Стандартизация сырья и препаратов солодки

Егоров, Максим Валерьевич

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Стандартизация сырья и препаратов солодки

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Егоров, Максим Валерьевич Пермь 2005 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Стандартизация сырья и препаратов солодки

На правах рукописи

ЕГОРОВ МАКСИМ ВАЛЕРЬЕВИЧ

СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ СОЛОДКИ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь - 2005

Диссертационная работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор В.А. Куркин Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор СЕ. Дмитрук доктор фармацевтических наук, профессор Т.И. Плеханова

Ведущая организация:

Курский государственный медицинский университет

Защита состоится _2005 г. в часов на

заседании Диссертационного совета Д 208.068.01 при ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального развития РФ» по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48, тел. (3422) 129-006; факс. (3422) 129-476.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «ПГФА Минздравсоцразвития РФ» по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Ленина, 48.

Автореферат разослан (З^/?/) 2005 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук, доцент

Е.В. Метелева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время особую актуальность приобретают исследования в плане расширения ассортимента доступных широким слоям населения препаратов на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС). В этом отношении особый интерес представляют виды солодки (солодка голая - Glycyrrhiza glabra L., солодка уральская -Gfycyrrhiza uralensis Fisch.), на основе корней которых выпускается целый ряд препаратов (экстракты густой, сухой, сироп солодкового корня и др.). Однако создание современных препаратов возможно лишь на основе методик, отвечающих параметрам валидации. С учетом этого обстоятельства, а также такого явления, как фальсификация лекарственных средств, особую актуальность приобретают исследования, направленные на совершенствование методик качественного и количественного анализа ЛРС и фитопрепаратов. Для стандартизации сырья и суммарных препаратов солодки ранее не использовались методы тонкослойной хроматографии (ТСХ) и государственные стандартные образцы (ГСО).

Кроме того, при решении этой проблемы необходимо учитывать то обстоятельство, что методики качественного и количественного анализа должны соответствовать принципу унификации или гармонизации в ряду: сырье-субстанция-лекарственная форма.

В ходе исследований учеными Самарского государственного медицинского университета и Всероссийского института лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) разработан Государственный стандартный образец глицирам (ФС 42-0034-00), причем при этом исправлена химическая структура глицирама и изучены особенности физико-химических свойств глицирризиновой кислоты. Ранее харьковскими учеными для целей стандартизации флавоноидных препаратов (ликвиритон, флакарбин) предложено использовать ГСО ликуразида (ФС 42-2573-88). Следовательно, появились объективные предпосылки для совершенствования методик

качественного анализа сырья и препаратов солодки с использованием хроматографических методов, в частности ТСХ, и соответствующих ГСО.

Цели и задачи исследования Целью настоящей работы является исследование по разработке методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов солодки (экстракт жидкий).

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Систематизация литературных данных о химическом составе солодки и ее фармакологическом действии.

2. Изучение условий хроматографического разделения сапонинов и флавоноидов корней солодки, позволяющих обнаруживать доминирующие биологически активные соединения (БАС) -глицирризиновую кислоту и ликуразид.

3. Разработка методики качественного анализа корней солодки.

4. Разработка методики количественного анализа корней солодки.

5. Разработка методик качественного и количественного анализа препарата «Экстракт солодки жидкий».

6. Обоснование способа получения препарата «Солодки сироп» на основе солодки экстракта жидкого.

7. Разработка проекта ФС «Солодки корни».

Научная новизна. Впервые изучен химический состав корней солодки голой, произрастающей в Самарской области. При этом выделены и идентифицированы с использованием УФ-, ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии и результатов химических превращений глицирризиновая кислота, ликуразид, изоликвиритигенин, изоликвиритин, ликвиритигенин, ликвиритин, формононетин и ононин. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов солодки по доминирующим группам БАС — сапонинам (глицирризиновая кислота) и флавоноидам (ликуразид).

Для достоверного определения диагностических веществ в сырье и препаратах солодки предложено использовать ГСО. В случае определения

глицирризиновой кислоты предложено использовать стандарт глицирам (ФС 42-0034-00), а для анализа флавоноидов — ликуразид (ФС 42-2573-88), что позволит более четко осуществлять идентификацию диагностических веществ и, следовательно, обеспечит валидацию методик качественного анализа сырья и препаратов солодки.

Научно обоснована необходимость унификации методик качественного и количественного анализа сырья и суммарных препаратов солодки («солодки экстракт жидкий», «солодки экстракт густой», «солодки экстракт сухой» и «солодки сироп») с использованием методов тонкослойной хроматографии и прямой спектрофотометрии.

Практическая значимость.

1. Разработаны методики качественного и количественного анализа сырья солодки, что отражено в проекте ФС «Солодки корни».

2. Унифицированы методики качественного и количественного анализа сырья и препаратов солодки с использованием ТСХ-анализа и спектрофотометрии.

3. Разработаны методики качественного и количественного анализа «солодки экстракта жидкого».

4. Обоснована целесообразность оптимизации способа изготовления сиропа солодкового корня, что позволяет повысить содержание глицирризиновой кислоты в данном препарате в 3-3,5 раза.

5. Оформлен проект ФС «Солодки корни», который проходит экспертизу в Фармакопейном государственном комитете Минздравсоцразвития РФ (письмо № 130 от 27.01.05 г.).

6. Результаты исследований используются в научных изысканиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета (акты внедрения от 01.03.2005 г.).

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты изучения химического состава корней солодки, произрастающей в Самарской области.

2. Данные проведенных исследований по разработке подходов к стандартизации сырья солодки.

3. Методики качественного и количественного анализа «солодки экстракта жидкого».

4. Способ получения «солодки сиропа».

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Государственной регистрации 01200105332) и Республиканских программ:

1. «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях» по теме:

«Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

2. «Разработка методик качественного и количественного анализа сырья, препаратов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды и флавоноиды» (№ Государственной регистрации 01990007536).

Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены и обсуждены на 2-ой Международной конференции молодых ученых и студентов « Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2001г.); на VII Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара,2001г.); на VIII Международном конгрессе «Актуальные проблемы экологии человека» (Самара, 2002 г.); на IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002 г.); на X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва,

2003г.); на Всероссийской конференции «Молодые ученые - медицине» -Аспирантские чтения -2003 (Самара, 2003 г.); на 4-ой Международной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2003 г.); на Региональной медицинской конференции «Тенденции и перспективы развития» (Самара, 2004 г.); на XXI International conference on polyphenols (Marrakech - Morocco, 2002г.); на XXII International conference on polyphenols (Helsinki-Finland,2004 г.).

Основное содержание диссертации опубликовано в 12 научных работах.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц, 20 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (Глава 1), описания объектов и методик исследования (Глава 2), 3 глав, отражающих результаты собственных эксперементальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 204 источников, из которых 51 — на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.

Глава 1 содержит аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по проблеме современного состояния исследований солодки голой и солодки уральской, где обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава растений, фармакологической активности и применению в медицинской практике.

В главе 2 представлена характеристика объектов и методов исследования. Приведены методики анатомо-морфологического химического и физико-химического изучения лекарственного сырья, индивидуальных веществ и препаратов, а также контроля качества лекарственных форм на основе сырья солодки.

В главах 3-5 экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований по изучению химического состава корней и препаратов солодки, совершенствованию методов стандартизации, разработке новых препаратов и оценке их качества.

В приложение включены: материалы по разработке нормативной документации, акты внедрения.

Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистически и представлены в таблицах, на рисунках, выражены в соответствующих формулах, которые приведены в тексте диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Исследование химического состава корней солодки, произрастающей в Самарской области

В результате изучения химического состава корней солодки голой, произрастающей в Самарской области, выделено 9 индивидуальных веществ, относящихся к тритерпенам (1-2), флавоноидам (3-9). Разделение веществ осуществляли с помощью метода колоночной хроматографии. Для элюирования использовали смеси растворителей, такие как: хлороформ -этиловый спирт, этиловый спирт - вода в различных соотношениях. Для колоночной хроматографии экстрактивных веществ использовали следующие сорбенты:

1. Полиамид «Woelm» (Германия); полиамид, изготовленный на Олайнском заводе химреактивов.

2. Силикагель марки L 40/ 100 мкм и L 100/250 мкм (Чехия)

3. Сефадекс LH-20 (Швеция)

Для контроля отсутствия примесей в получаемых соединениях использовали метод ТСХ в различных системах.

Для установления структуры выделенных веществ были использованы данные УФ-, 'Н-ЯМР- и масс-спектров. Фрагмент структурных исследований

выделенных соединений на примере глицирризиновой кислоты представлен на рисунке 1.

