечивает более мягкое их действие.

Среди всех известных дерматомикозов наиболее распространен микоз стоп, что требует не только выбора оптимального лекарственного вещества, но и соответствующей лекарственной формы, для обеспечения рационального использования выбранной субстанции.

Из существующих на сегодняшний день лекарственных форм, больше всего для этих целей подходят спреи, как по своим биофармацевтическим характеристикам, так и по технологическим показателям. Однако, в настоящее время ассортимент антамикотических спреев ограничен (термикон, бифосин, ламизил, фунготербин), и состав их не очень разнообразен. Оказывая выраженный терапевтический эффект, данные лекарственные средства не лишены побочных эффектов и имеют ряд противопоказаний.

В связи с этим, изучение возможности разработки противогрибкового спрея на основе фитокомпозиции - вопрос значимый и своевременный.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является создание современной лекарственной формы - спрея противогрибкового действия содержащего в качестве активного компонента комплексное извлечение из нескольких растительных объектов.

Для реализации данной цели необходимо решить следующие задачи:

- разработать состав фитокомпозиции;

- провести общее фитохимическое изучение исходного растительного комплекса;

- выбрать оптимальные условия экстрагирования биологически активных веществ из предлагаемого сырьевого комплекса, и провести подробный анализ полученного комплексного извлечения;

- провести биофармацевтические исследования in vitro с целью выбора соответствующего состава вспомогательных компонентов спрея и разработать технологическую схему его производства;

- разработать нормы качества для предложенного спрея, провести предварительные фармакологические исследования и создать необходимую нормативную документацию.

Научная новизна исследований.

Разработана лекарственная форма - спрей для профилактики и лечения микозов стоп. В качестве активного компонента впервые используется комплексное извлечение из донника лекарственного травы, ромашки аптечной цветков, зверобоя продырявленного травы, тысячелистника обыкновенного травы, полыни горькой травы, душицы обыкновенной травы. Для получения комплексного извлечения, являющегося полупродуктом при производстве выбранной лекарственной формы, установлен оптимальный состав растительных объектов. Показано наиболее подходящее их соотношение в сборе и проведено его фитохимическое изучение. Определены оптимальные условия экстракции действующих компонентов - кумаринов и флавоноидов, из исследуемого состава.

Выбрана оптимальная композиция спрея на основании проведенных биофармацевтических исследований in vitro и реологических характеристик.

Разработана рациональная технологическая схема спрея и предложены нормы качества: описание, подлинность, плотность, величина рН, величина кинематической вязкости, микробиологическая чистота, количественное определение действующих веществ, а также технологические показатели качества, обеспечиваемые дозирующим устройством спрея: количество холостых нажатий, степень эвакуации, статический отпечаток факела распыла, однородность дозирования, количество доз во флаконе.

Практическая значимость результатов исследования.

Практическая значимость работы заключается в том, что создан оригинальный лекарственный препарат - спрей противогрибкового действия на основе комплексного извлечения из нескольких растительных объектов.

Полученные в результате экспериментальных исследований данные свидетельствуют о возможности применения спрея для профилактики и лечения микозов стоп. Разработана технологическая схема спрея, определены критерии его качества, установлен срок годности (2 года). Полученные данные свидетельствуют о целесообразности промышленного выпуска спрея.

Внедрение результатов исследования в практику. Разработан проект ФСП «Алтай-люкс, спрей противогрибковый», утвержденный в рамках фармацевтического производства ООО «Медлинфарм» г. Москва (от 03.05.2009), получен акт технологической апробации производства спрея от того же предприятия.

Основные положения, выносимые на защиту:

- обоснование выбора состава фитокомпозиции и ее фотохимическое изучение;

- результаты определения оптимальных условий экстрагирования биологически активных веществ из исходной смеси растительных объектов;

- результаты анализа полученного комплексного извлечения;

- результаты биофармацевтических исследований in vitro и реологических исследований по выбору оптимального состава композиции вспомогательных веществ для создания спрея;

- технологическая схема спрея;

- результаты разработки норм качества спрея и установление срока его годности.

Апробация и публикация результатов исследования.

Основные положения диссертационной работы доложены на межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы фармации» (г. Владикавказ, 2007 год), на IX Общероссийской научной конференции с международным участием «Успехи современного естествознания» (г. Сочи, 2008 год), на 63-ей региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2008 год), на 64-ой региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2009 год), межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы фармации» (г. Владикавказ, 2009 год).

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из которых 2 работы в изданиях рекомендуемых ВАК.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (№ государственной регистрации 01200101061) в рамках проблемы «Фармация».

