Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение, стандартизация сырья, лекарственных средств боярышника и тыквы

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РХСИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИЙ

МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ им. И.М.СЕЧЕНОВА

- -ч ^ г

На правах рукописи УДК 615.32:615:072:532,73'1,3

САМЫЛИНА ИРИНА АЛЕКСАНДРОВНА

•ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ, СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ, ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ БОЯРЫШНИКА И ТЫКВЫ.

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Диссертация на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук в форнз научного доклада.

/

-Г* "

'о

..а/

•Москва - 1992 г.

Работа выполнена в Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова.

Научный консультант - доктор фармацевтических наук, проф

А.П.Арзамасцев.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор Д.А.Муравьева, доктор биологических наук, профессор Г.П.Яковлев, доктор фармацевтических наук, профессор В.Е.Чичиро.

Ведувдя организация - Харьковский фармацевтический инстит

Защита состоится " '1е}" Сс'ОГ(Л 1992 г. в У у часо на заседании Специализированного совета Д-074.05.06 при Москов медицинской академии имени И.И.Сеченова по адресу: г.Москва, С розский бульвар, 13).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской мэдицинской академии имени И.Н.Сеченова.

Диссертация разослана " " •- 1992 г,

Ученый секретарь Специализированного

совета ДЧ)?4.05.06

кандидат фармацевтических наук, доцент

Н.П.Садчиков:

* к»-

Бивало IV-;..

Актуальность темы. При наличии многолетнего опыта в практическом юльзовании лекарственных средств боярышника и тыкзы, вопросы стан-этизации сырья и лекарственных средств остаются нерешенными в связи шполными сведениями о химическом составе, биологических особен-:тях и специфической фармакологической активности.

В связи с этим не могут быть внедрены в медицинскую практику ¡ые виды боярышника, а также новые сорта тыквы.

Комплексное изучение сырья боярышника и тыкзы, направленное на :вние вопросов стандартизации сырья многочисленного видового я нового ооотава, позволяет значительно расширить сырьевую базу получения препаратов сердечно-сосудистого, противовоспалитель-о и антицестодного действия.

Обоснование уровня требований и показателей, характеризующих ество сырья и лекарственных средств боярышника и тыквы, выбор имальиых методов анализа, позволяющих установить нормы показа-ей качества, включение их в нормативно-техническую документацию цставляют собой актуальную задачу стандартизации лекарственного гительного сырья и лекарственных средств растительного происхож-

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы является ретическое и практическое обоснование методологических принципов ст£ вдартизации сырья, лекарственных средств боярышника и тыквы на )ве их комплексного фармакогностического и доклинического изу-ш.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

1. Изучить современное состояние стандартизации лекарственного читального сырья и препаратов растительного происхождения;

2. Провести направленный поиск биологически активных веществ »' адающих антиаритмической, антицестодкой и противовоспалительной

активностью среди представителей рода боярышник и тыква, выде;

биологически активные вещества, установить их структуру:

- изучить флавоноидный состав цветков и плодов боярышника кроз красного;

- провести сравнительное изучение флавоноидного, аминокислотш минерального состава фармакопейных и нефармакопейных видов ( рыиника;

- провести изучение антиаритыический активности различных лекг ных средств из сырья изучаемых видов боярышника;

- изучить состав аминокислот, жирного ыаола семян тыквы;

- провести изучение антигалышнтной активности и токсичности г трактов семян тыквы;

3. Изучить биологические особенности боярышника и тыквы }

- установления ритма сезонного развития, определения оптималы сроков заготовки сырья боярышника;

- определения биометрических показателей, выявления диагностик признаков.

Предложить систему стандартизации сырья, лекарственнь

средств боярышника и тыквы:

- разработать методики количественного определения биологичеси активных веществ (флавоноидов, аминокислот, жирного масла) в карственном растительном сырье и препаратах боярышника и"ты»

- изучить влияние биологических особенностей боярышника и тыкв качество сырья;

- разработать характеристика подлинности и показатели качеотва сырья боярышника и тыквы с учетом использования сырья от лев венных растений о многочисленным видовым и сортовым составом

- предложить систему рационального использования сырья боярышн и тыквы.

Научная новизна. Впервые, на основании комплексного фармакогко-тического и доклинического изучения сырья и лекарственных средств 'оярышника и тыквы, предложен методологический подход, основанный :а принципах "сквозной" стандартизации, обеспечивающей унификацию оказателей, норм и методов оценки качества на этапах - лекарствен* ое растительное сырье - готовое лекарственное средство.

Для препаратов боярышника выявлена специфическая антиаритмкче-кая активность при их длительном многократном введении. Показано, то специфическая активность обусловлена, главным образом, суммой лавоноидов. Выделено и идентифицировано из оырья боярышника крова-окрасного шесть флавоноидных соединений: гиперозид, витексин, био-верцетин, пиннатифидин, кверцетин, 8-метоксикемпфзрол. Установлено троение нового флавоноидного соединения - ацетилвитекспна. Выявлено, то доминирующий компонентой суммы флавокоидов в растениях {;ода бо-рышник является гиперозид. Доказано сходство флавоноидного, амино-нслотного, элементного состава, антиаритмической активности фарма-опейных и изученных нефармакопейных видов боярышника.

Сформулированы био-ыорфологические и индикаторные признаки боя-ышнмков. Установлено влияние биологических особенностей боярыаника а качество сырья.

Впервые разработаны методики унифицированного определения гипе-эзида в сырье и лекарственных средствах боярышника; показаны пути птимизации технологических процессов, обеспечивающих максимальное звлечение биологически активных веществ.

Предложены пути стандартизации лекарственных средств и сырья эярышника.

Впервые показана и обоснована возможность комплексного использо-ания семян тыквы для получения лекарственных средств антицесгодкого противовоспалительного действия. Охарактеризована сумма свободных иинокислот. Выделена и идентифицирована аминокислота кукурбитин.

Показано, что антицестодная активность водных экстрактов зависи содержания в них кукурбитина.

Охарактеризована липофильная фракция сеыян тыквы и установ, зависимость содержания ¡¡ирного масла от сорта тыквы.

Предложены пути стандартизации сырья и способы получения ж карственных средств из сеыян тыквы - водного экстракта и жирноп ела, по принципу безотходной технологии.

Обоснованы общие требования и показатели качества лекарств! го растительного сырья.

Практическая значимость работы. На основании комплексного I чения сырья боярышника разработаны характеристики подлинности, I загелн качества и их нормы, которые включены в фармакопейные сте "Цветки боярышника", "Плоды боярышника", "Брикет цветков боярьш (ГФ СССР XI издания, вып.2). В НТД включены такие методики коли» ъенного определения гиперозида в цветках и плодах боярышника, кс рые апробированы на Красногорском заводе по переработке лекарсп пого растительного сырья.

По результатам доклинического изучения лекарственных средой ие сырья боярышника нефармакопейкых видов разрешены к ыедицинскс применению наравне с фармакопейными видами цветки и плоды 10 виг боярышника в качестве сердечно-сосудистого средства.

Для рационального использования ресурсов боярышника разрабс таны и утверждены "Инструкции по сбору и сушке цветков и плодов ярышника".

На основании комплексного изучения семян тыквы разработаны .характеристики подлинности и показатели качества сырья, включаюа определение биологически активных вецеотв. Характеристики подлин ноати сырья "Микроскопия" включены в статью "Семена тыквы" (ГФ С XI издания, вып.2)

Составлены проекты ВФС на Масло семян тыквы и Кукурбин. Разработан опытно-промышленный регламент получения экстракта "Кукурбин" и масла семян тыквы. Наработана опытная партия экстракта "Кукурбин" и масла семян тыквы, которые показали высокую анги-гельшнтную и противовспалительную активность, соответственно. Способ получения кукурбина защищен 3 авторскими свидетельствами.

Разработанные методики определения в сырье содержания золы общей и влажности включены в методические указания "Использование деривагографии в фармацевтических исследованиях" МУ 64-003-87.

Сформулированные общие требования и показатели качества лекарственного растительного сырья включены в 13 общих и групповых статей ГФ СССР XI издания, вып.1.

Материалы о практической- значимости подтверждены официальными заключениями Научно-исследовательского института фармакологии РАМН, Фармакологического и Фармакопейного Комитетов ИЗ РФ, Института медицинской паразитологии и тропической медицины имени ЕЛ.Марцкков-ского и тремя авторскими свидетельствами на изобретения. Положения, выносимые на защиту:

- методологический подход к стандартизации лекарственного растительного сырья многочисленного видового и сортового совтава;

- результаты комплексного фармакогностлческого и доклинического изучения сырья лекарственных средств боярышника и тыквы;

- данные по стандартизации сырья боярышника и тыквы;

- методики контроля качества сырья боярышника и тыквы.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на 17 Всероссийском съезде фармацевтов в г.Воронеже (октябрь 1931г.), на 1У Всесоюзном симпозиуме по бенольным соединениям (г. Ташкент, июнь

- б -

1932 г.); на Всесоюзной симпозиуме по созданию и комплексному и следованию лекарственных форм с сердечно-сосудистыми средствами г.Тбилиси, октябрь 1982 г.; на Иеядународном симпозиуме "Хромат графия в биологии и медицине" г.Москва, 1986 г.; X Всесоюзной к ференции по микроэлементам г.Чебоксары, 1986 г.; У Всесоюзном с позиуые по фенольным соединениям г.Таллин, IS87 г.; У Всероссий ском съезде фармацевтов г.Ярославль, 1987 г.; на Всесоюзном сим зиуме "Микроэлементы человека" г.Москва, 1989 г.; на Международ ном симпозиуме "Экологические аспекты в фармации" г.Москва, июн 1990 г., а также на научных конференциях фармацевтического факу тета Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова.

Связь задач исследования с проблемным планом йармацевтичво наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематик научных исследований Всесоюзной проблемной комиссии "Фармация" научного совета "Фармакология и фармация" F Л M Н. и планом нау исследовательских работ Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова (te госрегистрации 01.860051447).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 65 печа; работ, получено 3 авторских свидетельства.

Основное содержание работы.

I. Анализ нормативно-технической документации на лекарственное растительное сырье.

Проведя изучение нормативно-технической документации на сы! и лекарственные средства растительного происхождения, мы выявил! разный уровень требований к качеству. Это объясняется отсутствш системного подхода к стандартизации сырья и лекарственных средой получаемых из нзго. Так, например, сырье водяного перца и зверос стандартизуются по содержанию флавоноидов, а лекарственные средс (экстракт и настойка) - по содержанию дубильных веществ; цветки

ромашки, трава тысячелистника - по содержанию эфирного масла, экстракты - по содержанию дубильных веществ.

Сырье,используемое для приготовления настоев и отваров, в большинстве случаев, не нормируется по содержанию действующих веществ. Имеющиеся методики количественного определения действующих веществ в сырье не учитывают перехода их в эксграгент, применяемый

тттто гтгчтмгпйшяст ттои-оплфтютл.т-'г рпоттг»ф'о

При наличии богатого видового состава растений к медицинскому применению разрешено сырье лишь от одного-двух видов, что в значительной степени увеличивает антропогенную нагрузку на лекарственные виды растений.

Для унифицирования требований к качеству лекарственного растительного сырья мы разработали и предложили 13 общих статей, в которых сформулировали концепцию стандартизации лекарственного растительного сырья. В этих статьях изложены современные требования к подлинности и качеству сырья. При определении подлинности предусматривается изучение внешних признаков, диагностических признаков при аикроскопическом исследовании, разработка качественных реакций, включая хронатографический анализ.Для всех видов предусмотрена разработка таких показателей качества, как содержание действующих веществ, влажности, золы общей и золы, нерастворимой в 10$ растворе слористоводородной кислоты, допустимых примесей.

Для практического подтверждения теоретических положений стан-[артизации сырья мы поставили перед собой задачу разработки системы :тандартизации сырья, лекарственных средств боярышника и тыквы.

Препараты боярышника (настойка и настой цветков, экстракт и 'твар плодов) разрешены к медицинскому применению в качестве сер-;ечно-сосудистых средств. Потребность в этих препаратах постоянно е удовлетворяется, хотя сырьевая база растений рода боярышник

представлена 89 видами в нашей стране, да и культивируются бояр ники как отечественные виды, так и зарубежные весьма успешно. Т противоречие находит очень простое объяснение: разрешены к меди пинскому применению цветки только двух видов, а плоды пяти зидо Другими словами, они включены в нормативно-техническую документ, цию, показатели качества, которой не регламентируют содержание действующих веществ, такого показателя просто нет. Все это свид тельсгвует о недостаточном фармакогностическом и фармакологичес; изучении как фармакопейных, так и других,нефармакопейных видов.

Чтобы говорить о разработке современных требований к качес: сырья боярылника, на первом этапе необходимо было решить вопрос! касающиеся разработки показателя качества - содержание действую; веществ для фармакопейных видов, а в дальнейшем оценить по этом; показателю другие, неофицинальные виды, и по результатам исслед( занпя предложить перспективные для медицинского применения новьн лекарственные виды боярышника. •

Для разработки показателя качества по действующим вещества) мы провели изучение флавоноидного состава цзетков и плодов бояр! ника кровавокрасного, наиболее широко распространенного на терр! тории Российской федерации, и наименее изученного в химическом отношении.

Из неофициальных видов нами для изучения были выбраны наис лее распространенные на территории Прибалтики виды, ранее не из5 чавшиеся и имеющие практическое значение для заготовок сырья б.германский, б.восточно-балтийский, б.курземский, б.даугавский. Эти виды являются близкородственными для б.сглаженного, б.вдно-пестичного, б.отогнуточашелистикового, которые изучены в химичас и фармацевтическом отношении, такие встречаются- ■ на территории Прибалтики.

Все 7 перечисленных видов боярышника включены во"Флору Латвий-ССР"и Межотраслевой классификатор высших сосудистых растений, ¡чающихся на территории Латвии, Литвы, Эстонии, поэтому в даль-1М тексте они объединены нами под условным названием "прибалтий-виды".

Вторая группа включала 3 вида боярышника из одиннадцати, про-тающих на территории Таджикистана: б.туркестанский, б.понтий-б.гиссарский. Эти виды являются наиболее распространенными в блике, что имеет важное значение для заготовки сырья. Б.турке-кий в оиогематическем огкошэгш язшееся близкородственным олькова и б.желтому, разрешенным к медицинскому применению. Третья группа видов, выбранных нами в качестве объектов иссле-ия, представлена боярышниками северо-американского происхожде-иироко и успешно культивируемыми в иаиэй стране и имеющими ряд уществ в культуре по сравнению с европейскими видами. Изучались пноколючковый, б.мягковатый, б.вееровидный, б.Арнольда, Б.остро-ковый, б.овальный, б.зазубренный, б.миссурийский, б.канадский, л(Ш)ВИдный, б.Дугласа, б.шамллейнский, б.Робсона, б.страшный. Вве исследования проводились в сравнении с фармакопейными ви-б.кровавокраоным, б.сглаженным (б.колючим), б.алтайским, б.да-м, б.однопестичным. Наиболее изучены в химическом отношении аяенный и б.однопестичный.

Семена тыквы относятся к растительному сырью, которое также не показателя качества по содержанию биологически активных ве-. К медицинскому применению разрешены отвар и суспензия очищен-эмян в воде в качестве антигельминтного средства. В последние 5ыла доказана высокая активность мирного масла семян тыквы эспалительных заболеваниях предстательной железы. Разработка научно обоснованных критериев стандартизации семян

тыквы, направленных на создание безотходной технологии полу» лекарственных средств антигельминтного и противовоспалитель* ствия проводилось на образцах семян трех видов тыквы, разреь к медицинскому применению : т.мускатная, т.крупноплодная, т. корая. Объектами нашего изучения служили семена всех изучаеь дов тыквы, наиболее распространенных сортов: т.мускатная - с таминная; г.крупноплодная - сорта волжская серая, кормовая с вая; т.твердокорая - сорта украинская многоплодная, мозолеев миндальная, грибовская кустовая, а также сырье, получаемое с шшленных партий с Красногорского завода по переработке лека ного растительного сырья.

2. Изучение химического состава сырья боярышника.

2.1. Выделение и идентификация флавоноидов из цветков и плодов боярьглника кровавокрасного.

Сумму флазоноидов выделяли по общеизвестным методикам: тракция этанолом, очистка хлороформом, последовательное извл этилацетатоы и н-бутанолом.

Препаративный выход сушы флавоноидов из цветков боярын кровавокрасного составил около 2%.

Для разделения суммы флавоноидов на индивидуальные веще нами были использованы методы избирательной экстракции, дроС кристаллизации, препаративной бумажной и колоночной хроматог на целлюлозе и силикагеле.