6 5 4 3 2 1 РРМ

РисЛ 'Н-ЯМР-спектр глицирризиновой кислоты (1) в дейтеропиридине

В 'Н-ЯМР спектре (рис. 1) отражены характерные для глицирризиновой кислоты сигналы протонов Н-12 (5,95 м.д.), семи метальных групп (в области 0,8-1,5 м.д.) и протона при С-9 (2,48 м.д.), принадлежащие 18-Р-глицирретовой кислоте. Кроме того, в ЯМР-спектре глицирризиновой кислоты обнаружены двойной дублет протона при С-3 с КССВ 3,8 и 11,7 Гц (при 3,43м.д.), двойной дублет Н-18 при 2,60 м.д. с КССВ 3,8 и 13,5Гц, дублет экваториального протона Н-к при 3,1 м.д. с КССВ 13,5 Гц, также относящиеся к структуре 18-р-глицирретовой кислоты (2).

В 'Н-ЯМР-спектре глицирризиновой кислоты (рис.1) при 5,0 и 5,3 м.д. обнаружены дублетные сигналы аномерных протонов двух молекул глюкуроновой кислоты с константой спин-спинового взаимодействия (КССВ) 7 Гц, что свидетельствует о р-конфигурации гликозидных связей и 4C1—конфигурации обоих углеводных фрагментов. В УФ-спектре спиртового раствора соединения (1) имеется максимум поглощения при 249 нм, характерный для глицирризиновой кислоты.

Таблица 1

Основные вещества выделенные из сырья солодки голой

№ п/п Соединения Брутго-формула, константы

Тритерпены

1 Глицирризиновая кислота «и » 9На соон «тан "чЛ '^ЗСрСЗ^0"3 С42Н62О16 Белый аморфный порошок Т. пл. 220 "С X тах (этанол) 248 нм

2. 18р-Глицирретовая кислота С30Н46О4 Белый аморфный порошок Т. пл. 292-295 "С

Флавоноиды

Флаваноны

3. Ликвиритигенин „а™ о С15Н12О4 Белые кристаллы Т. пл. 193-195 'С X шах(этанол) 275,310 нм

4. Ликвиритии -0м" о С21Н21О9 Белые кристаллы Т. пл. 209-211 °С X шах (этанол) 313,275 нм

Халконы

5. Изоликвиритигенин 0 С1бН)4Оз Оранжевые кристаллы X max (этанол) 255,370 нм

6. Изоликвиритин fY*"0' 0 С21Н21О9 Желтые кристаллы Т.пл.185-186 'С X max (этанол) 260,360 нм

7. Ликуразид ^/ОН Api—Glc |Г |Г |j СгвНзоОц Желтые кристаллы Т.пл.150-151 'С X шах (этанол) 245,305,370 нм

Изофлавоны

8. Ононин Glc—lk^^v^lL ° ^^-Dffls С22Н22О9 Белые с сероватым оттенком кристаллы Т.пл .215-217 'С X max (этанол) 260,300 нм

9. Формононетин С16Н]203 Белые кристаллы

Глицирризиновая кислота, 18р-Глицирретовая кислота, ликвиритигенин, ликвиритин, изоликвиритигенин, изоликвиритин, ликуразид, ононин, формононетин впервые выделены из корней солодки голой, произрастающей в Самарской области.

2. Стандартизация сырья и препаратов корней солодки

В настоящее время особую актуальность приобретают исследования в плане совершенствования методик стандартизации сырья и изготовленных на их основе препаратов.

Учитывая, что учеными Самарского государственного медицинского университета и ВИЛАР был разработан ГСО глицирам (ФС 42-0034-00), причем была исправлена химическая структура глицирама и глицирризиновой кислоты и изучены особенности их физико-химических свойств. Кроме того, ранее харьковскими учеными дпя целей стандартизации флавоноидных препаратов (ликвиритон, флакарбин) предложено использовать ГСО ликуразида (ФС 42-2573-88). Следовательно, появились объективные предпосылки для совершенствования методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов солодки.

Разработаны методики качественного и количественного анализа солодки корней. За основу разработанной методики количественного анализа нами был взят фармакопейный метод (ФС 42-2614-96) «Экстракт корня солодки густой». В методику количественного анализа глицирризиновой кислоты в корнях солодки внесены следующие изменения:

1. В методике качественного анализа предложено использовать метод ТСХ

2. 3 % ацетоновый раствор азотной кислоты заменен на 3 % ацетоновый раствор трихлоруксусной кислоты

3. В методику включено использование ГСО глицирама.

Также была унифицирована методика качественного и количественного анализа препарата «Солодки экстракт жидкий». Использование 3 % ацетонового раствора трихлоруксусной кислоты позволяет не только унифицировать подход к извлечению глицирризиновой кислоты, используемый в случае экстрактов солодки (Фармакопейная... , 1989; 1996), но и обеспечить валидацию параметров с точки зрения воспроизводимости методики.

В методиках качественного и количественного анализа солодки экстракта сухого, густого и солодки сироп было предложено использовать метод ТСХ и ГСО глицирам и ликуразид, что позволит обеспечить наиболее полную идентификацию БАС в сырье и препаратах солодки.

Таким образом, использование в методиках качественного и количественного анализа сырья и препаратах солодки (солодки экстракт сухой, густой, жидкий, солодки сироп) метода ТСХ и ГСО позволит не только унифицировать методики и объективно идентифицировать диагностические вещества данного растения, но и обеспечить валидацию данных методик с точки зрения их воспроизводимости.

2.1. Стандартизация лекарственного растительного сырья - корней солодки

Для разработки методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов солодки были использованы методы ТСХ-анализа, УФ-спектрофотометрии.

Исследования химического состава корней солодки позволили сформулировать подходы к стандартизации и разработать методики качественного и количественного анализа корней солодки с учетом принципа унификации и валидации методов анализа.

Нами были изучены условия хроматографического разделения сапонинов и флавоноидов корней солодки, позволяющие обнаруживать доминирующие БАС — глицирризиновую кислоту и ликуразид. Для достоверного определения веществ было предложено использовать государственные стандартные образцы. Так, для определения глицирризиновой кислоты предложено использовать стандарт глицирам (ФС 42-0034-00), а для флавоноидов - ликуразид (ФС 42-2573-88). Использование данных стандартов позволяет исключить ошибки при идентификации диагностических веществ и, следовательно, обеспечивать валидацию методик качественного анализа сырья и препаратов солодки.

Использование в качестве ГСО глицирама объясняется не лабильностью глицирризиновой кислоты во внешней среде, что препятствует использованию данного соединения в качестве государственного стандартного образца.

При использовании пластинок «Силуфол УФ 254» и «Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ» (система растворителей хлороформ - метанол - вода, 26:14:3)

ликуразид обнаруживается на хроматограмме в виде доминирующего желтого или желтовато-оранжевого пятна с величиной Я, около 0,5, а глицирризиновая кислота - в виде фиолетового флуоресцирующего пятна (254 нм) с величиной Я, около 0,3 (на уровне ГСО глицирама). При этом обнаруживаются также пятна ликвиритина (Я, около 0,6), ононина (Я, около 0,7), ликвиритигенина и изоликвиритигенина (Я, около 0,8), а также формононетина (ИГ около 0,9) (рис. 2).

2.1 Методика количественного анализа солодки корней

За основу разработанной методики нами взят фармакопейный метод (Государственная..., 1968), в который внесены следующие изменения: во-первых, вместо 3 % ацетонового раствора азотной кислоты нами взят 3 % ацетоновый раствор трихлоруксусной кислоты, во-вторых, в методику включено использование ГСО глицирама. Использование 3 % ацетонового раствора трихлоруксусной кислоты позволяет не только унифицировать подход к извлечению глицирризиновой кислоты, используемый в случае экстрактов солодки (Фармакопейная..., 1989; 1996), но и обеспечить валидацию параметров с точки зрения воспроизводимости методики.

УФ-спектр раствора очищенной глицирризиновой кислоты имеет кривую поглощения, сопоставимую по характеристикам с УФ-спектром раствора глицирама (рис 3).

0,7 -

0.3 0.2 0,1

0 —I—I—I—I—)—I—I—I—I—I—*—I—«—I—I—I—I—I—I—I—Н—Ы—Н-1-(—(—1-й—(—

230 234 236 240 244 246 248 250 252 254 25в 258 262 265 268 275 290

Рис.3. УФ-спектры раствора Б извлечения корней солодки (1) и 0,01% раствора ГСО глицирама (2).

По оси абсцисс — длина волны в нм; по оси ординат - оптическая плотность.

Метрологические характеристики методики качественного определения глицирризиновой кислоты в сырье солодки голой рассчитаны из результатов анализа в 11 независимых повторностях (табл. 3).

Таблица 2

Метрологические характеристики методики количественного определения глицирризиновой кислоты в сырье солодки голой

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью составляет 4,92 % (табл. 2).

Опыты с добавками ГС О глицирама к навеске сырья и к экстракту показали, что ошибка анализа находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки разработанной методики.

С использованием разработанной методики нами исследован ряд образцов корней солодки голой. Содержание глицирризиновой кислоты в исследованных образцах корней солодки находится в интервале от 10,51 % до 15,23% (табл.3).