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 128 страницах машинописного текста, содержит 36 таблиц, 13 рисунков, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), второй главы, посвященной материалам и методам исследований, 4-х глав, содержащих результаты собственных исследований, общих выводов, списка литературы и приложений. Список литературы включает 184 первоисточника, в том числе 21 иностранных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

РАЗРАБОТКА СОСТАВА II ТЕХНОЛОГИИ СПРЕЯ НА ОСНОВЕ ФИТОКОМПОЗИЦИИ ПРОТИВОГРИБКОВОГО ДЕЙСТВИЯ

При разработке фитокомпозиции для получения комплексного извлечения были учтены данные литературы о химическом составе растительного сырья, а также данные об их использовании в терапии грибковых заболеваний. На основании этого были выбраны следующие растительные объекты: донника лекарственного трава, ромашки аптечной цветки, зверобоя продырявленного трава, тысячелистника обыкновенного трава, полыни горькой трава, душицы обыкновенной трава.

Правильность выбора именно этих сырьевых объектов была подтверждена результатами проведенных предварительных исследований по выявлению специфической активности, и установлено, что предложенная нами смесь лекарственного растительного сырья активна в отношении штаммов Candida albicans, Trichophyton rubrum и Trichophyton mentagraphytes.

Далее проводили фитохимическое изучение исходного растительного комплекса. Нами проанализирован исследуемый сырьевой материал на содержание в нем полифенольных соединений. Методами ТСХ и БХ в различных системах растворителей подтверждено наличие некоторых флавоноидов, кумаринов и гидрокси-коричных кислот. В результате проведенного количественного анализа установлено, что в исследуемой фитокомпозиции содержится 3,89±0,05% кумаринов при относительной ошибке ±1,39%, и флавоноидов - 2,78±0,05% при относительной ошибке ±1,91%, что укладывается в нормы спектрофотометрического анализа в УФ-области, не превышая ±2,5%.

Выбор оптимального соотношения растительных объектов для их совместного экстрагирования основывался на результатах количественного определения действующих веществ (флавоноидов и кумаринов), а также предварительных фармакологических исследований в отношении специфической активности. В результате был выбран следующий состав фитокомпозиции: травы донника лекарственного 31,5%, ромашки аптечной цветков и зверобоя продырявленного травы по 23%, травы тыся-

челистника обыкновенного, травы полыни горькой, травы душицы обыкновенной по 7,5%.

Определены оптимальные условия экстракции биологически активных веществ. В качестве наиболее эффективного экстрагента выбран 70% спирт этиловый. Результаты выбора оптимального соотношения сырье - экстрагент представлены на рис. 1.

О КОЛИЧЕСТВО КУМАРИНОБ. % О КОЛИЧЕСТВО ФЛАВОНОИДОВ. %

Рис. 1 - Результаты исследования по выбору оптимального соотношения сырье - экстрагент

Примечание - 1 - соотношение 1:5;

2 - соотношение 1:8;

3 - соотношение 1:10.

Установлено, что оптимальным соотношением фаз является 1:8, которое обеспечивает максимальный выход флавоноидов и кумаринов.

Наиболее подходящая измельченность сырья составила 1-2 мм. Были проведены исследования и в отношении фактора времени, влияющего на процесс экстракции (рис. 2). Из данных рис. 2 видно, что состояние близкое к равновесному достигается через 24 часа настаивания. Это явилось основанием рекомендовать для проведения экстракции указанное время как оптимальное.

0,3 -

0 -I---I-1-1-Т-

8 16 24 36 48

ВРЕМЯ ЭКСТРАКЦИИ, ЧАС

Рис. 2 - Результаты определения оптимального времени экстракции Проведены исследования по выбору оптимального числа ступеней экстракции. Основные результаты эксперимента отображены на рис. 3.

100 и

0 1 2 3 4 5

ступени экстракции

Рис. 3 - Определение оптимального числа ступеней экстракции

Как видно из данных рисунка 3, при трехкратной экстракции извлечено 92,5% флавоноидов и 89,3% кумаринов. Четвертая и пятая ступени оказались неэффективными, так как после них извлекалось лишь 1,3 и 2,1% соответственно, вследствие чего предложено использовать трехступенчатую экстракцию для получения комплексного извлечения.

Дальнейшими исследованиями был установлен состав полученного комплексного извлечения с помощью ВЭЖХ (рис. 4).

5.05 А1

У. 5-

1 еа 1 ¡7 'Л се м со о Г? 1 геЙс 13 шш г*2£ [у | £г>' £ * * 1 § | V 5 I 11 * ш Л' VI II а.« 1 Э-г э ? ? ж •л - сь ' а . £ -её' 7 ^■*<> 41 Л

254 х ип

5 10 15 20 25 30 35 ми»«

Рис. 4 - Хроматограмма комплексного извлечения

Из данных хроматограммы видно, что в комплексном извлечении обнаружено более 30 веществ, 15 из которых идентифицировано.

