Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Стандартизация хвойного хлорофиллина натрия, разработка состава, технологии лечебных и лечебно-профилактических средств на его основе

На правах рукописи

3 од

'( Ш 1393

БЛИНОВА ОЛЬГА АЛЕКСЕЕВНА

СТАНДАРТИЗАЦИЯ ХВОЙНОГО ХЛОРОФИЛЛИНА НАТРИЯ, РАЗРАБОТКА СОСТАВА, ТЕХНОЛОГИИ ЛЕЧЕБНЫХ И ЛЕЧЕБНО- ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ НА ЕГО ОСНОВЕ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия 15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЕРМЬ - 1998

Работа выполнена в Пермской государственной фармацевтической академии

Научный руководитель - кандидат химических наук, доцент Олешко Л.Н.

Научный консультант - доктор фармацевтических наук, профессор Хомов Ю.А.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор Валевко С.А. кандидат фармацевтических наук, доцент Решетникова М.Д.

Ведущая организация - Санкт-Петербургская химико-фармацевтическая академия

Защита состоится 16 декабря 1998 г в час на заседании диссертационного с Д 084.70.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адрс 614000, г. Пермь, ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии.

Автореферат разослан 16 ноября 1998 года

Ученый секретарь диссертационного совета

Метелсв

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Расширение исследований по изысканию новых источников для получения эффективных лекарственных препаратов растительного происхождения является приоритетным направлением научно-практической фармации.

Одним из малоиспользуемых видов природного сырья имеющих специфический биологически активный состав и значительные возможности применения является древесная зелень сосны и ели, экологически доступные ресурсы которой, в России практически неисчерпаемы. Особый интерес представляет содержащийся в ней зеленый пигмент хлорофилл, выполняющий важную физиологическую роль, как в жизнедеятельности растений, так и в человеческом организме.

Перспективным направлением использования древесной зелени является их комплексная переработка, разработанная в 40 - 50 -е годы сотрудниками С,- Петербургской лесотехнической академии им. С.М. Кирова, позволяющая в одном технологическом процессе получить ценные биологически активные продукты, в том числе, хвойный хлорофиллин натрия. Качество хлорофиллина натрия регламентируется ОСТ 56-33-85 и область его применения ограничена использованием в парфюмерно-косметической промышленности для введения в зубные пасты, лосьоны, крема.

В то же время, по данным отечественных и зарубежных исследователей хлорофиллин натрия обладает широким спектром фармакологического действия: антибактериальным, противовирусным, противогрибковым, гемопоэтическим, тонизирующим, рано - и язвозаживляющим, дезодорирующим, противовоспалительным, радиопротекторным.

В связи с этим актуальным является исследование хлорофиллина натрия в качестве потенциальной субстанции для лечебных и лечебно - профилактических средств, их создание и внедрение в медицинскую практику, что позволит расширить ассортимент хлорофиллосодержащих лекарственных препаратов, ограниченный наличием лишь масляного испртового растворов хлорофиллипта.

В последние годы принципиально новым методологическим подходом к фармакотерапии иифекционно-воспалительных пораже!ШЙ кожи и слизистых является использование транедермальных систем пролонгированного действия на основе полимеров медицинского назначения (пластырей, пленочных покрытий), обладающих

значительными преимуществами в сравнении с традиционными средствами аппликационной терапии (растворы, гели, мази), что обосновывает целесообразность проведения исследований по созданию новой лекарственной формы - биорастворнмых лекарственных пленок на основе исследуемой субстанции хвойного хлорофиллина натрия.

Актуальность современной проблемы биокоррекции, направленной на повышение эффективности лечения различных заболеваний, а также резистентности организма к воздействию негативных экологических факторов, посредством парафарма-цевтических препаратов, а также присущая хлорофиллину натрия разнообразная биологическая активность, в сочетании с безопасностью применения, служит веским аргументом для разработки на его основе лечебно-профилактических средств в виде рациональных пищевых композиций: сиропа, меда и гранулированного напитка.

Цель и задачи исследования. Целью датой работы явилась стандартизация субстанции хвойного хлорофиллина натрия (ХН), разработка биорастворимых лекарственных пленок «Крона» и лечебно - профилактических средств (ЛПС): гранулированного сухого напитка, меда и сиропа «Крона» на его основе.

Для достижения поставленной цели необходимо решил, следующие задачи:

□ провести идентификацию и исследовать физико-химические свойства субстанции;

□ предложить методики количественного анализа действующих веществ хвойного хлорофиллина натрия с использованием современных физико-химических методов;

а осуществить стандартизацию субстанции ХН по основным показателям качества и установить срок годности;

□ разработать состав и технологию пленочной матрицы-носителя;

□ разработать оптимальный состав и технологию биорастворимых лекарственных пленок на основе хвойного хлорофиллина натрия;

□ установить параметры процесса всасывания БЛП в условиях моделирования желудочно-кишечного тракта;

□ предложить методики анализа качества пленок, провести их стандартизацию и установить экспериментально обоснованные сроки годности;

□ исследовать антибактериальную активность субстанции ХН и пленок;

□ изучить биологическую безвредность пленок и провести лабораторно-клинические исследования та фармакологической активности;

□ разработать состав и технологию лечебно-профилактических средств на основе хвойного хлорофнллина натрия;

□ осуществить стандартизацию ЛПС и изучить их стабильность;

□ разработать проекты временных фармакопейных статей (ВФС) на субстанцию хлорофнллина натрия, пленки лекарственные и технические условия (ТУ) на ЛПС.

Научная новизна. На основании комплекса проведенных экспериментально-теоретических исследований, впервые изучена и предложена новая растительная субстанция - хвойный хлорофиллин натрия - в качестве биологически активного ком-

I

понента для получения лечебных и лечебно - профилактических средств.

Впервые проведена стандартизация субстанции хвойного хлорофнллина натрия с учетом требований НД к медицинским препаратам, изучена ее стабильность. Впервые предложены методики качественного определения суммы хлорофиллов методом ТСХ и их количественного определения спектрофотометрическим методом. Разработан единый методический подход к стандартизации субстанции, НЛП и ЛПС на основе хлорофнллина натрия путем сквозного использования методов качественного и количественного анализа (тонкослойной хроматографии, фотоэлектроколориметрии и спектрофотометрии), учитывающий специфичность анализа исследуемых объектов.

Предложена методология создания новой лекарствешюй формы в виде БЛП «Крона», содержащих хвойный хлорофиллин натрия, включающая выбор оптимальной матрицы - носителя, модельное изучение процесса абсорбции, поиск терапевтической концентрации биологически активного вещества на основании изучения специфической активности субстанции, исследование технологических, микробиологических, фармакологических показателей, безвредности и стабильности нового фитопрепарата.

На основании биофармацевтических исследований впервые разработан состав пленочной матрицы для пленок транедермального и траисмукоидного назначения.

Проведено изучение кинетики и механизма высвобождения хвойного хлорофнллина натрия из БЛП с помощью впервые предложенного для этих целей метода кондуктометрии.

Впервые экспериментально доказана специфическая антибактериальная и противовоспалительная активность и отсутствие аллергенности субстанции ХН и КПП «Крона». Для пленок установлено ранозаживляющее действие и отсутствие токсичности.

