Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Комплексная технология препаратов на основе травы яснотки белой и яснотки пурпурной.

На правах рукописи 0034887В4

Петухова Надежда Михайловна

КОМПЛЕКСНАЯ ТЕХНОЛОГИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ТРАВЫ ЯСНОТКИ БЕЛОЙ И ЯСНОТКИ ПУРПУРНОЙ

15.00.01- Технология лекарств и организация фармацевтического дела

1 О ДЕК 2009

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Санкт-Петербург 2009

003488764

Работа выполнена в ГОУ ВПО Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии на кафедре промышленной технологии лекарственных препаратов

Научный руководитель:

кандидат фармацевтических наук, доцент Буракова Марина Анатольевна

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Демина Наталья Борисовна доктор фармацевтических наук Шиков Александр Николаевич

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Пермская государственная фармацевтическая академия

Защита состоится « 22 » декабря 2009 г. в 16.30 на заседании Диссертационного Совета Д. 208.088.01 при ГОУ ВПО Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии по адресу: 197227. Санкт-Петербург, пр. Испытателей, д.14.

Автореферат разослан « 20 » ноября 2009 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета Д 208.088.01, кандидат фармацевтических наук

Н. В. Марченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Перспективными источниками для создания фитопрепаратов являются растения, широко применяемые в народной медицине. К таким растениям можно отнести яснотку белую {Lamium album L.), извлечения из которой применяются в качестве кровоостанавливающего, вяжущего, отхаркивающего, диуретического, седативного, противовоспалительного, ранозаживляющего средства. В экспериментальной медицине показана эффективность препаратов из надземной части яснотки белой в качестве кровоостанавливающего, гипотензивного и антимикробного средства. Цветки яснотки белой являются официнальным сырьем в некоторых странах Западной Европы (Herbai Drugs and Phytopharmaceuticals, 2004). В Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии (СПХФА) на траву яснотки белой разработан проект ФСП (Березина, 2004).

Близкий вид - яснотка пурпурная {Lamium purpureum L.) в настоящее время не получила столь широкого применения в народной медицине и медицинской практике, несмотря на то, что обладает лечебными свойствами, аналогичными яснотке белой (Растительные ресурсы СССР, 1991).

Для возможного расширения сырьевой базы яснотки белой представляется актуальным сравнительное фитохимическое изучение яснотки белой и яснотки пурпурной. Степень изученности состава биологически активных веществ (БАВ) яснотки белой и яснотки пурпурной различна. Наиболее исследован фитохимический состав яснотки белой, для которой показано высокое содержание флавоноидов, фенолыгых кислот, полисахаридов (Березина, 2004, Растительные ресурсы СССР, 1991).

Присутствие БАВ различающихся по полярности в яснотке белой и яснотке пурпурной делает актуальной разработку технологии их комплексной переработки, а также создание на основе полученных извлечений препаратов и изучение их биологической активности.

Исходя из вышеизложенного, были определены цель и задачи данного исследования.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационной работы явилось: сравнительное фитохимическое изучение основных групп биологически активных веществ надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной, разработка комплексной технологии переработки сырья и разработка биологически активной добавки к пище и крема на основе полученных извлечений.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

1. Провести сравнительное изучение качественного и количественного состава основных групп БАВ яснотки белой и яснотки пурпурной, а именно: флавоноидов, фенольных кислот, БАВ липофильного комплекса (хлорофиллы,

каротиноиды, стерины) и полисахаридного комплекса (водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества).

2. Провести исследования по выбору экстрагентов и технологии экстрагирования БАВ липофильного комплекса и фенольных соединений из травы яснотки.

3. Определить параметры экстрагирования полисахаридов из шрота травы яснотки.

4. Разработать состав и технологию крема на основе БАВ травы яснотки.

5. Провести исследования ранозаживляющей активности разработанного крема.

6. Изучить в опытах "in vitro" сорбционную способность полисахаридов из травы яснотки.

7. Разработать состав и технологию биологически активной добавки к пище на основе полисахаридов из травы яснотки.

8. Разработать ФС на траву яснотки пурпурной, ТУ на крем и БАД к пище на основе травы яснотки.

Научная новизна

В результате сравнительного фотохимического исследования надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной показано, что оба вида по количественному содержанию хлорофиллов, каротиноидов, стеринов, флавоноидов, фенольных кислот, водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ сопоставимы и имеют близкий качественный состав.

Для травы яснотки белой и яснотки пурпурной при изучении закономерностей процесса двухфазного экстрагирования системами, состоящими из масел и спиртов, получены результаты, соответствующие ранее установленным данным для травы зверобоя, цветков ромашки, календулы и др., что обосновывает возможность расширения сферы применения двухфазного экстрагирования. Определен коэффициент распределения производных хлорофилла между масляной'и спиртоводной фазами для смеси сырья яснотки белой и яснотки пурпурной, который составил 11,58±0,82 и выходы суммы производных хлорофилла (81,25±4,10%) и суммы флавоноидов (60,40±3,40%).

Для стабилизации эмульсий, содержащих масляные и пропиленгликолевые экстракты с различными по природе БАВ из травы яснотки показано, что содержание эмульгаторов в составе эмульсии должно быть не менее 10% и соотношение эмульгаторов I и II рода составлять 20:80.

Показано наличие ранозаживляющей активности крема на основе БАВ травы яснотки на модели "линейных ран" у животных (крыс).

В опытах "in vitro" показана близкая сорбционная способность водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ из травы яснотки, сопоставимая с препаратом на основе пектовой кислоты.

Практическая значимость

На основании результатов фотохимического исследования надземной части яснотки пурпурной разработан проект ФС "Яснотки пурпурной трава ".

Технология масляного и спиртового экстрактов из надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной с применением двухфазной системы экстрагентов, состоящей из пальмового олеина и спирта этилового 70% апробирована на ЗАО «Фармаген» (акт апробации от 16.03.2009).

Определены оптимальные условия экстрагирования водорастворимых полисахаридов из шрота, полученного после выделения из травы яснотки БАВ липофильного комплекса и фенольных соединений: время предварительного, настаивания - 45 мин, соотношение фаз сырьё: экстрагент - 1:20; время проведения процесса - 3 ч; число циклов - 3; соотношение сконцентрированной вытяжки и спирта этилового 96% - 1:1. При этом выход полисахаридов от содержания их в шроте составляет 97%.

Разработана технологическая схема комплексной переработки травы яснотки, позволяющая получать экстракт, содержащий липофильные БАВ, экстракт суммы фенольных соединений и полисахаридный комплекс с высокими выходами БАВ от содержания в сырье.

Разработан состав и технология крема на основе БАВ травы яснотки и БАД к пище на основе полисахаридов из травы яснотки. Разработаны технологические схемы производства и-проекты ТУ на предлагаемый крем и БАД к пище.

Результаты исследования процесса экстрагирования травы яснотки белой и яснотки пурпурной двухфазной системой экстрагентов внедрены в учебный процесс СПХФА в методические указания к лабораторным работам "Технология фитохимических препаратов" в разделе комплексная переработка лекарственного растительного сырья с применением двухфазной системы экстрагентов, а также в лекционный курс по дисциплине "Основы технологии готовых лекарственных средств" (акт внедрения от 18.11 2008).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических

наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии "с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО СПХФА по теме "Изыскание новых технологий получения БАВ природного происхождения и разработка лекарственных препаратов нового поколения".

Апробация работы

Материалы диссертации прошли апробацию на IX Международном съезде «Фитофарм 2005» и конференции молодых ученых Европейского Фотохимического Общества «Растения и здоровье», Санкт-Петербург, 2005, межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием "Молодежь и наука: итоги и перспективы", Саратов, 2006, на Международном конгрессе "Традиционная медицина - 2007", Москва, 2007 г., на региональной научной конференции студентов и аспирантов СПХФА «Молодые ученые - практическому здравоохранению», Санкт-Петербург, 2007, на межрегиональной конференции Пятигорской фармацевтической академии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», Пятигорск, 2007, 2008, на межрегиональной

конференции Санкт-Петербургской химико-фармацевтической академии «Фармация из века в век», Санкт-Петербург, 2008, BMA "Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильных учреждениях", Санкт-Петербург, 2009 г, Межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Фармация в XXI веке: эстафета поколений», Санкт-Петербург, 2009 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 работ, из них 1 в журнале, входящем в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованных ВАК».

На защиту выносятся:

1. Результаты сравнительного фитохимического исследования основных групп биологически активных веществ надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной.

2. Результаты по разработке комплексной технологии переработки травы яснотки.

3. Обоснование и разработка состава и технологии крема на основе Б AB травы яснотки и изучение его ранозаживляющей активности.

4. Результаты изучения в опытах "in vitro" сорбционной способности полисахаридов из травы яснотки.