Количественный анализ комплексного извлечения показал, что сумма кумаринов составляет 0,435±0,004%, а сумма флавоноидов - 0,23 5±0,003%.

Полученное комплексное извлечение было использовано в качестве действующего компонента для включения в спрей-композицию. В качестве носителей использовали различные гидрофильные пластификаторы, широко применяемые в производстве, и не вызывающие сенсибилизирующих проявлений (табл. 1). В качестве гидрофильных пластификаторов были использованы: полиэтиленоксид - 400, про-пиленгликоль 1,2 и глицерин. По экспресс-методике была проверена способность

каждого состава высвобождаться из спрей-упаковки через дозирующее устройство. При неоднократном нажатии на распылитель высвобождения спрей-композиции из упаковки в виде сплошной струи не наблюдалось.

Таблица - 1 Составы исследуемых модельных образцов спрея

Компонент, г Состав, №

1 2 3 4 5 6

оо г; Комплексное извлечение 30,0 30,0 30,0 30,0 30,0 30,0

Пластификаторы Полиэтиленоксид - 400 10 5,0 10,0 2,5 2,5

Пропиленгликоль 1,2 10 5,0 2,5 2,5 10,0

Глицерин 5,0 5,0 5,0 2,5 10,0 2,5

Растворитель Вода очищенная До 100,0 До 100,0 До 100,0 До 100,0 До 100,0 До 100,0

Все спрей-композиции были подвергнуты биофармацевтическим исследованиям in vitro методом диализа через полупроницаемую мембрану. Результаты исследований представлены на диаграммах (рис. 5 и 6).

к и X

Э

s 5?

и ц

5 ©

а т S

ц

—♦—состав № 1 ■ —состав № 4

40 60

время, мин

-состав № 2 -состав № 5

100

^ состав № 3 -состав № 6

Рис. 5 — Динамика высвобождения суммы фдавоноидов в диализат из спрей-композиций

Из данных рис. 5 видно, что наибольшая степень высвобождения флавоноидов из спрей-композиций в диализат наблюдается к 90 мин. эксперимента у состава № 4 и № 6 и составляет 84,7% и 81,7% соответственно. Степень высвобождения у состава № 1 - 71,6%, у состава № 2 - 74,8%, у состава № 3 и № 5 - 74,0% и 76,7% соответственно.

Наивысшая степень высвобождения кумаринов также соответствует составу № 4 - 78,5% и № 6 - 77,2%. В связи, с чем были выбраны для дальнейшего изучения составы № 4 и № 6.

ю о о о

0,12

0,1

0,08

0,06

0,04

0,02

—состав № 1 ..-К—состав N5 4

40 60

время, мин

—состав № 2 -ж—состав № 5

100

—-^—состав № 3 —•—состав № 6

Рис. 6 - Динамика высвобождения суммы кумаринов в диализат из спрей-композиций Для пролонгации фармакотерапевтического эффекта спрея в выбранные составы вводили адгезивные полимеры (табл. 2). В качестве полимерных пролонгато-ров использовали 25% спиртовые растворы коллидона Б 90, коллидона Б 30 и кол-лидона Р 25. При оценке способности модельных составов спрея высвобождаться из упаковки установлено, что композиции № 7 и № 10 дают сплошную струю при высвобождении через дозирующее устройство (наблюдение визуальное), в связи с чем, они были исключены из дальнейших исследований.

Таблица 2 - Модельные составы спрей-композиции с пролопгаторами

Матрица, №

Компонент, г 7 8 9 10 11 12

с с; Коплскснос извлечение 30,0 30,0 30,0 30,0 30,0 30,0

о Й Полнэтиленоксид - 400 10,0 10,0 2,5 2,5 2,5 10,0

3 я сх н Пропилепгликоль 1,2 2,5 2,5 10,0 10,0 10,0 2,5

сЗ £ Глицерин 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5

Га о. 25% спиртовый р-р Коллндона Р 90 15,0 15,0

Й и о с; 25% опнрювын р-р Коллидона Р30 15,0 15,0

а. 25% спиртовый р-р Коллидона Р 25 15,0 15,0

Раствори ри- Вода очищенная До 100,0 До 100,0 До 100,0 До 100,0 До 100,0 До 100,0

Выбор оптимального пролонгатора осуществлен в результате проведенных биофармацевтических исследований, результаты которых приведены на диаграммах (рис. 7 и 8).