Из цветков б.кровавокрасного было выделено и идентифици 7 флавоноидных соединений. Идентификацию выделенных соединен водили на основании данных УФ-спектроскопии с ионизирующими комплексообразующими добавками, ПМР-спектроскопии, масс-спек метрии, а также данных кислотного гидролиза, температуре ила и проб смешения с достоверными образцами.

Шесть из семи выделенных соединений были идентифицированы нами с кверцетином, 8-метоксикемпферолом, вигехсином, гиперозидом, биокверцетином, пиннатифидином.

Седьмое соединение оказалось новым, ранее не описанным в литературе природным соединением.

Вещество 7 состава ^2.3^22Ри пРеДС1авляэг собой белые игольчатые кристаллы, хорошо растворимые в этиловом и метиловом спиртах, пиридине, диоксане, трудно- растворимые в воде, практически нерастворимые в бензоле, хлороформе, петролейном эфире.

Температура плавления 210-2П°С (из метанола), 9.J 0,53 (15$ уксусная кислота), 0,67 (БУВ 5:1:4).

Результат цианидиновой реакции в модификации Брианта (малиновое окрашивание водной фазы) также указывает на гликозиднкй характер вещества 7.

В УФ-спектре вещества присутствуют два максимума поглощения [333 нм и 268 нм), характерные для флавоноидов с оксигруппой в по-юженниУкольца В. Характер заместителей был определен с помощью гФ~спектросокпии с ионизирующими и комплексообразующями добавками, [ри добавлении ыегилата натрия наблюдается батохроыный сдвиг макси-1ума поглощения полосы I на 59 нм, при этом его интенсивность [есколько возрастает, что свидетельствует в пользу нахождения вободной ОЕ-группы в положении

Заместитель в положении 3* отсутствует, поскольку борная ислота с ацетатом натрия вызвала лишь незначительный сдвиг макси-ума поглощения полосы I.

При добавлении хлорида алюминия максимум поглощения полосы I

спытывает батохромное смещение на 53 нм, а с добавкой соляной

т т

лслоты - на 49 нм; это также подтверждает отсутствие Зх,4 -диокси-руппировки и указывает, что гидроксил в положении 5 свободен.

В присутствии плавленного ацетата натрия максимум поглощени полосы I находится в более коротковолновой области спектра, чем максимум поглощения полосы I в присутствии метилата натрия, что говорит о свободной 7-оксигруппе.

Анализ ПМР-спектра вещества 7 показывает, что в положении 4 кольца В имеется заместитель: об этом свидетельствует симметричн пара дублетов в области слабого поля (8,23 м.д. и 7,03 м.д.) с характерной константой равной 8,5 гц. Кроме того, в спектре имеются однопрогонные синглеты б-го и 3-его протонов при 6,8 м.д. и 6,7 м.д. Однопротонный триплет при 6,35 м.д. с константой спин-спинового взаимодействия 8,5 гц соответствует протону в положени 2 глюкозы, а однопротонный дублет при 5,77 м.д. с КССВ 9 .гц -сигнал аномерного протона -глюкозы; мультиплет при 05-4,6 м., интенсивностью 5 протонных единиц соответствует протокам глюкозы а трехлротонный синглех при 1,76 м.д. - сигнал ацетильной группы

Из данных УФ- и ПМР-спектров следует, что ацетильная группа может быть присоединена к углеводной части соединения.

Методом ИНДОР установлено, что триплет при 6,35 м.д. относи ся к синглегу гемиацетильного протона. Этот протон находится в виценальном положении к аномерному протону глюкозы, так как при облучения полем Н, компонентов дублета при 5,77 м.д. сигнал гемиацетильного протона.

Далее вещество 7 было подвергнуто щелочному гидролизу. В рэ зультата щелочного гидролиза было получено вещество, которое иде тифицировано с витексином.

Таким образом, соединение было охарактеризовано как 5,7,4* триокси$лавон-8-С-у5-Д-глюкозид-(2^-0-ацетил). Соединение не опи сагно в литературе и названо нами ацетилвитексин.

_ ми •-«сеансе

250 300 350

Рис. I. УФ-спектры вещества УП с ионизирующими и комплексообразующими добавками.

400 Л (нм)

Рис, 2. пМР-спектр вещества УП (с/-пиридин).

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ КОНСТАНТЫ ФЛАВОНОИДОВ БОЯРЫШНИКА КРОВАВОКРАСНОГО

.:.Название . п/п: эмпирическое

:Название :рациональное

: Брутто• •формула

пл.

: ГЦ

АО я

м ох

1. Кверцетин

2. 8-метокси-кемпферол

3. Витексин

4. Гиперозид

5. Биокверцетин

6. Пиннатифидин

7. Ацетилвитексин

3,5,7,31,41-пентаоксифлавон С15Нхо°7 ЗП-312°С

5,7,41-триокси-8-метокси- СтсНЬ0-? 271-274°С

флавон .. . ■

З^^-триоксиФлавон-в-С-А- С?ТН?П0ТП 255-257°С

-Д-глюкозид ~ ..

5,7,3*,4*-тетраоксифлавон-3-0--уб-Д-галактозид

5,7,31, 4*-тетрао:. _________

-/2>-Д-галактозидо(6-1)-о<£-

С21Н19°12

237-239 С

255,269,370 нм 273,328,'373 нм >

' -14 270,303,335 нм I с0,1;пиридин • ■ ■

-'60 - 257,267,364 нм сО,5;этанол-пиридин(2:3)

5,7,З1,41-тетраоксифлавон-3-0-

-рамнозид .^27Н30°16

5,7,4^-триокси-8-метоксифлавон-

197-193°С н/опред. 257,268,300, ' " ' • 362 нм

у » • г и 14'

-¿-0-/6 -Д-глюкозид

5,7,41-триоксцфлавон-8-С-76 -Д--глюкозидо-(2»'-0-ацэтил)

С22Н22°12

' 239-243 С

С23Н22°П

208-211°С

- 6,6 273,328,355 нм с0,1;этанол

269, 333 нм

КВЕРЦЕТИН

ЦЛА

но о

БИОКВЕРЦЕТИН

но. /О

ГИПЕРОЗИД он

о» Т Y \

ОН О N

си,он

он о \

АЦЕТИЛВИТЕКСМ

ОН о

Из плодов б.кровавокрасного было выделено 5 флавоноидных динений, которые были идентифицированы с 8-метоксикеыпферолом, токсином, гиперозидом, биокверцетином и ацетилвитнксинои.

При сравнительном хроыатографическом изучении сырья фарма пейных видов боярышника нами установлено, что для всех фарыако видов неизменным остается присутствие основных соединений: гип зида, витексина, биокверцегина, пиннатифидина, 8-метоксинемпфе и кверцетина. Причем преобладающим компонентом в сумме флавоно во всех случаеях оставался гиперозид.

р.Т. Определение содержания флавоноидов в цветках боярышника.

Обоснование показателя качества сырья по содержанию флаво; идов потребовало проведения исследований по разработке методик! количественного определения и проведения анализа сырья как от отдельных фармакопейных видов боярышника, так и от промышленны: партий сырья.

Учитывая, что преобладающим компонентом суммы флавоноидов цветках боярышника является гиперозид, мы разработали методику личесгвенного определения гиперозида в цветках боярышника.

Для разработки методики количественного определения гипер( да ш использовали сочетание двух методов - тонкослойной хрома! графии и спектрофотометрии.

В процессе работы были подобраны условия, позволяющие наис полно экстрагировать гиперозид из сырья и очистить его от сопуз ствующих веществ.

При подборе экстрагента были апробированы различные раствс тели: этанол различных концентраций, метанол, этилацетат, вода^ Наибольшее количество гиперозида экстрагируется метанолом при * гревании на водяной бане с обратным холодильником в течение I ч Однако в качестве экстрагента был выбран этанол как ыенее токси

1й растворитель.

Было установлено, что максимальное количество гиперозида {0,11%) :страгируется при соотношении сырья и экстрагента 1:50. Динамичное равновесие между сырьем и растворителем устанавливается рез 60 минут при оптимальном размере частиц 3 мм.

Б процессе разработки методики на стадии хроматографического зделения были использованы различные сорбенты (снликагель разных рок, полиамид, целлюлоза, бумага), а также системы растворителей УВ, хлороформ-метанол в различных соотношениях, уксусная кислота зличных концентраций). Наилучшее отделение гиперозида от сопуг-вующих веществ было достигнуто при применении бумажной хромаю- ■ афии в системе 15$ уксусной кислоты и хроматографии на пластинках илуфол" в системе хлороформ-метанол (8:2). Предпочтение было отда-тонкослойной хроматографии.

Опыты с добавками гиперозида-стандарта показали отсутствие ^тематической ошибки.

Для проверки воспроизводимости методики было проведено опреснив гиперозида в одном образце сырбя в 13 повторностях.

Относительная ошибка методики количественного определения шрозида в цветках боярышника при проведении анализа з трех пов-жостях на превышает 5,1%, поэтому в предлагаемой методике реко-1дуется проводить анализ в трех повторностях.

Метрологические характеристики методики.

X : г?^ ; --J1 : р tfay- АХ : В :

' : 0,81 : 0,001 : *0,02 : 95% : 2,23 : ¿0,07 : ± 8,8 : * 5,1

С помощью предложенной методики нами были проанализированы на держание гиперозида цветки фармакопейных видов и сырье промышлен-: партий. Содержание гиперозида в цветках составило от 0,62 % до ¡9 %.

Полученные, данные позволили обосновать норму содержания г розида в цветках боярышника не менее 0,5$.

2.3.Определение содержания флавоноидов в плодах боярышника. П боярышника значительно уступают цветкам по содержанию суммы фл ноидов (препаративный выход составляет 0,15$). Большое количес сопутствующих веществ, извлекаемых спиртом, затрудняет процесс хроматографирования и требует проведения предварительной очист экстрактов. Все это делает невозможным использование методики личествекного определения гиперозида в цветках боярышника непо отвенко для анализа плодов,

Для оценки качества сырья плодов боярышника целесообразно проводить определение суммы флавоноидов в пересчете на гипероз; Для установления нормы этого показателя мы разработали методик; количественного определения.

В основу методики была положена схема хроыатоспектрофотом! ческого определения. Для получения объективных данных о количв! действующих веществ в сырье определение суммы флавоноидов npoBi ли после отделения их от антоцианов.

Было установлено, что оптимальными условиями экстракции с; флавоноидов из плодов боярышника является нагревание сырья, иэ1 ченного до размера частиц 2 мм, с этиловым опиртом на водяной ( с обратным холодильником в течение I часа.

Была проверена необходимость предварительного обезнириваш сырья хлороформом. Сравнение результатов анализа показалфозыо! использования : методики без предварительного обезжиривания.

Нами проводилось также определение десорбции гиперозида о колонки полиамидного сорбента.Процент десорбции его составил 8i 89*$. Аналогично определяли процент десорбции суммы флавоноидо! с колонки полиамидного сорбента, который составил 85-88 $•

Для определения оптимального объема элюэнта при проведения

люирования сушы флавоноидов с колонки полиамидного сорбента,

люцию проводили различными объемами 95 % этанола (после промкза-

ия колонки дистиллированной водой).

С целью исключения ошибок, связанных с завышением результатов

лределения суммы флавоноидов из-за совместного элюирования йлаво-

............не

оидов и антоцианов, предлагаетояТйспользовать в анализе первый

крашенный элюат объемом I мл.

Для проверки воспроизводимости методики было проведено опреде-

ение суммы флавоноидов в одной партии сырья 170383 в II повторностях.

Меторологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в плодах боярышника. "

/: х : <3 ' : Р : V "

СО: 0,081 : 0,031 : 95% : 2,262 : 0,0069 : ± 8,56 : : ± 4,95

Относительная ошибка методики прр проведении анализа з трех звторностях не превышает * 4,95 $ (доверительный уровень 95 %).

Для проверки отсутствия систематической ошибки методики был:! зставлены опыты с добавками стандартного образца гиперозида не-)средственно в спиртовые извлечения. Результаты показали, что от-)сительная ошибка методики определения суммы флавоноидов в плодах шрышника при проведении анализа в трех повторностях не превыша-! ± 4,95%, т.е. находится в пределах величины случайной ошибки.

С помощью предложенной методики были проанализированы плоды шрышника фармакопейных видов и промышленных партий. Результаты [ализов позволяют сделать вывод о том, что плоды боярышника на-щливают сумму флавоноидов от 0,06 % до 0,11 %. В связи с чем ,ш была предложена норма содержания суммы флавоноидов в перес-¡те на гиперозид в плодах боярышника не менее 0,05$.

Оценка сырья боярышника на содержания флавоноидов свидетельст-

вует о гон, что перспективным источником получения суммы флагов идов являются цветки боярышника.

Однако, для решения вопроса о создании лекарственного сре; на основе суммы флавоноидов необходимо было провести сравнител! изучение специфической активности суммы флавоноидов и фармакопб ных препаратов боярышника (настойки и настоя цветков, экстракта отвара плодов).

3. Изучение антиаритмической активности препаратов боярышника.

Для суждения о прогивоаритмической активности исследуемых

боярышника была использована экспериментальная модель нарушения

сердечного ритма смешанного характера, воспроизводимая у бодрст

ющих крыс с помощью аконитина. В выборе модели мы руководствова

лись следующими принципами: аритмия должна быть близка к наруше

ям сердечного ритма; метод должен позволять производить оценку

не только активности, но и токсичности соединений, а это возмож

лишь у животных без анестезии.

Была проведена оценка специфической антиаритмической актив.

сти экстракта плодов, настойки цветков, настойки плодов, настоя

цветков, отвара плодов и суммы флавоноидов, выделенной из цветк

и плодов боярышника фармакопейных, близкородственных к ним видо:

произрастающих на территории Прибалтики, северо-аыериканских ви,

интродуцированных на территории ботанического сада АН Латвии и (

нического сада ША им.И.М.Сеченова, а также среднеазиатских вид|

Опыты проводили на бодрствующих крысах массой 180-200 г.

Электрокардиограмму (ЭКГ) регистрировали с помощью игольчатых

электродов во втором отведении на мингогграфе фирмы ёРещ-ЗсЪола, • - ■ Швеция

После снятия нормальной фоновой ЭКГ крысам вводили в хвоек

вену раствор аконитина хлорида в дозе 30-40йг/кг. Через 1-3 мш

после введения развивались нарушения сердечного ритма разнообразного характера (наблюдалось чередование сокращений синусовых и атриовентрикулярн.то узлов, различного рода экстрасистол, желудочковый ритм и прочив изменения), ЭКГ регистрировали каждые 3,5,10, [5,20 мин. Продолжительность аритмии в среднем составляла 1,5-2 часа.

Исследуемые вещества вводили двумя способами? А и Б.

Способ А. Препарат вводили однократно внутривенно за 30,25, [5,10,5-и 2 минуты до введения аконитина (профилактический эффект) ига через 1,2,3 минуты после введения аконитина (лечебный зЗфект). 1спользовали следующие дозы препаратов боярышника: 5,10,15,20 мг/кг [сумма флавоноидов в виде 0,8$ раствора в 40$ этаноле); 0,5, I, 2, >, 4 мл/кг (настойка цветков и экстракт плодов); 1,5,10,12 мл/кг 'настой и настойка плодов). Оптимальный эффект наблюдали г.ри введе-ши экстракта плодов, настоя и настойки цветков в дозе I мл/кг, [астоя и настойки плодов 10 мл/кг, суммы флавоноидов - 10 мг/кг 1а 2 мин. до введения аконитина.

Способ Б. Курсовое введение: ежедневно однократно в течение • дней внутрибршинно в дозах, с помощью которых был получек опти-;альный эффект при способе введения А, а затем в тех же дозах днократно внутривенно за 2 мин. до введения аконитина.

Контрольным животным вводили спиртовую смесь с соотзетствую-ей 1гассовой долей этанола.

В оценке положительного эффекта использовали 4 степени: 00$ эффект - на фоне препарата аконитина аритмия не развивалась; очти 100$ эффект - на фоне препарата возникали лишь единичные кстрасистолы на 10 или 15 минуте от введения аконитина; хороший ффект - аритмия на фоне препарата развивалась, но была значи-ельно слабее, чем в контроле; нет эффекта - аритмия развивалась эзависимо от введения препарата или была лишь незначительно

слабее, чем в контроле;

После выбора оптимальных условий проведения опытов ыа преп; тах фармакопейного вида б,сглаженного (б.колючего), были постав; ны опыты по сравнительной оценке антиаритмической активности пр| паратов фармакопейных и нефармакопейных видов боярышника.

