Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Изучение некоторых фенольных и терпеноидных соединений, используемых в стандартизации лекарственных растений

СП

е-

& АВДЕЕВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ФЕНОЛЬНЫХ И ТЕРПЕНОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1997 г.

АВДЕЕВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ФЕНОЛЬНЫХ И ТЕРПЕНОИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

! 5.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1997 г.

Диссертация выполнена в Самарском государственном медицинском университете и НПО "Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растении " (НПО "ВИЛАР")

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

- доктор фармацевтических наук, профессор ВА.Куркин

- доктор химических наук, профессор Г.Г.Запесочная

-доктор фармацевтических наук, профессор Д А.Муравьева

- доктор фармацевтических наук, профессор В.И.Прокофьева

Ведущая организация - Научно-исследовательский институт

фармации Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится "£/" ИИ^С/Л_1997 г.

в ]кхй€ часов на заседании диссертационного совета Д.074.05.06 при Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова по адресу: Москва, Зубовская пл., д.1.

Автореферат разослан " ($ " _1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д.074.05.06 кандидат фармацевтических наук,

доцент Н.П.Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. На современном этапе фармакогнозия достигла неоспоримых успехов по широте охвата и по глубине изучения растительных объектов. Однако многие перспективные лекарственные растения, в частности, полынь эстрагон, родиола линейнолистная до сих пор не являются офи-циналъными из-за отсутствия нормативно-технической документации (НТД). С другой стороны, в свете последних достижений фитохимического изучения растений, нуждаются в критическом пересмотре отдельные разделы фармакопейных статей н другие виды НТД, регламентирующие показатели качества сырья расторопши пятнистой, солодки голой, пиона уклоняющегося.

Особенно остро эти проблемы обозначились для растительного сырья и препаратов, содержащих комплекс фенольных и терпеноидных соединений. В частности, подобные проблемы возникают в случае корней солодки, при фармакопейном анализе которых приоритет отдан группе тритерпеновых глнкозидов (глицирризиновая кислота), и остаются без внимания флавоно-идные соединения, являющиеся источником противоязвенных и желчегонных препаратов (ликвиритон, флакарбнн, халкорин). Аналогичная ситуация имеет место в анализе корневищ пиона уклоняющегоя и настойки пиона. Актуальны эти проблемы для сырья мелиссы лекарственной (терпено-иды и фенилпропаноиды), полыни эстрагон (терпеноиды и флавоноиды), родиолы розовой (простые фенолы и фенилпропаноиды).

В этой связи дальнейшее углубленное изучение компонентного состава обсуждаемых растений и физико-химических свойств образцов стандартных веществ фенольной и терпеноидной природы создает реальные предпосылки для разработки объективных методик анализа ЛРС и препаратов и позволит решить проблему унификации методов контроля качества в ряду растительное сырье - субстанция фитопрепарата - лекарственная форма.

Таким образом, выбранное направление представляется актуальным и перспективным как в научном, так и в практическом отношении.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских работ СамГМУ, НПО "ВИЛАР" и Межведомственного Совета по фармации № 47 АМН РФ (№ гос. регистрации 01.9.60.004295).

Цель работы и основные задачи исследования. Целью работы является изучение физико-химических свойств выделенных фенольных и терпеноид-ных биологически активных соединений (БАС) и возможностей их использования в качестве стандартных веществ в анализе ЛРС и фитопрепаратов на основе корней солодки голой, корневищ пиона уклоняющегося, травы мелиссы лекарственной, травы полыни эстрагон, корневищ некоторых видов рода роднола, плодов расторопши пятнистой.

Для достижения указанной цели предстояло решить следующие задачи:.

- провести углубленное изучение химического состава вышеназванных лекарственных растений и обосновать возможность использования некоторых фенольных и гсрпенондных соединений ( ликуразид, глицирризиновая ки-слога, розавнн, триандрин, салидрозид, розмарнновая кислота, силнбин) в химической стандартизации сырья и фитопрепаратов;

- изучить физико-химические свойства и разработать показатели качества предложенных сгандартных веществ;

- ратрабогать технологический способ получения PCO розмариновой кислоты из травы мелиссы лекарственной;

- предложить унифицированные методики анализа показателей качества в ряду ЛРС- субстанция препарата - лекформа с использованием стандартных образцов;

- провести технологический, аналитический и технико-экономический блок исследований по созданию новых высокоэффективных фитопрепаратов на основе комплексного подхода к использованию ЛРС.

Научная новизна. Впервые проведено детальное изучение химического состава корневищ Paeonia anómala L., корней Glycyrrhiza glabra L., травы Melissa officinalis L., корневищ Rhodiola linearifolia Boriss. и Rh. iremelica Boriss. Выделено и идентифицировано более 30 индивидуальных веществ, принадлежащих к различным классам фенольных и терпеноидных соедине-

нин, причем пеоновицианозид, родиолинозид, эстрагонозид и тархунозид являются новыми природными соединениями, для которых предложим соответствующие структуры: 6-а-Ь-арабинопиранозил-Р-1>ппокопиранозид метилсалицилата, 4-0-Р-0-ппюкопиранозид 2,4-дигидрокси-б-метоксиаце-тофенона; 8-0-а-Ь-рамнопиранозид 5,6,7,8,4 -пептагидрокси-3 -метокси-флавона и 7-0-Р-1>глюкопиранозид 5,7-дигидроксифлаванона.