0,07

к

о X 0,06

1

ш X а: 0,05

ю о т О Ч X 0,04

3 ш г о ш 0,03

а н о V т I 0,02

£ С 0,01

§ 0

-сотсав № 8

Рис. 7 - Динамика высвобождения суммы флавоноидов в диализат из спрей-композиций

Как видно из данных рис. 7, добавление синтетического полимера в состав спрей-композиции продлевало время высвобождения действующих веществ до 105 минут с начала эксперимента.

Наиболее выраженное высвобождение флавоноидов наблюдается у составов № 9 и № 12- 84,1% и 85,7% соответственно.

к и

X

а

а ч

О ю о а о

а о а к и а

X

Ц

Рис. 8 - Динамика высвобождения суммы кумаринов в диализат из спрей-композиций

Из данных рис. 8 видно, что наивысшая степень высвобождения кумаринов к 105 минуте эксперимента соответствовала составу № 12 - 83,6% и составу № 9 -82,8%.

Таким образом, в ходе биофармацевтических исследований были выбраны 2 состава - это состав № 9 и состав № 12.

Заключительным этапом исследований по выбору оптимальной композиции вспомогательных веществ было определение вязкости, являющейся одним из основных показателей, влияющих на скорость и полноту высвобождения спрея через дозирующее устройство. По реологическим свойствам спрей-композиция № 12 является более эффективной (кинематическая вязкость равна 2,37 мм2 х с'1), чем композиция № 9.

0 20 40 60 80 100 120

время, мин

—»—сотсав № 8 —я—состав № 11 —состав № 9 —состав № 12

В результате определения микробиологической чистоты установлено, что свежеприготовленные спрей-композиции по истечении 48 часов соответствовали нормам микробиологической чистоты категории 2. Однако, при хранении в течение 5 суток, в условиях повышенной температуры, благоприятной для развития микрофлоры, бак-териостатическим действием они не обладали. Что вызвало необходимость использования консервантов. Микробиологические исследования по выбору консервантов проводились в б повторностях. Результаты исследования отражены в таблице 3.

Таблица 3 - Микробиологическая чистота модельных образцов спрея

Модельные образцы спрея с консервантами Общее число жизнеспособных микроорганизмов в 1 г спрея аэробных бактерий и грибов (суммарно) Энтсробактсрин и других грамотринатсль-ных бактерий в 1 г спрея Наличие Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa

через 30 сут спустя б месяцев через 30 сут спустя 6 месяцев через 30 сут спустя 6 месяцев

1 менее 10 15 менее 10 менее 10 нет нет

.. е о? Son В й о- 2 «То же» менее 10 «То же» «То же» «То же» «То же»

3 «» «То же» «» «» «» «»

g 5 р 4 «» «» «» «» «» «»

н " гп 5 «» «» «» «» «» «»

6 менее 10 12 «» «» «» «»

5 £ 1 15 20 менее 10 менее 10 нет нет

§о §о 2 12 32 «То же» «То же» «То же» «То же»

3 10 15 «» «» «» «»

га а □ &. 4 менее 10 менее 10 «» «» «» «»

о 2 ю 5 5 «То же» 10 «» «» «» «»

6 «» менее 10 «» «» «» «»

Данные таблицы 3 свидетельствуют о том, что консервирующие свойства

бензалкония хлорида в 0,01%-ной концентрации уступают смеси нипагин: нипазол (3:1) в 0,2%-ной концентрации по отношению к бактериальной флоре. На основании проведенных исследований выбран состав спрея. Состав спрея на основе комплексного извлечения, г:

Комплексное извлечение 30,0

Полиэтиленоксид - 400 10,0

Пропиленгликоль 1,2 2,5

Глицерин 2,5

25%-ный раствор Коллидона Р 25 15,0

Нипазол 0,05

Нипагин 0,15

Вода очищенная 100,0

ВР1.1 Санитарная обработка помещений

ВР 1.2 Санитарная обработка оборудования

ВР1.3 Санитарная подготовка технологической одежды

ВР 1.4 Подготовка воздуха

ВР3.1 Мойка флаконов

ВР3.2 Сушка флаконов

ВР5.1 Отмеривание и отвешивание ингредиентов

ВР5.2 Измельчение и отвешивание ЛРС

ТП7.1 Растворение Коллидона Р 25 в спирте этиловом 95%

ТП7.2 Смешивание ПЗО-400 с пропиленгпиколем 1,2 и глицерином

ТП 7.3 Смешивание комплексного извлечения с раствором пластификаторов и полимера

ТЛ 7.4 Растворение консерванта

ТП 7.5 Гомогенизация

ВР1

Санитарная подготовка производства

ВР2 Кг, К* Подготовка годы очищенной

1

ВРЗ К, Подготовка флаконов

1

ВР4 к, Подготовка дозаторов и насадок

ВР5 1 Кт Подготовка

1

ТП6 к,л Экстракция БАВ из ПРС

1

ТП7 к„к, Получение спрей-композиции

1

ТП 8 Кт,К, Розлив во флаконы

1 г

ТП9 Кт Установка дозаторов на флаконы

ТЛЮ к. Маркировка флаконов

1

ТП11 Установка флаконов в пачку

ТП12 Групповая упаковка

Промывная вода в канализацию

Потери механические

Потери технологические

Потери механические

Продукция на склад

Рис. 9 - Технологическая схема разработанного спрея

Технологическая схема спрея на основе комплексного извлечения приведена на рисунке 9. Основными стадиями получения предлагаемого спрея являются: экстракция БАВ из смеси ЛРС, получение спрей-композиции, розлив ее во флаконы и соединение флаконов с дозирующими устройствами.

Основные показатели качества спрея приведены в таблице 4.

Таблица 4 - Показатели и нормы качества спрея

Наименование показателя Характеристика и норма

Описание Спрей - упаковка, выполненная из полимерного материала с навинчивающимся дозирующим устройством. Содержимое упаковки представляет собой зеленовато-коричневого цвета, прозрачную, гомогенную жидкость, с ароматным растительным запахом.

Подлинность: флавоноиды кумарины положительные реакции положительные реакции

Водородный показатель 6,18

Плотность 1,408 ±0,03 г/см3

Вязкость 2,37 мм2 х с"1

Количественное определение: флавоноиды кумарины не менее 0,069 ± 0,007% не менее 0,129 ±0,006%

Микробиологическая чистота категория 2

Установленные показатели и нормы качества положены в основу разработан-

ного проекта ФСП на спрей.

Определены технологические показатели спрея, обеспечиваемые дозирующим устройством: количество доз во флаконе - 194±3 дозы; степень эвакуации спрея, равная 99,2%; количество холостых нажатий до начала выхода содержимого спрея из упаковки - 5 раз.

При анализе спрея на однородность дозирования установлено, что отклонение от фактического содержания для флавоноидов находится в пределах от ±0,29% до ±2,0%, а отклонение от фактического содержания для кумаринов - от ±0,2% до ±1,2%.

Статический отпечаток спрея является одним из важнейших факторов, влияющих на эффективность его распыления.

При распылении вещества на плоскость образуется статический отпечаток факела распыления, чаще всего кольцевой формы, изображенный на рисунке 10.

Рис. 10 - Статический отпечаток факела распыла спрея

Как видно из рис. 10 статический отпечаток имеет три зоны: 81-площадь в{гутреннего плотного участка, состоящую из крупных частиц, 82-нолезную, или рабочую площадь, состоящую из мелкого тумана частиц спрея, ЭЗ-площадь внешней зоны разброса частиц. При хорошем распылении препарата статический отпечаток имеет наименьший диаметр плотного участка, наибольшую площадь рабочей зоны и наименьший разброс во внешней зоне. Отпечаток факела распыла представлен на рис. 11.

По статическому отпечатку факела распыла можно установить правильность подбора оптимальной композиции спрея. Результаты проведенного эксперимента представлены в табл. 5. Из данных таблицы и рис. 5 видно, что во всех исследуемых случаях оптимальное равенство 82 > БЗ сохранялось, что доказывает правильность

Рис. 11 - Статический отпечаток факела распыла спрея

выбранной оптимальной композиции действующих и вспомогательных веществ, влияющей на способность спрея высвобождаться через дозирующее устройство.

Таблица 5 - Результаты определения статического отпечатка факела распыла

спрея

Диаметр полезной или рабочей зоны (d),CM Диаметр всего отпечатка (D), см Полезная площадь (Sj), см2 Площадь внешней зоны (%), см2

10,0 14,0 78,5 75,4

10,2 14,3 81,7 78,9

10,4 14,9 84,9 89,1

10,3 14,2 83,3 75,0

10,2 14,2 81,7 76,6

10,6 14,4 1 88,2 77,9

Срок годности спрея, на основе комплексного извлечения, установленный в естественных условиях (при t = 20 °С), составил 2 года.

Было изучено общетоксическое действие спрея, включающее определение «острой» токсичности и местнораздражающего действия. В результате изучения «острой» токсичности установлено, что спрей на основе комплексного извлечения, относится по ГОСТ 12.1.007-76 к 6 классу токсичности - относительно безвредные вещества. Результаты проведенных исследований на местнораздражающее действие свидетельствуют о том, что раздражающего действия разработанный спрей не проявляет.