Проведенные исследования позволили установить, что для все: изученных видов боярышника максимальный положительный аффект до гался при курсовом введении препаратов. Дозы веществ составляли экстракт плодов, настой цветков, настойка цветков - I мл/кг; настой и настойка плодов - 10 мл/кг; суша флавоноидов - 10 мг/

При введении экстракта плодов во всех опытах был достигнут 100$ или почти 100$ эффект. При введении суммы флавоноидов тако жеэффект был достигнут в 84$ случаев; а в 16$ опытов эффект был хорошим. При введении настойки цветков хороший эффект наблюдало, в 85$ случаев, а положительный эффект отсутствовал или был незн чителвн. в 15$ случаев. Полученные результаты позволили сделать : вод о том, что специфический антиаритмический эффект препаратов боярышника обусловлен, главным образом, флавоноидами, оказывающ ми оптимальное действие в дозе 10 мг/кг.

Специфику действия спиртовых и водных лекарственных форм и плодов и цветков боярышника по сравнению с ангиаритмическим дей ем суммы флавоноидов можно, вероятно, объяснить наличием других групп биологически активных соединений. Поэтому доя проведения рациональной терапии нарушений сердечного ритма препаратами боя рышника следует использовать не индивидуальные вещества, а гале вые лекарственные формы из сырья боярышника.

Помимо выраженного антиаритшческого действия, у изученных препаратов боярышника был отмечен положительный инотропный эффе (способность увеличивать амплитуду сердечных сокращений) и легк седативкый эффект.

Токсический эффект препаратов на фоне аконитина проявлялся в дозе 4-4,5 мл/кг для экстракта плодов, 2 ил/кг для настойки цветкоз, 20-40 мл/кг для суммй флавоноидов и выражался з усилении аритмии но сравнению с контролем и гибели животных, что характерно при передозировке всех антиаритмических средств.

Таким образом, наибольшую антиаритмическую эффективность препараты боярышника оказывают при их курсовом введении.

Более выраженное антиаритмическое действие оказывает экстракт 1лодов и настойка цветков. В дозе I мл/кг экстракт боярышника пол-юотью предупреждает развитие аконитиновой аритмии у 100% животных, I настойка цветков в той не дозе вызвает выраженное ослабление фитмии по сравнению с контролем у 85/5 животных.

Идентичные препараты, полученные из всех изученных видов боя-шника, обладают практически одинаковой специфической антиаритми-:ескоЙ активностью и токсичностью, что позволяет считать эти виды ;ерспективныш дополнительными источниками лекарственного расти-ельного сырья боярышника.

Таким образом, изучение антиаритмической активности суммы фла-оноидов и традиционных лекарственных средств из сырья боярышника озволило нам отказаться от идеи создания н(?вого лекарственного редства на основе суммы флавоноидов, и все дальнейшие исследования ырья от нефармакопейных видов боярышника проводить в плане стан-артизации сырья с целью введения их в медицинскую практику наравне фармакопейными видами.

Для этого необходимо было провести исследования по разработке зрактеристик подлинности сырья: выявить диагностические признаки, зрактеризующие внешние признаки, анатомическое строение отдель-¡IX видов боярышника, в затеи обобщить их, четко охарактеризовав 5щие для всех видов диагностические признаки, которые позволяют

достоверно определить сырье лекарственных видов боярышника.

Кроме того необходимо было предложить качественные реакцш характеризующие наличие флавоноидов в сырье, а также хроматогрс ческие пробы, которые позволяли бы быстро определить в сумме ф: ноидов присутствие гиперозида.

Разработка показателей качества - содержание флавоноидов, месей, влаги, золы общей и золы, нерастворимой в 10^ растворе £ потребовала проведения исследований по оценке всех изучаемых ви боярышника в сравнении с официналышми.видами.

4. Стандартизация сырья боярышника.

Полученные результаты фармакологических, химических и биол чзских исследований были положены в основу разработки стандарт« сырья боярышника.

4.1.Разработка характеристик подлинности сырья. Нами был прове анализ внешних признаков высушенных цветков и плодов боярышника готовленных от изучаемых видов, установлены их сходства и разли Проведенные исследования позволили установить, что диагноотичео значение для цветков имеет форма соцветия, лепестков, чашелисти: характер опупения цветков и цветоножки. Результаты обобщены в о; сании характеристик подлинности "Внешние признаки".

"Цветки боярышника " - представляют собой смесь высушенных цельных щитковидных соцветий и их частей- отдельных цветков, бу1 нов, цветоножек, лепестков, тычинок, пыльников. Соцветия - щит» ные метелки или выпуклые, сложные (чаще двойные), спиралевидные или спирально-супротивные щитки. Цветки правильные, с двойным 01 цветником. Чашечка состоит из 5 зеленоватых чашелистиков, котор! могут иметь иирокотреугольную, продолговато-треугольную, треу™ нуй, треугольно-ланцетную, узколанцетную форму. Лепестки венчикг ровато- или желтовато-белого цвета, округлой, овальной, яйцеви;

и широкояйцевидной формы. Тычинок до 20. Цвет пыльников буро-телтый, серовато-, буротемнокоричневый. Столбиков 1-5. Цветоносы и цветоножки голые, слабо опушенные, волосистые, опушенные или войлочно-опушенные.

Распустившиеся цветки 10-20 ш диаметром, бутоны 3-6 мм. Запах злабый, своеобразный. Вкус слабо-горький, слизистый.

"Плоды боярышника" - представляют собой смесь высушенных пло-цов-яблок, от шаровидной до эллипсоидальной формы, твердые, ыорщи-мстые, длиной 6-15 мм, шириной 5-18 мм, сверху с кольцевой отороч-<ой, образованной ооохшшиоя чашелистиками. В мякоти плода находят-<я 1-5 каменистых косточек, имеющих неправильную треугольную, оваль-1ую или сжатую с боков форму. Поверхность косточек ямчато-морщини-ная или бороздчатая по спине. Цвет плодов от желто-оранкевого и »уровато-красного до темно-бурого или черного с беловатым налетэм скристаллизовавшегося сахара. Запах отсутствует. Вкус сладковатый.

При диагностике плодов по внешним признакам особое внимание !ледует обращать на форму, размеры и цвет плодов, количество, фору и размеры косточек.

Для составления характеристики подлинности сырья "^кроскопия" ами были изучены анатомические признаки цветков и плодов и обобще-ы в разделе микроскопия. Для всех изучаемых видов диагностическое начениа имеют: волоски простые на поверхности чашелистиков; ярко ¡сраженная складчатость кутикулы эпидермы лепестка, чашелистика, осочковидныо выросты клеток эпидермы внутренней стороны лепестка, ногочисленные железки с бурым содержимым на чашелистике, друзы пя реже призматические кристаллы оксалата кальция в мезофилле шелистика и лепестков.

При рассмотрении чашелистиков и лепестков с поверхности видны 1етки эпидермиса? имеющие с наружной стороны прямые или слабо звилистыв стенки и складчатую кутикулу. Устьица крупные, редкие

аномоцитного типа, расположенные на чашелистиках с наружной сто; Клетки внутреннего эпидермиса лепестков имеют сосочковидные выр По краю чашелистиков расположены многочисленные шаровидные желе: (сидячие, на многоклеточных ножках, с желтовато-коричневым соде; шм), на поверхности многочисленные, простые, одноклеточные вол> ски с толстыми стенками, прямые или слабоизогнутые, у основания слегка расширенные и окруженные розеткой из 5 зпидермальных кле: В мезофилле чашелистиков,лепестков и завязи имеются друзы, изре. встречаются призматические кристаллы оксалата кальция.

При рассмотрении эпидермы плодов о поверхности видны чегыр! шестиугольные клетки с равномерно утолщенным стенками и желто-бурым содержимым. На поверхности эпидермы плода с поверхности р> кие, одиночные, слегка извилистые, на концах заостренные, .толст! стенные волоски. На кольцевой оторочке плода волоски многочисле) одноклеточные, со вздутиями, притуплённые у верхушки и расширен] у основания, с тонкими сгенкаш и буроватым содержимым. Мякоть плода состоит из клеток округлой или овальной формы, содержащих включения оранжево-красного или буровато-желтого цвета (каротин! иды), мелкие друзы оксалата кальция и призматические кристаллы. Близ крупных пучков расположены пласты каменистых клеток, ветре' ются одиночные склереиды.

Таким образом, для сырья плоды всех изучаемых видов диагно( ческое значение имеют механические элементы в мезокарпии, их фо] и расположение, наличие кристаллических включений, форма клеток паренхимы, на эпидерме - простые волоски.

Для определения подлинности сырья наряду с "Внешними призш ми" и "Микроскопией" широко используют качественные реакции, в : числа и хронагографлческие пробы. Для разработки этой характерш ки подлинности наш были использованы результаты хроматографиче<

го изучения цветков и плодоз всех изучаемых видов. Предложена тонкослойная хроматография на пластинках "Силуфол" спиртовых извлечений из сырья в системе хлороформ-метанол (3:2) со стандартным образцом гиперозида. Все исследуемые виды сырья на уровне ГСО гиперозида имели в Уф-свете зоны адсорбции темно-коричневого цвета, которые после обработки 5% спиртовым раствором алюминия хлорида приобретали ярко-желтую окраску в видимом свете и яркую желто-зеленую флуоресценцию в УФ-свете.

Методика изложена в ФС на цветки и плоды боярышника (ГФ XI, зып.2, стр.271, 283).

4.Р. Разработка показателей качества сырья боярышника. Основным юказателем качества сырья является содержание биологически активна веществ, обеспечивающих терапевтическую ценность сырья, В вод-ше и спиртовые .извлечения цветков и плодов боярышника переходит ¡умма действующих веществ, которая характеризуется показателем"со-*еркание экстрактивных веществ" для экстрактов,"сухой остаток" для ¡астоек. Водные извлечения не имеют никаких показателей качества. ! связи с этим мы провели сравнительное изучение суммы действующих ¡еществ, переходящих в лекарственные средства, получаемые из сырья юярыпника и установили, что содержание экстрактивных веществ для :лодов всех изучаемых видов составляет не менее 25$, сухой остаток :астойки цветков не менее 3$, отвара плодов - не менее 1,5$, настоя ;ветков - не менее 2$.

С целью изучения качественного состава лекарственных средств экстракт, настойка, настой, отвар) мы провели их хроматографическое зучение в сравнении с исходным сырьем и установили, что во все екарственные средства переходят флавоноиды. Судя по размеру и нтенсизности свечения (после проявления хлоридом алюминия) зон дсорбции флавоноидов, содержание их в лекарственных формах из

К* 0,78

— —---'

0,72 0,66 0,63 0,54 0,50 0,44 0,38 0,34 0,25 0,17 0,07 0,06 0 01

1-1 сггга ,-, ,-----,

и________ .. 1 1 1

Г - 1 1 1 ( 1 (... . 1 1-1 Г П

1 ' с Г ~' ' 1 С~~ 1) 1 II 1 1 1 1 II 1 1- . 1

сгггэ

1 2 3 А 5 6 г Ь Ъ \ О

Рис.3 . Схема ОБХ спиртовых извлечений из цветков боярышника (1:10, система! 15% уксусная кислота) I - б.сглаженный; 2 - б.кровавокрасный; 3 - б.однопестичный; 4 - б.даугавский; "5 - б.курземский; б - б.восточнобалтийский; 7 - б.германский; 8 - б.отогнутошачелистиковый; 9 - б.Арнольда; 10 - б.туркестанский.

Ri

0,78 0,72 0,66 0,63

0,54

0,48 0,44 0,38 0,34

0,25 0,17

0,07 0,06 0,01

® ® © ® с." э---

1. 1 iz-j = — '

1 1 --- сп с-э 1 1 i-1 £=> 1-i <= ---= 1 1 с-^-з 1 1--- 1-1 => <=> 1-1 1-1 с—л -1--- с-i 1-. 1_1 1 ' сг—а --- гг~п с 11 • ---- CZD--- г—п С=1 1=1 C=Z CZ3 с 1.13---

cm е-гэ т 2 3 4 12 3 4 12 3 4 12 3 4

i

го чэ

I

Рис.4 . Схема ОБХ . ' лекарственных препаратов из сырья боярышника сглаженного (А);

б.германского (В), б.Арнольда (С), б.туркестанского (D): I - настойка цветков; 2 - настой цветков; 3 - жидкий экстракт плодов (очищенный, 1:1); 4 - отвар плодов (очищенный). Система: 15$ уксусная кислота.

цветков значительно больше, чем в соответствующих препаратах и плодов. Спиртовые извлечения содержали больше флавоноидов, чем водные.

Учитывая фармакологическую активность суммы флавоноидов и отсутствие показателя качества сырья боярышника по биологическ активным веществам, мы провели изучение содержания суммы флаво идоз и гиперозида в изучаемых видах в сравнении с фармакопейны видами.

Из сырья боярышника всех изучаемых видов была выделена су; флавоноидов. Препаративный выход составил от 1,6 до 2,9$ для цветков и от 0,05 до 0,26$ для плодов. Содержание гиперозида в сумме флавоноидов цветков составило от 25 до 48$, плодов - от ; до 45$.

Для количественного определения гиперозида в исследуемых ( разцах сырья мы использовали метод ВЭИ и хроматоспектрофотоме:

Содержание гиперозида в цветках фармакопейных видов бояры: составляет 1,338-1,735$, прибалтийских - 0,981-2,504$, североамериканских - 0,304-2,003$, среднеазиатских - 1,180-1,450$; в плодах 0,058-0,080$, 0,06-0,09$, 0,024-0,0196$, 0,102-0,122$ СС ветственно.

При анализе промышленных партий сырья содержание гиперозщ цзетках составило 0,62-1,89$, в листьях - 0,56-0,80$, в плодах 0,063-0,102$.

Полученные данные позволили предложить норму содержания ги розкда в цветках боярышника всех видов не менее 0,5$, в плодах суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид не менее 0,05$.

4.3. Определение содержания примесей.Допустимые примеси в сырье обусловлены биологическими особенностями растения, условиями сб сушки сырья.

Содержание флавоноидов в сырье боярышника, ( % ).

Вид боярышника

Цветки

Плоды

сумма фла- : гиперо- : сумма фяа-: гиперо-

воноидов : зид : воноидов : зид

>. кровяно-краоный 2,11 1,04 0,16 0,09

>. даурский 2,21 1,89 0,12 0,07

!. алтайский 2,02 1,03 0,16 0,09

!. сглаженный 2,16 0,98 0,09 0,04

!. курзомский 2,04 0,96 0,08 0,04

1. 'даугавский 2,62 1,13 0,14 0,09

восточнобалтийский 2,36 1,09 0,21 0,09

однопестичный 1,99 0,99 0,10 0,05

германский 2,18 1,09 0,23 0,11

. отогнуточашелисти-

ковый 2,11 1,00 0,10 0,05

. сааренский 1,97 0,72 0,09 0,03

. туркестанский 2,02 1,45 0,01 0,10

. понтийский 1,94 1,18 0,08 0,11

. гиссарский 1,97 1,30 0,09 0,12

. страшный 2,90 . 1,40 0,26 0,12

. крупноколючковый 1,60 0,35 0,10 0,04

. шамплейнский 2,40 1,06 0,09 0,04

. Дугласа 1,94 0,92 0,09 0,03

. шарлаховидный 1,90 0,88 0,08 0,03

. пенсильванский 1,72 0,64 ' 0,06 0,01

. Прингля 1,64 0,74 0,05 0,01

. миссурийский 1,61 0,38 0,08 0,03

. овальнолистный 1,98 0,62 0,08 0,03

. мягковатый 2,52 1,25 0,09 0,04

, Арнольда 2,64 1,04 0,08 0,04

, канадский 2,02 0,98 0,09 0,03

, вееровидный 2,14 0,44 0,09 0,04

, Робсона 1,71 0,65 0,10 0,03

Б соответствии с тербованиямл общих статей ГФ XI допустимы! примесями могут быть: части растения, не подлежащие сбору; част: утратившие естественную окраску, части других растений (органич! екая примесь), минеральная примесь.

Использование сырья от многочисленных видов боярышника тре< пересмотра норм разрешенных примесей и установления их на том у] не, который бы позволил сохранить в сырье норму содержания флав< идов.

Так для цветков боярышника норма других частей растения - ] чек, листьев увеличена в 2 раза и установлена не более 6% на ос1 вакии определения содержания гиперозида в листьях. Более высоко< держание листьев также не снижает качество сырья по содержанию с воноидов, но при этом резко изменялись внешние признаки сырья, з соответствии с которыми сырье следовало называть цветки с листы а это ухе другая категория сырья.

Показатель содержания побуревших цветков исключен в овязи < в

тем, чтоТпобуревпшх цветках содержанке гиперозида соответствует установленным нормам.

Показатель - содержание плодов подгоревших - предложен вмес показателя - содержание плодов подгоревших и почерневших. Это ос словлено тем, что плоды боярышника пятипесгичного имеют черную окраску. Исходя из результатов химического анализа установлена I их содержания не более 2$.