Таблица 3

Содержание глицирризиновой кислоты в корнях Glycyrrbiza glabra

Номер образца Место и время сбора Содержание глицирризиновой кислоты в сырье, %

1. Самарская обл., окр. совхоза Полякове Большечерниговского района, май 2003 г. 10,51+0,39%

2. Республика Казахстан, окр г. Уральска, июнь 2000 г. 14,37 + 0,45%

3. Республика Казахстан, июнь 2002 г. 15,23 + 0,49%

4 Фиторарм (г. Анапа, Краснодарский край, май 2003 г.), серия 010703 13,85 ± 0,41 %

5. ОАО «Красногорлексредства», 2004 г., серия LAM 31204 14,52 ± 0,51%

Следовательно, использование ГСО глицирама в методике количественного анализа корней солодки, а также замена ацетонового раствора азотной кислоты на ацетоновый раствор трихлоруксусной кислоты (стадия экстракции) позволяет более объективно решать проблемы

стандартизации и создает предпосылки для совершенствования способов получения субстанций и лекарственных форм из сырья данного растения.

2.2. Методика количественного анализа солодки экстракта жидкого

С целью унификации методик количественного определения глицирризиновой кислоты в корнях и препаратах солодки нами предложено использовать ГСО глицирама в методиках анализа экстракта сухого, экстракта густого и сиропа солодкового корня.

Таблица 4

Метрологические характеристики методики количественного определения глицирризиновой кислоты в экстракте солодки жидком

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью составляет 4,78 % (табл. 4).

Опыты с добавками ГСО глицирама в жидкий экстракт показали, что ошибка анализа находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки разработанной методики.

Следовательно, использование в методике количественного анализа ГСО глицирама позволяет объективно оценивать уровень содержания глицирризиновой кислоты в корнях солодки и экстракте солодки жидком.

2.3. Унификация методик качественного и количественного анализа солодки экстрактов сухого, густого и солодки сироп.

С целью унификации методик стандартизации препаратов «солодки экстракт густой», «солодки экстракт сухой», «солодки экстракт жидкий» и «солодки сироп» было предложено использовать для качественного анализа метод ТСХ, что позволит исключить ошибки при идентификации БАС в

данных препаратах. При. этом, для целей стандартизации солодки экстрактов сухого, густого и солодки сиропа нами было предложено использовать ГСО глицирам и ликуразид.

Кроме того, обоснована целесообразность использования ГСО глицирама в методиках количественного определения глицирризиновой кислоты в вышеперечисленных препаратах. Это позволит не только унифицировать методики анализа, но и более объективно осуществлять оценку качества препаратов: «солодки экстракт сухой», «солодки экстракт густой», «солодки экстракт жидкий» и «солодки сироп».

3. Исследования по разработке новых препаратов, на основе корней солодки

Полученные в ходе предварительных фотохимических исследований данные и систематизированный литературный материал показали перспективность исследования по оптимизации способа получения солодки сиропа.

Содержащиеся в корнях солодки такие БАС, как сапонины (глицирризиновая кислота) и флаваноиды (ликвиритигенин, изоликвиритигенин) и их гликозиды (ликвиритин, изоликвиритин, ликуразид), являются термолабильными веществами. Применяемый в настоящее время сироп солодкового корня получают из густого экстракта солодки, в случае которого стадия длительного упаривания может привести к частичной потере БАС. В связи с этим нами была разработана новая схема получения сиропа солодки без процесса нагревания. В соответствии с разработанной технологией, в качестве субстанции нами был использован солодки экстракт жидкий с концентрацией водного спирта 40%, полученный методом реперколяции по Чулкову. Суть метода получения жидких экстрактов заключается в возможности исключить стадию упаривания.

Необходимая концентрация вытяжки достигается применением батареи из 3-5 перколяторов, причем извлечение из одного перколятора используется для перколирования сырья в следующем перколяторе. Пропустив, таким образом, вытяжку через несколько перколяторов со свежим или менее истощенным (при непрерывном процессе) сырьем, содержание действующих веществ в целевом продукте можно повысить. В предложенном способе экстракция проводится в батарее перколяторов, работающей, по принципу противотока (метод реперколяции по Чулкову).

В полученный экстракт жидкий добавляют сахарный сироп в соотношении 1:10 и растворяют при слабом нагревании с периодическим перемешиванием. Полученный сироп представляет собой золотистую сиропообразную жидкость со слабым специфическим запахом и сладким вкусом.

С использованием хроматографического метода (ТСХ) был проведен качественный анализ содержащихся в сиропе солодки таких диагностических для солодки БАС, как глицирризиновая кислота и ликуразид. При сравнении препаратов полученных стандартным и разработанным нами способом с помощью методов хроматографии и спектрофотометрии установлено, что содержание глицирризиновой кислоты во втором случае значительно превышает содержание их в сиропе, полученном стандартным способом, приблизительно в 3-4 раза (соответственно 0,20% и 0,70%).

ВЫВОДЫ

1. Проведено сравнительное фотохимическое исследование корней и препаратов солодки.

2. Изучен химический состав корней солодки голой (GJycyrrhiza glabra L.), произрастающей в Самарской области.

3. Из корней солодки голой, произрастающей в Самарской области, выделены и идентифицированы с использованием УФ-,Н-ЯМР-спектроскопии, и масс-спектрометрии, результатов химических

превращений, глицирризиновая кислота (тритерпеновый сапонин) и флавоноиды - ликуразид, ликвиритин, ликвиритигенин (флавононы); изоликвиритин, изоликвиритигенин (халконы); ононин, формононетин (изофлавоны).

4. Обоснована целесообразность использования в методиках качественного и количественного анализа корней видов солодки (солодка голая - Glycyrrhlza glabra L., солодка уральская - Glycyrrhiza uralensis Fisch.) и препаратов солодки (экстракты, сироп) государственных стандартных образцов ликуразида и глицирама.

5. Разработана методика качественного анализа корней солодки и с использованием ТСХ, основанная на обнаружении доминирующих компонентов данного сырья - глицирризиновой кислоты (тритерпновый сапонин) и ликуразида (флавоноид).

6. Разработана методика количественного определения глицирризиновой кислоты в корнях и препаратах солодки с использованием спектрофотометрии. Содержание глицирризиновой кислоты в сырье солодки находится в интервале от 9,87 % до 15,23%.

7. Метрологические характеристики методики количественного определения глицирризиновой кислоты в корнях солодки свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения составляет

8. Обоснована целесообразность использования в медицинской практике нового лекарственного средства «Солодки экстракт жидкий»

9. Обоснована целесообразность оптимизации способа получения солодки сиропа, с более высоким содержанием глицирризиновой кислоты в котором предусмотрено использование з качестве исходной субстанции солодки экстракта жидкого.

10. Обоснована целесообразность создания нового лекарственного средства «Солодки экстракт жидкий».

11. На основании полученных данных разработан проект ФС «Солодки корни», который находится на экспертизе в Фармакопейном государственном комитете Минздравсоцразвития РФ (письмо №130 от 27.01.05).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Валидация методик качественного анализа сырья и препаратов солодки./ М.В. Егоров, В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, В.А. Быков // Фармация.- 2005 -Т.53.-№1.-С.9-12.

2. Егоров, М.В. Фитохимическое и организационно-экономическое исследование корней солодки / М.В. Егоров, ВАКуркин // Тез. докл. 2-ой международной конференции молодых ученых и студентов. - Самара. -2001.-С.58.

3. Егоров, М.В. Значение препаратов корней солодки для лечения и профилактики экологически обусловленных заболеваний / М.В. Егоров, В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, ВА Быков // Актуальные проблемы экологии человека: Труды VIII Всероссийского конгресса.- Самара.2002.- С. 81-83.

4. Егоров, М.В. Новые подходы к стандартизации сырья и препаратов солодки / М.В. Егоров // Аспирантские чтения - 2003: Сборник дез. докл. Всероссийской конференции «Молодые ученые - медицине», - Самара: СамГМУ. - 2003. - С. 109-110.

5. Егоров, М.В. Исследования по обоснованию новых подходов к стандартизации сырья и препаратов солодки / М.В. Егоров // Актуальные проблемы современной науки: Труды 4-й Международной конференции молодых ученых и студентов. Фармация. - Самара. - 2003.- С.14-16.

6. Егоров, М.В. Исследования в плане совершенствования стандартизации сырья и препаратов солодки / М.В. Егоров // Аспирантские чтения-2004: Региональная медицинская наука: тенденции и перспективы развития. -Самара: СамГМУ. - 2004.- С. 474-475.

7. Значение препаратов корней солодки для коррекции экопатологии / М.В. Егоров, В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Е.В. Авдеева // Экология и здоровье человека: Труды VII Всероссийского конгресса. - Самара: Самарский областной Дом науки и техники.- 2001.- С.62-63.