Следует отметить, что большая часть идентифицированных веществ вьщелена нами впервые из указанных растительных объектов, в частности, ононин из корней солодки голой, пиноцембрин из травы тархуна, этиловый эфир розмариновой кислоты, лютеолин и даукосггерин из мелиссы лекарственной, а также группа соединений фенольной и терпеноидной природы из видов рода 1?Ьос1ю!а Ь. - ИЬ. НпеапГоПа Вопэз. и ИЬ. ¡гетеПса Воп^.

В ряду выделенных соединений выявлены доминирующие и диагностические вещества при определении родовой и видовой принадлежности растений: ликвиритигенин, ликвиритин, изолнквиритигенин, лнкуразид, фор-мононетт, ононин - для корней солодки голой; пеоновицианозид и пео-нифлорин - для корневищ пиона уклоняющегося; пиноцембрин, эстрагонозид, тархунозид - для травы полыни эстрагон; розмариновая кислота - для травы мелиссы лекарственной, тирозол, салидрозид - для корневищ родио-лы линейнолистной и р. иремельской.

На основании структурных исследований, изучения физико-химических свойств, данных термического анализа розавина, сирингина, ликуразида, С1шибина, розмариновой кислоты дано научное обоснование использования этих соединений в качестве стандартных веществ в анализе ЛРС, субстанций препаратов и лекарственных форм и разработаны технологические способы получения некоторых из них.

Предложены новые методики анализа с использованием стандартных образцов содержания БАС фенольной природы в сырье и препаратах рас-торопшн пятнистой ( ГСО силибин), мелиссы лекарственной (РСО розмариновая кислота).

Практическая значимость. На основании результатов химического изучения J1PC, субстанций и препаратов, а также исследования физико-химических свойств и установления показателен качества ряда БАС фе-нольной и терпеноидной природы были разработаны:

- способ получения PCO розмариновая кислота;

- технологические схемы получения новых фитопрепаратов "Экстракт рас-торопши жидкий" и "Силибохол", причем первое лекарственное средство разрабатывается в соответствии с региональной экологической программой "Здоровье населения города Самары";

- проект ВФС на "Экстракт расторопши жидкий";

- бизнес-план (комплекс маркетинга, технико-экономическое обоснование, структура финансирования) на производство "Экстракта расторопши жидкого" на базе Самарской фармацевтической фабрики.

Материалы диссертационных исследований были использованы при разработке проекта ВФС "Розавин - стандартный образец", ВФС 42-208892 "ГСО сириигин", ВФС 42-2106-92 "Кора сирени обыкновенной", ВФС 42-2090-92 "Экстракт элеутерококка сухой", ВФС 42-2085-92 "Таблетки сухого экстракта элеутерококка", Изменение №1, 24.02.92 к ФС 42-2725-90 "Корневище и корень элеутерококка колючего". Во всех упомянутых НТД на лекарственное сырье и препараты предложено использовать ГСО сириигин для качественных реакций и количественного определения.

Предложены следующие методики качественного и количественного анализа с применением ТСХ, ВЭЖХ и спеюрофотометрии:

- определение суммы флаволнгнанов в плодах расторопши пятнистой и лек-средстве "Экстра ст расторопши жидкий" с использованием ГСО силибина;

- определение суммы фенольных соединений в надземной части мелиссы лекарственной с использованием PCO розмариновой кислоты.

Положения, выдвигаемые на защиту:

- результаты химического изучения 6 видов лекарственных растений, содержащих фенольные и терпеноидные вещества:

- данные исследований физико-химических свойств стандартных веществ лнкураэида, розмариновой кислоты, розавина, сирингина;

- способ получения PCO розмариновой кислоты;

- технологические схемы получения новых гепатопрогекторных лекарственных средств "Экстракт расторопши жидкий" и "Силибохол";

- методики качественного и количественного анализа действующих веществ в сырье и препаратах расторопши пятнистой и мелиссы лекарственной.

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на П и III Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1996,1996), на I Международном симпозиуме "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования" (Пущино. 1995), на II международной научно-практической конференции "Экология и здоровье человека" (Самара,1995), на научной конференции "Биологическое разнообразие. Интродукция растений" (С-Пб.1995). на научно-практической конференции "Современное состояние и перспективы научных исследований в облает фармации", посвященном 25-легшо фармацевтического факультета СамГМУ (Самара. 1996), на 2-ом Международном симпозиуме по химии природных соединений (Турция. 1996).