Впервые осуществлены клинико-экспериментальные исследования активности БЛП «Крона» в хирургии и стоматологии. Доказана эффективность их действия при лечении длительно незаживающих трофических язв голени, а также поверхностных и глубоких ран СОПР, герпетического и афтозного стоматитов.

Впервые разработаны новые парафармацевтические препараты на основе ХН (гранулированный сухой напиток, мед и сироп «Крона»). Проведена их стандартизация, установлены обоснованные сроки годности.

Практическая ценность. Для введения в лечебные и лечебно-профилактические средства предложена оригинальная растительная субстанция хвойного хлорофшишна натрия, практическая значимость которой обусловлена наличием широкого спектра биологической активности, а также доступностью, дешевизной исходного сырья - древесной зелени сосны и ели, безотходностью производства, позволяющего выделить максимальное количество хлорофилла и его технологичный продукт - водорастворимое производное.

Создан новый эффективный препарат - БЛП «Крона» - антибактериального, противовоспалительного, ранозаживляющего действия, обеспечивающий повышение эффективности аппликационной терапии стоматологических и хирургических заболеваний данного патогенеза. Получены заключения Детской стоматполиклиники № 5 г. Перми об эффективности БЛП «Крона» при лечении стоматитов различной этиологии, ГКБ № 4 и МСЧ № 3 г. Перми при лечении трофических язв голени.

С целью оптимизации проведения биофармацевтических исследований in vitro предложен менее трудоемкий и более информативный, в сравнении с диализным, метод кондуктометрнческого анализа, позволяющий исследовать относительную биологическую доступность из пленочных систем не только для хлорофиллина натрия, но и для других лекарственных веществ ионного типа, а также изучать механизм процесса их релиза.

В качестве биологически активных добавок к пище предложены оригинальные лечебно-профилактические средства (сироп, мед, гранулированный напиток «Крона»)

на основе хвойного хлорофиллина натрия, позволяющие осуществить биокоррекцию организма при лечении и профилактике различных заболеваний и повышение резистентности организма в состоянии экологического и социального неблагополучия.

Разработана система стандартизации субстанции ХН и новой лекарственной формы - БЛП «Крона» и ЛПС «Крона» с использованием современных методов анализа. Предложенные методики характеризующиеся достаточной точностью, воспроизводимостью, простотой выполнения, приемлемы для серийных анализов в производственных условиях. На основе изученных показателей стандартности разработаны проекты временных фармакопейных статей «Хвойный хлорофшипш натрия» и «Пленки лекарственные», а также ТУ на все предложенные ЛПС, которые утверждены и зарегистрированы в ОЦГСЭН г. Перми, получены соответствующие Гигиенические Сертификаты, позволяющие производить и реализовывать ЛПС на территории РФ. Налажен выпуск ЛПС « Крона» в условиях аптеки и распространение продукции через аптечную сеть. Исследования по разработке ЛПС «Крона» включены в федеральную целевую программу «Экологическая безопасность Урала» и программу «Развитие производства лечебно-профилактических средств и улучшения обеспечения населения Пермской области и Уральского региона» на 1999 - 2005 гг.

Результаты проведенной работы внедрены в учебный процесс Пермской государственной фармацевтической академии при изучении теоретического и практического материала на 4 курсе очного факультета по теме «Состояние и перспективы развития технологии лекарственных форм. Новые лекарственные формы с регулируемым высвобождением и направленной доставкой», на факультете усовершенствования провизоров и в интернатуре по темам «Пролонгированные лекарственные формы», «Биологически активные добавки к иище (БАД). Нормативная документация, регламентирующая состав, производство, качество, использование БАД», «Биофармация. Основы фармако кинетики. Влияние фармацевтических факторов на биодоступность».

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научно - практических конференциях в ПГФА 1997 и 1998 гг.; II Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 1995 г); V Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва 1998 г); Научно- практической конференции, посвященной 25-ти летгао фармфакультета Самарского ГМУ (Самара,

1996); Всероссийской научной конференции "Актуальные проблемы создания новых лекарственных средств" (С.- Петербург, 1996); Научно - практической конференции, посвященной 75-ти летаю Украинской фармакадемии (Харьков, 1996); Юбилейной межвузовской научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава, посвященной 275-летию г. Перми и 80-летию фармобразования на Урале (Пермь, 1998); Конференции Курского государственного медицинского университета «Актуальные проблемы медицины и фармации» (Курск, 1998).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ. Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертация выполнялась в соответствии с планом научно - исследовательской работы Пермской фармацевтической академии по проблеме «Фармацевтическая технология и биофармация» (Мз государственной регистрации 01.9.10018873). Положения, выдвигаемые на защиту.

□ Стандартизация субстанции хвойного хлорофиллина натрия. Качественный и количественный анализ содержания производных хлорофилла, определяемого методами ТСХ, фотоэлектроколориметрическим, спектрофотометрическим.

а Разработка пленочной матрицы-носителя транедермального, тарнсмукоидного назначения.

□ Разработка состава и технологии БЛП «Крона», исследование механизма высвобождения хвойного хлорофиллина натрия из пленок.

□ Стандартизация БЛП «Крона» по технологическим и микробиологическим параметрам, изучение стабильности.

□ Оценка антибактериальной, противовоспалительной, ранозаживляющей активности и биологической безвредности субстанции и БЛП.

о Клинико-экспериментальные исследования БЛП Крона».

□ Разработка состава, технологии, изучение показателей качества и стабильности сиропа, меда и гранулировашюго напитка «Крона».

Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (одна глава), экспериментальной части (шесть глав), обсуждения результатов, общих выводов, списка литературы, приложений (сброшюрованы отдельно); включает таблицы, рисунков, библиографических источников, из которых иностранных.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, охарактеризованы научная новизна и практическая значимость работы.

Глава I представляет собой обзор литературы на тему «Современное состояние исследования хлорофиллов и их производных». Обзор включает сведения о физико-химических свойствах и применении в практической медицине хлорофиллов и их производных, полученных из крапивы, эвкалипта, пихты, сосны, ели, мяты, и т.д. Рассмотрены вопросы получения и клгашко-экспериментального исследования водорастворимых производных, в том числе и хвойного хлорофиллина натрия. Изучено состояние лечения инфекционно-воспалительных поражений кожи и слизистых различной этиологии. Систематизированы медико-фармацевтические требования к созданию новых аппликационных лекарственных форм трансдерамального и трансмукоид-ного назначения, представлен ассортимент лекарственных пленок, применяемых з различных областях медицины. Отражена информация по использованию хлорофиллов в качестве лечебно-профилактических биологически акшвньос добавок к пище Исходя из анализа литературных данных показана целесообразность проведения данных исследований.

Экспериментальная часть включает 5 глав, посвященных стандартизации субстанции хвойного хлорофиллина натрия, разработке БЛП «Крона» и лечебно-профилактических препаратов «Крона».

В главе II описаны объекты и методики, использованные в работе.

Главы III, IV, V, VI посвящены обсуждению результатов собственных исследований. Материал структурирован в соответствии с этапами выполнения работы.

