Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследования по созданию нового гепатопротекторного лекарственного средства "Силибохол"

!<с схс'Гь

^ г

На правах рукописи

СИМОНОВА ГАЛИНА ВИКТОРОВНА.

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СОЗДАНИЮ НОВОГО ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА «СИЛИБОХОЛ»

Специальность 15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 2000

Работа выполнена в Самарском государственном медицинском университете Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

В.А. КУРКИН

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор H.H. ДЕМЕНТЬЕВА кандидат фармацевтических наук, доцент T.JI. КИСЕЛЕВА

Ведущая организация:

Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова

Защита состоится «_»_2000 г. в_часов

на заседании Диссертационного Совета Д 074.28.01 при Федеральном государственном учреждении науки Научно-исследовательского института фармации Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 117418, г. Москва, Нахимовский проспект, 45.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного учреждении науки Научно-исследовательском института фармации Министерства здравоохранения Российской Федерации Автореферат разослан

Off

2000 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета Д 074.28.01, кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник

Л.М. БОБРОВА

РОССИЙСКАЯ ГОСуДЛ.СТЗЕННАЯ

И ОТЕКА ___2С01_

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время доминирующее положение в ряду лекарственных средств растительного происхождения гепатопротек-торного спектра действия по праву занимают препараты плодов растороп-ши пятнистой [БИуЬипг тапапит (Ь.) СаеЛп.] - карсил, легалон, силибор и др., сочетающие в себе выраженные гепатопротекторые и мягкие желчегонные свойства. Однако ассортимент гепатопротекторов на основе плодов данного растения, особенно отечественного производства, на наш взгляд, явно недостаточен, особенно в случае лечения различной патологии печени, в том числе острых вирусных и хронических гепатитов в период поздней реконвалесценцин, сопровождающихся, как правило, дискине-зиями и другими функциональными нарушениями в органах системы пищеварения. При этом традиционные препараты оказываются часто малоэффективными, поскольку их спектру действия не присущи или слабо выражены холекинетический, противовоспалительный, спазмолитический и иммунокорригирующий эффекты.

В этой связи нам представляются актуальными исследования по созданию нового комплексного гепатопротекторного препарата "Силибохол" на основе плодов расторопши пятнистой с включением в состав корней солодки, листьев березы, травы мелиссы лекарственной, цветков ромашки аптечной и сырья других лекарственных растений, придающих препарату более широкий спектр терапевтической активности.

Необходимость в предлагаемой разработке диктуется также ухудшающейся экологической обстановкой в ряде регионов и возрастающим числом экологически обусловленных патологий. В этих условиях особенно важно защитить печень как основной барьер на пути различных токсинов и других повреждающих факторов, и повысить ее антитоксические функции.

Кроме того, имеющийся на фармацевтическом рынке ассортимент ге-патопротекторов, в том числе на основе плодов расторопши пятнистой, не может в полной мере удовлетворить потребность практического здравоохранения в лекарственных средствах данной фармакотерапевгической группы из-за дороговизны зарубежных препаратов.

Таким образом, разработка нового отечественного, эффективного и доступного по цене гепатопротектрного фитопрепарата свойствами представляется актуальной и перспективной как в научном, так и в практическом отношении.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы является проведение исследований по созданию нового комплексного гепатопротек-торного фитопрепарата "Силибохол". Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- научно-методическое обоснование состава исследуемого препарата;

- изучение химического состава сырья (плоды, шрот и жом плодов расторопши пятнистой, получаемый при производстве жирного масла расторопши методом прессования и экстракционным способом) и целевого продукта - лекарственного средства «Силибохол»;

- разработка методик анализа сырья, субстанций и препарата;

- разработка показателей качества, их регламентации и контроля в ряду: лекарственное сырье - субстанции «Просилибохол - 1» и «Просилибохол - 2» (ПС-1 и ПС-2) - готовое лекарственное средство; изучение стабильности препарата, установление сроков годности «Силибохол»;

- установление оптимальных параметров технологического процесса и разработка технологической схемы производства силибохола;

- разработка нормативной (НД) и технологической документации

(ТД).