5. Обоснование и разработка состава и технологии биологически активной добавки к пище на основе полисахаридов из травы яснотки.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав- экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложений. Работа изложена на 181 страницах машинописного текста, содержит 46 таблиц и 36 рисунков. Список литературы включает 175 источников, в том числе 29 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В обзоре литературы подробно рассмотрены химический состав и биологическая активность видов рода Lamium L. - яснотки белой и яснотки пурпурной. Приведены данные по биологической активности таких групп веществ как хлорофиллы, каротиноиды, стерины, флавоноиды, фенольные кислоты, полисахариды. Освещены современные методы комплексной переработки лекарственного растительного сырья. Рассмотрены современные вспомогательные вещества, применяемые в производстве кремов и гранул.

Глава 2. Материалы и методы исследований

Объектами исследований служили образцы надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной собранные в весенне-летний период в 2004-2006 годах в фазу цветения растений. Образцы яснотки белой были собраны в Ленинградской области, яснотки пурпурной - в различных географических точках РФ: Ленинградская (образец №1), Свердловская (образец №2), и Ростовская область (образец ЖЗ).

Вспомогательные вещества, реактивы, использованные в работе, отвечали требованиям ГФ XII, ФС или соответствующей НД.

Обнаружение основных групп биологически активных веществ и изучение их качественного и количественного состава в надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной, а также в полученных извлечениях проводили методами: сисктрофотометрии (СФМ), ВЭЖХ, ГЖХ, хроматографии в тонких слоях сорбента (ТСХ) и на бумаге (БХ), с использованием специфических реакций и стандартных образцов.

Изучение реологических свойств эмульсий проводили с использованием ротационного вискозиметра ВгоокйеМ ОУ-И+ (Германия). Показатели качества крема определяли по ГОСТ 29188.0-91,29188.2-91,29188.3-91, МУК 4.2.801-99.

Показатели качества гранул определяли по ГФ XI.

Фармакологические исследования проводили в соответствии с Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2005.

Статистическую обработку результатов экспериментов проводили в соответствии с требованиями ГФ XI.

Глава 3. Сравнительное фитохимичсское изучение яснотки белой и яснотки

пурпурной

Обнаружение основных групп биологически активных веществ

В связи с тем, что качественный и количественный состав БАВ растительного сырья зависит от условий произрастания, проводили скрининговый фитохимический анализ трех образцов сырья яснотки пурпурной, собранных в различных областях РФ, параллельно с исследованием травы яснотки белой.

В результате качественного анализа надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной (таблица 1) установлено, что исследуемые образцы накапливают флавоноиды, фенольные кислоты, иридоиды, полисахариды, а также незначительные количества стероидных сапонинов и эфирного масла. В образцах сырья яснотки пурпурной, в отличие от образца яснотки белой, азотсодержащих соединений не обнаружено.

Таблица 1 - Результаты качественного фитохимического анализа надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной

Группа БАВ Яснотка белая Яснотка пурпурная

образец № 1 образец № 2 образец № 3

Сапонины ± ± ± ±

Антраценпроизводные - - -

Фенольные кислоты + + + +

Флавоноиды + + + +

Иридоиды + + + +

Азотсодержащие соединения ± - -

Эфирные масла ± ± ± ±

Кардиотонические гликозиды - - - -

Дубильные вещества - - - ■ -

Кумарины - - - -

Полисахариды + + + +

Примечание: + - обнаружены, ± - обнаружены в незначительном количестве, прочерк означает, что группа соединений не обнаружена.

Изучение качественного состава и количественного содержания некоторых групп биологически активных соединений

Изучение БАВ липофильного комплекса (хлорофиллы, каротиноиды, стерины)

В результате определения качественного состава основных пигментов (хлорофиллов и каротиноидов) методом ТСХ в системе петролейный эфир-ацетон 7:3 установлено наличие каротиноидов (по характерному окрашиванию в видимом и УФ-свете до и после обработки хроматограм фосфорно-молибденовой кислотой) и не менее 9 соединений, отнесенных к производным хлорофилла (по характерной окраске в видимом и ультрафиолетовом свете) и значениям Яг (рисунок 1). Спектры элюированных пятен, отнесенных к производным хлорофилла, полученные спектрофотометрическим методом имели максимумы при длинах волн 410±2 и 668±2 нм.

Качественное содержание стеринов в хлороформном извлечении из сырья яснотки белой и яснотки пурпурной определяли методом ТСХ после обработки хроматограм серной кислотой 50%. Было обнаружено пять пятен отнесенных к соединениям стероидной и тритерпеноидной природы.

Количественное содержание производных хлорофилла определяли спектрофотометрическим методом при длине волны 668±2 нм в пересчете на феофитин А (Мельникова, 2004). Содержание суммы каротиноидов определяли в пересчете на р-каротин спектрофотометрическим методом при длине волны 450±2 нм с использованием стандартного раствора калия бихромата (Ветров, 1989).

Рисунок 1 — Схема ТСХ хлороформного извлечения образцов яснотки белой и яснотки пурпурной Условия хроматографирования:

пластины "8Пи1о1 ЦУ 366", система растворителей: петролейный эфир: ацетон -7:3

Детекция: в видимом свете, в УФ свете (Х=366 нм).

Примечание: А-образец яснотки белой, образцы яснотки пурпурной: Б — №1, В — №2, Г - №3,1 - каротиноиды

Сумму стеринов в пересчете на (3-ситостерин определяли спектрофотометрическим методом при длине волны 536±3 нм (Ожигова, 2003). Результаты определения количественного содержания суммы производных хлорофилла, каротиноидов, стеринов представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Определенные компонентов липофильного комплекса яснотки белой и яснотки пурпурной_____

Компонент Яснотка белая Образец яснотки пурпурной

№1 | №2 №3

Содержание, %

Сумма липофильных 4,5±0,3 5,6±0,3 6,4±0,3 5,4±0,3

экстрактивных веществ

в ней:

хлорофиллы 0,433±0,022 0,424±0,021 0,239±0,012 0,221±0,010

каротиноиды 0,041±0,002 0,0190±0,001 0,010±0,001 0,011±0,001

стерины 1,250±0,090 1,370±0,110 0,970±0,050 1,120±0,050

в том числе:

р-ситостерин 0,140±0,005 0,080±0,004 0,070±0,004 0,050±0,003

При качественном анализе стеринов методом ТСХ один из компонентов, содержащихся в наибольшем количестве, был идентифицирован как р-ситостерин в присутствии стандартного образца. Количественное содержание Р-ситостерина определяли методом ТСХ-денситометрии в хлороформных извлечениях из надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной по разработанной методике (Петухова и др., 2005). Для этого предварительно осуществляли выбор условий экстрагирования на образце яснотки белой. В результате эксперимента были установлены следующие оптимальные параметры экстрагирования сырья методом мацерации при нагревании: степень измельчения сырья - 1-2 мм, соотношение сырья и экстрагента - 1:50, время экстрагирования - 15 мин,

кратность экстрагирования - 3 раза. В выбранных условиях была проведена оценка содержания Р-ситостерина в 5 образцах одной партии сырья яснотки белой. Содержание р-ситостеринэ составляет 0,140 ± 0,007 %.

Результаты статистической обработки полученных данных показали, что ошибка единичного определения при доверительной вероятности 95% находится в пределах 3,5%. С использованием разработанной методики было определено содержание Р-ситостерина в образцах яснотки пурпурной (таблица 2).

Изучение соединений фенольной природы (флавоноиды и фенольные кислоты)

Определение качественного состава и количественного содержания фенольных кислот в образцах надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной проводили методом ВЭЖХ на колонках с обращснно-фазовым сорбентом с использованием эшоента: уксусная кислота 3% - ацетонитрил. Результаты исследования представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Содержание фенольных кислот и суммы флавоноидов в надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной_

Фенольные кислоты Содержание фенольных кислот, в % (в пересчете на абсолютно сухое сырье)

Образец яснотки белой Образцы яснотки пурпурной

1 2 3

Галловая 0,002 0,01 0,02 -

Хлорогеновая 0,002 0,02 0,04 -

Кофейная - 0,02 0,04 -

Ванилиновая - - - 0,01

Сиреневая 0,090 0,20 0,11 0,07

п-гидроксикоричная 0,21 - - 0,08

Феруловая 0,58 0,72 1,25 0,13

Вератровая -0,09 0,03 0,05 -

Салициловая 0,04 - - -

Общее содержание фенольных кислот 1,00±0,05 1,00±0,05 1,50±0,07 0,41±0,02

Содержание суммы флавоноидов 1,б8±0,06 1,46±0,07 1,08±0,05 0,87±0,04

Примечание: прочерк означает отсутствие компонента. Ошибка единичного определения фенольных кислот при доверительной вероятности 95% не превышала 5,0%.

Установлен близкий качественный состав фенольных кислот для яснотки белой и образцов № 1 и № 2 яснотки пурпурной. Различия в качественном составе и количественном содержании фенольных кислот в образце №3 по сравнению с образцами №1 и №2 можно объяснить влиянием географических факторов и условий произрастания.