Показатель - содержание плодов недозрелых, буровато-зеленыэ предложен вместо показателя "содержание плодов недозрелых, блед! окрашенных". Это объясняется тем, что б.Королькова и б.желтый иь ют делтую и оранжевую окраску. Было проведено сравнительное изу* ние содержания суммы флавоноидов в образце, содержащем 20$ блед* окрашенных плодов. Установлено, что наличие в сырье бледноокраше

плодов не сникает его качества, в то время как недозрелые, буровато-зеленые плоды содержат действующих веществ в три раза меньше, поэтому установлена норма их содержания не более 1%.

Введение показателя "содержание плодов, поврежденных вредителями", объясняется тем, что практически все поступающее на завод зырье поражено большим яблоневым семяедом, личинки которого распо-шгаются в косточке.

Учитывая, что при заготовке сырья сборщики хорошо отличают ¡оярышник от других растений, то промышленные партии сырья, как фавило, содержали небольшое количество органической примеси (не !олее I%).

Содержание минеральной примеси не превышало 0,5% для всех ви-;ов сырья.

4.¿.Определение содержания влаги. Для всех видов сырья регла~енти-уется показатель "содержание влаги", который определяется методом зотерыической суики при 100-Ю5°С.

Нами было проведено определение содержания влаги в цветках и лодах изучаемых видов боярышника фармакопейным методом и методом эриватографии. Установлена норма не более

4.5.0пределениа золы общей и золы, нерастворимой в 10% растворе пористоводородной кислоты. На основании определения содержания злы общей и золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной юлоты, проведенных фармакопейным методом и дериватографическиы зтодом, установлена норма содержания золы общей для цветков не шее 12%, для плодов не более 5%; золы, нерастворимой в 10%раст-)ре хлористоводородной кислоты для;цветков не более 3,5%, для пло->в не более 1%.

Показано, что метод'дериватографии дает возможность определять держание влаги и содержание золы общей в одном образце сырья.

4.6. Установление сроков хранения сырья "Плоды боярышника". В ранее существующих НТД на плоды боярышника установлен срок хрг ния 2 года. Наш было проведено изучение стабильности сырья при нении. Установлено, что сроки хранения плодов боярышника не могз быть увеличены из-за повреждаемости сырья большим яблоневым семг едом, который повреждает боярышники еще в момент цветения. Изуче повреждаемости боярышников разных видов позволило установить вне кий процент повреждаемости европейских и азиатских видов, в отли от северо-амариканских видов. В результате прохождения вредителя полных циклов развития, повреждение сырья в начале третьего года хранения достигает 16$. Поэтому на третьем году хранения сырье к соответствует требованиям НТД по содержанию плодов, поврежденных вредителями и по содержанию суммы флавоноидов.

В то же время содержание флавоноидов в неповрежденных плода боярышника при хранении в течение грех с половиной лет изменяете незначительно.

5. Изучение биологических особенностей развития боярышни 5.1. Морфобиологическая характеристика возрастных состояний боярышника.

Для рационального использования ресурсов мы провели ряд бис гических исследований. Изучение вопросов онтогенеза и выделение возрастных периодов и состояний у семенных особей боярышника про водили по методике Т.А.Работнова и А.А.Уранова, уточненной Л.Б.Е гольновой для древесных пород. Основным объектом изучения служил б.туркестанский; исследования морфобиологических характеристик в растных состояний б.понтийского и б.гиссарского носили сравнител ный характер. Для боярышников мы выделили следующие периоды разв тия: латентный (семена), предгенеративный или девственный (проро ки или всходы; »ванильные особи), имматурные особи (виргинильные или взрослые вегетативные особи), генеративный (молодые, зрелые

ли средневозрастные, старые особи) и неясно выраженный постгенера-ивный или сенильный.

Вышеназванные возрастные группы характеризуются комплексом пределенных морфологических признаков.

Семена изученных видов боярышника имеют сходное строение. За-одыш занимает всю полость семени. Он прямой,безхлорофильный, состо-т из 2-х мясистых семядолей овальной формы, широкого зародышевого орешка и почки (стеблевого апекса и двух листовых примордиез).

Проростки (всходы). Прорастание у изученных видов боярышника адземноа, на поверхность почвы выносятся две зеленеющие семядоли вальной формы. В естественных условиях прорастание семян наблюда-гся с апреля. Для всходов характерно смешанное питание за счет зществ семени и ассимиляции первых листьез. Первая пара настоящих ютьев появляется у всходов спустя 4-7 дней после прорастания змядолей. Следующие листья появляются приблизительно через такие з интервалы времени. Пожелтение и отмирание семядолей начинается эиблизигельно через месяц после появления проростков. К этому мо-знту особи имеют 5-7 листьев. Проросток не ветвится.

Гипокотиль имеет длину до 4 см, эпикотиль - до 2 см, главный зрень - до 7 см. Корни всходов стержневые, вертикально уходящие шз, к концу месяца корень достигает 20-25 см, в то время как сте-;ль лишь 5-7 см. Всходы полностью формируются к концу вегетацион-)го периода.

После перезимовки всходы переходят в ювенильное состояние. Они )едсталвяют собой одноосные особи, нарастающие моноподиальяо, ред) со второго года жизни начинается вегетативное ветвление главной ¡и. По высоте ювенильнке особи не выходят за пределы тразостоя. ¡я 2-летних особей характерно усиление бокового ветвления; 3-5-летних особей корни продолжают постепенно углубляться и одно-юменно развиваются боковые корни.

Ювенильные особи имеют календарный возраст 1-5 лет (в угне ном состоянии срок пребывания в этом возрастном состоянии монет увеличиваться).

Имыатурные особи. Переход в это состояние характеризуется явлением боковых осей, увеличением, порядка ветвления и значител приростом. По высоте они входят в подлесок, достигая 1,5 м. В э возрастном состоянии начинает замедляться рост корней в длину и чинается их усиленное боковое ветвление,начинают разрастаться п герхностные корни; проекция корневой системы превышает проекция кроны. Календарный возраст имматурных особей 2-8 лет.

Взрослые вегетативные (виргинильные) особи составляют высо подлесок, достигая в высоту 2-3 м. У этой группы выделяется ств и крона, в которой выделяется лидерная ось. Крона слаборазвита, нической формы, есть сильно развитые боковые ветви, интенсивно растаэщие з длину и ширину, составляющие скелет кроны. Эта груя имеет наиболее крупные листья. В этот период усиленно разрасте придаточные, широко распростертые корни. Календарный возраст ос 4-15 лет.

В молодое генеративное состояние переходят особи, приобрел способность цвести и плодоносить, Цветение и плодоношение не ос ное. Соцветия образуются на укороченных побегах "плодушках", рс ложенных иа удлиненных, а с возрастом и на укороченных пвбегах. Генеративные почки на удлиненных побегах могут быть терминальнь и пазушными, а на укороченных - только терминальными. Годичный прирост побегов остается достаточно большим, но несколько меньц . чем в предшествующий период. Крона развита, суженной формы. Гле ось еще сохраняется, ветвление до У1 порядка. В основании ство; появляется шелушащаяся кора. Календарный возраст молодых генерг тивных особей 5-25 лет.

В зрелом (средневозрастном) генеративном состоянии происходит экончательное становление жизненной формы. Деревья достигают в вы-зоту 5 (7) м. Крона дерева становится раскидистой, приобретая округлую форму. Главная ось теряется среди сильных скелетных ветвей, её эост в высоту заметно ослабляется. Годичный прирост побегов также зслабляется. Цветение обильное, ежегодное, плодоношение ежегодное. 1твол в базальной части на 1-2 м покрыт шелушащейся пробкой.Кален- . ирный возраст зрелых генеративных особей 18-80 лет.

Стареющие генеративные особи имеют изреженную раскидистую кро-¡у, в котрой появляются умирающие или уже отмершие ветви; в провесе старения их количество увеличивается. Цветение носит не >бильный, убывающий характер. Годичный прирост все более сокращайся (2-5 см), идет, в основном, прирост диаметра ствола. Растрес-:авшаяся, шелушащаяся корка покрывает весь ствол и скелетные ветви; I процессе старения их количество увеличивается. Календарный возраст нарых генеративных особей 60-100 лат и более.

Особи сенильного периода, что подразумевает отсутствие цветения [ плодоношения у деревьев,в природе мы не наблюдали. Сенильный пе-1Идо у боярышников можно считать неясно выраженным, что проявляется I снижении деятельности камбия, падении прироста проводящих тканей, кзобь отмирает от небольших заморозков или других неблагоприятных •словий.

• Для онтогенеза б.понтинского следует тметить более замедленное развитие,особенно в первые годы жизни. !.гиасарский, напротив, является быстро развивающимся видом. Он первые зацветает в возрасте 5-6 лет, в то время как другие виды природе зацветают в 10-15-летнем возрасте.

По своему морфогенезу изучаемые виды боярышника следует отне-ти к жизненной форме "плодовое дерево".

Некоторые биометрические показатели возрастных состояний боярышника туркестанского

Возрастной период, состояние

Предгенсративный Р : 4 ;

¡Генеративный

Календарный возраст, в годах

Высота ствола, в см

Окружность створа в базальной части, в см

Окружность ствола на уровне I м, в см

Годовой прирост главной оси, в см

Радиус кроны, в см

Форма кроны

Порядок ветвления

Характер цветения и плодоношения

до I 15 ±5

1-5 45*30

0,45*0,05 1,25*0,75

15* 5

30*10

ДО II

2-8 4-15 5-25 95 * 55 200 ±100 275*125

18"- 80 60 -100 450*150 500*100

5 * 3

26*14 19*11

30*10

10 * 5

3,75 ±2,25 8* 4

40 * 20 40*20

50 * 20 85*35

кониче- кониче- островер-окая екая шинно-округлая

до И (И) до У Л

необильное

70*40 60*40

95*55 63*37

20*10 3,5*1,5 150*50 250*100 375*125

• округ- раскидистая, лая изреженная

У1 - УП УП-(УШ) ( УШ )

обильное средне-обильное , убывающее

со

СЭ

Таким образом, можно сделать вывод, что большой жизненный, цикл боярышников можно считать полночленным с длительным генеративным периодом и неясно выраженным сенильным периодом. Полный комплекс видовых особенностей боярышника формируется к началу генеративного периода, окончательное становление жизненной формы происходит в зрелом генеративном состоянии. Наиболее пригодным возрастным состоянием для заготовки сырья является зрелое генеративное, характеризующееся обильным цветением и плодоношением; именно особи этого возрастного состояния следует учитывать при определении ресурсов. Я.2.Ритм сезонного развития б.туркестанского, б.поктипского, б.гиссарского. Изучение динамики сезонного развития проводили по методике И.Г.Серебрянова. По типу ассимиляционной поверхности боярышники относятся к группе летнезеленых растений, сохраняющихся в зеленом состоянии до 8 месяцев. В течение года развивается одна генерация листьев. Боярышники обладают закрытыми почками возобновления, в которых формируется побег будущего года. По степени сформиро-ванности побегов изученные боярышники относятся к I группе - побеги формируются в почках возобновления полностью с зачатками цветков и зоцветий. Изученные виды боярышника начинают цветси в конце апреля, {огда среднесуточная температура воздуха достигает 15-2°С. Их ха-)актерной особенностью является зацветание после полного распускания шстьев и начала роста вегетативных побегов. Определена продолки-:ельность цветения одного цветка - 3-5 дней, соцветия - 5-8 дней, дерева - 7-12 дней. Ниаболее ранне цветущим и плодоносящим являет-я б.гиссарский. Период массового цветения составляет 2-4 дня. Это ремя является наиболее подходящим ;для сбора сырья "цветки боярыш-ика".

От завязывания .V плодоз до их созревания проходит 60-100 дней, аиболее раннее плодоношение (середина августа) наблюдается у б.гис-арского. Завязываемость плодов у него небольшая (до 40$). Массовое

плодоношение у б.туркестанского и б.понтийского приходится на ок тябрь; завязываемость плодов 60-90$.

Урожайность цветков и плодов определяли на модельных экземп pax - деревьях зрелого генеративного состояния среднего габитуоа средний урожай цветков составил от 0,5 до 1,5 кг воздушносухого сырья, плодов - у б.туркестанского 4-8 кг с дерева, у б.понтийск 5-10 кг, у б.гиссарского - до 2 кг плодов.

Изучение динамики роста вегетативных побегов показало, что развитие происходит, в основном, в апреле-мае (70-90$ годичного прироста). Продолжительность роста 50-60 дней. Максимальный рост укороченных побегов, образующихся из пазушных почек, продолжаете 20-30 дней. Продолжительность вегетации у б.гиссарского 220-230 у б.туркестанского 230-250 дней,

Результаты исследования динамики сезонного развития послужи, основой для разработки инструкций по сбору и сушке сырья. 5.3. Определение качества семян некоторых видов боярышника. Семе ной способ размножения является основным. Показателем качества я ляется чистота семян. Для заключения о чистоте семян мы определя их полнозернистосгь и повреждаемость большим яблоневым семяедом. Процент повреждаемости семян большим яблоневым семяедом в значит ной мере влияет на качество и сроки хранения сырья - плоды бояры ка.

Объектом исследования служили семена всех изучаемых видов. Контроль качества семян производился по ГОСТ 2937-55.

Нами установлено, что процент повреждаемости колеблется от до 60 в зависимости от вида боярышника.

Семена 15 изученных северо-американских видов, практически повреждаются большим яблоневым семяедом. В отдельных случаях эти повреждения могут достигать 2$.

Для фармакопейных видов показатель полнозернистости составл

11-92%. Для северо-американских видов он не превышает 41%, в основном от 17 до 30%.

Полученные предварительные данные за 4 года исследований позволяют сделать предположение, что на полнозернистость и повреждаемость семян влияет целый ряд факторов: видовая специфичность, погодные условия в момент цветения, качество и оплодотворяющая способность пыльцы, зараженность территории большим яблоневым семяедом, колебание его численности и др.

В результате проведения статистической обработки результатов определения качества семян боярышника установлено статистически значимое различие отечественных и североамериканских видов боярышника по полнозернистости семян и их повреждаемости.

Для семян фармакопейных видов среднее полнозернистости X = 53,4 при стандартном отклонении - = 22,4, среднее повреждаемости X = 14,3 при i =13,1; для семян северо-американских видов соответственно X = 27,3 при ± = 5,6 и X = 0,2 при ± = 0,5.

Учитывая, что повреждения семян ухудшают качество и сроки хранения сырья (плоды боярышника), полученные результаты позволяют считать североамериканские зиды боярышника перспективным источником сырья с более длительным сроком хранения. 5.4. Изучение режимов предпосевной обработки семян боярышника. Трудности проращивания семян и выращивания посадочного материала з питомниках обусловлены наличием у семян боярышника комбинированно покоя и твердой косточки.

Мы провели сравнительное изучение методов предпосевной обра-5отки семян, доступных практическим работникам питомников при боль-иих обьемах выращивания посадочного материала.

В опыт закладывали по 200 семян каждого зида боярышника из сех же партий, где ранее определялась чистота семян.

При постановке опыта использовали следуюище режимы предпосе ной обработки семян: стратификация в песке, обработка концентрир ванной серной кислотой (2 часа) с последующей стратификацией в песке, стратификация в грунте в течение 7 месяцев, обработка 1% раствором нитрита натрия (24 часа) с последующей стратификацией грунте, обработку недозрелых семян I% раствором нитрата калия (24 часа) с последующией стратификацией в грунте, стратификация торфе - 10 месяцев (0-5°С) семян предыдущего года сбора, стратиф кация в грунте недозрелых семян.

Процент прорастания контрольных партий семян, посеянных осе в грунт, значительно ниже, чем у семян, заложенных одновременно ними на стратификацию в грунт, а затем посеянных.

Проведение предварительной стратификации семян концентриров; кой серной кислотой незначительно изменяет, увеличивает процент ! растения по сравнению с аналогичной стратификацией без скарифика;

i

Обработка семян Г/о раствором нитрата калия улучшает их прор! ние, особенно в случае недозрелых семян, в то же время длительна] холодная стратификация эффективнее и дешевле.

Сравнение исследуемых показателей по группам (отечественные северо-америкакские) позволило установить, что при всех режимах предпосевной обработки процент прорастания семян отечественных видов вьше, чем северо-американских. Это, по-видимому, можно обы нить значительно большей толщиной косточек у семян северо-америкг ских видов.

Результаты статистической обработки показали, что наилучшие результаты при проращивании семян получаются после 10-месячной хс лодной (0-5°С) стратификации зрелых и недозрелых семян предыдуще! года сбора.