Научная новизна. На основе систематического анализа литературных данных и результатов химического исследования плодов расторопши пятнистой, культивируемой промышленным способом в Самарской области, научно обоснован состав нового гепатопротекторного лекарственного средства «Силибохол». Показана целесообразность включения в состав исследуемого препарата, наряду с субстанции из плодов расторопши пятнистой, сырья ряда растений (корни солодки , листья березы, цветки календулы, трава мелиссы лекарственной, трава спорыша, трава череды трехраздельной, листья крапивы двудомной, плоды кориандра, цветки ромашки аптечной, трава тысячелистника) для усиления желчегонных, противовоспалительных, спазмолитических и иммунокорригирующих свойств, необходимых с точки зрения тактики лечения больных с различными заболеваниями печени и желчных путей, в т.ч. острыми вирусными и хроническими гепатитами.

На основании результатов сравнительного изучения химического состава плодов расторопши пятнистой, субстанций и лекарственного средства «Силибохол» показана необходимость использования в анализе сырья, субстанций и препарата стандартных образцов веществ: ГСО силибина, ликуразида, глицирама. Определены подходы к стандартизации субстанций и лекарственного средства «Силибохол», заключающиеся в применении в методиках анализа унифицированного контроля показателей качества изучаемых объектов по основным группам БАС - суммы флавоноидов и глицирризиновой кислоты - с использованием с использованием ГСО силибина, ГСО ликуразида и ГСО глицирама.

На основании химических, аналитических и технологических исследований выявлены преимущества использования обезжиренных плодов расторопши перед традиционным сырьем (нативные необезжиренные плоды) при производстве экстракта расторопши жидкого.

Результаты исследований защищены двумя патентами РФ на изобрет-тение.'

Практическая значимость. В результате проведенных исследований разработаны и внедрены:

- технология нового лекарственного средства (Патент РФ № 2.139722, МКИ А 61 К 35/78 // Бюл. № 29 от 20.10.99 г), внедрение которого позволит расширить ассортимент желчегонных и гепатопротекторных препаратов. Силибохол отвечает важнейшим требованиям фармакоэкономики с точки зрения эффективности, безопасности и себестоимости курса лечения: будучи в 1,5-2 раза активнее карсила (препарат сравнения) стоимость курса лечения с использованием силибохола в 15-20 раз меньше таковой в случае выше указанного зарубежного аналога. Учитывая фармако-терапевтический спектр действия силибохола, данный препарат можно назначать в качестве универсального профилактического средства в экологически неблагоприятных регионах. В этой связи даны рекомендации по применению силибохола в профилактике и лечении больных с различными заболеваниями печени и желчных путей , в т.ч. вирусными гепатитами.

- технология жидкого экстракта из обезжиренных плодов растороп-ши пятнистой (Патент РФ № 2139724. - А 61 К 35/78. - Бюл. № 29 от 20.10.99 г.)

- нормативная и технологическая документация (проект ВФС «Силибохол», ТУ на «Просилибохол-2», лабораторный регламент), которая проходит экспертизу в Фармакопейном и Фармакологическом государственных комитетах МЗ РФ (Письмо № 73 от 22.01.98 г.).

- методики анализа Просилибохола-1: качественный и количественный анализ суммы флаволигнанов с использованием ГСО силибина;

- методики анализа Просилибохола-2: качественный и количественный анализ суммы флавоноидов с использованием ГСО ликуразида; качественный анализ с использованием ГСО ликуразида и ГСО глицирама;

- методики анализа Силибохола: качественный и количественный анализ суммы флавоноидов с использованием ГСО силибина; качественный анализ с использованием ГСО силибина и ГСО глицирама.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 работ, в том числе 2 патента РФ на изобретение.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на V, VII и VIII Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва,1998,1999, 2000), на IV, V, VI Международных научно-практических конференциях по экологии "Экология и здоровье человека" (Самара, 1997, 1998, 1999), на 19 Международной конференции по полифенолам (Франция, 1998), на 13 Международном конгрессе по фармакологии (Германия, 1998), на научно-практической конференции "Современные тенденции развития фармации", посвященной 80-летию фармацевтической службы Самарской области, Самарского государственного медицинского университета и Самарского аптечного склада (Самара, 1999), Международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск, 2000).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Гос. регистрации 01.97.0007687) и соответствует тематике Проблемной комиссии по фармации № 36.08 РАМН РФ.