В результате анализа фенольных соединений методом двумерной бумажной хроматографии в системах растворителей бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5) и уксусная кислота 15% в образце яснотки белой определено не менее 5 и в образцах яснотки пурпурной не менее 4 соединений флавоноидной природы. Данные соединения по характерной флуоресценции в УФ-свете до и после обработки хроматограмм специфическими реактивами отнесены к производным флавонола, одно из них совпадало со стандартным образцом рутина (обнаружено во всех исследуемых образцах).

Количественное содержание флавоноидов в образцах сырья яснотки белой и яснотки пурпурной проводили методом дифференциальной СФМ по реакции комплексообразования с алюминия хлоридом при длине волны 405±2 нм. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в образце яснотки белой составило 1,68±0,06%, а в образцах яснотки пурпурной - от 0,87±0,04 % до

I,46±0,07% (таблица 3).

Изучение углеводного состава яснотки белой и яснотки пурпурной

Выделение водорастворимых полисахаридов (ВРГ1С) и пектиновых веществ (ПВ) изучаемых растений проводили после предварительной обработки сырья последовательно хлороформом и спиртом этиловым 96%. Содержание углеводов в полисахаридах, определенное СФМ методом по реакции с фенол-серным реактивом составило для образцов яснотки пурпурной от 55,5±2,9% до 68,2±3,5% и для яснотки белой 59,2±3,0% в пересчете на галактозу. Содержание белка, рассчитанное по азоту в образцах полисахаридов составило от 6,6±0,3 до

II,0±0,6%. Содержание полисахаридов в образцах сырья яснотки приведены в таблице 4.

Таблица 4 - Содержание полисахаридов в надземной части яснотки белой и

Соединение Образец яснотки белой Образцы яснотки пурпурной

№1 №2 №3

ВРПС 14,72±0,70 13,86±0,71 11,86±0,55 15,51±0,78

ПВ 6,29±0,29 5,51±0,25 4,70±0,22 4,20±0,20

Качественный моносахаридный состав выделенных полисахаридов методом ТСХ после гидролиза их трифторуксусной кислотой, показал, что мономерными звеньями всех ВРПС являются глюкоза, галактоза, арабиноза, рамноза и галактуроновая кислота. В ПВ, помимо вышеуказанных моносахаров, также присутствует глюкуроновая кислота.

Методом ГЖХ определено количественное содержание идентифицированных нейтральных мономерных единиц в составе гидролизатов ВРПС и ПВ (таблица 5). Основными компонентами ВРПС и ПВ являются глюкоза, арабиноза, галактоза, рамноза. Также во всех образцах сырья яснотки пурпурной (за исключением ВРПС образца №2) в небольшом количестве присутствует фукоза (до 1,6%).

Таблица 5 - Содержание идентифицированных мономерных единиц (в % по отношению к суммарному количеству) в составе полисахаридов в надземонй части яснотки белой и яснотки пурпурной___

Образец Поли- Компонент

сахарид Glc Ara Gal Rha Fuk Xyl

№1 ВРПС 16,0 14,4 13,3 12,4 0,81 0,6

а § ПВ 25,3 35,2 7,7 8,6 1,6 -

w Cd Р р. №2 ВРПС 31,8 19,5 17,3 9,4 - -

« В О р. ПВ 42,5 21,3 17,9 5,0 0,4 0,2

&S & В №3 ВРПС 17,5 14,9 9,8 6,7 0,7 -

ПВ 23,1 21,4 14,9 9,0 1,2

Яснотка ВРПС 32,7 28,4 17,9 11,8 - -

белая ПВ 30,6 32,8 12,3 8,6 -

Примечание: Glc - глюкоза, Ara - арабиноза, Gal - галактоза, Rha - рамноза, Fuk -фукоза, Ху1 - ксилоза. Прочерк означает отсутствие компонента.

По данным проведенного скринингового фотохимического исследования образцов надземной части яснотки пурпурной показан близкий компонентный состав БАВ, количественное содержание которых колеблется в зависимости от условий произрастания.

В результате проведенного фармакогностического анализа образцов сырья яснотки пурпурной разработаны методы идентификации сырья и показатели качества, включенные в проект ФС "Яснотки пурпурной трава". Товароведческий анализ пяти партий сырья яснотки пурпурной позволил установить следующие числовые показатели: содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 1,4%, содержание суммы хлорофиллов в пересчете на феофетин А не менее 0,30%, содержание водорастворимых полисахаридов не менее 12,0%, содержание пектиновых веществ не менее 4,0%, потеря в массе при высушивании не более 12%, золы общей не более 8%, золы, нерастворимой в 10% HCl, не более 1%, частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 5 мм, не более 12%, стеблей, в том числе отделенных при анализе, не более 30%, частей травы, потемневших, пожелтевших и поврежденных вредителями, не более 4%, органической примеси не более 1%, минеральной примеси не более 1%.

При сравнительном фотохимическом анализе образцов яснотки белой и яснотки пурпурной показано, что по содержанию основных групп БАВ: флавоноидов, фепольных кислот, стеринов, водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ они близки. Различия в количественном содержании пигментов (хлорофиллов, каротиноидов) можно объяснить климатическими факторами и влиянием условий произрастания образцов сырья яснотки (Калер, 1977, Любименко,1963).

Достаточно высокое содержание производных хлорофилла, флавоноидов, фенольных кислот, водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ определяет перспективность использования яснотки белой и яснотки пурпурной в

качестве источников лекарственного сырья для медицинского применения. Л близкий состав БАВ позволяет рассматривать возможность применения указанных видов яснотки как взаимозаменяемых при получении препаратов на их основе.

Для дальнейших исследований была взята смесь сырья яснотки белой и яснотки пурпурной в равном соотношении (трава яснотки).

Глава 4. Экстрагирование БАВ из травы яснотки Экстрагирование липофильного комплекса БАВ и фенольных соединений травы яснотки

Присутствие в траве яснотки белой и яснотки пурпурной достаточно высоких количеств хлорофиллов, флавоноидов и фенольных кислот, обладающих способностью оказывать ранозаживляющее, противовоспалительное, антимикробное, капилляроукрепляющее, антиоксидантное,

противоаллергическое, регенерирующее, антисептическое действие, стимулировать регенерацию и эпитслизацию поврежденной кожи, делают актуальной разработку ранозаживляющего крема на их основе.

В качестве экстрагентов липофильного комплекса БАВ и фенольных соединений из травы яснотки были изучены двухфазные системы экстрагентов (ДСЭ), состоящие из двух несмешивающихся растворителей различной полярности (масло и спиртоводные смеси) (Вайнштейн, 1998, Каухова, 2007). ДСЭ позволяют за один технологический цикл получить сразу два извлечения, содержащие полярные и неполярные БАВ с высоким выходом, которые могут быть введены в крем как активные компоненты.

В составе ДСЭ для травы яснотки в качестве неполярной фазы было изучено жидкое растительное масло (подсолнечное) и твердые растительные масла, такие как: масло какао, кокосовое и пальмовое (пальмовый олеин). В качестве полярной фазы в ДСЭ применяли спирт этиловый 40% и 70%, а также пропиленгликоль 80% (Хаззаа, 2004, Демченко, 2006).

Экстрагирование БАВ из травы яснотки с применением ДСЭ, состоящей из жидкого растительного масла и спирта этилового

Первоначально в качестве экстрагента травы яснотки была выбрана ДСЭ, состоящая из неполярной фазы - масла подсолнечного и полярной фазы - спирта этилового 40% или 70%. Экстрагирование проводили методом мацерации при температуре 75±5°С в течение 1,5 ч (Мельникова, 2000). В масляной фазе (МФ) определяли содержание суммы производных хлорофилла (СПХ) в пересчете на феофитин А спектрофотометрическим методом при длине волны 668±2 нм и в спиртоводной (СВФ) - суммы флавонодов (СФ) в пересчете на рутин при длине волны 405±2 нм.

При соотношении сырья яснотки к масляной фазе и 70% спиртоводной фазе 1:10:10 были получены выходы суммы флавоноидов в СВФ 60,40±3,40% и производных хлорофилла в МФ - 81,25±4,40 и СВФ - 6,48±0,32% от содержания в сырье. При этом коэффициент распределения суммы производных хлорофилла между МФ и СВФ для смеси ■цэавы яснотки белой и яснотки пурпурной составил

И,6±0,8, т.е. основное количество производных хлорофилла переходит при экстрагировании в МФ.

Одним из факторов, оказывающих важное влияние на выход БАВ в извлечения, является объем экстрагента. Однако при увеличении объема МФ происходит разбавление извлечения, что нецелесообразно для масляных извлечений, которые невозможно подвергнуть концентрированию. Так при увеличении объема МФ в ДСЭ по отношению к сырью яснотки от 1:10 до 1:30 происходит увеличение выхода СПХ в масляное извлечение на 5,6%, при этом концентрация БАВ снижается в 3 раза (рисунок 2).