Основное содержание диссертации опубликовано в 24 научных работах.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 160 страницах машинописного текста, содержит 12 таблиц, 23 рисунка, список литературы, включающий 226 ссылок. Диссертация состоит из введения, 6 глав и выводов. Первая глава посвящена литературному обзору современного состояния исследований в области изучения химического состава и стандартизации лекарственных растений, содержащих комплекс фенольных и терпеноидных соединений; в последующих пяти главах экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований по изучению химического состава JIPC и предложенные на этой основе методические подходы к стандартизации сырья и препаратов расторопши пятнистой и мелиссы лекарственной, а также результаты технологических исследований по получению веществ-стандартов и фитопрепаратов, в шестой главе дана характеристика объектов, методов исследования и приведены физико-химические константы выделенных соединений. В приложение вынесены материалы по разработке НТД и технологической документации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Изучение химического состава некоторых видов лекарственного растительного сырья, содержащего Фенольные и терпеноидные соединения При исследовании химического состава 6 лекарственных растений было выделено более 30 индивидуальных веществ различной природы, относящихся к простым фенольным соединениям, феннллропаноидам, флаво-ноидам, флаволигнанам, монотерпенам, тритерпенам, стеринам (табл. I).

Для установления их структуры использованы данные УФ-, 'Н-ЯМР- и масс- спектров, а также результаты химических превращений и непосредственное сравнение с достоверными образцами веществ.

Исследование термодинамических характеристик выделенных соединений (температуры дегидратации, плавления, возгонки, окисления, разложения и др.) проведено с использованием современных инструментальных методов анализа ДТА, ДСК, ДТГ. На основании изучения термолиза корневищ роднолы розовой предложены оптимальные условия сушки сырья: в интервале 70 - 80 °С.

Хроматографическое поведение веществ изучалось с использованием ТСХ-, КХ- и ВЭЖХ- анализа.

1.1. Ghcyrrhiza glabra L. В рамках изучения возможностей новой комплексной технологии переработки корней солодки, разрабатываемой в НПО "ВИЛАР", изучены целевые продукты технологического процесса -фенольная и терпеноидная субстанции сырья. Причем, акцент сделан на исследовании химического состава флавонондного комплекса.

Выделено и идентифицировано 7 доминирующих соединений: ликвири-тигенин, ликвиритин (флаваноны), изоликвиритигенин, изоликвиритин и ликуразид (халконы), ононин и формононетин (изофлавоны).

При изучении компонентного состава фенольной субстанции (пролик-внритон) методом ВЭЖХ были подобраны условия хроматсирафического разделения основных компонентов: Zorbax OD6 4.6 х 250 мм (хроматограф фирмы Du Pont), линейный градиент, подвижная фаза МеОН (А) - 1,5% СООСШ (В) в соотношении от 20% до 40% А в В при X = 282 им (рис. 1).

Таблица 1

Физико-химические константы некоторых выделенных фенольных и терпеноидных соединений

№ Название

Состав

М+

Т.пл., «С

1шм(ЕЮН),нм

Феиольиые соединения

1 тирозол С8 Н10О2 138 92-93

2 салидрозид С14Н20О7 161-162 220,275

3 галловая кислота с7н6о5 170 248-250 216,273

4 пеоновицианознд С18Н26012 166-168 232,288

5 родиолинозид С14Н1909 191-194 224 пл,285,327

6 розавин С20Н28О10 252 252

7 триандрин С15Н20О7 176-181 264

8 сирингин С17Н2409 191-192 221,266

9 кофейная кислота с9 Н8 04 180 218-222 235,242,326

10 розмариновая к-та СюНмО» 360 235,242,327

11 ликвиритигенин С15Н12О4 256 193-195 275,313

12 ликвиритин С21Н22О9 209-211 275,313

13 пиноцембрин С13Н1204 256 193-195 289,325 пл

14 тархунозид С21Н22О9 289,326 пл

15 изоликвиритигенин С15Н1204 256 170-172 255,370

16 изоликвиритин С21Н2209 185-186 260,360

17 нарингенин С15Н1205 272 248-251 291,332 пл

18 ликуразид С23Н30О13 150-151 245,305,370

19 лютеолин СиНюОв 286 326-331 256,273,352

20 эстрагонозид С22Н21О11 192-195 258,348

21 формононетин С16Н12О4 268 257-265 260

22 ононин С22Н22О9 210-214 260

23 силибин С23Н22О10 482 162-164 289

24 родиолин С23Н20О10 480 232-235 230,260,281,382

Терпевоиды

25 розиридин С16Н28О7

26 розиридол С10Н18О2 170

27 пеонифлорин С16Н28О11 230,275

28 глицирризиновая к-та СмШвОз 249

29 р - ситостерин С29Н50О 414 133-135

30 даукостерин СззНбоОб 316-318

ВЭЖХ-анализ фенольной субстанции корней солодки

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 60 65 70 75

рис.1 X, мин

Установлено, что время удерживания соединений 12, Д, 18, 15 в указанных условиях составляет около 22, 38, 53 и 76 мин соответственно.

Однако оценку подлинности и качества сырья (по содержанию феноль-ных веществ) и флавоноидных препаратов солодки можно проводить также с использованием ТСХ-анализа (рис.2) и спектрофотометрии (рис.3).