В главе III изложен материал по стандартизации субстанции хвойного хлорофиллина натрия по технологическим и микробиологическим показателям, изучению ее дисперсолсгическнх свойств, определению стабильности. Приведены результаты по доклиническому фармакологическому изучению субстанции хвойного хлорофиллина натрия, полученные совместно с кафедрами микробиологии, фармакологии ПГФА, НПО «Биомед», С,- Петербургским НИИ вакцин и сывороток.

Глава IV содержит изложение основных этапов создания нового препарата -биорастворимых лекарственных пленок «Крона» и включает материал по выбору оптимальной матрицы-носителя на основании технологических, биофармацевтических исследований с использованием метода математического планирования, результаты

исследования биодоступности КПП «Крона» с фотоэлектроколориметрической реп странней высвобождения биологически активного вещества и обоснование перспе! тивности использования для этой цели метода кондуктометрии а также результат! изучения механизма релиза хлорофиллина натрия из пленок.

В главе V приведены данные по стандартизации лекарственных пленок, изуче ник» их стабильности и установлению сроков годности, результаты исследований п доклиническому изучению специфической активности и клин и ко экспериментальному исследованию БЛП «Крона» в комплексной терапии стомзтнто! и трофических язв голени, проведенных совместно с кафедрами микробиологии, фи зиологш и патологии ПГФА, отделениями сосудистой хирургии ГКБ № 4, хирургш МСЧ № 3, детской стомапюликлиникой № 5 г. Перми.

Глава VI включает результаты исследований по разработке оптимального состава парафармацевтических средств: сиропа, меда и гранулированного напила «Крона» на основе хвойного хлорофиллина натрия, по стандартизации и установлению сроков годности готовой продукции.

В Приложение включена нормативная документация - проекты ВФС «Хвойный хлорофиллин натрия», «Пленки лекарственные», ТУ «Сироп Крона», «Мед Крона», «Гранулированный напиток Крона», соответствующие Гигиенические Сертификаты, Акты внедрения производства ЛПС в научно-производственную аптеку «Вита-фарм» г. Перми, акты внедрения в учебный процесс ПГФА, акты клинической апробации БЛП «Крона».

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования. Объектом исследований являлись 5 промышленных серий хеойногохлорофиллина натрия (ОСТ 56-33-85), полученные в Ли-сииском учебно-опытного лесхозе Тоснииского района Ленинградской области; медицинские полимеры (поливиниловый спирт, поливишлпирролидои, желатин, на-трийкарбоксиметилцеллюлоза, мешлцеллюлоза, оксипропилметилцеллюлоза, полимер биорастворимый, натрия альгинат); глицерин; лимонная кислота; полиэтиленок-сид-400; аскорбиновая кислота; красители и ароматизаторы пищевые, биорастворимые лекарственные пленки «Крона», ЛПС «Крона».

Стандартизация исследуемых объектов проводилась с использованием офици-нальных физико-химических методов (ТСХ, фотоэлектроколориметрия, спекгрофо-тометрия), адаптированных к исследуемым объектам. Доказательство наличия жирных и смоляных кислот в субстанции ХН осуществлялось по модифицированной нами методике, предложенной Ралдугкиым В.А. Для оптимизации выбора пленочной матрицы использовался метод математического планирования эксперимента Хар-рщцтона. Биофармацевтическая оценка БЛП на основе ХН проводилась методом диффузии « in vitro» через полупроницаемую мембрану с фотоэлектроколориметри-ческим и кондуктометрическим контролем процесса высвобождения. Специфическая активность субстанции ХН и пленок исследовалась микробиологическим методом, на каррагешшовоя модели асептического экссудативного воспаления, методами тензио-метрки, моделирования ожогов, определением острой токсичности по экспресс - методу Прозоровского В.В.

Субстанция хвойного хлорофнллкна натрия Стандартизация. Хвойный хлорофиллнн натрия является экологически чистым водорастворимым продуктом омыленного хлорофилла. По литературным данным (Левин Э.Д, Репях С.М., 1984) известно также, что в состав субстанции входят натриевые соли жирных и смоляных кислот. В связи с этим, идентификация ХН требует доказательства наличия, как производных хлорофиллов, так и кислот.

Идентификацию суммы хлорофиллов а и b проводили методом тонкослойной хроматографии в системе бензол: метанол, свидетель - извлечение из крапивы. В результате исследования обнаружены два пятна, флуоресцирующие в УФ - свете красноватым свечением со значениями: Rr - 0,5 - 0,6 и 0,6 - 0,7, характерные для хлорофиллов айв. Полученные показатели Rf были предложены и использованы в дальнейшем для определения подлинности субстанции.

Для доказательства наличия натриевых солей жирных и смоляных кислот в губстанции ХН, их предварительно разделили по модифицированной нами методике, ^редлС'Ке* шеи сотрудниками Новосибирского института оргзкическои химИп для шализа кедрового стланика. Последовательная обработка субстанции растворами ки-;лоты и щелочи, а также органическими экстрагентами позволила селективна выде-шгь так называемые «сильные» кислоты, сумму остальных кислот, нейтральную

часть, при разбавлении которой органическим растворителем выделен воск (таблица

1).

Таблица 1

Компонентный состав субстанции ХН

№ образца Содержание фракций в г (в % от субстанции)

Сильные кислоты Остальные кислоты Нейтральная часть Воск

1 4,53 (34,85) 0,39 (3,00) 0,95(7,31) 0,015(0,12)

2 5,01 (38,54) 0,42 (3,23) 1,03 (7,93) 0,019(0,15)

3 4,36 (33,54) 0,35 (2,69) 0,92 (7,08) 0,011(0,10)

4 3,89 (29,93) 0,31(2,38) 0,87 (6,69) 0,009 (0,07)

5 5,12(39,39) 0,45 (3,46) 1,07 (8,23) 0,022 (0,18)

Из литературных данных (Раддугин В.А., 1985, Левин Э.Д., Репях С.М., 1984) известно, что хвоя древесных пород содержит фракцию сильных кислот, которая представлена в основном бензойной и 19-оксисукцинилагаталовой кислотами. Сумму остальных кислот после метилирования составляют метиловые эфнры смоляных кислот (абиетиновой, дегидроабиетиновой, неоабиетиновой, левопимаровой, сандара-копимгровой, изопимаровой). Нейтральная фракция и выделенный из нее воск, содержат насыщенные эфиры жирных кислот (линолевой, олеиновой, пальмитиновой, стеариновой, бегеновой) и спиртов.

Присутствие жирных и смоляных кислот было доказано также путем определения химических констант, таких как, кислотное число н число омыления, являющихся

показателями доброкачественности субстанции (таблица 2).

Таблица 2

__Результаты определения кислотного числа и числа омыления ХН___

№ серии 1 Кислотное число 3,34 ± 0,0003 Число омыления 48,54 + 0,016 47,681 0,012 ...................... * 47,92 + 0,017 .......