Положения, выдвигаемые на защиту:

- научное обоснование состава нового комплексного гепатопротскторного и желчегонного лекарственного средства «Силибохол»;

- технологическая схема получения препарата;

- результаты изучения химического состава плодов расторопши пятнистой;

- методики качественного и количественного анализа действующих веществ;

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 132 страницах машинописного текста, содержит 8 таблиц, 16 рисунков, список литературы, включающий 172 ссылки. Диссертация состоит из введения, 7 глав и выводов. Первая глава посвящена литературному обзору современного состояния и перспектив в области разработки гепатопротек-торных лексредств. Во второй главе дана характеристика объектов, методов исследования и приведены физико-химические константы выделенных соединений. В последующих пяти главах экспериментальной части приводятся предложенные методические подходы к направленной комбинации лекарственных субстанций для получения целевой лекформы с заданными свойствами (глава 3) и результаты фитохимических, технологических, аналитических, медико-биологических и технико-экономических исследований по созданию нового препарата «Силибохол» (главы 4-7). В приложение вынесены материалы по разработке нормативной, технологической и патентной документации.

НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА КОМПЛЕКСНОГО ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА «СИЛИБОХОЛ»

В результате разноплановой проработки вопросов по выбору сырьевых источников для получения нового препарата (спектр фармакологической активности, опыт применения в медицинской практике, уровень нормативной проработки и другие аспекты) в качестве базового компонента «Силибохола» рекомендованы плоды расторопши пятнистой. Состав:

Лросилибохол I Плодов расторопши пятнистой (ТУ 64-4-97-93) - 200,0 г Спирта 80 % (ГФ X, ст. 632) - 200 мл

Лросилибохол 2

Корней солодки Листьев березы Цветков календулы Травы мелиссы лекарственной Травы спорыша Травы череды

Листьев крапивы двудомной Плодов кориандра Цветков ромашки Травы тысячелистника Спирта 40 %

(ГФ X, ст.573) - 10,0 г (ВФС 42-2487-95) - 10,0 г (ГФ XI, ст. 5) - 2,0 г (ВФС 42-2578-95) - 5,0 г (ГФ XI, ст. 56) - 5,0 г (ГФ XI, ст. 45) - 3,0 г (ГФ XI, ст. 25) - 5,0 г (ГФ IX, ст. 214) - 2,0 г (ГФ XI, ст. 7) - 5,0 г (ГФ XI, ст. 53) - 3,0 г (ГФ X, ст. 632) - 100 мл

Для обеспечения холекинетического эффекта в состав препарат наряду с плодами расторопши пятнистой включены корни солодки, листья березы, трава спорыша (горец птичий) и листья крапивы двудомной. Листья березы и трава спорыша, содержащие в качестве основных биологически активных соединений флавоноиды, выгодно отличаются от других желчегонных средств (например, бессмертника песчаного) тем, что сочетают в себе выраженные холекинетические свойства и мягкое желчегонное действие. Кроме того, листья березы, а также листья крапивы двудомной (поливитаминное растение) благоприятно влияют на обменные процессы, что немаловажно на стадии реабилитации больных. Трава спорыша, наряду

с вышеперечисленными эффектами, показана как лекарственное сырье, применение которого целесообразно на фоне различных функциональных нарушений в органах системы пищеварения, имеющих место в восстановительном периоде. В качестве противовоспалительных компонентов включены цветки ромашки аптечной, трава тысячелистника обыкновенного и цветки календулы, причем в первых двух растениях эффект обусловлен эфирным маслом (хамазулен и другие терпен оиды), а в случае календулы комплексом биологически активных соединений (каротиноиды, флавонои-ды, сапонины). Цветки календулы являются также одним из самых эффективных и мягких иммунокорригирующих компонентов. Учитывая, что в случае ряда заболеваний печени, и особенно вирусных гепатитов, поражаются не только гепатоциты, но и иммуносистема, иммунокорригирующее действие усилено нами с помощью травы череды трехраздельной, содержащей богатый комплекс биологически активных веществ (каротиноиды, флавоноиды, сапонины и др.) и травы мелиссы лекарственной, которая дополнительно обеспечивает седативное и противовирусное действие (эфирное масло и фенилпропаноиды, в частности, розмариновая кислота). В качестве спазмолитического компонента включены плоды кориандра посевного, содержащие эфирное масло (линалоол). Корни солодки имеют в композиции особое значение: помимо усиления желчегонных, противовоспалительных и иммуномодулирующих свойств препарата (флавоноидно-терпеноидный комплекс БАС), они выступают в роли солюбилизатора флаволигнанов расторопши и готовой лекформы (глицирризиновая кислота). Последнее обстоятельство позволяет достичь ряд полезных в фармацевтическом плане свойств препарата: увеличить биодоступность флаволигнанов, снизить концентрацию водного спирта в конечном продукте до 65-70 % при сохранении ее на необходимом высоком уровне 80 % на этапе извлечения флаволигнанов расторопши, а также повысить стабильность силибохола при хранении.

ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СЫРЬЯ II ЛЕКАРСТВЕННЫХ СУБСТАНЦИЙ ПРЕПАРАТА «СИЛИБОХОЛ»

Наиболее детально изучался химический состав основного сырья препарата - обезжиренного шрота и жома плодов расторопши. В результате было выделено и охарактеризовано 4 индивидуальных соединения - сили-бин, дегидросилибин, силидианин, силикристин (табл. 1), в ряду которых особого внимания заслуживает флаволигнан дегидросилибин ( 2 ), выделенный впервые из плодов расторопши пятнистой, культивируемой в Российской Федерации и СНГ, в том числе в Самарской области. Ранее его получение было осуществлено японскими исследователями из нативных плодов расторопши, а немецкие ученые получили соединение методом химической модификации.

Выделение соединений осуществлялось с использованием различных

экстракционных и хроматографических методов (в основном полиамид и силикагель). Для элгоирования использовались водно-спиртовые и хлооо-формно - спиртовые системы в различных соотношениях. Окончательную очистку проводили путем рехроматографии и перекристаллизация веществ.

Для установления структуры выделенных веществ использованы данные УФ-, 'Н-ЯМР- и масс- спектров, а также результаты химических превращений (качественные реакции, реакции ацетилирования) и непосредственное сравнение с достоверными образцами веществ.

Для решения проблем стандартизации сырья, лекарственной субстанции «ПС-1» и лекарственного средства «Силибохол» проведена наработка ГСО силибина (ВФС 42-3383-99), который охарактеризован с использованием различных физико-химических и спектральных методов, в том числе с помощью 'Н-ЯМР-спектроскопии (рис.1).

Н-ЯМР-спектр ГСО силибиде ■ де&героацетонс

сн.2он

он у "он

он о осн,

ГСОсилнбин

А . jlU jJ

Рис. 1

Силибнн (1). Кристаллы белого цвета состава С25Н22О10, М +482, т.пл. 153-154°, Лша/10" 289, 326 (ил) им. 'Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне при 50 ° (200 МГц): 11,70 (с, 5-ОН), 6,8-7,2 (м, бН-Аг), 5,96 (д, 2Н, 2 Гц, Н-6,8, 5,10 (д, 12 Гц, Н-2), 5,00 (д, 8 Гц, Н-71), 4,60 (д, 12 Гц, Н-3), 4,1-4,2 (м, Н-81), 3,3-3,8 (м, 2Н-91), 3,85 (с, ЗН, СН30).

При фитохимическом изучении лекарственных субстанций «Просили-бохол-1» и <<Просшшбохол-1» было подтверждено наличие более двадцати соединений, относящихся к классу фенольных соединений (галловая кислота),флавоноидов, (рутин, авикулярин, кверцетин и др.), фенилпропа-ноидов (розмариновая кислота, кофейная кислота), терпеноидов (хамазу-лен, линалоол и др.) и тритерпенов (глицирризиновая кислота), что было учтено при разработке методов стандартизации.

Таблица 1

Физико-химические константы флаволигнанов плодов расторопши пятнистой

№ п/п Название / Структурная формула Физико-химические константа

1 2 3

3 Силикристин

4 Силидианин

С25Н22О10 (М+ 482) Т пл. 164-168 °С [a]D+ 10,8 (ацетон) А™* 289, 325 (пл) нм

С25Н20О10(М+ 480) Тпл. 254-255 °С >iml, 267, 365 нм

С25Н22Ою (М+ 482) Тпл. 174-177 °С [a]D + 80,5 (пиридин) Хтм 289, 325 (пл) нм

С25Н22О10 (М+ 482) Тпл. 188-191 °С [a]D + 207 (этанол) Хтах 289,326 (пл) нм

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА «СИЛИБОХОЛ»