-436. Разработка показателей качества лекарственных средств боярышника.

6.1.Экстракт плодоз боярышника. Из плодов боярышника разрешены к медицинскому применению жидкий экстракт и отзар, из цветков -настойка и настой.

Методы стандартизации по действующим веществам не разработаны. Для экстракта боярышника в НТД приведены следующие показатели качества: содержание спирта не менее 5$%, содержание сухого остатка не менее 18$. Подлинность определяется качественными реакциями на сердечные гллкозиды и дубильные вещества. Сердечные гликозиды не обнаружены, дубильные вещества не обеспечивают фармакологический эффект. Стандартизация жидкого экстракта боярышника по действующим веществам проводится биологическим методом на утомленном сердце лягушки.

Для определения качества экстракта мы разработали и предложили ввести показатель содержания суммы флавоноидоз в пересчете на гкперо-зид, Для этого использовали модифицированную методику определения суммы флавоноидоз в плодах боярышника в пересчете на гиперозид.

Для проверки воспроизводимости методики было проведено определение суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид в экстракте из плодов б.сглаженного в 10 повторностях.

Метрологические характеристики методики количественного

определения суммы флавоноидоз з экстракте боярышника.

£ : X : в : Р : -¿Ы) ... ., ..,_ -------! ....... ,. .. ^ \ ЬХ : £ : Ез,

9 : 0,056 : 0,0024 : 95$ : 2,262 : 0,0048 : ± 9,08 : ± 5,25

Относительная ошибка методики при проведении анализа в . трех повторностях не превышает * 5,25$.'

Для проверки отсутствия систематической ошибки были проведены опыты с добавками гиперозида-сгандарга непосредственно в экстракт. Относительная ошибка методики определения сушы флавоноидоз в экстракте боярышника при проведении анализа в трех повторностях не

превышает 5,23%.

С помощью разработанной методики нами были проанализированы экстракты плодов изучаемых видов.

В экстракт боярышника переходит от 34,5 до 56,0% от исходно количества суммы флавоноидов в сырье. В то же время содержание с мы флавоноидов в экстракте боярышника серии 180586 - 0,01%, что ставляет 13.3% от исходного количества суммы флавоноидов в сырье На фармацевтических фабриках для изготовления препарата чаще все используют неизмельченное сырье.

Наш изучена локализация флавоноидов в плодах по тканям. Ус

новлено, что содержание суммы флавоноидов в пересчете на гипероз:

в кожице плодов в 16 раз больше, чем в мякоти без семян и в 32 р;

больше, чем в мякоти с семенами. Около 73% суммы флавоноидов сод

лагся в кожице плодов. В результате количественного определения

суммы флавоноидов в цельных плодах и измельченных установлено, ч1 из

флавоноидов V измельченных плодов извлекается в 1,5 раза больше, чем из дельных.

Определение сухого остатка. НТД требует проводить методом ) термической сушки при Ю0-Ю5°С.

Нами установлена возможность использования дериватографичес] го метода для определения сухого остатка в настойках и экстракта: из лекарственного растительного сырья. При этом незначительная скорость повышения температуры в камере печи, автоматическая реп страция потери в массе повышает точность определения сухого оста: и уменьиают вероятность частичной деструкции образца при длителы воздействии повышенных температур.

Нами проведено сравнительное исследование результатов опред* ния сухого остатка методом изотермической сушки по ГФ X и дериваа графическим методом. Показано, что полное удаление влаги происход

Аналитические условия: Прибор: "Беектаи " 344

Колонка: 250 х 4,6 ш, "Штр^еге 5 ыкм

Элюент: вода - ацетонитрил - уксусная кислота ( 80:16:4 ) Детектор: УФ 257 ни

©

ЧА^

©

®

ч

©

0 10 20 30 мин.

Ю 20 30 шш. 0 10 20 30 ш, Э 10 2Э 30 пик.

СЛ

Рис. 5

. Хроматограммы спиотовых элюатов с колонки полиамидного сорбента, содеожащих сумму флавоколдов б. Арнольда: I - кожицы плодов; 2 - измельченных плодов; 3 - неизмель-ченнкх плодов; ь - мякоти плодов с косточками.

при 140°С. Сравнивая результаты, полученные при определении сухс остатка и суммы флавоноидов в экстракте боярышника, можно видеи что содержание сумш флавоноидов составляет в среднем 0,2$ массь сухого остатка.

Проведенные исследования позволяют предложить норму содержа сухого остатка не менее 20$, норму содержания суммы флавоноидов пересчете на гиперозид не менее 0,02$ для экстракта плодов боярь никап

6.2.Отвар плодов боярышника. Метод приготовления отваров из плс описан в статье "Настои и отвары" ГФ XI.

Для химической стандартизации отвара плодов боярышника вози но также использовать показатели содержания суммы флавоноидов в ресчете на гиперозид. Нами показано, что в отвар, переходит от 2 до 4,8$ сумш флавоноидов,от их исходного содержания в сырье.

Определение сухого остатка отвара плодов боярышника и сравн ние полученных данных с содержанием суммы флавоноидов в отваре л зволило установить, что содержание последних составляет в средне 0,26$ от массы сухого остатка отвара плодов боярышника.

Нами предложено установить норму соедрнания сухого остатка отвара плодов не менее 1$, содержание суммы флавоноидов не менее 0,002$.

б.З. Настой цветков боярышника. В соответствии с требованиями ГФ "Настои и отвары" из цветков готовят настой. Качество настоев, т же как и отваров, не регламентируется никакими показателями.

Для стандартизации настоя можно использовать по аналогии с сырьем показатель содержания гиперозида. Нами установлено, что в настой переходит в среднем 2,5$ гиперозида, а содержание сухого ка составляет в среднем 2$. Таким образом, гиперозид составляет среднем 1,2$ от массы сухого остатка настоя цветков боярышника.

Для стандартизации настоя цветков боярышника предложена нор

родеркания гиперозида но менее 0,02%, оухого остатка не менее 1,5%. 6.4.Настойка цветков боярышника. Нами был проведен анализ настойки цветков боярышника промышленного производства (московская галено-вая фабрика).

Для сравнения нами были приготовлены настойки (1:Ю)на 70% спирте из образца сырья серии 10481 с содержанием гиперозида 0,87%. Настойки готовили методом ремацерации в модификации ДАНИИ, соответствующему их промышленному изготовлению.

Для определения количественного содержания гиперозида использовали методику, предложенную нами для определения гиперозида в сырье.

Полученные данные говорят о том, что при изготовлении настоек промышленным путем извлекается гиперозида от 0,016 до 0,20, а приготовленным экспериментально - 0,068-0,70.

В настойку переходит в среднем 5,8% от исходного количества ?иперозида в сырье. Сухой остаток составляет в среднем 3%. Предло-кена норма содержания гиперозида не менее 0,05%.

6.5« Определение состаза свободных аминокислот.

Изучение сухих остатков препаратов боярышника показало, что сроме флавоноидов там содержится значительное количество свободных шинокислот, обладающих положительным влиянием на сердечно-сосуди-■тую систему.

Сравнительный анализ аминокислотного состава из различных висов, сырья боярышника позволил установить, что качественный состав !Вободных аминокислот во всех видах сырье идентичен. Сумма свобод-;ых аминокислот представлена фосфосерином, ;:таурином, мочевиной, 'лицерофосфоэтаноламином, фосфоэтаноламлном, глутамином, аспараги-:овой кислотой, саркозином, метионина сульфоксидом, треонином, серин^ спарагином, глутаминовой кислотой, пролином, цитруллином, глицином,

бодержание свободных аминокислот в различных органах боярышника сглаженного

Название : Листья : Цветки : Плоды

аминокислоты :. А* ■ :,-Б* : А : Б : А : ; Б

Фосфосерин, таурин, мочевина глицерофосфоэтаноламин, фосфоэтаноламин 1 0,7 3,2 1,1 2,1 0,3 5,2

Неидентисбицированные соединения 0,6 2,5 1,6 3,0 0,2 3,1

Глутамин, аспарагиновая кислота, метионина сульфоксид. 0,7 3,1 2,9 5,5 0,5 7,7

Треонин 1,0 4,5 7,9 15,2 0,5 7,7

Серии, аспарагин 1,1 4,7 7,7 14,6 0,8 12,4

Глутаминовая кислота 1,3 5,8 4,8 9,2 0,3 4,1

Саркозин, цитруллин 0,2 1,0 1,1 2,1 0,2 3,6

Пролин ** 1,1 5,0 4,9 9,3 1,1 17,5

Глицин 0,4 1,9 0,4 0,8 0,1 1,0

Алании 4,7 20,0 6,6 12,6 0,8 12,4

Валин 1,2 5,1 4,7 9,1 0,2 3,1

Изолейцин 0,5 2,2 1,2 2,4 0,1 1,0

Лейцин 0,2 0,7 0,4 0,8 0,03 0,5

Тирозин 0,5 2,0 0,1 0,2 следы 0

Фенилаланиц 0,9 3,9 0,8 1,6 0,2 2,6

Гидроксилизик, гамма-ашно-масляная кислота, неиденти-фицированное соединение 6,3 27,6 3,2 6,2 0,5 7,7

Лизин 0,1 0,6 0,1 0,2 следы 0

Неидентифицированное соединение 0,8 3,5 1,3 2,5 0,2. 3,0

Гистидин 0,1 0,3 0,5 1,0 следы 0

Триптофан 0,2 0,7 0,6 1,2 0,2 2,6

Аргинин 0,2 1,0 0,4 0,8 0,3 4,1

Сумма свободных аминокислот &2,б $2,3 6,3

х - единицы измерения: А - ммоль/кг абс.сухого сырья;

Б - % от суммы свободных аминокислот.

содержание пролина обсчитывалось компьютером прибора отдель; от содержания саркозкна и цитруллина, хотя на хроматограмме все три аминокислоты выходили одним пиком; это связано с те: что детектирование всех аминокислот проводилось при 570 нм, то время как детектирование пролина при 440 нм. ,

ианином, валинои, изолейцинои, лейцином, тирозином, фенилаланинои, 'идроксилурнои, гамма-аминомасляной кислотой, лизином, гистидином. количественное содержание в различных видах сырья не одинаково.

Показательно высокое содержание в цветках: 52,3.ммоль/кг, ;ротив 22,8 шоль/кг в листьях и 6,3 ммоль/кг в плодах.

Сумма фосфо-аминокислот, дикарбоновых аминокислот и их амидов, , ерина, треонина и минорных аминокислот в цветках боярышника в 5 аз больше, чем в листьях и в 8 раз больше, чем в плодах.

Фракция нейтральных аминокислот (глицина, аланина, валина, золейцина, лейцина, тирозина и фанилаланина) в цветках и листьях количественном отношении представлена практически одинаково. В лодах эта часть спектра аминокислот представлена в очень малых оличествах.

При изучении аминокислотного состава сырья боярышника особый иерее представляют аминокислоты, обладавшие положительным влияем на сердечно-сосудистую систему: метионин, лейцин, глутамино-ая и аспарагиновая кислоты. Все эти аминокислоты найдены н цветках, юдах и листьях б.сглаженного. В цветках обнаружено высокое со-зржание глутаминовой кислоты, применяемой в медицинской практике зи гипоксиях и аритмиях - 9,2$ от суммы свободных аминокислот. В 5солютном выражении содержание глутаминовой кислоты в цветках .сглаженного составляет 4,8 ммоль/кг и превышает соответствующую ¡личину для листьев в 3,7 раза, для плодов в 16 раз. Содержание нионина и лейцина, обладающих положительным илнотропным эффектом, югавляет в цветках б.сглаженного соотвественно 5,5$ и 0,8$ от шш свободных аминокислот.

Для нас представляло интерес также определение количественного держания в цветках, листьях и плодах боярышника аминокислот гисти-на и треонина, выполняющих в организме человека роль транспорта

меди. Медь необходима для коррекции нарушений микроэлеменгного пена при лечении сердечно-сосудистых заболеваний.

Проведенное'исследование позволило установить высокое соде ние треонина. Полученные результаты согласовываются с данными о количественном содержании меди в различных органах боярышника. Нас интересовало также содержание в сырье аминокислот тирозина фенилаланина. Известно, что эти аминокислоты являются исходными единениями для биосинтеза флавоноидов в растении. Установленное результате проведенного исследования невысокое их содержание в объясняется, по всей видимости, участием их в биосинтезе флавоН' дов.

Исходя их установленной идентичности качественного состава цветков, плодов и листьев одного вида боярышника для сравнения : довой специфичности различных представителей рода боярышник мы 1 пользовали один вид сырья - цветки.

Сравнительный анализ аминокислотного состава показал, что 1

ственный состав свободных аминокислот в изучаемых видах идентич« а количественное содержание их в различных видах различно. Приче

наблюдается широкий разброс значений содержания отдельных свобо;

аминокислот и их сумм для каждого вида боярышника.

В целом для рода боярышник содержание суммы свободных амине кислот в цветках изученных видов колеблется от 41,4 до 172,4 шс и в среднем составляет 86,0 - 38,5 ммоль/кг.

Цветки всех изучаемых видов содержат глутаминовых кислот в среднем 9,2 + 3$ от суммы свободных аминокислот, лейцина в орадг. 1,1 * 0,5$, гистидина 0,5 * 0,4$, треонина 4,5 * 1,8$, тирозина 0,2 ± 0,2$ и фенилаланина 2,3 - 0,9$ от суммы свободных аминокис . Проведенное исследование аминокислотного состава сырья разл ных видов боярышника позволяет считать боярышник перспективным

источником свободных аминокислот.

Нами было проведено также определение содержания свободных аминокислот в экстракте, настойке, отваре плодов, а также в настойке и настое цветков и листьев б.германского. Все изученные препараты имеют идентичный состав аминокислот, но различаются по их количественному содержанию. Наибольшее содержание аминокислот обнаружено в жидном экстракте плодов, а также в настойке и настое цветков (соответственно 0,25%,. 0,19%, 0,20%).

Содержание суммы свободных аминокислот в настойке и настое плодов незначительно по сравнению с экстрактом и соответственно 0,02% и 0,01%.

Таким образом, при комплексной терапии сердечно-сосудистых за-5олеваний в качестве источника свободных аминокислот наиболее целе-зообразно применение экстракта плодов, что согласуется в данными фармакологических исследований.

В.В . Определение микроэлементного состава.

При сердечно-сосудистых заболеваниях в крови человека наблюда-зтся дефицит меди и марганца. В то же время при этих заболеваниях токазаны препараты флавоноидов, аминокислот и аскорбиновой кислоты. Сочетание микроэлементов, флавоноидов, аминокислот и аскорбиновой сислоты характерно для сырья боярышника.

Поэтому при изучении растений рода боярышник особенный интерес федставляет выявление закономерностей накопления растениями меди, донка, марганца, а также тяжелых металлов - кадмия и свинца, оказы-¡ающих токсическое действие на организм человека.

Нами было исследовано распределение и накопление микроэлемен-:ов по органам растений (лист, цветок, плод) и их валовое содержаще в почвах различных-биогеохимических зон (по В.В.Ковальскому), [олученные наш данные свидетельствуют о том, что цветки боярышника

накапливают больше меди (18,2 * 7,7 иг/кг), чем листья (10,7*2, и плоды (5,4 * 3,0 иг/кг) независимо от вида и места сбора сырь Максимальное накопление марганца и железа наблюдается в плодах ярышника. а цинка - в листьях.

Кроме того установлено, что при значительных различиях в с держании валовой меди (от 9,4 до 95,0 мг/кг) в почвах различных химических зон, цветки, листья и плоды разных видов боярышника : рательно накапливают ыедь независимо от содержания её в почве.

Полученные данные позволяют рекомендовать проводить загото: боярышника во всех геохимических районах независимо от валового держания меди, цинка и марганца в почвах.

Высокое содержание и способность к накоплению микроэлеменп обладающих положительным влиянием на сердечко-сосудистую систем; сырье позволяет считать его перспективным источником биологичес] доступных микроэлементов .

Наш был изучен также шкроэлеыентный состав лекаротвэнных препаратов боярышника. Мы использовали атомно-абсорбционный мете определения микроэлементов непосредственно в лекарственных преш тах боярышника.

Отработку методики проводили на лекарственных препаратах иг сырья б.сглаженного на атомно-абсорбционном спектрофотометре

Разработанная нами методика группового определения микроэле тов в лекарственных препаратах боярышников позволяет определять цинк, марганец, хром, кадмий в спиртовых и водных лекарственных формах из сырья боярышника.

Полученные данные говорят о том, что содержание всех микроз ментов в экстракте плодов, настойке цветков и настое цветков при близительно одинаковые и значительно превышают соответствующие з чения для отвара плодов боярышника.

Содержание микроэлементов в сырье и лекарственных средствах боярышника.