100 т

Рисунок 2 — Выходы СПХ в масляные и СФ в спиртоводные извлечения

1:10:10

1:20:20

1:30:30

Я СПХ, ДСЭ с этанолом 70% ® СПХ, ДСЭ с этанолом 40%

1:10:20 1:10:30 ЛРС:\/мф:\/свф СФ, ДСЭ с этанолом 70% СФ, ДСЭ с этанолом 40%

Увеличение объема спиртоводной фазы в ДСЭ по отношению к траве яснотки от 1:10 до 1:30 приводит к увеличению выхода флавоноидов на 8,9% при постоянном объеме МФ (рисунок 2). При одновременном возрастании объема МФ и СВФ выходы флавоноидов в СВФ не отличаются от выходов, полученных при постоянном объеме МФ. Выходы производных хлорофилла и флавоноидов в извлечениях ДСЭ, полученные со спиртом этиловым 40% в отличие от экстрагирования ДСЭ со спиртом 70% значительно уменьшились и составили для СПХ от 65,74±2,7 до 75,46±4,42% и СФ от 50,02±2,68 до 58,38±2,95% (рисунок 2).

В спиртоводных извлечениях методом ТСХ обнаружены флавоноиды, фенольные кислоты и производные хлорофилла. В масляном извлечении по результатам ТСХ не менее 9 пятен и спиртоводном не менее 3 пятен отнесены к производным хлорофилла по характерной окраске в видимом и ультрафиолетовом свете, а также по значениям

Результаты, полученные для травы яснотки при двухфазном экстрагировании, согласуются с полученными ранее для травы зверобоя, цветков календулы, ромашки и др. растительных объектов (Демченко, 2006, Мельникова, 2000, Хаззаа, 2004).

При выборе соотношения полярной и неполярной фаз в ДСЭ для экстрагирования комплекса БАВ травы яснотки большое значение имеет как высокий выход, так и сохранение высоких концентраций веществ в извлечениях, поскольку полученные экстракты вводяться в крем как активные компоненты. Увеличение объема МФ в ДСЭ нецелесообразно в связи с незначительным

возрастанием выхода и разбавлением извлечения. Увеличение объема СВФ в ДСЭ хотя и приводит к росту выхода СФ в полярную фазу, но требует концентрирования. Поэтому для экстрагирования БАВ гравы яснотки целесообразно применить ДСЭ с соотношением полярной и неполярной фаз 1:10:10, которая позволяет получать достаточно концентрированные извлечения с высоким выходом БАВ.

Экстрагирование БАВ- травы яснотки с применением ДСЭ, состоящих из твердых растительных масел и спирта этилового

В качестве экстрагентов липофильных БАВ травы яснотки в составе ДСЭ были исследованы твердые масла: масло какао, кокосовое, пальмовое (пальмовый олеин). В качестве полярной фазы в ДСЭ применяли спирт этиловый 70%. Соотношение масла и спирта этилового 70% в ДСЭ на основании проведенных исследований с подсолнечным маслом также выбрали по отношению к сырью 1:10:10. Выходы СПХ в масляные и СФ в сиирговодные извлечения при экстрагировании маслами различной природы практически не различаются (рисунок 3).

^100

Рисунок 3 - Выходы СПХ в масляные и СФ в спиртоводные извлечения при экстрагировании травы

яснотки ДСЭ, состоящими из твердых растительных масел и спирта этилового 70%

Косовое масло: Какао масло: спирт 70% спирт 70%

Пальмовый олеин:спирт 70%

^ Выход СПХ в масляное извлечение

В Выход СФ в спиртоводное извлечение

Установлено, что природа изучаемых масел не влияет на степень извлечения БАВ травы яснотки при выбранных условиях экстрагирования. При этом выходы СПХ (от 75,46±3,9% до 80,56±4,1%) в масляную фазу для изученных твердых масел имели близкое значение к выходам при применении жидкого масла в составе ДСЭ.

Экстрагирование БАВ травы яснотки с применением ДСЭ. состоящих из твердых растительных масел и пропиленгликоля

В качестве полярной фазы в составе ДСЭ при экстрагировании травы яснотки максимальный выход получен для спирта этилового 70%. Однако применение в составе крема спирта этилового не представляется возможным, т.к. это может приводить к разрушению эмульсии. Поэтому в качестве полярной фазы в ДСЭ был изучен раствор пропиленгликоля, который может быть непосредственно введен в крем. Концентрация пропиленгликоля была выбрана 80%, т.к. такой растворитель позволяет достичь наибольшего выхода СФ в полярную фазу. Соотношение масла и пропиленгликоля 80% по отношению к сырью составило 1:10:10.

При применении пропиленгликоля 80% в качестве полярной фазы в составе ДСЭ были получены низкие выходы СПХ в масляные извлечения от 61,56±3,1% до 66,9±3,4% (рисунок 4), что, вероятно, связано с высокой вязкостью и температурой кипения пропиленгликоля в отличие от спирта этилового и, как следствие, худшими по сравнению со спиртом этиловым десорбирующими и диффузионными свойствами. . .. .

Косовое Какао масло: Пальмовый пропиленгликоля 80% масло: ПГ 80% ПГ 80% олеин: ПГ 80%

^ Выход СПХ в масляное извлечение Е2 Выход СФ в ПГ извлечение

Экстрагирующие способности пропиленгликоля 80% (выход СПХ от 55,7±2,8% до 59,06±3,0%) и спирта этилового 70% в качестве полярной фазы в ДСЭ по отношению к СФ травы яснотки находится на одном уровне. Качественный анализ спиртоводных и проггиленгликолевых извлечений методом ТСХ в системе растворителей бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5) показал близкий состав фенольных соединений для обоих извлечений.

На основании результатов проведенных исследований по экстрагированию липофильных БАВ и фенольных соединений травы яснотки разработана технология, которая заключается в проведении двухфазного экстрагирования с спиртом этиловым 70% в качестве полярной фазы, разделением фаз, упариванием спиртоводной фазы до сухого остатка и растворением сухого остатка в пропиленгликоле. Такой подход позволил получить масляный и пропиленгликолевый экстракты с достаточно высоким содержанием БАВ для применения их в технологии крема.

Экстрагирование полисахаридов из шрота травы яснотки

Экстрагирование водорастворимых полисахаридов

После экстрагирования липофильных БАВ и фенольных соединений из травы яснотки остается значительное количество шрота, содержащего водорастворимые полисахариды и пектиновые вещества.

Экстрагирование ВРПС из шрота проводили водой очищенной методом мацерации при температуре 95±5°С. При выделении ВРПС изучали влияние на выход таких параметров как: время предварительного настаивания, соотношение сырьё и экстрагент, время экстрагирования, количество циклов, соотношение упаренной вытяжки и спирта этилового 96% для осаждения полисахаридов.

На основании проведенных исследований установлены параметры экстрагирования полисахаридов из шрота травы яснотки, а именно: время предварительного настаивания - 45 мин, соотношение сырья и экстрагента - 1:20;

пропиленгликолевые извлечения при экстрагировании травы яснотки ДСЭ, состоящими из твердых растительных масел и

масляные и СФ в

Рисунок 4 - Выходы СПХ в

время проведения процесса - 3 часа; число циклов - 3; соотношение упаренной вытяжки и спирта этилового 96 % — 1:1.

При этих условиях выделены водорастворимые полисахариды с выходом 97±4,6% от содержания в шроте.

Экстрагирование пектиновых веществ

Шрот, оставшийся после получения ВРПС из травы яснотки, использовали для выделения ПВ. Шрот- экстрагировали раствором щавелевой кислоты и аммония оксалата двукратно методом мацерации при температуре 95±5°С, соотношении шрота и экстрагента - 1:20 и времени проведения процесса 1 час. Выход ПВ по отношению к массе шрота составляет 89,0±4,5%.

Глава 5. Разработка состава крема на основе БАВ яснотки белой и яснотки пурпурной и изучение его ранозаживляющей активности

Разработка состава крема

В результате экстрагирования травы яснотки белой и яснотки пурпурной был получен масляный экстракт, содержащий комплекс липофильных БАВ (производные хлорофилла, каротиноиды, стерины) и пропиленгликолевый экстракт, содержащий флавоноиды и фенольные кислоты. Для разработки крема, содержащего масляный и пропиленгликолевый экстракты с различными по природе БАВ, необходимо изучить влияние эмульгаторов на стабильность эмульсии.

Для стабилизации эмульсий были исследованы эмульгаторы, представляющие собой производные эфиров высших жирных кислот и глюкозы: ПЭГ-20 метилглюкозид сесквистеарат (С1исата1с 88Е-20) - эмульгатор I рода, метилглюкозид сесквистеарат (01иса1е ББ) - эмульгатор II рода. Также в состав крема для стабилизации вводили эмульгатор II рода - моноглицериды дистиллированные (МГД) и цинка стеарат.

Эмульсии при различных соотношениях эмульгаторов в смеси поверхностно-активных веществ (ПАВ) оценивали по показателям коллоидной (КС) и термической (ТС) стабильности. Результаты определения КС и ТС (объем не расслоившейся эмульсии) в зависимости от содержания эмульгаторов в смеси поверхностно-активных веществ представлены на рисунке 5.