По результатам оптимизации параметров исчерпывающего экстрагирования ведущих групп БАС из JIPC предложен способ получения лекарственного средства «Силибохол», в основе которого лежит технологический процесс, состоящий из трех этапов (рис. 2). Первый этап заключается в получении экстракта расторопши жидкого 1:1 (Просилибохол-1) методом модифицированной перколяции с использованием 80 % EtOH. На втором этапе - получение суммарного экстракта из остальных видов JIPC, входящих в пропись силибохола (Просилибохол-2), проводят последовательно две экстракции 40 % этиловым спиртом корней солодки, листьев березы, травы мелиссы лекарственной, травы тысячелистника обыкновенного, плодов кориандра посевного, цветков ромашки аптечной, цветков календулы, листьев крапивы двудомной, травы череды трехраздельной, травы спорыша в условиях модифицированной бисмацерации в двух экстракторах, сочетающей в себе извлечение целевых веществ с последующей экстракцией при нагревании в интервале температур 70-80 °С. Третий этап представляет собой объединение полученных субстанций: суммарный экстракт 1:2 добавляют в виде тонкой струи при перемешивании в экстракт расторопши жидкий 1:1, полученный методом реперколяции, оставляют на 4-5 часов и отфильтровывают готовый продукт.

Контроль качества лекарственных субстанций Просилибохол -1 и 2 осуществляется по содержанию суммы флаволигнанов расторопши и фла-воноидно-терпеноидного комплекса солодки. Оценка показателей качества в плане химической стандартизации целевого продукта - лексредства «Силибохол» проводится по основным флавоноидам и терпеноидам постадий-но с использованием соответствующих методикам качественного и количественного анализа препарата на всех трех этапах получения препарата «Силибохол».

ПРИНЦИПИАЛЬНАЯ ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА «СИЛИБОХОЛ»

Измельченные плоды расторопши

80 % ЕЮН

Батарея перколятопов

Измельченное ЛРС, 40 % ЕЮН входящее в пропись просилибохола

I

Мацеуациониые баки

Рис. 2

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ ПРЕПАРАТА

При решении вопросов контроля качества сырья (обезжиренный шрот и жом плодов расторопши), лекарственных субстанций «Просилибохол -1» и «Просилибохол - 2», целевого препарата «Силибохол» в плане унификации методов анализа за основу взяты подходы к стандартизации, рекомендованные для анализа нативного сырья и препаратов расторопши пятнистой, солодки голой, мелиссы лекарственной с учетом литературных даиных и нормативных документов по оценке показателей качества других компонентов препарата.

"Качественный анализ

Нами предложены методики ТСХ-анализа лекарственных субстанций и готовой лекформы но содержанию флаволигнанов расторопши и по фла-воноидно-терпеноидному комплексу солодки голой. Причем в обоих случаях предусмотрено использование стандартных образцов веществ: ГСО силибина, ликуразида и глицирама.

1. В ходе разработки методики определения подлинности препарата по аналогии анализом шрота плодов расторопши и просилибохола-1 были предложены оптимальные условия хроматографирования, позволяющие эффективно разделить и однозначно идентифицировать доминирующие флаволигнаны расторопши: силибин, силидианин и силикристин (рис. 3).

После просмотра хроматограммы в УФ-свете (254 нм) ее проявляют свежеприготовленным раствором диазобензолсульфокислоты в насыщенном растворе карбоната натрия: флаволигнаны окрашиваются в желто-оранжевый цвет; обнаруживаются пятна других соединений (рис. 3).

В указанных условиях пятно силибина (на уровне пятна ГСО силибина) имеет Иг 0.8; данный показатель для силидианнна и силикристина составляет 0.7, 0.6 соответственно.

ТСХ-анализ Силибохола ТСХ-анализ Силибохола по содер-

по содержанию флаволигнанов жанию глицирризиновой кислоты

СС1^ - AcN 6:4 УФ 254 нм, ДСК

о

8 ° о о

о о

О

о о

Л_________

12 3 4

ХЛФ-Ме0Н-Н2О 60:35:5 УФ 254 нм

О 8

о о

о

1

1. Силибохол 1. Силибохол

2. ГСО силибин (1^ 0,8) 2. ГСО глицирам (Яг 0,5)

3. Силидианин (Яг 0,7)

4. Силикристин (Иг 0,6)

Рис. 3. Рис. 4.