Объект • Си • З.П : Мп

исследования : 5 4 ^ ; мг/кг: . А , % : х ± - ;мг/кг: А, % : х - - ;мг/кг: А А, %

Плоды 4,70 ± 1,98 20,04 * 6,40 15,87 ± 6,91

Экстракт плодов 0,24 ± 0,13 5,2 0,34 ± 0,16 2,0 0,31 ± 0,16 2,0

Отвра плодов 0,06 ± 0,02 1.3 0,26 ± 0,04 1,2 0,05 ± 0,02 0,4

Цветки 16,36 ± 3,30 37,34 -14,21 26,43 ±10,11

Настойка цветков 0,29 ± 0,11 1,8 0,65 ± 0,13 1,7 0,11 ± 0,05 0,4

Настой цветков 0,34 ± 0,09 2,3 0,59 ± 0,20 2,0 0,41 ± 0,19 1,7

На основании полученных данных о количественном содержании микроэлементов в сырье и препаратах боярышника нами был рассчита процент перехода некоторых микроэлементов в лекарственные препар.

Из сырья в лекарственные препараты переходит от 0,4 до 2,3$ меди, цинка, марганца. Наибольший процент перехода характерен дл: меди.

• 7. Изучение химического состава семян тынвы.

Отвар семян тыквы и суспензия порошка очищенных семян в вод| разрешены к медицинскому применению в качестве антигельминтного средства. Липофильная фракция семян тыквы в последнее время нахо; медицинское применение как противовоспалительное средство для пр> филактики и лечения простатитов.

Однако контроль качества семян тыквы сводится к определению держания влаги, золы и допустимых примесей. Действующие вещества не определяются.

Для разработки показателей качества по содержанию дейотвуквд веществ, обеспечивающих антигельмингкоа и противовоспалительное действие,необходимо провести изучение химического состава гидрофильной и липофильной фракций.

7.1.Изучение гидообильной бракции семян тыквы. Чтобы иметь представление о количественном содержании гидрофильной фракции, мы щ вели определение содержания экстрактивных веществ, извлекаемых вс в соответствии с требованиями общей статьи ГФ XI и установили, чз

их содержится не менее 20$.

(1962^

Из работ А.М.ПавловоиТИзвестно, что наиболее эффективное анз гельминтное действие оказывает водное извлечение, очищенное от бе ков и низкомолекулярных пептидов.

Нами было проведено хроматографическое изучение депрогеинизи ванных водорастворимых фракций семян изучаемых видов тыквы в тонн

слое и на бумаге в различных системах растворителей, обычно используемых для разделения свободных аминокислот. Анализ хроматограмм показал, что изучаемая фракция содержит много нингидринположитель-[шх соединэний. Одно из пятен с 0,46 наиболее интенсивно и экрашено в необычный оливковый цвет.

Нами было проведено также исследование методом низковольтного электрофореза на бумаге в кислых буферных растворах. В наиболее аслой буферной системе рН=1,1 нам удалось отделить неизвестное шиносоединение от основных аминокислот, в частности аргинина.

В дальнейшем низковольтный электрофорез на бумаге был исполь-¡ован нами для препаративного выделения неизвестного аминосоедине-гая.

7.2.Идентификация аминосэединения. С целью изучения кислотной стабильности был проведен кислотный гидролиз 5,7н соляной кислотой з !тандартных условиях. Анализ гидролизата на аминокислотном анали-1аторе показал, что ни время элюции, ни соотношение каналов детекти-ювания, ни площадь пика, соответствующая аминосоединению, не изменись. Это указывало на то, что изучаемое соединение кислотоста-ильно, не является пептидом и не связано ковалентно с каким либо .ругим химическим соединением.

Анализ функциональных групп неизвестного аминосоединения ме-одами частичного замещения (динятрофенилирозания, тринитросульфо-енилирования, нитрозирования и метилирования) с последующим низко-ольтным электрофорезом на бумаге продуктов реакции позволил с ольшой степенью достоверности установить, что исследуемое амино-оединение имеет свободную карбоксильную, амино- и имино-группы.

При масс-спектро-—гметрических исследованиях ход фрагментации роизводного аминосоединения показал, что' оно содержит карбоксиль-ую группу и две аминогруппы.

+ —

Тг3 1 Ог,

lf 1 и0

tos (, о

h 5 о

< мм §

Зма ©

5 м и 3 - в)

Шелл Л о ф

Рис.6. Электрофоретичеокоо разделение водорастворимой фракцш из семян тыквы вида С.pepo в системе : муравьиная кислота-уксусная кислота-вода (28:20:52); 250 в; 3 час Проявление: 0,2$ раствор нингидрина в ацетоне. Нанесение: 1-4 - аликвоты 1,3,5 и 10 мкл исследуемой фракции (при концентрации 10 мг/мл воды); 5-8 - стандартные растворы основных аминокислот - аргинина, гистидина, триптофана, лизина по 0,01 мкмоль. Заштрихованные пятна окрашивались в оливковый цвет.

низированной водорастворимой фракции из семян тыквы С.pepo до гидролиза (А) и после гидролиза (Б). Внесено: А - 1,5 мг и 1,0 иг для анализа кислых/нейтральных и основных аминокислот, соответственно; Б - 1,0 мг и 0,8 мг фракции;

В - 50 мкл стандартной смеси аминокислот фирмы "Хитачи" (по 5 нмоль каждоН амчнокислоты).

А,Б - анализ основных аминокислот проведен в модифицированном буфере (рН 6,45); В - в стандартном (рН 5,28).

Сопоставление данных пасс-спектрометрического анализа с да ми по анализу функциональных групп позволяет сделать вывод, что исследуемоа соединение З-амино-З-карбокои-пирролидин.

Таким образом, нами выделено и охарактеризовано неизвестно аминосоединение из семян тыквы, которое оказалось идентично кук, тину, аминокислоте, выделенной из семян тыквы мускатной, произр щей в Китае.

7.3.Определение содержания кукурбятина в семенах тыквы на амин! кислотном анализаторе. Качественный и количественный анализ ами: кислотного состава водорастворимой фракции из семян тыквы разли' видов и сортов мы проводили на аминокислотном анализаторе ыодел; КМ-ЗБ "Хитачи" (Япония) в 2-х колоночном режиме работ)

Условия анализа стандартные, обычно используемые для анализа бе. ковых гидролизатов. Анализ полученных хроматограмм показал, что качественный состав фракций всех изучаемых видов идентичен. Поз: в дальнейшем для детального изучения аминокислотного состава мы использовали семена тыквы твердокорой.

Общий вид хроматограммы типичен для образцов свободных аиш кислот, получаемых из различных источников. Кроме универсально I сутствующих в белковых гидролизагах 18 аминокислот, исследуемая нами фракция содержала довольно большое количество нингидрин-по-лоаительных соединений, не совпадающих по времени выхода с'"бел1 выми" аминокислотами. Наряду со свободными аминокислотами содерг лось значительное количество низкоыолекулярных пептидов.

Наибольший интерес представляли.результаты разделения осно! ных аминокислот. На месте выхода лизина оказался довольно больше по площади пик с необычным для аминокислот распределением канале детектирования: в максимуме пика оптическая плотность при длине волны 440 и 570 ни практически одинакова, хотя известно, что прс дукт реакции всех аминокислот с нингидрином имеет макиимум поглс

1 !ll i II 55 h 7S 83 и! i SiMl :2 I 1,1,,1 . I 69 197 228

i i i I I —v 1 ; г i 1 1 i 1 1 . 1

50 100 150 200 250

Рис.8 . Масс-спектр производного аминосоединения.

Прибор "Vctricm" модель МАТ-44 (Швейцария) с прямым вводом вещества в ионный источник масс-спектрометра.

Условия: колонка 0,6 х 10 сыр смола 2612;

температура элюции 50°С;

скорость элюции 60 мл/час; элюент 0,3 М ^/а+-цитратный буф(

рН 6,45;

Внесено 0,2 мл стандартной смеси аминоки (по 50 нмоль каждой аминокислоты) и 0,25 мкмоль кукурбитина."

Рис.9. Хроматографическое разделение стандартной смеси аминокислот и кукурбитина на аминокислотном ана лизаторе КЛА-ЗБ фирмы "Хитачи"(Япония).

ния при 570 ни, только реакция с никгидрином имино-кислот (пролин л оксипролин) имеют максимум поглощения при 440 нм.

Это указывало на то, что зместе с лизином элюируется аминосое-цинение основного характера кукурбитин.

При исследовании депротеинизированных водорастворимых фракций ¡емян тыквы других видов и сортов, обнаружилось, что все они имеют сачественно одинаковый состав аминокислот и содержат 1миносеединение кукурбитин, но в различных количествах.

Изучение аминокислотного.состава в стандартном режиме работы 1минокислотного анализатора показало безуспешность попыток отделе-!ия кукурбитина от лизина. Проведя ряд экспериментов, связанных о вменением элнции основных аминокислот, нам удалось подобрать опти-альный режим. Нами были проведены все калибровочные работы, свя-анные с определением микромомерного коэффициента кукурбитина. Коэф-ициент равен 3,71 ± 0,11 3$).

Используя предложенную методику, мы проанализировали семена се^ввдов^"и сортов. Содержание кукурбитина в выделенных фракциях олебалось от I до 11%.

Депротеинизированные водорастворимые фракции из семян арбузов, янь, огурцов кукурбитина не содержали. Таким образом, кукурбитин чеет диагностическое занчение для растений рода Тыква. 7.4.Разработка способов получения кукуоби-<на. Установление хими-эского состава депротеинизиронанной фракции из семян различных 1дов и разработка метода количественного определения кукурбитина )зволили нам критически подойти к оценке существующего метода по-гчения водорастворимой депротеинизрованной фракции, известной под (званием кукурбина.

Изучение полноты экстракции жироподобных веществ из семян тыкзы.

Аминокислотный состав водорастворимой фракции из семян тыквы твердокорой после кислотного гидролиза.

Название аминокислоты

¡Количество аминокислоты (в мкиоль :на I мг кукурбина

Количество аминокислоты ( в мг на I мг кукурбина)

Аспарагиновая кислота 0,103

Треонин 0,050

Серин 0,068

Глутаминовая кислота 0,319

Пралин 0,070

Глицин 0,175

Алании 0,111

Цистин 0,020

Валин 0,053

Метионин 0,018

Изолейцин 0,036

Лейцин 0,066

Тирозин • 0,032

Фенилаланин 0,033

Гистидин 0,044

Кукурбитин х 0,544

Лизин 0,093

Аргинин 0,106

0,0137 0,0059 0,0071 0,0469 0,0081 0,0131 0,0099 0,0048 0,0062 0,0027 0,0047 0,0086 0,0058 0,0054 0,0068 0,0716 0,0136 0,0184

= 0,2527, что составляет 25,3 %

*

Количество этого аминосоединения определяли по микромолярному коэффициенту пролина.

аппарате Сокслета показало, что время обезжиривания может быть нияено с 18 часов до 5 часов.

Ранее для извлечения действующих веществ из обезжиренного рота использовалось автоклазирозание с 5-тикратньш количеством оды при 120°С в течение 25 минут с последующим концентрированием одной вытяжки.

Нами было показано, что эта стадия может быть заменена ккпяче-

ием обезжиренного шрота с водой. Оптимальное соотношение сырье-

ксграгент 1:10. Для оценки полноты извлечения, мы через опреде-

энные интервалы времени отбирали надосадочнуа жидкость и прово-

али аминокислотный анализ. 45-минутное кипячение обезжиренного

эота с водой в соотношении 1:10 оказалось достаточным, поскольку

_не

альнейшее увеличение времени экстракцииУсопровождалось увеличени-i содержания кукурбитина в экстракте.

Для удаления из водорастворимой фракции высокомолекулярных зединений мы использовали этиловый спирт, метиловый спирт, сульфо-шициловую кислоту, соляную кислоту.

Выход кукурбина, полученного разными способами, колеблется ; 0,97$ до 1,42$. Однако содержание кукурбитина в кукурбине значи-¡льно варьирует. Самый низкий выход - 5,61$ дает депротеиниз адия шловым спиртом, который вместе с белками осаждает и кукурбитиа. ¡пользование метилового спирта позволяет получить кукурбин : с 'держанием в нем кукурбитина до 21,24$. Наилучшие результаты по-■чаютоя при депротеинизации сульфосалициловой кислотой: зыход ку-•рбина и содержание в нем кукурбитина максимально (1,42$ и 32,40$, ответственно). Использование сульфосалициловой кислоты требует полнительной стадии обесссоливания препаратов. Нами было показа-. , что обесссоливание одинаково эффективно может быть проведено импортных и отечественных сульфокатионообменниках (КУ-2). Пред-

ложенные способы получения кукурбина запущены тремя авторскими I детельствами.

Таким образом, полученные результаты позволяют нам предлои показатель качества сырья - содержание кукурбина и кукурбихина, торые зависят от способа получения.

7,я.Изучение липофильной фракции семян тыквы.

Для количественной оценки липофильной фракции нами использ! лись семена тыквы, а также некоторые серии сырья "Семя тыквы" с ногорского завода по переработке лекарственного растительного с]

Ыы изучили влияние на выход липофильной фракции из оырья о; ни измельченносги сырья, времени экстракции, различных экстраге] и способов экстракции. Оптимальной следует считать измельченное', сырья до размера частиц 2 ш.

Нами изучено влияние на выход липофильной фракции таких эк< генгов как хлороформ, пегролейный эфир, бензин "Нефракс". Получ< сопоставимые результаты показывают, что все органические раство] тели могут использоваться в качестве экстрагэнта, однако мы отдг предпочтение бензину "Нефракс", экстрагенту, широко применяемо! в пищевой промышленности.

Изучение времени экстракции показало, что оптимальной явля< экстракция в течение 5-6 часов.

Липофильную фракцию получали в лабораторных условиях в апш те типа Сокслет. Экстрагенг отгоняли при температуре 60°С. Полу ная липофильная фракция представляет собой буро-вишневую ыаслоос ную жидкость с зелено-бурой флуоресценцией, условно названную не . '"тыввенным маслом".

Нами показано, что содержание тыквенного масла зависит от I тыквы и колеблется от 28 (т.твердокорая) до 48$ (т.мускатная). I дальнейшем было проведено'изучение тыквенного масла в соответси

Содержание тыквенного ыасла в семенах тыквы и его жирнокислотный состав.

[/'п

Наименование образца

:К-во тыквенного масла в :пересчете па :абсол.сухое :сыоье, %

Е И Р Н Ы Е КИСЛОТЫ. %

;Паль-:С.теари-:мити-'

;новая:

новая

Олеино-: Линоле-вая : вая

Витаминная 48,3 13,5 6,3 25,5 51,7

. Волжская серая 34,4 10,3 5,4 28,9 55,3

. Кормовая

стофунтовая 36,2 11,1 5,4 26,0 56,5

Украинская

многоплодная 38,4 11,0 6,2 27,6 55,2

• Мозолеевская 36,0 13,3 6,1 27,0 53,6

• Миндальная 36,1 11,0 4,7 29,3 55,0

. Грибовская

кустовая 33,8 15,9 5,7 20,0 58,4

• Грибовокая

зимняя 30,1 13,2 6,6 24,9 55,3

Кабачки

грибовские 27,9 9,9 5,8 28,8 55,5

"Аптечная смесь" 38,7 13,5 6,3 25,0 55,2

с требованиями общей статьи ГФ XI "Еирные масла".

Масло тыквенное практически не растворимо в воде, раствор) в эфире, хлороформе, петролейном эфире.

Пробы на парафин, воск, смолистые масла показали их отсут< Перекиси и альдегиды, шла, также отсутствовали в исследуемом i Плотность составила 0,9054-0,9156. Показатель преломления 1,46! Кислотное число 1,0-2,7. Число омыления 186-190. Эфирное число 185-187,3. Йодное число II0-II5. Число Рейхерта-Мейсля 0,55-0, Изучение состава жирных кислот тыквенного масла проводило! использованием метода Г1Х после щелочного гидролиза. Анализ пр( дили на приборе Varia*1 ~ 3700 в колонке (0,2смх1м) с 10% i подвижной фазой SP- 2330 заполненной хромосорбом WAW

100 - 120 минут в температурном градиенте I50-22C

при скорости тока - 20 мл/мин. Аналогичное исследование провод1 лось нами на отечественном оборудовании - хроматографе "Биохроь пламенно-ионизирующим детектором и стеклянной капиллярной коло!

В результате проведенного анализа в тыквенном шеле идени даровано и количественно определен^ Ц жирные кислоту- пальмити1 вая (16:0), олеиновая (18:1), линолевая (18:2), стеариновая (18 Общее содержание и изомерный состав стеринов и токофероло! определяли по методике Руденко 5.А., включающей предварительное омыление навески масла раствором щелочи с последующим извлечеш неомыляемой фракции диэтиловым эфиром и дальнейшим их изучением помощью ГЕХ.