Установлено также, что спрей оказывает противовоспалительное действие.

Предварительные исследования противогрибковой активности спрея проводили методом дисков, по отношению к грибам Candida albicans, Trichophyton rubrum и Trichophyton menthagraphytes и Microsporum canis. Установлено, что наибольшую активность спрей оказал в отношении Trichophyton mentagraphytes (25 мм) и Trichophyton rubrum (20 мм). Несколько меньшая активность проявилась в отношении Candida albicans (18 мм) и Microsporum canis (16 мм).

Антибактериальный эффект изучали методом диффузии в агар (метод лунок). В результате установлено, что наибольшая антибактериальная активность наблюдалась в отношении Staphylococcus aureus (18 мм), Echerichia coli (17 мм) и Bacillus

subtilis (16 мм). Несколько меньшую антибактериальную активность спрей проявил в отношении штаммов Aspergillus niger (14 мм), и Pseudomonas aeruginosa (12 мм).

Таким образом, разработанный нами впервые спрей на основе комплексного извлечения можно рекомендовать для профилактики и лечения микозов стоп.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Определены наиболее важные товароведческие показатели сырья (влажность, зольность), и их смеси: влажность - 5,6%, зола общая и зола, нерастворимая в 10%-ном растворе хлористоводородной кислоты - 4,3% и 1,5% соответственно.

2. Установлено оптимальное соотношение растительных объектов в смеси сырья: донника лекарственного травы - 31,5%, цветков ромашки аптечной цветков и зверобоя продырявленного травы - по 23%, тысячелистника обыкновенного травы, полыни горькой травы и душицы обыкновенной травы - по 7,5%.

3. Определены оптимальные условия экстракции БАВ из сырьевой смеси: экстра-гент - спирт этиловый 70%-ной концентрации, соотношение сырье - экстрагент - 1: 8, степень измельчения сырья - 2 мм, время экстракции - 24 часа, число ступеней экстракции-3.

4. Проведена оценка качества полученного комплексного извлечения по следующим показателям: описание, подлинность, плотность - 0,8758±0,004 г/см3, рН - 5,92, количественное определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин -0,235±0,003% и суммы кумаринов в пересчете на кумарин - 0,435±0,004%.

5. Проведены биофармацевтические исследования методом диализа через полупроницаемую мембрану по выбору оптимальной композиции вспомогательных веществ для создания спрея. Рассчитана степень высвобождения кумаринов (83,6%) и флавоноидов (85,7%) в диализат из спрей-композиций.

6. Разработана оптимальная технологическая схема спрея на основе фитокомпози-ции, и показано, что основными технологическими этапами являются: получение комплексного извлечения, получение спрей-композиции, розлив ее во флаконы и установка дозаторов на флаконы.

7. Предложены нормы качества спрея: описание, подлинность, водородный показатель - 6,18, плотность - 1,408±0,03, вязкость - 2,37 мм2 х с"', количественное определение действующих веществ: сумма флавоноидов в пересчете на рутин - не менее

0.0697., сумма кумаринов в пересчете на кумарин - не менее 0,1295%.

8. Определены показатели качества спрея, характеризующие работу дозирующего устройства: однородность дозирования (отклонение от фактического содержания флавоноидов колеблется от ±0,29 до ±2,0%, отклонение от фактического содержания кумаринов находится в пределах от ±0,20 ±1,2%), количество доз во флаконе (194±3,4 дозы), количество холостых нажатий до начала выхода содержимого из спрей - упаковки (5), степень эвакуации (99,2± 0,07%), качество распыления спрея по статистическим отпечаткам факела распыла.

9. Доказана специфическая активность спрея: противогрибковая в отношении Trichophyton mentagraphytes (25 мм) и Trichophyton rubrum (20 мм), Candida albicans (18 мм) и Microsporum canis (16 мм); и антибактериальная в отношении Staphylococcus aureus (18 мм), Echerichia coli (17 мм) и Bacillus subtilis (16 мм), Aspergillus niger (14 мм), и Pseudomonas aeruginosa (12 мм).

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ДИССЕРТАЦИИ

1. Морозова, Е.В. Современное состояние исследований противогрибковых парафар-мацевтических средств на основе фитокомпозиций и возможности использования их в виде спрея / Е.В. Морозова // Актуальные проблемы фармации: сб. материалов межрегион, науч. конф. (26-27 апреля 2007 г.). - Владикавказ, 2007. - С. 50-53.

2. Изучение химического состава комплексного экстракта противогрибкового действия с помощью метода ВЭЖХ / Е.В. Морозова, Ю.А. Морозов, С.В. Клочков, М.Г. Цыбулина II Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании: материалы меджунар. науч.-практич, конф. (20-21 ноября 2008 г.). -Белгород: Политерра, 2008. - С. 191-195.