При содержании в смеси ПАВ эмульгаторов I и II рода в равном соотношении и варьирований между собой эмульгаторов II рода, МГД от 40 до 10% и С1иса1е ББ от 10 до 40%, КС не превышала 80%, а ТС - 70% (рисунок 5 а).

Уменьшение в смеси ПАВ эмульгатора I рода С1исаша1е 88Е-20 от 40 до 20% и увеличение эмульгатора II рода С1иса1е ББ от 40 до 60% при постоянном значении эмульгатора П рода МГД=20% (рисунок 5 б), позволило увеличить ТС от 75 до 85% и КС от 80 до 100%. Состав, при котором КС достигала 100%, содержал ПАВ в соотношении 20:20:60 % соответственно С1исата1е 88Е-20: МГД: 01иса1е ББ. Для этого состава варьировали соотношения эмульгаторов II рода МГД от 20 до 40% и Иисаге ББ от 60 до 40%. При этом были получены коллоидно- и термически стабильные составы при содержании эмульгаторов в смеси ПАВ 20:30:50% соответственно аисапийе Б8Е-20: МГД: 01иса1е 88.

(рисунок 5 в). Увеличение в смеси эмульгаторов II рода доли МГД на 10% за счет уменьшения доли С1иса1е Б8 приводло к снижению ТС системы до 80% и КС до 75% (рисунок 5 в). Также уменьшение в смеси ПАВ эмульгатора I рода 01исапше 88Е-20 на 10% при увеличении МГД на 10% приводило к понижению стабильности эмульсии (КС составила 70% и ТС - 50%).

■ ДО 20 . 30 40: . Фисйе 55.(11 рода), %

Щ Коллоидная стабил ьность ЭТермическая стабильность

50; 60

С1иса.1е55 (II рода),%

I Коллоидная стабильность 0 Термическая стабильность

61иса{е55 (».родаК %

1 Коллоидная стабильность ; ВТермическая.стабильнОСть:

В)

01исата1е Б БЕ 20 = 20%, МГД = 20-40%

а) б)

01исата1е 88Е-20 (I рода)=50%, 01исата1е 88Е-20 = 40-20%, МГД (II рода) = 40-10% МГД = 20%

Рисунок 5 - Зависимость коллоидной и термической стабильности эмульсии (объем не расслоившейся эмульсии) от содержания эмульгаторов I и II рода в смеси поверхностно-активных веществ.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что уменьшение доли эмульгаторов I рода в смеси ПАВ от 50% до 20% и соответственно увеличение эмульгаторов II рода до 80% способствует увеличению термической и коллоидной стабильности эмульсии. При этом во все полученные составы эмульсий вводили цинка стеарат в количестве равном 1%. Исключение из стабильного состава цинка стеарата приводило к снижению стабильности эмульсии.

Исследования по выбору соотношения эмульгаторов в смеси ПАВ проводили при содержании масляной фазы в составе эмульсии 30%, суммы эмульгаторов 12% и водной фазы 58% (соотношения фаз определены в результате предварительных экспериментов). Увеличение содержания масляной фазы до 35% в составе крема при разработанном соотношении эмульгаторов позволило сохранить стабильность эмульсии. Экспериментально было установлено, что при содержании пропиленгдиколя в эмульсиях не более 4% и суммы эмульгаторов не менее 10% получаются стабильные эмульсии.

На основании проведенных исследований разработан состав крема с БАВ травы яснотки (таблица 6).

Таблица 6 - Состав крема на основе БАВ травы яснотки

Компонент Содержание, %

Масляный экстракт травы яснотки 35

Пропиленгликолевый экстракт травы яснотки 4

Моноглицериды дистиллированные 3

Метилглюкозид-сесквистеарат 5

ПЭГ-20 метилглюкозид сесквистеарат - 2 -

Цинка стеарат 1

Метиловый, пропиловый, бутиловый, изобутиловый эфир параоксибензойной кислоты в 2-фенокси этаноле (консервант) 0,4

Бутилгидроксианизол (антиоксидант) 3,5* 10"J

Вода до 100

Исследования реологических параметров показали, что разработанный крем является тиксотропной системой, эффективная вязкость которой при скоростях сдвига от 0,034 до 3,4 с"1 находится в пределах оптимума консистенции.

В креме разработанного состава определено содержание БАВ: СПХ -15,40±0,75 мг% и СФ - 31,12 ±1,53 мг %. В результате хранения образцов крема по органолептическим показателям, рН эмульсии, коллоидной и термической стабильности крем сохранял в течение 14 месяцев хранения исходные показатели. Содержание СПХ сохранялось до 85,3±4,2%, СФ - 89,1 ±4,4%.

Изучение ранозаживляющей активности крема

Изучение ранозаживляющей активности образцов крема на основе БАВ травы яснотки белой и яснотки пурпурной проводили на модели "линейных кожных ран" на белых беспородных крысах самцах массой тела 150-180 г.

В качестве препарата сравнения был выбран 2% • масляный раствор хлорофшшшпта с известной ранозаживляющей активностью. Содержание суммы производных хлорофилла в хлорофиллипте в пересчете на феофетин А, определенное спектрофотометрическим методом при длине волны 668±2 нм, составило 13,5±0,7 мг%, что сопоставимо с содержанием суммы производных хлорофилла в исследуемом креме.

В результате проведенных исследований показано, что крем на основе БАВ яснотки белой и яснотки пурпурной обладает ранозаживляющей активностью сопоставимой с 2% масляным раствором хлорофиллипта.

Глава 6. Изучение сорбционной способности полисахаридов из травы яснотки и разработка состава и технологии гранул на их основе

Изучение сорбционной способности полисахаридов из травы яснотки

Сорбционную способность ВРПС и ПВ изучали относительно ионов никеля и меди.

Исследования сорбционной способности полисахаридов проводили при рН среды растворения (для ВРПС. рН 5,5±0,5; для ПВ рН 3,5±0,4), в среде искусственного желудочного (рН 2) и искусственного кишечного соков (рН 8).

Содержание ионов тяжелого металла (ТМ) определяли СФМ методом в комплексах с полисахаридами, после их отделения в виде образующегося геля, и в надосадочной жидкости: ионов никеля после реакции с диметилглиоксимом в присутствии йода при длине воЛны 480±5 нм, ионов меди с аммиаком концентрированным при длине волны 615±5 нм. Комплексы полисахаридов с никелем и медью получали добавлением к раствору полисахарида (ПС) раствора иона ТМ в массовом соотношении ПС: ион ТМ от 1:0,2 до 1:1.

Сорбционные способности полисахаридов (рассчитанные как количество ионов никеля в ммолях на г сорбента) в зависимости от исходного содержания (СИсх) ионов никеля в растворе, представлены на рисунке 6.

Установлено, что при рН среды растворения с ростом концентрации ионов никеля в растворе сорбционные способности полисахаридов стремятся к близким значениям и составляют для ВРПС 9,80±0,60 ммоль/г и для ПВ 10,60±0,65 ммоль/г.

В среде искусственного кишечного сока сорбционная способность для ВРПС и ПВ относительно ионов никеля имела несколько большее значение, чем при естественном рН системы и составляла соответственно 11,84±0,58 и 12,85±0,61 ммоль/г.

В среде искусственного желудочного сока (рН 2) не удалось оценить сорбционную способность полисахаридов, в связи с тем, что не происходило связывание никеля с выделением гелеобразного осадка. 12

I

х

"8

8 с о

О

Рисунок б -Сорбционная способность полисахаридов относительно ионов никеля при рН среды растворения

80 100 Спех, ммоль

Сорбционная способность полисахаридов относительно ионов меди при рН среды растворения составила 6,98±0,35 ммоль/г для ВРПС и 8,40±0,51 ммоль/г для ПВ.

Наличие структурных изменений в функциональных группировках полисахаридов при связывании ионов никеля и меди оценивали по данным ИК-спектроскопии. Результаты ИК-спектроскопии свидетельствуют, что основными

группами ВРПС и ПВ ясноток, участвующими в комплексообразовании с ионами никеля и меди являются карбоксильные и гидроксильные группы полисахаридов.

Сорбционную способность выделенных полисахаридов сравнивали с препаратом, содержащим пектовую кислоту (БАД к пище "Зоостерин-ультра"). Сорбционная способность препарата сравнения, определенная по способности связывать ионы меди при рН среды растворения, составляет 10,70^0,47 Си2+ммоль/г.

В результате составления материального баланса процесса сорбции на примере ионов меди было показано, что высокая сорбционная способность полисахаридов связана не только с образованием комплексов полисахарида с тяжелыми металлами и, как следствие, выпадением гелсобразного осадка, но и включением в объем образующейся структуры значительного количества собственно растворов солей тяжелых металлов.