2 3,61+0,0005

3 3,22 + 0,0004

4 3,74 + 0,0009 49,67 + 0,011

5 3,52 + 0,0006 49,37 + 0,011

В настоящее время отсутствует нормативная документация, позволяющая использовать ХН для введения в лекарственные формы. Существующий же в парфюмерно-косметической промышленности ОСТ «Хвойный хлорофкллнн натрия» не учитывает перспектив внедрения данной растительной субстанции в медицинскую

практику, что требует его переработки с учетом специфики фармацевтического анализа.

На основании требований ГФ XI изд. и ОСТ 42-506-96 о «Порядке разработки нормативной документации» по фармакопейным методикам определяли показатели качества, как регламентируемые ранее ОСТ 56-33-85 на ХН: внешний вид, подлинность, содержание водорастворимых производных хлорофилла, рН водного раствора, потери в массе при высушивании, так и введенные впервые: прозрачность, цветность, сухой остаток, содержание тяжелых металлов, микробиологическая чистота.

По внешнему виду ХН представляет собой пастообразную массу оливково-зеленого цвета горького вкуса, со специфическим хвойным запахом.

Результаты определение числовых показателей субстанции, представлены в табл. 4.

Таблица 4

Результаты стандартизации субстанции ХН

№ серии Показатели качества

рН вода, извл. Потеря в массе при высуш., % Сухой остаток, % Содержание тяж. металлов, мг/кг Мнкробнол. чистота

1 9,01+0,04 52,26 + 0,02 47,74 + 0,02 - Соотв. кат. 4

2 8,83+0,01 49,78 + 0,02 50,22 + 0,02 - —«—

3 8,72 ± 0,02 49,31+0,04 50,69 + 0,04 - —«—

4 9,11+0,02 59,09 + 0,04 40,91 + 0,04 - —«—

5 8,61 + 0,01 52,24 + 0,03 47,76 + 0,03 - —«—

Зарегистрированные диапазоны основных показателей стандартности ХН, включенньк в проект ВФС «Хвойный хлорофиллин натрия», позволили установить стабильность субстанции в течение 2 лет при температуре (5+2)°С в стандартной упаковке - стеклянных банках оранжевого стекла с навинчивающимися крышками по ГОСТ 5717-8].

Для определения подлинности субстанции нами проведено исследование спектральной характеристики субстанции ХН в видимой области спектра. Получены три максимума поглощения при длине волны 406-408; 498-500 и 660-662 нм, представленные на рисунке 1, что соответствует требованиям ОСТ на ХН.

Рис. I- Спектральная ьграьгтсрвстккж субсппт&в хвойяого *лорофшш|ша катрая

ТОО 750

Длина сакл ы, вд!

Определение содержания водорастворимых производных хлорофилла проводили фотоэлектро-колориметрическнм методом, с использованием калибровочного графика по стандартному раствору Гетрн согласно ОСТ

на ХН. В связи с наличием у субстанции максимумов поглощения в интервале длин волн 400-700 нм представляло также интерес изучить возможность использования снегстрофогометрического метода количественного определения.

Для разработки методики нами изучены и рекомендованы оптимальные условия анализа: длина волны 662 нм; навеска субстанции 0,04 - 0,05 г; время экспозиции не более 3 часов; в качестве растворителя можно использовать как буферный раствор, так и воду, т.к. значение рН не оказывает влияния на оптическую плотность. Для расчета концентрации производных хлорофилла предложен метод, используемый в фо-тоэлектроколориметрии.

Таблица 3

Содержание производных хлорофилла в хвойном хлорофиллине натрия, определенное фотоэлектроколориметрическим и спектрофотометрическим методами

Метод Навеска, г Оптическая Содержание производных Метрологич.

определе- плотность хлорофилла, % характеркспжа

ния

ФЭК 0,0500 0,317 21,90 Х = 22.12

0,0500 0,319 21,98 5Х = 0,24

0,0500 0,330 22,74 Е = 0,67

0,0500 0,321 22,03 А = 3,03 %

0,0500 0,318 21,94

СФМ 0,0500 0,351 24,14 Х = 24,13

0,0500 0,350 24,09 = 0,20

0,0500 0,360 24,81 Е = 0,56

0,0500 0,349 24,05 А = 2,32 %

0,0500 0,342 23,54

Сопоставительный анализ результатов, полученных фотоэлектроколорнметрическим и спектрофотометрическнм методами (таблица 3), свидетельствуют об их идентичности по показателям точности и воспроизводимости, что указывает на перспективность использования спектрофотометрического метода наряду с фотоэлектроколори-метрическим для анализа субстанции и лекарственных форм, разрабатываемых на основе хлорофиллина натрия.

С целью выбора рациональной технологии различных лекарственных форм, содержащих хлорофиллин натрия изучены его поверхностно - активные свойства с помощью кондуктометра КЭЛ- 1М. В результате исследований установлено, что субстанция обладает выраженной поверхностной активностью в диапазоне концентраций от 0 до 6,2 %, и является стабильной, за счет природы самого вещества.

Доклиническое фармакологическое исследование. Изучение противовоспалительной активности XII, в диапазоне доз от 0,25 до 0,000125 мкг/кг, проводили на каррагениновой модели экссудативного асептического воспаления вызванного у крыс. Установлено, что хлорофиллин натрия обладает антиэкссудативными свойствами, причем это действие в большей степени выражено в малых дозах (0,0025 и 0,000125 мкг/кг). Исследование влияния ХН на фагоцитоз подтвердило тот факт, что при применении субстанции в малых дозах наблюдается стимулирующее воздействие на фагоцитарную активность нейтрофилов в отношении стафилококка и латекса, большие же дозы препарата (0,25-0,005 мкг/кг) изменяют ее в метшей степенн.

Оценка аллергенной активности субстанции хлорофиллина натрия по реакции активной системной анафилаксии, непрямой реакции дегрануляции тучных клеток крыс и пгаерчувствительности замедленного типа, в опытах на различных видах животных, позволила установить его слабый аллергенный потенциал.

В опытах in vitro, проведенных методом последовательных серийных разведений установлено бактерицидное действие ХН в отношении эталонных штаммов микроорганизмов: золотистый, белый, эпидермалъньш стафилококки, синегнойная н кишечная палочки, грибы рода Candida, наиболее выраженное у раствора в концентрации 5 %, выбранной нами в качестве эффективной терапевтической дозы ХН для введения в лекарственные пленки.

Биорастворимые лекарственные пленки «Крона»

Установленная широта терапевтического действия, а также стабильность сыр! евой базы послужили фундаментом для постановки задачи создания новой перепел тивной лекарственной формы - биорастворимых лекарственных пленок (БЛП) по, условным наименованием «Крона».

Создание основы пленок. Выбор оптимального состава БЛП «Крона», обес печивающего им необходимые технологические и потребительские свойства осуше ствлялся в три этапа.