3. Морозова, Е.В. Разработка метода ТСХ для выбора оптимального экстрагента при получении комплексного экстракта противогрибкового действия / Е.В. Морозова, Ю.А. Морозов, II.B. Благоразумная // Биологически активные соединения природ-

иого происхождения: фитотерапия, фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника: материалы междунар. науч.-практич. конф. (30 июня - 3 июля 2008 г.). - Белгород: Политерра, 2008. - С. 249-253.

4. Морозова, Е.В. Разработка методики количественного определения кумаринов в комплексном экстракте противогрибкового действия, полученного различными экс-трагентами / Е.В. Морозова, Н.В. Благоразумная // Фундаментальные исследования. -2008.- №8. -С. 147-149.

5. Морозова, Е.В. Разработка методики количественного определения флавоноидов в комплексном экстракте противогрибкового действия / Е.В. Морозова, Н.В. Благоразумная // Науч. жизнь. - 2008. - № 5. - С. 14-18.

6. Морозова, Е.В. Результаты предварительного эксперимента по определению специфической активности противогрибковой фитокомпозиции / Е.В. Морозова // Науч. обозрение. - 2008. - № 5. - С. 22-23.

7. Морозова, Е.В. Фармакологическое исследование спрея противогрибкового действия / Е.В. Морозова // Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании: материалы меджунар. науч.-практич. конф. (20-21 ноября 2008 г.). - Белгород: Политерра, 2008. - С. 186-190.

8. Морозова, Е.В. Использование инновационных упаковочных форм в технологии спреев / Е.В. Морозова // Рос. мед.-биол. вестн. им. Академ. И.П. Павлова. - 2008. -№ З.-С. 145-149.

9. Морозова, Е.В. Спреи: новая лекарственная форма или разновидность аэрозолей / Е.В. Морозова, Э.Ф. Степанова, Ю.А. Морозов // Новая аптека. - 2009. - № 2. - С. 104-106.

Морозова Елизавета Владимировна

РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИИ СПРЕЯ НА ОСНОВЕ ФИТОКОМПОЗИЦИИ ПРОТИВОГРИБКОВОГО ДЕЙСТВИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Сдано в набор 09.10.2009 г. Подписано в печать 09.10.2009 г. Формат 60x84 Vis. Бумага «Снегурочка». Гарнитура Times New Roman Cyr. Усл. неч. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 812.

Отпечатано: ПБОЮЛ Киселева О.В. ОГРН 304463202600213

Актуальность темы. Грибковые заболевания являются одной из старейших патологий, которой страдает человечество, и количественно эти болезни пока не уменьшаются. В то же время арсенал отечественных антимикотических препаратов практически ограничен антифунгальными антибиотиками и препа

1 \ ратами на основе синтетических соединений. Но использование данных лекарственных препаратов сопровождается проявлением целого ряда побочных действий, что зачастую ограничивает частоту их применения. При этом, как правило, в качестве основных побочных эффектов наблюдаются: различные аллерги ческие реакции, снижение иммунитета, нарушение функционирования пищеваI рительной системы. В связи с этим поиск новых антимикотических средств, особенно из сырья растительного происхождения - задача вполне актуальная.

Тем более, что лекарственные препараты из растительного сырья на сегодняш нии день занимают значительное место в номенклатуре лекарственных средств.

Многокомпонентность лекарственных фитопрепаратов не только расширяет диапазон терапевтической активности, но и обеспечивает более мягкое их дейI ствие. |

Среди всех известных дерматомикозов наиболее распространен микоз стоп, что требует не только выбора оптимального лекарственного вещества, но и соответствующей лекарственной формы, для обеспечения рационального использования выбранной субстанции.

Из существующих на сегодняшний день лекарственных форм, больше всего для этих целей подходят спреи, как по своим биофармацевтическим характеристикам, так и по технологическим показателям. Однако в настоящее время ассортимент антимикотических спреев ограничен (термикон, бифосин, ламизил, фунготербин), и состав их не очень разнообразен. Оказывая выраженный терапевтический эффект, данные лекарственные средства не лишены побочных эффектов и имеют ряд противопоказаний.

В связи с этим, изучение возможности разработки противогрибкового спрея на основе фитокомпозиции - вопрос значимый и своевременный.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы, является создание современной" лекарственной формы — спрея • противогрибкового' действия, содержащего в качестве активного компонента комплексное извлечение из нескольких растительных объектов.