В составе неомыляемой фракции наш были идентифицированы и количественно определены с£-1окофврол,уЗ^-токоферол, 3 -токофер каипестерин, стигмастерин, стигмастенол^уб-ситостерин. При чем чественный состав токоферолов и стеринов всех видов и сортов тн оказался одинаковым, а количественное содержание отдельных комп

Аналитические условия: прибор " Увп'й/|"3700, колонка (0,2 см х I м) с 10$ неподвижной фазой ^р-2330, заполненная хромосорбом \УА\к/(100-120 мин.), температурный градиент 150-220°С, газ-носитель - гелий, скорость газа-носителя 20 мл/мин.

1-метиловый эфир линолевой кислоты;

2-метиловый эфир олеиновой кислоты;

3-метиловнй эфир стеариновой кислоты;

4-мотиловый эфир пальмитиновой кислоты.

¿в А к ИЖ

РисЮ. Схема газожидкостной хроматограммы смеси

метиловых эфиров жирных кислот масла семян тыквы 1-метиловый эфир линолевой

РисII . Схема хроматограммы липофильиой фракции'семян тыкзы. Пластинки «¿¡еи^«(ЧССР), система: дихлорметан. Проявлений: реактив Зммера-Знгеля. Пробег растворителя 15 см.

Рис. 12.Схема хроматограммы лилофильной фракции семян тыквы. Пластинки "^|'2и/о€"(ЧССР), система: гексан - этил-ацетат (37:3).

Проявление: реактив Зммера-Энгеля. Пробег растворителя 15 см.

А Б 5 «¿-токоферолы

Рис.13. Схемы хроматограмм токоферолов липофильной фракции семян тыквы: А -оС-токоферол, Б - сумма токофероло Пластинки "¿¡РфС" (ЧССР). Системы растворителей:

1 - диэтиловый эфир-гексан (1:1);

2 - циклогексан-диэтиловый эфир (4:1). Проявление: реактив Эммера-Энгеля. Пробег растворителя ,15 см.

прибор "Хром-4" , условия анализа -стандартные для витами; группы Е.

30 20 10 мин. Рис.14. Схема газокидкостной хроматограммы токоферолов масла семян тыквы. 1-5 -токоферол

2 -уб+^-гокоферолы

3 - об -токоферол

А -^ -ситосгерин

Б - сумма стеринов.

РисД5. Схема хроматограммы сторинов масла семян тыквы. Пластинки " <8,еи/с?'(ЧССР), Система: диэтиловый эфир-гексан (1:1), Проявление: спиртовой раствор фосфорномолибденовой кислоты.

1 - кампестерин;

2 -^-ситостерин;-

3 - стигмостерин;

4 -д* -стигмастенол. ,

прибор "Хром-4"

условия анализа - стандартные

для растительных стеринов.

' 30 ' 20 ' 16 мин. Рис.16. Схема газожидкостной хроматограммы стеринов

семян тыквы.

1 - камцестерин;

2 -ситостерин;

3 - стигмастерин;

4 - д^-стигмастенол.

нентов колебалось в незначительных пределах. Преобладающим комп нентом среди токоферолов был ¿¿-токоферол (75-81$)« практически равных количествах были представлены^б-^-токоферол и ¿»-токофер (9 - 25$).

Среди стеринов преобладали Л*-стигмастенол (72$), кампест стигмастерин, у2>-ситостерин (9$).

8. Стандартизация сырья "Семена тыквы". .

8.1. Разработка характеристик подлинности. Анализ нормативно технической документации на семена тыквы (ФС 42-15632-80) в соо ветствии с общими требованиями к качеству сырья позволил выявит недостаточно высокий уровень требований к качеству семян тынвы. Так, в частности в разделе "Подлинность" отсутствуют такие хар теристики как диагностические признаки при микроскопическом исс вании. Мы провели изучение анатомического отроения семян тыквы для выявления диагностических признаков.

Семена тыквы имеют довольно, прочную семенную конуру, больш количество жирного масла, что затрудняет приготовление микропре тов, поэтому мы проводили специальную подготовку. Семена помеща в смесь этиловый спирт-вода-глицерин (1:1:1) на две недели.

После размягчения семенной кожуры семена разрезали поперек острой бритвой, подсушивали и помещали в аппарат Сокслета для обезжиривания, которое проводили в течение 6 часов. После чего мена вновь помещали в смесь спирт/вода-глицерин (1:1:1) и через недели материал был готов к исследованию. Готовили поперечные и дольные срезы семени.

На поперечном срезе семени видно, что оно состоит из семен кожуры,тонкого слоя эндосперма, зародыша.

Эпидерма семенной кожуры состоит из радиально удлиненных в ток, имеющих характер каменистых. Клетки эпидермы характеризуют тонкой наружной стенкой, которая легко разрушается на срезах.

:тиклинальные стенки более или менее утолщены, часто зигзагообраз-:е, особенно у видов т.тзердокорая и т.мускатная, у которых эпи-рмальныа клетки имеют более тонкие антиклинальные стенки. У крупноплодной клетки эпидермального слоя характеризуются сильно олщенными антиклинальными стенкаш, которые на поперечных срезах редко напоминают обрывки толстых волосков.

Под эпидермой располагается склеренхима, которую по характеру руктуры можно разделить на три части: наружная часть, средний ой и внутренняя часть. Вое три части склеренхимы состоят из кле-к о утолщенными лигнифицировакньш оболочками.

Наружная часть, лежащая напосредственно под эпидермой, состоит 5-6 (у т.крупноплодной 8-9) слоев небольших плотно сомкнутых эток. Их оболочка значительно-утолщена, лигнифицирозана, Пронина небольшими овальными порами. Очертание этих клеток от круглых многоугольных.

Средняя часть склеренхимы представлена одним слоем. В ребрах здний слой склеренхимы состоит из 2-3 слоев. Клетки крупные, эуглочетырехугольной формы, их оболочки сильно утолщены, имеют {0 выраженную слоистую структуру, поры редкие, очень тонкие.

Внутренняя часть склеренхимы состоит из очень рыхдой ткани, 'тки этой ткани характеризуются своеобразной формой - они развет-¡нные,-имеют довольно крупные выступы, с помощью которых соединя-!Я друг с другом, образуя' при этом крупные межклетники. Слой, при-¡агаций к срединной части склеренхимы, состоит из более мелких цок, которые лежат компактнее. Самая внутренняя часть этого 1я склеренхимы имеет очень рыхлую структуру. Оболочки этих клеток '.гка утолщены, лигнифицированы и пронизаны многочисленными порами, [щина внутренней части склеренхимы сильно варьирует у разных [ов. Наиболее широкая ока у т.крупноплодной (9-12 рядов клеток);

у т.твердокорой - от 3-4 до 7-3; у г. мускатной - 1-2 слоя.

Под склеренхимой лежат тонкостенные, тангентально вытянут; клетки хлоренхиыы, образующие несколько сильно сдавленных слое: Между хлоренхимой и семядолей зародыша различима структура тол: одного алейронового слоя, который представляет собой недоразви эндосперм. Семядоля зародыша состоят из клеток с очень тонкими стенками и плотно заполнена запасными питательными веществами • жирным маслом и алейроновыми зернами..

Наружный слой клеток семядолей (эпидермы) на поперечном с; округло-четырехугольной формы. Далее расположены палисадные юн которые имеют цилиндрическую форму и заполнены запасными питан ними веществами.

Разные виды семян тыквы по строению кожуры и семядолей за] ша практически ничем не отличаются..

Таким образом, диагностическое значение для установления I линности сырья при микроскопическом исследовании имеют: склере! состоящая из трех частей, недоразвитый эндосперм и клетки семя; зародыша.

я ^Определение содержания биологически активных вещее:!

Учитывая литературные данные и данные собственных исследо! о том, что гидрофильная фракция семян тыквы обладает антицесто? действием, а липофильная - противовоспалительным, мы пришли к I ду о том, что разработка показателя содержания действующих веще не может иметь однозначного решения. Качество семян тыквы, испс зуемых для получения лекарственных средств аягигельмингного де£ ствия можно определять по содержанию экстрактивных веществ, изе каемых водой. Однако, необходимо также знать содержание кукурби в семенах тыквы, так как в результате проведенных экспериментов установлено, что противоцестодная активность водных экстрактов

ямо зависит от содержания в них кукурбитина.

При получении лекарственных средств, созданных на основе липо-льной фракции семян тыквы, необходимо иметь показатель содержа- • я жирного масла.

В соответствии с вышеизложенным мы провели исследования по ределению этих показателей качества на опытных и промышленных ртиях сырья. Определение содержания экстрактивных веществ проводи по методике ГФ XI.

Предложенный нами количественный метод определения кукурбити-в семенах тыкзы и использованием аминокислотного анализатора на-жен, дает четко воспроизводимые результаты и позволяет определить • курбитин наряду со всеми прочими аминокислотами. Однако, этот тод требует дорогостоящего импортного оборудования.

Для стандартизации семян тыквы по содержании кукурбитина уа омышленных предприятиях необходимо иметь более досупный метод, торый бы не требовал дорогостоящего оборудования. Таким методом ляется спектрофотомегрия.

Вторичные алифатические ашны специфически реагируют с нитро-уссид-ацетальдегидным реактивом в щелочной среде с образованием одукта сине-фиолетового цвета.

Мы провели ряд экспериментов с кукурбитином, з которых изучили ловия реакции, её специфичность и чувствительность.

Спектр поглощения продуктов реакции кукурбитина с нитропруссид-зтальдегидным реактивом характеризуется также как и для различных оричных аминов двумя максимумами поглощения при 370 и 590 нм (при О нм более стабильный максимум). '

3 эксперименте установлено, что вплоть до концентрации кукурбл-ка I ммоль-мл соблюдается линейная зависимость между количеством эричного. амина и значением оптической плотности полученного проста реакции. Реакция чувствительна, к рН реакционной смеси. Ыак- ■

симальное поглощение продукта было получено в интервале рН 9,5 в наших экспериментах мы использовали 0,8 М натрия карбонат -бонатный буфер рН 9,6. Концентрация нитропруссида и время реак: также влияют на стабильность окраски. Наш был использован 0,2; раствор нитропруссида, оптическую плотность которого мы измеря: всегда через 5 минут после начала реакции.

Было изучено влияние первичных и третичных аминов на резу: реакции кукурбитина с нитропруссид-ацетальдегидным реактивом и зано, что влияние их на реакцию незначительно. Таким образом, I ние условий реакции кукурбитина с нитропруссид-ацетальдегидным активом, её специфичности и чувствительности дало предпосылки ; разработки количественного метода определения кукурбитина в се! тыквы.

Нами экспериментально отработаны оптимальные условия пров( методики количественного определения кукурбитина в семенах тш Установлено, что размер частиц должен быть 2 мм, обезжиривание следует проводить в течение пяти часов. Максимальное извлечение кукурбитина из шрота обеспечивается водой в соотношении 1:10 в

чение 45 минут. В качестве депрогеинизирующего агента мы предлс использовать метиловый спирт.

Так как спектр поглощения продуктов реакции кукурбитина и курбина с нитропруссид-ацетальдегидным реактивом совпадает, го основу метода количественного определения было положено измереь оптической плотности продукта реакции в боратно-карбонатном буз (рН 9,6-9,8) при длине волны 590 нм, с последующим расчетом кон трации по удельному показателю поглощения, который равен 76,71*

Для проверки воспроизводимости методики проведено определе кукурбитина в семенах тыквы в шести повторностях.

Метрологические характеристики методики количественного

определения кукурбитина в семенах тыквы.

: х : 8

: Р : дх : £ :

: 0,206 : 0,374 : 95% : 2,57 : 0,962 : ± 4,67 : : ± 2,73

Относительная ошибка методики количественного определения урбитина в семенах тыквы при проведении в трех повторностях не вышает - 2,73% (доверительный уровень 95%).

Для проверки отсутствия систематической ошибки методики были • ведены эксперименты с добавками кукурбитина непосредственно.- в кый экстракт. Полученные данные свидетельствуют от отсутствии тематических потерь кукурбитина в процессе анализа и об удов-ворительной воспроизводимости методики.

^Определение содержания парного масла в семенах тыкзы проводили 1редлоненной наш методике, гравиметрически. Относительная ошкб-летодики при проведении анализа в трех повторностях с 95% веро-)сти составляет * 6,3%. .

Проведенные исследования позволили нам предложить норму содер-;я экстрактивных веществ не менее 20%; норму содержания кукурби-, но менее 0,05%; норму содержания жирного масла не менее 30%.

8.4. Определение влагосодержа.тая и золы общей.

Решение задачи оптимизации цегода определения содержания влаги рье возможно при низкотермическом варианте определения влагосо-ания, с одновременной регистрацией и количественной оценкой ессов, протекающих при постоянном повышении температуры.

Реализация указанных условий возможна при использовании метода ватографии, который позволяет в одной навеске определить содер-е влаги и золы общей.

Нами была проведена сравнительная оценка качества сырья семян

тыквы по показателям содержания влаги и содержания золы обще£; методике ГФ XI и деривагографически.

На дифференциальной кривой нагревания наблюдались следук эндотермические эффекты с температурами начала и конца соотве но б0-80°С и потерей массы 1,5$, 130-145°С и потерей массы Ъ% 200-2Ю°С с потерей массы около 2% и экзотермические эффекты температурами начала и конца соответственно 220-245°С, сопров ювдеся непрерывным изменением маесы>образца.

Первые два термических эффекта связаны с удалением из об содержащейся в нем влаги.

Однако термический эффект с температурой начала и конца ветственно 130-145°С и следующий за ним эффект с температурой ла и конца соответственно 200-2Ю°С, по нашему мнению, может ветствовать удалению летучих жирных масел и началу термическо струкции.

Для подтверждения этого нами был выполнен качественный и чесгвенный анализ жирных кислот и жирных масел для образцов, ных при температуре не выше 120°С.

Из полученных данных следует, что оптимальной температур сушки семян тыквы является режим 80-Ю5°С, поскольку достигав содержание влаги, соответствующее требованиям статьи ГФ XI и i няется жирное масло.

Повышение же температуры до 120°С и выше ведет к изменен) личественкого содержания жирного масла.

Показатели доброкачественности лекарственного растительн! сырья-в значительной степени определяются условиями хранения.'

Нами изучено влияние относительной влажности воздуха на : содержание семян тыквы.

На основании экспериментальных данных была построена изо: десорбции, характер которой свидетельствует о том, что семена

юятся к сырью, для которого остаточное влагосодернание остается :тически постоянным в широком интервале относительной влажности уха. Полученные данные позволяют рекомендовать хранение семян ;ы без соответствующей герметизированной упаковки.

ВЫВОДЫ

I. Впервые осуществлено комплексное фармакогкостнческое и до-ическое изучение 25 видов рода боярышник. Показана возможность льзования сырья для получения лекарственных средств наравне с акопейными видами боярышника.

На основании изученет химического состава цветков и плодов олее широко распространенного вида - боярышника кровавокрасного. лено и идентифицировано б веществ флавоноидной природы: квзрце-8-метоксикемпферол, витексин, гиперозид, бискверцетин, пикна-. дин,- Установлено строение нового флавоноидного соединения -^-триоксифлавон-8-С^-Д-глвкозидо-(2п-0-ацетил)- ацетилзи-ина.

3. Изучена антиаритмическая активность различных ле::арственнлх зтв, полученных-из боярышника. Впервые показана специфическая ритмическая активность препаратов боярышника при их длительном жратнои введении.

Установлено сходство флавоноидного, аминокислотного и мине-юго состава сырья изучаемых видов боярышника. Доминирующим шоидным соединением для всех видов боярышника является глперо-Впервые изучен аминокислотный состав цветкоз, листьев и плодов щника. Показано наличие широкого спектра свободных аминокислот ¡амино-монокарбоновых, моноамино-дикарбоновых, диамияокарбоно-гетероциклических) что позволяет считать сырье боярышника пер-'ивным источником свободных аминокислот.

Показано, что сырье изученных видов бярышника накаплив медь и марганец независимо от валового содержания микроэлем в почвах различных геохимических зон. Установлена прямая ко ция между содержанием меди и флавоноидов в сырье боярышника

5. Изучен химический состав лекарственных средств из с боярышника (водные и спиртовые извлечения: настой цветков, плодов; настойка цветков, экстракт плодов). Установлено, чт лекарственные средства переходят флавоноиды, свободные амин кислоты, микроэлементы, количественное содержание которых з от способа получения. Предложена оптимизация технологическ цессов, обеспечивающих максимальное извлечение действующих из сырья.