На первом этапе проводился отсеивающий эксперимент по выбору оптимальной матрицы - носителя доя пленок. С этой целью нами исследованы пленкообразующие свойства полимеров медицинского назначения природного и синтетического происхождения в различных концентрациях: натркй-карбоксинетилцеялкшоза (0,53%), метщщеллюлоза -16; 35 и 100 (2-3%), натрия альгшит (1,5-3%), метилоксипро-пнлцеллюлоза (1,5-5%), поливиниловый спирт (5-10%), биополимер растворимый (312 %), полившшллнрролндон (10-20 %), желатин (2-18 %), ПЭГ - 400 0,5-6 % в сочетании с пластификаторами, обеспечивающими необходимую эластичность: глицерин в концентрации 1-3 %, лимонная кислоту 0,5-5 %, мочевина 1-3 %. В качестве растворителя использовали воду очищенную. На основании предварительных исследований по органолептическим свойствам (эластичность, однородность, отсутствие микротрещнн и разрывов) из 160 композиций, представляющих собой различные соотношения пленкообразователей и пластификаторов, выбрано 17 составов.

Второй этап исследований заключался в оптимизации эксперимента по выбору матрицы-носителя. Критериями отбора (откликами) служили такие показатели качества пленок как рН, толщина и влажность. Для статистической обработки результатов эксперимента использовался метода обобщенной функции желательности, рассчитываемой как среднее геометрическое желательности отдельных свойств.

На основании полученных данных наибольшее значение обобщенной функции желательности характеризующее удовлетворительное качество пленочного состава получили композиции на основе полимеров Иа КМЦ, N8 альгината, Иа КМЦ с МЦ и Ка КМЦ с Ка альгинатом, в качестве пластификатора - глицерин.

Получение пленок (Рис. 2) осуществляли методом полива пленочной массы на гидрофобную подложку с последующей сушкой в сушильном шкафу при экспериментально установленной температуре 40-50 °С, в течение 17-19 часов.

Рисунок 2. Технологическая схема получения БЛП «Крона».

КаККОД-1

Кг ¿ЛЫ.-2

КзКМЦ с кш-з КМН с Ка «ЛМ.-4

Срема, мни

Рнс. 4 Кнмгточссъэ» »^жвмс вьквдивжзетй ХН нэ пленах ф^гочлсктрокалпрнмпрнчеомм методом

Биодоступность н механизм релиза. Окончательный выбор наиболее оптимальной композиции в качестве основы для БЛП проводился по результатам исследования кинетики высвобождения ХМ из указанных выше составов.

Относительную биологическую доступность ХН нз пленок выбранных составов, определяли методом дналн-

* -----——за через полупроницаемую

мембрану. Результаты высвобождения ХН, определенного с помощью фотоэлектроколори-метрического метода, представлены на рисунке 3. Установлено, что при равных условиях эксперимента степень высвобождения биологически активного вещества из пленок на основах 1 и 2 выше, чем из пленок на основе 3 н 4, вследствие этого, дальнейшие исследования проводились на пленках первых двух составов, которые являются наиболее оптимальными.

С целью оптимизации процесса изучения кинетики высвобождения ХН из пленок диализным методом, исследовали возможность применения для контроля релиза менее трудоемкого и более информативного кондухто-метрического метода, использование которого обусловлено способностью ХН диссоциировать в водной среде с образованием ионов. Расчет степени его высвобождения проводили с помощью калибровочного графика. Как показано на рисунке 4, при равных условиях проведения эксперимента, степень высвобождения ХН в 1,2 раза ниже у пленок на основе альги-кат2 натрия, '¡гг.: ::а осцосе КМЦ, т.е. ски обладают более выраженным пролонгирующим эффектом. Эти данные коррелируются с результатами, полученными фото-электроколориметрическим методом, что свидетельствует о целесообразности ис-

1Ъс. 1 Ккмтмчеаз« ьзжшевьснп&иааеаХНс

пользования кондуктометрии для регистрации высвобождения лекарственных веществ ионного типа из пленок.

Кондуктометрический метод позволил также осуществить трактовку механизма релиза ХН из пленок. Исследования проводились без диализного устройства, функцию мембраны, имитирующей кровеносную систему организма, выполняла вода,

поэтому сопротивление ее

О Г\'а -ал»л.п.ои

-альт. -КМЦ

•8 2! Вре»ее*Ю"г,сек

Рнс5. Кинетические криль* еысшккгазкшк* ХН ншиуктиметритескт) >К'П'Л>ч

потоку лекарственного вещества принималось равным нулю, что обеспечивало полное высвобождение компонентов матрицы. Критерием количественной оценки высвобождения действующего вещества являлась величина удельной электрической проводимости. Ввиду того, что ее значение обладает свойством аддитивности и складывается из проводимостей всех компонентов раствора, т. е. ионов плацебо и лекарственного вещества, необходимо было изучить кинетику растворения пленки как с хлорофиллнном натрия, так и без него (Рис. 5). По полученным экспериментальным данным установлена прямолинейная зависимость 1п {%) = £ (I), что указывает на соответствие процесса высвобождения ХН реакции первого порядка.

На основании результа-

| тов, представленных на рис.5.,

2 н г, -

2 | /' \ рассчитаиа скорость растворе-

?'31! \ ния лекарственных пленок

2 1 ], ^т1 (рис.6). Установлено, что она

" II / \ ■

проходит через максимум, резкое увеличение скорости на-о1--------------;----------—■'6Т*----;-----; блюдается в начальный момент

Ирсмял1&-2, с

Рисб. Заьпсммостьскорости оыстЛх-ад^сня к_-к>р<1ф]1Л.-81№1 ВрСМСНИ, еС СНИЖСНИС МОЖСТ

натрий т ({.'Н! ог ицз «аш.1

Н !'

быть объяснено уменьшением количества ХН в поверхностных слоях матрицы-носителя, что свидетельствует о принадлежности исследуемых БЛП к матричным системам диффузионного типа. На базе полученных in vitro экспериментальных данных рассчитаны константы скорости диффузии (кл) равные 6,3 * 10"4 с 1 для пленок на основе Na КМЦ и 4,0 * 10 с 4 для пленок на основе Na альгината, что в 1,6 раза ниже. По значениям кд БЛП «Крона» могут быть отнесены к пролонгированным лекарственным формам.

В исследованиях in vivo при наложении пленки с концентрацией хлорофиллнна натрия 1,4 *10"5 г/см2 скорость рассасывания составила для пленки на основе Na КМЦ 2,63 * 10"2 мкг/(см2 *ч), а для пленки на основе Na альгината - 1,62 * 10"2 мкг/(см2 *ч) - в 1,6 раза меньше, что коррелируются с данными полученными in vitro.

Для управления процессом динамики высвобождения и создания систем с заданной скоростью дозирования изучалось влияние наиболее значимых факторов: вида основы, концентрации ХН, температуры, рН среды, интенсивности перемешивает. кькпгш^к^ш.шйж*^^ ния и измельчения пленки.

зшнскиоспютегосвдзнанкя

Влияние концентрации

ХН исследовали на пленках в диапазоне концентраций от 0,5 до 5 % (рис.7). Установлено, что увеличите содержания хлорофиллина натрия повышает скорость релиза за одинаковый интервал времени, что свидетельствует о протекании релиза хлорофиллина натрия из пленок в кинетической области, определяемой скоростью биодеструкции полимера. Повышение температуры диализной среды от 17 до 37°С ускоряет процесс высвобождения биологически активного вещества, что также свидетельствует о диффузионном механизме высвобождения ХН из пленок. По графику зависимости lg % ~ f (1/Т), определена энергия активации процесса растворения пленки, составляющая 6,55* 103 Дж/моль, что характеризует способность системы к самопроиз-

вольному релизу ХН из БЛП и отсутствие необходимости использования активаторов высвобождения.