Таким образом, для ВРПС и ПВ, выделенных из травы яснотки, показана близкая сорбционная способность их относительно ионов никеля и меди, сопоставимая с препаратом сравнения на основе пектовой кислоты, что обосновывает возможность создания энтсросорбента на их основе.

Разработка состава и технологии гранул с полисахаридами из травы яснотки

Для разработки состава и технологии гранул с полисахаридами были изучены физико-химические и технологические свойства смсси порошков полисахаридов, состоящей из ВРПС и ПВ в соотношении 2:1, что соответствует их содержанию в сырье (таблица 7).

По результатам исследований технологических свойств изучаемый порошок относится к легким порошкам, обладает удовлетворительной сыпучестью. Фракционный состав в значительном количестве представлен мелкой фракцией -от 0,25 до 0,1 мм.

Таблица 7 - Технологические свойства порошка полисахаридов

Форма частиц Фракционный состав, % о Т5 Л Й Насыпная масса, г/см3 2 о И ш Й г ° к „ 8 § 1 1

аморфная <2>1 мм <1> 0,5 мм А 1 еГ V <4 О <0,25>0,1 мм 2 % г** о" V и V Й* Я и ¡1 и И 2 >> * И а 5 « В 8" & § я £ »

- 6,50*0,31 54,50±2,60 34,50±1,70 1,50*0,01 3,3±0,2 0,60± 0,05 32-33° 6,8± 0,35

При изучении гигроскопичности установлено, что порошок полисахаридов поглощает значительное количество влаги, до 14% при 75,5% влажности (рисунок 7).

■ПС

■ПС+лактоза 1:2 •

•ПС+лактоза 1:1 ■ПС+лактоза 1:3

Рисунок 7 - Результаты изучения

гигроскопичности порошка полисахаридов и смеси его с лактозой при влажности 75,5%

125 150 Время, ч

Данные, полученные в результате проведенных исследований, свидетельствуют о целесообразности проведения гранулирования порошка полисахаридов.

Были изучены технологические свойства веществ, позволяющих снизить гигроскопичность порошка полисахаридов: лактозы разных марок и производителей (лактоза 80 mesh, лактоза 200 mesh, лактоза моногидрат) и микрокристаллической целлюлозы. В качестве наполнителя была выбрана лактоза марки 80 mesh в связи с близкими технологическими характеристиками с порошком полисахаридов.

Для выбора содержания лактозы в гранулах исследовали гигроскопичность смесей порошков полисахарида и лактозы в соотношениях 1:1,1:2,1:3 (рисунок 7). Установлено, что для смесей полисахарид: лактоза во всех соотношениях достигается близкие значения уменьшения гигроскопичности, почти в 2,5 раза в отличие от порошка полисахаридов. Поэтому для гранулирования был выбран состав с равным количеством порошка полисахаридов и лактозы.

Гранулы из порошка полисахаридов, полученные методом влажного гранулирования продавливанием, оценивали по показателям: фракционный состав, сыпучесть, распадаемость.

При гранулировании в качестве связующих веществ изучали спирт этиловый 96% и в различных концентрациях водные растворы связующих веществ, таких как метилцеллюлоза (МЦ) и поливинилпироллидон (ПВП) и их смеси (таблица 8).

На основании полученных данных в качестве связующего при гранулировании порошка полисахаридов может быть рекомендована смеси 3% раствора МЦ с 3% раствором ПВП, т.к. полученные гранулы обладали технологическими свойствами, удовлетворяющими требованиям ГФ XI.

Таблица 8 - Технологические характеристики гранул с полисахаридами из травы яснотки___

Увлажнитель Фракционный состав, % Сыпучесть, г/с Распадаемость, мин

<3>1 мм <1> 0,5мм <0,5>0,25 мм <0,25 мм

96% спирт этиловый 1,90±0,10 9,0б±0,51 42,72±2,22 36,58±1,91 5,4±0,30 3±0,14

3% раствор МЦ 26,00±0,61 21,50±0,80 52,50±2,15 1,00±1,30 2,65±0,34 >15

3% раствор ПВП 54,5±3,10 30,5±1,49 13,5±0,70 1,5±0,45 5,б±0,30 >15

5% раствор ПВП 43,50±2,20 40,50±2,00 11±0,60 5,00±0,20 6,7±0,34 > 15

3%МЦ + 3% ПВП (1:1) 59,20±2,9б 23,18±1,20 14,61±0,73 3,01А0,16 9,6±0,50 13,3±0,7

3% МЦ + 5% ПВП (1:1) 65,5±3,30 19,1±1,00 13,4б±0,70 1,94±0,10 10,2±0,53 10,22±0,5

На основании проведенных исследований разработан состав (таблица 9) и технология гранул с полисахаридами из травы яснотки.

Таблица 9 - Состав гранул с полисахаридами из травы яснотки

Компонент Соде ржание

г %

Полисахариды из травы яснотки 1,00 48

Лактоза 1,00 48

МЦ 0,05 2

ПВП 0,05 2

Итого: 2,10 100

Для определения сроков годности разработанных гранул 5 серий были заложены на хранение. При этом критериями оценки качества гранул служили: внешний вид, содержание полисахаридов, фракционный состав, распадаемость, потеря в массе при высушивании. Показано, что анализируемые гранулы не изменяли свойств в течение 2 лет хранения в естественных условиях. На гранулы с полисахаридами из травы яснотки разработаны ТУ.

Изучение сорбционной способности гранул с полисахаридами из травы

яснотки

При изучении сорбционной способности гранул с полисахаридами из травы яснотки предварительно было установлено отсутствие сорбционной способности лактозы, входящей в состав гранул в качестве наполнителя. Сорбционная способность гранул с полисахаридами относительно ионов никеля и меди составила 4,60±0,29 ммоль/г и - 3,60±0,22 ммоль/г соответственно.

выводы

1. Результаты сравнительного фитохимического исследования надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной, свидетельствуют о близком качественном составе основных групп БАВ, таких как хлорофиллы, каротиноиды, стерины, флавоноиды, фенольные кислоты, полисахариды; количественное содержание БАВ колеблется в зависимости от условий произрастания. В составе липофильных комплексов надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной впервые определено содержание суммы хлорофиллов, каротиноидов, стеринов. В результате проведенного фармакогностического анализа разработаны методы идентификации сырья и показатели качества, включенные в проект ФС "Яснотки пурпурной трава".

2. Показано, что экстрагирование травы яснотки целесообразно проводить двухфазной системой экстрагентов, состоящей из масла растительного и спирта этилового 70% при соотношении сырья к объемам фаз 1:10:10, т.к. такая система позволяет получить достаточно концентрированные извлечения для дальнейшего введения их в крем. Установлено, что масло подсолнечное и твердые масла -кокосовое, масло какао, пальмовый олеин - обладают близкой экстрагирующей способностью по отношению к липофильной фракции травы яснотки в качестве масляной фазы при двухфазной экстракции.

3. Для увеличения выхода производных хлорофилла в масляную фазу при двухфазном экстрагировании травы яснотки до 81% целесообразно применять спирт этиловый 70%> в качестве полярной фазы. Для получения пропиленгликолевого экстракта, содержащего флавоноиды и фенольные кислоты, целесообразно спиртоводное извлечение после упаривания до сухого остатка, вводить в водный пропиленгликоль.

4. Определены параметры экстрагирования водорастворимых полисахаридов из шрота, полученного после двухфазного экстрагирования травы яснотки: время предварительного настаивания -45 мин, соотношение сырьё: экстрагент - 1:20; время проведения процесса - 3 ч; число циклов - 3; соотношение сконцентрированной вытяжки и спирта этилового - 1:1. При этом выход полисахаридов от содержания их в шроте составляет 97%.

5. Разработан состав и технология крема на основе БАВ травы яснотки. Показано, что стабильные эмульсии на основе масляного и пропиленгликолевого экстрактов, содержащих различные по природе БАВ из сырья яснотки белой и яснотки пурпурной, образуются при содержании в них суммы эмульгаторов не менее 10%. При этом соотношение эмульгаторов I и II рода составляет 20:80. Оптимальная стабильность достигнута при сочетании цинка стеарата и эмульгаторов I и II рода: эмульгаторов на основе эфиров глюкозы и высших жирных кислот и МГД. На крем с БАВ травы яснотки разработан проект ТУ,

6. Установлено, что крем на основе БАВ травы яснотки обладает ранозаживляющей активностью сопоставимой с 2% масляным раствором хлорофиллипта.

7. Показаны близкие сорбционные способности водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ из травы яснотки относительно ионов никеля и меди. Установлено, что сорбционная способность полисахаридов

связана как с образованием комплексов с тяжелыми металлами, так и включением в объем гелеобразной структуры раствора солей металлов.

8. Разработан состав и технология БАД к пище в виде гранул на основе полисахаридов из травы яснотки. Оптимальный состав гранул с полисахаридами следующий: смесь полисахаридов - 48%; лактоза - 48%; МЦ - 2% и ПВП - 2%. На гранулы с полисахаридами разработан проект ТУ.