2. Для определения глицирризиновой кислоты в указанных условиях на хроматограмме обнаруживается пятно фиолетового цвета глицирризиновой кислоты с величиной Иг около 0,5 (на уровне пятна ГСО глицира-ма); допускается наличие других пятен (рис. 4).

3: Поскольку использование ТСХ-методик для других групп соедине--ний представляется трудоемким, для достижения полноты и объективности контроля также предложено оценивать подлинность препарата по характеру УФ-спектра (рис. 5), в котором обнаруживается максимум поглощения при 289 нм, обусловленный в основном флаволигнанами плодов расторопши пятнистой.

0

1

0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 -0,2 0,1 -0

УФ-спектр спиртового раствора ГСО силибина (1) и спирто-водного раствора лексрсдства "Силибохол" (2)

\1

289

270

У л

V

ЧЧХ 320

■н—1-—+— I—-1- -1- • -I

220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 340 350 360 X, ПГП

Рис. 5

Следует отметить, что использование только всех трех методик качественного анализа позволяет достоверно судить о подлинности комплексного препарата «Силибохол».

Количественное определение

Количественную оценку содержания суммы флавоноидов в препарате предложено проводить с помощью прямой спектрофотометрии в пересчете на ГСО силибин (ВФС 42-3383-99), как и в случае анализа сырья и экстракта расторопши.

Предложенная аналитическая длина волны 289 нм являегся не только основным максимумом УФ-спектра препарата (2), но и, на наш взгляд, наиболее объективно характеризует его качество, поскольку помимо фла-волигнанов в этой области вклад в кривую поглощения вносят и другие флавоноиды. В этой связи представляется оправданным в предложенных условиях определять сумму флавоноидов в пересчете на силибин (1).

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на силибин в процентах (X) вычисляется по формуле:

_ РхЮ0х50хто хЮО 40хДх/?ю

Х~ Кх 5х Ло х 100х 25 Ух Во 'ГД6

О - оптическая плотность испытуемого раствора (раствор Б);

Бо - оптическая плотность раствора ГСО силибина;

то- масса ГСО силибина, г;

V - объем испытуемого препарата, мл;

Результаты исследований с использованием разработанной методики свидетельствуют о том, что содержание суммы флавоноидов в препарате в пересчете на силибин составляет в среднем 2,0-2,3 % (нижний предел 1,5%).

Метрологические характеристики спектрофотометрической методики количественного определения суммы флавоноидов в препарате даны по результатам 11 определений и представлены в таблице 3.

Таблица 3

Метрологические характеристики методики

X р, % АХ Е, %

10 2,15 0,0721 95 2,23 ±0,1003 ±4,67

Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95 % составляет ±4,67 %.

Достоверность предложенной методики определения суммы флавоноидов в препарате "Силибохол" подтверждена опытами с добавками ГСО силибина в препарат и в раствор А (табл. 4).

Таблица 4

Содержание суммы флаволнгианов в препарате "Силибохол" в зависимости от добавляемого ГСО силибииа

Исходное содержание суммы флавоноидов, мг Добавлено силибина, мг Содержание суммы флавоноидов, мг Ошибка

расчетное найденное абсолют., мг относит. %

21,05 21,05 21,05 21,05

5,20 (в препарат)

5,30 (в препарат)

11,70 (в раствор А)

20,50 (в раствор А)

26,25 26,35 33,75 41,55

26,71 26,18 33,04 42,69

+ 0,46 -0,17 -0,71 + 1,14

+ 1,75 -0,65 -2,10 + 2,74

При этом ошибка определения суммы флаволигнанов в экстракте рас-торопши жидком находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки.

С использованием предложенных методик определения подлинности препарата и количественной оценки содержания флавоноидов исследованы 5 серий образцов «Силибохола», заложенных на хранение сроком на 4 года. Данные показатели качества остаются стабильными в течение трех лет.

ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕПАРАТА «СИЛИБОХОЛ» В МЕДИЦИНСКОЙ ПРАКТИКЕ

При исследовании влияния нового гепатопротекторного лекарствен-нш о средства "Силибохол" на перекисное окисление липидов и антиокси-даитные системы печени крыс на фоне токсического поражения четырех-хлористым углеродом установлено, что силибохол статистически достоверно снижает перекисное окисление липидов в 2,2 раза, в то время как препарат сравнения (легалон) - в 1,4 раза. Оба препарата - и силибохол, и легалон повышают активность супероксиддисмутазы в 4,5 и 4,0 раза соот-

ветственно. Активность каталазы повышается при действии силибохола и легалона в 3,5 раза и 4,5 раза соответственно. Следовательно, силибохол является эффективным препаратом, обладающим антиоксидантным действием, которое проявляется в виде гепатопротекторного эффекта, препятствующего поражению печени животных. Исследования проливают свет и на механизм гепатопротекторного эффекта, который объясняется, очевидно, повышением активности супероксиддисмутазы и каталазы. Эти ферменты инактивируют такие активные формы кислорода, как супероксидный радикал и перекись водорода. При этом не происходит столь интенсивной пероксидации липидов, в том числе липидов мембран клеток, и не происходит нарушения структуры печеночной ткани. При изучении острой токсичности лекарственного средства "Силибохол" показано, что препарат относится к группе малотоксичных веществ.

С целью определения места и роли нового препарата в общем комплексе лечебно-профилактических мероприятий по поводу ряда патологий печени различного генеза (в том числе экопатологий) для накопления опыта клинических наблюдений были выбраны острые и хронические вирусные гепатиты, как одни из наиболее тяжелых заболеваний с обширным поражением печеночных клеток. Силибохол назначался в общем курсе химиотерапии больных этого профиля в дозировке по 10 капель 3 раза в день, препарат сравнения - «Карсил». Курс лечения 3 недели. При оценке общего самочувствия больных, размеров печени, результатов УЗИ и данных анализов крови отмечено, что силибохол имеет преимущество перед препаратом сравнения: биохимические показатели (билирубин, Алат и др.) быстрее приходят к норме. Наилучшие результаты достигнуты при назначении силибохола в период реконвалесценции заболевания. Это обстоятельство подтверждает достижение заявляемого спектра фармакологической активности препарата (гепатопротекторная, желчегонная, спазмоли-

тическая, противовоспалительная), поскольку в случае хронических и острых вирусных гепатитов, как правило, развиваются дискинезии желчевы-водящих путей, хронический холецистит, холестагический синдром, наблюдается замедленное восстановление функциональных проб печени. Назначение препарата в указанной дозировке позволяет сократить восстановительный период больного в 1,5-2 раза.

Таким образом, силибохол следует отнести к фармакотерапевтической группе гепатопротекторных и желчегонных лекарственных средств. Причем в их ряду новый препарат выделяется органопротекторными свойствами. что позволяет его характеризовать как гепатопротектор нового поколения.

ВЫВОДЫ

1. Научно обоснован состав нового комбинированного гепатопротектор-ного фитопрепарата «Силибохол» на основе плодов расторопши пятнистой с включением в пропись корней солодки, листьев березы, цветков календулы, травы мелиссы лекарственной, травы спорыша, травы череды трехраздельной, листьев крапивы двудомной, плодов кориандра, цветков ромашки аптечной, травы тысячелистника.

2. Разработана оригинальная технологическая схема получения комплексного лекарственного средства «Силибохол», приоритет которой защищен патентом РФ.

3. В результате изучения химического состава плодов расторопши пятнистой, культивируемой в Самарской обл., а также шрота и жома данного сырья выделены и охарактеризованы с использованием УФ-, ЯМР-спсктроскопии и масс-спектрометрии доминирующие флаволигнаны силибин, силидианин, силикристин, дегидросилибин, причем последний ранее не был описан для сырья растения, культивируемого в России и странах СНГ.

4. Разработаны методы стандартизации сырья (обезжиренный шрот и жом плодов расторогнли), лекарственных субстанций «Просилибохол-1», «Просилибохол - 2» и целевого препарата «Силибохол» с использованием ГСО силибина, ликуразида и глицирама.

5. Разработаны методики качественного анализа Просилибохола- 1, Про-силибохол-2 и Силибохола с использованием спектрофотометрии и ТСХ анализа, в которых обосновано применение ГСО силибина, ГСО ликуразида и ГСО глицирама.

6. Разработаны методики количественного определения суммы флавонои-дов в субстанциях «Просилибохол-1» и «Просилибохол-2», а также в препарате «Силибохол» с использованием спектрофотометрии, в которой обосновано применение ГСО силибина и ГСО ликуразида.

7. Показана целесообразность использования препарата «Силибохол» в качестве гепатопротекторного лекарственного средства при лечении острых вирусных и хроничесикх гепатитов.