Перемешивание диализной среды в нашем случае увеличивало скорость релиза примерно в 2 раза. Поскольку в гетерогенных процессах, каковым является растворение пленок, взаимодействие происходит или начинается на поверхности раздела фаз, для таких процессов большое значение имеет не только состояние, но и размер, т.е. площадь соприкасающихся фаз. Резкое возрастание скорости растворения наблюдалось у измельченной пленки в начальный момент времени, время полного ее растворения совпадало со временем растворения цельного образца, при равных условиях проведения эксперимента, что также доказывает зависимость релиза хлорофилляна натрия от биодеструкции полимера. В результате исследования механизма высвобождения ХН из БЛП с использованием кондухгометрии установили, что по конструкции даюше лекарственные пленки можно отнести к матричным системам диффузионного типа, в которых диспергируемое вещество равномерно распределено в полимерной матрице. Механизм высвобождения ХН складывается из процессов набухания, геле-образования и диффузии системы, активируемых растворителем, релиз ХН соответствует реакции первого порядка и протекает в кинетической области.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о целесообразности использования кондуктометрического метода для проведения биофармацевтических исследований.

Стандартизация. Исходя из медико-фармацевтических требований, предъявляемых к аппликационным лекарственным формам, исследование лекарственных пленок проводилось по следующим показателям: подлинность, содержание водорастворимых производных хлорофилла средняя масса, толщина, растворимость, рН водного раствора, потеря в массе при высушивании, паропроннцаемость, микробиологическая чистота

Результаты, представленные в табл. 4, свидетельствуют о том, что пленки характеризуются оптимальным значением рН, высокой растворимостью и паропрони-цаемостью, что свидетельствует об их способности при нанесении на очаг поражения набухать, превращаясь в гель, растворяться за определенный промежуток времени и пролонгировать действие лекарственного вещества, не оказывая раздражающего действия.

Таблица 4

Результаты стандартизации БЛП «Крона»

№ сер Ср. масса, г Толщина, мм Время раств., мин рн водн. раств. Потеря в массе при аысуш., % Паропро- ниц., г/м5*час Механич. прочн. на разрыв, кг/.м2 Степ. равн. набух., % Подлинность Содерж. во- дораств.. произв. хло-роф., % Микроб, чистота

Состав № 1

1 0,0569 ±0,001 0,26 ± 0,015 40 ± 0,110 6,64 + 0,010 8,7 + 0,260 76,56± 2,240 19,0 + 0,520 265,3 5± 8,450 Положит. 0,83 ± 0,022 Соотв.

2 0,0565 + 0,002 0,23 + 0,001 42 ± 0,320 6,66 + 0,050 8Д + 0,090 60,74+ 3,390 18,0 + 0,450 207,17+ 7,623 —«— 0,63 + 0,020 —«—

3 0,0573 ±0,018 0,23 ± 0,003 42 ± 0,080 6,64 ± 0,080 8,4 + 0,330 87,67+ 7,680 18,3 + 0,780 278,18+ 9,640 —«... 0,91+0,014 —«—

4 0,0564 ± 0,002 0,22 + 0,001 45 + 0,450 6,65 + 0,007 8,4 + 0,170 74,99+ 4,270 18,5 + 0,632 283,15+ 6,324 —«— 0,73 ± 0,020 —«—

5 0,0546 ± 0,003 0,22 + 0,002 45 + 0,240 6,65 + 0,016 8,4 + 0,360 74,99+ 2,251 18,9 ±0,740 295,28+ 7,892 —«— 0,79 + 0,018 .......

Состав № 2

1 0,0501 + 0,004 0,23 ± 0,005 51 + 0,22 6,98 + 0,006 8,7 + 0,150 92,00 ± 9,330 20,6 ± 0,826 222,14+5,6 79 Положит. 0,87 + 0,019 Соотв.

2 0,0511 ± 0,002 0,24 + 0,002 53 + 0,56 7,01 + 0,012 10,1 + 0,240 100,85+3,4 20 19,0 + 0,910 222,21+8,2 40 —«— 0,81+0,023 ...«—

3 0,0505 ± 0,002 0,21 ± 0,018 50 ± 0,35 7,01 ± 0,005 9,4 + 0,320 98,37 + 6,170 19,2 ±0,745 290,07+9,4 46 —«— 0,91 + 0,020 .......

4 0,0488 ± 0,004 0,21 ± 0,001 51 + 0,15 7,00 ± 0,050 9,4 + 0,140 105,94+4,3 50 20,2 + 0,670 288,01+9,7 60 —«— 0,86 + 0,020 .......

5 0,0505 ± 0,005 0,24 ± 0,002 51 ± 0,25 7,00 + 0,070 9,4 + 0,350 99,29 ± 4,670 20,4 + 0,820 292,14+7,5 64 0,91 ±0,022 .......

Для проекта ВФС «Пленки лекарственные» и контроля стабильности в условиях естественного и ускоренного хранения нами предложены наиболее значимые из изученных технологических показателей. Сравнительная оценка значений, полученных двумя методами, свидетельствует о корреляции результатов при стабильности технологических показателей и количественного содержания действующих веществ в БЛП в течение 2 лет при (20+2) °С, влажности (75+3) %, в пакетах из полиэтилена упакованных термосвариванием.

Доклпническое фармакологическое исследование. При изучении лекарственных пленок «Крона» выявлено наличие:

- бактерицидной активности, определенной методом последовательных серийных разведений, в отношении грам-отрицательных микроорганизмов (золотистый стафилококк), МИК составила 5,00 - 1,25* Ю4, а также в отношешш грам - положительных (кишечная палочка), МИК - 5,00- 2,50* 104, для обоих составов пленок.

- ранозаживлягощего действия, установленного в модельных условиях (модель термического ожога и линейных ран кожи). Наблюдение за тремя группами крыс с ожогами вели в течение 30 суток, каждые 5 дней у животных измеряли кол1гчество лейкоцитов, площадь ожоговых ран, массу, а также визуально отмечали изменение ожоговой поверхности. Первой группе наносили 5 % водный раствор хлорофиллина натрия; второй - пленки на основе N8 КМЦ; третьей - пленки на основе Ыа альгината; четвертая - контроль). У контрольной группы увеличение количества лейкоцитов происходило в течение 15 дней. В то же время, этот показатель при лечении ожогов пленками «Крона» на На КМЦ и натрия альгинате начинал уменьшаться уже с 5 дня и на 15 (3 группа) - 20 день (2 группа) приходил к исходному нормальному уровню.

При этом, площадь ран, представленная на рис.8, на 30-е сутки опыта в контрольной группе составила 5,4 %, у группы леченной вод-

ным раствором хлорофиллина натрия 3,76 %, пленками на основе натрия КМЦ - она была в два раза меньше, чем в контроле и полное заживление наблюдалось в группе леченной пленками на основе натрия альгината.