Для.реализации данной цели необходимо решить следующие задачи:

- разработать состав фитокомпозиции;

- провести общее фитохимическое изучение исходного растительного комплекса; I

- выбрать оптимальные уел овия-экстрагирования, биологически^ активных веществ.из. предлагаемого сырьевого» комплекса и провести подробный анализ I полученного комплексного извлечения;

- разработать лекарственную форму — спрей на-основе комплексного? изI влечения; |

- выполнить биофармацевтические исследования in vitro с целью выбора соответствующего, состава' вспомогательных компонентов спрея и, разработать технологическую ;схему. его производства;

- разработать,нормы-качества для* предложенного спрея; провести предварительные^ фармакологические исследования и создать необходимую нормативную документацию;

Научная новизна> исследований.

Разработана лекарственная форма - спрей дляшрофилактики и лечения микозов стоп. В качестве* активного компонента впервые используется комплексное извлечение из донника лекарственного травы, ромашки, аптечной цветков, зверобоя, продырявленного травы, тысячелистника обыкновенного травы, полыни горькой травы, душицы обыкновенной" травы. Для получения комплексного извлечения, являющегося полупродуктом при производстве выбранной лекарственной формы, установлен оптимальный состав растительных объектов. Показано наиболее подходящее их соотношение в сборе и проведено его фитохимическое изучение. Определены оптимальные условия экстракции действующих компонентов - кумаринов и флавоноидов, из разработанного состава.

Выбрана оптимальная композиция спрея на основании проведенных биофармацевтических исследованийлп vitro и реологических характеристик.

Разработана рациональная технологическая схема спрея и предложены нормы,качества: описание, подлинность, плотность, величина рН, величина кинематической вязкости, микробиологическая* чистота, количественное опреде

I f ление действующих веществ, а также технологические показатели качества, обеспечиваемые дозирующим устройством, спрея: количество холостых нажатий, степень эвакуации, статический* отпечаток факела распыла, однородность

11 дозирования, количество доз во флаконе. i

Практическая значимость результатовисследования. |

Практическая значимость работы заключается в.том, что создан ориги нальный лекарственный препарат - спрей противогрибкового действия, на основе комплексного извлечения из нескольких растительных объектов. ' I

Полученные в результате экспериментальных исследований, данные свидетельствуют о возможности применения спрея для профилактики и лечения микозов стоп. Разработана технологическая схема спрея, определены критерии его качества, установлен срок годности (2* года). Полученные данные свидетельствуют о целесообразности промышленного выпуска спрея.

Внедрение результатов исследования в» практику. Разработана ФСП «Алтай-люкс, спрей противогрибковый», утвержденная в рамках фармацевтического производства ООО «Медлинфарм» г. Москвы (от 03.05.2009), получен акт технологической апробации производства спрея от того же предприятия. Основные положения, выносимые на защиту:

- обоснование выбора состава фитокомпозиции и ее фитохимическое изучение;

- результаты определения оптимальных условий экстрагирования биологически активных веществ из исходной смеси растительных объетков;

- результаты анализа полученного комплексного извлечения;

- результаты биофармацевтических исследований?т vitro и деологических исследований^ по выбору оптимального* составам композиции вспомогательных веществ для создания спрея;

- технологическая схема спрея;

- результаты разработки; норм качества спрея; и установление срока.' его годности.

Апробация и публикация результатов исследования.

• Основные положения, диссертационной работы доложены, на межрегиональной« научной конференции «Актуальные: проблемы-, фармации» (г:. Владикавказ, 2007 год), на;1Х 0бщероссийскойшаучно№конференции; с международным- участием «Успехи современного ; естествознания» (г. (Ночи;. 2008 год), на

1 ■ '

63-ей региональной; конференции nos фармации, фармакологии и подготовке кадров; (г. Пятигорск, 2008 год),*,на;64-ой региональной конференц1ии:по'фармации; фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2009 год); межрегиональной« научной конференции «Актуальные проблемы фармации» (г. Влади

-•".'' " ■ j кавказ, 2009 год): Г

По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из которых 2 работы в изданиях рекомендуемых ВАК. J

• ' '■ 1 Связь задачшсследованишс проблемнымшланом?фармацевтических наук.

Диссертационная работа- выполнена' в- соответствии* с , планом; научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (№ государственной регистрации, 01200101061) в рамках проблемы

•, ■ j , • •

Фармация". " , .

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на- 132 страницах машинописного текста, содержит 36 таблиц,. 13 рисунков,.состоит из введения; обзора литературы (1 глава), второй, главы, посвященной материалам и методам:исследований, 4-х глав, содержащих результаты собственных исследований, общих выводов; списка литературы и приложений. Список литературы включает 184 первоисточника, в том числе 21 иностранных авторов.