8. Перспективы использования в медицинской практике растительных иммуномодуляторов / М.В. Егоров, В.Н. Ежков, В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Е.В. Авдеева, В.Б. Браславский, О.Е. Правдивцева, А.В. Супильникова, Е.С. Петрова, И.Ю. Климова // XI Российский национальный конгресс «Человек и Лекарство», Тезисы докладов, М. - 2004. - С. 153.

9. Флавоноиды как гепатопротекторы и антиаксиданты / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, А.А. Лебедев, М.В. Егоров, В.Б. Браславский, Е.В. Авдеева, Г.В. Симонова, О.Е. Правдивцева // Тезисы докладов IX Российского национального конгресса "Человек и лекарство".- Москва.- 2002.-С.164.

10. Флавоноиды как государственные стандартные образцы и их значение для целей стандартизации сырья и препаратов / В.А. Куркин, Г.Г Запесочная, А.А. Лебедев, В.Н. Ежков, Г.В. Симонова, В.Б. Браславский, О.Е. Правдивцева, Е.В. Авдеева, А.В. Супильникова, М.В. Егоров, П.Г. Мизина, О.Г. Жарова, В.В. Купцова, ЗА. Леонтьева // "Человек и лекарство". - X Российский Национальный конгресс. - Москва. - 2003. - С. 728.

11. The flavonoids as the bioantioxidants / V.A. Kurkin, A.A. Lebedev, V.A. Zapesochnaya, V.B. Braslavsky, EA. Batakov, A.V. Supilnikova, M.V. Egorov, A.V. Volotsueva, V.V. Kyptsova, M.V. Bulatova, Leontjeva Z.A. // Polyphenols Communications 2002; XXI International conference on polyphenols Marrakech-Morocco. - 2002. - P.285-286.

12. The new possibilities in the standardization of the some medicinal plants containing the flavonoids / V.A. Kurkin, G.G. Zapesochnaya, E.V. Avdeeva, V.B. Braslavsky, O.E. Pravdivtseva, M.V. Egorov, A.V. Supilnikova, V.V. Stenyaeva, A.I. Bontsevich // Polyphenols Communications 2004; „xXl International Conference on Polyphenols Helsinki - Finland. - 2004.- P. 621 -622. -

I С : ? '

Отпечатано в ОАО ■Самарабланкиздаг», А5, 4-2005 г, т 100 эк^ , за* 1в00

ШЙШ5

Оглавление диссертации Егоров, Максим Валерьевич :: 2005 :: Пермь

Введение.

Глава 1. Современное состояние исследований солодки (обзор литературы).

1.1 .Историческая справка.

1.2.Ботанико-фармакогностическая характеристика солодки.

1.3.Характеристика сырьевой базы.

1.4.Размножение и агротехника.

1.5.Заготовка сырья.

1.6.Химический состав.

1.7.Фармакологические свойства.

1.8.Медицинское применение солодки.

1.8.1. Лекарственные средства на основе корней солодки.

1.8.2. Суммарные препараты корней солодки.

1.8.3. Препараты изготовленные на основе экстрактов.

1.8.4. Препараты на основе глицирризиновой кислоты.

1.8.5. Препараты на основе флавоноидов.

1.9.Стандартизация сырья и препаратов корней солодки.

Экспериментальная часть

Глава 2. Характеристика объектов и методов исследования.

2.1 Объекты исследования.

2.2 Методы исследования.

2.2.1.Качественные реакции.

2.2.2. ТСХ-анализ.

2.2.3. Спектрофотометрия.

Глава 3. Морфолого-анатомические и химические исследования солодки корней.

3.1. Методы морфолого-анатомического исследования.

3.2. Методы исследования веществ солодки корней.

3.2.1. Качественные реакции на сапонины и флавоноиды.

3.2.2. Метод колоночной хроматографии.

Глава 4. Стандартизация лекарственного растительного сырья - солодки корней.

4.1. Методики приготовления растворов и реактивов.

4.2. Методика качественного анализа солодки корней.

4.3. Методика количественного анализа солодки корней.

4.4. Методика качественного анализа солодки экстракта жидкого.

4.5. Методика количественного анализа солодки экстракта жидкого.

4.6. Методика качественного анализа солодки сиропа.

4.7. Методика количественного анализа солодки сиропа.

4.8. Методика качественного анализа солодки экстракта густого.

4.9. Методика количественного анализа солодки экстракта густого.

4.10. Методика качественного анализа солодки экстракта сухого.

4.11. Методика количественного анализа солодки экстракта сухого.

Глава 5. Исследования по разработке новых препаратов на основе корней солодки.

5.1. Технология получения солодки экстракта жидкого.

5.2. Разработка способа получения солодки сиропа.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Егоров, Максим Валерьевич, автореферат

Актуальность темы. В настоящее время особую актуальность приобретают исследования в плане расширения ассортимента доступных широким слоям населения препаратов на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС). В этом отношении особый интерес представляют виды солодки (солодка голая - Glycyrrhiza glabra L., солодка уральская -Glycyrrhiza uralensis Fisch.), на основе корней которых выпускается целый ряд препаратов (экстракты густой, сухой, сироп солодкового корня и др.). Однако создание современных препаратов возможно лишь на основе методик, отвечающих параметрам валидации. С учетом этого обстоятельства, а также такого явления, как фальсификация лекарственных средств, особую актуальность приобретают исследования, направленные на совершенствование методик качественного и количественного анализа ЛРС и фитопрепаратов. Для стандартизации сырья и суммарных препаратов солодки ранее не использовались методы тонкослойной хроматографии (ТСХ) и государственные стандартные образцы (ГСО).

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Систематизация литературных данных о химическом составе солодки и ее фармакологическом действии.

2. Изучение условий хроматографического разделения сапонинов и флавоноидов корней солодки, позволяющих обнаруживать доминирующие биологически активные соединения (БАС) — глицирризиновую кислоту и ликуразид.

3. Разработка методики качественного анализа корней солодки.

4. Разработка методики количественного анализа корней солодки.

5. Разработка методик качественного и количественного анализа препарата «Экстракт солодки жидкий».

6. Обоснование способа получения препарата «Солодки сироп» на основе солодки экстракта жидкого.

7. Разработка проекта ФС «Солодки корни».

Научная новизна. Впервые изучен химический состав корней солодки голой, произрастающей в Самарской области. При этом выделены и идентифицированы с использованием УФ-, ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии и результатов химических превращений глицирризиновая кислота, ликуразид, изоликвиритигенин, изоликвиритин, ликвиритигенин, ликвиритин, формононетин и ононин. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов солодки по доминирующим группам БАС - сапонинам (глицирризиновая кислота) и флавоноидам (ликуразид).

Для достоверного определения диагностических веществ в сырье и препаратах солодки предложено использовать ГСО. В случае определения глицирризиновой кислоты предложено использовать стандарт глицирам (ФС 42-0034-00), а для анализа флавоноидов - ликуразид (ФС 42-2573-88), что позволит более четко осуществлять идентификацию диагностических веществ и, следовательно, обеспечит валидацию методик качественного анализа сырья и препаратов солодки.

Практическая значимость.

3. Разработаны методики качественного и количественного анализа «солодки экстракта жидкого».

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты изучения химического состава корней солодки, произрастающей в Самарской области.

2. Данные проведенных исследований по разработке подходов к стандартизации сырья солодки.

3. Методики качественного и количественного анализа «солодки экстракта жидкого».

4. Способ получения «солодки сиропа».

Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены и обсуждены на 2-ой Международной конференции молодых ученых и студентов « Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2001г.); на VII Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара,2001 г.); на VIII Международном конгрессе «Актуальные проблемы экологии человека» (Самара, 2002 г.); на IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002 г.); на X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва,

2003г.); на Всероссийской конференции «Молодые ученые - медицине» -Аспирантские чтения -2003 (Самара, 2003 г.); на 4-ой Международной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2003 г.); на Региональной медицинской конференции «Тенденции и перспективы развития» (Самара, 2004 г.); на XXI International conference on polyphenols (Marrakech - Morocco, 2002r.); на XXII International conference on polyphenols (Helsinki-Finland,2004 г.).

Основное содержание диссертации опубликовано в 12 научных работах.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 127 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц, 21 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (Глава 1), описания объектов и методик исследования (Глава 2), 3 глав, отражающих результаты собственных эксперементальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 204 источников, из которых 51 — на иностранных языках.

Заключение диссертационного исследования на тему "Стандартизация сырья и препаратов солодки"

Общие выводы

1. Проведено сравнительное фитохимическое исследование корней и препаратов солодки.

2. Изучен химический состав корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.), произрастающей в Самарской области.

3. Из корней солодки голой, произрастающей в Самарской области, выделены и идентифицированы с использованием УФ-,-ЯМР-спектроскопии, и масс-спектрометрии, результатов химических превращений, глицирризиновая кислота (тритерпеновый сапонин) и флавоноиды - ликуразид, ликвиритин, ликвиритигенин (флавононы); изоликвиритин, изоликвиритигенин (халконы); ононин, формононетин (изофлавоны).