Список публикаций

1. Петухова, Н.М. Количественное определение В-ситостерина в надземной части яснотки белой Lamium album L. / Н.М. Петухова, B.C. Березина, А.Б. Вожева, М.А. Буракова // Материалы ЕХ Международного съезда «Фитофарм 2005» и конференции молодых ученых Европейского Фитохимического Общества «Растения и здоровье» - СПб., 2005. - С.779-782.

2. Петухова, Н.М. Фитохимическое изучение яснотки белой и черники обыкновенной для создания новых лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище / Н.М. Петухова, Д.В. Демченко // Подготовка кадров для фармацевтической промышленности: сб. науч. тр. - СПб., 2005. - С. 132.

3. Петухова, Н.М. Изучение сорбционной способности полисахаридного комплекса надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной / Н.М. Петухова,

B.В. Гришин, В.В Азарова, М.А. Буракова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2007. -Вып. 62. - С. 203-205.

4. Петухова, Н.М. Изучение возможности экстрагирования липофильных компонентов яснотки белой и яснотки пурпурной твердыми маслами / Н.М. Петухова, A.A. Марцинкевич // Материалы межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых "Молодежь и наука: итоги и перспективы" - Саратов, 2006.-С.101.

5. Петухова, Н.М. Разработка лечебно-косметического крема на основе биологически активных веществ яснотки белой и яснотки пурпурной / Н.М. Петухова // Тез. докл. Региональной научной конференции студентов и аспирантов «Молодые ученые - практическому здравоохранению» - СПб., 2007. -

C.143-144.

6. Петухова, Н.М. Оптимизация условий экстрагирования полисахаридов из шрота яснотки белой и яснотки пурпурной / Н.М. Петухова // Тез. докл. Региональной научной конференции студентов и аспирантов «Молодые ученые -практическому здравоохранению» - СПб., 2007. - С. 145-146.

7. Петухова, Н.М. Разработка технологии и оценка антиоксидантной активности масляного экстракта яснотки белой / Н.М. Петухова, М.А. Буракова, E.JI. Авенирова, A.B. Бурякина // Тез. докл. Международного конгресса "Традиционнаямедицина-2007". -М.,2007.-С. 144-145.

8. Петухова, Н.М. Анализ углеводного состава надземной части Lamium purpureum (Lamiaceae) / Н.М. Петухова, А.И. Тулайкин, К.Н. Разоренова // Растительные ресурсы. - 2008. - Т. 44. №1. - С. 86-90.

9. Петухова, Н.М. Исследование ранозаживляющей активности кремов на основе экстрактов яснотки белой и яснотки пурпурной / Н.М. Петухова, Е.В. Коноплева, М.А. Буракова, Ю. Бобкова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2008. - Вып. 63. - С. 475477.

10. Петухова, Н.М. Сравнительное фотохимическое изучение надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной / Н.М. Петухова, Л.С. Теслов, Ю.В. Бобкова // Фармация из века в век: сб. науч. тр. - СПб., 2008. - ч.З. - С. 115-118.

11. Исследование экстрагирующей способности систем экстрагентов различной полярности для извлечения суммы стеринов из растительного сырья / М.Г. Ожигова, Е.С. Ананьева, Ю.В. Бобкова, Н.М.Петухова // Фармация из века в век: сб. науч. трудов. - СПб., 2008. - ч.2. - С. 90.

12. Петухова, Н.М. Изучение сорбционной способности полисахаридов из надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной / Н.М. Петухова, В.И. Кучук, И.Б. Дмитриева, М.А. Буракова // Вестник Российской военно-медицинской академии. Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении: сб. науч. тр. - СПб., 2009. -ч.П-С.388.

13. Петухова, Н.М. Разработка состава и технологии гранул с полисахаридами яснотки белой и яснотки пурпурной / Н.М. Петухова // Фармация в XXI веке: эстафета поколений: сб. науч. тр. - СПб., 2009. — С. 153.

Приложение А

Технологическая схема комплексной переработки травы яснотки белой и яснотки пурпурной

ВР.2.1 Подготовка доздцха

ВР.2.2 Подготодка дезинфицирующих растрой

ВР.2.3 Подготодка технологической одежды

ВР2А Подготодка персонала

ВР2.5 Подготодка помещений

ВР.2.6 Подготодка пдооцдодания

ВР.3.1 Измельчение сырья

\BP3.2 Просед сырья

ВР.3.3 Приготовление '/и% гпцптп штПтп

ВРЗЛ Рссплабление масла

ВР.3.5 Приготойление рост Пора аммония оксалато и кислоты щабелебои

ВР1 К Км Кх Подготодка Воды

-

ВР.2 Кг Км Кх Подготовка производства

ВР.3.6

пропиленгликоля

сВР.1

ВРЗ Подготовка сырья

Кт и зкстрагентоВ

7774.7

Экстрагирование

ГП.4.2

Фильтрование

I

&

ТПЛ и КтКх

Экстрагиродание сырья ддухфазной системой зкстрагентоВ

на ТП.Ь

Шрот

Потер1

ТП.5 Кт

Разделение фаз

Потери

ТП.6.1 Отстаивание

ТП.6.2 Фильтрование

ТП.6 Кт

Очистка спиртового извлечения

Потери

На ТП.7

77777

Упарибание спиртоЬогт. извлечения

С ТП.6

ТП.7.2

Растборение сухого остатка В 80% пропиленгликале

ТП.8.1 Шрайотка шрота растборителем

ТП.8.2 Фильтрование

ТП.8.3 Сушка шрота —-1

ТП.9.1 Зкстрагиродание шрота Мой очищенной

ТП.9.2 Фильтробание

ТП.9.3 Упарийание извлечения

1№ исажбение ИРИС

ТП.9.5 Центрифцгиродание

ТП.9.6 Сцшка ВРПС

ТП.10.1 Зкстрагиродание шроте раствором аммония оксалата // шпбрпрбпй киглоты

ТП.10.2 Фильтробание

ТП.10.3 Упарибание тппрчриия

ТПШ ПгпжЯрнпр ПИ I

ТП.10.5 Центрифугирование

ТПШ Сушка ПВ

тп.; Кт Получение пропиленглико-лейого зкетракте

уШ

ТП.8 Кт Очистка шрота

ТП.9 Кт Выделение ВРПС

плгтРпритрль

на регенерацию

уггщртет

на регенерацию

на регенерацию

-\Потери\

17110 Выделение ПВ

Кт

6 отдал

Кх-контроль химическийКт-контоль технологический Км- контроль микробиологический ВРПС - водорастворимые полисахариды ПВ - пектиновые вещества

На правах рукописи

Петухова Надежда Михайловна

КОМПЛЕКСНАЯ ТЕХНОЛОГИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ТРАВЫ ЯСНОТКИ БЕЛОЙ И ЯСНОТКИ ПУРПУРНОЙ

Специальность 15.00.01 —Технология лекарств и организация фармацевтического дела

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Печать Н. В. Андриановой

Подписано к печати 18.11.2009. Формат 60 х 90/16. Бумага тип. Печать ризограф. Гарнитура «Тайме». Печ. л.3,0. Тираж 100 экз. Заказ 821

Санкт-Петербург 2009

Актуальность темы

Перспективными источниками для создания фитопрепаратов являются растения, широко применяемые в народной медицине. К таким растениям можно отнести яснотку белую (Lamium album L.), извлечения из которой применяются в качестве кровоостанавливающего, вяжущего, отхаркивающего, диуретического, седативного, противовоспалительного, ранозаживляющего средства. В экспериментальной медицине показана эффективность препаратов из надземной части яснотки белой в качестве кровоостанавливающего, гипотензивного и антимикробного средства. Цветки яснотки белой являются официнальным сырьем в некоторых странах Западной Европы [156]. В Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии (СПХФА) на траву яснотки белой разработан проект ФСП [5].

Близкий вид — яснотка пурпурная (Lamium purpureum L.) в настоящее время не получила столь широкого применения в народной медицине и медицинской практике, несмотря на то, что обладает лечебными свойствами, аналогичными яснотке белой [106].

Для возможного расширения сырьевой базы яснотки белой представляется актуальным сравнительное фитохимическое изучение яснотки белой и яснотки пурпурной. Степень изученности состава биологически активных веществ (БАВ) яснотки белой и яснотки пурпурной различна. Наиболее исследован фитохимический состав яснотки белой, для которой показано высокое содержание флавоноидов, фенольных кислот, полисахаридов [5, 106].

Присутствие БАВ различающихся по полярности в яснотке белой и яснотке пурпурной делает актуальной разработку технологии их комплексной переработки, а также создание на основе полученных извлечений препаратов и изучение их биологической активности.

Исходя из вышеизложенного, были определены цель и задачи данного исследования.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационной работы явилось: сравнительное фотохимическое изучение основных групп биологически активных веществ надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной, разработка комплексной технологии переработки сырья и разработка биологически активной добавки к пище и крема на основе полученных извлечений.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

1. Провести сравнительное изучение качественного и количественного состава основных групп БАВ яснотки белой и яснотки пурпурной, а именно: флавоноидов, фенольных кислот, БАВ липофильного комплекса (хлорофиллы, каротиноиды, стерины) и полисахаридного комплекса (водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества).