ТСХ- анализ фенольной субстанции корней солодки

ХЛФ-МеОН-ШО УФ 254,366 нм 26:14:3_ДСК

° о 0

В О 0 8° б

? 3 3 ? § 8 9

1 -прсшиквиритон

2 -ликуразид

3 - ликвиритин

4 - изолихвиритин

5 - ононин

6 - изоликвиритигенин

7 - ликвиритигенин

8 - формононетин

рис. 2

УФ-спектры фенольной субстанции и некоторых флавонондов корней солодки

-- фенольная субстанция ("проликвиритон"),

.........- раствор ГСО ликуразида,

—........раствор ликвиритигенина,

------ раствор иэоликвнритигенина. рис. 3

1.2. Paeonia anómala L. В результате изучения компонентного состава корней пиона уклоняющегося были выделены и идентифицированы производные галловой и салициловой кислот, пеоновицианозид, относящиеся к фенольным соединениям, и пеонифлорин, имеющий терпеноидную природу.

Примером проведенного структурного анализа может служить установление строения нового природного соединения пеоновицианозида (рис. 4). Строение биозы в его молекуле было установлено путем сопоставления ПМР-спектров исходного гликозида и его гексаацетата со спектрами ви-цианозида коричного спирта (6), его гексаацетата и ацетатов других араби-нозидов (Запесочная, 1984), а также подтверждено данными масс-спектра.

Для соединений 4 и 27, представляющих наибольший интерес в плане стандартизации сырья и препаратов пиона уклоняющегося, разработаны оптимальные условия хроматографического обнаружения и идентификации.

ПМР-спектр пеоновицианозида

Н-3,4,5,6

р-Н-1'

JU

Н-ГН-6-

UuU

но

он

-ОСНз

Ьосн,

он

SoViiiQ; tt>

UONfc..

8

7

6

4

3

2

1 5, мл.

5

рис. 4

Это позволило нам предложить методику установления подлинности корневищ и корней растения с использованием ТСХ - анализа (рис.5). В указанных условиях на "Силуфоле-254" при просмотре в УФ-свете обнаруживается доминирующее пятно со светло-фиолетовой флуоресценцией (нсонифлорин), окрашивающееся при проявлении в розовый цвет.

ХЛФ-МеОН-ШО 26:14:3 УФ 254 им HSQ разв.

о

О &

1 2

1 - спиртовое извлечение из сырья

(80% ЕЮН) 2-пеоннфлорин

рис. 5

1.3. Melissa officinalis L. При изучении химического состава фенольного комплекса травы растения показана целесообразность определения подлинности и качества сырья и препаратов мелиссы лекарственной не только по эфирному маслу (в соответствии с требованиями DAB 7) или экстрактивным веществам (ВФС 42-2578-95), но и по содержанию фенилпропаноидов.

Бьли выделены и идентифицированы фенилпропаноиды: розмариновая кислота и ее этиловый эфир, а также кофейная кислота, флавоноиды -космосиин, цинарозид и лютеолин, стерины - даукостерин.

Полученные результаты нашли применение при разработке методов стандартизации JIPC. Разработана методика количественного определения суммы фенилпропаноидов в надземной части мелиссы лекарственной в пересчете на розмариновую кислоту (раздел 2.1.).

1.4. Rhodioía lineari folia Borisr.. Rh. iremelica Boriss.

С целью поиска новых сырьевых источников для получения лексредств тонизирующего и адагттогенного действия (аналогичных препаратам ро-диолы розовой) и расширения сырьевой базы растений рода Rhodioía L проведено сравнительное исследование химического состава корневищ р. линейнолистной, интродуцированной в Санкт-Петербург, и р. иремсдьской, интродуцированной в Башкирии, и дикорастущих экземпляров. 11ри этом изучение компонентного состава подземной части культивируемой Rh. iremelica проведено впервые.

Из корневищ родиолы иремельской вь¡делено 16 индивидуальных соединений, относящихся к простым фенолам [тирозол (I), салидрозид (2), галловая (3) и n-пщроксибензойная кислоты], фенилпропанондам [кофейная кислота (9), коричный спирт и его гликозиды: розавин (6), розарии и розин], флавоноидам [родиолин (24), родионин, кемпферол], монотерпенам (25,26), стеринам (29,30).

Отмечено, что корневища интродуцированной р. иремельской характеризуются высоким содержанием флавоноидов, в т.ч. флаволигнана родио-лина. В следовых количествах в них обнаружены циннамилглнкознды, которые отсутствуют в дикорастущем растении.

Из корневищ родиолы линейнолистной выделено 9 индивидуальных соединений, относящихся к простым фенолам (1, 2, 3, родиолинозид (5) и его агликон), монотерпенам (25, 26), стеринам (29,30).

Роднолинозид является новым природным соединением, ему предложена формула: 4-0-Р-1>гтокопиранозида 2,4-дигидрокси-6-метоксиацето-фенона.

'Н-ЯМР-спектр родиолинозида

рис. 6 мд.