4. Обоснована целесообразность использования в методиках качественного и количественного анализа корней видов солодки (солодка голая - Glycyrrhiza glabra L., солодка уральская - Glycyrrhiza uralensis Fisch.) и препаратов солодки (экстракты, сироп) государственных стандартных образцов ликуразида и глицирама.

5. Разработана методика качественного анализа корней солодки и с использованием ТСХ, основанная на обнаружении доминирующих компонентов данного сырья - глицирризиновой кислоты (тритерп новый сапонин) и ликуразида (флавоноид).

6. Разработана методика количественного ■ определения глицирризиновой кислоты в корнях и препаратах солодки с использованием спектрофотометрии. Содержание глицирризиновой кислоты в сырье солодки находится в интервале от 10,51 % до 15,23%.

8. Обоснована целесообразность создания и использования в медицинской практике нового лекарственного средства «Солодки экстракт жидкий»

9. Обоснована целесообразность оптимизации технологии изготовления, что позволило разработать способ получения сиропа солодкового корня с более высоким содержанием глицирризиновой кислоты в готовом продукте заключающаяся в использовании в качестве субстанции экстракта солодки жидкого.

10. На основании полученных данных разработан проект ФС «Солодки корни», который находится на экспертизе в Фармакопейном государственном комитете Минздравсоцразвития РФ (письмо №130 от 27.01.05).

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2005 года, Егоров, Максим Валерьевич

1. Абубакиров, Н.К. Получение глицирризиновой и глицир-ретиновой кислот из экстракта солодкового корня / Н.К. Абубакиров, В.К. Яцын // Мед. промышленность. 1960. - № 5. - С. 31-34.

2. Авдеева, Е.В. Изучение некоторых фенольных и терпеноидных соединений, используемых в стандартизации лекарственных растений: Афтореф. дис. . канд. фармац. наук: (15.00.02.) / Е.В.Авдеева; Самар. гос. мед. ун-т -М., 1997.-23с.

3. Аврамова, С.М. Способ получения глицирризината аммония // Авт. свид. НРБ 35532 (заявл. 12.01.83).

4. Акопов, И.Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение / И.Э. Акопов. Ташкент, Медицина, 1990. - С.113

5. Аммосов, А.С. Фенольные соединения родов Glycyrrhiza L. И Meristotropis Fisch. Et May / А.С. Аммосов, В.И. Литвиненко // Растит, ресурсы.- 1995.-Т. 31, вып. 3.-С. 116-145.

6. Арзамасцев, А.П. Основные аспекты совершенствования фармакопейного анализа / А.П. Арзамасцев, В.Л. Багирова, Н.П. Садчикова // Хим.-фарм.журн.- 2000, Т.34. №5. - С.47-48.

7. Ахтанова, Н.К. Исследование халкон-флаваноновых препаратов солодки голой методом высокоэффективной жидкостной хроматографии: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: (15.00.02.) /Н.К. Ахтанова; М., 1991.

8. Багирова, B.JL, Ковалева, E.JL, Садчикова, Н.П. О стандартизации лекарственных средств на современном этапе / В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева, Н.П. Садчикова // Хим.-фарм. журн,- 2000, Т.34. -№11.- С.46-47.

9. Балтина, Л.А. Трансформация глицирризиновой кислоты .IV Синтез три-терпеновых гликопептидов / Л.А. Балтина, С.А. Рыжова, Е.В. Васильева, Г.А. Толстиков // Биоорганическая химия.- 1994, Т. 20. №1.- С. 55-62

10. Балтина, Л.А. Получение чистой глицирризиновой кислоты из глицирама и технического экстракта / Л.А. Балтина, Н.Г. Сердюк, Н.А. Сомов, Ю.И. Муринов, Г.А. Толстиков // В сб. 32., С. 140.

11. Бондарев, А.И. Солодка (обзор) / А.И. Бондарев, Ф.С. Зарудий, И.А. Русаков // Хим.-фармац. журнал.- 1995. Т.29, №10.- С.33-39.

12. Быков, В.А. Эффективность разработки лекарственных средств из растительного сырья / В.А.Быков, В.К.Колхир, С.А.Вичканова, Т.А. Сокольская, Н.М. Крутикова // Химия, технология, медицина: Тр. ВИЛАР- М., 2000. -С.177-185.

13. Батиров, Э.Х., Киямитдинова, Ф., Маликов, В.М. Флавоноиды надземной части Glycyrrhiza glabra // XuMHn природ, соедин. 1986.- № 1. - С. 111-112.

14. Бибикова, Н.Е. Комплексная технология переработки корня солодки: Ав-тореф. дис. . канд. фарм. наук: (15.00.01.) / Н.Е. Бибикова; М., 1999. - 24 с.

15. Быков, В.А. Биомедицинская концепция создания лекарственных препаратов на основе солодки / В.А. Быков, Г.Г. Запесочная // Труды НПО "Биомедицинские технологии". Вып.З., М., 1996. С.31-42.

16. Быков, В.А. Комплексная технология переработки корня солодки / В.А. Быков, Г.Г. Запесочная // 1 Международный симпозиум "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования". Тезисы докладов, Пущино.- 1995.- С.762-763.

17. Вандышев, В.В. Лакрица лекарственное растение / В.В. Вандышев // Медицинская помощь,- №4. - М. - 2001. - С.42-46.

18. Вопросы изучения и использования солодки в СССР (Материалы Симпозиума) -М., Л: Наука.- 1966.-214 с.

19. Вичканова, С.А. Туберкулостатическая активность препаратов из растений / С.А. Вичканова, Л.В. Макарова, Н.И. Гордейкина // Фитонциды: Результаты, перспективы и задачи исследования.- Киев, 1972,- С.90-9430. ВФС 42-419-75 "Глицирам".

20. ВФС 42-482-75 Таблетки глицирама 0,05 г".

21. ВФС 42-419-75 "Глицирам" Изменение № 1 от 4.02.1980г. Изменение №2 от 25.07.1985г.

22. ВФС 42-482-75 "Таблетки глицирама 0,05г.". Изменение № 1 от 26. 02. 80г.

23. Гажев, Б.Н. Лечение детей лекарственными растениями / Б.Н. Гажев, Т.А. Виноградова, В.К. Мартынов, В.М. Виноградов // С-Пб.:АОЗТ «Аспект». ИКФ «МиМ Экспресс, 1995.- 288 с.

24. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук // Новосибирск: Наука,- 1990.- 333 с.

25. Государственная фармакопея СССР, X изд., М.: Медицина,- 1968. С.582-584.

26. Григорьев, Ю.С. Род Солодка Glycyrrhiza L / Ю.С. Григорьев, И.Т. Ва-сильченко // В кн.: Флора СССР, Т.13. - M.-JL: Изд. АН СССР. - 1948. - С. 230-240.

27. Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений / Н.И. Гринкевич, JI.H. Сафронич // «Высшая школа» М.- 1983. С.41-49, 82-89.

28. Губен-Вейль. Методы органической химии / Губен-Вейль // М.: Госхим-издат. 1963. - 1032с.

29. Губанов, И.А. Дикорастущие полезные растения СССР / И.А. Губанова, И.Л. Крылова, В.Л. Тихонова // М.: Мысль, - 1976. - С. 287-288.

30. Егоров, М.В. Исследования в плане совершенствования стандартизации сырья и препаратов солодки / М.В. Егоров // Аспирантские чтения-2004: Региональная медицинская наука: тенденции и перспективы развития. Самара: СамГМУ, - 2004. - С.474-475.

31. Егоров, М.В. Фитохимическое и организационно-экономическое исследование корней солодки / М.В. Егоров, В.А. Куркин // Тез. докл. 2-ой международной конференции молодых ученых и студентов Самара, 2001. - С.58.

32. Егоров, М.В. Новые подходы к стандартизации сырья и препаратов солодки / М.В. Егоров // Аспирантские чтения — 2003: Сборник дез. докл. Всероссийской конференции «Молодые ученые медицине», - Самара: Сам-ГМУ, 2003. - С.109-110.

33. Егоров, М.В. Валидация методик качественного анализа сырья и препаратов солодки / М.В. Егоров, В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, В.А. Быков // Фармация. 2005, Т. 53. - №1. - С.9-12.

34. Жизнь растений / Под ред. A.JI. Тахтаджяна. Т. 5.- Ч. 2. М.: Просвещение. - 1981. - С.404-412.

35. Запесочная, Г.Г. Проликвиритон. Дополнение № 1 к опытно-промышленным регламентам на производство глицирама и очищенного экстракта солодкового корня / Г.Г. Запесочная, А.А. Ананьева, Н.Е. Бибикова // НПО "ВИЛАР". 1996. - 30 с.

36. Запесочная, Г.Г. Современные аспекты химического и технологического исследования корня солодки / Г.Г. Запесочная, В.А. Быков // Научно-практическая конференция по солодке.- г. Астрахань, 1994.- Доклад.