2. Провести исследования по выбору экстрагентов и технологии экстрагирования БАВ липофильного комплекса и фенольных соединений из травы яснотки.

3. Определить параметры экстрагирования полисахаридов из шрота травы яснотки.

4. Разработать состав и технологию крема на основе БАВ травы яснотки.

5. Провести исследования ранозаживляющей активности разработанного крема.

6. Изучить в опытах "in vitro" сорбционную способность полисахаридов из травы яснотки.

7. Разработать состав и технологию биологически активной добавки к пище на основе полисахаридов из травы яснотки.

8. Разработать ФС на траву яснотки пурпурной, ТУ на крем и БАД к пище на основе травы яснотки.

Научная новизна

В результате сравнительного фотохимического исследования надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной показано, что оба вида по количественному содержанию хлорофиллов, каротиноидов, стеринов, флавоноидов, фенольных кислот, водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ сопоставимы и имеют близкий качественный состав.

Для травы яснотки белой и яснотки пурпурной при изучении закономерностей процесса двухфазного экстрагирования системами, состоящими из масел и спиртов, получены результаты, соответствующие ранее установленным данным для травы зверобоя, цветков ромашки, календулы и др., что обосновывает возможность расширения сферы применения двухфазного экстрагирования. Определен коэффициент распределения производных хлорофилла между масляной и спиртоводной фазами для смеси сырья яснотки белой и яснотки пурпурной, который составил 11,58±0,82 и выходы суммы производных хлорофилла (81,25±4,10%) и суммы флавоноидов (60,40±3,40%).

Для стабилизации эмульсий, содержащих масляные и пропиленгликолевые экстракты с различными по природе БАВ из травы яснотки показано, что содержание эмульгаторов в составе эмульсии должно быть не менее 10% и соотношение эмульгаторов I и II рода составлять 20:80.

Показано наличие ранозаживляющей активности крема на основе БАВ травы яснотки на модели "линейных ран" у животных (крыс).

В опытах "in vitro" показана близкая сорбционная способность водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ из травы яснотки, сопоставимая с препаратом на основе пектовой кислоты.

Практическая значимость

На основании результатов фотохимического исследования надземной части яснотки пурпурной разработан проект ФС "Яснотки пурпурной трава ".

Технология масляного и спиртового экстрактов из надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной с применением двухфазной системы экстрагентов, состоящей из пальмового олеина и спирта этилового 70% апробирована на ЗАО «Фармаген» (акт апробации от 16.03.2009).

Определены оптимальные условия экстрагирования водорастворимых полисахаридов из шрота, полученного после выделения из травы яснотки БАВ липофильного комплекса и фенольных соединений: время предварительного настаивания - 45 мин, соотношение фаз сырьё: экстрагент — 1:20; время проведения процесса — 3 ч; число циклов - 3; соотношение сконцентрированной вытяжки и спирта этилового 96% — 1:1. При этом выход полисахаридов от содержания их в шроте составляет 97%.

Разработана технологическая схема комплексной переработки травы яснотки, позволяющая получать экстракт, содержащий липофильные БАВ, экстракт суммы фенольных соединений и полисахаридный комплекс с высокими выходами БАВ от содержания в сырье.

Разработан состав и технология крема на основе БАВ травы яснотки и БАД к пище на основе полисахаридов из травы яснотки. Разработаны технологические схемы производства и проекты ТУ на предлагаемый крем и БАД к пище.

Результаты исследования процесса экстрагирования травы яснотки белой и яснотки пурпурной двухфазной системой экстрагентов внедрены в учебный процесс СПХФА в методические указания к лабораторным работам "Технология фотохимических препаратов" в разделе комплексная переработка лекарственного растительного сырья с применением двухфазной системы экстрагентов, а также в лекционный курс по дисциплине "Основы технологии готовых лекарственных средств" (акт внедрения от 18.11 2008).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО СПХФА по теме "Изыскание новых технологий получения БАВ природного происхождения и разработка лекарственных препаратов нового поколения".

Апробация работы

Материалы диссертации прошли апробацию на IX Международном съезде «Фитофарм 2005» и конференции молодых ученых Европейского Фитохимического Общества «Растения и здоровье», Санкт-Петербург, 2005, межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием "Молодежь и наука: итоги и перспективы", Саратов,

2006, на Международном конгрессе "Традиционная медицина — 2007", Москва, 2007 г., на региональной научной конференции студентов и аспирантов СПХФА «Молодые ученые - практическому здравоохранению», Санкт-Петербург, 2007, на межрегиональной конференции Пятигорской фармацевтической академии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», Пятигорск, 2007, 2008, на межрегиональной конференции Санкт-Петербургской химико-фармацевтической академии «Фармация из века в век», Санкт-Петербург, 2008, ВМА "Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильных учреждениях", Санкт-Петербург, 2009 г, Межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Фармация в XXI веке: эстафета поколений», Санкт-Петербург, 2009 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 работ, из них 1 в журнале, входящем в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованных ВАК».

На защиту выносятся:

1. Результаты сравнительного фитохимического исследования основных групп биологически активных веществ надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной.

2. Результаты по разработке комплексной технологии переработки травы яснотки.

3. Обоснование и разработка состава и технологии крема на основе БАВ травы яснотки и изучение его ранозаживляющей активности.

4. Результаты изучения в опытах "in vitro" сорбционной способности полисахаридов из травы яснотки.

5. Обоснование и разработка состава и технологии биологически активной добавки к пище на основе полисахаридов из травы яснотки.

выводы

1. Результаты сравнительного фотохимического исследования надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной, свидетельствуют о близком качественном составе основных групп БАВ, таких как хлорофиллы, каротиноиды, стерины, флавоноиды, фенольные кислоты, полисахариды; количественное содержание БАВ колеблется в зависимости от условий произрастания. В составе липофильных комплексов надземной части яснотки белой и яснотки пурпурной впервые определено содержание суммы хлорофиллов, каротиноидов, стеринов. В результате проведенного фармакогностического анализа разработаны методы идентификации сырья и показатели качества, включенные в проект ФС "Яснотки пурпурной трава".

2. Показано, что экстрагирование травы яснотки целесообразно проводить двухфазной системой экстрагентов, состоящей из масла растительного и спирта этилового 70% при соотношении сырья к объемам фаз 1:10:10, т.к. такая система позволяет получить достаточно концентрированные извлечения для дальнейшего введения их в крем. Установлено, что масло подсолнечное и твердые масла — кокосовое, масло какао, пальмовый олеин - обладают близкой экстрагирующей способностью по отношению к липофильной фракции травы яснотки в качестве масляной фазы при двухфазной экстракции.

3. Для увеличения выхода производных хлорофилла в масляную фазу при двухфазном экстрагировании травы яснотки до 81% целесообразно применять спирт этиловый 70% в качестве полярной фазы. Для получения пропиленгликолевого экстракта, содержащего флавоноиды и фенольные кислоты, целесообразно спиртоводное извлечение после упаривания до сухого остатка, вводить в водный пропиленгликоль.

4. Определены параметры экстрагирования водорастворимых полисахаридов из шрота, полученного после двухфазного экстрагирования травы яснотки: время предварительного настаивания - 45 мин, соотношение сырьё: экстрагент - 1:20; время проведения процесса — 3 ч; число циклов — 3; соотношение сконцентрированной вытяжки и спирта этилового — 1:1. При этом выход полисахаридов от содержания их в шроте составляет 97%.

5. Разработан состав и технология крема на основе БАВ травы яснотки. Показано, что стабильные эмульсии на основе масляного и пропиленгликолевого экстрактов, содержащих различные по природе БАВ из сырья яснотки белой и яснотки пурпурной, образуются при содержании в них суммы эмульгаторов не менее 10%. При этом соотношение эмульгаторов I и II рода составляет 20:80. Оптимальная стабильность достигнута при сочетании цинка стеарата и эмульгаторов I и II рода: эмульгаторов на основе эфиров глюкозы и высших жирных кислот и МГД. На крем с БАВ травы яснотки разработан проект ТУ.

6. Установлено, что крем на основе БАВ травы яснотки обладает ранозаживляющей активностью сопоставимой с 2% масляным раствором хлорофилл ипта.

7. Показаны близкие сорбционные способности водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ из травы яснотки относительно ионов никеля и меди. Установлено, что сорбционная способность полисахаридов связана как с образованием комплексов с тяжелыми металлами, так и включением в объем гелеобразной структуры растворов солей металлов.

8. Разработан состав и технология БАД к пище в виде гранул на основе полисахаридов из травы яснотки. Оптимальный состав гранул с полисахаридами следующий: смесь полисахаридов - 48%; лактоза - 48%; МЦ — 2% и ПВП - 2%. На гранулы с полисахаридами разработан проект ТУ.