Родиолинозид расщепляется под воздействием р-глкжозидазы на глюкозу и агликон, строение которого следует из данных ЯМР-спектра глико-зида: синглетный сигнал 2-ОН-группы при 13.83 мд., 2-х протонный уширенный синглетный сигнал ароматических протонов Н-3 и Н-5 (6 6.22 мд.) и два трехпротонных синглетных сигнала, принадлежащих ОСНз- и СНзСО- группе при 3.90 и 2.57 мд. соответственно (рис.6).

В пользу данной структуры свидетельствуют и данные масс-спектра гликозида: обнаруживаются пик молекулярного нона агликона с т/г 182 и базовый пик иона с т/г 167 (М-СНз).

Вывод о гликозилировании 4-ОН-группы (а не 2-ОН), сделан исходя из наличия в ЯМР-спектре соединения 5 синтлетного сигнала 2-ОН-группы (13.83 мд.), который в противном случае (отсутствие водородной связи с карбонилом в пери-положении) не был бы обнаружен. Наличие Р-1> глюкопиранозильного остатка в молекуле 5 подтверждается данными ферментативного гидролиза и 'Н-ЯМР-спектра (дублетный сигнал аномерного протона глюкозы с КССВ 7 Гц) (рис. 6).

Вывод о наличии одной свободной ароматической гидроксигруппы и присутствии 4-х алифатических ОН-групп (углеводный фрагмент) подтверждается данными ЯМР-спектра пентаацетата родиолинозида.

Химический состав корневищ интродуцнрованной р. линейнолистнон отличается от состава дикорастущих растений наличием родиолинозида, его агликона и галловой кислоты, а также более низким содержанием монотерпенов.

1.5. Artemisia dracuncuíusL. В результате проведенных исследований нами впервые выделены из полыни эстрагон (тархун), выращенной в условиях Среднего Поволжья (сорт "Грибовскнн"), основные компоненты пиноцем-брин (J3) и новый флавоноидный гликозид - эстрагонозид (20), для которого предложено строение 8-0-а-Ь-рамнопиранозида 5,6,7,8,4 -пентагидроксн-3 -метокенфлавона (рис. 7).

9 8 7 6 5 4 3 2 I Я. мл.

рис. 7

В минорных количествах выделен также новый флаваноновый гликозид - тархунозид (14). имеющий строение 7-0-Р-0-глюкопиранозида 5,7-дигидроксифлаванона.

На наш взгляд, эстрагонозид и пиноцембрин, обладающий антимикробной активностью, могут оказаться перспективными в плане диагностики ЛРС и оценки показателей качества сырья и препаратов тархуна.

2. Стандартизация лекарственного растительного сырья и препаратов, содержащих фенольные и терпеноидные соединення

2.1. Melissa o fficinalis L В результате проведенных исследований обоснована целесообразность проведения стандартизации сырья мелиссы лекарственной не только по содержанию эфирного масла, как это предусмотрено в немецкой фармакопее (DAB 7), но и по такой группе БАВ, как фенилпро-паноиды, среди которых доминирует розмариновая кислота.

С учетом перспективы создания отечественных галеновых и других препаратов на основе травы мелиссы лекарственной данные подходы имеют принципиальное значение, т.к. контроль качества фитопрепаратов по содержанию эфирного масла довольно проблематичен.

Качественный анализ. Для определения подлинности сырья предложен ТСХ-анализ спиртового извлечения на пластинках "Силуфол УФ 254" в системе хлороформ-метанол-вода (26:14:3). При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны 366 нм четко выделяется пятно с голубой флуоресценцией (Rf 0.6), соответствующее розмариновой кислоте (10).

Кроме этого, для идентификации JIPC и спиртовых экстрактов мелиссы предложено использовать УФ-спектр (рис. 8), имеющий два характерных максимума: при 270 нм (флавоны) и 326 нм (фенилпропаноиды).

Количественное определение. Разработана методика прямого спектро-фотометрического определения при длине волны 326 нм фенилпропаноидов в сырье мелиссы лекарственной в пересчете на розмариновую или кофейную кислоту (Е! сы= 700).

УФ-спектр экстракта травы мелиссы лекарственной

рис. 8

Оптимальными условиями проведения анализа являются экстракция 70% ЕЮНв соотношении сырье - экстрагент 1:40 при кипении в течение 60 мин.

Таблица 2

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенилпропаноидов в траве мелиссы лекарственной

£ X Р, % 1(Р,0 ДХ Е, %

10 3,46 0,08223 95 2,23 10,18338 ±4,09

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет 4,09%; ошибка анализа находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки разработанной методики (опыты с добавками).

2.2.5ИуЬит тапапит (Ь.) ОаеПп.

Качественный аналнз. Определение подлинности ЛРС и принадлежности анализируемых образцов к хеморасс (силибиновая, силидианиноная) предложено проводить методом ТСХ на пластинках "Силуфол УФ 254" н системе циклогексан-ацетонитрил 6:4 (рис. 9).