37. Запесочная, Г.Г. Исследование природных флавоноидных гликозидов и их ацилпроизводных: Дис. . докт. хим. наук: (15.00.02.) / Г.Г. Запесочная; М., 1984.

38. Запесочная, Г.Г. Изучение структуры и стереохимии флавоноидных 0-рамнозидов с помощью спектроскопии ЯМР / Г.Г. Запесочная // Химия природных соедин.- Мб.- С.695-709.

39. Запесочная, Г.Г. Некоторые свойства глицирризиновой кислоты // Г.Г. Запесочная, Е.Н. Звонкова, В.А. Куркин, Е.В. Казакова, Л.Н. Первых, В.И. Шейченко, В.А. Быков // Химия природ, соедин. 1994,- № 6.- С. 772-780.

40. Запесочная, Г.Г., Степанов, А.Н., Перов, А.А. Масс-спектры полевой десорбции флавоноидных ацилгликозидов. I. Природные ацетилпроизводные // Химия природ, соедин. 1984. - N 5. - С.573-582.

41. Запесочная, Г.Г. Опытно-промышленный регламент на производство лик-виритона / Г.Г. Запесочная, Н.С. Цыбулько, А.А. Ананьева, Н.Е.Бибикова, В.А Куркин, Е.В.Авдеева // НПО "ВИЛАР"- 1997. 152 с.

42. Запесочная, Г.Г. Алкилиденовые производные датисцина / Г.Г. Запесочная, И.В. Ширвашидзе, Н.А. Тюкавкина // Химия природных соедин. 1982. -№ 2.- С.183-186.

43. Зарудий, Ф.С. Глицирризиновая кислота -модулятор основного свойства лекарственных препаратов / Ф.С. Зарудий, Д.Н. Лазарева, Х.М. Насыров // В сб. "Фундаментальные исследования, как основа создания лекарственных средств".-М. 1995. - С.164, 373.

44. Захаров, В.П. Лекарственные вещества из растений и способы их производства / В.П. Захаров, Н.И. Либизов, Х.А. Асланов // Ташкент: ФАН. 1980. - С.190-195.

45. Захарченко, В.В. Электризация жидкостей и ее предотвращение // М., Химия, 1975.

46. Зенкевич, И.Г. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки // И.Г. Зенкевич, В.Л. Багирова., Т.А. Сокольская, Е.Б. Нечаева // М., Фармация. -2002.-№ 1. С.43-45.

47. Изменение № 1 к ОСТ 64-002-86. Раздел 2.1.10. Техника безопасности, пожарная безопасность и производственная санитария, М., 1993.

48. Изучение и использование солодки в народном хозяйстве СССР (Материалы III Симпозиума). Ашхабад, 1988. - 142 е.

49. Изучение и использование солодки в народном хозяйстве СССР (Материалы IV Симпозиума). Алма-Ата: Гылым, 1991. - 196 с.

50. Интернет: www.eda-server.ru.

51. Кит, С.М. Лекарственные растения в эндокринологии / С.М. Кит, И.С. Турчин-Киев, 1986.

52. Ковалева, Н.Г. Лечение растениями. Очерки по фитотерапии / Н.Г. Ковалева М: Медицина, - 1971. - С.278.

53. Котуков, Г.Н. Культивируемые и дикорастущие лекарственные растения: Справочник. Киев: Наукова думка. - 1974. - С.52-55.

54. Круганова, Е.А. Обзор видов Glycyrrhiza и Meristotropis Fisch / Е.А. Кру-ганова // Труды Ботанического института АН СССР, сер. I, 1955. - Вып. 2. -С.161-197.

55. Куркин, В.А. Современные аспекты классификации биологически активных соединений лекарственных растений / В.А. Куркин // Фармация. 2002. - № 2. - С.8-16.

56. Куркин, В.А. Иллюстрированный словарь терминов'и понятий в фармакогнозии / В.А. Куркин, В.Ф. Новодранова, Т.В. Куркина,// Москва; Самара: РП «Перспектива», СамГМУ. 2002. - С.82-83.

57. Куркин, В.А. Флавоноиды как гепатопротекторы и антиоксиданты /

58. Лавренов, В.К. Полная энциклопедия лекарственных растений / В.К. Лав-ренов, Г.В. Лавренова // Т.И М-Я, СПб.: Изд. дом "Нева", М.: "Осма-Пресс". -1999. С. 35-37.

59. Ладынина, Е.А. Фитотерапия / Е.А. Ладынина, Р.С. Морозова JI.: Медицина, 1987.-С. 78-79.

60. Лазарева, Н.В. Вредные вещества в промышленности / Н.В. Лазарева, Э.Н. Левина//Справочник. Т.1,11.-Л. Химия. 1976.

61. Литвиненко, В.И. Способ получения суммы халконовых гликозидов II В.И Литвиненко, А.С. Аммосов, Т.П. Попова, А.Л. Литвиненко, Г.В. Оболен-цева. //Авт. свид. СССР (ДСП) 1164933 (1985 г.).

62. Литвиненко, В.И. Способ получения ликвиритона // В.И Литвиненко,

63. A.С. Аммосов, Т.П. Попова, Г.В. Оболенцева // Авт. свид. СССР (ДСП) 1141607(1984 г.).

64. Литвиненко, В.И. / В.И. Литвиненко, Н.П. Максютина, Д.Г. Колесников // Ж. общей химии. 1963. - Т.ЗЗ, вып.1,- С.296-300; Т.ЗЗ, вып. 12. - С.4014-4018.

65. Литвиненко, В.И. Получение полиамидного сорбента / В.И. Литвиненко, Н.П. Максютина, Д.Г. Колесников // Мед. Промышленность, 1962.- № 3. С. 40-44.

66. Литвиненко, В.И. Способ получения ликвиритона / В.И Литвиненко, Г.В. Оболенцева, Е.Е. Борзунов, В.П. Георгиевский // Авт. свид. СССР (ДСП) 345714(1972 г.).

67. Максютина, Н.П. Растительные лекарственные средства // Н.П Максютина, Н.Ф. Комиссаренко, А.П. Прокопенко, Л.И. Погодина, Г.Н. Липкан // Киев: Здоровье. 1985.

68. Маняк, В. А. Способ получения сухого экстракта солодки / В.А. Маняк, Т.Н. Москалева//Авт. свид. СССР 1102604 (заявл. 19.01.82).

69. Маняк, В.А. Способ получения глицирама из густого экстракта солодки /

70. B.А. Маняк, И.А. Муравьев // Авт. свид. СССР 1189453.

71. Маняк, В.А.Способ получения-глицирама / В.А. Маняк, И.А. Муравьев // Авт. свид. СССР 1223911.

72. Маняк, В.А., Муравьев, И.А. Способ получения экстракта солодки / В.А. Маняк, И.А. Муравьев // Авт. свид. СССР 1127593 (заявл. 16.11.81).

73. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский // Медицина, М., 1984. Т.1 -С.362.

74. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский // Новая Волна, M.,T.l. -С.340-341.

75. Муравьев, И.А., Зюбр, Т.П. Способ получения глицирама / И.А. Муравьев, Т.П. Зюбр // Авт. свид. СССР 914060 (заявл. 21.05.79).

76. Муравьев, И.А. Способ получения глицирризиновой кислоты из солодкового корня / И.А. Муравьев, В.Д. Пономарев // Авт. свид. СССР 145713 (заявл. 03.04.61).

77. Муравьев, И.А. О строении однозамещенной аммонийной соли глицирризиновой кислоты / И.А. Муравьев, В.Д. Пономарев, Э.К. Кравченко. // Химия природ, соедин. 1971. - № 1. - С. 121-122.

78. Муравьев, И.А. Опытно-промышленный регламент № 39-10-034 на производство глицирама / И.А. Муравьев, В.Д. Пономарев, Т.Г. Красова, Л.И. Мягкая, В.И. Коган //ПЭЗ "ВИЛАР", 1979. 159с.

79. Муравьев, И.А. Об эстрогенно активных веществах солодки голой / И.А. Муравьев, Н.Ф. Конохина // Материалы объединенной научной конференции «Вопросы курортологии, фармации и фармакологии» П., - 1967. -С.333-334.

80. Муравьев, И.А. Об установлении оптимальных сроков заготовки солодкового корня / И.А. Муравьев // Ученые записки, Т.И.-П. 1957. - С.73-83.

81. Муравьев, И.А., Пономарев, В.Д. Глицирризиновая кислота и ее препараты в качестве новых лекарственных средств / И.А. Муравьев, В.Д. Пономарев // Медицинская промышленность СССР, №7. М. - 1962. - С. 11-18.

82. Муравьев, И.А. Изучение режима реперколяции при экстрагировании корней и корневищ солодки уральской / И.А. Муравьев, Т.П. Зюбр // Химико-фармацевтический журнал, №7. Медицина, М., 1972. Т. VI.- С.47-52.