Рне. И, ран на ЗЗ-с сутки лечения крыс с модельными

ожогами

В результате данного эксперимента установлено, что заживления ожогов у ис следуемых групп животных под пленками происходило быстрее, чем в контрольно? группе и группе леченной раствором ХН, образования грубого вторичного струпа не наблюдалось и появившаяся грануляционная ткань далее переходила в ровный ело? эпителия без следов ожога.

Как показал анализ экспериментальных данных по линейным ранам, пленки обоих составов вызывали достоверное увеличение прочности рубца на 7-е сутки эксперимента (рис.9).

На основании проведенного исследования, можно сделать вывод о целесообразности использования ХН для лечения ожоговых и резаных ран покровных тканей.

В острых опытах на белых беспородных мышах установлено, что БЛП «Крона» являются малотоксичным препаратом, терапевтическая доза пленок не обладает ал-лергизирующим и местнораздражающим действием

Клишпео-экспериментальные исследования. Оценка эффективности лекарственных пленок проводилась в условиях стоматологической клиники при терапии острого герпетического стоматита, хешшта, одиночных афт слизистой полости рта у 24 детей. При лечении наблюдалось устранение гиперемии и отечности слизистой полости рта, уменьшение ее болезненности, очищение ран от бактериальной флоры, ускорение репаративных процессов (сроки лечения сокращались до 5-7 дней).

Пленки применялись также в отделении сосудистой хирургии ГКБ М> 4 и в отделении хирургии МСЧ № 3 у 10 больных для лечения длительно незаживающих трофических язв на фоне хронической венозной недостаточности, при отсутствии гнойного воспаления. Результаты оценивались по клиническим, лабораторным, бактериологическим исследованиям. Наблюдалось снятие отека, происходило очищение язв от бактериальной флоры. Значительного ускорения процессов регенерации не отмечалось, но при лечении пленок уменьшалось количество фибрина, некротических масс, появлялась грануляционная ткань с выраженным процессом краевой эпителиза-

цин, уменьшением экссудации язв, вследствие полного рассасывания пленок грануляционная ткань не травмировалась. Пленки хорошо переносились пациентами не вызывая общих и местных аллергических реакций, изменений со стороны обмена веществ.

О перспективности использования пленок в качестве средств аппликационной терапии свидетельствуют: удобство применения, возможность использования в стационарных и амбулаторных условиях, длительность, атравматичностъ воздействия, вследствие уменьшения количества аппликаций, отсутствие необходимости использования специально подготовленного персонала и т.д.

Лечебно-профилаетическне средства «Крона»

Наличке у хвойного хлорофшшина натрия гемопоэтической, тонизирующей, антипптоксической, радиопротекторной и др. видов активности в сочетании с антибактериальными и противовоспалительными свойства, позволяет прогнозировать создание широкого спектра парафармацевтической продукции профилактического назначения на его основе. Перспективность данного направления исследований не вызывает сомнения, т.к. ассортимент отечественных ЛПС крайне ограничен.

В качестве разрабатываемых средств нами выбраны ыед, сироп и напиток, которые являются наиболее оптимальными с точки зрения комфортности применения в качестве добавок к пище, экономичности и технологичности производства ввиду возможности использования смежных отраслей - кондитерской и пищевой промышленности. В результате проведенного поиска ЛПС из значительного ассортимента вспомогательных веществ по органолептнческим и технологическим параметрам разработаны оптимальные композиции и способы получения скропа, меда и гранулировашю-го напитка «Крона».

Для введения в ЛПС экспериментально обоснована и выбрана концентрация ХН 0,05 %. С целью коррекции достаточно горького вкуса субстанции использованы корректоры вкуса и ароматизаторы. Вкусовые качества меда не требуют их улучшения. Получение сиропа «Крона» проводили согласно ГФ XI изд., статья «Сиропы». В результате исследований по разработке гранулированного напитка «Крона» из нескольких композиций выбран оптимальный состав, включающий ХН, сахарную пудру и лимонную кислоту.

Таблица 5

Исследование показателей качества меда «Крона»_

Кг обр Показатели качества

Внешний ззид Масс, доля воды, % Диастаз, число, ед ГОТе Содержание тяжелых металлов, мет/кг Сод-е произв. хлороф., % Микроб, чистота

Щ Си РЬ са гп ГХ.ДЦТ, 2,4-Д

1 сиропообразная масса однотонного темно-зеленого цвета сладкого вкуса, со специфическим для меда трав запахом. 19 8,0 - 0,57 0,04 3,02 - 0,015 Соотв.

2 18 8,1 0,61 0,06 ■ 3,05 - 0,013 —«—

3 20 7,9 - 0,36 0,07 - 3,04 0,011 —«—

4 19 8,0 - 0,59 0,05 - 3,06 - 0,017 —«—

5 19 8,1 - 0,60 0,06 - 3,04 - 0,012 ...«—

Таблица 6

Исследование показателей качества сиропа «Крона»_

№ обр Показатели качества

Внешний вид Плотность г/см3 Показатель преломления Содержание тяжелых металлов Сод-е произв. хлороф., % Мтфоб. чистота

Аз т Си РЬ са гп

1 2 густоватую вязкую ямдкость, однотонного темно-зеленого цвета со специфическим для трав запахом, сладковато-кислого вкуса 1,300 1,452 - - - 0,06 0,00 5,37 0,012 Соотв.

1,310 1,451 - - 0,03 0,01 5,36 0,014 —«—

3 1,301 1,454 - - 0,07 0,03 5,38 0,013 —«—

4 1,313 1,451 - - 0,05 0,01 5,40 0,010 ...«—

5 1,310 1,452 - - - 0,05 0,02 5,37 0,016

Таблица 7

Исследование показателей качества гранулированного напитка «Крона»

№ Показатели качества

00 Внешний вид Сыпу- Влаж- Грануломет- Распа- Сод-е токе, элем., Микроб.

Р честь, ность, рии. состав, дае- мкг/кг чистота

г/сек % гранул разм. 1,0-0,1 мм, % мость мин А$ Си РЬ СИ

1 крупинки округлой, 10,18 1,0 98 12 - - 0,14 0,06 0,01 5,37 Соотв,

2 цилиндрической или 8,48 1,2 100 14 - - 0,15 0,04 0,02 5,39 —«—

3 неправильной формы, 6,78 1,0 96 10 - - 0,17 0,07 0,00 5,38 —«—

4 однородного светло- 8,48 0,9 99 12 - - 0,13 0,09 0,00 5,37 —«—

5 зеленого цвета, кисло-сладкого вкуса, с ха-рахгериым для эссенции запахом 8,48 1,0 98 10 0,15 0,08 0,01 5,38 —«—

Стандартизация. При разработке показателей качества препаратов руководствовались ГФ XI изд. и «Медико-биологическими требованиями н санитарными нормами качества продовольственного сырья и пищевых продуктов». Результаты стандартизации, приведенные в таблицах 5,6, 7, включены в ТУ «Мед «Крона», «Сироп «Крона» и «Гранулированный напиток «Крона». ТУ утверждены на региональном уровне, получены первые опытные партии препаратов, налажено их распространение через сеть- аптек ПГФА и других аптек гт. Перми и Кургана. Далее производство может осуществляться как в условиях аптеки, так и предприятий фармацевтической и кондитерской промышленности. Исследования по разработке препаратов «Крона» включены в программу «Развитие производства лечебно - профилактических средств и улучшения обеспечения населения Пермской области н Уральского региона» на 1999-2005 гг.