ТСХ плодов и экстракта

расторопши

В этих условиях достигается четкое

разделение трех основных флаволнг- О О

нанов енлибина, енлндианина, енни- О О

кристина, которые при облучении о о

УФ-светом (254 нм) обнаруживают-

ся в виде фиолетовых пятен с Не 0,8:

0,7; 0,6 соответственно. При обрабо- .....о--- -----О.......О......а.........

тке хроматограммы диазореакгивом Ехг 5Ь Ба 8к

флаволигнаны проявляются в виде

пятен желто-оранжевого цвета. Рис. 9

Количественное определение. С целью совершенствования имеющихся

подходов к анализу плодов расторопши пятнистой (ТУ 64-4-97-93), нами предложены методики количественного определения сидибнна и суммы

флаволигнанов в сырье и разрабатываемом лексредстве "Экстракт расто-ропши жидкий" с использованием прямой спектрофотометрин (аналитическая длина волны 289 нм) и высокоэффективной жидкостной хроматографии, причем в обоих случаях предусмотрено применение ГСО силибина.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что данные, полученные на основе разработанных методик, коррелируют как по содержанию суммы флаволигнанов, так и по содержанию отдельных компонентов (таб.3).

Таблица 3

Результаты анализа плодов расторопши пятнистой на содержание флаволигнанов

Экстрагент Содержание суммы флаволигнанов (спектрофотометрия), % Содержание флаволигнанов (ВЭЖХ), %

методика ТУ прямой метод силибин силидианин силикристин

96% этиловый спирт 1,71 2,73 0,49 0,28 1,14

2=1,81

80% этиловый спирт 1,66 2,62 0,64 0,38 1,24

71=2,26

Таким образом, разработанные методики создают методологическую основу для более объективного контроля качества сырья и препаратов расторопши пятнистой.

3. Разработка технологических способов получения

стандартных веществ На основе изучения физико-химических свойств и хроматографическо-го поведения предложена технологическая схема выделения ликуразида и ликвиритигенина, использующихся в стандартизации сырья и препаратов солодки, и разработан технологический способ получения PCO розмариновой кислоты из травы мелиссы лекарственной.

Ключевым вопросом при проведении комплекса технологических исследований явился подбор оптимальных условий первичного препаративного разделения спиртовых извлечений из JIPC. С этой целью нами использовались колоночная хроматография в невысоких слоях сорбента (силикагель L 40/100, полиамид, сефадекс LH-2Q) и фильтрация через полиамид и оксид алюминия. В качестве атоентов использовались водно-

спиртовые и хлороформно-спиртовые смеси. Тонкое разделение и очистка технических образцов стандартных веществ достигалось путем последовательного рехроматографирования фракций, обогащенных целевыми продуктами (схема I).

Измельченная трава мелиссы

Экстракция

водный спирт

Извлечение, содержащее розмариновую кислоту

Упарииянне J

Колонка № 1 (П/А, Н20 : ЕЮН)

Элюнрование

Фракции, содержащие розмариновую кислоту (НгО: ЕЮН95:5)

Упаривание „

Колон Ь№2

(силикагель, хлф:ПЮН)

Элюирование , < хлф:ЕЮН

95:5, 90:10.85:15 Фракции, обогащенные розмариновой кислотой (хлф:ЕЮН85:15) i

Фильтрация через П/А

Упаривание

Колонка № 3 _ (силикагель. хлф:ЕЮН)

Элюнрование

хлф-МеОН

95:5,90:10,88:12,85:15

Фракции, содержащие розмарн-новую кислоту (хлф-МеОН88:12)

Упаривание|

PCO /розмариновая\

кислота .выход: 0,5 %i

Схема 1. Технологическая схема получения PCO розмариновой кислоты

ВЫВОДЫ

1. В результате изучения химического состава JIPC солодки голой, пиона уклоняющегося, родиолы линейнолистной и р. иремельской, мелиссы лекарственной, полыни эстрагон выделено более 36 индивидуальных веществ, относящихся к простым фенолам, феннлпропаноидам, флавоноидам, флаво-лигнанам, монотерпенам, тритерпенам, стерннам.

2. Четыре вещества оказались новыми природными соединениями, для которых на основании данных УФ-, ЯМР-, масс-спектров и результатов химических превращений установлены следующие структуры: 8-O-a-L-рамнопиранозид 5,6,7,8,4'-пентагидрокси-3-метоксифлавона (эстраго-нозид); б-а-Ь-арабинопиранозил-Р-О-глюкопиранозид метилсалицилата (пеоновицианозид); 4-0-р-Е)-П1юкопиранозид 2,4-дигидрокси-6-метокси-ацетофенона (родиолинозид), 7-0-Р-1>глюкопиранозид 5,7-дигидрокси-флаванона (тархунозид).

3. По результатам изучения спектральных, химических, хроматографи-ческнх и термических свойств фенольных соединений разработаны показатели качества ГСО снрннпша, розавина, триандрина, сшшбина, ликурази-да, PCO розмариновой кислоты.