83. Муравьев, И.А. О явлениях, сопутствующих процессу набухания сухого сырья корня солодки / И.А. Муравьев, В.Д. Пономарев, Ю.Г. Пшуков // Химико-фармацевтический журнал №1. Медицина. М., 1971. С.44-49.

84. Муравьев, И.А. Получение экстракта из вытяжки солодкового корня после выделения из нее глицирризиновой кислоты и использование его в пилюльных массах / И.А. Муравьев, Л.И. Мягкая // Ученые записки. Т.VI. вып I.-C. 1967. - С.264-266.

85. Муравьев, И.А. Материалы к изучению кинетики извлечения глицирризиновой кислоты из солодкового корня / И.А. Муравьев, Н.И. Бурка // Ученые записки. T.VI. вып I. С. 1967.- С.268-279.

86. Муравьев, И.А. Глицирам новый отечественный препарат типа корти-костероидов / И.А. Муравьев, В.Д. Пономарев // Материалы объединенной научной конференции «Вопросы курортологии, фармации и фармакологии» П., 1967. - С.335-336.

87. Муравьев, И.А. О получении в чистом виде глицирризиновой кислоты и некоторых ее солей / И.А. Муравьев, В.Д. Пономарев // Ученые записки. T.III.-Ставрополь, 1959. С. 169-174.

88. Исследование отходов солодкового корня и возможности их использования / Л.И. Мягкая, Н.Ф.Конохина, И.А. Муравьев, В.Д. Пономарев // Ученые записки. Т.VI. вып I. С. 1967.- С.281-284.

89. Муравьева, Д.А., Самылина, И.А., Яковлев, Г.П. Фармакогнозия. М.: Медицина. - 2003. - С.656.

90. Немецкая фармакопея, DAB 9, S. 1331.

91. ОСТ 42-505-96. Продукция медицинской промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения. М., 1996.

92. Фармакологические и терапевтические свойства препаратов солодки (обзор) / Г.В. Оболенцева, В.И. Литвиненко, А.С. Амосов, Т.П. Попова, A.M. Сампиев // Химико-фармацевтический журнал, Т.ЗЗ М., 1999. - С.24-27.

93. Попова, Н.В. Тезисы докладов V Всесоюзного симпозиума по фенольным соединениям (секция химии) / Н.В. Попова, В.И. Литвиненко// Таллинн, 1987.-С. 71-72.

94. Правила сбора и сушки лекарственных растений (сборник инструкций) // М., Медицина.- 1985. С.232-236.

95. Практикум по органической химии. М.: Мир, 1979. Т.2.-302 с.

96. Промышленный регламент на производство глицирама.// Чимкент, хим-фармзавод. 1984. - 130с.

97. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. Вып.9.-М.: 000 "РЛС-2002", 2002. С. 325, 429, 1072.

98. Соколов, C.J1. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей / C.JI. Соколов // М.: ООО "Медицинское информационное агентство", 2000. С.105-107.

99. Способ получения из лакрицы препарата для лечения язв желудка и кишечника//Патент, Швейцария 375103, 18.11.58-РЖХим, 1965, 12Н327Г.

100. Степанова, Э.Ф. Способ получения глицирама / Э.Ф. Степанова // Авт. свид. СССР 827065 (заявл. 07.03.78).

101. Теоретические и практические аспекты применения глицирризина. / Г.И. Сторожаков, И.Е. Байкова, И.Г. Никитин, А.И. Арчаков, О.М. Ипатова // Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. №1 2003. -С.35-39.

102. Такагаки, Р. Способ экстракции гидрофобных флавоноидов из Glycyr-rhiza / Р. Тагаки // Патент, Япония N 64-22564', 02.02.89 РЖХим, 1991, 190170П.

103. Татьянин, В.Н. Непрерывный процесс экстракции солодкового корня в вертикально шнековом аппарате / В.Н. Татьянин, Н.С. Танеев // Хим.-фарм. ж. 1970, Т.4. - N8.- С.39-40.

104. Толстиков, Г.А. Комплексы глицирризиновой кислоты с урацилами -новый класс антидотных и антирадикальных средств / Г.А. Толстиков, В.А. Мышкин, Л.А. Балтина // Изуч. и использ. солодки,в нар. х-ве СССР. Алма-Ата, 1991.-С. 159.

105. Толстиков, Г.А. Глицирризиновая кислота как основа для создания новых лекарственных препаратов высокой ценности / Г.А. Толстиков // Изуч. и использ. солодки в нар. х-ве СССР. Алма-Ата, 1991.- С.165-167.

106. Толстиков, Г.А. Спектры ЯМР 13С ряда пента- и гексациклических три-терпеноидов производных глицирретовой кислоты / Г.А. Толстиков, Л.М.

107. Халилов, Л.А. Балтика, P.M. Кондратенко, А.А. Панасенко, Е.В. Васильева // Химия природ. Соедин. 1985. - N 5. - С. 645-653.

108. Толстиков, Г.А. Способ выделения глицирризиновой кислоты / Г.А. Толстиков, У.М. Джемилев, Д.Я. Сошников, А.Г. Петунина, А.Ш. Юханова // Авт. свид. СССР 419521 (заявл. 14.06.72).

109. Толстиков, Г. А. Способ получения пента-О-никотината глицирризиновой кислоты / Г.А. Толстиков, У.М. Джемилев, А.Ш. Юханова, Д.Н. Лазарева, В.Д. Давыдова, Х.М: Насыров, А.Г. Петунина, Д.Я. Сошников // Авторское свид.СССР 482446 (заявл. 19. 03. 74).

110. Тосисукэ, И. Получение чистой глицирризиновой кислоты и ликви-ризина из экстракта лакричника / И. Тосикуэ // Патент, Япония 15875, 21.10.60 -РЖХим, 1963, 10Н222П.

111. Тосикуэ, И. Способ очистки экстрактов Glycyrrhiza glabra L. var. Glan-dulifera / И. Тосикуэ // Патент, Япония 1400, 29.02.60 РЖХим, 1961, 20ЛЗЗО.

112. Тюкавкина, Н.А. Анализ ликвиритона и халкорина метом ВЭЖХ /Н.А. Тюкавкина, В.И. Литвиненко, В.Е. Ручкин // Фармац. журн: 1992. - № 4.-С.54-58.

113. Филатова, Т.И. Кетальный тест в структурном анализе флавоноидных гликозидов, содержащих рамнозу / Т.И. Филитова, Г.Г. Запесочная // Труды VIII конф. Молодых ученых ВИЛАР,- М., 1987.- С.205-207. (Рукопись,деп. в ВИНИТИ 25.01.88, N 627-И-88).

114. Флора СССР / Ботанический институт им. В.Л. Комарова Академии наук СССР; Под ред. В.Л. Комарова.- Ленинград Москва, - 1948. - С. 230-242.

115. ФС 42-2425-86 "Ликвиритон"

116. ФС 42-2656-89 "Таблетки ликвиритона 0,1 г."

117. ФС 42-2573-88 "Ликуразид-стандартный образец".

118. ФС 42-419-75 "Экстракт солодкового корня сухой".

119. Чирков, Н.С. Наука и лекарственные растения / Н.С. Чирков, М.Н. Павлов // М.: Знание, 1981. С.7-20.

120. Шостаковский, С.А. Систематика высших растений / С.А. Шостаков-ский //М.: Высшая школа, 1971. С.257

121. Шретер, Г.К. Лекарственные растения и растительное сырье, включенные в отечественные фармакопеи / Г.К. Шретер // М., 1972.

122. Шретер, А.И. Лекарственная флора Кавказа / Муравьева Д.А., Пакалн Д.А., Ефимова Ф-D М.: Медицина. - 1979. - С.260.

123. Экстракт солодкового корня сухой. Статья 260. // ГФ X, 1968. С.283-284.

124. Экстракт солодкового корня густой. Статья 261. //ГФ X, 1968. С.285.

125. Экспресс-информация. "Химико-фармацевтическое производство за рубежом". М.: ВНИИСЭНТИ, 1988. № 22. - С. 22; 1990, X" 15. - С.19.

126. Экспресс-информация. Сер. "Химико-фармацевтическое производство за рубежом".- М.: ВНИИСЭНТИ, 1988. № 22. - С.22 и 1990. - № 15. - С. 19.

127. Ясницкий, Б.Г. Корригенты запаха и вкуса в производстве лекарственных препаратов / Б.Г. Ясницкий, Е.Б. Дольберг, Т.В. Медведева // Хим.-фарм. промышленность. Обзорная информация. Вып.9, 1987.

128. Яковлева, Г.П., Блинова, К.Ф. Растения для нас / Г.П. Яковлева, К.Ф. Блинова // Справочное издание. Учебная книга, 1996. С. 7-67.

129. Arakawa, Н., Nakazaki, М. Flavanone configuration / H.Arakawa, М. Naka-zaki // Liebigs Annalen Chemie, 636,114-116 (1960).