8. Разработаны ТУ и проект ВФС на лекарственное средство «Силибохол», а также лабораторный регламент на производство данного препарата.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Куркип В,А., Запесочная Г.Г., Лебедев A.A., Симонова Г.В., Авдеева Е.В., Фарси Ахмед, Егоров В.А., Столяров Е.А., Суздальцев A.A., Рощупкин В.II., Юрченко Н.Г., Попова JI.JI. Исследования по созданию нового гепатопротекторного лекарственного средства "Силибохол" // Самарский медицинский архив. - Самара, 1997. - № 5. - С. 40-42.

2. Куркип В.А., Лебедев A.A., Запесочная Г.Г., Авдеева Е.В., Суздалы^ев A.A., Рощупкин В.И..Егоров В.А., Первушкин C.B., Браславский В.Б., Козлов C.B., Юрченко Н.И., Попова Л.Л., Сгшерзина Л.В., Булатова М.В., Марусин М.А., Кантария Е.В. Перспективы использования новых лекарственных средств на основе плодов расторопши пятнистой // Экология и здоровье человека: Тезисы докладов IV научно-практической конференции с международным участием (6-10 октября 1997 г., Самара). -1997.-С. 194-196.

Ъ. Куркин В.А., Лебедев А.А., Косарев В.В., Авдеева Е.В., Запесочная Г.Г., Первушкин С.В., Егоров В.А., Лебедев П.А., Суздалъцев А.А., Марусин М.А., Булатова М.В. Плоды расхоропши пятнистой - перспективный источник антиоксидантов // V Международная конференция "Биоантиоксидант". - Москва, 1998. - С. 52-53.

4. Куркин В.А., Лебедев А.А., Авдеева Е.В., Суздальцев А.А. Итоги и пер-епекттивы научных исследований в области создания биоантиоксидант-ных экопротекторов на основе флавоноидов // Здоровый образ жизни -системный подход: Тезисы докладов V Всероссийской научно-практи ческой конференции серии "Экология и здоровье человека". - Самара, 1998.-С. 109-111,

5. Куркин В.А., Лебедев А.А., Запесочная Г.Г., Егоров В.А., Авдеева Е.В., Первушкин С.В., Суздальцев А.А., Пименов КС., Козлов С.В., Булатова М.В., Юрченко Н.Г., Попова Л.Л., Ахтемиров Е.В .Новые биоантиокси-дантные препараты на основе плодов расторопши пятнистой // Современные тенденции развития фармации: Тезисы докладов научно- практической конференции, посвященной 80-летию фармацевтической службы Самарской области, Самарского государственного медицинского университета и Самарского аптечного склада. - Самара, 1999. - С. 30.

6. Авдеева Е.В., Куркин В.А., Лебедев А.А., Косарев В.В., Запесочная Г.Г., Симонова Г.В., Первушкин С.В., Егоров В.А., Суздальцев А.А., Рощупкин В.Н., Юрченко Н.Г., Попова Л.Л., Кантария Е.В. Пути рационального использования плодов расторопши пятнистой как уникального гепато-протекторного средства // V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство": Тезисы докладов. - Москва, 1998. - С. 341.

7. Куркин В.А., Лебедев А.А., Запесочная Г.Г., Авдеева Е.В., Симонова Г.В., Лебедев П.А., Первушкин С.В., Егоров В.А., Булатова М.В., Ахтемиров Е.В., Кантария Е.В. Новые препараты на основе плодов расторопши MTHncToii//International Journal on Immunorehabilitation.-1998.-N. 8.- P.12.

8. Kurkin V.A., Lebedev A.A., Zapesochnaya G.G., Avdeeva E.V., Simonova G.V., Lebedev P.A., Pervushkin S.V., Egorov V.A., Mizina P.G., Bulatova M.V. The new possibilities of the use of Silybum marianum (L.) Gaertn. Fruits // Polyphenols Communications 98, XIX International Conference on Polyphenols. -France, 1998. - V. 1. - P. 29-30.

9. Куркин B.A., Запесочная Г.Г., Авдеева E.B., Ежков В.Н., Симонова Г.В., Авдеева О.И., Егоров В.А. Фенилпропаноиды как физиологически активные соединения лекарственных растений // IV Съезд общества физиологов растений "Физиология растений - наука III тысячелетия»: Тезисы докладов. - М., 1999. - С. 615-616.