4. Обоснована целесообразность определения подлинности и показателей качества сырья и препаратов солодки голой, пиона уклоняющегося, полыни эстрагон, мелиссы лекарственной не только по веществам терпеноид-ной природы (тритерпеновыс сапонины, монотерпены, эфирное масло), но и по содержанию фенольных соединений (флавоноиды, фенилпропаноиды).

5. Разработаны методики качественного и количественного анализа с использованием ТСХ, ВЭЖХ и спектрофотометрии по определению в ЛРС и фнтопродукции расторопши пятнистой флаволигнанов (ГСО силибин), мелиссы лекарственной - фенилпропаноидов (PCO розмариновая кислота).

6. Разработан технологический способ получения PCO розмариновой кислоты.

7. Разработаны технологические схемы получения новых гепатопротек-торных лексредств "Экстракт расторопши жидкий" и "Силибохол".

8. Данные, полученные при изучении показателей качества стандартных веществ, были использованы при разработке ВФС 42-2088-92 на ГСО сирингин, проектов ВФС на ГСО трнандрин, розавпн, снлибин, а также ВФС 42-2106-92 "Кора сирени обыкновенной", ВФС 42-2090-92 "Экстракт элеутерококка сухой", ВФС 42-2085-92 "Таблетки сухого экстракта элеутерококка", Изменение №1, 24.02.92 к ФС 42-2725-90 "Корневище и корень элеутерококка колючего".

9. Разработан проект ВФС на "Экстракт расторопши жидким", предложенный в качестве гепатопротекторного средства, в том числе для лечения вирусных гепатитов.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1. Авдеева Е.В. и Др. Калибровка установки ДСК, оценка точности и воспроизводимости получаемых результатов по теплотам фазовых переходов / Е.В.Авдесва, С.В.Бобровская, ПА.Кадышева, А.Э.Рожанская '■' Актуальные проблемы современной химии: Тезисы докладов областной студенческой научной конференции. - Куйбышев. 1988. - С. 91-92.

2. Авдеева Е.В. и др. Выделение из растительного сырья биологически активных фенольных соединений и их термический анализ ' Г:.В.Льдссиа. С.В.Бобровская, Е.В. Баранова, П.А.Кадышсва, П.Б. Никитина. Е.А.Чекмарева // Актуальные проблемы современной химии: Тезисы докладов областной сгуденческой научной конференции. - Куйбышев. 1989. -С. 98-99.

3. Авдеева Е.В. и др. Изучение термодинамических свойств биологически активных веществ, выделенных из лекарственного растшс.тыюго сырья ' Е.В.Лвдеева, Г.Е.Штер, А.С.Космынин, В.А.Куркпн / Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики: Тезисы докладов научно-практической конференции, посвященном 25-летию фармац. фак-; лыега Курского государственного медицинского институт. - Курск, 1991. - Ч. -1.-С. 177-178.

4. Куркии В.А. и др. Термический анализ корневищ родиолы розовой ' В.А.Куркин, Г.Е.Штер, А.С.Космынин, Н.В.Авдееиа //Фармация. - 1992. -Т. 41, № I,-С. 67-69.

5. Запесочная Г.Г. и др. Химическое изучение корней (Ъеоша апоппЬ [,./ 1 .1 . Запссочная, ВА.Куркин, Е.В.Авдсева, Д.М.Попов, М.В.Колпакова " Химия природ, соедип. - 1992. - № 1. - С. 55-59.

6. Авдеева Е.В. и др. Фитохимическос изучение флавопондного сое гака солодки голой / Е.В.Авдеева, Н.А.Белокурова, О.А.Фатнна, В.А.Куркин // Региональные экологические проблемы п возможные пути их решения:

Тезисы докладов межвузовской научно-практической конференции студентов и молодых специалистов. - Самара, 1994. - С. 24.

7. Куркин В А. и др. Фитохимическое исследование лекарственных растений родов родиола, тополь, ива, расторопша, одуванчик, содержащих флаво-ноиды / В-А.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.ВАвдеева, В.Б.Браславский, М.Ф.Сенцов, И.Б. Смольякова // Современные аспекты изучения лекарственных растений: Научные труды, Т. XXXIV НИИФ. - Москва, 1995. -С.151-157.

8. Куркин ВА. и др. Перспективы использования растительного сырья, содержащего флавоноиды, в качестве антимикробных и противовоспалительных лекарственных средств / ВА.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.ВАвдеева, М.Ф.Сенцов, В.Б.Браславский, И.Б.Смольякова // II Российский национальный конгресс "Человек и лекарство": Тезисы докладов. -Москва, 1995.-С. 238.

9. Запесочная Г.Г. и др. Флавоноиды - целевой продукт технологии комплексной переработки сырья солодки / Г.Г.Запесочная, ВА.Куркин, Е.ВАвдеева, Н.С.Цыбулько // I Международный симпозиум "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования": Тезисы докладов. - Пущино, 1995. - С. 764.

Ю.Сацыперова И.Ф. и др. Химический состав корневищ Rhodiola linearifolia Boriss., интродуцированной в Санкт-Петербурге / И.Ф.Сацыперова, ВА.Куркин. Г.Г.Запесочная, ИА.Паутова, Е.ВАвдеева // Растит, ресурсы.. 1995.-Т. 31, вып. 2,-С. 27-31.