130. Bharadwaj, D.K. Occurence of 2-methylisoflavones m Glycyrrhiza glabra// D.K. Bharadwaj, R. Murari, T.R. Seshadri, R. Singh // Phytochemistry.-1976.-V.15, N 2.- P. 352-353.

131. BritishPharmacopoeia. London, 1980. V. II, p 563.

132. Canonica, L., Russo, G., Bombardelli, L.// Gazz. chim. Ital. 1966. - V. 96.-P.772,832.

133. Catalogue Fluka 1997/98, Chemika-Biochemika Switzerland, Fluka Chemie AG, 1997.-C. 761.

134. Catalog SIGMA. 1998 (C. 550), USA, Sigma Chemical Company.

135. Demizu, S. / S. Demizu, K. Kajiyama, K. Takahashi, Y. Hiraga, S. Yama-moto, Y. Tamura, K. Okada, T. Kinoshita // Chem. Phann. Bull. 1988. -V.36, N9.-P. 3474-3479.

136. Duddeck, H. Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectra 18a-and 18(3-Glycyrrhetic Acid Derivatives / H.Duddeck, M.H.A.Elgama, G.S.Ricca, B.Danieli, G.Palmisano.// Organic Magnetic Resonance. -1978.-V.11.N3.- P. 130-132.

137. Fukai, T. On the Structure of Licoricidin / T. Fukai, M. Toyono, T. Nomura // Heterocycles. 1988. - V. 27, N 10. - P.2309-2313.

138. Fukai, T. Six prenylated phenols from Glycyrrhiza uralcnsis / T. Fukai, Q.-H. Wang, T. Nomura // Phytochemistry. 1991.- Vol. 30, N 4.- P.1245-1250.

139. Geissman, T.A. The Chemistry ofFlavonoid Compounds / T.A. Geissman // Oxford, N.-Y., L.: Pergamon Press. 1962. - 665 p.

140. Hatano, T. Phenolic constituents of Licorice specimens. IV / T. Hatano, T. Fukuda, Y-Z Liu, T. NoroJ. Okuda // Yakugaku Zasshi. 1991.- V.ll 1, N6.-P. 311-321.

141. Hatano, T. Phenolic constituents Of Licorice. Ill / T. Llatano, T. Fukuda. T. Miyase, T. Noro, T. Okuda// Chem. Phann. Bull. 1991.- V.39, N5.-P. 1238-1243.

142. Hatano, T. Two new flavonoids and other constituents of licorice root / T. Hatano, H. Kagawa, T. Yasuhara // Chem. Phann. Bull. 1988.- V. 36, N 6. - P. 2090-2097.

143. Hatano, T. Phenolic constituents of Licorice П .Structures of li-copyranocoumarin, licoarylcoumarin and glisoflavone / T. Hatano, T. Yasuhara, T. Fukuda, T.Noro, T. Okuda // Chem. Pharm. Bull. 1989.- V. 37, N11.-P. 30053009.

144. Hiraga, Y. High-performance liquid chromatographic analysis of licorice extracts / Y.Hiraga, H. Endo, K. Takahashi, S. Shibata // ^'Chromatography. 1984.-V.292, N 2. - P. 451-453.

145. Herhammer, L. Uber die Position der Glucose in Spireoside / L. Herhammer, P. Hensel // Arch. Pharm. 1954. - Bd. 287 / 59. - S.36-39.

146. Karrer, W. Konstitution und Vorkommen der organischen Pflanzenstoffe / W. Karrer// Basel und Stuttgart: Birkhauser Verlag, 1958. 1207 S.

147. Karrer, W. Konstitution und Vorkommen der organischen Pflanzenstoffe / W. Karrer-Erganzungl. 1977 - 1038S.

148. Karrer, W. Konstitution und Vorkommen der organischen Pflanzenstoffe / W. Karrer // Erganzung 2, Teil 1. 1981. - 939 S.

149. Karrer, W. Konstitution und Vorkommen der organischen Pflanzenstoffe / W. Karrer // Erganzung 2, Teil 2. 1985. - 2328 S.

150. Kinoshita, T. The occurence of an isoflavene and the corresponding isofla-vone in licorice root / T. Kinoshita, T. Saitoh, S. Shibata // Chem. Pharm. BulL-1976. V. 24. - N5.- P.991-994.

151. Lakritze-Stangen Fachgemass Verpackt. "Neue Verpackt", 1980 33 - № 10, 1238-1240.

152. Lauria,F. / F. Lauria // Gazz.chim.Ital, 1957. V.87. - P. 1407.

153. Lythgoe, В. Constitution of the disaccaride of the glycyrrhisic acid / B. Lythgoe, S.Trippet //J. Chem. Soc. London. 1950. - P.1983-1990.

154. Mabry, T.J. The Systematic Identification of Flavonoids / T.J. Mabry, K.R. Markham, M.B. Thomas // Berlin et al.: Springer Verlag. 1970. - 354 p.

155. Marsch, C.A., Levy, G.A. Glucuronide metabolism in plant / C.A. Marsch, G.A. Levy // Biochem J. 1956. - V. 63, N1 - P.9-14.

156. Martindale. The Extra Pharmacopoeia,- London: Pharm.Press, 1982.-2025 p.

157. Nakanishi, T. Flavonoid glycosides of roots of Glycyrrhiza uralensis / T. Na-kanishi, A. Inada, K. Kambayashi, K. Yoneda К // Phytochemistry.-1985.-V.24, N2.-P. 339-341.

158. Norman, C. The structure of glycyrrhisic acid / C. Norman // Chem. Week-blad. 1952.-V. 48. - P.213-219.

159. Pun, В., Seshadri, T.R. / B. Pun, T.R. Seshadri // J. Sci. Ind. Res.- 1954.-V.13B.- P.475 (C.A.- 1955.-V.49.-N11569).

160. Reiners, W. / W. Reiners // Experientia. 1966. - V. 22. - P. 359.

161. Reiners, W. Cumarine und Hydroxyzimtsauren aus Sussholzwurzel / W. Reiners //Naturwissenschaflen. 1964. - Bd.51.- N8. - S.193.

162. Ricca, G.S. Carbon-13 NMR Spectra of some Pentacyclic Trite4)enoids with the Olean-12-ene and 18a-01ean-12-ene Skeleton / G.S. Ricca, B. Danieli, G. Palmisano, H.Duddeck, M.H.A. Elgamal // Organic Magnetic Resonance. 1978.-V.I 1.-N4.-P.163-166.

163. Saitoh, T. New isoflavan and flavanone from licorice root / T. Saitoh., T. Kinoshita, S. Shibata // Chem. Pharm. Bull. 1976 - V. 24. - N 4. - P.752-755.

164. Shibata, S., Saitoh, T. Flavonoid compounds in licorice root / S. Shibata, T. Saitoh / J. Indian chem. Soc. 1978. - V. LV. - P. 1184-1191.

165. Shinoda, J., Ueeda, S. / J. Shinoda, S. Ueeda // Chem. Ber. 1934. - B. 67. -S. 434.

166. The Flavonoids: Advances in Research since 1980. Ed. by Harbome J.B. -London, New York: Chapman and Hall. 1988. - 773 p.

167. The Flavonoids: Advances in Research. Ed. by Harbome J.B., Mabry T.J. London, New York: Chapman and Hall. 1982. - 744 p. (Ken R. Markham and V. Mohan Chari).

168. The Flavonoids. Ed. by Harbome J.B., Mabry T.J., Mabry H.- London, New York: Chapman and Hall. 1975. - 1204 p.

169. The Pharmacopeia of Japan. X, 1982. P.1034, 1059.

170. The United States Pharmacopeia. XXI. The National Formulary. XVI, 1985. -1683 p.

171. Tittel, G. Analysis and Isolation of Phenolics from Plants by HPLC: Possibilities and Limits / G. Tittel, H. Wagner // Flavonoids and Bioflavonoids, 1981. (Proceedings of the International Symposium, Munich, FRG, 1981). Budapest, 1982, p.299-310.

172. Tsuji, H., Osaka, S., Kiwada, H. / H. Tsuji, S. Osaka, , H. Kiwada // Chem. Pharm. Bull. 1991. - V. 39. - N. 4. - P.1004-1008.

173. Van Hulle, C. Isolation of two new flavonoids from the root of Glycyrrhiza glabra var. Typica / C. Van Hulle, P. Braeckman, M. Vandewalle // Planta medica.- 1971. Bd.20. - N3. - S.278-282.

174. Wrzeciono, U. Triterpenoids II. Carbon 13 NMR Spectra of 18(3 -and 18oc -11-Oxooleanolic Acid Derivatives// U. Wrzeciono, L. Zaprutko, J. Budzianowsky, H. Wojtowicz, D.Dubowska.// Magnetic Resonance in Chemistry. 1987. - V. 25.- P.223-226.

175. Yahara, S., Nishioka, I. Flavonoid glucosides from licorice / S. Yahara, I. Nishioka // Phytochemistry. 1984. - V.23. - N 9,- P.2108-2109.