Маркетинговое исследование. Проведенное маркетинговое исследование потенциального рынка сбыта ХН в Пермской н Курганской областях позволило устЪцго-вить, что он является более конкурентоспособным, чем представленный на фармацевтическом рынке «Хлорофиллипт». В социологическом опросе специалистов (медицинских и фармацевтических работников) приняло участие 107 человек, из них 48,0% - медицинские к 52,0% - фармацевтические работ! шки, а также 249 человек населения. Все опрошенные группы положительно относятся к выходу на рынок нового препарата и в особенности его парафармацевтическнх форм.

В целом результаты проведенного исследования служат фундаментом для дальнейшего развития новых направлений оп использованию субстанции хвойного хлорофиллина натрия в фармацевтической и пищевой промышленности. Прежде всего, прослеживается перспектива разработки новых лекарственных форм, расширения ассортимента парафармацевтическнх препаратов для проведения лечебно-реабилитационных мероприятий среди населения экологически неблагополучных регионов.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Экспериментальными исследованиями специфической активности хвойного хлорофиллина натрия подтверждено выраженное антибактериальное и противовоспалительное действие субстанции и аргуметгирована необходимость внедрения

ценного отечественного препарата, содержащего водорастворимые производные хлорофилла в медицинскую практику.

2. Впервые предложены методики качественного определения суммы хлорофиллов методом ТСХ и их количественного определения спектрофотометрическнм методом. Изучены физико-химические характеристики и разработаны показатели качества субстанции, на основании которых составлен проект временной фармакопейной статьи «Хвойный хлорофиллин натрия».

3. Изучена аллергенное«. субстанции и доказано отсутствие данного воздействия на организм экспериментальных животных.

4. На основании комплекса проведенных экспериментально-теоретических, технологических, физико-химических, биофармацевтических и фармакологических исследований обоснованы принципы и реализованы пути создания новой оригинальной лекарственной формы - биорастворимых лекарственных пленок «Крона», предлагаемых для речения инфекционно-воспалительных поражений кожи и СОПР. Проведен скрининг различных композиций пленкообразующих и пластифицирующих веществ. Разработаны оптимальный состав и рациональная технология получения пленок.

5. Определены основные параметры качества БЛП «Крона» (средняя масса, толщина, рН водного извлечения, потеря в массе при высушивании, время растворения, подлинность, содержание водорастворимых производных хлорофилла, микробиологическая чистота). Наиболее значимые из них включены в проект ВФС «Пленки лекарственные». Полученные результаты можно рассматривать как общее методическое направление при стандартизации новых пленочных форм.

5. Экспериментальными фармакологическими исследованиями доказана антибакте- ■ риальная, противовоспалительная, ранозажнвлятощая активность БЛП, в условиях «острого» опыта показана практическая безвредность плепох в дозах, выходящих за рамки терапевтических, а также отсутствие местно-раздражающих и аллергизи-рутощих свойств.

7. В условиях клиники изучена эффективность применения БЛП «Крона» при лечении герпетического и афтозного стоматитов, а также трофических язв голени.

3. Разработаны научно-методические основы создания и стандартизации лечебно-профилактических средств (меда, сиропа, гранулированного напитка), что позво-

лило расширить область применения хвойного хлорофиллкна натрия в качестве тонизирующего, общеукрепляющего, антианемического средства.

9. Разработаны и утверждены ТУ на ЛПС и получены Гигиенические Сертификаты, разрешающие их производство и распространение. Осуществлено их производство в условиях аптеки и распространение через сеть аптек.

10. Исследована стабильность субстанции хвойного хлорофнллнна натрия, БЛП и ЛПС «Крона» в процессе хранения. Установлены индивидуальные сроки их хранения.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Олешко Л.Н., Блинова O.A., Олешко Г.И., Конышша Л.О., Плакснна А.Н., Снма-иовскаа Е.Ю., Болотова М.Ф. Исследование по разработке состава и технологии фотопленок. // Тезисы докладов научно-практической конф., поев. 25-тн летию фарм. факультета Самарского ГМУ - Самара: Сам ГМУ, 1996.- С. 58-59.

2. Олешко Л.Н., Блинова O.A., Садков С.А., Ягодин В.И., Распогаш В.А., Конышша Л.О., Олешко Г.И., Одегова Т.Ф. Исследования по стандартизации и разработке лечебных и лечебно - профилактических средств препарата " Крона". // Всероссийская научная конференция " Актуальные проблемы создания новых лекарственных средств". Тезисы докладов. СПб., 1996,- C.I04.

3. Блинова O.A., Олешко Л.Н., Плаксина А.Н., Колла В.Э., Назметдинов Ф.Я., Сыро-пятов Б.Я., Белоногова В.Д. Исследования по перспективному использованию продукта переработки древесной зелени - хлорофшшина натрия. // Материалы научно - практ. конф., поев. 75-ти летию Укр. фарм. академии. - Харьков. - 1996,- С. 186-187.

4. Олешко Л.Н., Блинова O.A., Юшков В.В., Одегова "Г.Ф., Олешко Г.И.Хлорофкл-лин натрия - средство эффективной фармакотерапии. // Тезисы докладов IV Российского национального конгресса " Человек и лекарство", - М.: РЦ " Фармме-динфо", 1997 - С. 173.

5. Олешко Л.Н., Голованенко А.Л, Блинова O.A., Петухова Т.В. Исследования по выбору состава матрицы для биорастворимых лекарственных пленок. // Матер, юбнл. межвуз. научно-практ. конф. профессорско-препод. состава, поев. 275-летщо г. Перми и 80-летию фармобразования на Урале, Пермь. - 1998.- С. 117.

6. Олешко J1.H., Петухова Т.В., Блинова O.A., Коньшина Л.О., Дудоладова Т.В. Поиск новых суппозиторных основ. // Тез.докл. V Российского национального конгресса «Человек и лекарство», М. - 1998.-С.599.

7. Петухова Т.В., Блинова O.A., Олешко Л.Н., Белоногова В.Д., Гайсннович М.С., Чубун Ю., Махова С. Идентификация биологически активных соединений методами ТСХ и ВЭЖХ. И Актуальные проблемы медицины и фармации. Материалы конференции Курск: КГМУ,1998,- С.232-233.

8. Блинова O.A., Малкова Т.Л., Олешко Л.Н. Сравнительная оценка методов количественного определения хлорофшшша натрия. // Депонировано в ВИНИТИ, 05.02.97, № 304-В97,

9. Рюмина Т.Е., Олешко Л.Н., Блинова O.A., Коньшина Л.О., Заводова Н.В. Использовать кондуктомегрического метода для изучения релиза хлорофиллина натрия из полимерных лекарственных пленок. /У Матер, юбил. межвуз. научно-практ. конф. профессорско-препод. состава, поев. 275-летию г. Перми и 80-летию фарм.