I I Авдеева Е.В. и др. 11овая концепция создания лекарственных препаратов на основе солодки / Е.ВАвдеева, ВА.Куркин, Г.Г.Запесочная, Н.С.Цыбулько // Экология и здоровье человека: Тезисы 2-ой международной научно-практической конференции. - Самара, 1995. - С. 8.

12.Куркин В.А и др. Проблемы создания лекарственных препаратов на основе плодов расторопши пятнистой / ВА.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.ВАвдеева. М.Ф.Сенцов, В.Б.Браславский, А.В.Смирнова, Е.К.Соловьева //Там же. - Самара, 1995. - С. 55.

1 З.Авдеева Е.В. и др. Исследование химического состава надземной части Artemisia dracunculus L., выращенной на Средней Волге / Е.ВАвдеева, ВА. Куркин, Г.Г.Запесочная, А.В.Мыцык, А.В. Куркнна, К.С.Пименов, М.С.Марьина // Биологическое разнообразие. Интродукция растений: Материалы научной конференции. - С-Пб., 1995. - С. 94-95.

14.Куркин В.А. и др. Химическое исследование травы Mdissa officinalis. / ВА.Куркин, Т.В.Куркина, Г.Г.Запесочная, Е.ВАвдеева, Ж.В.Боголюбова, В.В.Вандышев, И.ЮЛикина // Химия природ, соедин. - 1995. - № 2. -С. 318-320.

15.Сацыперова И.Ф. и др. Химический состав корневищ Rhodiola iremdica Вэпзз., интроцуцнрованной в Башкирии / И.Ф.Сацыперова, М.М.Иш-

Муратова, Е.ВАвдеева, ВА.Куркин, Г.Г.Запесочная // Там же. - С-Пб., 1995.-С. 166-167.

16.Куркин В А. и др. Проблемы создания лекарственных средств на основе плодов расторопшн пятнистой / ВА.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.ВАвдеева, М.Ф.Сенцов, В.Б.Браславский, С.В.Первушкии, И.Б.Смольякова, АА.Сохина //III Российский национальный конгресс "Человек и лекарство": Тезисы докладов. - М.: РЦ "Фармединфо", 1996. - С. 312.

17.Быков В А. и др. Новая концепция создания лекарственных препаратов на основе корней солодки / ВА.Бмков, Г.Г.Запесочная, ВА.Куркин. Е.ВАвдеева, Н.С.Цыбулько //Там же. - М.:РЦ"Фармедимфо",1996.- С. 12.

!8.Куркин ВА. и др. Методика количественного определения сплнбина п суммы флаволигнанов в плодах расторопшн пятнистой / ВА.Куркин, М.Ф.Сенцов, Е.ВАвдеева, С.В.Первушкии //Самарский медицинский архив. - 1996.-Mb I.-С. 71-76.

19.Куркнн ВА. и др. Проблемы стандартизации сырья некоторых видов лекарственных растений, содержащих флавоноиды / ВА.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.ВАвдеева, М.Ф.Сенцов, В.Б.Браславский, И.Б. Смоль-якова, Н.С. Цыбулысо //Актуальные проблемы фармацевтической химии: Научные труды, Т. XXXV НИИФ. - Москва, 1996.-С. 164-174.

20.Куркнн В.А. и др. Проблемы стандартизации сырья и препаратов расторопшн пятнистой / ВА.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.В.Андеева, М.Ф.Сенцов, А.И.Мнсетов, А.М.Коробов, В.Б.Браслапскнн // Современное состояние и перспективы научных исследований в области фармации: Тезисы докладов научно-практической конференции, посвященной 25-летию фарм. факультета Самарского государственного медицинского университета. - Самара, 1996. - С. 138-141.

21.Мизина П.Г. и др. Пути совершенствования пролонгированных лекарственных форм / П.Г.Мнзина, Е.ВАвдеева, А.И.Мнсетов. А.М.Коробов, ВА.Куркин //Там же. - Самара, 1996. - С.54-55.

22.Куркин В.А и др. Количественное определение силибинл и суммы флаволигнанов в плодах Silybum marianum (L) Gmain. / ВА.Куркин, Г.Г.Запесочная, Е.ВАвдеева, М.Ф.Сенцов, И.Б.Смольякова. В.Б.Браславский, С.В.Первушкии, Н.С. Цыбулько // Растительные ресурсы . - 1996. - Т. 32, вып. 3. - С. 80-87.

23.Kutkin V.A, Zapcsochnaya G.G., Avdeeva E.V. Plienjlpropanoids of some medicinal plants // Second International symposium on the chcmistry of natural oom-paund : Abstracts of SCNC. - Turkey, 1996. - P. 319.

24.Куркин ВА., Запесочная Г.Г., Авдеева E.B. Строение и свойства эараго-нозида - нового флавононда надземной части Artemisia dracunculus // Химия природ. соедин.- 1997.-№ 1.-С.61-66. '