6. Разработаны методики количественного определения фл дов, свободных аминокислот, микроэлементов в сырье и лекаре средствах боярышника.

7 Изучении биологические особенности развития боярышни примере б.туркестанского, б.понтийского, б.гиссарского.Уста но, что их большой жизненный цикл можно считать полночленны длительным генеративным периодом и неясно выраженным сениль риодом. Для каждого возрастного состояния охорактеризованы морфологические признаки. Наиболее пригодным возрастным сос для сбора сырья является зрелое генеративное состояние.Изуч ритма сезонного развития и динамики накопления действующих положено в основу определения оптимальных сроков сбора сырь

Проведено морфолого-анатомическое изучение цветков, ли плодов Есех изучаемых видов боярышника, показано сходство и чия, выявлены индикаторные признаки, необходимые для диагно сырья.

8. На основании данных химических и биологических иссл

выявлены различные факторы, влияющие на качество сырья боярышника. Разработаны требования к качеству сырья боярышника многочисленного видового состава, полоненные в основу фармакопейных статей на цветки, брикеты цветков, плоды боярышника. Показана перспективность дериватографического метода для определения показателей качества сырья и лекарственных средств боярышника: содержание влаги, золы общей, экстрактивных веществ, сухого остатка.

9. Изучен состав гидрофильной фракции семян тыквы на содержание свободных аминокислот. Выделена и идентифицирована аминокислота кукурбитин. Показана зависимость протизоцестодной активности водных экстрактов тыквы от содержания кукурбитлна.

10. Проведена количественная оценка содержания жирного масла в семенах тыквы. Изучены физико-химические показатели масла, идентифицированы и количественно определены жирные кислоты (пальмитиновая, стеариновая, олеиновая,линолевая), токоферолы (оС,уЗ&), стерины (кампестерин, стигмастерин,дх-стигмастенол,^6-ситостерин.

11. Разработаны способы получения водного экстракта кукурбина и жирного масла по принципу безотходной технологии, которые защищены авторскими свидетельствами.

На основе системного подхода сырье - лекарственное средство разработаны показатели качества семян тыквы, водного экстракта кукурбин и жирного масла, которые включены в проекты фармакопейных статей.

12.На основе проведенных химических, фармакологических, фар-макогностических исследований семян тыквы показана возможность их комплексного использования для получения лекарственных средств антицестодного и противовоспалительного действия.

Основные результаты диссертации опубликованы в следующих

работах:

Г.Самылина И.А., Баландина И.А.,Сорокина A.A. и др. Изучение пре ставителей рода наперстянки, гречихи и боярышника в геохимичес аспекте.//"Биологическая роль шкроэлеыентов и их применение в медицине"."Материалы УИ Всесоюзн.конф.",Ивано-Франковск,1979г.

2.Саыылина И.А.,Гринкевич. Н.И..Баландина И.А. идр. Изучение неко рых лекарственных растений в геохимическом аспекте.//Тез.IX Вс конф.по микроэлементам, г.Кишинев,1981г.,с,17.

3.Саыылина й.А.,Кашникова М.В..Ладыгина Е.Я. Фармакогноогичеокое изучение боярышника кровавокрасного.//Депонир. во ВНИИМИ.МРЖ fe разд.ХХП, публ.К»514. Материалы конф.молод.учен.I !Ш, 1981г. ..

4.Самылина И.А..Гриккевич Н.И..Баландина И.А.Растительные источн: ки получеш1я препаратов сердечно-сооудиотого действия.// Тез. Всес.конф. "Создание,исследование и комплексное использование лекарств.преп.,приыен.для лечен,серд.-сосуд.забол.",г.Тбилиси, 1982г.

Э.Самклина И.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. и др. Фармаконностич кие аспекты в стандартизации' лекарственного растительного сырь: //Матер.1У Всерос.съезда фармацевтов, г.Воронен,1981г.,0.454-4!

6.Саыылина й.А.,Кашникова М.В.,Патудин A.B. и др.Изучение флавон! идного состава цветков фармакопейных видов боярышника.//Теа. Всес.симп.по фенольн.соед.,г.Ташкент,1982г.,о.34-35.

7.Самылина И.А.,Кашникова М.В.,Кузнецова М.А. и др. Фитохишчесю изучение растений рода боярышник.//Тез.Всес.конф. "Пути повыш. эффективности использ. и воспроизводства пищевых,кормовых и лекарств. ресурсов леса в решении задач "Продовольственной прогрг Ы СССР", г.Пенза, 1983г.,с.306-308.

8.Самылина И.А.,Кашникова М.В.,Шейченко В.И. Ацетилвитексин - но] флавоноид из цветков боярышника.//к.ХПС,1984г.,tel,с.108-109.

амылина H.A., Гарбузова В.М.,Гринкевич Н.Я. и др. Химическое зучение некоторых представителей рода наперстянка и рода боя-Л1ШИк.//Сб.научн.тр.ВНИИФ "Соврем.методы исслед.лекарств.расте-1Й",Москва,1983,том.XX,с.126-132.

змылина И.А.,Киселева Т.Л.,Кашникова М.В. и др.Анализ суммы фла-жоидов цветков и листьев боярышника кровавокраснсго методом ШХ.//Сб.научи.тр.ВНИИФ "Физпко-химкч.методы анализа лекарств'.' .,1984г.,т.ХХП,с.299-302.

1мылина И.А.,Попков В.А.,Гринкевич Н.И. и др.Использование дори-иографии в фармацевтических исследованиях./Айетодич.указания, г 64-003-87,М.,1987,с.30.

,мылина И.А.,Анцишкина A.M.,Барабанов Е.И. Некоторые данные о рмакологическом действии среднеазиатских боярышников.//Депонир. ВИНИТИ, i;«474I-B,89, 5с.

мылина И.А.,Анциикина A.M..Барабанов 2.И. К вопросу о большом зненном цикле боярышника туркестанского.//Депонир в ВИНИТИ, ?,42,В-89, с.6.

мылина И.А..Киселева Т.Л. Подбор условий для анализа гиперозида цветках и листьях боярышника кроказокраского.//Сб.научн.тр. ИИФ "физико-химич.методы анализа лекарств",М.,1984,т.ХХП,с.199-

шлина И.А.,Киселева Т.Л.,Баратова Л.Н. и др. Использование зокоэффективной жидкостной хроматографии для количественного ализа флавоноида гиперозида.//Тез.междунар.симпоз."Хроматогра-i в биологии и медицине",}.!.,1986,с.130. шлина И.А.Киселева Т.Л. Изучение микроэлеменгного состава <оторых представителей рода боярышник.//Тез.докл. X Всес. 1ф."Микроэлементы в биологии и их применение е медицине и 1ЬСком хозяйстве",Чебоксары,1986,т.2,с.I20-I2I.

17.Самылина И.А.,Киселева Т.Л.,Баранова Л.Н. и др. Анализ флг идов в лекарственных препаратах методом высокоэффективной костной хроматографии.//Тез.докл. 1У Всес. симпоз. по моле ной хроматографии, М.,Черноголовка,1987,с.125-126.

18.Самылина И.А.бКиселева Т.Л.,Цинновскис Р.К. Прибалтийские боярыпника и их использование в медицине.//Тез.докл.У Всес по фенольн.соед.,г.Таллин,1987,т.З,с.98-99.

19.Самылина И.А.Киселева Т.Л. Фармакогностическое изучение не представителей рода боярышник.//Сборник научн.трудов ВНИЙЗ сурсоведческое и фармакогностическое изучение лекарственнс СССР",1987,т.ХХУ,с.75-78.

20.Самылина И.А.,Киселева Т.Л.,Головнин А.Б. Фаркакогностичес изучение нефармакопейных видов боярышника.//Тез.докл. У Вс съезда фармацевтов,Ярославль,1987,с.371-372.

21.Самылина И.А.,Киселева Т.Л. Количественное определение суь флавоноидов в плодах боярышника.//¡к."фармация",1987,К,с.2

22.Самылина И.А..Киселева Т.Л. Оценка качества семян некоторь доз боярышника.""ж."Растительные ресурсы",1987,т.23,вып. с.554-561.

23.Самклина И.А.,Киселева Т.Л. О стандартизации сырья плодов ника.//я."Фармация",1988,'И,с.19-21.

24.Самылина И.А.,Ванивская Э.П.,Плетенева Т.В; и др. Фронталь элементный анализ плодов и цветков боярышника разных видов //"Хим.-фарм.журнал",1990,Й2,с.148-150.

25.Самылика И.А.,Киселева Т.Л. Цветки боярышника.//Статья Гос ственной Фармакопеи СССР XI, вып.2,1990,с.241-244.

26.Самылика И.А.,Кашникова М.В. .Брикет цветков боярышника.//В •ная Фармакопейная статья. ■•";.

шина И.А.,Киселева Т.Л. Плоды боярышника.//Статья Государст-[ной Фармакопеи СССР XI, вып.2,1990,с.283-289. жшина И.А.,Анцишкина A.M.,Барабанов Е.И. К вопросу о фармако-'ической активности препаратов боярышника.//к."Фармация",1990, с.

илина И.А.,Киселева Т.Л.,Каверина В.П. и др. Изучение спецификой антиаритмической активности препаратов боярышника.//яс."0ар-¡ия",1988,Ёб,с.31-36. -

шина И.А.,Киселева Т.Л. ,Баратова Л.А', и др. Аминокислотный

тав цветков фармакопейных и нефармакопейных видов боярышника.

:."Растительные ресурсы",1989,вып.2,с.145-154.

:ылина И.А..Киселева Т.Л.,Баратова Л.А. Состав свободных амино-лот различных органов

:."Растительные ресурсы",1989,вып.I,с.92-97. ылина И.А.,Киселева Т.Л.,Орлова Л.П. и др. Изучение мккроэлеу тного состава препаратов боярышника.//"Хим.-фарм.яурн.",1989, с.614-618.

ылина И.А..Киселева Т.Л. Состав свободных аминокислот лекарст-ных препаратов из листьев и плодов боярышника"//к."Растит, урсы",1989,вып.4,с.546-5 52.

ылина И.А.,Киселева Т.Л.,Орлова Л.П. Использование лекарст-ных препаратов боярышника для коррекции нарушений кикроэле-тного обмена при сердечно-сосудистых заболеваниях.//Матер, с.симпоз. "Микроэлементы человека",!i.,1939,с.143-149. ылина И.А.,Киселева Т.Л.,Попов Д.1,1. Количественное определение ерозида в сырье и жидком экстракте боярышника методом ВЭЯХ.// м.-фа рм.журн.",1989, Гз7, с. 85 3-855.

ылина И.А.,Киселева Т.Л. Изучение химического состава нефар-• опейных видов боярышника и оценка их фармакологической актив-ти.//ж."Фармация",1990,№1,с.12-18.

37.Самылина И.А. .Киселева Т.Л. »Евдокимова О.В. Разработка пс . лей качества настоя цветков боярышника.//"Хим.-фарм.журн. М, с. 52-53.

ЗЭ.Самылина И.А.,Киселева Т.Л.,Орлова Л.П. Влияние геохимиче факторов на содержание микроэлементов в лекарственном рас ном сырье и препаратах боярышника.//Тез.докл.междунар.см "Экологические аспекты в фармации",М.,1990,с.60-61.

ЗЭ.Самылина И.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. Определение со; влаги в лекарственном растительном сырье.//Государственна копея СССР XI,М., "Медицина'1,вып.1,0.285-286.

ад.Самылина И.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. Определение noi измельченности и содержания примесей в лекарственном paci сырье.//Государственная Фармакопея СССР XI,М.,Медицина,IS вып.1,с.275-276.

41.Самылина И.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. Правила приемки карсгвенного растительного сырья и методы отбора проб для за.//Государственная Фармакопея СССР Х1,М.»Медицина,1987, с.267-275.

42.Самылина И.А. Определение степени зараженности лекарствен растительного сырья амбарными вредителями.//Государственн Фармакопея СССР XI, Ц. Медицина, выл Л. 1987, с. 276-277.

43.Самылина И.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. Определение сод экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье, дарственная Фармакопея СССР XI,М.,Медицина,1987,вып.I,с.2

44.Самылина И.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. Определение зол Государственная Фармакопея СССР XI,Ы.,Медицина,1937,вып.I

45.Самылина К.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. Листья.//Госуда ная Фармакопея СССР XI, II.,Медицина,1987,вып.I,с.252-256.

мылина И.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. Травы.//Государственная рнакопея СССР XI, 1.1..Медицина, 1987,вып.I,с.256-257. мылина И.А.,Ладыгина Е.Я..Сафронич Л.Н. Цветки.//Государстзен-я Фармакопея СССР XI,М.,Медицина,1987,вып.I,с.257-258. мылина И.А..Ладыгина Е.Я..Сафронич Л.Н. Плоды.//Госудраствен-я Фармакопея СССР XI,М.,Медицина.1987,вып.I.с.258—260. мылина И.А.,Ладыгина Е.Я..Сафронич Л.Н. Семена.//Государствен-я Фармакопея СССР XI,М..Медицина,1987,вып.I,с.260-261. мылина И.А.,Ладыгина Е.Я.,Сафронич Л.Н. Коры.//Государст-нная Фармакопея СССР XI,М.,Медицина,1987,еып.1,с.261-263. мылина-'И.А.,Ладыгина Е.Я..Сафронич Л.Н. Корни,корневища, ковицы,клубни,клубнелуковицы.//Государственная Фармакопея Р XI, М.,Медицина,1987,вып.I.e.263-266.

шлина И.А.,Ладыгина Е.Я..Сафронич Л.Н. Роль норматизно-^ехни-зкой документации в повышении качества лекарственного растительно сырья.//Сб.научн.трудов "Актуальные проблемы современной ?мации'»,М., 1986,0.119-122.

.шлина И.А.Денисова М.И..Киселева Т.Л. Изучение полифенолького шлекса цветков боярышника.//Тез.докл.Всесоюзн.научн.кокф. юд.учен. и студентов 225 лет I ММИ "Молодежь практическому шоохранению",М.,1990,4-6 декабря,с.43-44.

шлина И.А.,Зыков A.B..Банивская Э.Г. и др. Кинетика извлечения сроэлементов из плодов боярышника при приготовлении отваров.// !.докл.Всесоюзн.научно.конф.молод.учен, и студ. 225 I ММй 1Лодеиь практическому здравоохранению",М.', 1990,4-6 дек.,с.46. шлина И.А.,Лобанчикова Н.В..Киселева Т.Л. Разработка методик мчестзенного определения действующих веществ'в настойке пло-| боярышника.//Тез.докл.Всес.конф.молод.учен.и студ. 225 лет [МИ "Молодежь практическому здравоохранению",М.,1990,4-6 дек. 2-53.

56.Саыылина И.А.,Бокова H.A.,Баранова Л.А. Предварительное и< суммарных экстрактов из семян тыквы.//а."Фармация",1981.1И

57.Самылина И.А.,Бокова H.A.,Химическое изучение семян тыквы, научн.конф."Успехи в изучении природных и синтетич.лек.сре Томск,1982,с.20-21.

58.Самылина И.А.,Бокова H.A.,Баратова Л.А. Способ получения и на.//Авт.свид. te 1025428 от 51 августа 1981 г.

59.Сашлина И.А.,Бокова H.A.,Баратова Л.А. Фигохимическое исс вание семян тыквы.//ж."Фармация",1982,№2,с.17-18.

60.Самылина И.А.,Бокова H.A..Баратова Л.А. О нирнокислотном с жирного масла семян тыквы.//н."ХПС",1982,№2,с.248-249.

61.Самылина И.А.,Бокова H.A.,Баратова Л.А. и др. Выделение и теристика кукурбина - антигельминтного препарата из семян //Матер.тез.Всес.симп."Успехи биоорганич.химии в создании лек.преп.", Рига,15.05.82,с.47.

62.Самылина И.А.»Нестерова О.В.,Баратова Л.А. Разработка, мете стандартизации препарата кукурбин из семян тыквы.//ж."Фарь I939,йб,с.34-36.

63.Сашлина И.А. .Нестерова 0.В. .Бобылев Р.В. и др. Изучение (] химических свойств и жирнокислотного состава тыквенного мае //н."Фармация",1990,№1,с.75-76.

64.Самылмна И.А.,Бокова H.A. Способ получения кукурбина.//Abü свид. Кг I2239I2 от 26.0I.83r.

65.Самылина И.А.,Бокова H.A.Семена тыквы.//Государственная Фг пея СССР XI, М.,Медицина,вып.2,с.371-372.

66.Самылина И.А.,Нестерова О.В. ,РешетнякВ.Ю. Оптимизация теэ гического режима обработки семян тыквы.//ж."Фармация",I99C

■ К°3, с .44-46.